CN1304038C - 一种治疗阴道炎的药物组合物及其制备和质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种治疗萎缩性阴道炎的药物组合物及其制备方法和质量控制方法。该组合物是由如下原料药制成的：淫羊藿330-420重量份，蛇床子220-280重量份，赤芍220-280重量份，黄柏220-280重量份，重楼220-280重量份，甘草220-280重量份，白花蛇舌草20-280重量份和大黄110-140重量份；本发明同时公开该组合物的栓剂的制备方法、质量控制方法及其在制备治疗萎缩性阴道炎的药物中的应用。

Description

一种治疗阴道炎的药物组合物及其制备和质量控制方法

发明领域

本发明涉及一种药物组合物及其制备方法、质量控制方法，特别涉及一种治疗萎缩性阴道炎的药物组合物及其制备方法和质量控制方法。

背景技术

妇女开始进入更年期时，最早的变化是卵巢功能衰退，雌激素水平下降，随之而产生各种临床症状。生殖系统表现为，阴道壁萎缩，粘膜变薄，上皮细胞内糖原含量减少，阴道内pH值上升局部抵抗力降低，致病菌容易入侵繁殖引起炎症，即萎缩性阴道炎，又称老年性阴道炎。

由于萎缩性阴道炎是雌激素水平下降所引起，妇女随着年龄的增长与老化，均要面临卵巢功能衰退、雌激素水平下降的问题。因此，进入围绝经期和老年期的妇女萎缩性阴道炎的发病率高达30％～50％，是该年龄段最常见的下生殖道病症。生殖系统的萎缩性改变，还可导致性交不适、性交疼痛。长期形成慢性炎症后，可使阴道粘膜下结缔组织纤维化，阴道失去弹性，形成狭窄和斑痕，甚至导致阴道闭锁，严重影响妇女的老年生活。中医药治疗萎缩性阴道炎有其独特的优势，近年来有不少治疗阴道炎的药物均以清热解毒、利湿散结、杀虫止痒、行气破瘀为法，采用清热解毒药为主，主要治疗其标证。经过我们多年的研究认为，萎缩性阴道炎属本虚标实之证，以肾虚为本，下焦湿热为标，治疗时单治其标，只能缓解症状，不能从根本上治疗本病。

发明内容

本发明目的在于公开一种药物组合物，本发明的另一个目的是公开该药物组合物的制备方法和质量控制方法，本发明的第三个目的在于公开该药物组合物在治疗萎缩性阴道炎的药物中的应用。

本发明是通过如下技术方案实现

本发明药物组合物的原料药组成及配比如下：

淫羊藿330-420重量份            蛇床子220-280重量份

赤芍220-280重量份            黄柏220-280重量份

重楼220-280重量份            甘草220-280重量份

白花蛇舌草220-280重量份      大黄110-140重量份

上述原料药的优选配比为

淫羊藿390-410重量份          蛇床子250-270重量份

赤芍250-270重量份            黄柏250-270重量份

重楼250-270重量份            甘草250-270重量份

白花蛇舌草250-270重量份      大黄120-130重量份

上述原料药的优选配比为

炙淫羊藿97.5重量份    蛇床子265重量份    赤芍265重量份

黄柏265重量份         重楼265重量份      甘草265重量份

白花蛇舌草265重量份   大黄132.5重量份

按药剂学方法，可以将上述原料药制备成各种临床可接受的剂型，包括但不限于如下剂型当中的一种：如：片剂、硬胶囊、软胶囊缓释片、控释片、缓释胶囊、控释胶囊，口服溶液剂、口服混悬剂、口服乳剂、胶浆剂、口服液、乳剂、胶体溶液、合剂、酊剂、滴剂、混悬滴剂，丸剂、滴丸，颗粒剂、肠溶颗粒剂，散剂或粉剂等。

上述组合物的栓剂制备方法包括如下步骤：取八味原料药，蛇床子、淫羊藿用50-90％乙醇加热回流提取1-3次，每次1-2小时，加醇量分别为药材量的14-18倍，合并提取液，静置20-30小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，浓缩至相对密度至60℃时为1.15-1.20，药液备用；赤芍、黄柏等剩余六味加水煎煮1-3次，每次1-2小时，加水量分别为药材量的8-12倍，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度至60℃时为1.05-1.15，加乙醇使含醇量达50-70％，放置20-30小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，浓缩至相对密度至60℃时为1.15-1.20，与上述醉提药液合并，继续浓缩至相对密度至80℃时为1.40的稠膏；另取甘油、明胶按1∶1比例，明胶中加水适量至充分膨胀，加入甘油放置水浴上蒸去水分，蒸至重量为加入甘油明胶的总量，冷却，制得甘油明胶基质3600-3900重量份，加热融化，温度保持在80-90℃，取上述稠膏，加热融化后加入到甘油明胶中，再加入甘油700-800重量份，混匀，浇模，制粒，即得。

本药物组合物制成药剂的质量控制方法包括鉴别和/或含量测定。

本药物组合物的质量控制方法中鉴别方法包括如下方法中一种和/或几种

A.取本药物组合物制剂日用剂量3倍，剪碎，置锥形瓶中，加入乙醇30-50ml，超声处理20-40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20-40ml使溶解，用乙醚萃取2-4次，每次15-25ml，弃去乙醚液，再用水饱和正丁醇萃取2-4次，每次15-25ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加乙醇10ml使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊藿苷对照品，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液4μl，对照品溶液4μl分别点于同一硅胶H薄层板上，以1.2-1.4∶0.9-1.1∶0.9-1.1的醋酸丁酯-甲酸-水的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上显相同的暗红色斑点；喷以三氯化铝试液，热风吹干，再置365nm紫外光灯下检视，显相同的橙红色荧光斑点；

B.取鉴别A项下试液作为供试品溶液；另取赤芍对照药材1g，同法制成对照药材溶液；再取芍药苷对照品，加乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以38-42∶4-6∶8-12∶0.2的氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

C.取本药物组合物制剂日用剂量2倍，剪碎，置锥形瓶中，加入甲醇15-25ml，冷浸2-4小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20-30ml使溶解，加盐酸2-4ml，置水中加热20-40分钟，立即冷却，用乙醚提取1-3次，每次15-25ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加氯仿2ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材0.3g，同法制成对照药材溶液；再取大黄酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液8μl，对照药材及对照品溶液各4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的砖胶H薄层板上，在30～60℃条件下，以13-17∶4-6∶1的石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏后，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同的红色斑点；

D.取本药物组合物制剂日用剂量2倍，剪碎，置锥形瓶中，加入甲醇15-25ml，冷浸10-20小时，滤过，滤液浓缩至10ml，作为供试品溶液；另取黄柏对照药材0.2g，同法制成对照药材溶液；再取盐酸小檗碱对照品，加乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以8-12∶0.9-1.1∶0.9-1.1∶0.9-1.1的醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点。

