CN1420125A

CN1420125A - 旋毛虫抗原基因Ts87及其应用

Info

Publication number: CN1420125A
Application number: CN02153180A
Authority: CN
Inventors: 诸欣平; 杨静; 杨雅平
Original assignee: Capital Medical University
Current assignee: Capital Medical University
Priority date: 2002-07-25
Filing date: 2002-11-26
Publication date: 2003-05-28
Anticipated expiration: 2022-11-26
Also published as: CN1159333C

Abstract

本发明为一种旋毛虫新抗原基因，含有该基因的载体的构建及原核和真核表达载体，以及所表达的蛋白。本发明还涉及所述基因及编码的蛋白的应用。用该基因构建的旋毛虫pc DNA 3.1/Ts87 DNA疫苗在COS7细胞和小鼠体内成功表达。旋毛虫Ts87重组蛋白免疫动物后产生高滴度的抗体并对攻击感染产生有效的免疫保护性。

Description

旋毛虫抗原基因Ts87及其应用

发明领域

本发明为一种旋毛虫新抗原基因，含有该基因的载体的构建及原核和真核表达载体，以及所表达的蛋白及由蛋白免疫动物产生的抗体。本发明还涉及所述基因和蛋白的应用。

背景技术

旋毛形线虫(Trichinella spiralis，简称旋毛虫)，可感染人及150多种动物，它所引起的旋毛虫病是一种人畜共患寄生虫病，呈全球性分布，严重地威胁了人类健康并对畜牧业造成巨大经济损失。旋毛虫生活史简述如下：当人或动物宿主生食或半生食含旋毛虫囊包的肉类(猪肉、狗肉等)，囊包内幼虫在胃液、肠液作用下逸出并在小肠内发育为成虫。雌、雄虫交配后雌虫产新生幼虫。新生幼虫侵入肠粘膜淋巴管或静脉，随淋巴和血循环到达宿主横纹肌继续发育。旋毛虫的致病过程分为三期：侵入期、幼虫移行及囊包形成期，即在该虫生活史的每个环节均可使宿主致病。

旋毛虫病临床表现复杂多样，诊断较困难，给及时的治疗造成一定难度，因此该病的免疫诊断及预防成为当务之急。由于病原体不能在体外大量传代培养，限制了抗原的获取；加之旋毛虫抗原的复杂性、多样性，造成目前尚无很好的高敏感度高特异性的抗原作为诊断或保护性疫苗的候选抗原分子。

发明内容

本发明的目的在于：寻找和克隆旋毛虫抗原新基因，对该基因的基因重组蛋白进行细胞定位及免疫学功能的研究，同时以该基因构建DNA疫苗，为旋毛虫病的免疫诊断及预防提供新的候选抗原分子。

根据本发明，提供了：

1、一种核苷酸序列，其特征在于它是选自以下几种的任何一种：

(A)与序列1有至少70％，尤其至少90％同源性的核苷酸序列；

(B)与序列1的核苷酸序列杂交或互补的核苷酸序列；和

(C)(A)或(B)核苷酸序列的片段。

2、上述1项的核苷酸序列，特征在于具有序列1所描述的核苷酸序列。

3、具有序列2所描述的氨基酸序列的多肽，或其片段，类似物或衍生物。

4、根据上述3项所要求的多肽，其特征在于具有序列2的氨基酸序列。

5、含有序列1的核苷酸序列的原核或真核表达载体。

6、含有上述5项的载体的遗传工程宿主细胞。

7、含有3或4项的多肽的药物组合物。

8、1或2项的核苷酸序列在医学、畜牧兽医学中的用途。

9、上述3或4项的多肽作为试剂在人畜旋毛虫病的诊断及疫苗在防治人畜旋毛虫疾病中的应用。

10、制备多肽的方法，包括在适合的条件下培养项6的宿主细胞，从培养物中纯化多肽。

11、抗3或4项多肽的抗体。

本发明的核苷酸序列可以用免疫筛选从旋毛虫cDNA基因文库中获得。本发明还涉及该序列的变异体，例如一个或多个碱基的缺失、添加或替换，但不改变所编码的蛋白质的功能。变异体可以是天然存在的等效变异体或非天然存在的变异体。

本发明的多肽可以通过构建上述基因的原核或真核表达载体，转化到适合的宿主细胞中，从培养物中纯化多肽来制备。本发明的多肽包括序列2的多肽，以及具有等效功能的它的衍生物、片段或类似物。

