CN1408882A - 一种核酸检测微流芯片 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种核酸检测芯片，它包括：检测膜，所述检测膜包括接触区、点样区和吸水区，其中，所述检测膜的平均孔径0.5－10微米，且在点样区固定有核酸探针点样点，点样点的直径大小为150－1500微米，点密度为9－5000点/平方厘米。本发明还公开了使用该芯片的检测方法、含该芯片的检测试剂盒。本发明的芯片技术工艺简单、反应快速、操作简便、和/或成本低廉。

Description

一种核酸检测微流芯片

技术领域

本发明涉及核酸的检测方法，具体地涉及对聚合酶链反应(PCR)产物进行检测的方法。本发明还涉及核酸检测试剂盒，具体地涉及检测聚合酶链反应产物的试剂盒。更具体地，本发明涉及用于PCR疾病诊断的检测方法和试剂盒。

背景技术

随着分子生物学发展，大量基因信息需要进行分析，因此生物芯片概念、技术和产品应运而生。

所谓生物芯片，是借用了计算机芯片寻址概念，将生命科学研究中所涉及的不连续的分析过程(如样品制备、化学反应和分析检测)，利用微电子、微机械、化学、物理技术、计算机技术在固体芯片表面构建的微流体分析单元和系统，使之高通量、微型化、集成化。生物芯片技术将为表达谱分析、药物研发、HLA分型、突变分析、疾病诊断等领域研究提供更多的方便。高通量、微型化、集成化是生物芯片的特征。

目前的生物芯片包括微点阵或微阵列(Microarray)和微型实验室(Lab on chip)两方面技术。

微点阵平台是最普遍采用的技术，它是按照经典的印迹原理在特定的载体基片上进行分析检测。

根据识别分子种类不同，微点阵分为DNA芯片(DNA Chip)和蛋白芯片两种。DNA芯片是根据碱基互补的原理，利用基因探针识别特定基因。它将探针分子固定于支持物上，形成DNA分子微阵列，然后与标记的样品(DNA、核酸扩增产物、RNA等)进行杂交，通过检测杂交信号的强度及分布来进行分析，比较成熟的产品有检测基因突变的芯片(捕获探针一般用寡核苷酸，也叫Oligo Chip)，检测细胞基因表达水平的表达基因芯片(捕获探针用EST或Unigene的PCR产物)。蛋白质芯片，是利用抗体与抗原结合的特异性即免疫反应来检测抗体或抗原的芯片。简化模型为：选择一种固相载体能够牢固地结合蛋白质分子(抗原或抗体)，这样形成蛋白质的微阵列，即蛋白质芯片。如果加入与之特异性反应的带有特殊标记的蛋白质分子(抗体或抗原)，两者结合后，通过对标记物的检测来实现抗原抗体的互检，即蛋白质或小分子非蛋白质检测。

但现有的微点阵平台技术或者生产工艺复杂、反应时间长，或者需要专用的设备、操作烦琐，使用成本居高不下，很难得到普及应用，这些缺点已成为微点阵产业化的主要障碍。

目前微点阵平台技术种类及优缺点如下：

(1)以载玻片(+-NC膜)为基片，点样，荧光扫描检测

优点：技术成熟，制备简单

缺点：影响因素较多，杂交时间长

(2)原位合成，荧光扫描检测(Affymetrix为代表)

优点：制备自动化

缺点：专用设备制造，成本高，影响因素较多，杂交时间长。

(3)以常用的微孔板为基片，荧光或其信号扫描检测

优点：能批处理样本，杂交时间长，成熟蛋白检测技术

缺点：制备复杂，扫描仪专用，成本高。

(4)以光纤或多孔玻璃为基片，配合Beads标记，在微孔板反应，荧光扫描检测(Illumila为代表，所谓Array of Array或三维芯片)

优点：能批处理样本，杂交时间短

缺点：制备复杂，专用扫描仪，成本高

(5)电磁场杂交，能量传导的荧光检测(Nanogen为代表)