质量控制方法中的含量测定方法包括如下步骤：

取本药物组合物制剂日用剂量3倍，置冰箱中冷冻后，剪碎，取6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇20-40ml，称定重量，浸泡过夜，称定重量，用乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液作为供试品溶液；另精密称取蛇床子素对照品适量，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，精密吸取供试品溶液5μl，对照品溶液1μl与3μl，分别交叉点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以28-33∶1苯-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干；照薄层色谱法试验，进行荧光扫描，激发波长λ＝365mn，测量供试品与对照品吸收度积分值，计算，即得；

本药物组合物制剂日用剂量含蛇床子素C₁₅H₁₆O₃不得低于1.66mg；

本药物组合物制剂日用生药量为2.12g生药量/日。

药物组合物的制备工艺中，药材水提取液采取醇沉除杂，进一步纯化。经正交试验得出使药液含量为60％乾地醇沉。三批中试产品的出膏率分别为16.9％、17.2％和18.9％，平均出膏率为17.7％，在制备甘油明胶基质时，在甘油∶明胶大于1∶2的条件下，制剂粘着，成型不好。所以在考虑工艺成型的因素时选择甘油∶明胶小于1∶2的最佳比例；鉴别方法试验中，各阴性对照液进行薄层色谱鉴别为阴性反应，证明此试验为专属性试验。含量测定试验中，检测波长的选择试验结果在200～700nm波长范围内测定光密度，供试品与对照品溶液在310nm处有最大吸收而阴性对照液在皮波长处无明显吸收，故波长选择为测量波长λs＝310nm，激发波长λ＝365nm；线性试验结果表明：蛇床子素在1～5μg范围内呈较好的线性关系；稳定性试验测定结果表明：斑点在2.5小时内稳定；精密度试验用测定值的相对标准偏差反映测定结果的精密度，RSD＝1.36％，表明精密度良好。；重现性试验，用测定值的相对标准偏差反映测定结果的重现性，5份样品进样后测定的相似度相没有明显的变化，说明该方法的重现性良好；空白对照试验结果表明，蛇床子阴性溶液薄层色谱扫描图谱中基本无吸收，所以可认为为其它药材中成分对蛇床子素的含量测定无影响；回收率试验，测得5组供试品溶液，平均回收率为100.30；三批中试检测试验的成品率分别为96.6％、97.4％和94.2％，蛇床子素含量分别为2.232.02和2.61mg/日用量。

本药物组合物制剂对正常小鼠及摘除卵巢的大鼠、小鼠激素的变化试验中，能使正常和摘除卵巢的大鼠、小鼠体内雌激素水平升高，表层细胞比例增大，阴道上皮细胞角化程度增加，说明本药物组合物制剂具有明显的类雌激素样作用。药效学实验结果证明本药物组合物制剂可提高动物体内激素水平；长期应用可增加卵巢、肾上腺重量，亦能增加肾虚小鼠的体重及子宫-卵巢重量，延长其在低温条件下游泳时间，缓解其症状，因此从中医角度认为具有补肾之功效。其次，本药物组合物制剂局部给药对多种炎症动物模型的影响试验中，结果表明本药物组合物制剂可明显抑制小鼠二甲苯耳水肿，对大鼠角叉菜胶足肿胀、毛细血管通透性增加、棉球肉芽组织增生均有不同程度的抑制作用，即对炎症发生的不同阶段均可表现出明显的抑制作用，特别是对由于炎症而造成的渗出性增加表现出较强的拮抗作用。该栓剂可抑制醋酸致小鼠扭体反应的发生，延长热板致痛反应发生时间，具有明显的镇痛作用；同时还可抑制磷酸组织胺致小鼠局部瘙痒的发生，表现出明显的止痒作用，这在临床上对妇科疾病症状的缓解都具有实际意义。该药为中药复方制剂，考虑到传统医学认为老年性阴道炎的发生主要的表现症状之-即为血瘀，因此我们在对血瘀动物模型的治疗过程中发现，本药物组合物制剂可使血瘀动物血液粘度降低，血液流变学指标得到改善，结合长期毒性实验中的结果，长期使用可延长凝血时间，因而具有一定的活血化瘀作用。同时体外实验充分证明本药物组合物制剂具有较强的抑菌作用，这对于局部炎症感染将起到直接的治疗作用。

本药物组合物制剂的栓剂经阴道给药后对动物体重、生长状态、饮食、进水、主要脏器系数、血常规、肝肾功能无不良影响，主要脏器无药物引起的病理改变，可减少西医治疗该病口服用药所带来的不良反应，药物直接用于患病部位可起到高效、速效的作用；其雌激素样作用及可间接恢复阴道的自净作用，达到中药标西兼治的目的。

下面实验例用于进一步说明但不限于本发明。

实验例1：基质的选择试验

现将半合成脂肪酸、聚乙二醇4000、甘油明胶为基质，进行栓剂基质种类的选择，药材以膏状或粉状入药，不加入其它任何赋形剂；观察其外观性状。

                    表1基质种类考察表

基质种类	药材加入形式	样品外观性状
			PEG4000PEG4000	浓缩液药物细粉	不均匀不均匀
半合成脂肪酸半合成脂肪酸	浓缩液药物细粉	不相混溶不相混溶，剂下部有药物沉积现象
			甘油明胶甘油明胶	浓缩液药物细粉	外观光滑，均匀外观不均匀

所以选用甘油明胶作为基质。即操作简单又不用加入其它赋形剂，即节省时间又节省成本。

实验例2：处方中生药材的醇提工艺的研究试验

为了全面考察醇提工艺的条件提高原药材的利用率，本实验把醇提浓度、加醇量提取时间和提取次数作为影响因素，每个因素选三个水平。见表2。

                    表2醇提取部分因素水平素

因素水平	A	B	C	D
					乙醇用量	乙醇浓度	提取时间	提取次数
	123	18倍16倍14倍	90％70％50％	21.51					321

采用正交表L₉(3⁴)安排试验。试验方法为：取两味药材125g(淫羊藿75g，蛇床子50g)共9份，以表1中所列因素水平，以L₉(3⁴)正交试验，提取，滤过，滤液浓缩至小体积，放冷，以60％乙醇转入置200ml量瓶中，定容，摇匀，精密量取此液10ml，置50ml量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。按本质量标准中“含量测定”项下方法，点样，展开，扫描，计算其含量。以蛇床子药材中蛇床子素含量为考核指标，试验所用蛇床子中蛇床子素含量为10.7mg/g。结果见表3、表4。

                        表3正交试验L₉(3⁴)结果表

表头设计列号	A	B	C	D	考察指标蛇床子素含量(mg/g)
						123456789K1K2K3R	11122233327.14730.2826.993.29	1231232325.19731.1928.035.993	12323131227.95727.6328.831.2	12331223133.11729.5621.7411.377	9.6610.377.116.8113.0010.478.727.8210.45G＝84.417GT＝G2/n＝791.80Q＝K1 2+K2 2+K3 2S＝Q/3-CT

                             表4方差分析表

方差来源	离差平方和	自由度	均方	F值	P
						ABD误差	SA＝2.29SB＝5.99SD＝22.59SC＝0.26	2222	1.152.9911.30.13	8.852386.9	＜0.05＜0.05

