CN1327069A - 动物骨髓及组织提取骨髓氨基酸多肽生产工艺 - Google Patents
动物骨髓及组织提取骨髓氨基酸多肽生产工艺 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种动物骨髓及组织提取骨髓氨基酸多肽生产工艺。工艺为:取动物骨清洗破碎;进行脱臭、脱腥处理;蒸煮;在PH4－5的条件下进行酸水解;在PH3.5－5.5,温度35－55℃的条件下,通过胰蛋白酶和木瓜酶进行酶解;过滤取液体进行浓缩为流浸膏;将流浸膏喷雾干燥。该工艺简单易操作。所生产的骨髓氨基酸多肽具有提高机体免疫能力的功效。
Description
本发明属于动物骨髓提取骨髓氨基酸多肽生产工艺，具体以鲜牛骨、鲜羊骨等动物骨头混合提取骨髓氨基酸的方法。
骨髓多肽对人体细胞免疫功能具有促进作用早已有文献记载，但目前尚未文献公开利用鲜牛骨、鲜羊等动物骨头混合提取骨髓氨基酸的方法。
本发明的目的在于提供一种以鲜牛骨、鲜羊骨等动物骨头混合提取骨髓氨基酸的生产工艺。
本发明之工艺如下：
1)取鲜牛骨或鲜牛骨及组织、鲜羊骨或鲜羊骨及组织、鲜骆驼骨或鲜骆驼骨及组织清洗破碎；
2)对破碎后的动物骨进行脱臭、脱腥处理；
3)蒸煮破碎后的动物骨；
4)在PH4—5的条件下进行酸水解；
5)在PH3.5—5.5，温度35—55℃的条件下，通过胰蛋白酶和木瓜酶进行酶解；
6)过滤取液体进行浓缩为浓缩液；
7)将浓缩液喷雾干燥成粉末。
在取动物骨时，还可以取鲜银狐骨或鲜银狐骨及组织和鲜梅花鹿骨或鲜梅花鹿骨及组织，骨头可覆盖一些组织，选取各动物骨及组织的重量份为：鲜牛骨及组织：鲜羊骨及组织：鲜骆驼骨及组织：鲜银狐骨及组织：鲜梅花鹿骨及组织＝70—80∶20—30∶1—2∶0—1∶0—1。
在工艺过程中胰蛋白酸和木瓜酶的重量比为2∶0.5，酶的用量为底物重量的1—2‰，酶解时间为8—10小时。
实施例1：
取鲜牛骨及组织，鲜羊骨及组织，鲜骆驼骨及组织，鲜银狐骨及组织，鲜梅花鹿骨及组织，重量份比为75∶25∶1∶1∶1按以上工艺，制得干粉末，取样，利用高效液相色谱，依据紫外吸收光谱分析通则，分析测试其中骨髓多肽含量为0.38mg/mg。
实施例2：
鲜牛骨及组织，鲜羊骨及组织，鲜骆驼骨及组织，重量分比为80∶28∶2，按以上工艺，制得干粉末，取样，利用高效液相色谱，依据紫外吸收光谱分析通则分析测试其中骨髓多肽含量为0.29mg/mg。
以上产品依据GB4789、2—5、10、11、15—94进行食品卫生检验，结果如下：砷(以As计，mg/mg)0.16，铅(以Pb计，mg/kg)0.30，细菌总数(个/g)1.8×103，大肠菌群(个/100g)＜30，霉菌(个/g)＜10，酵母(个/g)＜10，致病毒未检出。符号GB16740-1997保健(功能)食品通用标准。
利用日立835 50 AA仪J AICP9000，依据Z/NSJ001-1997对产品中的微量元素的含量进行检测，结果如下：微量元素含量的单位mg/kg，磷415，铁260，钙211，镁88.1，锰1.50，铜1.31，锌9.6，硅216，钾3356，铝18.2，硼3.40，锶0.07，锂0.61，铬0.42，钠(％)1.44。依据GB/T14965-94对氨基酸的含量进行检测，结果如下：天冬氨酸：5.01％苏氨酸：1.76％丝氨酸：2.47％谷氨酸：11.68％甘氨酸：18.28％丙氨酸：8.30％胱氨酸：0.92％颉氨酸：3.19％蛋氨酸：1.46％异亮氨酸：1.80％亮氨酸：4.00％酪氨酸：0.78％苯丙氨酸：2.73％赖氨酸：3.43％组氨酸：0.87％精氨酸：7.51％脯氨酸：10.86％γ氨基丁酸：0.68％鸟氨酸：0.31％羟基脯氨酸：10.15％。
1、以上产品进行毒性试验。
1急性毒性实验：
1.1试验动物：昆明种小鼠，18-20g，雌雄各10只。
