CN1355790A

CN1355790A - 采用二氢异吲哚衍生物抑制淀粉样蛋白聚集和使淀粉样蛋白沉积成像的方法

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Publication number: CN1355790A
Application number: CN00808728A
Authority: CN
Inventors: C·E·奥格利萨弗兰; Y·赖; A·T·萨卡比; L·C·沃克尔
Original assignee: Warner Lambert Co LLC
Current assignee: Warner Lambert Co LLC
Priority date: 1999-06-10
Filing date: 2000-05-31
Publication date: 2002-06-26
Anticipated expiration: 2020-05-31
Also published as: ES2223531T3; DE60012742D1; DE60012742T2; DK1192131T3; SI1192131T1; PL352294A1; AU5312000A; CR6530A; SK17622001A3; EA200101133A1; EP1192131B1; IL146455A0; NO20015992L; OA11958A; NO20015992D0; ATE272623T1; UA64842C2; BR0011446A; EE200100666A; EP1192131A1

Abstract

本发明提供了一种使用式(I)的新化合物治疗早老性痴呆的方法,其中X是苯基或取代的苯基;Y是苯基,取代的苯基,吡啶基,或取代的吡啶基。还提供了用式(I)化合物抑制淀粉样蛋白聚集的方法和用二氢异吲哚衍生物使淀粉样蛋白沉积成像的方法。

Description

采用二氢异吲哚衍生物抑制淀粉样蛋白聚集

和使淀粉样蛋白沉积成像的方法

发明领域

本发明涉及一种抑制淀粉样蛋白聚集和使淀粉样蛋白沉积成像的方法。更具体地说，本发明涉及一种采用二氢异吲哚衍生物抑制淀粉样蛋白聚合以治疗早老性痴呆的方法。

发明背景

淀粉样变性是一种以各种不可溶的原纤维蛋白质在患者的组织中聚合为特征的疾病。聚集或沉积的原纤维蛋白质被称之为淀粉样蛋白。当在沉积物中发现的特定蛋白质或肽改变时，原纤维状形态和大量的β-片次级结构的存在对许多类型的淀粉样蛋白来说是很普通的。淀粉样沉积是由于淀粉样蛋白聚集，以及随后聚集物和/或淀粉样蛋白进一步结合而形成的。

淀粉样沉积的存在会表现在各种疾病中，每一种疾病又与特定结合的蛋白相关，如地中海热、综合征、自发性骨髓瘤、淀粉样多神经病、淀粉样心肌病、系统性老年性淀粉样变性、淀粉样多神经病、遗传性脑出血伴淀粉样变性、早老性痴呆、唐氏综合征、羊迟发性病毒感染、Creutzfeldt-Jacob疾病、库鲁病、Gerstmann-Straussler-Scheinker综合征、甲状腺髓样癌、孤立性心房淀粉样变性、在渗析患者中的β₂-微球蛋白淀粉样蛋白、包涵体肌炎、在肌肉萎缩疾病中的β₂-淀粉样蛋白沉积、镰状细胞性贫血、帕金森氏病、兰格汉斯岛II型糖尿病胰岛瘤。

早老性痴呆是一种变性性脑疾病，其临床特征是，记忆、认知、推理、判断和情绪稳定性的进行性丧失，逐渐地导致精神颓废，最终导致死亡。由于早老性痴呆和相关的变性性脑疾病是日益增加的老年化人口的主要医疗问题，因此，就迫切需要对此类疾病新的治疗方法和诊断方法。

人们一直在寻求一种在患者中进行的简单而无损伤的检测和定量淀粉样沉积的方法。目前，对淀粉样沉积的检测涉及活组织检查或尸体解剖材料的组织学分析。两种方法均存在严重缺陷。例如，尸体解剖仅可用于验尸诊断。

体内淀粉样沉积的直接成像是非常困难的，这是因为，沉积物与正常的组织一样具有相同的物理性质(即，密度和含水量)。直接采用磁共振成像(MRI)和计算机辅助断层摄影术(CAT)对淀粉样沉积物进行成像的努力并未成功，仅仅在某些特定有利的条件下才能检测淀粉样沉积。此外，人们还试图采用抗体、血清淀粉样P蛋白或其它蛋白质分子来标记淀粉样沉积物，这对于组织外周提供了某些选择，但是组织内部成像还是很差。

因此，用于对患者淀粉样蛋白沉积进行成像和定量的非侵入性技术是非常有用的。此外，抑制淀粉样蛋白聚集而形成淀粉样沉积的化合物也是非常有用的。

发明概述

本发明提供了式I的化合物或其可药用盐：

其中

X为苯基或取代的苯基；

Y为苯基、取代的苯基、吡啶基或取代的吡啶基；其中，取代的苯基和取代的吡啶基可具有1-4个取代基，每一个取代基彼此独立地选自-OC₁-C₁₂烷基、卤素、-C₁-C₆烷基、苯基、

-NO₂，-CF₃，-CN，-NR¹R²，-(CH₂)_nCO₂H，-(CH₂)_nCO₂R¹，

-SO₂NR¹R²、四唑基、-(CH₂)_n-四唑基、十氢异喹啉基、咪唑基、-(CH₂)_n咪唑基、-CH＝CH-四唑基、-CH＝CH-咪唑基或苯基；

R¹和R²独立地为氢或C₁-C₆烷基；

每一个n独立地为0-5(含)；

R″为氢、C₁-C₆烷基或苯基；和

R’为氢、C₁-C₆烷基、-CF₃或苯基。

在式I化合物的优选实施方案中，X为取代的苯基，取代的苯基具有1-3个取代基，其彼此独立地选自-OC₁-C₆烷基、卤素、C₁-C₆烷基、-CF₃或苯基。

在式I化合物的优选实施方案中，Y为取代的苯基，取代的苯基具有1-3个取代基，其彼此独立地选自-CO₂H、-NO₂、-OC₁-C₁₂烷基、-CN、四唑基、-(CH₂)_nCO₂H、-SO₂NR¹R²、-CF₃、咪唑基、-(CH₂)_n-四唑基、-(CH₂)_n咪唑基、-CH＝CH-四唑基或-CH＝CH-咪唑基。

在式I化合物的优选实施方案中，Y为取代的苯基，取代的苯基具有1-3个取代基，其中一个选自-CO₂H。

在式I化合物的更优选实施方案中，Y为取代的苯基，其中，取代基为-CO₂H，其位于苯环的2位。

在式I化合物的更优选实施方案中，其中，X为取代的苯基，取代的苯基具有两个氯取代基，它们位于苯环的3和4位。

本发明还提供了具有下式I的化合物或其可药用盐：

其中

X为苯基或取代的苯基，

其中，当X为取代的苯基时，取代的苯基具有1-4个取代基，其彼此独立地选自-OC₁-C₆烷基、卤素、C₁-C₆烷基、-CF₃或苯基；

Y为苯基、取代的苯基、吡啶基或取代的吡啶基；其中，当Y为取代的苯基或取代的吡啶基时，取代的苯基或取代的吡啶基具有1-4取代基，其彼此独立地选自-CO₂H、-NO₂、-OC₁-C₁₂烷基、-CN、-CF₃、-(CH₂)_nCO₂H、-SO₂NR¹R²、四唑基、-(CH₂)_n-四唑基、十氢异喹啉基、苯基、咪唑基、-(CH₂)_n咪唑基、-CH＝CH-四唑基或-CH＝CH-咪唑基；

R¹和R²独立地为氢或C₁-C₆烷基；每一个n独立地为0-5(含)。

特别优选的化合物和其可药用盐具有通式II

其中

R³为卤素；

R⁴为氢或卤素；和

R⁵为氢、卤素、C₁-C₆烷基、-O-C₁-C₆烷基、-CF₃、-NO₂或-NR¹R²。

本发明的另一组优选的化合物和其可药用盐具有通式III：

其中

R³为卤素；

R⁴为氢或卤素；和

本发明还提供了下述化合物：

2-[2-(2，3，4-三甲氧基-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]苯甲酸；

5-硝基-2-[2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]苯甲酸；

4-甲氧基-5-硝基-2-[2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]苯甲酸；

2-[2-(3，4-二氯苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]苯甲酸；

2-[2-(3，4-二氯苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-5-硝基苯甲酸；

2-[2-(3，4-二氯苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-4-甲氧基-5-硝基-苯甲酸；

2-[2-(3-氯苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]苯甲酸；

2-[2-(4-氯苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]苯甲酸；

2-[2-(3，4-二甲基苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]苯甲酸；

2-[2-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]苯甲酸；

2-[2-联苯-4-基-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]苯甲酸；

2-[2-(3-氯苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-5-硝基-苯甲酸；

2-(2-苯基-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基)-苯甲酸；

5-硝基-2-(2-苯基-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基)-苯甲酸；

2-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]苄腈；

[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基]-(2-四唑-1-基-苯基)-胺；

{2-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-苯基}-乙酸；

3-{2-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]苯基}-丙酸；

2-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-6-硝基-苯甲酸；

2-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-4-硝基-苯甲酸；

2-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-3-硝基苯甲酸；

2-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-5-甲磺酰基-苯甲酸；

2-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-5-氨磺酰基-苯甲酸；

4-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-间苯二甲酸；

3-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-邻苯二甲酸；

2-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-5-三氟甲基-苯甲酸；

2-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-5-咪唑-1-基-苯甲酸；

[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基-]-(2-四唑-1-基甲基-苯基)-胺；

[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基-]-[2-(2-四唑-1-基-乙基)-苯基]-胺；

[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基-]-[2-(2-四唑-1-基-乙烯基)-苯基]-胺；