      查F表，F_0.01(2，2)＝99，F_0.05(2，2)＝19，F_0.1(2，2)＝9

结果分析，因素C均方值很小，在统计学上没有实际意义，所以作为误差。因素B，D两个因素具有显著性，B因素以K₂最高，D因素以K₁最高，故选择B₂D₁，从正交试验结果可以看出，最佳醇提取工艺为A₂B₂C₃D₁，即以70％乙醇提取三次，每次1小时，加醇量为16倍。

实验例3：处方中药材水提部分工艺研究

为全面考察水提部分工艺的条件，把加水量，提取时间，提取次数，醇沉浓度作为影响因素，每个因素选三个水平，如表5。

              表5水提取部分因素水平表

因素水平	A	B	C	D
					加水量	提取时间	提取次数	醇沉浓度
	123	12倍10倍8倍	21.51	321					70％60％50％

采用正交表L₉(3⁴)安排试验。以黄柏中小檗碱的含量为考核指标，试验前测得药材中小檗碱含量为3.7mg/g。具体试验方法为：取六味药材110g(大黄10g，赤芍等五味药材均为20g)共9份，以表5中所列的因素水平，以L₉(3⁴)正交试验条件提取后，用60％乙醇定容于200ml量瓶中，精密吸取此溶液20ml，定容置100ml容量瓶内，另取盐酸小檗碱加甲醇溶解，制成每1ml含0.068mg的溶液作为对照品溶液。精密吸取供试品溶液2～6μl，对照品溶液1μl、2μl，照薄层色谱法试验，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10∶1∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。照薄层色谱法试验，进行荧光扫描，激发波长λ＝366nm，测定积分值，计算，即得。结果见表6、表7。

                            表6正交试验L₉(3⁴)结果表

表头设计列号	A	B	C	D	考核指标小檗碱含量(mg/g)
						123456789K1K2K3R	1112223335.585.505.130.45	1231231236.005.504.711.29	1232313127.004.634.582.42	1233122315.135.755.330.62	2.501.751.331.751.502.251.752.251.13G＝16.21GT＝G2/n＝29.196Q＝K1 2+K2 2+K3 2S＝Q/3-CT

                            表7方差分析表

方差来源	离差平方和	自由度	均方	F值	P
						BCD误差	SB＝0.28SC＝1.28SD＝0.07SA＝0.04	2222	0.140.640.030.02	7.032.01.5	＜0.05

       查F表，F_0.01(2，2)＝99，F_0.05(2，2)＝19，F_0.1(2，2)＝9

结果分析：因素C对含量有较大影响，C因素以K₁最大，故选择C₁，A因素K₁、K₂相差无几，为了减少用水量节省成本，故选K₂。B因素K₁、K₂相差不大，为了省时，缩短周期，所以选择B₂。结合试验结果，最佳提取工艺为A₂B₂C₁D₂，即药材加水量为10倍，提取三次，每次1.5小时，醇沉浓度为60％。

实验例4：制剂成型工艺研究试验

在制剂成型工艺中，稠膏相对密度的大小和甘油加入比例的大小直接影响成品的质量，所以，我们以稠膏相对密度，甘油的比例、融化温度为影响因素，选用L₉(3⁴)表安排正交试验。

                    表8制剂成型工艺因素水平表

因素	A	B	C
				水平123	稠膏相对密度(80℃)＞1.401.40＜1.40	甘油∶甘油明胶(基质)1∶31∶41∶5	融化温度50℃70℃90℃

甘油与基质比例的选择：在实验室基础上将甘油与甘油明胶基质配成不同比例子制成成品观察其外观性状，具体实验方法为：按处方1/10量生药材，按所得最佳工艺条件进行提取处理后，按表中所列条件制成成品(每粒含生药量不变)，观察栓剂的外观性状，触摸栓剂的软硬程度、弹性及粘着程度。

               表9正交试验L₉(3⁴)试验结果

表头设计	A	B	C	D	成型状况
						列号123456789	111222333	123123123	123231312	123312231	(误差)粘着，成型性差。稍粘着，弹性差成型好，弹性好。稍粘着，成型性差。稍粘着，硬度差。弹性好，成型性好，硬度好。成型差，粘着，硬度差。粘着，成型性差。稍粘着，成型不好。

从以上结果可以看出，3号和6号实验结果较好，但考虑稠膏相对密度大于1.40，在实际生产中不仅费时，且加热后不易混匀，相对密度为1.40已能满足制剂的成型工艺。6号实验结果各方面考核指标均较好，但50℃加热明胶和稠膏融化的太慢，耗费时间且浇模时不易灌模，所以选用90℃加热，缩短时间，温度高易于浇模。所以最佳条件为相对密度1.40(80℃)，保温在90℃，甘油与甘油明胶(基质)比例为1∶5。

实验例5：含量测定试验：

蛇床子为本方臣药，且其含有小毒，故选定处方中蛇床子中蛇床子素作为本制剂的含量测定指标。因为本制剂在气候炎热条件下剪碎时较粘着，影响有效成分的浸出，所以放入冰箱内冷冻后再进行操作。蛇床子素含量测定采用荧光薄层扫描法测定，薄层色谱条件：硅胶G薄层板(自制)，以苯-醋酸乙酯(30∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。扫描条件：岛津9301-PC薄层色谱扫描仪，使用2号滤光片，狭缝0.4mm×10mm，单波长线性扫描，激发波长λ＝365nm，最大吸收波长λs＝310nm。照薄层色谱法试验测定吸收度积分值，本品五批样品蛇床子素含量测定结果见表10。

           表10舒妇栓中蛇床子素含量测定

批号	蛇床子素含量
			000908000910000912000914000916	4.764.704.794.864.58	X＝2.37mg/日用量

由上表可见，五批样品蛇床子素的平均含量为2.37mg/日用量，其值下降15％，即为2.0mg/粒，故限定样品中蛇床子含量以蛇床子素计不得低于2.0mg/日用量。根据《中国药典》2000年版256页“蛇床子”中用量3～9g计算，蛇床子素每日用量为30～90mg，远远高于本品每日的用量。所以上限不做规定。

实验例6：对摘除卵巢小鼠血清中雌二醇及阴道上皮细胞的影响试验：

取成年雌性小鼠，在乙醚麻醉下消毒，切除双侧卵巢，正常饲养2周后，于显微镜下观察阴道分泌物涂片，以涂片细胞学变化作为观察指标。当涂片上观察有大量白细胞，上皮细胞完全消失或仅有少量出现，肉眼可见动物阴道口几乎封闭，此时可认为动物体内雌激素几乎耗竭，动物可用于实验^[1]。取模型成功的小鼠60只，随机分为五组：空白对照组，恒和坤净栓20mg/只(909mg/kg)给药药组。每日给药2次，每次至少间隔6小时，连续给药7天。末次给药后4小时，取动物阴道分泌物涂片，观察上皮细胞的成熟情况(以成熟指数为指标)；同时将动物断头处死，取血，用放免法测定血清中雌二醇含量。结果见表11、表12。

          表11舒妇栓对摘除卵巢小鼠阴道上皮细胞的影响( x±s)

