CN110283255A - 一种改性羊肚菌多糖的制备方法及应用 - Google Patents

一种改性羊肚菌多糖的制备方法及应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种改性羊肚菌多糖的制备方法，包括以下步骤：(1)取羊肚菌洗净、去除杂质、高温灭菌、烘干、粉碎过筛，通过水提醇沉法提取羊肚菌多糖；(2)将羊肚菌多糖加入过氧化氢水溶液中，再加入磷酸氢二钠‑磷酸二氢钠缓冲液进行反应，反应结束后浓缩，冷冻干燥，得到改性羊肚菌多糖。本发明利用过氧化氢氧化法对羊肚菌多糖进行改性，改性羊肚菌多糖对α‑淀粉酶抑制率有显著提高；同时，蔗糖酶抑制率、麦芽糖酶抑制率、α‑葡萄糖苷酶也有相应提高；与同浓度下的阿卡波糖相比，本发明的改性羊肚菌多糖除对蔗糖酶抑制率与阿卡波糖无明显差异外，对另外三种糖苷酶的抑制率均有相应提高。

Description

一种改性羊肚菌多糖的制备方法及应用
技术领域
本发明涉及羊肚菌多糖的制备方法及应用，尤其涉及一种改性羊肚菌多糖的制备方法及应用。
背景技术
糖苷酶是一种可以水解糖苷键的酶，在糖和糖复合物的水解和合成中起着关键作用，在小肠内催化蔗糖、麦芽糖分解，分解产物葡萄糖进入血液，这是引起餐后高血糖的主要因素之一。通过延缓糖类的消化、吸收从而降低血糖是治疗糖尿病的一个重要途径。因此可以通过服用糖苷酶抑制剂抑制糖类消化，减缓人体内糖类的吸收，最终可以达到抑制餐后血糖快速升高的目的。在2型糖尿病的治疗药物中，糖苷酶抑制剂因其具有毒副作用小甚至无毒，且作用温和持久等优点，得到越来越多的研究者青睐。
羊肚菌是一种珍稀食用菌品种，具有丰富的营养，药用价值较高。近年来的研究表明食用菌多糖除了抗氧化、抗肿瘤等功能外，还具有降低血脂、提高人体免疫力、抑菌、抗癌等其他重要生物学功能。目前，对羊肚菌多糖的研究主要集中在提取、分离纯化以及抗肿瘤、抗氧化等生物活性研究。从食药用真菌中筛选糖苷酶抑制剂是一条极为重要的途径，同时，不断尝试以分子结构母体为模型进行修饰改性，开发新型、廉价、高效的降糖药是糖苷酶抑制剂研究领域的研究趋势和最终目的。食用菌多糖被视为较为理想的来源，但由于其性质和结构的限制，其生物活性很难与药物相比。多糖的生物活性与其糖苷键的类型、相对分子量、空间结构有很大的关联性，通过多糖的改性研究能够改变其空间结构、分子量和取代基的种类数量，从而影响抗肿瘤、抑菌、抗氧化等生物活性。多糖经过改性后其生物活性可以得到明显提升，甚至可能产生新的生物学活性。
糖类化合物是由至少超过十个的单糖组成的聚合糖高分子碳水化合物，其糖苷酶抑制率与化合物的结构有一定的关系。目前虽然有一些关于羊肚菌多糖的化学改性研究，如唐瑜婉等在《硫酸化羊肚菌多糖调控胆固醇代谢作用》一文中对羊肚菌多糖进行硫酸化修饰从而增强其降胆固醇活性。陈金龙在《化学修饰羊肚菌多糖生物活性研究》一文中对乙酸酐法、氯磺酸-吡啶法以及一氯乙酸法对羊肚菌多糖改性后的抗肿瘤、抗氧化等活性进行了比较。刘海玲、王振斌等分别在《黑木耳多糖乙酰化改性及其抗氧化活性的研究》以及《无花果多糖提取工艺优化及其超声波改性》对黑木耳多糖以及无花果多糖分别进行乙酰化和超声改性，乙酰化及超声改性产物的抗氧化作用均有所增强。但是鲜有对羊肚菌多糖改性产物进行深一步的体外降血糖研究。
研究发现羊肚菌多糖对α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶、蔗糖酶以及麦芽糖酶均有一定的抑制作用。与常用的降糖药阿卡波糖相比，其对α-葡萄糖苷酶、蔗糖酶以及麦芽糖酶的抑制能力并不弱于阿卡波糖，但对α-淀粉酶的抑制能力却远弱于阿卡波糖。
发明内容
发明目的：针对以上问题，本发明提出一种改性羊肚菌多糖的制备方法。本发明的另一目的是提供该改性羊肚菌多糖作为糖苷酶抑制剂在降血糖方面的应用，改性羊肚菌多糖能够显著提高其对α-淀粉酶的抑制能力。