1.2试验方法：取受试物30g。用蒸馏水配成150ml均匀混悬液，按0.3m1/10g.bw经口灌胃，灌胃前停食16h，每三小时灌胃一次，连续给予三次，累计为0.9ml/10g.bW，含固形物重为0.18g，即18g/kg.bw，观察一周，并记录动物中毒症状及死亡情况。结果见表1：
表1小鼠急性毒性试验结果
| 性别 | 剂量(g/kg.bw) | 动物数(只) | 动物体重变化 | 死亡动物数(只) | 中毒反应 | |
| 初重 | 终重 | |||||
| 雄 | 18 | 10 | 20.5±0.8 | 25.4±0.7 | 0 | 一周内受试动物未出现任何中毒症状 |
| 雌 | 18 | 10 | 18.5±0.6 | 23.9±0.4 | 0 | |
1.3结论：一周内动物未见明显中毒症状及死亡发生，LD50＞18g/kg。按急性毒性分级，该受试物属无毒级类物质。
2.微核实验：
2.1试验动物：昆明种小鼠，24—26g，雌雄各30只。
2.2试验方法：动物按体重随机分成6组，A组为阴性对照组，F组为环磷酰胺阳性对照组，另设四个试验剂量组。试验组剂量分别为2.0、4.0、6.0、8.0g/kg.bw。每只动物经口灌胃给予受试物。两次灌胃间隔24小时，第二次灌胃6小时后，处死动物，取胸骨骨髓涂片，Giemsa染色。每只动物油镜下观察1000个嗜多染红细胞，结果如下：
表2微核试验观察结果(X±S)
| 组别 | 剂量(g/kg.bw) | 动物数(只) | 观察细胞数(个) | 出现微核细胞数(个) | 微核形成率(‰) | ||||
| 雌 | 雄 | 雌 | 雄 | 雌 | 雄 | 雌 | 雄 | ||
| ABCDEF | 02.04.06.08.00.06g/kg | 555555 | 555555 | 5×10005×10005×10005×10005×10005×1000 | 5×10005×10005×10005×10005×10005×1000 | 1013101312151 | 9812138146 | 2.0±0.62.6±1.12.0±0.92.6±1.22.4±0.930.2±6.1 | 1.8±0.81.6±0.52.4±0.92.6±0.91.6±0.429.2±8.9 |
2.3结论：各实验纽与阴性对照组结果比较，差异无显著必性；表明受试物骨髓微核试验结果为阴性。
3.小鼠精子畸形试验：
3.1试验动物：昆明种雄性小鼠，23—25g，共30只。
3.2试验方法：动物按体重随机分成5组，A组为阴性对照组，E组为环磷酰胺阳性对照组，B、C、D组为试验组。试验组剂量分别为5.0、10.0、15.0g/kg.bw。动物连续灌胃五天后，再继续喂养30天，处死动物，取两侧副睾涂片，伊红染色。每只动物高倍镜下观察1000个精子，记录畸形精子数。结果见表3
表3小鼠精子畸形试验结果(x±s)
| 组别 | 剂量(g/kg.bw) | 动物数(只) | 观察精子数(个) | 畸形精子数(个) | 精子畸形率(％) |
| ABCDE | 05.010.015.00.04g/kg | 66666 | 6×10006×10006×10006×10006×1000 | 116148157155543 | 1.9±0.52.4±0.52.6±0.32.6±0.69.0±1.2 |
3.3结论：各实验组与阴性对照组结果比较，差异无显著性，表明该受试物精子畸形试验结果为阴性。
4.Ames试验：
4.1试验菌珠：采用经鉴定符合生物学要求的鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102四株菌株进行试验。
4.2试验方法：采用多氯联苯(PCB)诱导的大鼠肝匀浆作为体外活化系统(+S9)。受试物分为五个剂量组，每皿加入量0.2mL含2、8、40、200、500ug受试物(以固形物计)分别作为各剂量组，0.103Mpa、20min灭菌处理。同时设置空白及阳性对照组。采用平板掺入法记录二次重复的平行样品结果。
表4Ames试验结果(个/皿，x±s)