组别	动物数(只)	细胞涂片(％)
					底层细胞	中层细胞	表层细胞
		空白对照组恒和坤净栓舒妇栓  高中低	1212121212	4.8±2.523.0±1.414.8±1.534.6±1.514.1±1.73				54.3±11.239.8±14.8044.5±5.7346.8±7.4350.1±8.43	40.8±13.0558.8±15.47**50.5±6.59*48.4±8.6845.9±9.27

注：与空白对照组比*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001(以下各表均同)

表12舒妇栓对摘除卵巢小鼠血清中雌二醇含量的影响( x±s)

组别	动物数(只)	雌二醇含量(pg/ml)
			空白对照组恒和坤净栓舒妇栓  高中低	1212121212	40.1±11.3639.5±7.5453.4±10.09**52.3±18.7924.5±11.81

由表11结果可见，恒和坤净栓和舒妇栓高剂量给药组与对照组相比，可明显增加表层细胞比例数。表12结果表明，舒妇栓高剂量给药组可明显增加动物血中雌二醇含量，与对照组比具有明显差异P＜0.01。在对摘除卵巢大鼠血清中雌二醇及阴道上皮细胞的影响试验中，结果显示恒和坤净栓和舒妇栓均可明显增加摘除卵巢大鼠体内雌二醇含量；对正常小鼠血清中雌二醇的影响试验中，结果舒妇栓高、中两个剂量组均能明显增加小鼠体内雌二醇的含量P＜0.01。

实验例7：对摘除卵巢大鼠子宫及肾上腺重量的影响试验：

将成年雌性大鼠用上述方法造模型。同样取模型成功的大鼠40只，随机分为五组：空白对照组，恒和坤净栓150mg/只(882mg kg)，舒妇栓150、75、38mg/只(882、441、221mg/kg)三个剂量给药组。每日给药2次，每次至少间隔6小时，连续给药7天。末次给药后4小时，将动物称重，断头处死，取子宫、肾上腺称重。结果见表13。

         表13舒妇栓对摘除卵巢大鼠子宫及肾上腺重量的影响( x±s)

组别	动物数(只)	脏器指数(11g/10g体重)
				子宫	子宫
		空白对照组恒和坤净栓舒妇栓  高中低	88888			68.9±12.1785.1±16.19*124.4±35.06***96.8±16.32**96.9±24.92*	12.3±4.3315.9±3.1318.3±4.29*19.6±2.72**20.2±3.09***

结果可见，给药组与模型组比较，可明显增加去势动物子宫及肾上腺重量。

本次实验结果也进一步证明，舒妇栓局部给药可明显增加去势动物性器官重量及体内雌二醇含量，具有类雌激素样作用。在对摘除卵巢小鼠子宫及肾上腺重量的影响试验中，结果表明舒妇栓高、中剂量给药组可明显增加小鼠子宫的重量，对肾上腺重量无明显的影响。

实验例8：对正常小鼠阴道粘膜的影响试验：

取60只小鼠，随机分为五组：空白对照组，恒和坤净栏20mg/只(909mg/kg)剂量给药组，舒妇栓20、10、5mg/只(909、455、227mg/kg)三个剂量给药组。每日给药2次，每次给药间隔时间至少6小时，连续给药7天。末次给药后4小时将动物断头处死，取阴道粘膜做病理检查。结果见表14及病理报告。

            表14舒妇栓对小鼠阴道粘膜的影响(X²)

组别	动物数(只)	粘膜角化的动物数(只)
			空白对照组恒和坤净栓舒妇栓  高中低	1212121212	15542

由表14及病理报告结果可见，高、中剂量组和恒和坤净栓均能增加阴道上皮的角化程度，但与对照组比无明显差异。

实验例9：对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响试验：

取大鼠50只，随机分为五组：空白对照组，恒和坤净栓150mg/只(882mg/kg)剂量给药组，舒妇栓150、75、37.5mg/只(882、441、221mg/kg)三个剂量给药组。每天给药2次，每次给药间隔对间至少6小时，连续给药3天。末次给药后4小时，于大鼠右后足跖踺膜下注射1％角叉菜胶0.1ml/只，分别于其后1、2、3、4、5、6小时测量足肿胀程度。结果见表15。

                表15舒妇栓对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响( x±s)

组别	动物数(只)	给药后不同时间足肿胀程度(mm)
								1h	2h	3h	4h	5h	6h
		空白对照组恒和坤净栓舒妇栓  高中低	1010101010	5.5±2.684.6±0.704.6±2.995.5±2.766.6±2.01	13.7±5.669.5±3.6310.6±5.0211.4±3.8612.4±4.60	18.6±3.3714.5±3.21*17.8±2.1516.1±2.6415.8±1.63*	16.6±1.8415.5±2.5515.0±1.8915.2±2.3915.0±1.63							17.0±3.0615.1±2.8513.8±3.22*14.2±2.04*15.1±2.38	16.8±2.8214.4±2.8012.4±1.17***13.4±2.88*14.8±2.30

结果可见，舒妇栓各剂量对角叉菜胶致大鼠足肿胀均有不同程度的抑制作用，与对照组比P＜0.05；恒和坤净栓组于致炎后3小时亦明显抑制大鼠足肿胀。

实验例10：对大鼠毛细血管通透性的影响试验：

取，45只大鼠，随机分为五组：空白对照组，恒和坤净栓150mg/只(882mg/kg)剂量给药组，舒妇栓150、75、37.5mg/只(882、441、221mg/kg)三个剂量给药组。每天给药2次，间隔时间不得少于6小时，连续给药5天。末次给药后4小时，与大鼠背部剪毛处两点分别皮内注射组织胺200μg/只(0.05ml)、5-羟色胺20μg/只(0.05ml)，立即尾静脉注射1％的伊文思蓝溶液0.4ml/100g。20分钟后将动物断头处死，剥离背部皮肤，测量蓝染部位的皮斑面积，并将此处皮肤剪碎，置于6ml丙酮-生理盐水(7∶3)溶液中浸泡24小时，离心，上清液于610nm处比色，记录OD值。结果见表16。

                    表16舒妇栓对小鼠毛细血管通透性的影响( x±s)

组别	动物数(只)	OD值		蓝染面积(mm2)
						组胺	5-羟色胺	组胺	5-羟色胺
		空白对照组恒和坤净栓舒妇栓  高中低	99999	0.15±0.0910.12±0.0650.11±0.0360.10±0.0280.11±0.073	0.21±0.0860.10±0.065**0.13±0.046*0.12±0.075*0.06±0.035***					4.3±0.303.7±0.933.2±0.34***3.8±0.50*3.4±0.38***	3.3±0.312.6±0.67*2.6±0.19***2.6±0.22***2.7±0.30***

由表16结果可见，无论是蓝染面积测量结果，还是浸泡滚比色结果，舒妇栓各剂量组与恒和坤净栓给药组均能明显抑制5-羟色胺引起的大鼠毛细血管通透性增加，与对照组比较有明显的差异；对组织胺引起的毛细血管通透性的增加亦有抑制作用，蓝染面积与对照组比较明显减少，但比色结果有降低趋势，无统计学差异。