本发明的内容包括应用分子生物学技术，如：cDNA文库免疫筛选、分子克隆、聚合酶链式反应(PCR)、DNA序列测定、5’-RACE、Southern杂交、Western印迹杂交法，克隆鉴定了旋毛虫抗原新基因Ts87；利用基因表达及免疫学技术获得该基因的重组蛋白及高效价免疫血清；并对该蛋白的细胞定位、免疫原性及免疫保护性进行了分析。同时，应用基因克隆技术构建了pcDNA3.1/Ts87 DNA疫苗及进行了真核细胞体外及动物体内表达。

该基因达到的技术指标为：

1.在本发明中采用eDNA文库免疫筛选和5’-RACE技术获得该基因的全长cDNA序列。全长1172bp，起始密码子ATG位于序列第13bp处，TAA为终止密码子，编码的蛋白质含347个氨基酸。5’端含18个氨基酸的信号肽，切割位点位于18与19氨基酸之间(见序列表部分)。

2.旋毛虫Ts87基因的347个氨基酸重组蛋白在大肠杆菌BL21株中获得表达并纯化(图1)。

3.旋毛虫Ts87基因重组蛋白免疫动物获高滴度抗Ts87免疫血清。

4.旋毛虫Ts87基因重组蛋白为感染旋毛虫的病人血清、病猪血清、病兔血清所识别。并与Ts87重组蛋白免疫血清发生反应(图2)。

5.旋毛虫Ts87基因重组蛋白主要分布于虫体体壁(图3)。

6.成功构建旋毛虫pc DNA 3.1/Ts87 DNA疫苗，在COS7细胞(图4)和小鼠体内成功表达(图5)。

7.旋毛虫Ts87重组蛋白免疫动物后对攻击感染产生有效的免疫保护性(表1)。

本发明发现了旋毛虫Ts87抗原基因全长cDNA；获得了纯化的Ts87基因重组蛋白及进行了免疫学的研究，为旋毛虫病的免疫预防提供了新的保护性候选抗原。并且也可以用于制备诊断试剂。

附图说明

图1SDS-PAGE电泳：Ts87基因重组蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化

M.蛋白分子量Marker

1.未经IPTG诱导的含Ts87基因片段质粒的裂解物

2.IPTG诱导后的含Ts87基因片段质粒的裂解物

3.纯化的Ts87基因重组蛋白

箭头所指为重组蛋白带

图2Western免疫印迹鉴定Ts87基因表达蛋白的免疫特性

1.纯化的Ts87基因表达蛋白与旋毛虫病人血清反应

2.纯化的Ts87基因表达蛋白与感染旋毛虫的猪血清反应

3.纯化的Ts87基因表达蛋白与感染旋毛虫的兔血清反应

4.纯化的Ts87基因表达蛋白与Ts87重组蛋白免疫兔血清反应

图3共聚焦显微镜分析Ts87基因重组蛋白的细胞定位

图4Western印迹鉴定pc DNA 3.1/Ts87DNA疫苗在COS7中特异表达

1.一抗为正常兔血清

2.一抗为旋毛虫感染兔血清

3.一抗为Ts87重组蛋白免疫兔血清

4.一抗为旋毛虫虫体可溶性抗原免疫兔血清

图5肌注pc DNA 3.1/Ts87DNA疫苗的免疫组化结果

A.pc DNA 3.1/Ts87DNA疫苗在肌肉中阳性表达结果

B.阴性对照组

实施例

实施例1 旋毛虫抗原基因Ts87的克隆及序列分析

1.筛选血清的制备

收集旋毛虫成虫，匀浆超声制备全虫可溶性抗原。免疫家兔(200μg/只)，隔周加强3次，获得人工免疫兔血清；实验兔喂以4000条旋毛虫肌幼虫，4周后获人工感染血清。经ELISA测定两者的血清滴度均达1∶8000以上。