| 剂 | 回变菌落数 | ||||||||
| 组别量 | -S9 | +S9 | |||||||
| (ug/皿) | TA97 | TA98 | TA100 | TA102 | TA97 | TA98 | TA100 | TA102 | |
| 自发回变剂量组阳性对照 | 028402005000注 | 94±7135±24120±10137±6137±18154±26＞6000 | 30±441±848±1040±446±1043±12＞6000 | 113±7134±14141±9141±14173±19176±7432±50 | 238±21269±18262±12271±22275±22298±111086±294 | 104±7142±8131±14141±30142±12142±191826±173 | 32±6.838±5.737±6.034±1041±8.441±5.0＞5000 | 119±8.7145±16.0134±10.0153±18.0140±10.3182±10.0＞3000 | 242±10.0272±11.0266±8.30288±21.0271±22.0286±281305±277 |
注：-S9阳性对照组TA97、98、100为2、4、7-TNFone，加入量为0.3ug/皿，TA102
阳性物为敌克松，加入量为50ug/皿。
+S9阳性对照组TA97、98、100为2-AF，加入量为20ug/皿，TA102阳性物
为1、8一二羟基蒽醌，加入量为50ug/皿。
4.3结论：受试物各组回变菌落数均未超过自发回变数2倍，且无剂量反应关系，故Ames试验结果为阴性。
5.30天喂养试验
5.1动物品种：Wistar大鼠，共80只，体重75-90g，雌雄各半。
5.2剂量与分组：设三个剂量组和一个对照组，每组20只动物，雌雄各半。按人群推荐日摄入量0.1g/kg.bw扩大20、50、100倍分别作为低、中、高剂量组，相应实际剂量为2.0、5.0、10.0g/kg.bw。受试物给予途径按1.5ml/100gbw经口灌胃，连续给予30天，对照组同时给予等量蒸馏水。然后按试验要求测定有关的指标。
5.3观察指标：
5.3.1临床检查：包括一般表现、行为、中毒及死亡情况，记录各组动物每周体重和进食量，计算食物利用率。
5.3.2血液学检查：连续给予30天后，测定后组动物血红蛋白(Hb)含量、红细胞(RBC)计数、白细胞(WBC)计数及分类、血小板(PLT)计数、网织红细胞数除网织红细胞为试管色法涂片计数外，其余指标均采用日本产SYSMEXTMF820型自动血球计数仪测定。
5.3.3血液生化学检查：连续给予30天后，测定各组动物血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、尿素氮(BUN)、葡萄糖(Glu)、肌酐(Cre)、总胆固醇(T.C)含量及白蛋白/球蛋白(Alb/Glo)比值。除葡萄糖采用美国Johnson公司产ONE TOUCHTM血糖分析仪快速纸片法测定外，其余指标均采用德国产eppendorTMECOM-F 6124型自动化分析仪、北京中生生物高技术公司生产的相应试剂盒测定。
5.3.4称取各组动物主要脏器重量并计算脏器系数。
5.3.5病理组织学检查：对各组动物进行大体解剖检查，并对心、肝、脾、肺、肾等主要脏器进行病理组织学检查。
5.4试验结果：
5.4.1临床检查：试验中各剂量动物无中毒症状。体重及食物利用率结果见表5。
表中可见各剂量组动物及食物利用率与对照组比较，经统计学分析差异无显著性。
表5受试物对大鼠体重及食物利用率的影响(x±s)
| 剂 量(g/kg.bw) | 动物数(只) | 体重(g) | 食物利用率(％) | ||||
| 初重 | 第一周 | 第二周 | 第三周 | 终重 | |||
