CN1269828A

CN1269828A - 恶臭味的减少

Info

Publication number: CN1269828A
Application number: CN98808901A
Authority: CN
Inventors: R·苏奇亚; B·R·彼得森
Original assignee: Novo Nordisk AS
Current assignee: Novo Nordisk AS
Priority date: 1997-08-14
Filing date: 1998-08-14
Publication date: 2000-10-11
Anticipated expiration: 2018-08-14
Also published as: DE69828175T2; WO1999009143A1; CN1136309C; AU8623498A; JP2001514881A; CA2300372A1; DE69828175D1; ATE284953T1; EP1007644B1; ES2235346T3; US6080391A; EP1007644A1; AU746146B2

Abstract

本发明涉及利用一种或多种氧化还原酶与一种介体混合减少恶臭味,也对减少恶臭味的组合物和含有这种组合物的产品提出了权利要求。

Description

恶臭味的减少

发明领域

本发明涉及利用氧化还原酶除去恶臭味，减少恶臭味的组合物和含有本发明的组合物的产品。

发明背景

现已确认恶臭味可以由许多化合物，如挥发性含硫化合物(VSC)、含氮化合物，短脂肪酸等引起。

挥发性含硫化合物(VSC)

臭味：

以从口腔中发出的臭味形式存在的恶臭味典型地是挥发性含硫化合物(VSC)的结果。VSC类是由口腔中的厌氧性革兰氏阳性细菌降解鼠尾草属植物中的含硫蛋白质底物而产生的。VSC类被释放入口腔环境，在那里它们与从肺中呼出的空气混合导致从口中散发出讨厌的气味。上述蛋白质底物可能由于摄入食物，如肉、鱼、调味品、蔬菜、奶产品。挥发性含硫化合物例如二烯丙基硫醚(一种硫醚)可以在例如大蒜中被找到，已知它们能产生令人反感的臭味。

糊味：

当热处理某些食物，如UHT-处理牛奶时，会产生由挥发性硫化物引起的“糊”味。

VSC类的实例是硫化氢(H₂S)，二甲基硫醚(CH₃SCH₃)，二烯丙基硫醚，和被认为是最有效力的甲基硫醇(CH₃SH)也叫做甲硫醇的VSC。

含氮化合物

含氮化合物如氨、吲哚，粪臭素和许多胺能产生难闻的气味也是熟知的。胺如三甲基胺产生鱼腥味。

尿布等：

含氮化合物的来源是尿、粪便和血液，它们产生一种难闻的气味，这一点多数人从染污的尿布或其它卫生产品，如成人失禁产品、训练短裤、妇女卫生巾、棉塞等已知道。

来自尿布等的难闻的气味典型地是存在于会阴处(在肛门和外生殖器之间的区域)皮肤上的细菌，特别是大肠杆菌，粪肠球菌和奇异变形菌的生长的结果。变形菌属的所有菌株在它们的代谢过程中形成脲酶。脲酶具有迅速将尿素(人尿中含大约2％)分解成产生讨厌气味的氨。

短脂肪酸

短脂肪酸，如丁酸(C₄)产生一种恶臭味也是已知的。在将鞋子穿了暖和的一整天后，大多数人都知道汗脚的臭味，这是由短脂肪酸如丁酸引起的。

此外，用含有脂肪酶的洗衣房洗涤剂洗过的衣服有时带有一种类似于婴儿口水气味的令人生厌的气味。据信这种恶臭味是当织物上含有甘油三脂的污斑的脂肪酶降解产物在洗涤和漂洗期间未被完全除去而产生的。所述的降解产物由短链游离脂肪酸(例如丁酸)组成。

恶臭味的去除或减少

文献中已经叙述了许多气味控制剂和体系。例如碳，如以活性炭的形式存在，是以能吸附散发气味的分子的能力而被熟知的。

美国专利第5,593,398号公开了具有恶臭味肠胃内气体过滤用多孔物质的防护性内衣，所说的过滤用多孔物质包含活性炭作为恶臭控制剂。

沸石材料已经表现出对与体液有关的恶臭味的有效性。

日本专利申请第02068117号涉及除臭的工具例如含有沸石、铜和活性炭的尿布。

美国专利第4,026,814号涉及一种肥皂，其在储存期间具有降低的产生恶臭味的趋势。这种皂包括一种酶体系，它含有一种氧化还原酶如醇脱氢酶和/或醛脱氢酶，和一种选自烟酰胺-腺嘌呤-二核苷酸和/或烟酰胺-腺嘌呤-二核苷酸磷酸酯的氢受体。

日本专利申请第9038183号(Takasago香料有限公司)涉及一种除臭组合物，它能除去口臭、冰箱、宠物等的气味。该组合物由酚类化合物和一种能氧化酚类化合物的酶所组成。作为优选的酚类化合物，可提到的有下列二酚类化合物：儿茶酚、儿茶素化合物、酪氨酸和绿原酸。作为氧化性酶可提到的有酪氨酸酶、过氧化物酶、葡糖氧化酶和漆酶。优选的酶是属于Agrinus bisporus微白变种和粉状牛肝菌(Boletus pulverulentus)蘑菇或如苹果、梨(gobou)的水果来源的酶。

美国专利第3,903,259号涉及一种除去尿布和人体排泄物臭味的方法，包括向尿布或排泄物施用一种化学组合物，其最简单的形式是由酸性物质、抗菌素物质和溶剂所组成。浸渍组合物也可含有螯合剂和润湿剂。对尿布的处理导致从排泄物中产生的讨厌的气味明显减少，从而使更换分选的尿布变得不太令人生厌。

美国专利第3,935,862号公开了一种一次性尿布，其中包含抑制氨形成的物质，包括一种氨基多元羧酸化合物，其量为每平方英寸至少0.001克。

美国专利第4,385,632号涉及一种收集血液，粪便和尿的杀菌吸附体，它含有一种水溶性的铜盐，可以阻碍细菌的生长，防止尿分解为氨和配位结合氨以便防止令人生厌气味的发生。

美国专利第4,551,187号叙述了一种除臭体清洁组合物，它是一种液体或固体不透明棒，包含一种洗涤剂和一种能减少身体(皮肤和/或头发)上产生气味的细菌群的特异性碳水化合物，没有使用抗微生物剂。基本的除臭剂是对皮肤和/或头发上产生气味的细菌有特异的有效性的一组碳水化合物，它们是甘露糖、葡萄糖和它们的低聚体，即二聚体、三聚体和四聚体。

美国专利第5,395,555号涉及一种地毯、毛毯和纺织品的含水的清洁组合物，尤其适用于减少尿渍的恶臭味。该组合物包括a)约4.23％至约4.28％(重量)的二亚乙基三胺五乙酸钠盐或钾盐，乙二胺四乙酸、N-羟乙基乙二胺三乙酸或它们的混合物；b)约1.95％至约2.05％(重量)的二亚乙基三胺五乙酸、乙二胺四乙酸，N-羟乙基乙二胺三乙酸、或它们的混合物；c)约0.82％至0.98％的十二烷基硫酸钠；d)约0.49％至0.59％(重量)的一种式CF₃(CF₂)_nCH₂OC0C(CH₃)＝CH₂的丙烯酸酯共聚物，式中n是6至8；e)约0.22％至约0.27％(重量)的辛基苯氧基聚乙氧基乙醇；f)约0.35％至约0.5％(重量)的香料；和g)约0.00003％至约0.05％(重量)的防腐性1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮。

发明概述

本发明的目的是提供能减少恶臭味的改良组合物和含有这种组合物的产品。

在本发明的第一个方面涉及使用一种或多种氧化还原酶与一种介体混合以便减少恶臭味。

本发明的目的也是提供减少恶臭味的组合物，它包含一种或多种氧化还原酶和一种介体，如口腔护理和洗涤剂组合物。

此外本发明涉及一种含有本发明组合物的产品。预期的产品包括口腔护理产品，如牙粉、卫生产品，如尿布等，其中具有掺入体液材料中的减少恶臭味的组合物，食品、如UHT-牛奶、盥洗产品和个人护理产品及洗涤剂如固体和液体洗涤剂。

表和图的简述

图1表示在酶反应前的对照气相色谱谱图(无酶，无PPT)。峰1.28-1.61表示甲硫醇(CH₃SH)的存在。

图2表示与酶和PPT反应后获得的气相色谱谱图。

发明详述

本发明的目的是提供能减少恶臭味的改良组合物和含有这种减少恶臭味的组合物的产品。

在本发明的上下文中，术语“恶臭味”是指一种由下列类型化合物所引起的令人生厌的难闻的气味和/或味道/味：VSC类、含氮化合物和短脂肪酸，或它们的结合体。

发明人已经发现通过使用一种或多种氧化还原酶结合一种介体能达到除去或至少是减少恶臭味的目的。

术语“减少恶臭味”或“减少的恶臭味”是指由一个测试小组测定的恶臭味与尚未暴露于一种或多种氧化还原酶和介体的相应的空白样品相比较，被评价为明显地减弱了。

不受任何理论限制，据信介体有几分地连接到挥发性硫化合物和含氮化合物上形成一种不具有难闻的气味的反应产物。另一种理论是介体介导两种或多种挥发性化合物连接起来形成一种没有或减少的难闻的气味的化合物。

氧化还原酶

氧化还原酶(即按照生物化学和分子生物学国际联合会的推荐(1992)以酶分类号E.C.1(氧化还原酶)分类的酶)是催化氧化还原反应的酶。

根据本发明三种类型的氧化还原酶是特别被期待的：

a)漆酶或相关的酶如酪氨酸酶覆盖了那些对分子氧(O₂)起作用和产生水(H₂O)而不需要任何过氧化物(如H₂O₂)的酶。

b)氧化酶覆盖了那些对分子氧(O₂)起作用并产生过氧化物(H₂O₂)的酶，和

c)过氧化物酶覆盖了对过氧化物(例如H₂O₂)起作用并产生水(H₂O)的酶。

优选的氧化还原酶是微生物来源的酶，特别是重组体和/或没有任何副反应活性的基本上纯化的酶。微生物酶优于植物和水果酶，因为微生物酶更容易用本领域熟知的重组技术大量生产。

在本发明的上下文中微生物酶是指从细菌，丝状真菌或酵母衍生得到的酶。

在作用于作为受体的氧(O₂)的酶情况下，所述的氧可以是空气供给的分子氧。

根据本发明包含三种类型的酶的结合体的酶体系也是被期待的。酶体系可以由例如漆酶或相关的酶和氧化酶；漆酶或相关的酶和过氧化物酶；漆酶或相关的酶和氧化酶和过氧化物酶；或氧化酶和过氧化物酶所组成。

漆酶和相关的酶

在能够氧化正被讨论的VSC类和氮化合物的漆酶和相关的酶中特别被期待的酶的实例是单-和二酚氧化酶，如儿茶酚氧化酶(E.C.1.10.3.1)，漆酶(E.C.1.10.3.2)，酪氨酸酶(E.C.1.14.18.1)(E.C.1.10.3.1)，和胆红素氧化酶(E.C.1.3.3.5)。

漆酶氧化邻苯二酚以及对苯二酚形成它们相应的醌。酪氨酸酶或儿茶酚氧化酶催化两个不同的反应：邻苯二酚中的单酚的羟基化和在邻醌中邻苯二酚的氧化。

所用的漆酶可以是从多孔菌属菌种的菌株，特别是Polyporuspinsitus(也叫做绒毛栓菌)或变色多孔菌的菌株，或毁丝霉属菌种的菌株，例如嗜热毁丝霉或丝核菌属的菌株，特别是Rhizoctoniapraticola或立枯丝核菌的菌株，或Scytalidium sp.的菌株，特别是S.thermophilium，或Pyricularia sp.的菌株，特别是Pyricularia oryzae，或鬼伞属菌种的菌株，如灰盖鬼伞菌株衍生得到的。

漆酶也可以是从真菌，如金钱菌属，层孔菌属、香菇属、侧耳属、曲霉属、脉孢菌属，柄孢壳属，射脉菌属，例如射脉菌(WO 92/01046)，革盖菌属菌种例如毛革盖菌(JP 2-238885)和葡萄孢属衍生得到的。

在本发明的一个优选的实施方案中，漆酶是从毁丝霉属菌种的菌株衍生的，特别是在WO 95/33836(Novo Nordisk)中叙述的嗜热毁丝霉漆酶。

胆红素氧化酶可以是从漆斑菌属菌种的菌株，如疣孢漆斑菌菌株衍生得到的。

过氧化物酶

为获得所需要的结果，即除去或至少减少恶臭味，过氧化物酶必须与H₂O₂或氧化酶结合使用。

适用的过氧化物酶可以在作用于作为受体的过氧化物的一组酶中找到，例如E.C.1.11.1，特别是过氧化物酶(E.C.1.11.1.7)。

与作为受体的过氧化物起作用的适用的酶的特定的实例包括从真菌鬼伞属菌种的菌株，尤其是灰盖鬼伞或长根鬼伞菌株衍生的过氧化物酶，或是从细菌芽孢杆菌属菌种的菌株，尤其是短小芽孢杆菌菌株衍生的过氧化物酶。

根据本发明卤代过氧化物酶也是适用的。卤代过氧化物酶形成一类在过氧化氢存在下能将卤化物(Cl^-、Br^-、I^-)氧化成相应的次卤酸的酶。适用的卤代过氧化物酶是从弯孢属菌种，特别是从小疣状弯孢衍生的酶。

氧化酶

产生过氧化物(H₂O₂)的氧化酶必须与过氧化物酶结合使用才能除去或至少减少恶臭味。

适用的氧化酶包括葡糖氧化酶(E.C.1.1.3.4)，己糖氧化酶(E.C.1.1.3.5)，L-氨基酸氧化酶(E.C.1.4.3.2)、木糖醇氧化酶，半乳糖氧化酶(E.C.1.1.3.9)，吡喃糖氧化酶(E.C.1.1.3.10)，醇氧化酶(E.C.1.1.3.13)。

如果使用L-氨基酸氧化酶，这种酶可以是从木霉属菌种如Trichoderma harzianum衍生得到的，如在WO 94/25574(Novo NordiskA/S)中叙述的L-氨基酸氧化酶，或从绿色木霉衍生的酶。

一种适用的葡糖氧化酶可以是来自曲霉属菌种如黑曲霉的菌株，或从枝孢属菌种的菌株，尤其是Cladosporium oxysporum衍生的酶。

从红海草皱波角叉菜(常称之为角叉菜)(Sullivan和Ikawa，(1973)，生物化学和生物物理学报(Biochim.Biophys.Acta)309卷，第11-22页；Ikawa，(1982)酶学方法(Meth.in Enzymol.)89，碳水化合物代谢D部分145-149页)衍生的己糖氧化酶能氧化广谱的碳水化合物，如D-葡萄糖、D-半乳糖、麦芽糖、纤维二糖、乳糖、D-葡萄糖6-磷酸酯、D-甘露糖、2-脱氧-D-葡萄糖、2-脱氧-D-半乳糖、D-岩藻糖、D-葡糖醛酸和D-木糖。

红海草Iridophycus flaccidum也很容易产生可提取的己糖氧化酶，它能氧化几种不同的单-和二糖化物(Bean和Hassid，(1956)，生物化学杂志，(J.Biol.Chem.)218卷，第425页；Rand等人(1972，食品科学杂志(J.of Food Science)37卷，第698-710页)。

另一组适用的酶是木糖醇氧化酶(见例如JP 80892242)，它在氧存在下氧化木糖醇、D-山梨糖醇、D-半乳糖醇、D-甘露糖醇和D-阿糖醇。木糖醇氧化酶能够从链霉菌属菌种(例如链霉菌IKD 472，FERMP-14339)的菌株获得。所述酶的最适pH为7.5并且在pH5.5至10.5和最高为65℃的温度下是稳定的。

在减少从口腔中发出的恶臭味情况下，例如通过在口腔护理产品中掺入一种氧化还原酶，较有利的是使用在口腔中的主要pH下，即在pH5.0至9.0，优选pH6.0至8.5，特别是在pH6.4至7.4之间于25℃至40℃温度下是基本上具有活性的酶。

术语“基本上具有活性的”酶在本发明的上下文中是指酶的相对活性(pH最适值在同样条件下定义为100％)为高于30％，较好是50％，更好为超过70％，如80％，和在最好情况下于最适pH下高至约100％的活性。

介体

根据本发明，一种或多种氧化还原酶是与一种适宜的氧化还原介体结合使用的。所谓的“氧化还原介体”有时在文献中叫做“增强剂”。在本发明上下文中将使用术语“介体”。

“介体”是能增强氧化还原酶活性的试剂。

介体可以是酚类介体或非酚类介体。优选哪种介体取决于目的。如果本发明的概念将被用于口腔护理或食品，介体应优选是无毒的。

能增强氧化还原酶活性的介体的实例包括在WO 95/01426(在此合并作参考)中叙述的化合物，由下列通式I表述：

R₁至R₁₀和基因A的定义可在WO 95/010426中找到(见第9至11页)。

在上面式I中特别期待的化合物包括下列化合物：2，2′-连氮基-二(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸酯)(ABTS)；6-羟基-2-萘甲酸，7-甲氧基-2-萘酚；7-氨基-2-萘磺酸；5-氨基-2-萘磺酸；1，5-二氨基萘；7-羟基-1，2-萘咪唑；10-甲基吩噻嗪；10-吩噻嗪-丙酸(PPT)；N-羟基琥珀酰亚胺-10-吩噻嗪-丙酸酯；联苯胺；3，3′-二甲基联苯胺；3，3′-二甲氧基联苯胺；3，3′，5，5′-四甲基联苯胺；4′-羟基-4-联苯基羧酸；4-氨基-4′-甲氧基茋；4，4′-二氨基茋-2，2′-二磺酸；4，4′-二氨基二苯基胺；2，7-二氨基芴；4，4′-二羟基-联苯；三苯基胺；10-乙基-4-吩噻嗪羧酸；10-乙基吩噻嗪；10-丙基吩噻嗪；10-异丙基吩噻嗪；甲基-10-吩噻嗪丙酸酯；10-苯基吩噻嗪；10-烯丙基吩噻嗪；10-吩噁嗪丙酸(POP)；10-(3-(4-甲基-1-哌嗪基)丙基)吩噻嗪；10-(2-吡咯烷乙基)吩噻嗪；10-甲基吩噁嗪；亚氨基茋；2-(对氨基苯基)-6-甲基苯并噻唑-7-磺酸；N-亚苄基-4-联苯基胺；5-氨基-2-萘磺酸；7-甲氧基-2-萘酚；4，4′-二羟基二苯甲酮；N-(4-(二甲基氨基)亚苄基)-对-茴香胺；3-甲基-2-苯并噻唑啉酮(4-(二甲基氨基)亚苄基)腙；2-乙酰基-10-甲基吩噻嗪；10-(2-羟乙基)吩噻嗪；10-(2-羟乙基)吩噁嗪；10-(3-羟丙基)吩噻嗪；4，4′-二甲氧基-N-甲基-二苯基胺；香草醛连氮。

其它被期待的介体包括4-羟基苯甲酸；L-酪氨酸，丁香酸，阿魏酸，芥子酸，绿原酸，咖啡酸和它们的酯。

进一步的实例包括在WO 96/10079(在此合并作参考)中叙述的有机化合物，如下列式II所示：其中式A是一个如-D，-CH＝CH-D，-CH＝CH-CH＝CH-D，-CH＝N-D，-N＝N-D，或-N＝CH-D的基团，其中D选自-CO-E，SO₂-E，-N-XY，和-N⁺-XYZ，其中E可以是-H，-OH，-R，或-OR，并且X和Y和Z可以是相同的或不同的，选自-H和-R；R是C₁-C₁₆烷基，优选C₁-C₈烷基，该烷基可以是饱和的或不饱和的，支化或未支化的和选择性地被羧基、磺基或氨基取代的；B和C可以是相同的或不同的，选自C_mH_2m+1；1≤m≤5。

由上面式I覆盖的具体化合物是乙酰丁香酮，丁香醛；丁香酸甲酯，丁香酸，丁香酸乙酯，丁香酸丙酯，丁香酸丁酯，丁香酸己酯，丁香酸辛酯和3-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)丙烯酸乙酯。

本发明概念的应用

本发明的概念/原理能被用于多种场合。

糊味

本发明的原理也可以被用来除去糊味，糊味已知是与例如UHT-处理的奶有关的问题。

兽皮和皮肤的脱毛

在兽皮和皮肤的脱毛过程中通常使用大量的硫化物。这会产生一种由VSC类引起的难闻的气味。根据本发明可以减少这些VSC类。

烫发

烫发包括打断和/或恢复赋予角质头发纤维的形状的二硫化物交联键。为了这一目的可使用许多有机还原剂如巯基乙酸、硫代乙酸和其它含硫化合物。烫发过程产生一种由VSC类引起的恶臭味和作为副产物形成的胺。根据本发明可以减少这种恶臭味。

尿布

通过将一种或多种上文所述的氧化还原酶和介体掺入包括尿布、失禁产品、内衣中的过滤用多孔物质、服装吸汗垫布等的卫生产品中，一种或多种氧化还原酶和一种介体相结合的去除恶臭味的作用也能被用于体液和体气的气味控制。

洗涤剂

根据本发明向一种如洗衣粉、液体洗涤剂等的洗涤剂组合物中加入一种或多种氧化还原酶和一种介体也是被期待的。短脂肪酸所引起的剩余的恶臭味可以用这种方法来减少。减少恶臭味的体系也可以作为软化剂(即软化织物的组合物)的一部分在洗涤周期中加入。对于如洗碟剂的其它洗涤剂也同样适用。

洗涤剂组合物可以，例如，被组配成手洗和机洗洗衣房洗涤剂组合物包括洗衣添加剂组合物和适用于有污渍织物的预处理的组合物、添加了漂洗剂的织物软化剂组合物，和适用于普通家用硬表面清洗操作和洗碟操作的组合物。

洗涤剂组合物含有脂酶，并且通常还含有其它酶活性如蛋白酶活性，如下文将进一步叙述的，和表面活性剂。此外，它可选择性地含有助洗剂、抑泡剂、软化剂、染料转移抑制剂和常规上用于洗涤剂中的其它组分如悬污剂、释污剂、荧光增白剂、磨蚀剂、杀菌剂、晦暗抑制剂、着色剂、和/或包胶的或未包胶的香料。

洗涤剂组合物可是液体、糊状物、凝胶体、棒状物或颗粒形式。pH值(使用浓度下水容液中测得)通常是中性或碱性，例如在7-11范围中。根据本发明的颗粒组合物也可以是“高密度形式”的，即它们可以具有比常规的颗粒洗涤剂相对更高的密度，即550至950克/升。

掺加在洗涤剂组合物中的脂酶或选择性的另一种酶，通常是以0.00001％至2％的酶蛋白(按组合物重量计)，优选地是以0.0001％至1％的酶蛋白(按组合物重量计)，更好的是以0.001％至0.5％酶蛋白(按组合物重量计)，最优选的是以0.01％至0.2％酶蛋白(按组合物重量计)的量掺入洗涤剂组合物中。

脂酶蛋白的量可以是每克洗涤剂0.001-10毫克或每升洗涤液0.001-100毫克。更具体地说，脂酶可以按WO 97/04079、WO 97/07202、WO 97/41212和PCT/DK 97/00345中所叙述的掺入洗涤剂组合物中。

表面活性剂体系：

表面活性剂体系可以包含非离子、阴离子、阳离子、两性和/或两性离子表面活性剂。表面活性剂体系优选地由阴离子表面活性剂或阴离子表面活性剂和非离子表面活性剂，例如，50-100％的阴离子表面活性剂和0-50％的非离子表面活性剂的结合体组成。洗衣房洗涤剂组合物除了在此已经叙述过的那些非离子和/或阴离子表面活性剂以外还可以含有阳离子、两性、两性离子和半极性表面活性剂。

表面活性剂代表性地以从0.1％至60％(重量)的量存在，表面活性剂的一些实例在下面叙述。

非离子表面活性剂：

表面活性剂可以含有烷基酚的聚烷基环氧化物(例如聚环氧乙烷)缩合物。烷基可以在直链或支链中含有大约6至大约14个碳原子。环氧乙烷可以等于每摩尔烷基酚大约2至大约25摩尔的量存在。

表面活性剂也可以含有脂肪伯醇和仲醇与大约1至大约25摩尔的环氧乙烷的缩合产物。脂肪醇的烷基链可以是直链或支链，和通常含有大约8至大约22个碳原子。

此外，非离子表面活性剂可以含有烷基酚的聚环氧乙烷缩合物，脂肪伯醇和仲醇与大约1至大约25摩尔的环氧乙烷的缩合产物，烷基多糖类和它们的混合物。最优选的是具有3至15个乙氧基的C₈-C₁₄烷基酚乙氧基化物和具有2至10个乙氧基的C₈-C₁₈醇乙氧基化物(优选平均值为C₁₀)，和它们的混合物。

阴离子表面活性剂：

适用的阴离子表面活性剂包括烷基烷氧基化的硫酸盐，它们是式RO(A)_mSO₃M的水溶性盐或酸，其中R是未取代的C₁₀-C₂₄烷基或具有C₁₀-C₂₄烷基组分的羟基烷基，优选地是C₁₂-C₂₀烷基或羟基烷基，更优选地是C₁₂-C₁₈烷基或羟基烷基，A是乙氧基或丙氧基单元，m大于0，代表性地在约0.5和约6之间，更优选地是在约0.5和约3之间，和M是H或阳离子，它可以是，例如，金属阳离子(例如，钠、钾、锂、钙、镁等)，铵或取代的铵阳离子。烷基乙氧基化的硫酸盐以及烷基丙氧基化的硫酸盐在此都是被期望的。取代的铵阳离子的具体实例包括甲基-、二甲基-、三甲基-铵阳离子和季铵阳离子如四甲基铵和二甲基哌啶鎓阳离子和从烷基胺如乙基胺、二乙基胺、三乙基胺、它们的混合物等所衍生的那些铵阳离子。

其它适用的阴离子表面活性剂包括烷基硫酸盐表面活性剂，它们是式ROSO₃M的水溶性盐或酸，其中R优选地是C₁₀-C₂₄烃基，优选地是烷基或具有C₁₀-C₂₀烷基组分的羟基烷基，更优选的是C₁₂-C₁₈烷基或羟烷基，和M是H或阳离子，例如，碱金属阳离子(例如，钠、钾、锂)、或铵或取代的铵。

其它阴离子表面活性剂包括下列物质的盐(包括，例如，钠、钾、铵和取代的铵盐如单-、二-和三乙醇胺盐)，这些物质是皂、C₈-C₂₂伯或仲链烷磺酸盐、C₈-C₂₄烯烃磺酸盐，通过将碱土金属柠檬酸盐的热解产物磺化制得的磺化的多元羧酸。

烷基苯磺酸盐是适用的，特别是线性(直链)烷基苯磺酸盐(LAS)，其中烷基优选地含有10至18个碳原子。

洗衣房洗涤剂组合物代表性地含有大约1％至大约40％，优选地大约3％至大约20％(重量)的这种阴离子表面活性剂。

助洗剂体系：

根据本发明的组合物可以进一步含有助洗剂体系。任何常规的助洗剂体系都适用于本发明，包括硅铝酸盐材料，硅酸盐，多元羧酸盐和脂肪酸，如乙二胺四乙酸盐(EDTA)的材料、金属离子螯合剂如氨基膦酸酯。磷酸盐助洗剂也能被用于本发明。

适用的助洗剂可以是一种无机离子交换材料，通常是一种无机水合的硅铝酸盐材料，更具体地说是一种水合的合成沸石如水合的沸石A，X，B，HS或MAP。

助洗剂盐通常是以5％至80％(以组合物重量计)的量存在的。对液体洗涤剂来说优选的助洗剂的量是5％至30％。

其它酶

洗涤剂组合物除含有脂酶外也可以含有能提供清洁性能和/或织物护理好处的其它酶，例如蛋白酶、脂酶、角质酶、淀粉酶、纤维素酶、过氧化物酶、氧化酶(例如漆酶)。

适用的蛋白酶包括那些从动物、植物或微生物来源的蛋白酶。微生物来源的是优选的。包括化学或遗传学上修饰的突变体。蛋白酶可以是丝氨酸蛋白酶、优选碱性微生物蛋白酶或胰蛋白酶样蛋白酶。碱性蛋白酶的实例是枯草杆菌蛋白酶，特别是从芽孢杆菌衍生的，例如Novo枯草杆菌蛋白酶、Carlsberg枯草杆菌蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶309、枯草杆菌蛋白酶147和枯草杆菌蛋白酶168(在WO 89/06279中叙述)和它们的变体。

漂白剂：

洗涤剂组合物(特别是在粒状洗涤剂情况下)也可以含有漂白剂，例如含氧漂白剂或含卤素漂白剂。含氧漂白剂可以是过氧化氢释放剂如过硼酸盐(例如PB1或PB4)或过碳酸盐，或者例如它可以是过羧酸。颗粒大小可以是400-800微米。当含氧漂白剂存在时，含氧漂白化合物代表性地以约1％至约25％的量存在。

过氧化氢释放剂能与如四乙酰基乙二胺(TAED)、壬酰氧基苯磺酸酯(NOBS)、3，5-三甲基-己酰氧基苯磺酸酯(ISONOBS)或五乙酰基葡萄糖(PAG)的漂白活化剂结合使用。

含卤素漂白剂可以是，例如，次卤酸盐漂白剂，例如，三氯异氰脲酸和二氯异氰脲酸钠和钾和N-氯和N-溴链烷磺酰胺。这些物质通常是以0.5-10％(以制成品的重量计)的量加入，优选1-5％(重量)。

食品恶臭味

如鱼、肉等食品产生一种主要由含氮化合物引起的恶臭味。胺，已知产生一种鱼腥味的三甲胺能按照本发明减少。

废水/废气

本发明的概念也能用于从废水和废气中除去胺类和VSC类。

盥洗用品

将本发明的减少恶臭味的体系作为活性成分用在盥洗用品、沐浴用品，包括香波、调理剂、润肤液、膏霜、肥皂条、香皂和液体皂以及其它个人护理产品中也是被期望的。身体恶臭味的产生据信很大程度上是由于细菌对汗腺产物的作用。

清洁组合物

能够利用本发明原理的另一个应用在于将清洁组合物用于清洗地毯、毛毯、服装、纺织品等。

如在权利要求书中所定义的本发明的概念的实际体现能很容易地被技术人员所实施。本领域的技术人员能很容易地将本发明的概念用于已知需要控制或除去或减少恶臭味的特定类型产品中。

组合物

在第二个方面中，本发明涉及一种含有一种或多种氧化还原酶和一种介体的去除或减少恶臭味的组合物。

氧化还原酶和介体可以是在涉及本发明第一个方面的上文中所公开的那些氧化还原酶。

口腔护理

本发明的组合物可被用于口腔护理产品中。

能够除去从口腔中散发出的恶臭味的根据本发明的口腔护理产品可以具有任何适当的物理形式(即，粉末、糊状物、凝胶、液体、软膏、片剂等)。

“口腔护理产品”可被定义为一种能够通过例如，预防龋齿护理、预防牙斑和牙石的形成、除去牙斑和牙石、预防和/或治疗牙齿疾病、除去恶臭味等用于保持或改善人和动物的口腔卫生的产品。

口腔护理产品也包括用于清洁假牙、人造牙齿等的产品。

口腔护理产品的实例包括牙膏、牙霜、牙胶或牙粉、齿科药剂、嗽口水、刷牙前或后的漂洗组合物，口香糖、糖锭和糖果等。

牙膏和牙胶代表性地包括磨光材料，起泡剂、香味剂、润湿剂、粘合剂、增稠剂、甜味剂、增白/漂白/去污剂、水和选择性的酶。

嗽口液，包括牙斑清除液，代表性地包含水/醇溶液、香味剂、润湿剂、甜味剂、起泡剂、着色剂和选择性的酶。

产品

在本发明的第三个方面中本发明涉及包含本发明的清除或减少恶臭味的组合物的产品。

本发明的组合物可被用于口腔护理产品如牙粉、盥洗用品、洗涤剂、织物软化剂、食品中。

可期待的产品的其它实例包括卫生用品，如尿布、成人失禁产品、训练短裤、妇女卫生巾、棉塞；盥洗产品，如肥皂条等；除去由食物如牛奶等的燃烧气味的产品。

根据本发明，产品可以是一种单室或两室产品，在单室产品中氧化还原酶、介体和其它成分一起被保持在稳定化溶液中或保持在稳定的条件下(即使得无氧存在)。在两室产品中氧化还原酶和介体和其它成分分开保持在两个容器中。所述容器中的内容物在使用前混合。

方法和材料

材料：

酶：

漆酶

从嗜热毁丝霉(rMtL)(从Novo Nordisk可商购)得到的和在WO95/33836(Novo Nordisk)中所述的重组漆酶。

重组灰盖鬼伞漆酶(rCeL)

重组Polyporus pinsitus漆酶(rPpL)。

酪氨酸酶

从蘑菇/Sigma得到的酪氨酸酶T-7755。

过氧化物酶

重组灰盖鬼伞过氧化物酶(rCip)

辣根过氧化物酶I型/Sigma P-8125

辣根过氧化物酶XII型/Sigma P-8415

酸性辣根过氧化物酶：RZ 2.5，pI 4，5.3，5.85和6.0。不与苯氧肟酸琼脂糖结合。

试剂：

介体：10-吩噻嗪-丙酸(PPT)；10-吩噁嗪-丙酸(POP)；咖啡酸；绿原酸；L-酪氨酸；对羟基苯甲酸；丁香醛；丁香酸甲酯。

甲硫醇钠(从Fluka购买)

缓冲剂：在实施例中所示的pH下的Britten-Robinson缓冲剂。

气相色谱

柱：外部尺寸为6英尺×1/8英寸的装有40/60目carbopaokBHT-100的特氟龙柱(Supelco)。

检测器：火焰光度检测器(FPD)(Hewlett-Packard)

空气流：100毫升/分(350kpa)

H₂：75毫升/分(150kpa)

载气+配载气：30毫升/分(130kpa)

色谱条件

30毫升/分的氮气和氦气

进样器温度 150℃

检测器温度 200℃

起始炉温 35℃

起始时间 2.5分

升温速率 10℃/分

最终温度 140℃

方法

漆酶活性的测定(LAMU)

LAMU方法用来测定嗜热毁丝霉漆酶的活性。

漆酶(E.C.1.10.3.2)，对苯二酚：O₂氧化还原酶，在辅基中含有铜，用分子氧作为最终电子受体。大气氧被直接还原为2H₂O，在释放4个电子过程中，无过氧化氢作为中间体步骤。

漆酶将在有氧条件下催化丁香醛连氮氧化形成四甲氧基-偶氮二亚甲基醌。

酪氨酸酶活性

利用根据Duckworth，H.W.和Coleman，J.E.(1970)生物化学杂志(J.Biol.Chem.)245，1613-1625定义的酪氨酸酶活性和比活性来计算酶蛋白的量。

反应条件

底物：丁香醛连氮 19毫摩尔

缓冲剂：三羟甲基氨基甲烷缓冲剂 23毫摩尔

pH： 7.50

温度： 30℃

反应时间： 90秒

酶工作面积： 0.0016-0.0064 LAMU/毫升

波长： 530nm

水： MilliQ

单位定义

1LAMU是在给定的分析条件下每分钟转化1微摩尔丁香醛连氮的酶量。

特异性和灵敏性

检测极限LOD： 0.007 LAMU/毫升

定量极限LOQ： 0.07 LAMU/毫升

范围： 0.100-0.400 ABS/分。

试剂/底物

马来酸，1.0M

马来酸37％paM^*’800380 23.2克

软化水，MilliQ 至200毫升

在称重皿上称取23.2克马来酸和在不断搅拌下加入150毫升水。搅拌直至溶解。将溶液定量转移至一个200毫升的容量瓶中并加水至刻度。

按照分析^*’Merck

三羟甲基氨基甲烷缓冲剂1.0M；储备溶液

三羟甲基氨基甲烷Sigma T-1378 121.1克

软化水，MilliQ 至1升

在称重皿中称取三羟甲基氨基甲烷缓冲剂和在不断搅拌下加入800毫升水。搅拌直至溶解。将溶液定量转移至一个1升的容量瓶中并加水至刻度。

三羟甲基氨基甲烷缓冲剂25毫摩尔；pH7.50

三羟甲基氨基甲烷缓冲剂1.0M 25.0毫升

马来酸，1.0M 5.0毫升

软化水至1升

将pH调整至7.50±0.05

将50毫升1.0摩尔三羟甲基氨基甲烷缓冲剂(量筒)倒入一个1升的容量瓶中和加入大约700毫升水。再加入5毫升1M马来酸。调整pH至7.50±0.05并加水至刻度(pH不能用HCl来调整，因为会抑制对漆酶的作用)。

稀释介质

PEG 6000paM 807491 25.0克

Triton X-100，Sigma T-9284 5.0克

MilliQ水至 0.5升

在称重皿中称取25.0克PEG 6000和5.0克Triton X-100和在连续搅拌下加入400毫升水。搅拌直至溶解。

将溶液定量转移至一个0.5升的容量瓶中并加水至刻度。

丁香醛连氮，0.56毫摩尔，储备溶液

无水丁香醛连氮Sigma S-7896 10.0毫克

乙醇 96％ 50毫升

在一个50毫升的容量瓶中称取丁香醛连氮和加入50毫升乙醇。搅拌直至溶解(约3小时)。该试剂对光敏感，应保存于深色瓶中。

丁香醛连氮，0.28毫摩尔；48％乙醇

丁香醛连氮，0.56毫摩尔 25毫升

软化水，MilliQ 至50毫升

将25毫升0.56毫摩尔丁香醛连氮(充满移液管)转移至一个50毫升的容量瓶中，填充水至刻度。

试剂的检验：丁香醛连氮，0.056毫摩尔；48％乙醇，

丁香醛连氮，0.28毫摩尔 2毫升

乙醇，96％ 4毫升

软化水，MilliQ 至10毫升

溶液在用6％乙醇测量时应在360纳米处具有大约2.2的吸收度。

乙醇，6％

乙醇，96％，62.5毫升

软化水，MilliQ 至1000升

将62.5毫升96％的乙醇(量筒)转移至1升的容量瓶中，加水至刻度。

样品和标准品

对照

将分析与熟知的漆酶样品相比较，以便控制测定的水平。样品是代表性的漆酶批料。

未知样品

漆酶样品用稀释介质稀释至0.18 LAML/毫升的预期活性。在分析前将样品静置15分钟。

工作面积：0.07-0.28 LAMU/毫升

含有沉淀的其它样品在约3000转/分下离心10分钟。

步骤

制备试剂和标准品。将样品称重和稀释至0.18 LAMU/毫升的预期活性。

4毫升pH7.5的25毫摩尔的三羟甲基氨基甲烷缓冲剂在30℃预加热至少10分钟。加入100毫升样品。混合。加入300毫升0.28毫摩尔的丁香醛连氮，由此反应开始。混合。

将样品安放在光度计中，然后在光度计上读取530nm处的动力学顺序和计算出从t90秒-t60秒每分钟吸收度的变化。见下面表1。在每个样品之间光度计样品池用6％乙醇溶液冲洗。

三羟甲基氨基甲烷缓冲剂25毫摩尔；pH7.5(试剂6.3)	4.00毫升
三羟甲基氨基甲烷缓冲剂25毫摩尔；pH7.5(试剂6.3)	4.00毫升	加热，10分钟，30℃
酶	100毫升	加热，10分钟，30℃
酶	100毫升	混合

丁香醛连氮0.28毫摩尔(试剂6.6)	300毫升
丁香醛连氮0.28毫摩尔(试剂6.6)	300毫升	混合
读出t＝90秒，530纳米读数计算：t90秒-t60秒		混合
读出t＝90秒，530纳米读数计算：t90秒-t60秒		用6％醇漂洗

表1.漆酶步骤计算ΔABS×0.677×D＝LAMU/mL

\frac{ΔABS \times 4.4 \times 10^{- 3}}{0.065 \times 0.1} \times D = LAMU / mL

其中：ΔABS：每分钟吸收度变化4.4：总体积毫升数0.1：测定体积毫升数0.065：m摩尔消光系数10^-3：LAMU/升→LAMU/毫升D：进一步稀释

实施例

实施例1

嗅觉测试对照实验

进行对甲硫醇的感官试验。在Britton-Robinson缓冲剂，pH6.0中制备已知浓度的甲硫醇钠。将2.0毫升的每种溶液倒入20毫升玻璃瓶中。受过训练的实验对象给出评分。

如下表所示，当对样品给出0分或“无气味”时，超过95％的甲硫醇已被除去。

NaSCH₃	0.11(参照)	0.055	0.027	0.013	0.006	0.003
NaSCH₃	0.11(参照)	0.055	0.027	0.013	0.006	0.003	评分	4	4	3	2	1	1

评分：4：参照或气味作参照3：清楚的气味2：较弱气味1：非常弱气味0：无气味

实施例2

用漆酶和PTT作介体减少恶臭味(VSC)

将0.5微升15％的甲硫醇钠(CH₃SNa)(0.11毫摩尔)加入到置于一个封闭的50毫升容器中的10.0毫升40毫摩尔Britton-Robinson缓冲剂(pH6.0)中。

将500微摩尔PPT和5 LAMU/毫升嗜热毁丝霉漆酶加入到混合物中和在37℃温育30分钟。在温育过程中用手摇动反应混合物。

酶反应后，从容器中液面上空间抽取0.1毫升的气体样品并进行气相色谱分析。对照实验在没有漆酶和PPT下进行。

气相色谱-溴探表明在对照中于1分钟时的第一个峰(图1)是CH₃SH。

如从色谱(图1和图2)中可以看到的，在酶反应后CH₃SH峰完全消失，反映出甲硫醇恶臭味已经消失。

嗅探试验

甲硫醇(CH₃SH)具有特有的气味。在酶反应后通过对反应混合物进行嗅探来测试气味。恶臭味已经消失，这表明超过95％的CH₃SH被除去了。

实施例3

用漆酶和PPT和POP作介体减少恶臭味(VSC)

将2微升15％甲硫醇钠(0.11毫摩尔)加入到置于一个封闭的50毫升容器中的2.0毫升40毫摩尔Britton-Robinson缓冲剂中。

将嗜热毁丝霉漆酶和PPT或POP按照下表加入。混合物(总体积2.0毫升)在室温下用手摇动10分钟。评价恶臭味。

酶

介体500微摩尔

pH

恶臭味

0	无	5.5	+++强甲硫醇味
0	无	5.5	+++强甲硫醇味	0	无	6.0	+++强甲硫醇味
5 LAMU/毫升	PPT	5.5	+有些甲硫醇味	0	无	6.0	+++强甲硫醇味
5 LAMU/毫升	PPT	5.5	+有些甲硫醇味	0	PPT	5.5	+++强甲硫醇味
5 LAMU/毫升	POP	5.5	±无甲硫醇味	0	PPT	5.5	+++强甲硫醇味
5 LAMU/毫升	POP	5.5	±无甲硫醇味	0	POP	5.5	+++强甲硫醇味
5 LAMU/毫升	PPT	6.0	±无甲硫醇味	0	POP	5.5	+++强甲硫醇味
5 LAMU/毫升	PPT	6.0	±无甲硫醇味	0	PPT	6.0	+++强甲硫醇味
5 LAMU/毫升	POP	6.0	±无甲硫醇味	0	PPT	6.0	+++强甲硫醇味
5 LAMU/毫升	POP	6.0	±无甲硫醇味	0	POP	6.0	+++强甲硫醇味

PPT，POP和漆酶无气味

如从表中所见漆酶与介体结合显著地减少了VSC恶臭味。

实施例4

减少体外口臭(VSC)

从一个实验对象收集舌苔并在脑心浸液(BHI)介质中于37℃培养过夜。0.5毫升培养液与0.5毫升40毫摩尔Britton-Robinson缓冲剂，pH6.0在一个20毫升体积的玻璃容器中混合。根据下表将500微摩尔PPT或POP和5 LAMU/毫升嗜热毁丝霉漆酶加入到混合物中。将其于室温下用手摇动10分钟，评价恶臭味。

酶	介体500微摩尔	pH	恶臭味
酶	介体500微摩尔	pH	恶臭味	0	无	6.0	++强挥发性硫味
5 LAMU/毫升	PPT	6.0	+果味，很好闻的气味	0	无	6.0	++强挥发性硫味
5 LAMU/毫升	PPT	6.0	+果味，很好闻的气味	0	PPT	6.0	++强挥发性硫味
5 LAMU/毫升	POP	6.0	+果味，很好闻的气味	0	PPT	6.0	++强挥发性硫味
5 LAMU/毫升	POP	6.0	+果味，很好闻的气味	0	POP	6.0	++强挥发性硫味

实施例5

减少恶臭味(三甲基胺)

将5 LAMU/毫升嗜热毁丝霉漆酶和25微升三甲基胺加入到置于一个50毫升体积玻璃瓶中的10.0毫升的40毫摩尔Britton-Robinson缓冲剂，pH6.0中。瓶子用橡胶帽密封。加入500微升PPT介体使开始反应。37℃下反应时间为30分钟。反应过程中用手摇动瓶子。由一个3人小组评价恶臭味。

酶	介体500微摩尔	恶臭源	评分
酶	介体500微摩尔	恶臭源	评分	0	PPT	三甲胺	++明显的鱼腥味
5LAMU/毫升	PPT	三甲胺	±几乎无味	0	PPT	三甲胺	++明显的鱼腥味

PPT和漆酶单独不产生任何气味。

如从上表所见在经过漆酶和PPT介体的混合物处理后由三甲胺引起的恶臭味几乎全部消失了。

实施例6

减少恶臭味(短脂肪酸)

将5 LAMU/毫升嗜热毁丝霉漆酶和10微升丁酸加入到置于一个50毫升体积玻璃瓶中的10.0毫升40毫摩尔Britton-Robinson缓冲剂，pH6.0中。瓶子用橡胶帽密封。加入500微升PPT介体后反应开始。37℃下反应时间为30分钟。反应期间用手摇动瓶子。恶臭味由一个3人小组评价。

酶LAMU/毫升	介体500微摩尔	恶臭源	评分
酶LAMU/毫升	介体500微摩尔	恶臭源	评分	0	PPT	丁酸	++明显的气味
5	PPT	丁酸	+比无酶处理更小的气味	0	PPT	丁酸	++明显的气味

PPT和漆酶单独不产生任何气味。

实施例7

用各种介体减少恶臭味(VSC)

测试了去除由甲硫醇引起的恶臭味的能力，试验方法是

将1微升1.5％甲硫醇溶液(0.11毫摩尔)加入到置于一个封闭的20毫升玻璃瓶中的总体积为2.0毫升的20毫摩尔Britton-Robinson缓冲剂，pH6.5中。

加入5 LAMU/毫升嗜热毁丝霉漆酶和介体并于37℃反应30分钟。

反应条件：37℃，30分钟，反应期间用手摇动。

	无酶	嗜热毁丝霉漆酶5 LAMU/毫升
	无酶	嗜热毁丝霉漆酶5 LAMU/毫升	介体(500微摩尔)	嗅探评分	嗅探评价
无	++	++	介体(500微摩尔)	嗅探评分	嗅探评价
无	++	++	咖啡酸	++	-
绿原酸	++	-	咖啡酸	++	-
绿原酸	++	-	L-酪氨酸	++	+
对羟基苯甲酸	++	+	L-酪氨酸	++	+
对羟基苯甲酸	++	+	丁香醛	++	-
丁香酸甲酯	++	-	丁香醛	++	-
丁香酸甲酯	++	-	PPT	++	-

-：无甲硫醇味+：减少的甲硫醇味++：强甲硫醇味

实施例8

减少由UHT-奶产生的蒸煮味

对两个10毫升UHT-奶样品进行如下处理：

	绿原酸(毫摩尔)	漆酶(LAMU/升)	温度(℃)	时间(分)
	绿原酸(毫摩尔)	漆酶(LAMU/升)	温度(℃)	时间(分)	实验样品	0.1	10	40	30
对照	0.1	无	40	30	实验样品	0.1	10	40	30

所用的UHT-奶是在140℃下处理过的脱脂奶(可从Klφver MlkA.m.b.a.，Frederikcia，丹麦商购)。

所用的漆酶是从嗜热毁丝霉衍生的，活性：3760 LAMU/克(可从Novo Nordisk A/S，丹麦商购)。

也向样品中加入绿原酸作为介体。

使用一个Clark氧电极(Rank Brothers，GB)和Oximeter Oxi3000(Wissenschaftlische werksttten G.m.b.H.，DE)测得UHT-奶中氧浓度为0.94毫克/升。丙醛、丁醛、己醛、壬醛和二甲硫醚通过使用连接到气相色谱-质谱设备(Hewlett Packard G1800A GCD系统)上的顶空捕集(Büchi，带有一个清洗和捕集浓缩器自动进样器和样品袋加热器型Tekmar的Rotavapor R-134)的GC-MS(气/质谱)来鉴定。一种明显的蒸煮味由一组7个鉴定人来鉴定。

接下来的样品分析表明所有上述化合物在实验样品中已经消失，而在对照样品中仍然存在。

在实验样品中无蒸煮味被感觉小组鉴定出来，而在对照样品中仍觉察到很明显的蒸煮味。

实施例9

嗜热毁丝霉漆酶和蘑菇酪氨酸酶间的比较实验

A：将10微升0.15％甲硫醇钠溶液(0.11毫摩尔)与500微摩尔介体(最终浓度)(使用时为0.5％乌龙茶提取液)和20毫摩尔Britton-Robinson缓冲剂(最终浓度)，pH6.5在20毫升玻璃瓶中混合至总体积为2毫升。

将瓶子于37℃静置5分钟。评价恶臭味。

加入酶和根据下表使用介体。

介体(500微摩尔或5％)	剂量毫克酶蛋白/毫升	rMtL	酪氨酸酶
介体(500微摩尔或5％)	剂量毫克酶蛋白/毫升	rMtL	酪氨酸酶	绿原酸	0.005	0	3
	0.01	0	2	绿原酸	0.005	0	3
	0.01	0	2	丁香酸甲酯	0.1	0	4
乌龙茶提取液	0.1	0	3	丁香酸甲酯	0.1	0	4

评级4：参照或气味作参照3：清楚的气味2：较弱气味1：非常弱气味0：无气味

B：为替代甲硫醇钠使用1毫升的培养过的舌苔。从两个实验对象收集舌苔。并接种在BHI中(用氮气置换空气)。接种的舌苔在37℃下培养过夜。

结果如下。

介体	剂量毫克酶蛋白/毫升	rMtL	酪氨酸酶
介体	剂量毫克酶蛋白/毫升	rMtL	酪氨酸酶	绿原酸	0.1	2	3

如表中所显示的，按酶蛋白重量计rMt漆酶在去除恶臭味上比蘑菇酪氨酸酶更有效。

实施例10

rMt漆酶、蘑菇酪氨酸酶和介体的反应

将500微升介体(乌龙茶提取液为0.5％)、0.11毫摩尔甲硫醇钠，20毫摩尔Britton-Robinson缓冲剂，pH6.5以与实施例9中相同的量和在相同条件下进行混合。

在400纳米下测量Δ吸收度/分/毫克酶蛋白。

使用不同介体的结果列于下表。

Δ吸收度/分/毫克酶蛋白

	rMt漆酶	酪氨酸酶
	rMt漆酶	酪氨酸酶	绿原酸	21.8	1.49
丁香醛	0.16	0.016	绿原酸	21.8	1.49
丁香醛	0.16	0.016	丁香酸甲酯	1.04	0.015
乌龙茶提取液	1.35	0.03	丁香酸甲酯	1.04	0.015

如从表中所见rMt漆酶比蘑菇酪氨酸酶更有效地产生颜色，这说明rMt漆酶比蘑菇酪氨酸酶更有效地产生一种反应性邻醌化合物。

结果是通过于室温向0.11毫摩尔甲硫醇钠，500毫摩尔绿原酸和40毫摩尔Britton-Robinson缓冲剂，pH6.5中剂量加入0.01-0.2毫克/毫升酶蛋白得到的。

实施例11

rKt、rPp、rCc漆酶和蘑菇酪氨酸酶(Sigma)之间的比较

按照下表向实施例8A的混合物中加入酶。5分钟后于37℃由一个小组评价恶臭味。

供体(500微摩尔或0.5％)	剂量毫克酶蛋白/毫升	效果评级
		效果评级				rCcL	rPpL	rMtL	酪氨酸酶

绿原酸

0.01

0

评级4：参照或气味作参照3：明显气味2：较弱气味1：非常弱气味0：无气味

如表所示，不同的漆酶按酶蛋白重量计比蘑菇酪氨酸酶更有效地除去恶臭味。

rMt漆酶、蘑菇酪氨酸酶和供体的反应

500微摩尔介体(乌龙茶提液为0.5％)，0.11毫摩尔甲硫醇钠，20毫摩尔Britton-Robinson缓冲剂，pH6.5以与实施例9相同的量和在相同条件下混合。

在400钠米下测量Δ吸收度/分/毫克酶蛋白。

使用不同酶的结果列于下表。

Δ吸收度/分/毫克酶蛋白，在400nm下
Δ吸收度/分/毫克酶蛋白，在400nm下				rCcL	rPpL	rMtL	酪氨酸酶
绿原酸^*	7,01	21,6	26,2	rCcL	rPpL	rMtL	酪氨酸酶	1,04

如表所示，漆酶比蘑菇酪氨酸酶更有效地产生颜色，这说明漆酶比蘑菇酪氨酸酶更有效地产生一种反应性邻醌化合物。

实施例12

过氧化物酶和漆酶间的比较

10微升0.15％甲醇钠溶液(0.11毫摩尔)与500微摩尔绿原酸和20毫摩尔Britton-Robinson缓冲剂，pH6.5在20毫升玻璃瓶中混合至总体积为2.0毫升。在使用过氧化物酶情况下加入1毫摩尔过氧化氢。

将瓶子于37℃静置5分钟。评价恶臭味。

根据下表加入酶。

	毫克酶蛋白/毫升
	毫克酶蛋白/毫升					10^-3	10^-4	10^-5	10^-6

rMtL	-	+	N.D.	N.D.
rMtL	-	+	N.D.	N.D.	rCiP	-	-	+	+
辣根P-8125	-	-	-	+	rCiP	-	-	+	+
辣根P-8125	-	-	-	+	辣根P-8415	-	-	-	+
酸性辣根	-	-	-	+	辣根P-8415	-	-	-	+

气味评级：-：无气味+：有气味N.D.：未测

如表所示，在去除恶臭味上过氧化物酶与漆酶一样有效但所用浓度更低。

rMt漆酶和过氧化物酶与绿原酸的反应

在400钠米下测定含有500微摩尔绿原酸，1毫摩尔过氧化氢(只对过氧化物酶)，0.11毫摩尔甲硫醇钠，20毫摩尔Britton-Robinson缓冲剂(pH6.5)在室温下和含有不同酶的溶液的吸收度变化。过氧化物酶：

	Δ吸收度/分/毫克酶蛋白，在400nm下
	Δ吸收度/分/毫克酶蛋白，在400nm下				rCiP	辣根P-8125	辣根P-8415	酸性辣根
绿原酸	9480	11800	14200	18600	rCiP	辣根P-8125	辣根P-8415	酸性辣根

漆酶和酪氨酸酶：

	Δ吸收度/分/毫克酶蛋白，在400nm下
	Δ吸收度/分/毫克酶蛋白，在400nm下				rCcL	rPpL	rMtL	酪氨酸酶
绿原酸^*	7,01	21,6	26,2	1,04	rCcL	rPpL	rMtL	酪氨酸酶

如表所示，过氧化物酶比漆酶和蘑菇酪氨酸酶能更有效地产生颜色，这说明过氧化物酶更有效地产生反应性邻醌化合物。该表也说明漆酶比酪氨酸酶更有效地产生颜色。

Claims

1.将一种或多种氧化还原酶与一种介体混合用于减少恶臭味的应用。

2.根据权利要求1的应用，其中氧化还原酶是微生物来源的，如细菌、丝状真菌或酵母来源的。

3.根据权利要求1或2的应用，其中氧化还原酶是漆酶或相关的酶，氧化酶或过氧化物酶，或它们的混合物。

4.根据权利要求3的应用，其中氧化还原酶是漆酶，氧化酶或过氧化物酶。

5.根据权利要求3或4的应用，其中过氧化物酶是一种从毁丝霉属的菌种，特别是嗜热毁丝霉衍生的或从多孔菌属的菌种特别是P.pinsitus衍生的漆酶。

6.根据权利要求3或4的应用，其中氧化还原酶是一种从鬼伞属的菌种，特别是灰盖鬼伞衍生的过氧化物酶或是辣根过氧化物酶。

7.根据权利要求1至6的任一的应用，其中介体是酚类化合物或非酚类化合物。

8.根据权利要求1至7中任一的应用，其中介体是无毒性的。

9.一种含有一种或多种氧化还原酶和一种介体的减少恶臭味的组合物。

10.根据权利要求9的组合物，其中氧化还原酶是根据权利要求1至6中任一项的酶；介体是根据权利要求7至8中任一项的化合物。

11.根据权利要求9和10的组合物，进一步含有用于洗涤剂中的成分。

12.根据权利要求11的组合物，是一种含有脂肪酶作为活性成分的洗涤剂。

13.一种含有根据权利要求9至12中任一项的组合物的产品。

14.根据权利要求13的产品，是一种口腔护理产品，如牙粉，特别是牙膏或漱口剂。

15.根据权利要求14的产品，是一种卫生产品，如尿布、成人失禁产品、训练短裤、女用卫生巾、棉塞。

16.根据权利要求13的产品，是一种用于除去烧焦气味的产品。

17.根据权利要求13的产品，是一种盥洗产品，如香皂。