技术方案：本发明所述的改性羊肚菌多糖的制备方法，包括以下步骤：
(1)取羊肚菌洗净、去除杂质、高温灭菌、烘干、粉碎过筛，通过水提醇沉法提取羊肚菌多糖；
(2)将羊肚菌多糖加入过氧化氢水溶液中，再加入磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液进行反应，反应结束后浓缩，冷冻干燥，得到改性羊肚菌多糖。
其中，所述水提醇沉法的步骤为：将粉碎过筛后的羊肚菌加入水中混合搅拌，超声加热提取，得到提取液，提取液静置、过滤、离心处理，得到上清液，上清液浓缩后，加入无水乙醇，进行醇沉，静置，收集沉淀，沉淀经冷冻干燥，得到羊肚菌多糖。
所述羊肚菌多糖与过氧化氢水溶液的料液比为1:1～13，优选为1:5～11，进一步优选为1:9。
所述磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液的pH为5～9，优选为6～8，进一步优选为7。
所述步骤(2)中反应温度为20～60℃，反应时间0.5～3.5h，优选为30～60℃，2.5～3.5h，进一步优选为50℃，3h。
本发明所述的上述改性羊肚菌多糖作为糖苷酶抑制剂在降血糖方面的应用，通过对α-淀粉酶、蔗糖酶、麦芽糖酶和α-葡萄糖苷酶这四种糖苷酶的抑制，以此实现在降血糖方面的应用。
有益效果：与现有技术相比，本发明的显著优点是：(1)利用过氧化氢氧化法对羊肚菌多糖进行改性，改性羊肚菌多糖对α-淀粉酶抑制率有显著提高，改性后与改性前相比，α-淀粉酶抑制率提高了16.99倍；(2)蔗糖酶抑制率由72.08％提高到78.13％，麦芽糖酶抑制率由10.05％提高到16.48％，α-葡萄糖苷酶由17.54％提高到21.40％；(3)改性羊肚菌多糖与同浓度下的阿卡波糖相比，α-淀粉酶抑制率提高了1.44倍，蔗糖酶抑制率与阿卡波糖无明显差异，麦芽糖酶抑制率提高了1.63倍，α-葡萄糖苷酶抑制率提高了1.88倍。
附图说明
图1是羊肚菌多糖、改性羊肚菌多糖的红外光谱图；
图2是反应时间对改性羊肚菌多糖α-淀粉酶抑制率的影响；
图3是羊肚菌多糖与过氧化氢水溶液料液比对改性羊肚菌多糖α-淀粉酶抑制率的影响；
图4是反应温度对改性羊肚菌多糖α-淀粉酶抑制率的影响；
图5是磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液的pH对改性羊肚菌多糖α-淀粉酶抑制率的影响；
图6是羊肚菌多糖、改性羊肚菌多糖及阿卡波糖对糖苷酶抑制率的比较。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1
羊肚菌多糖的提取：取羊肚菌实体洗净、去除杂质，置于105℃的烘箱中进行灭菌10min，65℃下烘干。取烘干羊肚菌实体进行粉碎并过40目筛，按照1:10的比例加入蒸馏水混合搅拌，在55℃下、400W功率下进行超声加热提取45min，得到提取液。提取液4℃静置12h，提取液经4层纱布过滤，离心得上清液，上清液用85℃水浴浓缩后，按6倍量加入无水乙醇，-20℃静置12h。收集沉淀，真空冷冻干燥后得到羊肚菌多糖。
羊肚菌多糖的改性：称取1g上述羊肚菌多糖，按料液比1:5加入5mL的30％过氧化氢水溶液溶解样品，再加入0.2mol/L pH＝7的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液定容至25mL，在温度为40℃的条件下反应0.5h，反应结束后，浓缩，经真空冷冻干燥得改性产物，即改性羊肚菌多糖。
实施例2
羊肚菌多糖的提取同实施例1。
羊肚菌多糖的改性：称取1g上述羊肚菌多糖，按料液比1:5加入5mL的30％过氧化氢水溶液溶解样品，再加入0.2mol/L pH＝7的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液定容至25mL，在温度为40℃的条件下反应3h，反应结束后，浓缩，经真空冷冻干燥得改性产物，即改性羊肚菌多糖。