2-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-5-甲基-苯甲酸；

2-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-3-甲基-苯甲酸；

2-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-4-硝基苯甲酸；

2-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-3，5-二硝基-苯甲酸；

3-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-2-甲基苯甲酸；

2-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-4-甲氧基-苯甲酸；

2-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-4-丙氧基-苯甲酸；

4-丁氧基-2-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-苯甲酸；

2-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-4-戊氧基-苯甲酸；

2-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-4-己氧基-苯甲酸；

2-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-4-庚氧基-苯甲酸；

2-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-4-辛氧基-苯甲酸；

2-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-4-壬氧基-苯甲酸；

4-癸氧基-2-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-苯甲酸；

2-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-4-异丙氧基-苯甲酸；

2-[2-(4-氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-5-硝基-苯甲酸；

2-[2-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-5-硝基-苯甲酸；

2-(2-联苯基-4-基-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基)-5-硝基-苯甲酸；或

2-[2-(3，4-二甲基-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-5-硝基苯甲酸。

本发明还提供了包含式I化合物及可药用载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物。

本发明还提供了一种治疗早老性痴呆的方法，该方法包括向患有早老性痴呆疾病的患者给药治疗有效量的式I化合物。

本发明还提供了抑制淀粉样蛋白聚集以形成淀粉样沉积的方法，该方法包括向需要抑制淀粉样蛋白聚集的患者给药淀粉样蛋白聚集抑制量的式I化合物。

本发明还提供了使淀粉样沉积物成像的方法，包括下述步骤：

a.向患者引入可检测量的经标记的式I化合物或其可药用盐：

其中

X为苯基或取代的苯基；

Y为苯基、取代的苯基；其中，取代的苯基可具有1-5个取代基，每一个取代基彼此独立地选自-OC₁-C₁₂烷基、卤素、-C₁-C₆烷基、苯基、

-NR¹R¹，-(CH₂)_nCO₂H，-(CH₂)_nCO₂R¹，-SO₂NR¹R¹，

四唑基、-(CH₂)_n-四唑基、咪唑基、-(CH₂)_n咪唑基、-CH＝CH-四唑基或-CH＝CH-咪唑基；

每一R¹独立地为氢或C₁-C₆烷基；

每一个n独立地为0-5(含)；

R″为氢、C₁-C₆烷基或苯基；和

R’为氢、C₁-C₆烷基、-CF₃或苯基。

b.使标记的化合物有足够的时间与淀粉样沉积物进行缔合(associated)；和

c.检测与淀粉样沉积物缔合的标记的化合物。

在该方法的一个优选实施方案中，患者患有或怀疑患有早老性痴呆。

在该方法的一个优选实施方案中，标记的化合物为放射性标记的化合物。

在该方法的一个优选实施方案中，标记的化合物采用MRI进行检测。发明详述

术语“烷基”是指直链或支链的烃基。烷基的代表性实例为甲基、乙基、丙基、异丙基、异丁基、丁基、叔丁基、仲丁基、戊基和己基。

优选的烷基为C₁-C₆烷基。

术语“烷氧基”是指连接有氧原子的烷基。烷氧基的代表性实例包括甲氧基、乙氧基、叔丁氧基、丙氧基和异丁氧基。

术语“卤素”包括氯、氟、溴和碘。

术语“取代的”是指分子的一个或多个氢原子被另一个原子或原子基团取代。例如，取代基包括卤素、-OH、-CF₃、-NO₂、-NH₂、-NH(C₁-C₆烷基)、-N(C₁-C₆烷基)₂、C₁-C₆烷基、-OC₁-C₆烷基、-CN、-CF₃、-CO₂H和-CO₂C₁-C₆烷基。

术语“取代的苯基”是指其中1-4个氢原子彼此独立地被一个取代基代替的苯环，优选取代基选自上面列出的那些。其实例包括3-氯苯基、2，6-二溴苯基、4-硝基苯基、3，4，5-三甲氧基苯基和3-二乙氨基苯基。

符号“-”是指共价键。

本文中所采用的术语“可药用盐、酯、酰胺和前药”是指本发明化合物的羧酸盐、氨基酸加成盐、酯、酰胺和前药，在合理的药物判断范围内，它们适用于与患者的组织进行接触，无毒、无刺激性、无过敏反应等，具有合理的效益/风险比，对其使用目标是有效的，本发明的化合物在可能时还为两性离子形式。术语“盐”是指本发明化合物相对无毒的无机和有机酸加成盐。这些盐可在化合物的最后分离与纯化期间就地生产，或者分别通过使游离碱形式的纯化后的化合物与适宜的有机或无酸酸进行反应，再分离形成的盐。代表性的盐包括：氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、硝酸盐、乙酸盐、草酸盐、戊酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、硼酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、磷酸盐、甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、萘甲磺酸盐、葡庚糖酸盐、乳糖酸盐和十二烷基磺酸盐等。它们可包含基于碱金属和碱土金属的阳离子，如钠、锂、钾、钙、镁等，以及无毒的铵、季铵和胺阳离子，包括但不限于：铵、四甲基铵、四乙基铵、甲基胺、二甲基胺、三甲基胺、三乙基胺、乙胺等(例如参见，Berge S.M.等，药用盐(Pharmaceutical Salts)，药学杂志(J.Pharm.Sci.)，66：1-19(1977)，该文献引入本文作为参考)。

药学上可接受的实例，本发明化合物无毒酯包括C₁-C₆烷基酯，其中，烷基为直链或支链。可接受的酯还包括C₅-C₇环烷基酯和芳香基烷基酯，例如但不限于苄基。优选C₁-C₄烷基酯。本发明化合物酯可以根据常规的方法制备。

药学上可接受的实例，本发明化合物无毒酰胺包括来自氨、伯C₁-C₆烷基胺和仲C₁-C₆二烷基胺的酰胺，其中该烷基为直链或支链。在仲胺的情况下，该胺还可以是含有一个氮原子的5-或6-元杂环。优选来自氨、C₁-C₃烷基伯酰胺和C₁-C₂二烷基仲酰胺的酰胺。可以根据常规方法制备本发明化合物的酰胺。

术语“前体药物”指在体内快速转化得到上式的母体化合物的化合物，例如通过在血液中的水解。在T.Higuchi和V.Stella，作为新的给药体系的前体药物(Pro-drugs as Novel Delivery Systems)，Vol.14 of the A.C.S.Symposium Series和药物设计中的生物可逆的载体(Bioreversible Carriers in Drug Design)，ed.EdwardB.Roche，美国药学会(American Pharmaceutical Association)和Pergamon Press，1987中提供了详细的讨论，本文引用二者作为参考。

此外，本发明的化合物可以未溶剂化或与药学上可接受的溶剂如水、乙醇等溶剂化的形式存在。一般而言，认为在本发明目的方面溶剂化形式等同于未溶剂化形式。

本发明化合物可以由于该化合物中不对称中心的存在而以不同的立体异构体形存在。考虑该化合物的所有立体异构形式和其混合物，包括外消旋混合物构成本发明部分。

在本发明成像方法的第一步，将式I的标记化合物以可检测量引入到组织或患者。该化合物一般为药学组合物的部分并采用现有技术中已知的方法给予组织或患者。

在本发明的方法中，可以口服、直肠、不经肠道(静脉内、肌内或皮下)、脑池内、阴道内、腹膜内、膀胱内、局部(散剂、软膏或滴剂)给药，或者作为口腔或鼻喷雾剂。

适于肠胃外注射的组合物可以包括生理学上可接受的无菌水或非水溶液、分散体、悬浮体或乳剂和用于重新构成无菌可注射溶液或分散体的无菌粉剂。适宜的含水和无水载体、释释剂、溶剂或赋形剂的实例包括水、乙醇、多元醇(丙二醇、聚乙二醇、甘油等等)、其适宜的混合物、植物油(如橄榄油)和可注射的有机酯如油酸乙酯。可以保持良好的流动性，例如可以采用包衣如卵磷脂，在分散体的情况下保持所需的颗粒大小和采用表面活性剂。

这些组合物还可以包括助剂如防腐剂、湿润剂、乳化剂和分散剂。可以采用各种抗菌和抗真菌剂如parabens、氯丁醇、苯酚、山梨酸等来防止微生物的作用。它还可以适宜的包括等渗剂如糖、氯化钠等等。采用延迟吸收剂如单硬脂酸铝和明胶可以产生延时吸收的可注射药剂。

用于口服的固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性成分与至少一种惰性的常规赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或者(a)填充剂和膨胀剂，如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和硅酸；(b)粘合剂如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)湿润剂，如甘油；(d)崩解剂，如琼脂-琼脂、碳酸钙和碳酸钠；(e)溶解阻滞剂如石蜡；(f)吸收加速剂，如季铵化合物；(g)湿润剂如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂如高岭土和皂粘土；和(i)润滑剂，如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂酰硫酸钠或它们的混合物。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，该剂型还可以包括缓冲剂。

类似类型的固体组合物还可以用作采用赋形剂如乳糖或乳糖如高分子量的聚乙二醇等的软-和硬填充明胶胶囊的填充剂。

可以用包衣和壳如肠包衣和现有技术中已知的其它包衣制备固体剂型如片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂和颗粒剂。它们可以含有遮光剂并还可以是这样的组合物：以延时的方式在肠道的某一部分释放出活性化合物。可以用于包埋组合物的实例是聚合物质和蜂蜡。如果合适的话，该活性化合物还可以是与一种或多种上述赋形剂一起的微囊包束的形式。

用于口服的液体剂型包括药学上可接受的乳剂、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。除了这些活性化合物以外，该液体剂型可以含有现有技术中常用的惰性稀释剂，如水和其它溶剂、助溶剂和乳化剂，如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、聚乙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油，尤其是棉籽油、野豆油、玉米胚芽油、橄榄油、海狸油和芝麻油、甘油、氢糠醇、聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯或者这些物质的混合物等等。

除了这些惰性稀释剂以外，该组合物还可包括助剂如湿润剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂和芳香剂。

悬浮液除了该活性化合物以外，可以含有助悬剂，如乙氧基化的异硬脂酰醇、聚氧化乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯，微晶纤维素、间氢氧化铝、皂粘土、琼脂-琼脂和黄芪胶或者这些物质的混合物等等。

直肠给药的组合物优选为可以通过混合本发明混合物与适宜非电离赋形或载体如可可油、聚乙二醇或栓剂蜡等的栓剂，它在常温下为固体但在体温下为液体，因而它在直肠或阴道内熔解并释放出活性成分。

用于局部给予本发明化合物的剂型包括软膏、散剂、喷雾剂和吸入剂。在无菌条件下将该活性成分与生理学上可接受的载体和任何防腐剂、缓冲剂或可能需要的抛射剂混合。本发明的范围内还考虑眼用制剂、眼用软膏、散剂和溶液。

