CN1467226A - 琼胶多糖的降解方法 - Google Patents
琼胶多糖的降解方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1467226A CN1467226A CNA021325731A CN02132573A CN1467226A CN 1467226 A CN1467226 A CN 1467226A CN A021325731 A CNA021325731 A CN A021325731A CN 02132573 A CN02132573 A CN 02132573A CN 1467226 A CN1467226 A CN 1467226A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- agar
- adds
- add
- concentration
- degraded
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及海藻化学领域，具体为一种琼胶多糖的降解方法。它是以成品的琼胶粉或条状琼胶为原料，用pH＝7的0.1mol/L磷酸氢钠和磷酸二氢钠缓冲溶液进行琼胶的溶解，在Fe2+离子存在的条件下加入H2O2进行降解，加入Vc进行诱导反应，加入过氧化氢酶作为反应终止剂来终止反应，将降解产物高速离心，然后加入乙醇纯化沉淀，取上清液旋转蒸发后冷冻干燥获得琼胶的寡糖降解产物，降解后获得的琼胶寡糖的分子量在3000左右，产率在85％以上。本发明降解工艺简单，成本低廉，降解后的琼胶寡糖有明显的α－葡萄糖甘酶抑制剂的作用以及其它功能性的作用。
Description
技术领域
本发明涉及海藻化学领域，具体为一种琼胶多糖的降解方法。
背景技术
琼胶是一种从石花菜中提取的海藻多糖，目前已经广泛的应用于医药和食品行业，但是由于海藻多糖分子量大，粘度大，溶解度小等特点，而使其应用的范围受到限制。利用降解的手段对多糖的分子量进行降解，降低粘度，改善其溶解度，可以拓展琼胶的应用范围。
琼胶多糖是主要的海藻多糖，无特殊的生理活性，其功能与纤维素相似是人体不吸收的多糖。已有的研究表明，琼胶多糖降解后形成由半乳糖和内乳糖组成的琼二糖以及少量的琼四糖和琼六糖。这些降解后的琼胶寡糖具有明显的生理活性例如；
1.抗肿瘤，可以促使人类的各种癌细胞程序性凋亡，可以抑制前列腺素和肿瘤坏死因子TNF-α的产生从而抑制阿癌细胞的产生。
2.抗氧化作用，可以通过阻止可诱导性NO合成酶iNOS的表达来抑制NO自由基的产生，从而消除此种NO自由基过量造成的损伤，并且这种抑制作用与琼胶寡糖的量成正比，可以肯定琼胶寡糖抑制NO自由基产生的能力和Epigallocatechin Gallate(EGCG)(一种在茶叶中发现的具有抗癌作用的化合物)相当。
3.防治一些炎症疾病，如关节炎和内毒素休克。
琼胶寡糖具有一些很有价值的生理活性，使它成为目前的研究热点之一。而琼胶寡糖的生理活性也是与其结构紧密相关，故而寻找一个最佳的降解方法，高产率的制备寡糖具有重要的实际应用意义。
从化学的角度，对大分子的化合物降解有很多种方法(物理降解法、酶降解法和化学降解法)，但是对琼胶多糖的降解还是首次进行，没有合适的方法可以借鉴，试验和研究表明，在不同温度和酸度下的盐酸水解法、双氧水和醋酸催化水解法不足之处是：琼胶降解比较缓慢、降解效率低。
发明内容
本发明目的是提供一种降解速度快、效率低、工艺简单、成本低的琼胶多糖的降解方法。
本发明的技术方案是利用维生素C诱导的Fenton体系产生的羟基自由基氧化还原降解琼胶，得到琼胶寡糖，具体步骤如下：
1)将干燥的琼胶粉末或条状琼胶加入pH＝7的0.1mol/L磷酸氢钠和磷酸二氢钠缓冲溶液中润湿，缓冲溶液加入量为每克琼胶加入1～2ml，搅拌均匀，再加入上述浓度的缓冲溶液至琼胶含量为9～10g/L，置于恒温水浴锅上搅拌，水浴锅温度为95～100℃，直至琼胶完全溶解；
2)恒温水浴锅温度降至45～55℃，加入FeSO4·7H2O，其在步骤1)所得液体中的浓度为0.9～1.1mmol/L，并搅拌均匀；
3)按9.5～10.5ml/L加入重量百分浓度为30％的过氧化氢，进行降解反应，待反应溶液颜色变深加入维生素C，进行诱导反应，维生素C加入量为3.5～4g/L；
4)恒温水浴锅温度降至20～30℃，加入过氧化氢酶终止反应，其加入量为0.01～0.5mg/L；
5)将降解产物高速离心10～15分钟，然后加入重量百分浓度为95％的乙醇，至乙醇的体积百分浓度为60～65％，再将上清液高速离心10-15分钟，取上清液旋转蒸发后冷冻干燥获得琼胶的寡糖降解产物。
所述步骤2)FeSO4·7H2O加入前采用步骤1)所述浓度的缓冲溶液溶解；所述步骤5)高速离心采用高速离心机，离心速度为10000～12000r/min。
本发明的有益效果是：
1.降解产率高，琼胶粘度降解比较快。本发明根据市场发展的需要，在大量实验室研究的基础上确立了海藻多糖-琼胶的氧化还原降解法，利用Vc诱导的Fenton体系产生的羟基自由基氧化还原降解琼胶，得到低分子量琼胶寡糖，降解后获得的琼胶寡糖的分子量在3000左右，产率在85％以上，有明显的α-葡萄糖甘酶抑制剂的作用以及其它功能性的作用，适用于有条件的中小企业生产和大专院校实验课用。
2.本发明降解工艺简单，成本低廉。
具体实施方式
实施例1