优点：杂交时间极短，信号采集独特

缺点：制备复杂，检测工作站专用，成本高。

(6)膜或聚苯乙烯等材料，阵列(Array)或点(dot)，常规方法检测(显色，荧光)(以RANDOX为代表)

优点：制备简单，成本底实用，市场易于接收

缺点：反应时间长，检测工作站专用。

微型实验室(Lab-on-chip)技术是当今国际上生物芯片技术发展的热点，基本原理是以硅、玻璃等材料建立反应通道和系统，完成反应全过程，目前集中在以微反应池为基础的微阀系统的研究，如形成集样品处理、核酸扩增、核酸标记及检测为一体的分析系统等；但这项技术尚处于研究的初期阶段，要达到应用还需要一段相当长的时间。

因此，本领域迫切需要开发一种工艺简单、反应快速、操作简便、和/或成本低廉的芯片技术。

发明内容

本发明的目的就是提供一种工艺简单、反应快速、操作简便、和/或成本低廉的芯片技术。

在本发明的第一方面，提供了一种核酸检测芯片，该检测芯片包括：检测膜，所述检测膜包括接触区、点样区和吸水区，

其中，所述检测膜的平均孔径0.5-10微米，且在点样区固定有核酸探针点样点，点样点的直径大小为150-1500微米，点密度为9-5000点/平方厘米。

较佳地，所述的检测膜的平均孔径为0.8-8微米，更佳地为1-5微米。

在本发明中，所述芯片上固定的探针选自下组的核酸分子：DNA、RNA、肽核酸、通过扩增方法产生的核酸、人工合成的寡核苷酸及这些核酸的修饰物。

在本发明中，点密度通常为9-5000点/平方厘米，较佳地为15-2500点/平方厘米，更佳地为25-1000点/平方厘米。点样点的直径大小为150-1500微米，较佳地为150-500微米。

在本发明的第二方面，提供了一种核酸检测方法，它包括步骤：

(1)提供一核酸检测芯片，该检测芯片包括：检测膜，所述检测膜包括接触区、点样区和吸水区，其中，所述检测膜的平均孔径0.5-10微米，且在点样区固定有核酸探针点样点，点样点的直径大小为150-1500微米，点密度为9-5000点/平方厘米；

(2)将所述的接触区与含待检核酸的液体接触，液体通过微流作用被吸引通过点样区，从而使点样区的核酸探针与待检核酸杂交；

(3)根据点样区中点样点是否产生的信号，以及信号强弱来判断结果。

在本发明中，所述待检核酸包括：DNA、RNA、通过扩增方法产生的核酸、核酸衍生物和核酸标记物。

在本发明的第三方面，提供了一种核酸检测试剂盒，它具有

一种核酸检测芯片，该检测芯片包括：检测膜，所述检测膜包括接触区、点样区和吸水区，其中，所述检测膜的平均孔径0.5-10微米，且在点样区固定有核酸探针点样点，点样点的直径大小为150-1500微米，点密度为15-5000点/平方厘米。