实施例3
羊肚菌多糖的提取同实施例1。
羊肚菌多糖的改性：称取1g上述羊肚菌多糖，按料液比1:3加入3mL的30％过氧化氢水溶液溶解样品，再加入0.2mol/L pH＝7的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液定容至25mL，在温度为40℃的条件下反应3h，反应结束后，浓缩，经真空冷冻干燥得改性产物，即改性羊肚菌多糖。
实施例4
羊肚菌多糖的提取同实施例1。
羊肚菌多糖的改性：称取1g上述羊肚菌多糖，按料液比1:9加入9mL的30％过氧化氢水溶液溶解样品，再加入0.2mol/L pH＝7的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液定容至25mL，在温度为40℃的条件下反应3h，反应结束后，浓缩，经真空冷冻干燥得改性产物，即改性羊肚菌多糖。
实施例5
羊肚菌多糖的提取同实施例1。
羊肚菌多糖的改性：称取1g上述羊肚菌多糖，按料液比1:9加入9mL的30％过氧化氢水溶液溶解样品，再加入0.2mol/L pH＝7的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液定容至25mL，在温度为50℃的条件下反应3h，反应结束后，浓缩，经真空冷冻干燥得改性产物，即改性羊肚菌多糖。
实施例6
羊肚菌多糖的提取同实施例1。
羊肚菌多糖的改性：称取1g上述羊肚菌多糖，按料液比1:9加入9mL的30％过氧化氢水溶液溶解样品，再加入0.2mol/L pH＝7的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液定容至25mL，在温度为30℃的条件下反应3h，反应结束后，浓缩，经真空冷冻干燥得改性产物，即改性羊肚菌多糖。
实施例7
羊肚菌多糖的提取同实施例1。
羊肚菌多糖的改性：称取1g上述羊肚菌多糖，按料液比1:9加入9mL的30％过氧化氢水溶液溶解样品，再加入0.2mol/L pH＝5的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液定容至25mL，在温度为50℃的条件下反应3h，反应结束后，浓缩，经真空冷冻干燥得改性产物，即改性羊肚菌多糖。
实施例8
羊肚菌多糖的提取同实施例1。
羊肚菌多糖的改性：称取1g上述羊肚菌多糖，按料液比1:9加入9mL的30％过氧化氢水溶液溶解样品，再加入0.2mol/L pH＝9的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液定容至25mL，在温度为50℃的条件下反应3h，反应结束后，浓缩，经真空冷冻干燥得改性产物，即改性羊肚菌多糖。
相比于常用的降糖药阿卡波糖，羊肚菌多糖对对α-葡萄糖苷酶、蔗糖酶以及麦芽糖酶的抑制能力并不弱于阿卡波糖，但对α-淀粉酶的抑制能力却远弱于阿卡波糖。因此，以下通过试验来验证上述各实施例制备得到的改性羊肚菌多糖α-淀粉酶抑制率，具体测定方法如下：
将羊肚菌多糖和改性羊肚菌多糖分别用蒸馏水配制成40mg/L的样品溶液，分别测定α-淀粉酶抑制率。
α-淀粉酶抑制率的测定：加入2％淀粉溶液0.5mL，在抑制管和抑制对照管中加入1.0mL 40mg/L的样品溶液，在空白管和空白对照管中加入1.0mL蒸馏水进行对照，再在空白管和抑制剂管加入0.5mL 20U/mL的α-淀粉酶，对照管加入0.5mL蒸馏水。置于37℃水浴中反应10min后，加入1.0mL DNS(二硝基水杨酸)，再放入沸水浴中反应5min，加入10.0mL蒸馏水，冷却至室温，最后于540nm处测其吸光值，得A。
羊肚菌多糖和改性羊肚菌多糖对α-淀粉酶的抑制率：