实验例11：对大鼠棉球肉芽组织增生的影响试验：

取45只大鼠用乙醚麻醉后，迅速将无菌棉球(10mg)分别植入两前肢腋下。待动物清醒后，随机分为五组：空白对照组，恒和坤净栓150mg/只(882mg/kg)剂量给药组，舒妇栓150、75、37.5mg/只(882、441、221mg/kg)三个剂量给药组。于手术后第二天开始给药，每天2次，间隔时间不得少于6小时，连续给药8天。末次给药后4小时，将动物处死，取出棉球称重；然后将棉球置60℃烘箱中干燥3小时，至恒重，再次称重。结果见表17。

表17舒妇栓对大鼠棉球肉芽组织增生的影响( x±s)

组别	动物数(只)	棉球湿重(mg/100g体重)	棉球干重(mg/100g体重)
				空白对照组恒和坤净栓舒妇栓  高中低	99999	146.0±53.10121.0±22.24117.0±23.17130.0±47.72120.4±35.08	35.4±9.1729.3±4.8127.8±3.97*29.4±7.9728.9±6.23

由表17结果可见，舒妇栓高剂量组对大鼠棉球肉芽肿有明显的抑制作用。特别是干重，给药组与对照组比有明显差异P＜0.05。

实验例12：对小鼠二甲苯耳水肿的影响试验：

取65只小鼠，随机分为五组：空白对照组，恒和坤净栓20mg/只(909mg/kg)剂量给药组，舒妇栓20、10、5mg/只(909、455、227mg/kg)三个剂量给药组。每日给药2次，每次给药间隔至少6小时，连续给药3天。末次给药后4小时，于小鼠右耳滴二甲苯0.03ml/只。2小时后将小鼠脱臼处死，用φ9mm打孔器，打下两耳片称重，以两耳片重量之差为肿胀指标。结果见表18。

表18舒妇栓对二甲苯致小鼠耳水肿的影响( x±s)

组别	动物数(只)	肿胀程度(mg)
			空白对照组恒和坤净栓舒妇栓  高中低	1313131313	8.5±5.974.6±3.992.5±3.50**7.1±4.156.0±4.44

表18结果表明，舒妇栓高剂量组能明显抑制二甲苯致小鼠耳肿胀，与对照组比P＜0.01。

实验例13：对醋酸致小鼠扭体反应的影响试验：

取60只小鼠，随机分为五组：空白对照组，恒和坤净栓20mg/只(909mg/kg)剂量给药组，舒妇栓20、10、5mg/只(909、455、227mg/kg)三个剂量给药组。每日给药2次，每次给药间隔至少6小时，连续给药3天。末次给药后4小时，于小鼠腹腔注射0.7％的醋酸溶液10ml/kg，5min后观察10min内扭体次数，计算抑制百分率。结果见表19。

表19舒妇拴对醋酸致小鼠扭体反应的影响( x±s)

组别	动物数(只)	扭体次数	抑制率(％)
				空白对照组恒和坤净栓舒妇栓  高中低	1212121212	32.4±8.4023.3±12.69*22.2±10.63*23.3±11.49*23.0±13.54	28.2831.5928.0329.06

由表19结果可见，给药组与对照组比均能明显抑制小鼠扭体反应的发生，具有明显的镇痛作用。

实验例14：对小鼠热板法致痛反应的影响试验：

取预筛合格的小鼠55只，随机分为五组：空白对照组，恒和坤净栓20mg/只(909mg/kg)剂量给药组，舒妇栓20、10、5mg/只(909、455、227mg/kg)三个剂量给药组。每日给药2次，每次给药间隔至少6小时，连续给药3天。末次给药后4小时，将小鼠置于55±5℃的热板仪上，于1、2、3、4、5、6小时观察并记录动物产生痛觉的潜伏期(以其舔后足为指标)。结果见表20。

                表20舒妇栓对小鼠热板法致痛反应的影响( x±s)

组别	动物数(只)	给药后不同时间疼痛发生阈值(秒)
								1h	2h	3h	4h	5h	6h
		空白对照组恒和坤净栓舒妇栓  高中低	1111111111	32.9±13.5227.3±10.7734.2±6.1931.7±13.1832.0±17.21	35.3±17.3439.2±15.1145.0±16.1148.8±12.9542.6±14.31	30.0±18.2240.1±17.6739.1±17.4844.1±16.8947.6±14.56*	41.6±15.2948.6±15.2551.9±14.0052.6±10.2849.5±16.90							40.9±18.4153.1±12.2856.6±7.97*54.9±9.69*56.6±12.46	33.5±15.1837.9±17.7552.6±11.87**53.0±9.65**53.3±9.63**

由表20结果可见，舒妇栓各给药组均能明显延长小鼠痛阈值，与对照组比有明显差异。

实验例15：对磷酸组织胺致小鼠局部瘙痒的影响试验：

取55只小鼠，随机分为五组：空白对照组，恒和坤净栓20mg/只(909mg/kg)剂量给药组，舒妇栓20、10、5mg/只(909、455、227mg/kg)三个剂量给药组。每日给药2次，每次给药间隔至少6小时，连续给药3天。末次给药后4小时，将小鼠会阴部皮肤用刀片轻轻划破(以渗血为度)，将2％的磷酸组织胺10μl/只点于此处，每隔3min点一次，如此反复，直至动物出现舔创伤部位为止，即为发生瘙痒反应的潜伏期，并记录磷酸组织胺的累积用量^[2]。结果见表21。

              表21舒妇栓对磷酸组织胺致小鼠局部瘙痒的影响( x±s)

组别	动物数(只)	潜伏期(min)	磷酸组织胺用量(μl)
				空白对照组恒和坤净栓舒妇栓  高中低	1212121212	7.3±4.1917.9±8.75**17.9±8.77**15.8±9.83*12.6±6.89	34.2±24.2963.3±28.07*64.2±26.10**56.7±31.1446.7±23.09

由表21结果可见，舒妇栓能明显延长动物发生瘙痒反应的潜伏期，可增加磷酸组织胺的用量，与对照组比有明显的差异。

实验例16：对血瘀模型大鼠血液流变学的影响试验：

取48只大鼠，随机分为六组：空白对照组，血瘀模型组，恒和坤净栓150mg/只(600mg/kg)剂量给药组，舒妇栓150、75、37.5mg/只(600、300、150mg/kg)三个剂量给药组。每天给药2次，间隔时间不得少于6小时，连续给药7天。分别于第4、第5天给药当天的第一次给药后4小时，将大鼠皮下注射1％盐酸肾上腺素注射液0.1ml/只，30min后将其置于1.5℃冷水浴中游泳5min后取出^[3]：给药第六天，大鼠仅皮下注射1％盐酸肾上腺素注射液0.1ml/只。末次给药后4小时，将大鼠麻醉，腹静脉采血，测全血粘度、血沉等指标。结果见表22。

                表22舒妇栓对血瘀大鼠血液流变学指标的影响( X±S)

