CN1453029A - 一种治疗老年性痴呆的中药组合物 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种预防和/或治疗中药组合物按照重量份计算包括熟地5～40，制何首乌5～35，枸杞子5～35，淫羊藿5～35，仙茅5～35，石菖蒲5～35，远志3～20。本发明还涉及该中药组合物的水、醇提取物。

Description

一种治疗老年性痴呆的中药组合物

技术领域

本发明涉及一种中药组合物，特别是用于治疗老年性痴呆的中药组合物。

背景技术

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)或者老年性痴呆是一种常见的中枢神经系统进行性变性疾病，其主要临床表现为进行性记忆减退和认知障碍。据流行病学资料统计，欧美发达国家60岁以上老年人AD的发病率为6-8％，AD在老年人死因中仅次于心血管疾病、肿瘤和中风，居第四位。全世界至少有2,000-3,000万AD病人。目前我国人口已达13亿，60岁以上老年人比例已超过10％，这意味着我国已步入老龄化社会。据最新研究报道，我国北京地区60-80岁间老年人AD的发病率为5％左右，80岁以上老年人AD的发病率为7-8％，即我国至少有500-800万AD病人。世界上目前对该病缺乏有效的防治手段。AD病人不仅给自己带来极大的痛苦，而且给亲人和社会带来严重的精神和经济负担，已成为医学和社会的世界性难题，引起了世界各国政府和科研工作者的密切关注，AD防治的研究已成为世界性热点之一。从科研经费的投入来看，AD在所有重大疾病中科研经费投入占第二位，仅次于AIDS。我国“973计划”和“863计划”中，均设有老年性疾病的重大课题专项，其中，主要资金投向于AD的科研与开发，尤其利用我国传统医学(中医药)对AD的防治研究。有关AD防治的药物开发也必将形成巨大的产业。

阿尔茨海默病是一种常见的中枢神经系统进行性变性疾病，其主要临床表现为进行性记忆减退和认知障碍。AD的主要神经病理学特征为过度的细胞外Aβ淀粉样蛋白沉淀、神经纤维缠结增多、tau蛋白的过度磷酸化、突触密度减少、神经元细胞减少等。其中细胞外Aβ淀粉样蛋白的沉积，形成分散的老年斑和淀粉样血管病，被认为是该病发病机制中的关键环节。

中国专利申请97116461.4号公开了一种治疗老年痴呆的药物及其制备方法。该发明由陈皮、佩兰、天麻、刺五加、丹皮、山萸肉、熟地、巴戟肉、益智仁等二十七味中药组成，经粉碎，水、醇渗漉法提取，混合等程序，使用蜜丸工艺加工成蜜丸。方中的二十七味中药相互配伍后，可以改善脑功能，间接抑制痴呆的发展，维持残存脑功能的正常生活，减少因痴呆而产生的症状和并发症；迅速改善脑血液循环，增加缺血区的血流量和氧供给，防止脑血管内血栓的继续扩展并努力消除脑水肿，使其功能受到抑制的细胞较快地恢复活力。

中国专利申请98112741.X公开了一种防治老年痴呆的口服液，它是由石菖蒲、黄芪、远志、防风、秦艽、茯神、益智子、菊花、荆芥、羌活、栀子按配比经煎煮、蒸馏精制而成，对防治老年痴呆恢复失语、记忆、行为等功能有特效。

现有技术中用来治疗AD的大部分药物都是针对该病的主要症状，即认知障碍，包括记忆减退，语言障碍，实践活动功能降低等。同时，抑郁、焦虑、幻觉和妄想在内的精神和行为症状也常伴随AD。长期以来用于治疗抑郁，精神分裂症等精神病的药物近来也被用于治疗AD的这些症状。但是，理想的药物是针对AD的主要神经病理学特征的药物，目前国内外缺乏这类特异性药物。

发明内容

为了克服现有技术的不足之处，本发明的目的在于提供一种预防和/或治疗中药组合物按照重量份计算包括熟地5～40，制何首乌5～35，枸杞子5～35，淫羊藿5～35，仙茅5～35，石菖蒲5～35，远志3～20。