| ♀对照组2.05.010.0♂对照组2.05.010.0 | 1010101010101010 | 77.2±8.375.3±8.783.2±4.778.2±6.487.3±3.278.5±4.787.1±3.086.5±3.2 | 114.7±11110.4±8.9120.4±3.1107.0±11118.0±8.7128.0±5.5116.0±4.5115.3±7.0 | 155.0±23142.0±7.2155.0±13131.3±18145.0±8.1155.3±8.7140.4±6.5145.6±10 | 188.0±18.4182.0±7.9178.0±18.4165.4±19.7191.0±11.0183.0±8.8175.0±13181.0±13 | 199.3±15.7214.3±10.0206.0±13.5195.9±14.4229.0±8.0217.0±7.0227.0±16.0227.4±23.2 | 21.822.422.021.922.623.523.922.4 |
5.4.2血液学检查：各组随机抽取部分动物测定血液指标，结果见表6.1、6.2。从表中可知，各项指标测定结果与对照组比较，经统计学分析差异无显著性。所有血液学指标测定结果均在正常范围内。
表6.1受试物对大鼠血液学指标的影响(x±s)
| 剂量(g/kg.bw) | 动物数(只) | Hb含量(g/L) | RBC计数(X1012个/L) | WBC计数(X109个/L) | PLT计数(X109个/L) |
| 对照组2.05.010.0 | 10101010 | 131.0±8.1132.6±11.3137.3±0.3126.2±18.0 | 8.16±0.838.44±0.408.38±0.398.19±0.94 | 18.2±3.619.9±4.618.0±2.218.0±4.7 | 895.6±187.5916.4±241.9921.3±16.5876.8±184.6 |
表6.2受试物对大鼠血液学指标的影响(x±s)
| 剂量(g/kg.bw) | 动物数(只) | WBC分类(％) | 观察红细胞数(个) | 网织红细胞数(个) | 网织红出现率(％) | |
| 淋巴及单核 | 粒细胞 | |||||
| 对照组2.05.010.0 | 10101010 | 68.2±1.1068.0±1.0572.1±1.372.5±3.5 | 31.8±1.132.0±1.127.9±1327.5±3.5 | 10×100010×100010×100010×1000 | 280287290286 | 2.802.872.902.86 |
5.4.3血液生化学检查：各组随机抽取部分动物测定血液生化学指标，结果见表7.1、7.2。从表中可知，各项指标测定结果与对照组比较，经统计学分析差异无显著性。
表7.1受试物对大鼠血液生化学指标的影响(x±s)
| 剂量(g/kg.bw) | 动物数(只) | ALT(U/L) | AST(U/L) | BUN(mmol/L) | T.C(mmol/L) |
| 对照组2.05.010.0 | 10101010 | 94.8±29.498.7±21.195.5±39.2110.3±21.4 | 270.1±36.7281.4±79.2242.1±40.4276.3±70.2 | 16.9±11.19.86±3.578.95±4.568.16±1.41 | 2.81±0.693.21±0.423.46±0.632.98±0.66 |
表7.2受试物对大鼠血液生化学指标的影响(x±s)
| 剂量(g/kg.bw) | 动物数(只) | Are(umol/L) | Alu(mmol/L) | Alb/Glo |
| 对照组2.05.010.0 | 10101010 | 86.8±21.683.5±34.694.6±10.187.5±11.6 | 2.91±0.552.87±0.432.80±0.292.63±0.18 | 0.78±0.190.75±0.060.55±0.380.70±0.08 |