组别	动物数(只)	全血粘度(mPa·s)			血沉(mm/h)
						高切	中切	低切
		空白对照组模型组恒和坤净栓舒妇栓  高中低	888888	4.8±0.426.2±0.20***5.8±0.40△5.6±0.34△△△5.8±0.57△5.8±0.62					5.9±0.557.7±0.25***7.2±0.51△7.0±0.44△△△7.2±0.74△7.1±0.80	11.1±0.9514.1±0.37***13.2±0.85△13.0±0.75△△13.2±1.2113.2±1.32	9.5±5.9614.4±6.5514.8±8.227.9±3.34△3.3±2.15△△△2.6±3.07△△△

注：与模型组比△P＜0.05，△△p＜0.01，△△△P＜0.001

由表22结果可见，舒妇栓可使血瘀动物血液流变学指标有明显的改善，使血液粘度降低。

实验例17：对肾虚小鼠体重及低温条件游泳时间的影响试验：

方法：取66只小鼠，随机分为六组：空白对照组，模型组.补肾强身片给药组1.6g/kg，舒妇栓20、10、5mg/只(909、445、227mg/kg)给药组。每日给药2次(补肾强身片每日给药1次)，每次给药至少间隔6小时，连续给药9天，且与给药第3天开始.连续5天腹腔注射氢化可的松25mg/kg，末次给药后4小时(补肾强身片给药后1小时)，放入18±1℃的水浴中，记录游泳时间。

表23舒妇栓对肾虚小鼠体重及低温条件下游泳时间的影响( X±s)

组别	动物数(只)	体重(g)	血沉(mm/h)
				空白对照组模型组舒妇栓  高中低	111111111111	22.4±2.8418.8±1.78**20.9±1.30▲▲21.1±1.58▲▲22.4±1.57▲▲▲21.6±1.12▲▲▲	17.6±6.9012.3±2.47*17.2±5.85▲17.1±3.73▲▲16.7±3.52▲▲14.2±2.61

注：与模型组比较▲P＜0.05，▲▲P＜0.01，▲▲▲P＜0.001以下均同。

实验过程中可见，动物注射氢化可的松后逐渐出现蜷缩，活动减少，皮毛无光泽，体重减轻等阳虚体征。由表23结果可见，给药组可明显缓解上述症状的出现，体重及低温条件下游泳耐力均与模型比有明显差异。而补肾强身片及舒妇栓给药组动物则使上述肾虚症状明显缓解。

实验例18：对肾虚小鼠脏器指数的影响试验

方法：取66只小鼠，随机分为六组：空白对照组，模型组，补肾强身片给药组1.6g/kg，舒妇栓20、10、5mg/只(909、445、227mg/kg)给药组。每日给药2次(补肾强身片每日给药1次)，每次给药至少间隔6小时，连续给药9天，且与给药第3天开始，连续5天腹腔注射氢化可的松25mg/kg，末次给药后4小时(补肾强身片给药后1小时)将动物脱臼处死，取子宫-卵巢、肾上腺称重，计算脏器指数。

表24舒妇栓对肾虚小鼠脏器指数的影响( X±s)

组别	动物数(只)	脏器指数(mg/10g体重)
				子宫-卵巢	肾上腺
		空白对照组模型组补肾强身片舒妇栓  高中低	111111111111			24.7±3.8020.5±4.54*25.9±3.49▲▲26.5±5.32▲26.5±7.64▲25.3±7.65	5.4±0.474.6±1.79*6.1±0.82▲4.8±1.005.7±0.705.4±1.03

结果可见，肾虚动物子宫-卵巢重量明显低于空白对照组，肾上腺重也有降低的趋势，给药组动物可使上述症状明显改善，特别是子宫-卵巢重量与模型组比较有显著性差异。上述实验表明舒妇栓可使肾虚动物症状得到明显缓解，表明其具有一定的补肾作用。

实验例19：舒妇栓体外抑菌试验

菌种：大肠杆菌(CMCC(B)44102)、沙门氏菌(CMCC(B)50094)、绿脓杆菌(CMCC(B)10104)、变形杆菌(49027)、金黄色葡萄球菌(CMCC(B)26003)、表皮葡萄球菌、甲型溶血性链球菌、淋病奈瑟菌、生孢梭菌(CMCC(B)6491)、破伤风杆菌(CMCC(B)6406)、白色念珠菌(CMCC(B)98001)、滴虫活体，以上菌种均有卫生部生物制品检定所和自求恩医科大学提供。

供试品：舒妇拴  省中医中药研究院提供，每g膏相当于5.653g生药对照品：青霉素钠  石家庄制药集团有限公司

实验结果表明，舒妇拴对所试验11个菌种的G+球菌有较强的抑菌作用，对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、甲型溶血性链球菌，最小抑菌浓度为3.125mg/ml，对厌氧菌也有较强的抑菌作用，生孢梭菌、破伤风杆菌最小抑菌浓度为6.25mg/ml，对真菌、白色念珠菌最小抑菌浓度为3.125mg/ml，对淋病柰瑟菌抑菌作用较弱。对G-杆菌抑菌作用也较弱，大肠杆菌、沙门氏菌、绿脓杆菌有轻度敏感作用，对变形杆菌、有中度敏感作用，对滴虫作用较强，最小抑菌浓度为3.125mg/ml。对照药物青霉素钠，大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念珠菌在普通肉汤琼脂、霉菌琼脂平板生长，其它细菌未见生长。

具体实施方式如下：

实施例1：

取淫羊藿795g，蛇床子530g，赤芍530g，黄柏530g，重楼530g，甘草530g，白花蛇舌草530g，大黄265g，按常规方法制成栓剂2000粒。

实施例2：

炙淫羊藿795g，蛇床子530g，赤芍530g，黄柏530g，重楼530g，甘草530g，白花蛇舌草530g，大黄265g，以上八味，蛇床子、淫羊藿用70％乙醇加热回流提取三次，每次1小时，加醇量分别为药材量的16倍，合并提取液，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，浓缩至相对密度为1.15～1.20(60℃)，药液备用。赤芍、黄柏等剩余六味加水煎煮三次，每次1.5小时，加水量分别为药材量的10倍，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.15(60℃)，加乙醇使含醇量达60％，放置过夜，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，浓缩至相对密度为1.15～1.20(60℃)，与上述醇提药液合并，继续浓缩至相对密度为1.40(80℃)的稠膏；另取甘油、明胶各1875g，明胶中加水适量至充分膨胀，加入甘油后，放置水浴上蒸去水分，蒸至重量为加入甘油明胶的总量，冷却，制得甘油明胶基质3750g，加热融化，温度保持在80～90℃，取上述稠膏，加热融化后加入到甘油明胶中，再加750g甘油，混匀，浇模，制成2000粒。

实施例3：质量控制

鉴别(1)取实施例1所得的栓剂9g，剪碎，置锥形瓶中，加入乙醇40ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，用乙醚萃取三次，每次20ml，弃去乙醚液，再用水饱和正丁醇萃取三次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加乙醇10ml使溶解，作为供试品溶液。另取淫羊藿苷对照品，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液4μl，对照品溶液4μl分别点于同一硅胶H薄层板上，以醋酸丁酯-甲酸-水(1.3∶1∶1)的上层溶液为展开剂，展开(展距8cm)，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上显相同的暗红色斑点；喷以三氯化铝试液，热风吹干，再置紫外光灯(365nm)下检视，显相同的橙红色荧光斑点。