在本发明的优选的实施方案中，将标记化合物以可检测的数量引入到患者，并在经过足够时间使该化合物变成与淀粉状蛋白沉积物缔合之后，在患者体内非侵入性检测该标记化合物。在本发明的另一实施方案中，将式I的标记化合物引入到患者，并使该化合物有足够的时间变成与淀粉状蛋白沉积物缔合，然后从患者身上取出组织试样，在患者之外检测组织中的该标记化合物。在本发明的另一实施方案中，从患者身上取出组织试样并将式I的标记化合物引入到该组织试样上。在充足的时间使该化合物与淀粉状蛋白沉积物结合后，检测该化合物。

可以通过普遍的或局部给药途径将该标记化合物给予患者。例如，可以通过使该标记化合物被全身转运而将其给予患者。或者，将该标记化合物给予有兴趣的特定的器官或组织。例如，需要在脑部定位和定量淀粉状蛋白沉积物以诊断或跟踪患者阿耳茨海默氏病的进展。

术语“组织”是指患者身体的部分。组织的实例包括脑、心脏、肝脏、血管和动脉。可检测量为由所选择的检测方法检测所需的标记化合物数量。本领域技术人员可以容易地确定用于测定引入到患者身上的标记化合物的数量。例如，可以将增大数量的标记化合物给予患者直到用所选择的检测方法检测到该化合物。将该标记引入到该化合物中以检测该化合物。

术语“患者”是指人或其它动物。本领域技术人员也熟悉确定使化合物与淀粉状蛋白沉积物缔合的足够的时间的量。可以通过以下方法容易地测定所需的时间：将可检测量的式I的标记化合物引入到患者身上，然后在给药后的各时间处检测该标记化合物。式I的标记化合物为任何具有至少一个作为其结构的一部分的放射性元素的其化合物。

术语“缔合”是指标记化合物和淀粉状蛋白沉积物之间的化学相互作用。缔合的实例包括共价键、离子键、亲水-亲水相互作用、疏水疏水相互作用和配合物。

本领域技术人员熟悉各种检测标记化合物的方法。例如，可以使用磁共振成像(MRI)、正电子发射体层摄影术(PET)或单光子发射计算机体层摄影术(SPECT)检测放射标记的化合物。引入到化合物的标记将取决于所需的检测方法。例如，如果选择PET作为检测方法，则该化合物必须具有正电子发射原子如¹¹C或¹⁸F。

式I化合物中适宜标记的另一实例为诸如¹³C、¹⁵N或¹⁹F的原子，可以采用有时还被称为核磁共振(NMR)的磁共振成像(MRI)检测这些原子。此外，可以通过MRI采用顺磁性造影剂检测式I的标记化合物。可以通过标准合成方法容易地制备具有放射性元素作为其结构一部分的化合物。

另一种检测的实例为电子顺磁性共振(EPR)。在这种情况下，可以使用现有技术中已知的EPR探针如硝基氧化物(nitroxides)。

还可以定量进行淀粉状蛋白沉积物成像以可以检测淀粉状蛋白沉积物的数量。

本发明还提供了一种抑制淀粉状蛋白聚集形成淀粉状蛋白沉积物的方法，它通过给予需要抑制淀粉状蛋白聚集的患者一种淀粉状蛋白抑制量的式I化合物。本领域技术人员可以容易地通过简单地给予患者式I的化合物，并增大用量直至淀粉状蛋白沉积物的生长减少或停止来测定淀粉状蛋白抑制量。可以采用成像或从患者上抽取组织试样并观察其中的淀粉状蛋白沉积物来评价其生长率。

需要抑制淀粉状蛋白聚集的患者为具有淀粉状蛋白聚集的疾病或病症的患者。这种疾病和病症的实例包括地中海热、默-韦综合症、自发性骨髓瘤、淀粉状蛋白性多神经病、淀粉状蛋白性心肌病、系统性老年淀粉样变性、淀粉状蛋白多神经病、具有淀粉样变性的遗传性小脑出血、阿耳茨海默氏病、唐氏综合症、瘙痒病、克罗伊茨费尔特-雅各布疾病、库鲁病、格-施-沙综合症、甲状腺骨髓癌、分离的心房淀粉状蛋白、渗析患者的淀粉状β₂-微球蛋白、包埋体肌炎、肌肉消耗性疾病的β₂-淀粉状蛋白沉积物、镰状细胞性贫血、帕金森氏病和朗格罕岛糖尿病2型胰岛素瘤。

本发明还提供了式I的标记化合物，其中已用放射性同位素取代该化合物中的一或多个原子。该放射性同位素可以是任意的放射性同位素。但是优选³H、¹²³I、¹²⁵I、¹³¹I、¹¹C和¹⁸F。本领域技术人员熟悉用于往化合物中引入放射性同位素的方法。例如，制备其中的一个碳原子为¹¹C和¹⁴C的式I的化合物，因为它是一种标记化合物。

可以以大约0.1-1,000mg每天的剂量水平将本发明的化合物给予患者。对于体重约为70kg的正常成年人，每天大约0.01-100mg每公斤体重的剂量足矣。但是可以采用特定的剂量。例如，该剂量取决于许多因素包括患者的需求、所治疗疾病的严重性和所用化合物的药学活性。本领域技术人员已知具体患者的最佳剂量的测定。

以下所示的实施例意在说明本发明的具体实施方案，而不是意图以任何方式限定说明书，包括权利要求。

实施例

可以通过在方案1所列的合成途径制备式I的化合物。适宜取代的苯胺(I)和5-硝基异苯并呋喃1，3-二酮(II)或类似取代的呋喃在乙酸中被加热时产生对应的邻苯二甲酰亚胺(III)。(III)的标准氢化条件如Raney-nickel/DMF，产生还原的邻苯二甲酰亚胺(IV)。采用标准还原剂如氢化锂铝还原邻苯二甲酰亚胺(IV)产生胺(V)。采用Buchwald反应条件(J.F.Hartwig，Angew：Chem.Int.Ed 1998：37：2046-2067)，通过在碳酸铯、三(二亚苄基丙酮)-二钯(O)和(S)-(2，2’-二(二-对甲苯基膦酰基-1，1’-联萘)(BINAP)的存在下使(V)和各种取代的2-溴苯甲酸甲基酯(VI)反应，可将(V)转化为(VIII)(方法A)。此外，还可以通过在二甲基双(三甲基甲硅烷基)氨基化锂(LHMDS)的存在下使(V)与各种取代的2-氟苯甲酸甲基酯的反应而得到(VIII)(方法B)。然后采用标准条件如含水氢氧化钠皂化(VIII)得到期望的式I取代的异二氢吲哚。此外，可以通过在LHMDS的存在下使(V)与2-氟苯甲酸(VII)反应而将(V)直接转化成式I的化合物。

方案I

实施例1制备2-[2-(2，3，4-三甲氧基-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨

基]-苯甲酸

步骤A：制备5-硝基-2-(2，3，4-三甲氧基-苯基)异吲哚-1，3-二酮

将2，3，4-三甲氧基苯基胺(91.61g，0.50mol)和5-硝基异苯并呋喃-1，3-二酮(96.56g，0.5mol)在乙酸(1000mL)中的混合物加热回流2小时。冷却后，滤出沉淀，用H₂O(1L)，1N NaOH(1.5L)和H₂O(1L)洗涤。将形成的沉淀用沸腾的MeOH研制，过滤，随后在真空炉(67℃)中干燥16小时，得到一种所需产物的黄色固体144.0g(0.40mol，80％)。

熔点(mp)245-247℃。对C₁₇H₁₄N₂O₄的实验分析：计算值：C，56.98；H，3.94；N，7.82；实测值：C，56.80；H，4.08；N，7.80。步骤B：制备5-氨基-2-(2，3，4-三甲氧基-苯基)异吲哚-1，3-二酮

在Ra-Ni(12g)存在下，在28-36℃(ΔP＝7.5psi)下，还原5-硝基-2-(2，3，4-三甲氧基-苯基)异吲哚-1，3-二酮(89.0g，0.25mol)在THF(1.25L)，MeOH(1.25L)和DMF(100mL)中的样品。将反应混合物过滤，，并将滤液进行真空浓缩，在真空炉(67℃)中干燥16小时，得到所需产物的灰白色固体81.6g(0.25mol，85％)，mp＞280℃。对C₁₇H₁₆N₂O₅的实验分析：计算值：C，62.09；H，4.92；N，8.52；实测值：C，61.71；H，4.94；N，8.48。

步骤C：制备2-(2，3，4-三甲氧基苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基-胺

在-40℃下，将AlCl₃(8.12g，60.92mmol)的THF(200mL)溶液缓慢地加至LiAlH₄(1M/THF，183mL，182.75mmol)的THF(100mL)悬浮液中，将其搅拌10分钟。将温度升至0℃，再缓慢地滴加入5-氨基-2-(2，3，4-三甲氧基苯基)-异吲哚-1，3-二酮(20.0g，60.92mmol)的THF(500mL)悬浮液。将反应混合物搅拌3小时，同时升温至室温。将混合物再冷却至0℃，小心地加入25％NaOH(33mL)，然后加入H₂O(7.3mL)。然后，将该混合物在室温下搅拌2小时，用硅藻土过滤，浓缩，在60℃的真空炉中干燥16小时，得到所需产物的苍白色固体10.8g(35.96mmol，59％)，mp：213-215℃。对C₁₇H₂₀N₂O₃·0.14H₂O的实验分析：计算值：C，67.41；H，6.75；N，9.25；实测值：C，67.03；H，6.62；N，8.98。步骤D1：制备2-[2-(2，3，4-三甲氧基苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-