5.4.4脏器重量及系数：称取各组动物心、肝、脾、肺、肾主要脏器重量埋头苦干计算脏器系数，结果见表8.1、8.2。从表中可知，各剂量组各项指标测定结果，与对照组比较，经统计学分析差异无显著性。
表8.1受试物大鼠脏器重量及系数的影响(X±S)
| 剂 量(g/kg.bw) | 动物数(只) | 心 脏 | 肝 脏 | 食物利用率 | |||
| 重量(g) | 系数(％) | 重量(g) | 系数(％) | 重量(g) | 系数(％) | ||
| ♀对照组2.05.010.0♂对照组2.05.010.0 | 1010101010101010 | 0.69±0.060.76±0.060.74±0.030.75±0.020.86±0.130.87±0.110.89±0.100.85±0.09 | 0.35±0.260.35±0.090.36±0.060.38±0.040.38±0.070.40±0.090.39±0.060.37±0.04 | 7.9±1.218.6±1.087.6±0.098.1±0.079.15±0.1310.9±0.2110.1±0.1511.0±0.25 | 3.94±1.184.03±1.053.68±0.084.13±0.064.00±0.155.02±0.134.50±0.114.84±0.15 | 0.51±0.130.56±0.090.54±0.060.52±0.040.63±0.020.65±0.030.68±0.040.66±0.04 | 0.25±0.830.26±0.050.26±0.030.27±0.030.28±0.050.30±0.040.30±0.020.29±0.07 |
表8.2受试物大鼠脏器重量及系数的影响(X±S)
| 剂 量(g/kg.bw) | 动物数(只) | 肺 脏 | 肾 脏 | ||
| 重量(g) | 系数(％) | 重量(g) | 系数(％) | ||
| ♀对照组2.05.010.0♂对照组2.05.010.0 | 1010101010101010 | 1.43±0.151.54±0.321.26±0.191.40±0.261.48±0.231.68±0.151.56±0.091.56±0.08 | 0.72±0.050.75±0.030.71±0.060.71±0.030.65±0.050.77±0.010.69±0.040.69±0.08 | 1.48±0.251.67±0.081.61±0.051.62±0.031.79±0.021.81±0.111.73±0.071.81±0.06 | 0.74±0.110.81±0.040.80±0.080.83±0.070.78±0.090.83±0.080.76±0.050.80±0.04 |
5.4.5病理组织学检查结果：对部分动物心、肝、脾、肺、肾、肾上腺等脏器进行大体解剖观察和病理组织切片，除少量动物肺组织呈现大鼠肺炎图像外，其余脏器未见明显中毒性病理改变。
由以上实验得知，本发明之工艺生产出的骨髓氨基酸多肽对两种性别昆明种小鼠经口毒性，累计三次经口灌胃总量为18g/kg.bw，一周内动物未见明显中毒症状，也无动物死亡。按急性毒性分级，该受试物属无毒级类物质。三项致突变试验(小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、Ames试验)结果均为阴性。30天喂养试验结果表明：该受试物2.0、5.0、10.0g/kg.bw剂量(相当于人群日推荐摄入量6g/60kg.bw的20、50、100倍)，对Wistar大鼠的临床检查(含体重增加和食物利用率)、血液学检查、血液生化学检查、主要脏器重量及脏器系数和病理组织学检查均无明显毒性影响。
二、以上产品进行免疫性实验：
1.样品给予途径：将样品用无菌蒸馏水配成相应浓度，各组小鼠每天经口灌服相应剂量，连续给予一个月后进行以下试验工作。正常对照组灌服普通自来水。
2.动物：昆明种雄性小鼠，18—22g。湖北省医学实验动物中心提供。动物批准号为鄂动医管字19-007。