在本发明的优选例中，所述的试剂盒还含有选自下组的一种或多种试剂：

(1)进行RNA反转录反应所用试剂；

(2)进行RNA化学修饰所用试剂；

(3)进行DNA化学修饰所用试剂；

(4)进行核酸扩增反应所用试剂。

在本发明的第四方面，提供了上述的核酸检测芯片的用途，它被用于下列检测分析：

(1)基因突变检测分析；

(2)耐药基因突变检测分析；

(3)HLA分型检测分析；

(4)SNP分型检测分析；

(5)微生物分型检测；

(6)表达谱检测分析；

(7)药物研发中的检测分析。

附图说明

图1为本发明核酸检测微流芯片的操作示意图。

图2为本发明一个实施例中，芯片点样中各探针位置示意图。

图3是野生型(H37rv)结核杆菌耐药基因rpoB的部分序列及热点突变区域。

图4注明热点突变区域中各突变位点的名称。

图5显示了对野生株H37rv检测结果：左侧针对野生型探针，均显示非常强的杂交信号，而针对突变型探针，信号非常弱，右上角为控制点。

图6显示了对质控品(R1克隆)的检测结果。

图7显示了对耐药结核杆菌rpoB基因杂交检测结果。

具体实施方式

本发明人通过多年研究发现，通过改进传统核酸杂交-检测法中的点样技术，可以大大提高核酸-杂交检测法的效率，并使操作大为简化。

在本发明中，“检测膜”指用于检测核酸分子的固相载体，它通常为膜状或片状，有时也被称为“载体膜”。其结构一般由背衬材料和涂在背衬材料上的膜涂层所组成。膜涂层一般为聚合物材料。

在本发明中，检测核酸分子时采用层析的形式，在固相载体上直接进行杂交反应。为了进行这样的杂交反应，载体必须满足三个方面的要求，即(1)具有良好的亲水性；(2)易于包被核酸探针和(3)对核酸、酶及其它物质的非特异吸附作用较小。

对于后两方面的要求，可选择在一定条件下能有效结合核酸探针，而在一般杂交条件下对核酸、蛋白质、酶、酶底物和其它有机分子较少发生非特异性吸附的高分子聚合膜材料，比如醋酸基、硝酸基或硫酸基的多聚物，如纤维素膜或者尼龙膜等。正如本领域技术人员所熟知的那样，在聚合过程中，通过调节聚合原料的浓度、配比、聚合速度、温度、添加剂、催化剂种类等条件，可以方便地控制聚合物的孔径、硬度、亲水性等各种理化指标。

本领域中用于核酸分子杂交的常规膜，其孔径很小，一般平均孔径为0.5微米左右或甚至以下。但是用这种膜进行层析杂交时，有很多缺点如速度极其缓慢等，因此不适合用于本发明的检测方法。本发明的发明人发现，当检测膜涂层的聚合物的平均孔径在1-10微米时，不仅可以大大改善层析杂交的速度指标，从而使杂交过程在较短的时间内完成，而且还能使杂交效率保持在很高水平，并提高检测的灵敏度。较佳地，该检测膜的平均孔径为0.8-8微米；更佳地，平均孔径为1-6微米。

本发明的检测膜，其形状没有限制。较佳地为长方形。由于吸水材料的存在，液体会从检测膜的浸没端向吸水端移动，从而将液体中的核酸分子夹带至探针包被点处，以发生杂交反应。

本发明的检测膜可以在一端含有吸水材料，从而制成一体化的检测膜(固相膜+吸水材料)。

在本发明的检测方法中，需要将特异性的核酸探针固定在固相载体(即检测膜)上。在这一固定过程中，为了牢固地固定核酸探针并形成不扩散的探针点，需要使用包被液。在本发明中，可以使用基因芯片领域常用的包被液。一种理想的包被液是氯化钠溶液。

在将特异性的核酸探针用本发明的包被液固定在检测膜上之后，可将其一端浸在含有待检测的核酸分子的液体(如PCR扩增后的反应液体)中，检测膜的一端与吸水性材料相接触，以便吸引含有待检测核酸分子的液体(见图1)。待检测的核酸分子便会到达探针的包被点样点，如果该核酸分子可与探针发生特异性结合，那么就可得到阳性结果；如果不与探针发生特异性结合，就得到阴性结果。

在实施本发明方法时，对于已经被探针特异地吸附在载体膜上的核酸，应当采用信号放大的方式对核酸进行特异地显示。可以利用的方法包括本领域熟知的金标记、酶标记、同位素标记、荧光标记和化学发光物标记等方法。其中以酶标记最为常见，因为这种方法具有使用安全、操作简便、结果清楚、不需要特殊设备、灵敏度较高等优点。常用的标记酶是碱性磷酸酶或者过氧化物酶，一般条件下，都使用可溶性的酶反应底物和产物。但是当显色反应是在固相载体上进行时，如果仍然使用可溶性的酶反应底物和产物，会导致酶显色反应的有色产物在固相载体表面的水相层中快速扩散，结果无法分辨。当使用包括5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸/氮蓝四唑、3，3′-二氨基联苯胺等不溶性底物时，问题就迎刃而解，可以清晰地观察并便于保存。