基氨基]苯甲酸甲酯

在氮气氛下，将2-(2，3，4-三甲氧基-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基-胺(1.2g，4.0mmol)，2-溴-苯甲酸甲酯(0.72g，3.3mmol)，碳酸铯(1.52g，4.7mmol)，三(二亚苄基丙酮-二钯(O)(91mg，0.1mmol)和(S)-(2，2’-二(二对甲苯基膦酰基-1，1’-联萘(98％，(S)-tol-BINAP)(102mg，0.15mmol)(L/Pd＝1.5)在无水甲苯(30mL)中的混合物在100℃下加热24小时。冷却后，将反应混合物用乙醚稀释，用硅藻土过滤，充分用乙醚漂洗。将滤液蒸发至干，得到一种褐色残余物。通过快速色谱纯化(硅胶，10％EtOAc/己烷)，得到1.39g(3.2mmol，80％)的所需产物，mp128-129℃。对C₂₅H₂₆N₂O₅的实验分析：计算值：C，69.11；H，6.03；N，6.45；实测值C，69.39；H，5.99；N，6.13。步骤E：制备2-[2-(2，3，4-三甲氧基-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-

基氨基]-苯甲酸

将2-[2-(2，3，4-三甲氧基苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]苯甲酸甲酯(1.30g，2.99mmol)和1N NaOH(aq.)(20.0mL)在EtOH(5.0mL)和THF(20mL)中的溶液加热回流16小时。真空除去溶剂。将残余物用H₂O稀释，再用浓HCl酸化至pH1。过滤收集形成的沉淀，再与沸腾的MeOH-H₂O(4∶1)研制，在真空炉中干燥16小时，得到实施例1的化合物，为一种褐色固体(0.96g，2.28mmol，76％)，mp194-195℃。对C₂₄H₂₄N₂O₅的实验分析：计算值：C，68.56；H，5.75；N，6.66；实测值：C，68.19；H，5.57；N，6.47。

实施例2制备5-硝基-2-[2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚5-基

氨基]苯甲酸

在氮气氛下，将2-(2，3，4-三甲氧基苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基-胺(1.81g，6.03mmol)，2-溴-5-硝基-苯甲酸甲酯(1.49g，6.02mmol)，碳酸铯(2.75g，8.44mmol)，三(二亚苄基丙酮二钯(O)(166mg，0.18mmol)和(S)-(2，2’-二(二对甲苯基膦酰基-1，1’-联萘(98％，(S)-tol-BINAP)(184g，0.27mmol)(L/Pd＝1.5)在无水甲苯(30mL)中的混合物在100℃下加热48小时。将反应混合物用乙醚稀释，用硅藻土过滤，充分用乙醚漂洗。将滤液蒸发至干，得到一种褐色残余物(6.3g)。将形成的残余物溶解于EtOH(10mL)和THF(20mL)中，加入5N NaOH(aq.)(40mL)，将混合物回流16小时。真空除去溶剂。将残余物用浓HCl酸化至pH3。过滤收集形成的沉淀，再与沸腾的MeOH-H₂O(4∶1)研制，在真空炉中干燥16小时，得到实施例2的化合物，为一种黄色固体(1.8g，3.87mmol，64％)。mp＞220℃。对C₂₄H₂₃N₃O₇·0.71H₂O的实验分析：计算值：C，60.27；H，5.15；N，8.79；实测值：C，59.88；H，4.90；N，8.42。

实施例3制备4-甲氧基-5-硝基-2-[2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-2，3-二氢-1H-

异吲哚-5-基氨基]苯甲酸

向冷却(-78℃)下的2-(2，3，4-三甲氧基苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基-胺(535mg，1.78mmol)的THF(15mL)溶液中滴加入LHMDS(3.56mL，1M在THF中，3.56mmol)。将反应混合物在-78℃下搅拌10分钟。再滴加入2-氟-4-甲氧基-5-硝基-苯甲酸甲酯(408g，1.78mmol)的THF(10mL)溶液。将该溶液在-78℃下搅拌30分钟。再将反应混合物逐渐升温至室温，再在氮气氛下搅拌2小时。将反应混合物用EtOAc稀释，再用5N HCl酸化(pH3)。将有机层用干燥(Na₂SO₄)，过滤和真空浓缩，得到一种褐色残余物。向该残余物的EtOH(20mL)和THF(40mL)溶液中，加入5N NaOH(aq.，50mL)，再将混合物回流16小时。除去溶剂，将残余物用浓HCl酸化(pH3)。过滤收集形成的沉淀，再与沸腾的MeOH-H₂O(2∶1)研制，在真空炉中干燥16小时，得到实施例3的化合物，为一种苍白色固体(550g，1.11mmol，62％)。mp＞200℃。对C₂₅H₂₅N₈·0.42H₂O的实验分析：计算值：C，59.09；H，5.18；N，8.35；实测值：C，59.30；H，4.80；N，8.24。

实施例4制备2-[2-(3，4-二氯苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]苯甲酸

步骤A：制备2-(3，4-二氯苯基)-5-硝基-异吲哚-1，3-二酮

采用实施例1步骤A所述的过程，由3，4-二氯苯基胺(48.6g，0.3mol)和5-硝基-异苯并呋喃-1，3-二酮(57.9g，0.3mol)在乙酸(50mL)中制备标题化合物，获得所需产物的黄色固体72.6g(0.22mol，72％)，mp210-211℃。对C₁₄H₆N₂O₄Cl₂的实验分析：计算值：C，49.88；H，1.79；N，8.31；实测值：C，49.71；H，1.87；N，8.34。

步骤B：制备5-氨基-2-(3，4-二氯苯基)-异吲哚-1，3-二酮

采用实施例1步骤B所述的过程，由2-(3，4-二氯苯基)-5-硝基-异吲哚-1，3-二酮(106.9g，0.32mol)，Ra-Ni(5g)在THF(0.8L)中在20-76℃(AP＝9.5psi)下制备标题化合物，获得所需产物的黄色固体80.0g(0.26mol，81％)，mp255-257℃。对C₁₄H₈N₂O₄Cl₂的实验分析：计算值：C，54.74；H，2.63；N，9.12；实测值：C，54.59；H，2.65；N，9.57。步骤D1：制备2-(3，4-二氯苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基-胺

采用实施例1步骤C所述的过程，由5-氨基-2-(3，4-二氯苯基)-异吲哚-1，3-二酮(15.0g，0.049mol)，AlCl₃(6.51g，0.049mol)，LiAlH₄(5.56g，0.147mol)在THF(1000mL)中制备标题化合物，获得所需产物的黄褐色固体，12.23g(0.044mol，90％)，mp207-209℃。对C₁₄H₁₂N₂Cl₂的实验分析：计算值：C，60.23；H，4.33；N，10.03；实测值：C，59.91；H，4.36；N，9.90。步骤C：制备2-[2-(3，4-二氯苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]

苯甲酸

采用实施例2所述的过程，由2-(3，4-二氯苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基-胺(4.04g，14.47mmol)，2-溴-苯甲酸甲酯(2.59g，12.06mmol)，碳酸铯(5.50g，16.88mmol)，三(二亚苄基丙酮-二钯(O)(331mg，0.36mmol)和(S)-(2，2’-二(二-对甲苯基膦酰基-1，1’-联萘(98％，(S)-tol-BINAP)(368g，0.54mmol)(L/Pd＝1.5)在无水甲苯(80mL)和5N NaOH(aq.)(100mL)在EtOH(20mL)和THF(40mL)中制备标题化合物，得到所需产物的褐色固体，3.11g(7.79mmol，54％)，mp＞210℃。对C₂₁H₁₆N₂O₂Cl₂的实验分析：计算值：C，63.17；H，4.04；N，7.02；Cl，17.76；实测值：C，63.31，H，3.94；N，6.73；Cl，17.75。

实施例5制备2-[2-(3，4-二氯苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-5-硝基

-苯甲酸

采用实施例2所述的过程，由2-(3，4-二氯苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基-胺(3.00g，10.75mmol)，2-溴-5-硝基苯甲酸甲酯(2.67g，10.75mmol)，碳酸铯(4.90g，15.04mmol)，三(二亚苄基丙酮-二钯(O)(295mg，0.32mmol)和(S)-(2，2’二(二-对甲苯基膦酰基-1，1’-联萘(98％，(S)-tol-BINAP)(328g，0.48mmol)(L/Pd＝1.5)在无水甲苯(80mL)中和5N NaOH(aq.)(100mL)在EtOH(40mL)和THF(100mL)中制备标题化合物，得到所需产物的褐色固体，3.64g(8.19mmol，76％)，mp＞222℃。对C₂₁H₁₅N₃O₄Cl₂·0.1H₂O·0.25MeOH的实验分析：计算值：C，56.21；H，3.60；N，9.25；实测值：C，56.54；H，3.74；N，8.86。

实施例6制备2-[2-(3，4-二氯苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-4-甲氧

基-5-硝基-苯甲酸

采用实施例3所述的过程，由2-(3，4-二氯苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基-胺(801mg，2.87mmol)，LHDMS(5.74mL，1M的THF溶液，5.74mmol)，2-氟-4-甲氧基-5-硝基-苯甲酸甲酯(658g，2.87mmol)的THF(50mL)溶液和5N NaOH(aq.，100mL)的EtOH(20mL)和THF(40mL)溶液制备标题化合物，得到所需产物的褐色固体，1.07g(2.26mmol，79％)，mp＞230℃。对C₂₂H₁₇N₃O₅Cl₂的实验分析：计算值：C，55.71；H，3.61；N，8.86；实测值：C，55.43；H，3.57；N，8.80。

实施例7

制备2-[2-(3-氯苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]苯甲酸

步骤A：制备2-(3-氯苯基)-5-硝基-异吲哚-1，3-二酮

将3-氯苯胺(31.89g，0.25mol)和5-硝基-异苯并呋喃-1，3-二酮(48.28g，0.250mol)在乙酸(800mL)中的混合物加热回流4.5小时(130-140℃)。冷却后，滤出沉淀，用水(650mL)，1N NaOH(330mL)和水(500mL)洗涤，得到一种白色固体状的产物，61.0lg(0.202mol，81％)，mp210-212℃。对C₁₄H₆N₂O₄Cl₂的实验分析：计算值：C，55.56；H，2.33；N，9.26；实测值：C，55.78；H，1.69；N，9.15。

步骤B：制备5-氨基-2-(3-氯苯基)-异吲哚-1，3-二酮

由2-(3-氯-苯基)-5-硝基-异吲哚-1，3-二酮(60.94g，0.20mol)的DMF(1.2L)溶液制备，并在Ra-Ni(60g)存在下，在22＝28℃(AP＝6.0psi)下还原，制备标题化合物。将反应混合物过滤，并将滤液进行真空浓缩，然后在60℃下的真空炉中干燥18小时，获得所需产物的绿色固体54.31g(0.20mol，99％)，mp203-205℃。对C₁₄H₈N₂O₂Cl₂的实验分析：计算值：C，61.66；H，3.33；N，10.27；实测值：C，61.27；H，3.40；N，9.98。