优选的是按照重量份计算包括熟3～30，制何首乌3～25，枸杞子3～25，淫羊藿3～25，仙茅3～25，石菖蒲3～25，远志23～15。

本发明还涉及一种预防和/或治疗老年性痴呆的中药组合物的水提物，所述的中药组合物按照重量份计算包括熟地5～40，制何首乌5～35，枸杞子5～35，淫羊藿5～35，仙茅5～35，石菖蒲5～35，远志3～20。

本发明还涉及一种预防和/或治疗老年性痴呆的中药组合物的乙醇提物，所述的中药组合物按照重量份计算包括熟地5～40，制何首乌5～35，枸杞子5～35，淫羊藿5～35，仙茅5～35，石菖蒲5～35，远志3～20。

由此可见，本发明中药组合物可以使用现有技术公知的方法制成中药的各种剂型，例如但不限于片剂，胶囊剂，丸剂，散剂，膏剂，等等口服或者注射剂型，优选为口服剂型。

本发明的中药组合物具有以下有益效果：1)纯天然中草药制剂，无毒、无副作用；2)对记忆和认知能力有明显的改善作用；3)对神经元有明显的保护性作用；4)能够明显地降低脑组织内Aβ淀粉样蛋白的沉积和老年斑的形成；降低脑组织内反应性星形胶质细胞的活化。这是本中药方剂最显著的特点。目前尚未发现其它中药方剂具有此作用；5)不仅对AD病人的认知功能障碍和记忆能力低下具有明显的改善作用，而且对正常老年人的记忆减退也具有明显的改善作用；6)所含成分均为天然中草药，市场上均有销售，成本低廉。

21世纪人口的老龄化对人类社会是一个重大的挑战。我国目前已经步入老年型社会，60岁以上老年人人口数量达到1.3亿。随着社会性人口的衰老，与人口衰老相关疾病的发生急剧增加，特别是以阿尔茨海默病(AD)和骨质疏松为代表的老年性疾病引起的智能衰退、行动障碍和骨折等严重地影响老人的生活质量，为社会和家庭带来沉重负担。其中，AD病人达500～800万。但是，目前用来治疗AD的大部分药物，如艾斯能、哈伯因等都是针对该病的主要症状的药物。但是，理想的药物是针对AD的主要神经病理学特征的药物，目前国内外都在致力于开发这类特异性药物。21世纪人口的老龄化对人类社会是一个重大的挑战。我国目前已经步入老年型社会，60岁以上老年人人口数量达到1.3亿。随着社会性人口的衰老，与人口衰老相关疾病的发生急剧增加，特别是以阿尔茨海默病(AD)和骨质疏松为代表的老年性疾病引起的智能衰退、行动障碍和骨折等严重地影响老人的生活质量，为社会和家庭带来沉重负担。其中，AD病人达500～800万。但是，目前用来治疗AD的大部分药物，如艾斯能、哈伯因等都是针对该病的主要症状的药物。但是，理想的药物是针对AD的主要神经病理学特征的药物，目前国内外都在致力于开发这类特异性药物。本发明中药组合物就是针对AD的主要神经病理学特征脑组织内淀粉样蛋白的药物，通过降低脑组织内淀粉样蛋白的沉积，降低炎症反应性星形胶质细胞的活化和保护神经元的作用，改善AD病人的认知功能和记忆能力，为临床提供有效的手段用于AD的防治。

因此，本发明中药组合物凭借其自身优势，面对中国500～800万AD病人和1.3亿60岁以上老年人的巨大市场，必将发展成为有巨大潜力的产业，给社会带来巨大的社会效益和经济效益。

本发明中药组合物就是针对AD的主要神经病理学特征脑组织内淀粉样蛋白的药物，通过降低脑组织内淀粉样蛋白的沉积，降低炎症反应性星形胶质细胞的活化和保护神经元的作用，改善AD病人的认知功能和记忆能力，为临床提供有效的手段用于AD的防治。

附图说明

图1显示PDAPP转基因小鼠(A)和非转基因小鼠(B)在隐蔽平台实验1～6天的平均潜伏期(means±SEM)的结果。

图2显示各组PDAPP转基因小鼠和非转基因小鼠在隐蔽平台实验1～6天的平均潜伏期(Mean±SEM)的结果，其中A对照组；B本发明药物组；C脑复康组。缩写：Tg mice，转基因小鼠；non-Tg mice，非转基因小鼠。

图3显示各组小鼠在探索实验中在TQ象限中搜索时间的所占百分比。其中A.PDAPP小鼠。B.非转基因小鼠。*P＜0.01，**P＜0.01，与对照组，#P＜0.05，与脑复康组相比较。

图4显示各组小鼠在探索实验中在30秒内经过平台位置的次数。其中A.PDAPP小鼠。B.非转基因小鼠。*P＜0.05，**P＜0.01，与对照组，#P＜0.05，与脑复康组相比较。

图5显示各组小鼠在可见平台实验1～4天的平均潜伏期(Mean±SEM)结果。其中A.PDAPP小鼠。B.非转基因小鼠。*P＜0.05，**P＜0.01，与对照组，#P＜0.05，与脑复康组相比较。

图6显示PDAPP转基因小鼠脑组织内Aβ淀粉样蛋白免疫组织化学检测(海马区域)结果(4×10)。其中A.对照组。B.脑复康组。C.本发明药物组。

图7显示PDAPP转基因小鼠脑组织刚果红组织化学染色(海马区域)(4×10)结果。A.对照组。B.脑复康组。C.本发明药物组。

图8.显示PDAPP转基因小鼠脑组织GFAP免疫组织化学检测。A.对照组。B.脑复康组。C.本发明药物组。(400×)

图9显示MTT实验检测本发明中药组合物对Aβ42介导的对SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞神经毒性作用的保护作用的结果。**P＜0.01，与Aβ42组相比较，#P＜0.05，与脑复康组比较。

具体实施方式

以下将结合附图详细说明本发明的技术方案。

首先，本发明提供一种中药组合物按照重量份计算包括熟地5～40，制何首乌5～35，枸杞子5～35，淫羊藿5～35，仙茅5～35，石菖蒲5～35，远志3～20。该组合物的功能是补肾填精、开窍醒神。主治老年性痴呆(呆病)。症见智力下降，记忆力进行性衰退，乃至部分或全部丧失。或伴有精神行为异常症。

中医理论认为精神、意识、思维的生理功能与脑、肾密切相关。“脑为元神之府”、“脑为髓之海”、“肾主骨，生髓，上通于脑”(《内经》)；同时亦有“痰不能消……使神不清而成呆病”之说。可见元神之健全必须依赖“髓充满”、“空窍清”、“脑络通”，作为生理功能的基础，一旦痰邪客于脑，难免蒙蔽清窍、阻塞脑络，加之老年髓海渐空，势必致虚实夹杂，元神失其健全，出现精神、意识、思维方面的病理变化。故治疗老年呆病宜邪正兼顾，补肾填精、化痰开窍并用。

本方以熟地为君，熟地味甘，性温，归肾、肝经，《本草从新》云“滋肾水，封填精髓”。本方以此药为君补肾益精填髓。

制何首乌、枸杞子为臣。首乌“平补阴血之良药”(《药性切药》)，枸杞“能补益精之不足”(《药性论》)，两药合用增熟地补肾益精之力；同时以淫羊藿、仙茅并为臣药。淫羊藿“补命门肝肾，能壮阳益精”(《医林纂要.药性》)，仙茅温肾壮阳，并“通神强记，长精神”。上五药合用旨在平补肾之阴阳。

石菖蒲、远志为佐药。菖蒲气味芳香，其性轻扬，能疏导督脉，以怡情志、疏郁气、化脾浊、宁脑神。远志宁心安神，“治心神健忘，安魂魄，令人不迷”(《药性论》)，并能祛痰开窍以“补不足，利九窍，益智慧，耳目聪明，不忘，强志倍力。”(《本经》)。二药为佐意在疏导督脉之气，行开窍益智之功。

诸药配伍共凑补肾精以填脑髓、化痰浊以开脑窍、醒脑神以复神智之效。

本发明的药物组合物对AD模型小鼠和转基因小鼠的防治药效学研究，进一步从理论上阐明该中药方剂的作用机理，以期开发成为一种对AD的认知功能和记忆能力有明显改善作用的新药，用于临床治疗AD病人的认知和记忆功能障碍。

1.采用聚集的β一淀粉样多肽[β-AP(25-35)]注射入小鼠侧脑室，通过观察小鼠行为学改变及大脑皮层和海马的组织学变化，建立AD模型小鼠。

2.应用该模型小鼠对多种中药复方制剂进行药效学研究，并以西药脑复康作为对照，评价本发明中药组合物对小鼠记忆功能和认知能力的改善作用。

3.为了进一步研究本发明的药物组合物对AD的疗效作用，选用了目前国际上公认的AD药物筛选动物模型-PDAPP^V717I转基因小鼠进行该方剂的药效学研究。该小鼠被转染了淀粉样蛋白前体(APP)基因突变体(APP^V717I)，使脑组织内APP^V717I蛋白过度表达，Aβ42肽沉积增多，继发出现人类AD样病理改变。目前，PDAPP^V7171I转基因小鼠为研究AD发病机制和评价治疗和预防AD药物的理想实验动物模型。实验结果显示，本发明的药物组合物不仅能够明显地改善PDAPP^V717I转基因小鼠的认知和记忆功能，而且能够明显地降低PDAPP^V717I转基因小鼠脑组织内Aβ淀粉样蛋白的沉积，老年斑减少。同时，本发明的药物组合物能够降低PDAPP^V717I转基因小鼠脑组织内反应性星形胶质细胞的活化。

4.本发明的药物组合物对神经元的保护性作用体外实验研究。结果显示，本发明中药组合物对神经元具有明显的保护性作用。

5.经过毒理学试验表明本发明的药物组合物对哺乳动物包括人无毒性。

6.本发明的药物组合物的临床实验表明对老年型痴呆有效。

实施例1

选取熟地5公斤，制何首乌5公斤，枸杞子5公斤，淫羊藿5公斤，仙茅5公斤，石菖蒲5公斤，远志3公斤，分别粉碎并混合，制成粉状混合物。按照现有技术公知的方法制成蜜丸。

实施例2

选取熟地40公斤，制何首乌35公斤，枸杞子35公斤，淫羊藿35公斤，仙茅35公斤，石菖蒲35公斤，远志20公斤。分别粉碎并混合，制成粉状混合物。按照现有技术公知的方法制成片剂或者胶囊剂。

实施例3

选取熟地3公斤，制何首乌3公斤，枸杞子3公斤，淫羊藿3公斤，仙茅3公斤，石菖蒲3公斤，远志2公斤。经过粉碎后于提取釜中加入水，其加入量为没过上述的中药，然后沸煮提取至少两次，除去药渣，得提取液，合并提取液。

实施例4

选取熟地40克，制何首乌35克，枸杞子35克，淫羊藿35克，仙茅35克，石菖蒲35克，远志20克。经过适当的粉碎后于提取釜中加入乙醇，其加入量为没过上述的中药提取48小时，除去药渣，得上述中药组合物的醇提物。

实施例5

采取同实施例1相同的步骤制备本发明药物组合物，不同的是选用熟地40公斤，制何首乌5公斤，枸杞子30公斤，淫羊藿15公斤，仙茅10公斤，石菖蒲5～35，远志3～20。

实施例6

采取同实施例3相同的步骤制备本发明药物组合物的水提物，不同的是选用熟地5公斤，制何首乌5公斤，枸杞子5公斤，淫羊藿5公斤，仙茅5公斤，石菖蒲5公斤，远志20公斤。

实施例7

采取同实施例3相同的步骤制备本发明药物组合物的水提物，不同的是选用熟地40公斤，制何首乌35公斤，枸杞子35公斤，淫羊藿35公斤，仙茅5公斤，石菖蒲35公斤，远志20公斤。实验例1

本发明中药组合物对β-淀粉样多肽侧脑室注射阿尔茨海默病模型小鼠的认知和记忆功能改善作用的研究。通过Balb/c小鼠侧脑室微量注射聚集态β-淀粉样多肽(β-AP_25-35)，建立模拟AD的小鼠动物模型(Giovannelli L，Casamenti F，Scali C.Differential effects of amyloidpeptides β-(1-40)and β-(25-35)injections into the rat nucleus basalis.Neuroscience.1995；66：781-792.)，并通过行为学实验和脑组织组织化学检测，研究了和本发明中药组合物对该小鼠模型认知和记忆能力的疗效作用。同时，以促智药西药脑复康做对照。结果显示，本发明中药组合物对AD模型小鼠的认知和记忆能力具有明显的改善作用。(1)干预试验各组AD模型小鼠的跳台试验

动物给药30天后进行跳台回避试验。首先，将小鼠放入跳台仪反应箱内，适应环境3分钟，然后通以36V交流电，小鼠受到电击后多数跳上跳台逃避电击。小鼠可能再次或多次跳至铜栅上，后又跳回平台，如此训练5分钟，记录小鼠错误次数，以此作为学习成绩。24小时后重新测试，记录小鼠触电潜伏期，并记录5分钟内的错误次数。(Maurice T，Lockhart BP，Privat A.Amnesia induced in mice by centrallyadministered β-amyloid peptides involves cholinergic dysfunction.BrainResearch.1996；706：181-193.)表1干预实验各组AD模型小鼠的跳台实验结果(x±S，n＝12)组别                        潜伏期(秒)                    错误率(％)AD模型对照组                84.83±71.6                    83.3生理盐水组                  187.18±120.65²⁾              64.3脑复康组                    148.92±111.41¹⁾              61.5中药组合物小剂量组          264.17±71.58^{2，4，5，6，7)}       30.8中药组合物大剂量            199.33±123.17^2，3)            53.9

注：¹⁾P＜0.05，²⁾P＜0.01，与AD模型对照组相比较；³⁾P＜0.05，⁴⁾P＜0.01，与脑复康组相比较；⁵⁾P＜0.05，与生理盐水组相比较。

如表1所示，模型组小鼠的下台潜伏期明显低于手术对照组(P＜0.01)，而错误率也明显高于生理盐水对照组(P＜0.05)。

总之，脑复康组、本发明中药组合物大剂量组、本发明中药组合物小剂量组的下台潜伏期均明显地比模型对照组延长。本发明中药组合物大剂量组与小剂量组之间无显著性差异(P＞0.05)。

(2)干预试验各组AD模型小鼠的回避试验动物给药33天后进行避暗试验。先将小鼠背向洞口放入明室，适应环境3分钟，然后，通电3分钟，记录小鼠进入暗室受到电击的潜伏期。24小时后重新测试，记录3分钟内小鼠进入暗室受到电击的次数和触电潜伏期(蔡永春，李凤文。中药及其复方对小鼠学习记忆影响的研究进展。中国中医基础医学杂志1998，4(8)：58-62)。

表2干预实验各组AD模型小鼠的回避实验结果(x±S，n＝12)组别                  潜伏期(秒)               错误率(％)AD模型对照组          106.42±71.91            61.5生理盐水组            173.83±20.45²⁾         21.4脑复康组              146.5±65.18¹⁾          38.5中药组合物小剂量组    180±0²⁾                0中药组合物大剂量组    163.42±40.43¹⁾         23.1注：¹⁾P＜0.05，²⁾P＜0.01，与AD模型对照组相比较。

如表2所示，模型组小鼠的下台潜伏期明显低于手术对照组(P＜0.01)，而错误次数明显高于生理盐水对照组(P＜0.01)。脑复康组、中药组合物大剂量组和中药组合物小剂量组的潜伏期明显地比模型对照组延长。其中中药组合物小剂量组与模型对照组之间的统计学差异最显著(P＜0.01)。实验例2

本发明中药组合物PDAPP转基因小鼠上的防治药效学研究。

采用PDAPP转基因小鼠作为实验动物模型，同时采用目前国际上通用的动物行为学实验(Morris Water Maze)、脑组织内淀粉样蛋白免疫组织化学和组织学染色等方法进一步研究本发明中药组合物对阿尔茨海默病的疗效作用。2.1水迷宫实验2.1.1隐蔽平台试验

(1)在隐蔽平台实验中1～6天小鼠搜索平台的平均潜伏期为了研究本发明中药组合物对PDAPP转基因小鼠认知功能和记忆能力的改善作用，首先采用Morris水迷宫隐蔽平台实验评价各组小鼠的学习和记忆能力(Janus，C.，D′Amelio，S.，Amitay，O.，Chishti，M.A.，Strome，R.，Fraser，P.，Carlson，G.A.，Roder，J.C.，George-Hyslop，P.，and Westaway，D.(2000)Neurobiol.Aging 21，541-549)。在实验过程中，记录小鼠搜索隐蔽平台的潜伏期、搜索距离和速度。经分析各组小鼠之间的搜索速度无显著性差异，潜伏期与搜索距离之间具有非常明显的相关性，所以，以小鼠搜索平台的潜伏期作为评价小鼠空间学习和记忆能力的指标。

如图1A所示，在第1～6天的训练过程中，尽管各组PDAPP小鼠搜索平台的潜伏期之间存在差异，但是潜伏期均有明显的缩短。采用post hoc统计学分析结果显示，本发明中药组合物组在第4、5、6天的平均潜伏期均明显比对照组和脑复康组的平均潜伏期短(p值均小于0.05)。如第6天，本发明中药组合物组的平均潜伏期为25.41±2.53s，对照组为36.62±2.96s，脑复康组为36.89±3.04s。脑复康组的平均潜伏期与对照组之间没有明显的统计学差别(p＞0.05)。这表明本发明中药组合物组PDAPP^V717I转基因小鼠的学习与记忆能力得到明显的改善。

比较非转基因小鼠各组的平均潜伏期发现，在第6天时，本发明中药组合物组在第6天的平均潜伏期明显比对照组(p＜0.05)和脑复康组的平均潜伏期短(p＜0.05)(图1B)。这表明本发明中药组合物对非转基因小鼠的学习与记忆能力也具有改善作用。通过分析各组PDAPP转基因小鼠和非转基因小鼠的平均潜伏期发现，只有本发明中药组合物组转基因小鼠与非转基因小鼠之间没有明显的差异(图2A)，而对照组和脑复康组中转基因小鼠与非转基因小鼠之间均具有明显的差异(图2B和图2C)。表明，本发明中药组合物组PDAPP转基因小鼠的学习与记忆能力与非转基因小鼠相比没有显著性差异，这意味着本发明中药组合物组PDAPP转基因小鼠的学习与记忆能力得到明显的改善。2.1.2探索实验(Probe test)

由于小鼠在搜索隐蔽平台过程中，可能有小鼠偶尔、无意识或随机的碰到平台后上台的，为了消除这种随机性，我们将平台从水池中拿走，让小鼠在水池内搜索平台60秒，观察小鼠在TQ象限中的搜索时间和经过平台位置次数，通过比较在TQ象限中搜索时间的百分比和经过平台的次数，评价小鼠空间学习和记忆能力。同时，考虑到小鼠可能由于在平台位置搜索不到平台而影响小鼠后面的行为，所以，我们统计了前30秒小鼠在TQ象限中的搜索时间和经过平台位置次数作为评价小鼠空间学习和记忆能力的指标。

(1)小鼠在探索实验中TQ象限中搜索时间的百分比

探索实验结果显示，在PDAPP小鼠，本发明中药组合物组小鼠的学习和记忆能力得到明显的改善，本发明中药组合物组小鼠的空间学习和记忆能力与脑复康组和对照组之间有明显的差异。如图3A所示，本发明中药组合物组小鼠30秒内在TQ象限中搜索时间的百分比明显高于脑复康组(p＜0.05)和对照组(p＜0.01)。本发明中药组合物组在TQ象限中搜索时间的百分比为43.1±4.4％，而脑复康组为35.2±3.6％，对照组29.9±3.7％。本发明中药组合物组与对照组和脑复康组之间均有明显的差异(p＜0.05)。脑复康组和对照组之间均没有明显的差异(p＞0.05)。而非转基因小鼠30秒内在TQ象限中搜索时间的百分比如图3B所示，本发明中药组合物组明显高于对照组(p＜0.05)和脑复康组(p＜0.05)。

(2)小鼠在探索实验中经过平台位置的次数

如图4A所示，本发明中药组合物组PDAPP小鼠在30秒搜索时间内平均经过平台位置的次数为(1.20±0.30)，明显高于脑复康组(0.89±0.24)和对照组(0.65±0.21)。在非转基因小鼠中，如图4B所示，本发明中药组合物组小鼠经过平台位置的次数(1.98±0.4)也均明显高于脑复康组(1.60±0.28)和对照组(1.42±0.34)。2.1.3可见平台实验(visible platform)

在做完“probe test”后，在平台的上方插一个标志杆，黑白相间，非常醒目，小鼠很容易发现。同时在标志杆的上方放一个白色小球，防止影像示踪系统对标志杆的识别而引起实验终止。可见平台水迷宫实验结果显示，第2天开始，本发明中药组合物组和脑复康组PDAPP小鼠的平均潜伏期明显短于对照组。如图5A所示，经可重复方差分析发现，本发明中药组合物组与脑复康组之间没有显著性差异(P值均小于0.05)。在非转基因小鼠，如图5B所示，第2天开始，本发明中药组合物组小鼠的平均潜伏期与对照组之间具有明显的差异(P＞0.05)。

通过这几种水迷宫实验检测发现，本发明中药组合物治疗组PDAPP转基因小鼠与其它各组小鼠相比，其学习和记忆能力得到明显地改善。本发明中药组合物处理的非转基因小鼠与其它组相比，其学习和记忆能力也得到明显地改善。由此表明，本发明中药组合物对老年性痴呆不仅具有治疗作用，而且对正常人的学习和记忆能力具有明显的改善作用的。2.2 PDAPP小鼠脑组织内β淀粉样蛋白免疫组织化学染色

为了进一步研究PDAPP转基因小鼠脑组织内β淀粉样蛋白的沉积情况，利用Aβ特异性单克隆抗体3D6做免疫组织化学染色。在对照组PDAPP小鼠脑组织的大脑皮质和海马区域(如图6)均可以看到有明显的β淀粉样蛋白沉积区域，大量成熟的老年斑。本发明中药组合物组小鼠脑组织内β淀粉样蛋白沉积区域明显减少，虽然有的小鼠也可以看到老年斑，但是老年斑的直径明显比对照组小，看不到大的老年斑。而脑复康组小鼠脑组织内β淀粉样蛋白沉积情况与对照组之间没有发现明显的差异。我们利用NIH image J图像灰度扫描定量分析软件(http：rsb.info.nih.gov/nih-image)分析各组PDAPP小鼠脑组织内β淀粉样蛋白沉积区域的百分比。结果显示，本发明中药组合物组小鼠脑组织大脑皮质和海马区域β淀粉样蛋白的平均值明显低于对照组脑复康组(P＜0.05)。2.3 PDAPP小鼠脑组织刚果红组织学染色

在对照组和脑复康组PDAPP小鼠脑组织的大脑皮质和海马区域(如图7)均可以看到有大量明显的嗜刚果红神经细胞。本发明中药组合物组小鼠脑组织的大脑皮质和海马区域嗜刚果红神经细胞数目明显减少。2.4 PDAPP小鼠脑组织内星形胶质细胞增生状况的免疫组织化学染色

如图8所示，对照组和脑复康组PDAPP小鼠脑组织大脑皮质均可见到大量明显的GFAP阳性星形胶质细胞增生，而本发明中药组合物组PDAPP小鼠脑组织内仅有非常弱GFAP阳性星形胶质细胞增生。

本发明中药组合物能够降低PDAPP转基因小鼠脑组织内Aβ淀粉样蛋白的含量，降低脑组织内炎症反应，保护神经元细胞，明显改善小鼠的认知和记忆功能。同时，对非转基因老龄小鼠的认知和记忆功能也具有改善作用。实验例3

本发明中药组合物对神经元保护作用的研究。

为了进一步证实本发明中药组合物对神经元的保护作用，采用MTT实验检测本发明中药组合物对Aβ42介导的对SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞的神经毒性作用是否有保护作用。结果显示，本发明中药组合物能够部分中和Aβ42介导的对SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞的神经毒性作用。如图9所示，本发明中药组合物在某一特定稀释度时，能够部分防止Aβ42的神经毒性作用(76.2％的细胞存活率)，与Aβ42组和脑复康组相比较具有明显的差异，而脑复康组与Aβ42组比较无明显差异。实验例4

本发明中药组合物毒理学研究：因无法定出LD₅₀，根据《新药评审办法》有关规定进行最大耐受量测定。选择19-22克的SPF级ICR小鼠20只，雌雄各半。将612克发明中药组合物经北京同仁堂崇文门药店煎制，浓缩为200ml药液。动物禁食4小时后，一次性灌胃受试物1ml。即刻观察动物反应，连续观察7天；逐日记录小鼠的毒性反应及死亡情况。结果显示：小鼠灌胃给药153g生煎药/kg体重，是成人临床用量(1.7g生药/kg体重)的90倍，实验中动物外观、活动、食欲正常，无异常分泌物及大小便异常。未见毒性反应及因毒性死亡的动物。第八天处死动物进行尸检，肉眼观察未发现病变器官。病理组织学检查发现无病理学变化。实验例5

发明中药组合物的临床研究。

为进一步探讨发明中药组合物防治AD的疗效和作用机制，本发明人进行本发明中药组合物治疗老年痴呆的临床研究，现将研究结果报道如下。

AD的临床诊断按照美国精神疾病诊断和统计手册第IV版修订版和美国精神病学及语言障碍和卒中-阿尔茨海默病及相关疾病国家研究所的标准执行(American Psychiatric Association.Diagnostic andstatistical manual of mental disorders，4^th ed.Washington：AmericanPsychiatric Association Press.1994.and Mckhann G，Drachman D，Foistein M et al.Clinical diagnosis of Alzheimer’s disease：Report of theNINCDS-ADRDA Work Group under the auspices of the Department ofHealth and Human Service Task Force on Alzheimer’s disease.Neurology1984；34：939-44.)。在排除患有严重的神经系统疾病、内分泌疾病、严重代谢疾病、严重肝肾和心肺疾病、重度痴呆及临床不能配合者等后，通过病史和简易精神状态检查表(MMSE)和日常生活功能活动量表调查(ADL)筛查出53例AD患者(所有AD患者MMSE测评均低于25分)。随机分为本发明中药组合物组33例，脑复康对照组20例。本发明中药组合物组服用发明中药组合物每天3次，每次50ml；脑复康对照组服用脑复康片(由东医集团东北制药总厂生产，批号200006066，每片含吡拉西坦0.4g)每次4片，每日3次，3月为1疗程。在观察期间，予适当对症处理，如有感染者予抗感染治疗，但停用其他益智药及扩血管药物。采用简易精神状态检查表(MMSE)和日常生活自理能力量表(ADL)积分的变化进行疗效评估。经SPSS软件进行统计分析，治疗前后及两组之间采用t检验。

表3中药组合物组和脑复康组治疗前后MMSE、ADL积分比较(X±s)

                             MMSE积分         ADL积分

中药组合物组       治疗前    15.03±2.67      59.7±7.71

(n＝33)            治疗后    19.01±2.39^*#   53.60±7.51^*#

脑复康组           治疗前    15.51±2.12      58.1±6.19

(n＝20)            治疗后    16.71±2.91      56.91±7.23

^*P＜0.01，与治疗前相比较；^#P＜0.01，与脑复康组比较

结果如3表所示，两组治疗前MMSE、ADL积分基线无明显差异(P＞0.05)，治疗后本发明中药组合物组的MMSE平均积分较治疗前有明显提高(P＜0.01)，但是脑复康组的MMSE平均积分较治疗前无显著性改变(P＞0.05)。治疗后本发明中药组合物组的MMSE平均积分也明显高于脑复康组的MMSE平均积分(P＜0.05)。同样，治疗后本发明中药组合物组的ADL平均积分较治疗前有明显降低(P＜0.01)，而脑复康组的ADL平均积分较治疗前无明显改变。

上述数据表明本发明中药组合物能够明显地改善AD病人的智能障碍，提高AD病人的生活能力；而脑复康的作用虽然不明显，但是对AD病人智能障碍的进一步发展有一定的抑制作用。

Claims (5)

1、一种预防和/或治疗老年性痴呆的中药组合物，其特征在于按照重量份计算包括熟地5～40，制何首乌5～35，枸杞子5～35，淫羊藿5～35，仙茅5～35，石菖蒲5～35，远志3～20。

2、如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于按照重量份计算包括熟地3～30，制何首乌3～25，枸杞子3～25，淫羊藿3～25，仙茅3～25，石菖蒲3～25，远志2～15。

3、一种预防和/或治疗老年性痴呆的中药组合物的水提物，其特征在于所述的中药组合物按照重量份计算包括熟地5～40，制何首乌5～35，枸杞子5～35，淫羊藿5～35，仙茅5～35，石菖蒲5～35，远志3～20。

4、一种预防和/或治疗老年性痴呆的中药组合物的乙醇提取物，其特征在于所述的中药组合物按照重量份计算包括熟地5～40，制何首乌5～35，枸杞子5～35，淫羊藿5～35，仙茅5～35，石菖蒲5～35，远志3～20。

5、如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于该组合物制成片剂，胶囊剂，丸剂，散剂，膏剂。

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