(2)取鉴别(1)项下试液作为供试品溶液。另取赤芍对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取芍药苷对照品，加乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)为展开剂，展开(展距7cm)，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

(3)取实施例2所得的栓剂6g，剪碎，置锥形瓶中，加入甲醇20ml，冷浸2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水25ml使溶解，加盐酸3ml，置水中加热30分钟，立即冷却，用乙醚提取两次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加氯仿2ml使溶解，作为供试品溶液。另取大黄对照药材0.3g，同法制成对照药材溶液。再取大黄酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液8μl，对照药材及对照品溶液各4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的砖胶H薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏后，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同的红色斑点。

(4)取实施例2所得的栓剂6g，剪碎，置锥形瓶中，加入甲醇20ml，冷浸过夜，滤过，滤液浓缩至10ml，作为供试品溶液。另取黄柏对照药材0.2g，同法制成对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品，加乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10∶1∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点。

实施例4：质量控制

含量测定：取实施例2所得的栓剂3粒，每粒3g，置冰箱中冷冻后，剪碎，取6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇30ml，称定重量，浸泡过夜，称定重量，用乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液作为供试品溶液。另精密称取蛇床子素对照品适量，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，精密吸取供试品溶液5μl，对照品溶液1μl与3μl，分别交叉点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯(30∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。照薄层色谱法试验，进行荧光扫描，激发波长λ＝365mn，测量供试品与对照品吸收度积分值，计算，即得。

本品每粒含蛇床子素(C₁₅H₁₆O₃)不得低于2.0mg。

实施例5：片剂的制备

淫羊藿330g、蛇床子280g、赤芍220g、黄柏280g、重楼220g、甘草280g、花蛇舌草220g、大黄140g

按常规方法制成片剂1660片，萎缩性阴道炎患者服用，每日2片。

实施例6：缓释胶囊的制备

淫羊藿420g、蛇床子220g、赤芍280g、黄柏220g、重楼280g、甘草220g、白花蛇舌草280g、大黄110g

按常规方法制成缓释胶囊1057粒，萎缩性阴道炎患者服用，每日1粒。

实施例7：口服液的制备

淫羊藿390g、蛇床子270g、赤芍250g、黄柏270g、重楼250g、甘草270g、白花蛇舌草250g、大黄130g

按常规方法制成口服液9810ml，萎缩性阴道炎患者服用，每日10ml。

实施例8：滴丸的制备

淫羊藿410g、蛇床子250g、赤芍270g、黄柏250g、重楼270g、甘草250g、白花蛇舌草270g、大黄120g

制成滴丸2062粒，萎缩性阴道炎患者服用，每次1粒，一天2次。

实施例9：质量控制方法

鉴别(1)取实施例6所得的缓释胶囊9g，剪碎，置锥形瓶中，加入乙醇40ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，用乙醚萃取三次，每次20ml，弃去乙醚液，再用水饱和正丁醇萃取三次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加乙醇10ml使溶解，作为供试品溶液。另取淫羊藿苷对照品，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液4μl，对照品溶液4μl分别点于同一硅胶H薄层板上，以醋酸丁酯-甲酸-水(1.3∶1∶1)的上层溶液为展开剂，展开(展距8cm)，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上显相同的暗红色斑点；喷以三氯化铝试液，热风吹干，再置紫外光灯(365nm)下检视，显相同的橙红色荧光斑点。

(2)取鉴别(1)项下试液作为供试品溶液。另取赤芍对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取芍药苷对照品，加乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)为展开剂，展开(展距7cm)，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

(3)取实施例6所得的缓释胶囊6g，剪碎，置锥形瓶中，加入甲醇20ml，冷浸2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水25ml使溶解，加盐酸3ml，置水中加热30分钟，立即冷却，用乙醚提取两次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加氯仿2ml使溶解，作为供试品溶液。另取大黄对照药材0.3g，同法制成对照药材溶液。再取大黄酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液8μl，对照药材及对照品溶液各4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的砖胶H薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏后，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同的红色斑点。

(4)取实施例6所得的缓释胶囊6g，剪碎，置锥形瓶中，加入甲醇20ml，冷浸过夜，滤过，滤液浓缩至10ml，作为供试品溶液。另取黄柏对照药材0.2g，同法制成对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品，加乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10∶1∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点。

含量测定：取实施例6所得的缓释胶囊3粒，每粒3g，置冰箱中冷冻后，剪碎，取6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇30ml，称定重量，浸泡过夜，称定重量，用乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液作为供试品溶液。另精密称取蛇床子素对照品适量，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，精密吸取供试品溶液5μl，对照品溶液1μl与3μl，分别交叉点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯(30∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。照薄层色谱法试验，进行荧光扫描，激发波长λ＝365mn，测量供试品与对照品吸收度积分值，计算，即得。

本品每粒含蛇床子素(C₁₅H₁₆O₃)不得低于2.0mg。

Claims (13)

1、一种治疗萎缩性阴道炎的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由如下原料药按重量份制成：

淫羊藿330-420重量份          蛇床子220-280重量份

赤  芍220-280重量份          黄  柏220-280重量份

重  楼220-280重量份          甘  草220-280重量份

白花蛇舌草220-280重量份      大  黄110-140重量份。

2、如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由如下原料药按重量份制成：

淫羊藿390-410重量份          蛇床子250-270重量份

赤  芍250-270重量份          黄  柏250-270重量份

重  楼250-270重量份          甘  草250-270重量份

白花蛇舌草250-270重量份      大  黄120-130重量份。

3、如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由如下原料药按重量份制成：

炙淫羊藿397.5重量份      蛇床子265重量份    赤  芍265重量份

黄  柏265重量份          重  楼265重量份    甘  草265重量份

白花蛇舌草265重量份      大  黄132.5重量份。

4、如权利要求1、2或3所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物制成片剂、硬胶囊、软胶囊缓释片、控释片、缓释胶囊、控释胶囊，口服溶液剂、口服混悬剂、口服乳剂、胶浆剂、口服液、乳剂、胶体溶液、合剂、酊剂、滴剂、混悬滴剂，丸剂、滴丸，颗粒剂、肠溶颗粒剂，散剂或粉剂。

5、如权利要求1、2或3所述的药物组合物栓剂的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

取八味原料药，蛇床子、淫羊藿用60-80％乙醇加热回流提取2-4次，每次0.5-1.5小时，加醇量分别为药材量的14-18倍，合并提取液，静置20-30小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，浓缩至相对密度至60℃时为1.15-1.20，药液备用；赤芍、黄柏等剩余六味加水煎煮2-4次，每次1-2小时，加水量分别为药材量的8-12倍，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度至60℃时为1.05-1.15，加乙醇使含醇量达50-70％，放置20-30小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，浓缩至相对密度至60℃时为1.15-1.20，与上述醇提药液合并，继续浓缩至相对密度至80℃时为1.40的稠膏；另取甘油、明胶按1∶1比例，明胶中加水适量至充分膨胀，加入甘油放置水浴上蒸去水分，蒸至重量为加入甘油明胶的总量，冷却，制得甘油明胶基质3600-3900重量份，加热融化，温度保持在80-90℃，取上述稠膏，加热融化后加入到甘油明胶中，再加入甘油700-800重量份，混匀，浇模，制粒，即得。