式中，A1、A2、A3和A4分别为540nm下空白管、空白对照管、抑制管和抑制对照管的吸光值。测试结果见表1。
表1各实施例中羊肚菌多糖和改性羊肚菌多糖对α-淀粉酶抑制率
由表1可知，改性羊肚菌多糖对α-淀粉酶抑制率远高于羊肚菌多糖，尤其是实施例5，当羊肚菌多糖与过氧化氢水溶液的料液比为1:9，磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液的pH为7，反应温度为50℃，反应时间为3h时，α-淀粉酶抑制率最大，改性后与改性前相比，抑制率提高了16.99倍。这是因为多糖的生物活性与其糖苷键的类型、相对分子量、空间结构有很大的关联性。通过多糖的改性能够改变其空间结构、分子量和取代基的种类数量，从而影响抗肿瘤、抑菌、抗氧化等生物活性，甚至产生新的生物学活性。通过对羊肚菌多糖经过氧化氢改性前后的红外图谱分析发现(如图1所示)，改性前后产物的红外图谱基本吻合，官能团种类基本没有发生变化，呈现明显的多糖吸收特征。说明羊肚菌多糖经过氧化氢氧化降解后，化学结构单元不发生变化，仅糖苷键发生断键，分子量降低，提高了其对糖苷酶的抑制能力。
本发明还针对不同条件下制备得到的改性羊肚菌多糖对α-淀粉酶抑制率的影响进行了相关研究。
反应时间对改性羊肚菌多糖α-淀粉酶抑制率的影响
称取1g上述羊肚菌多糖，按料液比1:5加入5mL的30％过氧化氢水溶液溶解样品，再分别加入0.2mol/L pH＝7的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液定容至25mL，在温度为40℃的条件下分别反应0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h、3h、3.5h，反应结束后，浓缩，经真空冷冻干燥得改性产物，即改性羊肚菌多糖。将上述改性羊肚菌多糖分别用蒸馏水配制成40mg/L的样品溶液，分别测定α-淀粉酶抑制率。测试结果如图2所示，反应时间过短，反应不充分，随着反应时间的增加，α-淀粉酶抑制率提高，当反应时间为3h时，抑制率最大；继续增加反应时间，反应时间过长则会出现过度氧化的现象，同时过氧化氢也会出现分解，抑制率没有继续增加，因此最佳反应时间为3h。
羊肚菌多糖与过氧化氢水溶液料液比对改性羊肚菌多糖α-淀粉酶抑制率的影响
称取1g上述羊肚菌多糖，按料液比1:1、1:3、1:5、1:7、1:9、1:11、1:13分别加入1mL、3mL、5mL、7mL、9mL、11mL、13mL的30％过氧化氢水溶液溶解样品，再加入0.2mol/L pH＝7的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液定容至25mL，在温度为40℃的条件下反应3h，反应结束后，浓缩，经真空冷冻干燥得改性产物，即改性羊肚菌多糖。将上述改性羊肚菌多糖分别用蒸馏水配制成40mg/L的样品溶液，分别测定α-淀粉酶抑制率。测试结果如图3所示，随着过氧化氢水溶液加入量的增多，可以提供更多的羟基自由基，多糖的降解程度就越大，因此α-淀粉酶抑制率提高，当料液比为1:9时，抑制率最大；当过氧化氢水溶液加入量的继续增多，过氧化氢的过度氧化作用会使C-O-C发生断裂，使得分子量进一步降低，从而导致α-淀粉酶抑制率降低，因此最佳料液比为1:9。
反应温度对改性羊肚菌多糖α-淀粉酶抑制率的影响
称取1g上述羊肚菌多糖，按料液比1:9加入9mL的30％过氧化氢水溶液溶解样品，再分别加入0.2mol/L pH＝7的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液定容至25mL，分别在温度为20℃、30℃、40℃、50℃、60℃的条件下反应3h，反应结束后，浓缩，经真空冷冻干燥得改性产物，即改性羊肚菌多糖。将上述改性羊肚菌多糖分别用蒸馏水配制成40mg/L的样品溶液，分别测定α-淀粉酶抑制率。测试结果如图4所示，随着反应温度提高，α-淀粉酶抑制率提高，当反应温度为50℃时，抑制率最大；温度继续升高，可能由于过氧化氢不稳定，高温下易降解，从而降低了其氧化降解能力，抑制率下降，因此最佳反应温度为50℃。
磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液的pH对改性羊肚菌多糖α-淀粉酶抑制率的影响
称取1g上述羊肚菌多糖，按料液比1:9加入9mL的30％过氧化氢水溶液溶解样品，再分别加入0.2mol/L pH＝5、6、7、8、9的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液定容至25mL，在温度为50℃的条件下反应3h，反应结束后，浓缩，经真空冷冻干燥得改性产物，即改性羊肚菌多糖。将上述改性羊肚菌多糖分别用蒸馏水配制成40mg/L的样品溶液，分别测定α-淀粉酶抑制率。测试结果如图5所示，过氧化氢虽然在酸性条件下显示出更强的氧化性，但是过度的氧化可能会导致羊肚菌多糖改性物的分子量进一步变化，同时其羟基氧化成羧基的可能性也大大增强，因此随着缓冲液pH的增大，α-淀粉酶抑制率提高，当pH＝7时，抑制率最大；当缓冲液pH继续增大，在碱性环境下会降低其稳定性，并且抑制过氧化氢的氧化性，从而降低了改性产物的α-淀粉酶抑制能力，因此缓冲液最佳pH＝7。
综上，当羊肚菌多糖与过氧化氢水溶液的料液比为1:9，磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液的pH为7，反应温度为50℃，反应时间为3h时，α-淀粉酶抑制率最大。
本发明还将羊肚菌多糖、改性羊肚菌多糖以及常用的降血糖药阿卡波糖对糖苷酶抑制率进行了比较，将羊肚菌多糖、改性羊肚菌多糖和阿卡波糖分别用蒸馏水配制成40mg/L的样品溶液，再分别测定相应的α-淀粉酶抑制率、蔗糖酶抑制率、麦芽糖酶抑制率以及α-葡萄糖苷酶抑制率。
α-淀粉酶抑制率的测定方法已在前面描述，在此不做赘述。
蔗糖酶抑制率的测定：加入2％蔗糖溶液0.5mL，在抑制管和抑制对照管中加入1.0mL 40mg/L上述样品溶液，在空白管和空白对照管中加入1.0mL蒸馏水进行对照，再在空白管和抑制剂管加入0.5mL 20U/mL蔗糖酶，对照管加入0.5mL蒸馏水。置于37℃水浴中反应10min后，加入1.0mLDNS，于沸水浴中反应5min，加入10.0mL蒸馏水，冷却至室温，最后于550nm处测定吸光值，得A。
羊肚菌多糖、改性羊肚菌多糖和阿卡波糖对蔗糖酶的抑制率：
式中，A1、A2、A3和A4分别为550nm下空白管、空白对照管、抑制管和抑制对照管的吸光值。
麦芽糖酶抑制率的测定：加入2％麦芽糖溶液0.5mL，在抑制管和抑制对照管中加入1.0mL 40mg/L上述样品溶液，在空白管和空白对照管中加入1.0mL蒸馏水进行对照，再在空白管和抑制剂管加入0.5mL 20U/mL麦芽糖酶，对照管加入0.5mL蒸馏水。置于37℃水浴中反应10min后，加入1.0mL的DNS，于沸水浴中反应5min，加入10.0mL蒸馏水，冷却至室温，最后于405nm处测定吸光值，得A。
羊肚菌多糖、改性羊肚菌多糖和阿卡波糖对麦芽糖酶抑制率：
式中，A1、A2、A3和A4分别为405nm下空白管、空白对照管、抑制管和抑制对照管的吸光值。
α-葡萄糖苷酶抑制率的测定：加入PNPG溶液2.0mL，在抑制管和抑制对照管中加入1.0mL 40mg/L上述样品溶液，在空白管和空白对照管中加入1.0mL蒸馏水进行对照，再加入2.0mL磷酸盐缓冲溶液。置于37℃水浴中保温10min，在空白管以及抑制管加入1.0mL 20U/mL的α-葡萄糖苷酶，在对照管加入1.0mL蒸馏水。再次放入37℃水浴中保温15min，加入5.0mL碳酸钠溶液终止试验。冷却至室温，于405nm处测得吸光值，得A。