步骤C：制备2-(3-氯苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基-胺

在-40℃下，将AlCl₃(4.89g，0.037mol)的THF(200mL)溶液缓慢地加至LiAlH₄(4.17g，0.110mol)的THF(150mL)悬浮液中，将其搅拌10分钟。将温度升至室温，再搅拌10分钟。滴加入5-氨基-2-(3-氯苯基)-异吲哚-1，3-二酮(10g，0.037mol)的THF(300mL)溶液。将反应物搅拌3小时，同时将溶液升温至室温。再将反应物冷却至0℃，并先用30％NaOH(20mL)，再用H₂O(40mL)使反应停止。将溶液用硅藻土过滤，浓缩和在60℃的真空炉中干燥16小时，得到所需产物，为一种浅褐色固体，5.24g(0.021mol，58％)，mp178-186℃。对C₁₄H₁₂N₂Cl₂·0.11mol H₂O的实验分析：C，68.16；H，5.40；N，11.36；实测值：C，68.33；H，5.46；N，10.96。步骤D2：制备2-[2-(3-氯苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]苯

甲酸

在-78℃下，向THF(100mL)中的2-(3-氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基-胺(3g，0.012mol)中滴加入LHDMS(36.78mL，1M的THF溶液，36.78mmol)，并在-78℃下搅拌10分钟。滴加入2-氟苯甲酸(1.72g，.012mol)的THF(100mL)溶液，将溶液在-78℃下搅拌1小时，然后使其逐渐升温至室温，并搅拌16小时。将反应混合物浓缩，用3M HCl(100mL)酸化，然后用CH₂Cl₂(3×150mL)萃取。将有机层干燥(Na₂SO₄)，过滤和真空浓缩，获得一种褐色固体。将产物溶解于MeOH(25mL)中，并在室温下搅拌10分钟。中入水以沉淀出残余物。将产物过滤，并用1∶4MeOH∶H₂O(400mL)洗涤，得到所需产物的褐色固体，1.02g(2.80mmol，23％)，mp209-212℃。对C₂₂H₁₇N₃O₅Cl₂·0.29mol H₂O的实验分析：C，68.16；H，4.79；N，7.57；实测值：C，67.76；H，4.56；N，7.83。

实施例8

制备2-[2-(4-氯苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]苯甲酸

步骤A：制备2-(4-氯苯基)-5-硝基-异吲哚-1，3-二酮

采用实施例1步骤A的过程，由4-氯苯基胺(19.14g，0.150mol)和5-硝基-异苯并呋喃-1，3-二酮(28.97g，0.150mol)在乙酸(300mL)中制备标题化合物，获得所需产物的橙色固体，42.49g(0.140mol，94％)，mp198-200℃。对C₁₄H₆N₂O₄Cl₂的实验分析：计算值：C，55.56；H，2.33；N，9.26；实测值：C，55.52；H，1.74；N，8.90。

步骤B：制备5-氨基-2-(4-氯苯基)-异吲哚-1，3-二酮

采用实施例1步骤B的过程，由2-(4-氯苯基)-5-硝基-异吲哚-1，3-二酮(41.68g，0.138mol)，Ra-Ni(40g)DMF(1.0L)，在20-27℃(AP＝28.5psi)制备标题化合物，获得所需产物的绿色固体，40.13g(0.147mol，107％)，mp0.228-230℃。对C₁₄H₈N₂O₂Cl₂·0.34molH₂O的实验分析：C，60.31；H，3.50；N，10.05；实测值：C，59.92；H，4.05；N，11.01。

步骤C：制备2-(4-氯苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基-胺

采用实施例1步骤C的过程，由5-氨基-2-(4-氯苯基)-异吲哚-1，3-二酮(10.0g，0.037mol)，AlCl₃(4.89g，0.037mol)，LiAlH₄(4.17g，0.110mol)在THF(650mL)中制备标题化合物，获得所需产物的褐色固体，6.39g(0.026mol，71％)，mp204-210℃。对C₁₄H₁₂N₂Cl₂的实验分析：计算值：C，68.72；H，5.35；N，11.45；实测值：C，68.54；H，5.39；N，11.16。步骤D2：制备2-[2-(4-氯苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]苯

甲酸

采用实施例1步骤D2的过程，由2-(4-氯苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基-胺(3g，0.012mol)，LHDMS(36.78mL，1M的THF溶液，36.78mmol)，2-氟苯甲酸(1.72g，0.012mol)在THF(200mL)中制备标题化合物，获得所需产物的褐色固体1.26g(0.003mol，28％)，mp210-212℃。对C₂₂H₁₇N₃O₅Cl₂·0.11mol H₂O的实验分析：C，68.76；H，4.73；N，7.64；实测值：C，68.39；H，4.47；N，7.76。

实施例9制备2-[2-(3，4-二甲基苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]苯甲

酸

步骤A：制备2-(3，4-二甲基苯基)-5-硝基-异吲哚-1，3-二酮

采用实施例7步骤A的过程，由3，4-二甲基苯胺(30.30g，0.250mol)和5-硝基异苯并呋喃-1，3-二酮(48.28g，0.250mol)在乙酸(500mL)中制备标题化合物，获得所需产物的黄色固体，63.37g(0.234mol，94％)，mp173-174℃。对C₁₄H₆N₂O₄Cl₂的实验分析：计算值：C，64.86；H，4.08；N，9.45；实测值：C，64.87；H，3.74；N，9.39。

步骤B：制备5-氨基-2-(3，4-二甲基苯基)-异吲哚-1，3-二酮

采用实施例7步骤B的过程，由2-(3，4-二甲基苯基)-5-硝基-异吲哚-1，3-二酮(63.37g，0.213mol)，Ra-Ni(50g)DMF(1.0L)，MeOH(500mL)，在22-32℃(ΔP＝4.8psi)下制备标题化合物，获得所需产物的褐色固体，57.67g(0.217mol，100％)，mp215-218℃。对C₁₄H₈N₂O₂Cl₂·0.06mol H₂O的实验分析：C，71.87；H，5.32；N，10.48；实测值：C，71.49；H，5.17；N，10.49。步骤C：制备2-(3，4-二甲基苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基-胺

采用实施例7步骤C的过程，由5-氨基-2-(3，4-二甲基苯基)-异吲哚-1，3-二酮(7.5g，0.028mol)，AlCl₃(3.75g，0.028mol)，LiAlH₄(3.19g，0.084mol)在THF(725mL)中制备标题化合物，获得所需产物的浅褐色固体，4.69g(0.020mol，70％)，mp152-155℃。对C₁₄H₁₂N₂Cl₂·0.09mol H₂O的实验分析：C，80.09；H，7.64；N，11.67；实测值：C，79.72；H，7.45；N，11.49。步骤D2：制备2-[2-(3，4-二甲基苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨

基]苯甲酸

采用实施例7步骤D2的过程，由2-(3，4-二甲基苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基-胺(4g，0.017mol)，LHDMS(50.34mL，1M的THF溶液，50.34mmol)，2-氟-苯甲酸(2.35g，0.017mol)在THF(200mL)中制备标题化合物，获得所需产物的褐色固体，2.95g(0.008mol，49％)，mp198-202℃。对C₂₂H₁₇N₃O₅Cl₂·0.52mol H₂O的实验分析：C，75.11；H，6.31；N，7.62；实测值：C，74.73；H，6.02；N，7.75。

实施例10制备2-[2-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚5-基氨基]

苯甲酸步骤A：制备2-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-5-硝基-异吲哚-1，3-二酮

采用实施例7步骤A的过程，由5-氨基-2-氯三氯甲苯(48.89g，0.250mol)和5-硝基异苯并呋喃-1，3-二酮(48.28g，0.250mol)在乙酸(500mL)中制备标题化合物，获得所需的灰白色固体，84.4g(0.222mol，90％)，mp165-168℃。对C₁₄H₆N₂O₄Cl₂的实验分析：计算值：C，48.61；H，1.63；N，7.56；实测值：C，48.50；H，1.29；N，7.37。步骤B：制备5-氨基-2-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-异吲哚-1，3-二酮

采用实施例7步骤B的过程，由2-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-5-硝基-异吲哚-1，3-二酮(55.88g，0.150mol)，Ra-Ni(11.5g)DMF(1.0L)在27℃(ΔP＝4.5psi)下制备标题化合物，获得所需产物的黄色固体，56.60g(0.166mol，＞100％)，mp198-201℃。对C₁₄H₈N₂O₂Cl₂·0.42mol H₂O的实验分析：C，51.73；H，2.56；N，8.04；实测值：C，52.12；H，2.70；N，7.62。步骤C：制备2-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基-

胺

采用实施例7步骤C的过程，由5-氨基-2-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-异吲哚-1，3-二酮(7.5g，0.022mol)，AlCl₃(2.94g，0.022mol)，LiAlH₄(2.51g，0.066mol)在THF(700mL)中制备标题化合物，获得所需产物的黄色固体，5.78g(0.018mol，84％)，mp148-151℃。对C₁₄H₁₂N₂Cl₂·0.26mol H₂O的实验分析：C，56.76；H，3.98；N，8.83；实测值：C，56.42；H，3.79；N，8.43。步骤D2：制备2-[2-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚5-

基氨基]苯甲酸

采用实施例7步骤D2的过程，由2-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基-胺](1.75g，0.006mol)，LHDMS(16.80mL，1M的THF溶液，16.80mmol)，2-氟-苯甲酸(0.79g，0.006mol)在THF(200mL)中制备标题化合物，获得所需产物的褐色固体，0.690g(0.002mol，28％)，mp229-233℃。对C₂₂H₁₇N₃O₅Cl₂·0.47mol H₂O的实验分析：C，59.88；H，3.87；N，6.35；实测值：C，59.48；H，3.81；N，6.60。