6、如权利要求5所述的药物组合物的栓剂制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：取八味原料药，蛇床子、淫羊藿用70％乙醇加热回流提取三次，每次1小时，加醇量分别为药材量的16倍，合并提取液，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，浓缩至相对密度至60℃时为1.15-1.20，药液备用；赤芍、黄柏等剩余六味加水煎煮三次，每次1.5小时，加水量分别为药材量的10倍，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度至60℃时为1.05-1.15，加乙醇使含醇量达60％，放置24小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，浓缩至相对密度至60℃时为1.15-1.20，与上述醉提药液合并，继续浓缩至相对密度至80℃时为1.40的稠膏；另取甘油、明胶按1∶1比例，明胶中加水适量至充分膨胀，加入甘油放置水浴上蒸去水分，蒸至重量为加入甘油明胶的总量，冷却，制得甘油明胶基质3600-3900重量份，加热融化，温度保持在80-90℃，取上述稠膏，加热融化后加入到甘油明胶中，再加入甘油750重量份，混匀，浇模，制粒，即得。

7、权利要求1、2或3所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法中的鉴别方法包括如下鉴别中的一种或几种：

A.取本药物组合物制剂日用剂量3倍，剪碎，置锥形瓶中，加入乙醇30-50ml，超声处理20-40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20-40ml使溶解，用乙醚萃取2-4次，每次15-25ml，弃去乙醚液，再用水饱和正丁醇萃取2-4次，每次15-25ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加乙醇10ml使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊藿苷对照品，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液4μl，对照品溶液4μl分别点于同一硅胶H薄层板上，以1.2-1.4∶0.9-1.1∶0.9-1.1的醋酸丁酯-甲酸-水的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上显相同的暗红色斑点；喷以三氯化铝试液，热风吹干，再置365nm紫外光灯下检视，显相同的橙红色荧光斑点；

B.取鉴别A项下试液作为供试品溶液；另取赤芍对照药材1g，同法制成对照药材溶液；再取芍药苷对照品，加乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以38-42∶4-6∶8-12∶0.2的氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

C.取本药物组合物制剂日用剂量2倍，剪碎，置锥形瓶中，加入甲醇15-25ml，冷浸2-4小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20-30ml使溶解，加盐酸2-4ml，置水中加热20-40分钟，立即冷却，用乙醚提取1-3次，每次15-25ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加氯仿2ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材0.3g，同法制成对照药材溶液；再取大黄酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液8μl，对照药材及对照品溶液各4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的砖胶H薄层板上，在30～60℃条件下，以13-17∶4-6∶1的石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏后，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同的红色斑点；

D.取本药物组合物制剂日用剂量2倍，剪碎，置锥形瓶中，加入甲醇15-25ml，冷浸10-20小时，滤过，滤液浓缩至10ml，作为供试品溶液；另取黄柏对照药材0.2g，同法制成对照药材溶液；再取盐酸小檗碱对照品，加乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以8-12∶0.9-1.1∶0.9-1.1∶0.9-1.1的醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点。

8、如权利要求7所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法中的鉴别方法包括如下鉴别中的一种或几种：

A.取本药物组合物制剂日用剂量3倍，剪碎，置锥形瓶中，加入乙醇40ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，用乙醚萃取3次，每次20ml，弃去乙醚液，再用水饱和正丁醇萃取3次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加乙醇10ml使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊藿苷对照品，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液4μl，对照品溶液4μl分别点于同一硅胶H薄层板上，以1.3∶1∶1的醋酸丁酯-甲酸-水的上层溶液为展开剂，以展距为8cm展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上显相同的暗红色斑点；喷以三氯化铝试液，热风吹干，再置365nm紫外光灯下检视，显相同的橙红色荧光斑点；

B.取鉴别A项下试液作为供试品溶液；另取赤芍对照药材1g，同法制成对照药材溶液；再取芍药苷对照品，加乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以40∶5∶10∶0.2的氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，以展距为7cm展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

C.取本药物组合物制剂日用剂量2倍，剪碎，置锥形瓶中，加入甲醇20ml，冷浸2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水25ml使溶解，加盐酸3ml，置水中加热30分钟，立即冷却，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加氯仿2ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材0.3g，同法制成对照药材溶液；再取大黄酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液8μl，对照药材及对照品溶液各4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的砖胶H薄层板上，在30～60℃条件下，以15∶5∶1的石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏后，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同的红色斑点；

D.取本药物组合物制剂日用剂量2倍，剪碎，置锥形瓶中，加入甲醇20ml，冷浸12小时，滤过，滤液浓缩至10ml，作为供试品溶液；另取黄柏对照药材0.2g，同法制成对照药材溶液；再取盐酸小檗碱对照品，加乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以10∶1∶1∶1的醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点。

9、如权利要求1、2或3所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法中的含量测定包括如下测定方法：

取本药物组合物制剂日用剂量3倍，置冰箱中冷冻后，剪碎，取6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇20-40ml，称定重量，浸泡过夜，称定重量，用乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液作为供试品溶液；另精密称取蛇床子素对照品适量，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，精密吸取供试品溶液5μl，对照品溶液1μl与3μl，分别交叉点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以28-33∶1苯-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干；照薄层色谱法试验，进行荧光扫描，激发波长λ＝365mn，测量供试品与对照品吸收度积分值，计算，即得；

本药物组合物制剂日用剂量含蛇床子素C₁₅H₁₆O₃不得低于1.66mg。

10、如权利要求9所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法中的含量测定为包括如下测定方法：

取本药物组合物制剂日用剂量3倍，置冰箱中冷冻后，剪碎，取6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇30ml，称定重量，浸泡过夜，称定重量，用乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液作为供试品溶液；另精密称取蛇床子素对照品适量，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，精密吸取供试品溶液5μl，对照品溶液1μl与3μl，分别交叉点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以30∶1苯-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干；照薄层色谱法试验，进行荧光扫描，激发波长λ＝365mn，测量供试品与对照品吸收度积分值，计算，即得；

本药物组合物制剂日用剂量含蛇床子素C₁₅H₁₆O₃不得低于1.66mg。

11、如权利要求1、2或3所述的药物组合物在制备治疗萎缩性阴道炎的药物中的应用。

12、如权利要求11所述的药物组合物的应用，其特征在于所述的治疗萎缩性阴道炎是指能抑制炎症、具有类雌激素样作用、镇痛作用、止痒作用、降低血液粘度或抑菌作用。

13、如权利要求11所述的药物组合物的应用，其特征在于所述的治疗萎缩性阴道炎是指能活血化瘀或具有补肾作用。