本发明方法可用于检测来源不同的、以及用不同方法获得的核酸分子。较佳地，所检测的核酸分子包括：DNA、RNA、通过扩增方法产生的核酸、核酸衍生物和核酸标记物。

本发明的核酸检测微流芯片在操作时，通常包括以下步骤(参照图1)：

1.将各种检测核酸1点样在高分子聚合膜(2)上(微点阵)，形成反应区3；

2.将核酸样品5与步骤1中的高分子聚合膜的一端(即接触端或接触区)2接触(步骤2)

3.接触后，借助聚合膜吸水区4而产生的虹吸现象液体产生微流，并流过反应区3(步骤3)。

4.核酸分子与高分子聚合膜中反应区3上的检测核酸发生杂交反应，根据高分子聚合膜上各点产生的信号强弱判断结果(步骤4)。

本发明的优点在于，将经典印迹检测技术与层析原理结合，引入微点阵(Microarray)概念形成的微流芯片技术，用于核酸检测不但具有高通量、微型化和集成化等生物芯片特征，更具有生产工艺简单、反应快速、操作简便等特性。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York：ColdSpring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

实施例1

微流芯片用于结核杆菌耐药基因rpoB突变检测分析

对结核杆菌耐药相关基因的突变分析，可尽早获得感染结核菌耐药信息，提高临床医生早期结核用药的合理性，提高结核病治愈率；对于结核病合理治疗方案的实施、流行病疫情监控等具有重要的意义；结核杆菌耐药相关基因中最重要的是与一线药物利福平(Rifampin)相关的RpoB基因，其突变株耐药发生率达96-98％，同时不同的突变方式与其耐药性程度关系也十分密切，因此结核株RpoB基因突变分析非常重要。

RpoB基因突变热点区域为一段约70bp的序列，图3显示了RpoB的部分序列(SEQ ID NO：1)，其中带下划线的序列为突变热点区域。图4进一步显示了该突变热点区域，即

ctg agccaattcatggaccagaacaacccgctgtcggggttgacccacaagcgccgactgtcggcgctg

(SEQ ID NO：2)。

步骤：

(1)按表1所示，设计与合成引物和探针，其中下游引物5′端带生物素标记；

链霉亲和素交联碱性磷酸酶溶液(SA-AP)来自于Bio-rad公司，稀释到1∶2000。

AP酶底物溶液来自于Bio-rad公司，事先用双蒸水将25x专用稀释液配制成1x稀释液，临用前将底物A、底物B原液分别用1x稀释液稀释到工作浓度(1∶50)，按1∶1比例混合。

PBS溶液：分别称取NaCl40g，KCl1.0g，Na₂HPO₄.12H₂O6.0g，NaH₂PO₄1.0g，在约3000ml双蒸水中全部溶解，滴加1MNaOH至pH为7.4左右，最后加双蒸水定容至5000ml；

20xSSC溶液：在800ml水中溶解175.3gNaCl和88.2g柠檬酸钠，加入数滴10mol/LNaOH溶液调节pH值至7.0，加水定容至1L，高压灭菌。高分子聚合膜是FF125膜(德国Schleicher&Schull公司产品)；

(2)将寡核苷酸探针以3.6％NaCl稀释至25uM，分别点样在高分子聚合膜上，点分布如图2，并通过UV交联固定，其中，膜大小为1.5×2cm，点大小为φ1mm；