取100克琼胶粉末，加入100ml、pH＝7的0.1mol/L磷酸氢钠和磷酸二氢钠缓冲溶液置于搅拌器上混合，直至琼胶粉末彻底湿润后再加入上述浓度的缓冲溶液至总体积为10L，搅拌均匀，置于100℃恒温水浴锅上搅拌至琼胶粉末完全溶解后转移至50℃水浴锅上并加入2700mg硫酸亚铁晶体(FeSO4·7H2O)，硫酸亚铁晶体事先用上述缓冲溶液溶解，其最终浓度为1mmol/L，搅拌均匀后再加入100ml 30％(重量百分浓度)的H2O2，待反应溶液颜色加深后加入35g的Vc(H2O2最终浓度约0.1mol/L，Vc最终浓度约0.02mol/L)进行反应，反应过程中注意观察粘度的变化，当反应物的浓度变化不大时，降温至25℃并加入2-3mg的过氧化氢酶终止反应，降解产物进行高速离心10分钟，离心速度为10000r/min，上清液加入重量百分浓度为95％的乙醇，使乙醇的体积百分浓度(V/V)达到60％，乙醇加入量为15L左右，上清液再次高速离心10分钟，离心速度为10000r/min，除去分子量比较大的降解产物和磷酸盐后旋转蒸发、冷冻干燥获得降解的琼胶寡糖。
本发明利用Vc诱导的Fenton体系产生的羟基自由基氧化还原降解琼胶得到低分子量的琼胶。降解产物经过超速离心、乙醇沉淀，除去分子量比较大的降解产物和磷酸盐，得到分子量在3000左右的降解产物琼胶寡糖，所获得的低分子量的降解产物的产率可以达到85％以上，特别说明的是经过60％乙醇的纯化沉淀后，经硝酸盐溶液检测证明大部分磷酸盐都随着分子量比较大的降解产物沉淀，并经高速离心后除去。
降解过程中所需要的仪器、药品及配制方法：
1)pH＝7.0的0.1mol/L磷酸氢钠和磷酸二氢钠缓冲溶液：购买上海雷磁分析仪器厂，化学试剂分厂生产的定型产品。
2)琼胶粉原料：青岛海洋渔业公司水产品加工厂生产过氧化氢酶(来自牛的肝脏)，Sigma化学试剂公司。
3)粘度测定仪，上海分析仪器厂
4)恒温水浴锅；
5)高速离心机(1000～12000r/min)。
实施例2
与实施例1不同之处是：
取100克条状琼胶，加200ml pH＝7的0.1mol/L磷酸氢钠和磷酸二氢钠缓冲溶液置于搅拌器上混合，直至条状琼胶湿润变软后再加入上述浓度的缓冲溶液至总体积为10L，置于100℃恒温水浴锅上搅拌，直至条状琼胶完全溶解成透明浆糊状，降低水浴锅的温度到50℃，加入2750mg事先用缓冲溶液溶解的FeSO4·7H2O，搅拌5分钟后加入105ml 30％(重量百分浓度)的H2O2，待反应溶液的颜色加深后再加入35g的Vc，当反应液粘度变化趋于稳定时，水浴锅温度降为20℃，并加入5mg的过氧化氢酶完全终止反应。降解产物进行高速离心15分钟，离心速度为12000r/min，上清液加入重量百分浓度为95％的乙醇，使乙醇的体积百分浓度(V/V)达到62％，乙醇加入量为16L左右，上清液再次高速离心15分钟，离心速度为12000r/min，除去分子量比较大的降解产物和磷酸盐后旋转蒸发、冷冻干燥获得降解的琼胶寡糖。
结果表明：氧化还原降解反应中琼胶的粘度降解比较快，效果比较好有一定的代表性，因此氧化还原降解法可以作为琼胶多糖的降解方法。
Claims (3)
1.一种琼胶多糖的降解方法，其特征是利用维生素C诱导的Fenton体系产生的羟基自由基氧化还原降解琼胶，得到琼胶寡糖，具体步骤如下：
1)将干燥的琼胶粉末或条状琼胶加入pH＝7的0.1mol/L磷酸氢钠和磷酸二氢钠缓冲溶液中润湿，缓冲溶液加入量为每克琼胶加入1～2ml，搅拌均匀，再加入上述浓度的缓冲溶液至琼胶含量为9～10g/L，置于恒温水浴锅上搅拌，水浴锅温度为95～100℃，直至琼胶完全溶解；
2)恒温水浴锅温度降至45～55℃，加入FeSO4·7H2O，其在步骤1)所得液体中的浓度为0.9～1.1mmol/L，并搅拌均匀；
3)按9.5～10.5ml/L加入重量百分浓度为30％的过氧化氢，进行降解反应，待反应溶液颜色变深加入维生素C，进行诱导反应；维生素C加入量为3.5～4g/L；
4)恒温水浴锅温度降至20～30℃，加入过氧化氢酶终止反应，其加入量为0.01～0.5mg/L；
5)将降解产物高速离心10～15分钟，然后加入重量百分浓度为95％的乙醇，至乙醇的体积百分浓度为60～65％，再将上清液高速离心10～15分钟，取上清液旋转蒸发后冷冻干燥获得琼胶的寡糖降解产物。
2.按照权利要求1所述琼胶多糖的降解方法，其特征是所述步骤2)FeSO4·7H2O加入前采用步骤1)所述浓度的缓冲溶液溶解。
3.按照权利要求1所述琼胶多糖的降解方法，其特征是所述步骤5)高速离心采用高速离心机，离心速度为1000～12000r/min。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 02132573 CN1246338C (zh) | 2002-07-11 | 2002-07-11 | 琼胶多糖的降解方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 02132573 CN1246338C (zh) | 2002-07-11 | 2002-07-11 | 琼胶多糖的降解方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1467226A true CN1467226A (zh) | 2004-01-14 |