2.免疫筛选表达文库

1μl旋毛虫成虫λZAP II cDNA表达文库稀释液加入600μl宿主菌XL1-Blue中，37℃，吸附20分钟加入顶层琼脂，倒置于42℃温箱中培养至有针尖大小的噬菌斑长出。把硝酸纤维素膜铺在平板上，放在37℃温箱培养过夜。第二天在室温下将膜做好标记，从平板上揭下，浸入一抗工作液30分钟，血清中加入了大肠杆菌噬菌体裂解液(STRTAGENE公司)。把膜浸入二抗工作液-1∶7500碱性磷酸酶-羊抗兔IgG(Promega公司)，30分钟。浸入显色液NBT、BCIP中(Promega公司)，显色充分后，加入终止液。用1∶1000人工免疫兔血清筛选获得的阳性克隆，再用1∶1000人工感染兔血清复筛，获得3个阳性克隆。经PCR及SouthernBlot鉴定后，选取Ts87克隆进行DNA序列测定。

3. 5’端cDNA末端快速扩增技术获DNA全长

用5’-RACE试剂盒(Gibco BRL公司)进行Ts87基因的5’末端延伸。根据该基因的cDNA第一链设计三个特异扩增引物进行PCR。引物序列为：

T87-R1：GGCTCGAGTTAGGTGCATGCATCCAAGT

T87-R2：GGCATCTATATCTGCTGCAG

T87-R3：CAGTTGGTAGAAGATGATGT，扩增产物经克隆测序，获Ts87 cDNA全长序列。

4.cDNA序列与编码的氨基酸分析

Ts87cDNA全长1172bp，开放阅读框为347个氨基酸，有一个18个氨基酸的信号肽，其理论分子量为37.97KD。

实施例2 制备Ts87基因重组蛋白及免疫血清

1.Ts87基因原核表达及纯化

Ts87基因片段经BamH I和Xho I酶切后，亚克隆于原核表达载体PET-28a(+)。正确的重组质粒转化大肠杆菌BL21株，经37℃ 150转/分1.0mM IPTG诱导3小时，获得Ts87基因重组蛋白，重组蛋白经His-binding(Novagen公司)亲和层析柱纯化后，经电洗脱仪洗脱使纯度更高(图1)。

2.纯化的Ts87重组蛋白经皮肤多点注射免疫家兔(200μg/只)，加强4次。5周后兔颈动脉取血。ELISA测定抗体效价高达1∶128000。

实施例3 Ts87重组蛋白的免疫特性

1.酶联免疫吸附(ELISA)检测

以1μg Ts87重组蛋白为抗原包被96孔酶标板，一抗为待检血清，二抗为辣根过氧化物酶标记的相应二抗，该蛋白可与旋毛虫病人血清、感染旋毛虫的兔及猪血清产生阳性反应，而与包虫病人血清、囊尾蚴病人血清及感染日本血吸虫的兔血清未发生交叉反应，说明Ts87基因的重组蛋白具有特异的免疫原性，是极具潜力的诊断试剂。

2.Western印迹分析

纯化的Ts87表达蛋白(200ng)经SDS-PAGE电泳后，转移至PVDF膜，用ECL化学发光试剂盒(Amersham公司)检测，分别以病人血清1∶200、感染猪血清1∶10000、感染兔血清1∶10000、Ts87重组蛋白免疫血清1∶10000作为第一抗体。结果显示约40KD处均呈现一明显的蛋白印迹带(图2)，表明Ts87重组蛋白可为感染旋毛虫的人、猪、兔血清及Ts87重组蛋白免疫血清所识别。

实施例4 Ts87重组蛋白在旋毛虫的免疫细胞定位

取旋毛虫肌幼虫做冰冻切片，利用Ts87免疫兔血清作为第一抗体，用FITC标记的山羊抗兔IgG作为第二抗体(北京中山公司)，进行共聚焦显微镜分析，证明Ts87主要定位于旋毛虫的虫体壁上(图3)。

实施例5 pcDNA3.1/Ts87 DNA疫苗的构建及表达

1.pcDNA3.1/Ts87 DNA疫苗的构建

截取Ts87序列的1044核苷酸，在其两端引入HindIII和BamH I酶切位点，并使启始密码子环境符合KOZAK序列，和pcDNA3.1(+)真核表达载体连接，经酶切鉴定，构建成功。

2.pcDNA3.1/Ts87 DNA疫苗导入COS7细胞后的表达蛋白的制备

利用Lipofectamine脂质体，把重组质粒pcDNA3.1/Ts87和质粒pcDNA3.1(+)分别导入COS7细胞，收集自转染开始48-72小时的细胞产物，加入等体积的SDS上样缓冲液，100℃煮沸10分钟，用同样体积的正常COS7细胞内的蛋白做阴性对照。