(3)样品核酸提取：

菌株稀释液或样本液12,000rpm离心15分钟，弃上清。在沉淀中加入50ulDNA提取液，使沉淀悬浮后100℃沸水浴15分钟，15,000rpm离心10分钟；

(4)PCR扩增耐药基因rpoB：

PCR扩增条件为常规PCR条件，取已加引物的PCR反应液46ul、Taq酶5ul混于一离心管中，旋涡振荡器上振荡10秒，加入样本核酸离心上清5ul。标记后5,000rpm离心2秒，取出置热循环仪上。先在37℃反应10分钟，然后94℃保温5分钟，再按93℃45秒→55℃45秒→72℃60秒循环35次，最后72℃延伸5分钟。；

(5)DNA变性：

在扩增后的rpoB反应管中加入30μlDNA变性液(0.4MNaOH)，充分混匀后放置2min，加入20xSSC和水，使终浓度为2xSSC，并将液体转移至一反应槽中，52℃放置5分钟；

(6)微流杂交：

52℃培养箱保温中，将杂交膜一端与反应槽中杂交液接触52℃培养箱保温时间约5到10分钟，至杂交液被杂交膜刚好吸干，洗脱：将杂交膜和反应槽转移至37℃恒温箱中，加入洗涤液200ul，洗涤液为PBS含0.3％Tween-20；SA-AP酶结合：反应槽中加入200ulSA-AP酶工作液，37℃反应5-10分钟，至槽中液体被杂交膜刚好吸干。

酶工作液制备：吸取SA-AP酶原液10μl至SA-AP酶液瓶中，混匀。

(7)底物显色：

在另一反应槽中加入显色底物液A、显色底物液B各200ul，混匀，使杂交膜与底物液接触，37℃反应5-10分钟，判断结果。；

(8)结果扫描分析。

      表1用于结核杆菌耐药基因rpoB突变检测的引物和探针(5′→3′)

+引物：5′GCGATCAAGGAGTTCTTCGGCACC		SEQ ID NO：3
			-引物：5′生物素-CGGTACGGCGTTTCGATGAACCC		SEQ ID NO：4
ccagccagctgagc caattcatg gaccag aacaacccgctg tcggggttgacc c acaagcgccgactg tcggcg ctggggc		SEQ ID NO：5
			探针序列	名称
1)ccagccag ctgagc caattcatgg	W511-13	SEQ ID NO：6
			2)ccagccagcCgagc caattcatg g	511cCg	SEQ ID NO：7
3)ccagccagctgagc cTattcatg g	513cTa	SEQ ID NO：8
			4) aattcatg gaccag aacaacccgct	W516-18	SEQ ID NO：9
5) aattcatg gTccag aacaacccgct	516gTc	SEQ ID NO：10
			6) aattcatg Taccag aacaacccgct	516Tac	SEQ ID NO：11
7)ttcatg gaccag aacccgctgTCG	518Del	SEQ ID NO：12
			8)aacccgctg tcggggttgacc	W522	SEQ ID NO：13
9)aacccgctg tcggggttgacc	522tTg	SEQ ID NO：14
			10)ggttgacc cacaagcgccgact	W526	SEQ ID NO：15
11)ggttgacc Tacaagcgccgact	526Tac	SEQ ID NO：16
			12)ggttgacc Gacaagcgccgact	526Gac	SEQ ID NO：17
13)ggttgacc caGaagcgccgact	526caG	SEQ ID NO：18
			14)ggttgacc Aacaagcgccgact	526Aac	SEQ ID NO：19
15)ggttgacc cGcaagcgccgact	526cGc	SEQ ID NO：20
			16)ggttgacc cCcaagcgccgact	526cCc	SEQ ID NO：21
17)gactg tcggcg ctggggc	W531-33	SEQ ID NO：22
			18)gactg tTggcg ctggggc	31tTg	SEQ ID NO：23
19)gactg tGggcg ctggggc	31tGg	SEQ ID NO：24
			20)gactg CAggcg ctggggc	31CAg	SEQ ID NO：25
21)gactg tcgggcg cCggggc	33cCg	SEQ ID NO：26
			22)GCCACCTGAAGGAACGTTCAG	阴性对照	SEQ ID NO：27
23)引物：5′生物素-CGGTACGGCGTTTCGATGAACCC	阳性对照	SEQ ID NO：28