| CN1246338C CN1246338C (zh) | 2006-03-22 |
Family
ID=34145225
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 02132573 Expired - Fee Related CN1246338C (zh) | 2002-07-11 | 2002-07-11 | 琼胶多糖的降解方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1246338C (zh) |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100365008C (zh) * | 2006-07-21 | 2008-01-30 | 宁波大学 | 一种红藻寡糖的制备方法 |
| CN101168570B (zh) * | 2007-11-15 | 2010-05-26 | 暨南大学 | 海带硫酸多糖的降解方法 |
| CN102584411A (zh) * | 2011-01-06 | 2012-07-18 | 宁波大学 | 一种琼胶原藻生物肥及其制备方法 |
| CN103665194A (zh) * | 2013-11-27 | 2014-03-26 | 华侨大学 | 一种从琼脂中直接分离琼脂糖和琼胶酯的方法 |
| CN107090052A (zh) * | 2017-05-16 | 2017-08-25 | 浙江大学 | 一种低分子量果胶的制备方法 |
| CN107216404A (zh) * | 2017-06-06 | 2017-09-29 | 威海温喜生物科技有限公司 | 一种海藻寡糖磷酸酯及其制备方法 |
| CN109134682A (zh) * | 2018-09-14 | 2019-01-04 | 集美大学 | 一种红藻低聚糖及其制备方法与应用 |
| CN109400756A (zh) * | 2018-11-26 | 2019-03-01 | 广州大学 | 一种羟基自由基反应体系制备琼胶寡糖的制备方法 |
| CN110283255A (zh) * | 2019-06-24 | 2019-09-27 | 江苏农林职业技术学院 | 一种改性羊肚菌多糖的制备方法及应用 |
-
2002
- 2002-07-11 CN CN 02132573 patent/CN1246338C/zh not_active Expired - Fee Related
Cited By (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100365008C (zh) * | 2006-07-21 | 2008-01-30 | 宁波大学 | 一种红藻寡糖的制备方法 |
| CN101168570B (zh) * | 2007-11-15 | 2010-05-26 | 暨南大学 | 海带硫酸多糖的降解方法 |
| CN102584411A (zh) * | 2011-01-06 | 2012-07-18 | 宁波大学 | 一种琼胶原藻生物肥及其制备方法 |
| CN102584411B (zh) * | 2011-01-06 | 2014-03-05 | 宁波大学 | 一种琼胶原藻生物肥及其制备方法 |
| CN103665194A (zh) * | 2013-11-27 | 2014-03-26 | 华侨大学 | 一种从琼脂中直接分离琼脂糖和琼胶酯的方法 |
| CN103665194B (zh) * | 2013-11-27 | 2016-06-15 | 华侨大学 | 一种从琼脂中直接分离琼脂糖和琼胶酯的方法 |
| CN107090052A (zh) * | 2017-05-16 | 2017-08-25 | 浙江大学 | 一种低分子量果胶的制备方法 |
| CN107216404A (zh) * | 2017-06-06 | 2017-09-29 | 威海温喜生物科技有限公司 | 一种海藻寡糖磷酸酯及其制备方法 |
| CN109134682A (zh) * | 2018-09-14 | 2019-01-04 | 集美大学 | 一种红藻低聚糖及其制备方法与应用 |
| CN109134682B (zh) * | 2018-09-14 | 2021-11-05 | 集美大学 | 一种红藻低聚糖及其制备方法与应用 |
| CN109400756A (zh) * | 2018-11-26 | 2019-03-01 | 广州大学 | 一种羟基自由基反应体系制备琼胶寡糖的制备方法 |
| CN110283255A (zh) * | 2019-06-24 | 2019-09-27 | 江苏农林职业技术学院 | 一种改性羊肚菌多糖的制备方法及应用 |
| CN110283255B (zh) * | 2019-06-24 | 2021-06-25 | 江苏农林职业技术学院 | 一种改性羊肚菌多糖的制备方法及应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN1246338C (zh) | 2006-03-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Toffano et al. | Interactions of GM1 ganglioside with crude rat brain neuronal membranes | |