3.Western印迹分析DNA疫苗在COS7中特异性表达

等体积的pcDNA3.1/Ts87和pcDNA3.1(+)转染COS7细胞后收集的蛋白和正常COS7细胞内的蛋白经SDS-PAGE电泳后，转移至硝酸纤维素膜上，分别以Ts87重组蛋白免疫兔血清、旋毛虫人工免疫兔血清和人工感染兔血清作为第一抗体，结果证明pcDNA3.1/Ts87DNA疫苗有约40KD的特异性表达带(图4)。该表达蛋白具有特异的免疫原性，均为上述一抗所识别。

4.pcDNA3.1/Ts87 DNA疫苗免疫BABL/c小鼠

利用小鼠股四头肌肌肉注射的方法免疫小鼠。小鼠分为实验组、对照组和空白组。实验组注射pcDNA3.1/Ts87，对照组注射pcDNA3.1(+)，空白组注射生理盐水。免疫4次，每次间隔4周，每次每只小鼠注射100μg质粒。

免疫成功后，取相应的组织进行免疫组化分析。以Ts87重组蛋白免疫兔血清为第一抗体，采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶免疫组化染色超敏试剂盒(北京岳泰公司产品)，阳性表达的肌肉显示棕褐色染色(图5)。

实施例6 动物体内保护性实验

BABL/c小鼠8只，随机分为2组，每组4只。Ts87重组蛋白免疫组以200μg/只的抗原加等量的弗氏完全佐剂(FCA)腹腔、皮下注射。以后每隔10天以相同剂量抗原加等量不完全弗氏佐剂，加强3次。末次注射后7天，每只鼠用200条旋毛虫感染性幼虫进行攻击感染。对照组注射相同剂量的PBS，与免疫组同时接受200条旋毛虫感染性幼虫攻击。于攻击4周后将小鼠处理，取全部肌肉用胃蛋白酶消化收集幼虫，计数。经单因素方差分析，Ts87重组蛋白免疫组减虫率为27％，与对照组比较，有显著性差异(P＜0.01)。

由于本实验Ts87重组蛋白在动物体内产生有效的减虫率，据此可作为保护性候选抗原，应用于旋毛虫病的免疫治疗。

表1 Ts87重组蛋白免疫BABL/c小鼠的保护性结果组别 BABL/c 平均幼虫数幼虫保护率 P值

的数目 ±SD ％Ts87蛋白 4 6135.6±1437.3 27 ＜0.01对照 4 8397.8±1488.4 -

序列表<110>首都医科大学<120>旋毛虫抗原基因Ts87及其应用<160>2<210>1<211>1172<212>DNA<213>旋毛形线虫种(Trichinella spiralis sp.)<220><223>n＝a或g或c或t<400>1AAA ATT AGA AAA ATG TTC ATA TTT TAT GCT 30

Met Phe Ile Phe Tyr Ala

5ATA GCT CTA TAT ACC TTG CAG TTA GGT GTA 60Ile Ala Leu Tyr Thr Leu Gln Leu Gly Val

10 15ACA CCC ATT GAT TAC CAA TGC AAA GAA CAA 90Thr Pro Ile Asp Tyr Gln Cys Lys Glu Gln

20 25AAT AAT GAT GTG GAT TGG TTC TTT GTC TAT 120Asn Asn Asp Val Asp Trp Phe Phe Val Tyr

30 35AAA TTG CCA GGA GGG AAA TCT TCA CAT CAT 150Lys Leu Pro Gly Gly Lys Ser Ser His His

40 45CTT CTA CCA ACT GCT GCA ACA GAC TGG TCA 180Leu Leu Pro Thr Ala Ala Thr Asp Trp Ser

50 55GCT GCA GCA GAT ATA GAT GCC CAA CAG CAA 210Ala Ala Ala Asp Ile Asp Ala Gln Gln Gln

60 65CCA ATT CAT TCT ACA ATG AAT ATT TAT ATT 240Pro Ile His Ser Thr Met Asn Ile Tyr Ile

70 75GGT TCA CAA AAC AAG CCC AAT ACA AAT ATT 270Gly Ser Gln Asn Lys Pro Asn Thr Asn Ile

80 85GTA GCA TAC AGC AAT TAT CCT CCA CAT TTT 300Val Ala Tyr Ser Asn Tyr Pro Pro His Phe

90 95AAA TTT GAA CTT CCC ATG AGT CCT GGA AAA 330Lys Phe Glu Leu Pro Met Ser Pro Gly Lys

100 105GGT GTA ATA ATG GCT GAA GAT AAT AAT AAA 360Gly Val Ile Met Ala Glu Asp Asn Asn Lys

110 115GGA TTT TGG TTG GTA CAC ACA GCA AAG TAT 390Gly Phe Trp Leu Val His Thr Ala Lys Tyr

120 125TTT CCA AAT TTA GCA CTT GCT ATA GGA GAT 420Phe Pro Asn Leu Ala Leu Ala Ile Gly Asp

130 135CTA TTT TCG AAT GAA AAG ACC ACA AAG GAA 450Leu Phe Ser Asn Glu Lys Thr Thr Lys Glu

140 145GCA GCT GCA TTT TTA TGC ATG TCA TAT TCT 480Ala Ala Ala Phe Leu Cys Met Ser Tyr Ser

150 155GAT GTC AAT TTG AGG GCT ATT GCA AAA ATA 510Asp Val Asn Leu Arg Ala Ile Ala Lys Ile

160 165ATC GAT TAT GAA CAA CCC ATC GTA TTT TTT 540Ile Asp Tyr Glu Gln Pro Ile Vla Phe Phe

170 175GCT CAG AAA TCT GCA ACA GTA CCC GCT TTC 570Ala Gln Lys Ser Ala Thr Val Pro Ala Phe

180 185TAT GAT TCA ACT GAA ATT CAA AGA CTC GTT 600Tyr Asp Ser Thr Glu Ile Gln Arg Leu Val

190 195AAT GGC TTG CAT ACA TAT CAG CCA ACT GCA 630Asn Gly Leu His Thr Tyr Gln Pro Thr Ala

200 205TCT GCT TCT GGT GAT GGC GTA GCG ACT TTG 660Ser Ala Ser Gly Asp Gly Val Ala Thr Leu

210 215ACT GCA CCA GGA ACT GTG AAA ATA TTT GCA 690Thr Ala Pro Gly Thr Val Lys Ile Phe Ala

220 225TCA GCA CCA GTA GCA TAT TCA TCG GAT ATA 720Ser Ala Pro Val Ala Tyr Ser Ser Asp Ile

230 235TAT TTG AAT TAT ATC GTT AAA ATT ATG CAA 750Tyr Leu Asn Tyr Ile Val Lys Ile Met Gln

240 245AAA TCC TTC CAA GTT TAC ACA CCT GGA ACA 780Lys Ser Phe Gln Val Tyr Thr Pro Gly Thr

250 255ACT GCA ACT GTT TTG AGA AAA TCA TGC GCT 810Thr Ala Thr Val Leu Arg Lys Ser Cys Ala

260 265GGC ACA TTA AAA GTG GAA AAT GTA TTA GGG 840Gly Thr Leu Lys Val Glu Asn Val Leu Gly

270 275CCA ATA ACT GTT AGA GAT ACT GAA ATT CCA 870Pro Ile Thr Val Arg Asp Thr Glu Ile Pro

280 285ATA GGA CAA GAC AGT GCA AGA TGG TCT GTT 900Ile Gly Gln Asp Ser Ala Arg Trp Ser Val

290 295CCG AAA TCA GAT TCT GAT TTC ATA TGC TTA 930Pro Lys Ser Asp Ser Asp Phe Ile Cys Leu

300 305AGC AAT ACT GGA AGA ACG GCG AAA GAT GCA 960Ser Asn Thr Gly Arg Thr Ala Lys Asp Ala

310 315AAA TAT GGA GCA AGC GTT GCT TGC GTT TTG 990Lys Tyr Gly Ala Ser Val Ala Cys Val Leu

320 325AGC AAA GAA GCA GCT GAC TTA TTC AGA AAG 1020Ser Lys Glu Ala Ala Asp Leu Phe Arg Lys

330 335ATG ATC ACC ACG AAG AAC TTG GAT GCA TGC 1050Met Ile Thr Thr Lys Asn Leu Asp Ala Cys

340 345ACC TAA TAT AAT TAT ACT GTT TAC TGT GCA 1080ThrTGT AAT TAA TTT TGT GCA TTG AAA AGT TGG 1110AAT CTT CTT TGT AAA ATT GAA AAT AAA ATT 1140TTA TAA AAC ATA CAA AAA AAA AAA AAA AAA 1170AA 1172<210>2<211>347<212>PRT<213>旋毛形线虫种(Trichinella spiralis sp.)<400>2Met Phe Ile Phe Tyr Ala Ile Ala Leu Tyr1 5 10Thr Leu Gln Leu Gly Val Thr Pro Ile Asp

15 20Tyr Gln Cys Lys Glu Gln Asn Asn Asp Val

25 30Asp Trp Phe Phe Val Tyr Lys Leu Pro Gly

35 40Gly Lys Ser Ser His His Leu Leu Pro Thr

45 50Ala Ala Thr Asp Trp Ser Ala Ala Ala Asp

55 60lle Asp Ala Gln Gln Gln Pro Ile His Ser

65 70Thr Met Asn Ile Tyr Ile Gly Ser Gln Asn

75 80Lys Pro Asn Thr Asn Ile Val Ala Tyr Ser

85 90Asn Tyr Pro Pro His Phe Lys Phe Glu Leu

95 100Pro Met Ser Pro Gly Lys Gly Val Ile Met

105 110Ala Glu Asp Asn Asn Lys Gly Phe Trp Leu

115 120Val His Thr Ala Lys Tyr Phe Pro Asn Leu

125 130Ala Leu Ala Ile Gly Asp Leu Phe Ser Asn

135 140Glu Lys Thr Thr Lys Glu Ala Ala Ala Phe

145 150Leu Cys Met Ser Tyr Ser Asp Val Asn Leu

155 160Arg Ala Ile Ala Lys Ile Ile Asp Tyr Glu

165 170Gln Pro Ile Vla Phe Phe Ala Gln Lys Ser

175 180Ala Thr Val Pro Ala Phe Tyr Asp Ser Thr

185 190Glu Ile Gln Arg Leu Val Asn Gly Leu His

195 200Thr Tyr Gln Pro Thr Ala Ser Ala Ser Gly

205 210Asp Gly Val Ala Thr Leu Thr Ala Pro Gly

215 220Thr Val Lys Ile Phe Ala Ser Ala Pro Val

225 230Ala Tyr Ser Ser Asp Ile Tyr Leu Asn Tyr

235 240Ile Val Lys lle Met Gln Lys Ser Phe Gln

245 250Val Tyr Thr Pro Gly Thr Thr Ala Thr Val

255 260Leu Arg Lys Ser Cys Ala Gly Thr Leu Lys

265 270Val Glu Asn Val Leu Gly Pro Ile Thr Val

275 280Arg Asp Thr Glu Ile Pro Ile Gly Gln Asp

285 290Ser Ala Arg Trp Ser Val Pro Lys Ser Asp

295 300Ser Asp Phe Ile Cys Leu Ser Asn Thr Gly

305 310Arg Thr Ala Lys Asp Ala Lys Tyr Gly Ala

315 320Ser Val Ala Cys Val Leu Ser Lys Glu Ala

325 330Ala Asp Leu Phe Arg Lys Met Ile Thr Thr

335 340Lys Asn Leu Asp Ala Cys Thr

345

Claims

(A)与序列1有至少70％同源性的核苷酸序列；

(B)与序列1的核苷酸序列杂交或互补的核苷酸序列；和

(C)(A)或(B)核苷酸序列的片段。

2、如权利要求1所述的核苷酸序列，特征在于具有序列1的核苷酸序列。

3、具有序列2所描述的氨基酸序列的多肽，或其片段、类似物或衍生物。

4、如权利要求3所要求的多肽，其特征在于具有序列2的氨基酸序列。

5、含有序列1的核苷酸序列的原核或真核表达载体。

6、含有权利要求5的载体的遗传工程宿主细胞。

7、含有权利要求3或4的多肽的药物组合物。

8、权利要求1或2的基因在医学、畜牧兽医学中的用途。

9、权利要求3或4的多肽作为诊断试剂和疫苗在防治人畜旋毛虫疾病中的应用。

10、制备多肽的方法，包括在适合的条件下培养权利要求6的宿主细胞，从培养物中纯化多肽。

11、抗权利要求3或4的多肽的抗体。

12、权利要求11的抗体在医学、畜牧兽医学领域中的应用。