3.分组：按生产厂家推荐人群日饮用6g/60kg.bw，扩大10、20、30倍，设计低、中、高三个剂量组，即1、2、3g/kg.bw。
4.试验方法与结果：
4.1试验前后动物体重记录：见表1.各组动物间体重无明显差异。
表1试验前后动物体重记录(克，X±S)
| 组 别 | 剂量(g/kg.bw) | 动物数(只) | 体 重(克) | 增重(克) | |
| 试验前 | 试验后 | ||||
| 空 白 组低剂量组中剂量组高剂量组 | 0123 | 10101010 | 19.2±1.919.5±1.419.4±1.719.3±1.4 | 39.1±2.139.9±1.639.8±1.839.6±1.6 | 19.9±1.020.4±0.820.4±0.520.3±0.4 |
4.2对动物淋巴器官/体重比值的影响：见表2，各组动物间胸腺体重比和脾脏/体重比值无明显差异。
表2对动物沐巴器官/体重比值的影响(X±S)
| 组 别 | 剂量(g/kg.bw) | 动物数(只) | 胸腺/体重比值(X10-3) | 脾脏/体重比值(X10-3) |
| 空 白 组低剂量组中剂量组高剂量组 | 0123 | 10101010 | 2.42±0.142.45±0.152.41±0.162.43±0.19 | 3.26±0.133.28±0.113.26±0.113.29±0.13 |
4.3 CouA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验
方法：MTT法(步骤同功能实验程序规定)
结果：见表3，从表3可见，与空白组比较，本产品中、高剂量组显性增强ConA诱导的脾淋巴细胞增殖能力。
表3对小鼠细胞免疫功能影响
| 组 别 | 剂量(g/kg.bw) | ConA诱导脾淋巴细胞增殖 | DNFB诱导DTH | ||
| N | OD差值 | N | 左右耳重量量差(mg) | ||
| 空 白 组低剂量组中剂量组高剂量组 | 0123 | 10101010 | 0.012±0.0030.019±0.006#0.028±0.009*0.033±0.12* | 10101010 | 17.6±2.620.9±1.9*21.9±2.7*24.1±2.8* |
与空白组比较*P＜0.01 #0.01＜P＜0.05
注：取0.1ml测定OD570值
4.4二硝基氟苯(DNFB)诱导迟发型变态反应(DTH)
方法：耳肿胀法。用DNFB致敏小鼠后，第5天再用NDFB攻击右耳，24h后处死动物剪下左右耳壳用打孔器取下直径8mm的耳片，称重，以左右耳的重之差来表示DTH的程度。
结果：见表3，从表3可见：与空白组比较，本产品低、中、高剂量组显著性增强小鼠对DNFB诱发的DTH反应。
4.5血清溶血素的测定
方法：血凝法。按照功能实验程序操作，根据血清凝聚程度的级别计算出抗体积数。
结果：从表4可见，本发明生产的产品高剂量组可显著性升高血清溶血素含量。
表4对小鼠体液免疫功能的影响
| 组 别 | 剂量(g/kg.bw) | 动物数(只) | 血清溶血素(抗体积数) |
| 空 白 组低剂量组中剂量组高剂量组 | 0123 | 10101010 | 72.6±16.736.0±26.799.0±26.4#115.8±24.2* |
与空白组比较*P＜0.01#0.01＜P＜0.05
4.6腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验
方法：半体内法。制血20％的鸡红细胞悬液；每只鼠腹腔注射1mL该悬液，30min后处死动物，将其仰立固定于鼠板上，开腹，经腹腔注入生理盐水2mL，转动鼠1min，然后，吸出腹腔洗液1mL，平均分滴于2片载玻片上，37℃温育30min育毕用生理盐水漂洗，凉干，以1∶1的丙酮甲醇溶液固定，4％Giemsa-磷酸缓冲液染色3min，再用蒸馏水漂洗晾干。油镜下计数100个巨噬细胞，按下式计算吞噬率和吞噬指数：