结果如图5-7所示。

图5显示了对野生株H37rv检测结果。左侧印迹点针对野生型探针，均显示非常强的杂交信号，而针对突变型探针，信号非常弱，右上角为控制点。

图6显示了对质控品(R1克隆)的检测结果。质控品为一株在rpoB野生株上进行人工致突变，经DNA测序确认的克隆株，人工致突变引入突变位点和方式是：511CTG→CCG、516GAC→GTC、526CAC→TAC、531TCG→TTG，对照图2，结果相当吻合。

图7显示了对一耐药结核杆菌rpoB检测结果。结果发现存在526位点a→C突变，而511、513、516、518、522、531、533均未发生变化。为了证实，对该耐药结核杆菌rpoB进行克隆、DNA测序分析。测序结果证实，526a→C变化这一检测结果是正确的。

尽管本发明是结合具体实施例进行描述的，但是本领域的技术人员知道，可以对本发明作各种等价的改动和修改。应理解，这些等价形式同样在申请权利要求书所限定的范围之内。

                         序列表<110>上海雅贝科技有限公司<120>一种核酸检测微流芯片<130>015139<160>28<170>PatentIn version 3.0<210>1<211>409<212>DNA<213>结核杆菌<400>1tacggtcggc gagctgatcc aaaaccagat ccgggtcggc atgtcgcgga tggagcgggt              60ggtccgggag cggatgacca cccaggacgt ggaggcgatc acaccgcaga cgttgatcaa              120catccggccg gtggtcgccg cgatcaagga gttcttcggc accagccagc tgagccaatt              180catggaccag aacaacccgc tgtcggggtt gacccacaag cgccgactgt cggcgctggg              240gcccggcggt ctgtcacgtg agcgtgccgg gctggaggtc cgcgacgtgc acccgtcgca              300ctacggccgg atgtgcccga tcgaaacccc tgaggggccc aacatcggtc tgatcggctc              360gctgtcggtg tacgcgcggg tcaacccgtt cgggttcatc gaaacgccg                          409<210>2<211>69<212>DNA<213>结核杆菌<400>2ctgagccaat tcatggacca gaacaacccg ctgtcggggt tgacccacaa gcgccgactg              60tcggcgctg                                                                      69<210>3<211>24<212>DNA<213>引物<400>3gcgatcaagg agttcttcgg cacc                                                     24<210>4<211>23<212>DNA<213>引物<400>4cggtacggcg tttcgatgaa ccc                                                      23<210>5<211>46<212>DNA<213>结核杆菌<400>5ccgctgtcgg ggttgaccca caagcgccga ctgtcggcgc tggggc                             46<210>6<211>24<212>DNA<213>探针<400>6ccagccagct gagccaattc atgg                                                     24<210>7<211>24<212>DNA<213>探针<400>7ccagccagcc gagccaattc atgg                                                     24<210>8<211>24<212>DNA<213>探针<400>8ccagccagct gagcctattc atgg                                                     24<210>9<211>25<212>DNA<213>探针<400>9aattcatgga ccagaacaac ccgct                                                    25<210>10<211>25<212>DNA<213>探针<400>10aattcatggt ccagaacaac ccgct                                                    25<210>11<211>25<212>DNA<213>探针<400>11aattcatgta ccagaacaac ccgct                                                    25<210>12<211>24<212>DNA<213>探针<400>12ttcatggacc agaacccgct gtcg                                                     24<210>13<211>21<212>DNA<213>探针<400>13aacccgctgt cggggttgac c                                                        21<210>14<211>21<212>DNA<213>探针<400>14aacccgctgt cggggttgac c                                                        21<210>15<211>22<212>DNA<213>探针<400>15ggttgaccca caagcgccga ct                                                       22<210>16<211>22<212>DNA<213>探针<400>16ggttgaccta caagcgccga ct                                                       22<210>17<211>22<212>DNA<213>探针<400>17ggttgaccga caagcgccga ct                                                       22<210>18<211>22<212>DNA<213>探针<400>18ggttgaccca gaagcgccga ct                                                       22<210>19<211>22<212>DNA<213>探针<400>19ggttgaccaa caagcgccga ct                                                       22<210>20<211>22<212>DNA<213>探针<400>20ggttgacccg caagcgccga ct                                                       22<210>21<211>22<212>DNA<213>探针<400>21ggttgacccc caagcgccga ct                                                       22<210>22<211>18<212>DNA<213>探针<400>22gactgtcggc gctggggc                                                            18<210>23<211>18<212>DNA<213>探针<400>23gactgttggc gctggggc                                                            18<210>24<211>18<212>DNA<213>探针<400>24gactgtgggc gctggggc                                                            18<210>25<211>18<212>DNA<213>探针<400>25gactgcaggc gctggggc                                                            18<210>26<211>18<212>DNA<213>探针<400>26gactgtcggc gccggggc                                                            18<210>27<211>21<212>DNA<213>探针<400>27gccacctgaa ggaacgttca g                                                        21<210>28<211>23<212>DNA<213>探针<400>28cggtacggcg tttcgatgaa ccc                                                      23