实施例11制备2-[2-(3-氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-5-硝基-苯

甲酸

步骤D2：制备2-[2-(3-氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨

基]-5-硝基-苯甲酸

在-78℃下，向来自实施例7步骤C的2-(3-氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基-胺(2g，0.008mol)的THF(100mL)溶液中滴加入LHDMS(24.51mL，1M的THF溶液，24.15mmol)，并在-78℃下搅拌10分钟。滴加入2-氟-5-硝基-苯甲酸(1.51g，0.008mol)的THF(100mL)溶液，将溶液在-78℃下搅拌1小时，逐渐升温至室温，再搅拌16小时。将反应物浓缩，再用3M HCl(100mL)酸化。滤出形成的固体，用10％HCl酸化，然后真空干燥，获得一种褐色固体。将产物用MeOH和水进行重结晶，得到所需产物的褐色固体，0.250g(0.0006mmol，7.5％)，mp：在130℃下发生颜色变化，不会熔化＞260℃。对C₂₁H₁₆N₃O₄Cl·0.24mol H₂O的实验分析：C，60.90；H，4.01；N，10.15。实测值：C，60.91；H，4.01；N，9.75。

在上述实施例所述的一般方法制备下述化合物。

实施例12

2-[2-(3，4-二甲基-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-5-硝基-苯甲酸。mp＞280℃。对C₂₃H₂₁N₃O₄的实验分析：计算值：C，68.26；H，5.27；N，10.38；实测值：C，67.87；H，5.17；N，10.29。

实施例13

2-(2-苯基-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基)-苯甲酸。mp220-224℃。对C₂₁H₁₈N₂O₄的实验分析：计算值：C，75.97；H，5.52；N，8.44；实测值：C，75.59；H，5.70；N，8.40。

实施例14

2-[2-(3-氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-5-硝基-苯甲酸。mp＞260℃。对C₂₁H₁₆ClN₃的实验分析：计算值：C，60.90；H，4.01；N，10.15；实测值：C，60.91；H，4.01；N，9.75。

实施例15

2-[2-(4-氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-5-硝基-苯甲酸。mp＞275℃，MS410(MH⁺)。

实施例16

[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基]-[2-(1H-四唑-5-基)-苯基]-胺按照实施例4所述合成，采用四唑氟中间体，其是由商购的2-氟苯甲腈和叠氮化钠采用标准反应条件制得。mp203-208℃，MS423(M^-)。

实施例17

5-氨基-2-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-苯甲酸是由来自实施例5的硝基衍生物与氢气在雷内镍存在下反应制备的，mp242-244℃。对C₂₁H₁₇Cl₂N₃的实验分析：计算值：C，60.08；H，4.43；N，9.79；实测值：C，60.44；H，4.22；N，9.40。

实施例18

5-硝基-2-(2-苯基-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基)-苯甲酸。mp＞265℃。对C₂₁H₁₇N₃O₄的实验分析：计算值：C，67.19；H，4.56；N，11.19；实测值：C，66.98；H，4.30；N，10.86。

实施例19

2-[2-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-5-硝基-苯甲酸。mp＞260℃。对C₂₂H₁₅ClF₃的实验分析：计算值：C，51.55；H，3.71；N，8.20；实测值：C，51.15；H，3.41；N，8.17。

实施例20

2-[2-(3-氟-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-5-硝基-苯甲酸。mp＞265℃，MS392(M⁺)。

实施例21

2-[2-(3-甲氧基-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-5-硝基-苯甲酸。mp＞290℃。对C₂₂H₁₉N₃O₅的实验分析：计算值：C，64.52；H，4.91；N，10.12；实测值：C，64.84；H，4.90；N，9.72。

实施例22

2-[2-(3-氟-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-苯甲酸。MS349(M⁺)。对C₂₁H₁₇FN₂的实验分析：计算值：C，70.79；H，5.06；N，7.86；实测值：C，70.41；H，4.80；N，7.68。

实施例23

2-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-5-氟-苯甲酸。mp230-236℃，MS417(M⁺)。

实施例24

2-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-烟酸。mp213-225℃。C₂₀H₁₅Cl₂N₃实验分析：计算值：C，59.80；H，3.80；N，10.46；实测值：C，59.41；H，3.82；N，10.21。

实施例25

2-[2-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-苄腈。mp129-131℃。C₂₄H₂₃N₃O₃实验分析：计算值：C：71.80；H，5.77；N，10.47；实测值：C，72.09；H，5.64；N，10.23。

实施例26

2-[2-(3-甲氧基-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-苯甲酸。mp206-211℃。

通式I的本发明的化合物也可采用组合工艺过程制备。该过程可以少量地迅速合成用于实验目的的多种由通式I包括的类似物，然后，大多数有效的化合物可通过常规方法大量合成。例如，对于通式II的化合物来说，一种典型的组合合成工艺过程是使卤代的苯甲酸酯与胺异吲哚进行反应，形成相应的芳基氨基异吲哚，随后将其皂化成通式I的羧酸(例如，其中y为苯甲酸部分)。该反应按照下述在0.15mmol的规模下进行。将卤代的苯甲酸酯反应物(0.18M)的甲苯溶液放置在2个微量反应瓶中。将氨基异吲哚反应物溶解于无水甲苯中得到0.15M的溶液。采用Distriman移液管向每个微量反应瓶中加入1mL(0.15mmol，1当量)的卤代苯甲酸酯溶液，这些反应瓶中包含1mL(0.18mmol，1.2当量)的氨基异吲哚反应物。通过在甲苯中溶解0.025M的Pd₂(dba)₃(二钯-三二亚苄基丙酮)和0.075M的BINAP(2，2’-二(二苯基膦酰基)-1，1’-联萘)制得催化剂溶液，向每个反应瓶中加入0.25mL的催化剂溶液。再向每个反应瓶中加入一种碱，通常另入碳酸铯(68mg，0.21mmol，1.40当量)，将反应瓶盖上，放置在摇动烘箱中，并在100℃下加热48小时。然后，将反应混合物冷却，通过蒸发除去反应溶剂。将固体残余物悬于400μL的乙酸乙酯中，过滤除去所有的催化剂。将滤液经蒸发浓缩至干，得到通式I的化合物，其中，苯甲酸部分被酯化(如苄基或甲基酯)。将酯溶解于500μL的THF/乙醇(1∶1v/v)中，向其中加入300μL的5M氢氧化钠。将溶液在60℃下摇动5小时，然后冷却并通过蒸出溶剂而浓缩至干，得到所需的通式I的化合物。

按照如上所述的过程也可制备下述化合物：

2-(2-苯基-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基)-苯甲酸；

5-硝基-2-(2-苯基-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基)-苯甲酸；

2-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-苄腈；

[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基-]-(2-四唑-1-基-苯基)-胺；

{2-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-苯基}乙酸；

3-{2-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-苯基}-丙酸；

2-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-3-硝基-苯甲酸；

[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基-]-(2-四唑-1-基-甲基-苯基)-胺；

2-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-4-壬氧式-苯甲酸；

2-(2-联苯-4-基-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基)-5-硝基-苯甲酸；

2-[2-(3，4-二甲基-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-5-硝基-苯甲酸；

2-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-5-甲氧基-苯甲酸；

3-硝基-2-{2-[(4aS，8aR)-4-(八氢-异喹啉-2-基)-苯基]-2，3二氢-1H-异吲哚-5-基氨基}-苯甲酸；

2-{2-[(4aS，8aR)-4-(八氢-异喹啉-2-基)-苯基]-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基}-苯甲酸；

4-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-烟酸；

2-[2-(4-二丁基氨基-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]苯甲酸；

2-[2-(3-二丁基氨基-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-苯甲酸；

2-[2-(3-溴-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-苯甲酸；

2-[2-(2-氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-苯甲酸；

5-二丁基氨基-2-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-苯甲酸；

2-(2-联苯-4-基-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基)-苯甲酸；

2-[2-(3，4-二甲氧基-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-苯甲酸；

2-[2-(3，4-二羟基-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-苯甲酸；

2-[2-(3，4-二氟-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-苯甲酸；

2-[2-(3-氟-4-甲基-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]苯甲酸；

2-[2-(3，4，5-三羟基-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-苯甲酸；

2-[2-(4-甲基-3-三氟甲基-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-苯甲酸；

2-[2-(3，5-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-苯甲酸；

2-[2-(2，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-苯甲酸；或

2-[2-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5基氨基]-苯甲酸。

已在淀粉状蛋白研究的普通技术人员所常规采用的体内和体外测定标准中评估了式I化合物，其目的是评估该化合物在防止淀粉状蛋白形成及其聚集中的用途以及确定其在治疗与淀粉状蛋白有关的疾病如阿耳茨海默氏病中的潜在用途。以下的测定为良好建立的作为临床应用预测。

生物学实施例

淀粉状蛋白测定

BASSR(β-淀粉状蛋白自播种(self-seeding)放射测定)

测定自播种淀粉状蛋白原纤维生长抑制剂

材料：

储备液：

测定缓冲剂-50mM磷酸钠，pH 7.5，100mM NaCl，0.02％NaN₃，1M尿素(过滤并在4℃下贮存)。

在贮存1周以后，在去离子H₂O中的可溶Aβ(I-40)肽(Bachem，Torrance，CA)-2.2mg/mL(在-20℃下等分试样贮存，融化时保持在冰上)将自播种。一般应将该溶液贮存直至在该测定中没有观察到迟滞期。

在100％乙腈-0.1％三氟乙酸(TFA)-1％β-氢硫基乙醇中的¹²⁵I-标记的Aβ(1-40)-150K-350K cpm/μL(-20℃下等分试样贮存)。

可以根据H.LeVine，III在Neurobiol.Aging，16：755(1995)中提出的方法制备¹²⁵I-标记的Aβ(1-40)，本文引用其作为参考，或者这种反应剂可以从Amersham，Arlington Heights，IIIinois购得。

最终测定条件：每一测定在测定缓冲剂的去离子水中的30μM可溶Aβ(1-40)+20-50Kcpm¹²⁵I-标记的Aβ(1-40)。将用于测试的化合物溶于二甲基亚砜(DMSO)，一般5-50mM贮存物，使得在测定中的DMSO的最终浓度为＜1％v/v。

测定：用于50个测定(在冰上)的反应混合物包括0.1-0.2μL的¹²⁵I-标记的A¹²⁵I-标记的Aβ(1-40)+1μL可溶Aβ(1-40)+13.5μL测定缓冲剂每一测定。以下为足以用于50测定孔的反应混合物成分数量。

干燥过的5-10μL¹²⁵I-标记的Aβ(1-40)

675μL测定缓冲剂

50μL可溶Aβ(1-40)

测定方法

1)通过混合组分并在冰上贮存而制备反应混合物。

2)移取14.5μL的反应混合物至处在冰上的聚丙烯U底96-孔微滴平皿(Costar3794)的50孔中的每一孔。

3)将1.7μL的欲测试的稀释化合物到每一八柱孔中，包括溶剂对照。

在测定缓冲剂中从1mM连续3倍稀释(最终100μM)-尿素＝7稀释物+零。因此每个96-孔平皿可以容纳11份试样+1刚果红对照(在2-重步骤中最终0.039-5uM)。

4)用铝薄膜(Beckman538619)熔封该平皿并在冰上培养10分钟。

5)升高温度至37℃并培养3-5小时(取决于肽的批量)。

6)除去铝薄膜并加入200μL/孔的冰冷测定缓冲剂和尿素，通过96-孔平皿上的0.2μm孔大小的GVWP过滤器(Millipore MAGV N22，Bedford，MA)上的真空过滤收集放射标记的纤维。采用本领域技术人员已知的标准方法测定过滤器的放射性。

BASST(β-淀粉状蛋白自播种，硫黄素T(Thioflavin T))

测定自播种淀粉状蛋白原纤维生长抑制剂

方法：

材料：

储备液：

测定缓冲剂-50mM磷酸钠，pH7.5，100mM NaCl，0.02％NaN₃，1M尿素(过滤并在4℃下贮存)。

在贮存1周以后，在去离子H₂O中的可溶Aβ(I-40)肽-2.2mg/mL(在-20℃下等分试样贮存，融化时保持在冰上)将自播种。一般应将该溶液贮存直至在该测定中没有观察到迟滞期。

最终测定条件：在测定缓冲剂的去离子水中的30μM可溶Aβ(1-40)。将欲测试的化合物溶于DMSO，一般5-5mM贮存物，使得在该测定中DMSO的最终浓度为＜1％v/v。

测定：用于50个测定(在冰上)的反应混合物包括1μL可溶Aβ(1-40)+13.5μL测定缓冲剂每一测定。以下为用于50个测定孔的每一孔的反应混合物成分数量。

50μL可溶Aβ(1-40)

675μL测定缓冲剂

测定方法

1)通过混合组分并在冰上贮存而制备反应混合物。

2)移取14.5μL的反应混合物至处在冰上的聚丙烯U底96-孔微滴平皿(Corning25881-96)的50孔中的每一孔。

3)将1.7μL的欲测试的稀释化合物到每一八柱孔中，包括溶剂对照。在测定缓冲剂中从1mM连续3倍稀释(最终100μM)-尿素＝7稀释物+零。因此每个96-孔平皿可以容纳11份试样+1刚果红对照(在2-重步骤中最终0.039-5uM)。

4)用铝薄膜熔封该平皿并在冰上培养10分钟。

5)升高温度至37℃并培养3-5小时(取决于肽的批量)。

6)除去铝薄膜并加入250μL/孔的在50mM甘氨酸-NaOH，pH8.55μM中的硫黄素(ThT)[T-3516，Sigma-Aldrich]，5分钟内读取平皿阅读器上的荧光(ex＝440nm/20nm；em＝485nm/20nm)。

BAPA(β-淀粉状蛋白肽聚集)

该测定用于提供测定化合物对β淀粉状蛋白肽的聚集行为的抑制作用。

该测定的目的在于提供采用基于过滤的末端测定来测定β淀粉状蛋白聚集体的更高容量的方法。在该测定中，六氟异丙醇(HFIP)用于分解最初的淀粉状蛋白肽至单体状态并采用33pM的浓度，这种高浓度足以使在PH6.0下的聚集在数小时后发生。

方法：

6-淀粉状蛋白肽聚集，pH6.0(BAPA)

在96-孔平皿(Costar3794)中，加入25μl50mM磷酸盐缓冲剂，在20％HFIP中的pH6.0，10μL0.5mg/mL的Aβ(1-40)肽+0.1μL/测定放射碘处理的¹²⁵IAβ(1-40)[¹²⁵I Aβ(1-40)]和1μL起始于50mM的受试化合物和浓度＜1的DMSO。然后在室温下培养2-4小时。用200μl50mM的磷酸盐缓冲剂，PH6.0终止反应并通过0.2μm96-孔过滤平皿(Millipore MAGU N22)过滤。用100μl的相同磷酸盐缓冲剂洗涤该过滤平皿。在用Meltilex(1450-441)浸渗该过滤器后和校正背景后在Microbeta计数器上检测聚集

BATYM测定

方法：

所需的Aβ(1-42)(加利福尼亚肽)从它的六氟异丙醇(HFIP)储备液中干燥得到。将Aβ(1-42)溶于二甲基亚砜(DMSO)然后与磷酸盐缓冲盐水(PBS)(pH7.4)混合。通过0.2μM Omnipore膜注射过滤器(Millipore，Bedford，MA)过滤该混合的Aβ(1-42)溶液。将在DMSO中的受试化合物(50倍浓缩)置于96-孔平皿中的每一孔(0.5μL/孔)。将Aβ(1-42)溶液加到每一孔(24.5μL/孔)。在1,000g下将该平皿离心5分钟并在37℃培养1天(Aβ1-42；最终浓度100M)。

培养后，将在甘氨酸-NaOH缓冲剂(pH8.5，50mM)中的硫黄素T(ThT)(30μM)溶液加到每孔(250μL/孔)，采用荧光平皿阅读器测定荧光(ex.440/20nm；em485/20nm)。用下式计算抑制活性作为荧光的减少。

抑制作用(％)＝{(F(Aβ)-F(Aβ+化合物)}/{F(Aβ)-F(溶剂+化合物)}×100

通过采用以下方程式的曲线匹配程序计算IC₅₀(导致50％聚集抑制作用所需的受试化合物浓度)。数据来自三重实验中的两组不同实验。

抑制作用(×)＝100-100/{1+(x/IC₅₀)ⁿ}，

x＝受试化合物的浓度

IC₅₀＝(M)，

n＝Hill系数。

在前面的测定中，式I的代表性化合物已表现出约为1μM至大于100μM范围的抑制活性(IC₅₀)。这些对本发明的具体代表性化合物的测定的结果如以下表1所示。

表1

淀粉状蛋白抑制活性实施例 BASSR BASST BATYM BAPA号 IC₅₀μM IC₅₀μM IC₅₀μM IC₅₀μM1 5，6，10，5(P) 2，1.6(P) 11.3(P) 72

30，20(Q) 3，3(Q) 46.4(Q)

＞100，15(R) 15，15(R) 59.7(R)2 30，7.5，10 2，2，2 14.13 15，6.2，3.1，4，6，4.5， 3，2.1 17.4 64

10，124 12，11，11(P) 2，2，2(P) 26.1(P) 101(P)

15，15，15，(Q) 2(Q) 22.2(Q) ＞100，93(Q)5 5，4.1，3 3，3，3 11.46 7，7，12(P) 1(P) 13.5(P) 14

4，5(Q) 1.5(Q) 14.6(Q)7 90，80，＞100 1.1 37.3 288 ＞100，＞100 1 33.4 199 ＞100(ppt)，＞100 1.5 32.9 1310 100，58，55，70 3 34.6 1611 2.5，3.8，5.2，1.2(P) 0.8，1 12.6 ＞10012 ＞100(ppt) 1.1 11.7 513 ＞100(P) 1(P) 90.2，60(P) 4，21(P)

＞100(Q) 8(Q) ＞100(Q) 32(Q)

＞100(R) 30(R) ＞100(R) 11(R)

52(S) 4(S) 79.7(S)

60(T) 2(T) 83(T)14 2.5，1.2，3.8，5.2 0.8，1.0 12.6 ＞10015 ＞100，＞100 0.6 32.5 ＞10016 ＞100，＞100(ppt) 1.8 29.5 8617 20(ppt)，80 1.5 20 40

表1(续)实施例 BASSR BASST BATYM BAPA号 IC₅₀μM IC₅₀μM IC₅₀μM IC₅₀μM18 7(ppt)，4，5 0.9，1.0，0.6 16.6 9719 1.1(v-形) 1.0 12.8 ＞10

1(v-形)

1(v-形)20 ＞100 2 11.5 ＞6021 7，2.2，2.0 0.7 9.64 ＞6022 10，3，3，6.5，8 6，2 84 ＞6023 ＞100，50，70 3，2，2 34.1 6224 5，18，18 0.8，0.3，0.325 ＞100(ppt)，＞100，＞100 15 ＞100 2526 ＞100(ppt) 10 64.9 ＞60

特定数值后的括号内字母表示受试化合物的批量。例如，10(P)表示受试化合物来自批量P。如果没有指定批量，则该化合物的批量为批量P。P、Q、R、S和T为该化合物的不同批量。

本发明的化合物还在常用于评估药剂治疗与淀粉状蛋白聚集相关的疾病，特别是阿耳茨海默氏病和其它淀粉样变性的体内标准测定中表现出良好的活性。在一种测定中，通过皮下注射硝酸银、Freund’s完全佐剂和静脉内注射淀粉状蛋白增强因子而将淀粉状蛋白引到小鼠的脾上。每天给予硝酸银，经过11天。从第1天起至第11天每天给予小鼠受试化合物。在第12天将动物处死并除去脾脏，组织分离，用刚果红染色并用显微镜定量被双折射的刚果红染色的淀粉状蛋白所占据的脾脏百分区域。

另一种已评估本发明化合物的体内测定采用转基因小鼠。该小鼠携带人β-淀粉状蛋白前体蛋白转基因和启动子，如Hsiao等人所述，″转基因小鼠中的相关的记忆缺陷，Aβ升高，和淀粉状蛋白斑，″Science1966；274：99-102。这些转基因小鼠在约9月龄时产生β-淀粉状蛋白沉积物。到15个月时，扩散和紧凑的衰老斑丰富，主要存在于新皮质、嗅球和海马。让8月龄的小鼠口服发明化合物(刚好就在发生淀粉状蛋白沉积之前)，并持续数个月(直至约14-18个月)。处死动物并除去脑。组织学和生物化学定量脑中淀粉状蛋白的数量。

以上的数据表明代表性的本发明化合物在用于测定蛋白聚集抑制作用的标准测定中具有活性。该化合物表现出优良的特异性，如在BASST测定和BATYM以及BAPA测定中所示。因此这些化合物用于临床上抑制淀粉状蛋白的聚集和成像淀粉状蛋白沉积物以用于诊断。该化合物将以药物制剂的形式使用，以下的实施例例举了典型的组合物。

实施例27

片剂成分数量实施例1的化合物 50mg

乳糖 80mg玉米淀粉(用于混合) 10mg玉米淀粉(用于粘合) 8mg硬脂酸镁(1％) 2mg

150mg

将实施例1的化合物与乳糖和玉米淀粉(用于混合)混合，并混合均匀至散剂。将玉米淀粉(用于粘合)悬浮在6mL水中并搅拌加热形成糊剂。将该相加到该混合的散剂中并将该混合物制粒。将湿颗粒通过8号硬筛并在50℃下干燥。用硬脂酸镁润滑该混合物并压制成片剂。以1-4颗每天的速率将该片剂给予患者以预防淀粉状蛋白的聚集和治疗阿耳茨海默氏病。

实施例28

胃肠道外溶液

在700ml的丙二醇和200ml的注射用水溶液中加入20.0g的9号化合物。搅拌该混合物并用盐酸将PH调节至5.5。用注射用水将体积调节至1000ml。消毒该溶液，将其装填至5.0ml的安瓿中，每个安瓿含有2.0ml(40mg的8号化合物)并在氮下封口。将该溶液注射给予患有甲状腺髓癌和需要治疗的患者。

实施例29

贴剂

将10毫克的2-{4-[3-(3，4-二氯-苯基)丙基]苯基氨基}苯甲酸与1ml丙二醇和2μg含有树脂交联剂的基于丙烯酸的聚合物粘合剂混合。将该混合物用于非渗透性衬垫(30cm²)，并将其用于患者的上背以持续释放治疗淀粉状蛋白多神经病。

现在以如此完整、清楚、简明和确切的术语描述本发明及其制造与使用它的方式与方法以使任何属于本领域的技术人员制造和使用本发明。应该认识到，以上描述了本发明的优选实施方案，而在不背离权利要求所述的本发明的精神和范围的情况下可对本发明进行改动。为了特别指出和清楚地要求保护认为是本发明的主题，以下的权利要求概括了本说明书。

Claims

1.式I的化合物或其可药用盐：

其中

X为苯基或取代的苯基；

Y为苯基、取代的苯基、吡啶基或取代的吡啶基；

其中，取代的苯基和取代的吡啶基可具有1-4个取代基，每一个取代基彼此独立地选自-OC₁-C₁₂烷基、卤素、-C₁-C₆烷基、苯基、

-CO₂H，-CO₂R¹，-NO₂，-CF₃，-CN，-NR¹R²，-(CH₂)_nCO₂H，

-(CH₂)_nCO₂R¹，-SO₂NR¹R²，

四唑基、-(CH₂)_n-四唑基、十氢异喹啉基、咪唑基、-(CH₂)_n咪唑基、-CH＝CH-四唑基、-CH＝CH-咪唑基或苯基；

R¹和R²独立地为氢或C₁-C₆烷基；

每一个n独立地为0-5，包括0和5；

R″为氢、C₁-C₆烷基或苯基；和

R’为氢、C₁-C₆烷基、-CF₃或苯基。

2.根据权利要求1的化合物，其中

X为取代的苯基，而该取代的苯基具有1-3个取代基，取代基彼此独立地选自-OC₁-C₆烷基、卤素、C₁-C₆烷基、-CF₃或苯基。

3.根据权利要求1的化合物，其中

Y为取代的苯基，而该取代的苯基具有1-3个取代基，取代基彼此独立地选自-CO₂H、-NO₂、-OC₁-C₁₂烷基、-CN、四唑基、-(CH₂)_nCO₂H、-SO₂NR¹R²、-CF₃、咪唑基、-(CH₂)_n-四唑基、-(CH₂)_n咪唑基、-CH＝CH-四唑基或-CH＝CH-咪唑基。

4.根据权利要求1的化合物，其中

Y为取代的苯基，而该取代的苯基具有1-3个取代基，取代基之一选自-CO₂H。

5.根据权利要求4的化合物，其中基团-CO₂H位于苯环的2-位上。

6.根据权利要求2的化合物，其中取代的苯基具有两个氯取代基，它们位于苯环的3和4位上。

7.式I的化合物或其可药用盐：

其中

X为苯基或取代的苯基，其中，当X为取代的苯基时，该取代的苯基具有1-4个取代基，取代基彼此独立地选自-OC₁-C₆烷基、卤素、C₁-C₆烷基、-CF₃或苯基；

Y为苯基或取代的苯基，其中，当Y为取代的苯基时，该取代的苯基具有1-4个取代基，取代基彼此独立地选自-CO₂H、-NO₂、-OC₁-C₁₂烷基、-CN、-CF₃、-(CH₂)_nCO₂H、-SO₂NR¹R²、四唑基、-(CH₂)_n-四唑基、咪唑基、-(CH₂)_n咪唑基、-CH＝CH-四唑基或-CH＝CH-咪唑基；

R¹和R²独立地为氢或C₁-C₆烷基；和

每一个n独立地为0-5，包括0和5。

8.化合物：

2-[2-(2，3，4-三甲氧基-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-苯甲酸；

2-[2-(3，4-二氯苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]苯甲酸；

2-[2-(3，4-二氯苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-5-硝基-苯甲酸；

2-[2-(3-氯苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]苯甲酸；

2-[2-(4-氯苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]苯甲酸；

2-[2-(3，4-二甲基苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]苯甲酸；

2-[2-联苯-4-基-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]苯甲酸；或

2-[2-(3-氯苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-5-硝基-苯甲酸。

9.化合物：

2-(2-苯基-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基)-苯甲酸；

5-硝基-2-(2-苯基-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基)-苯甲酸；

2-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-苄腈；

{2-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]苯基}-乙酸；

4-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]间苯二甲酸；

3-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]邻苯二甲酸；

[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基-]-(2四唑-1-基-甲基-苯基)-胺；

2-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-5-甲基-苯甲酸；或

2-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-3-甲基-苯甲酸。

10.化合物：

3-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-2-甲基-苯甲酸；

2-(2-联苯-4-基-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基)-5-硝基-苯甲酸；或

2-[2-(3，4-二甲基-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-5-硝基-苯甲酸。

11.化合物：

2-(2-苯基-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基)-苯甲酸；

2-[2-(3-氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-5-硝基-苯甲酸；

[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基]-[2-(1H-四唑-5-基)-苯基]-胺；

5-氨基-2-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-苯甲酸；

5-硝基-2-(2-苯基-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基)-苯甲酸；

2-[2-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基-氨基]-5-硝基-苯甲酸；

2-[2-(3-氟-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-5-硝基-苯甲酸；

2-[2-(3-甲氧基-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-5-硝基-苯甲酸；

2-[2-(3-氟-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-苯甲酸；

2-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-5-氟-苯甲酸；和

2-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-烟酸。

12.化合物：

3-硝基-2-{2-[(4aS，8aR)-4-(八氢-异喹啉-2-基)-苯基]-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基}-苯甲酸；

4-[2-(3，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-烟酸；

2-[2-(4-二丁基氨基-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-苯甲酸；

2-[2-(3-溴-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-苯甲酸；

2-[2-(2-氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]苯甲酸；

2-(2-联苯-4-基-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基)-苯甲酸；

2-[2-(3，4-二氟-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-苯甲酸；

2-[2-(3-氟-4-甲基-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-苯甲酸；

2-[2-(3，5-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-苯甲酸；

2-[2-(2，4-二氯-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-苯甲酸；

2-[2-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-苯甲酸；

2-[2-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-苄腈；或

2-[2-(3-甲氧基-苯基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-苯甲酸。

13.一种药物组合物，其包含权利要求1的化合物和其可药用载体、稀释剂或赋形剂。

14.一种治疗早老性痴呆的方法，该方法包括向患有早老性痴呆的患者给药治疗有效量的权利要求1的化合物。

15.一种抑制淀粉样蛋白聚集形成淀粉样蛋白沉积物的方法，该方法包括向需要抑制淀粉样蛋白聚集的患者给药淀粉样蛋白聚集抑制量的权利要求1的化合物。

16.一种淀粉样蛋白沉积物的成像方法，该方法包括如下步骤：

a.向患者引入可检测量的标记的通式I的化合物或其可药用盐

其中

X为苯基或取代的苯基；

Y为苯基、取代的苯基、吡啶基或取代的吡啶基；其中，取代的苯基和取代的吡啶基可具有1-4个取代基，每一个取代基彼此独立地选自-OC₁-C₁₂烷基、卤素、-C₁-C₆烷基、苯基、-CO₂H，-CO₂R¹，-NO₂，-CF₃，-CN，

-(CH₂)_nCO₂R¹，-SO₂NR¹R²，

四唑基、-(CH₂)_n-四唑基、十氢异喹啉基、咪唑基、-(CH₂)_n咪唑基、-CH＝CH-四唑基、苯基或-CH＝CH-咪唑基；

R¹和R²独立地为氢或C₁-C₆烷基；和

每一个n独立地为0-5，包括0和5；

R″为氢、C₁-C₆烷基或苯基；和

R’为氢、C₁-C₆烷基、-CF₃或苯基；

b.使标记的化合物有足够的时间与淀粉样蛋白沉积物缔合；和

c.对与淀粉样蛋白沉积物缔合的标记的化合物进行检测。

17.根据权利要求16的方法，其中所述患者患有或怀疑患有早老性痴呆。

18.根据权利要求16的方法，其中标记的化合物为放射性标记的化合物。

19.根据权利要求16的方法，其中标记的化合物采用MRI进行检测。