结果：见表5，从表5可见，本产品低中、高剂量吞噬百分数、吞噬指数均明显高于空白对照组。
表5对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响
与空白组比较*P＜0.01
| 组 别 | 剂量(g/kg.bw) | 动物数(只) | 吞噬百分率(％) | 吞噬指数 |
| 空 白 组低剂量组中剂量组高剂量组 | 0123 | 10101010 | 38.3±3.744.3±3.0*49.5±2.2*52.0±2.5* | 0.413±0.040.482±0.03*0.529±0.02*0.558±0.03* |
4.7小鼠碳廓清试验
方法：依程序规定的方法。根据注入墨汁2min、10min后血中碳浓度(测吸光值)，计算出各组小鼠的吞噬指数。
结果：见表6，从表6可见，本发明生产的产品低、中、高剂量组可显著性提高小鼠碳廓清吞噬指数。
表6对小鼠碳廓清功能的影响
| 组 别 | 剂量(g/kg.bw) | 动物数(只) | 吞噬指数 |
| 空 白 组低剂量组中剂量组高剂量组 | 0123 | 10101010 | 4.088±0.24.708±0.3*5.053±0.4*5.255±0.6* |
与空白组比较 *P＜0.01
4.8抗体生成细胞检测
方法：改良Jerne玻片法(略)。
结果：见表7，从表7可见，中、高剂量组均明显高于正常对照组，经统计分析差异有显著性(p＜0.01)。
表7对抗体生成细胞功能的影响
| 组 别 | 剂量(g/kg.bw) | 动物数(只) | 溶血空斑数(/102脾细胞) |
| 空 白 组低剂量组中剂量组高剂量组 | 0123 | 10101010 | 441±33.6478±29.3#517±12.7*534±28.44* |
以上试验结果表明：与空白组比较，1)中、高剂量组能明显增强ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖能力；2)低、中、高剂量组能明显增强二硝基氟苯诱导的小鼠迟发型变态反应；3)中、高剂量组能明显升高小鼠血清溶血素含量；4)低、中、高剂量组能明显增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞功能；5)低、中、高剂量组能明显增强小鼠碳廓清能力；6)中、高剂量组能明显增强抗体生成细胞能力。按照免疫调节作用评价程序规定，该受试物具有免疫调节作用。
Claims (6)
1、一种动物骨髓及组织提取骨髓氨基酸多肽生产工艺，其特征工艺为：
1)取鲜牛骨或鲜牛骨及组织、鲜羊骨或鲜羊骨及组织、
鲜骆驼骨或鲜骆驼骨及组织清洗破碎；
2)对破碎后的动物骨进行脱臭、脱腥处理；
3)蒸煮破碎后的动物骨；
4)在PH4-5的条件下进行酸水解；
5)在PH3.5-5.5，温度35-55℃的条件下，通过胰蛋白酶
和木瓜酶进行酶解；
6)过滤取液体进行浓缩为浓缩液；
7)将浓缩液喷雾干燥。
2、如权利要求1所述动物骨髓及组织提取骨髓氨基酸多肽生产工艺，其特征在于取得动物骨还有鲜银狐骨或鲜银狐骨及组织，鲜梅花鹿骨或鲜梅花鹿骨及组织。
3、如权利要求1或2所述动物骨髓及组织提取骨髓氨基酸多肽生产工艺，其特征在于动物骨上覆组织，各动物骨及组织的重量份为：鲜牛骨及组织：鲜羊骨及组织：鲜骆驼骨及组织：鲜银狐骨及组织：鲜梅花鹿骨及组织＝70—80∶20—30∶1—2∶0—1∶0—1。
4、如权利要求1所述动物骨髓及组织提取骨髓氨基酸多肽生产工艺，其特征在于胰蛋白酶和木瓜酶的重量比为2∶0.5。
5、如权利要求4所述动物骨髓及组织提取骨髓氨基酸多肽生产工艺，其特征在于酶的用量为底物重量的1-2‰。
6、如权利要求1或4或5所述动物骨髓及组织提取骨髓氨基酸多肽生产工艺，其特征在于酶解时间为8-10小时。
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