Claims (9)

1.一种核酸检测芯片，其特征在于，该检测芯片包括：检测膜，所述检测膜包括接触区、点样区和吸水区，

其中，所述检测膜的平均孔径0.5-10微米，且在点样区固定有核酸探针点样点，点样点的直径大小为150-1500微米，点密度为9-5000点/平方厘米。

2.如权利要求1所述的芯片，其特征在于，所述芯片上固定的探针选自下组的核酸分子：DNA、RNA、肽核酸、通过扩增方法产生的核酸、人工合成的寡核苷酸及这些核酸的修饰物。

3.如权利要求1所述的芯片，其特征在于，点密度为15-2500点/平方厘米。

4.如权利要求1所述的芯片，其特征在于，点密度为25-1000点/平方厘米。

5.一种核酸检测方法，其特征在于，它包括步骤：

(1)提供一核酸检测芯片，该检测芯片包括：检测膜，所述检测膜包括接触区、点样区和吸水区，其中，所述检测膜的平均孔径0.5-10微米，且在点样区固定有核酸探针点样点，点样点的直径大小为150-1500微米，点密度为9-5000点/平方厘米；

(2)将所述的接触区与含待检核酸的液体接触，液体通过微流作用被吸引通过点样区，从而使点样区的核酸探针与待检核酸杂交；

(3)根据点样区中点样点是否产生的信号，以及信号强弱来判断结果。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的待检核酸包括：DNA、RNA、通过扩增方法产生的核酸、核酸衍生物和核酸标记物。

7.一种核酸检测试剂盒，其特征在于，它具有

一种核酸检测芯片，该检测芯片包括：检测膜，所述检测膜包括接触区、点样区和吸水区，其中，所述检测膜的平均孔径0.5-10微米，且在点样区固定有核酸探针点样点，点样点的直径大小为150-1500微米，点密度为15-5000点/平方厘米。

8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还含有选自下组的一种或多种试剂：

(1)进行RNA反转录反应所用试剂；

(2)进行RNA化学修饰所用试剂；

(3)进行DNA化学修饰所用试剂；

(4)进行核酸扩增反应所用试剂。

9.如权利要求1所述的核酸检测芯片的用途，其特征在于，它被用于下列检测分析：

(1)基因突变检测分析；

(2)耐药基因突变检测分析；

(3)HLA分型检测分析；

(4)SNP分型检测分析；

(5)微生物分型检测；

(6)表达谱检测分析；

(7)药物研发中的检测分析。

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