羊肚菌多糖、改性羊肚菌多糖和阿卡波糖对α-葡萄糖苷酶的抑制率：
式中，A1、A2、A3和A4分别为405nm下空白管、空白对照管、抑制管和抑制对照管的吸光值。
测试结果如图6所示，羊肚菌多糖和阿卡波糖对蔗糖酶、麦芽糖酶以及α-葡萄糖苷酶的抑制率相差不大，但对α-淀粉酶抑制率却相差很大，羊肚菌多糖对α-淀粉酶抑制率仅为0.95％，而阿卡波糖对α-淀粉酶抑制率为11.21％。
利用过氧化氢氧化法对羊肚菌多糖进行改性，改性羊肚菌多糖对α-淀粉酶抑制率显著提高至16.14％(P﹤0.05)，改性后与改性前相比，α-淀粉酶抑制率提高了16.99倍。同时，蔗糖酶抑制率由72.08％提高到78.13％，麦芽糖酶抑制率由10.05％提高到16.48％，α-葡萄糖苷酶由17.54％提高到21.40％。
改性羊肚菌多糖与同浓度下的阿卡波糖相比，α-淀粉酶抑制率提高了1.44倍，蔗糖酶抑制率与阿卡波糖无明显差异(P﹤0.05)，麦芽糖酶抑制率提高了1.63倍，α-葡萄糖苷酶抑制率提高了1.88倍。本发明改性羊肚菌多糖对糖苷酶抑制率提高，尤其是提高了对α-淀粉酶抑制能力，为更好的用于体外降血糖研究提供了新的思路。

Claims (10)

1.一种改性羊肚菌多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取羊肚菌洗净、去除杂质、高温灭菌、烘干、粉碎过筛，通过水提醇沉法提取羊肚菌多糖；
(2)将羊肚菌多糖加入过氧化氢水溶液中，再加入磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液进行反应，反应结束后浓缩，冷冻干燥，得到改性羊肚菌多糖。
2.根据权利要求1所述的改性羊肚菌多糖的制备方法，其特征在于，所述水提醇沉法的步骤为：将粉碎过筛后的羊肚菌加入水中混合搅拌，超声加热提取，得到提取液，提取液静置、过滤、离心处理，得到上清液，上清液浓缩后，加入无水乙醇进行醇沉，静置，收集沉淀，沉淀经冷冻干燥，得到羊肚菌多糖。
3.根据权利要求1所述的改性羊肚菌多糖的制备方法，其特征在于，所述羊肚菌多糖与过氧化氢水溶液的料液比为1:1～13。
4.根据权利要求3所述的改性羊肚菌多糖的制备方法，其特征在于，所述羊肚菌多糖与过氧化氢水溶液的料液比为1:5～11。
5.根据权利要求1所述的改性羊肚菌多糖的制备方法，其特征在于，所述磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液的pH为5～9。
6.根据权利要求5所述的改性羊肚菌多糖的制备方法，其特征在于，所述磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液的pH为6～8。
7.根据权利要求1所述的改性羊肚菌多糖的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中反应温度为20～60℃，反应时间为0.5～3.5h。
8.根据权利要求7所述的改性羊肚菌多糖的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中反应温度为30～60℃，反应时间为2.5～3.5h。
9.根据权利要求1所述的改性羊肚菌多糖的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中羊肚菌多糖与过氧化氢水溶液的料液比为1:9，所述磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液的pH为7，反应温度为50℃，反应时间为3h。
10.如权利要求1～9任一项制备所得的改性羊肚菌多糖作为糖苷酶抑制剂在降血糖方面的应用。
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