| Carlson et al. | Polyuronic acids produced by Pseudomonas aeruginosa | |
| Jouault et al. | Characterization, chemical modifications and in vitro anticoagulant properties of an exopolysaccharide produced by Alteromonas infernus | |
| De Zoysa et al. | Anticoagulant activity of sulfated polysaccharide isolated from fermented brown seaweed Sargassum fulvellum | |
| CN1246338C (zh) | 琼胶多糖的降解方法 | |
| Hickman et al. | Isolation of a bacterial lipopolysaccharide from Xanthomonas campestris containing 3-acetamido-3, 6-dideoxy-D-galactose and D-rhamnose | |
| Johansson | The effect of poly (ethyleneglycol) esters on the partition of proteins and fragmented membranes in aqueous biphasic systems | |
| Eriksson et al. | Hydrophobic surface properties of erythrocytes studied by affinity partition in aqueous two-phase systems | |
| Kauss et al. | Enzymic introduction of the methyl ester groups of pectin | |
| CN107034205B (zh) | 一种利用表面活性剂制备高酯化活性脂肪酶的方法 | |
| CN1157416C (zh) | 絮凝提取海藻多糖的方法 | |
| CN1923854A (zh) | 低分子量水溶性壳聚糖的制备方法 | |
| CN113647624A (zh) | 一种姜黄素微胶囊的制备方法 | |
| CN105125580A (zh) | 一种富勒烯-高分子复合物及其制备方法 | |
| Karunairatnam et al. | A glucuronide-decomposing enzyme from rumen micro-organisms. 1. Preparation and assay | |
| CN106075414A (zh) | 一种菠萝蛋白酶脂质体及其制备方法 | |
| CN115028750A (zh) | 泡叶藻岩藻多糖及其制备方法和应用 | |
| Xu et al. | Enzyme-assisted extraction of apricot polysaccharides: process optimization, structural characterization, rheological properties and hypolipidemic activity | |
| GOGGINS et al. | Hyaluronidase activity of alveolar macrophages | |
| US6207438B1 (en) | Method for preparing a product in particular for preventing and curing skin diseases, and resulting product | |
| EP1171473A1 (en) | Pectin having reduced calcium sensitivity | |
| CN115926013B (zh) | 一种葛仙米多糖及其制备方法 | |
| CN1255394C (zh) | 紫杉醇纳米微粒的制备方法及应用 | |
| RU2656847C1 (ru) | Наночастицы на основе кордицепина/o-карбоксиметилхитозана и способ их получения | |
| Lipovac et al. | Control of the action of Vibrio cholerae sialidase on mammalian brain gangliosides by ionic strength |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C19 | Lapse of patent right due to non-payment of the annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |