CN1421203A

CN1421203A - 小檗碱的体内抗肿瘤作用的新用途

Info

Publication number: CN1421203A
Application number: CN 02134693
Authority: CN
Inventors: 冼励坚; 蔡于琛
Original assignee: TUMOR PREVENTION AND THERAPY CENTER ZHONGSHAN UNIV
Current assignee: TUMOR PREVENTION AND THERAPY CENTER ZHONGSHAN UNIV
Priority date: 2002-09-07
Filing date: 2002-09-07
Publication date: 2003-06-04
Anticipated expiration: 2022-09-07
Also published as: CN1313093C

Abstract

本发明属于一种小檗碱的体内抗肿瘤作用的新用途。其特征为小檗碱的体内抗肿瘤作用的新用途。口服小檗碱可达有效抑瘤浓度，较好地抑制S180肉瘤在昆明小鼠体内的生长，并抑制人鼻咽癌CNE2细胞及人结肠癌细胞在裸小鼠体内的生长。

Description

小檗碱的体内抗肿瘤作用的新用途

[技术领域]

本发明涉及一种小檗碱的体内抗肿瘤作用的新用途。

[背景技术]

中药黄连来源于毛莨科植物黄连Coptis chinensis、三角叶黄连Coptis deltoidea或云连Coptis teeta的干燥根茎，其味苦寒，具有清热燥湿、泻火解毒的功效。小檗碱(又称黄连素，小蘖碱，Berberine，简称Ber)是其主要有效成分，同时它也是黄柏，三颗针等植物干燥根茎的主要成分。盐酸小檗碱的分子式为：C₂₀H₁₈ClNO₄·2H₂O。分子量407.85。其纯品为黄色结晶性粉末，无臭，味极苦。在热水中溶解，在水或乙醇中微溶。小檗碱(单体)的化学结构式为：

小檗碱是一种高效低毒的常用的广谱抗菌药物，主要应用于菌痢，胃肠炎，痈肿等细菌性感染，也可用于呼吸道，五官科，外科局部感染的治疗。现在还广泛应用于消化性溃疡，心率失常，糖尿病，抗血小板聚集，高血压，氨硫脲副反应，顽固性菌痢，宫颈糜烂等疾病的治疗。特别是在心血管系统方面，动物实验及临床研究均已证实，Ber具有正性肌力作用和负性频率作用，对心肌缺血及心肌梗塞具有保护作用，并能降低动脉血压，增加冠脉流量，对心肌Ca²⁺内流有双向调节作用。同时Ber具有抗自由基作用。此外，己注意到Ber对脑缺血的保护作用以及抗糖尿病作用。近年来，小檗碱体外抗肿瘤作用亦日渐受到重视。

以往研究表明，Ber能抑制培养细胞的氧摄取能力，抑制细胞呼吸链中的黄酶，而癌组织中的黄酶含量较低，因此比正常细胞对小檗碱更为敏感；抑制癌细胞对羧胺的利用，从而抑制嘌呤及核酸的合成。国内有学者报道了小檗碱对艾氏腹水瘤和淋巴瘤NT/LY细胞均有一定的抑制作用，其中主要通过抑制腹水瘤细胞呼吸以及抑制细胞嘌呤和核酸的生物合成而发挥作用。目前国内外对小檗碱抗肿瘤作用的研究主要是体外实验，研究的细胞株有K562细胞、HL-60(人急性早幼粒细胞白血病APL细胞)和CCRF-CEM(淋巴母细胞样白血病)细胞、人胃癌细胞株(低分化粘液腺癌MGC-803，胃腺癌淋巴结转移SGC-7901)、鼻咽癌上皮样细胞株HNE₃细胞、人脑胶质瘤细胞株和大鼠9L脑肿瘤细胞、HepG₂细胞、结肠癌、乳腺癌细胞、人食管癌细胞(ECCs)，显示了小檗碱在体外有着明显的抗增殖活性。

尽管人们对小檗碱的体外抗肿瘤作用研究较多，但是有关小檗碱的体内抑瘤实验在国内外的报导均极少。检索1966年到2002年共36年间的国内外文献，只有4篇报道与小檗碱的体内抑瘤实验有关。在这4篇文章中真正涉及小鼠体内抑瘤作用的仅有1篇文章，实验只在1个瘤株、1次实验中进行，结论认为口服小檗碱难以达到有效抑制肿瘤的作用。其他3篇文章均不是实际意义上的体内抑瘤实验，因此到现在为止，对于小檗碱的体内抑瘤作用还没有一个明确的定论。

[发明内容]

本发明提供一种小檗碱用于体内抗肿瘤作用的应用，口服小檗碱可达有效抑瘤浓度，较好地抑制S180肉瘤在昆明小鼠体内的生长，并抑制人鼻咽癌CNE2细胞及人结肠癌细胞在裸小鼠体内的生长。

[附图说明]

图1为Ber对人鼻咽癌裸鼠移植瘤生长曲线的影响图。

图2为Ber对人鼻咽癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用图。

图3为Ber对人结肠癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用图。

图4为Ber对人结肠瘤裸鼠移植瘤生长曲线的影响图。

[具体实施方式]

下列实验研究了小檗碱对小鼠S₁₈₀肉瘤、人鼻咽癌裸鼠移植瘤和人结肠癌裸鼠移植瘤的抑瘤作用。药品为盐酸小檗碱片。1.Ber对昆明小鼠S₁₈₀肉瘤的抑瘤实验

抽取小鼠腹腔接种6-8天的S₁₈₀肉瘤腹水型细胞悬液，生理盐水稀释成1×10⁶细胞悬液，作右腋下注射，0.2mL/只。24h后进行随机分组，设阴性对照组(蒸馏水)、阳性对照组(CTX，5mg/kg)、Ber低剂量组(10mg/kg)、Ber中剂量组(30mg/kg)和Ber高剂量组(50mg/kg)。每组10只小鼠，每天灌胃给药1次，连续用药10天。停药后24h杀鼠取肿瘤称重。用公式(1)计算抑瘤率。统计分析：采用t检验处理，P＜0.05认为有显著性差异。重复3次实验。

式中T为给药组平均瘤重，C为对照组平均瘤重。

结果：

第一次实验：Ber在剂量为10mg/kg和30mg/kg时对小鼠S₁₈₀肉瘤均有明显的抑制作用，抑瘤率分别为：31.9％(P＜0.05)和42.2％(P＜0.01)。用药组小鼠和对照组小鼠体重没有明显差异，未见小鼠外观、活动状态等方面的异常。

第二次实验：Ber在剂量为10mg/kg、30mg/kg和50mg/kg时对小鼠S₁₈₀肉瘤均有明显的抑制作用，抑瘤率分别为：36.4％、46.9％和54.5％，P值均＜0.01。CTX阳性对照组(5mg/kg)的抑瘤率为63.6％，P值＜0.01。用药组小鼠和对照组小鼠体重没有明显差异，未见小鼠外观、活动状态等方面的异常。

第三次实验：Ber在剂量为10mg/kg、30mg/kg和50mg/kg时对小鼠S₁₈₀肉瘤均有明显的抑制作用，抑瘤率分别为：31.7％、43.3％和48.3％，P值均＜0.01。CTX组(5mg/kg)的抑瘤率为65.0％，P值＜0.01。用药组小鼠和对照组小鼠体重没有明显差异，未见小鼠外观、活动状态等方面的异常。结果见表1。2.Ber对人鼻咽癌CNE₂裸鼠移植瘤的抑瘤实验

选择肿瘤生长旺盛且无溃破、健康情况良好的荷瘤小鼠，颈椎脱臼处死，固定于手术板上，用酒精消毒动物皮肤，无菌条件下在超净台上剥离肿瘤组织，所用器械全部经高压消毒。肿瘤组织用加了双抗的平衡盐溶液冲洗，剪去其中坏死的部分，再将其剪成直径0.2cm左右的小块，接种到裸鼠右侧背部皮下。一周后根据肿瘤体积将其随机分组，设阴性对照组(蒸馏水)、阳性对照组(CTX，10mg/kg)、Ber低剂量组(10mg/kg)、Ber中剂量组(30mg/kg)和Ber高剂量组(50mg/kg)。24h后开始用药。每天灌胃给药1次，连续用药10天。每3天用游标尺测量肿瘤大小及称体重，按公式(2)计算肿瘤体积，绘制生长曲线。肿瘤接种后，第30天处死小鼠，取其肿瘤组织，用公式(3)计算肿瘤体积抑制率。统计分析：采用t检验处理，P＜0.05认为有显著性差异。

式中a为肿瘤长径，b为肿瘤短径。

式中T为给药组肿瘤平均体积，C为对照组肿瘤平均体积。

结果：

Ber在剂量为10mg/kg、30mg/kg和50mg/kg时对人鼻咽癌裸鼠移植瘤均有明显的抑制作用，肿瘤体积抑制率分别为：50.3％、58.8％和53.3％，P值均＜0.01。CTX组(10mg/kg)的肿瘤体积抑制率为65.8％，P值＜0.01。用药组小鼠和对照组小鼠体重没有明显差异，未见小鼠外观、活动状态等方面的异常。见表2，图1和图2。3.Ber对人结肠癌LoVo裸鼠移植瘤的抑瘤实验

肿瘤接种步骤同2。因LoVo生长较快，接种4天后根据肿瘤体积将其随机分组，设阴性对照组(蒸馏水)、阳性对照组(CTX，10mg/kg)、Ber低剂量组(10mg/kg)、Ber中剂量组(30mg/kg)和Ber高剂量组(50mg/kg)。24h后开始用药。每天灌胃给药1次，连续用药10天。每2天用游标尺测量肿瘤大小及称体重，按公式(2)计算肿瘤体积，绘制生长曲线。肿瘤接种后，第16天处死小鼠，取其肿瘤组织，用公式(3)计算肿瘤体积抑制率。统计分析：采用t检验处理，P＜0.05认为有显著性差异。

结果：

Ber在剂量为30mg/kg和50mg/kg时对人结肠癌裸鼠移植瘤均有明显的抑制作用，肿瘤体积抑制率分别为：33.1％(P＜0.05)和45.4％(P＜0.01)。Ber在剂量为10mg/kg时的肿瘤体积抑制率为29.2％(P＞0.05)。CTX组(10mg/kg)的肿瘤体积抑制率为32.3％(P＜0.05)。用药组小鼠和对照组小鼠体重没有明显差异，未见小鼠外观、活动状态等方面的异常。见表3，图3和图4。

根据抗肿瘤药物药效学指导原则，我们可以认为小檗碱具有明确的体内抑瘤作用，口服可以达到有效抑瘤的血药浓度。

小檗碱作为一种抗菌药应用为时已久，其治疗量相当安全。一次口服2.0g对人未见任何副作用，长期服用亦无明显毒性。在小鼠的急性毒性实验中，灌胃的LD₅₀为329mg/kg。现在小檗碱应用于治疗心血管疾病的临床用量是0.3-0.5g/次，每天3-4次。而在本实验中，在小鼠中的最高剂量(50mg/kg)折算到人体的用量是0.388g/次，低于现有的临床用量，可以安全使用。

小檗碱作为临床常用药物，理化特性清楚、化学结构明确、使用安全。我们的工作首次证明小檗碱口服可达有效抑瘤浓度，较好地抑制S180肉瘤在昆明小鼠体内的生长，并抑制人鼻咽癌CNE2细胞及人结肠癌细胞在裸小鼠体内的生长。

下面为本发明相关实验之图表：

表1 Ber对昆明小鼠S₁₈₀肉瘤的体内抗肿瘤作用

剂量小鼠数量体重变化平均瘤重抑瘤率组别 P值

(mg/kg) 开始结束 (g) (x±s，g) (IR)％对照组 - 10 10 +8.2 1.80±1.29 - -Ber用药组 10 8 8 +11.4 1.23±0.61 31.9 ＜0.05

30 10 10 +11.9 1.04±0.63 42.2 ＜0.01^*灌胃给药，1次/1天×10天

剂量小鼠数量体重变化平均瘤重抑瘤率组别 P值

(mg/kg) 开始结束 (g) (x±s，g) (IR)％对照组 - 10 10 +7.8 1.43±0.27 - -CTX组 5 10 10 +8.8 0.52±0.11 63.6 ＜0.01Ber用药组 10 10 10 +7.1 0.91±0.22 36.4 ＜0.01

30 10 10 +6.7 0.76±0.19 46.9 ＜0.01

50 10 10 +5.7 0.65±0.18 54.5 ＜0.01^*灌胃给药，1次/1天×10天

剂量小鼠数量体重变化平均瘤重抑瘤率组别 P值

(mg/kg) 开始结束 (g) (x±s，g) (IR)％对照组 - 10 10 +6.7 1.20±0.22 - -CTX组 5 10 10 +5.7 0.42±0.24 65.0 ＜0.01Ber用药组 10 10 10 +5.3 0.82±0.13 31.7 ＜0.01

30 10 10 +2.0 0.68±0.18 43.3 ＜0.01

50 10 10 +4.1 0.62±0.11 48.3 ＜0.01^*灌胃给药，1次/1天×10天表2 Ber对人鼻咽癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用

剂量小鼠数量体重变化平均瘤体积抑瘤率组别 P值

(mg/kg) 开始结束 (g) (x±s，cm³) ％对照组 - 10 10 +1.7 2.47±0.71 - -CTX组 10 9 9 +1.3 0.85±0.21 65.8 ＜0.01Ber用药组 10 9 9 +0.8 1.23±0.39 50.3 ＜0.01

30 10 10 +1.4 1.02±0.27 58.8 ＜0.01

50 10 10 +1.1 1.16±0.22 53.3 ＜0.01^*灌胃给药，1次/1天×10天

表3 Ber对人结肠癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用

剂量小鼠数量体重变化平均瘤体积抑瘤率组别 P值

(mg/kg) 开始结束 (g) (x±s，cm³) ％对照组 - 10 10 +6.6 6.11±1.92 - -CTX组 10 10 10 +4.3 4.14±0.98 32.3 ＜0.05Ber用药组 10 10 10 +5.1 4.33±2.41 29.2 ＞0.05

30 10 10 +4.0 4.09±1.75 33.1 ＜0.05

50 10 10 +3.0 3.34±1.30 45.4 ＜0.01^*灌胃给药，1次/1天×10天

Claims

1、一种小檗碱的体内抗肿瘤作用的新用途，其特征为：小檗碱用于体内抗肿瘤作用的应用。