CN1269242A - 成骨生长肽药物组合物及制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种含成骨生长肽(Osteogenic Growth Peptide,OGP)的药物组合物。本发明的OGP是人工合成的,与血清中天然存在的OGP结构一致,该药物组合物具有促进成骨细胞、成纤维细胞增殖,促进机体成骨作用和提高骨小梁的密度,防止骨量丢失作用。在骨质疏松症的预防和治疗及骨折的治疗有广阔的应用前景。本发明提供了制备方法。
Description
本发明属生物制剂，具体涉及一种含成骨生长肽的药物组合物及制备方法和应用。
成骨生长肽(Osteogenic Growth Peptide)是近几年来在人和动物体内发现的一种能够促进骨细胞生长的14-氨基酸多肽，当机体骨折或骨髓损伤后，除了在骨折或受损骨髓的局部有成骨反应外，还伴有全身的成骨反应[Bab I，et a1.(1985)Calcif Tissue Int.37：551-555；Foldes J，et al.(1989)J Bone Miner Res.4：643-646].经深入的实验研究表明，愈合的骨髓组织能释放几种促进成骨因子进入血循环而致全身成骨反应增强，经研究证实并分离、提纯，有一种因子为成骨生长肽(Osteogenic Growth Peptide，OGP)[Bab I，et al.(1988)Endocrinology 123：345-352；Bab I，et al.(1992)EMBO J 11：1867-1873]。进一步的研究表明，OGP的氨基酸序列为ALKRQRGTLYGFGG，此序列在小鼠和人类是完全一致的，而且其作用特性也相同。
有关体外实验研究显示，人工合成的OGP(与血清中天然存在的OGP结构相一致)作用于成骨细胞系的ROS、MC3T3、E1和NH3T3成纤维细胞，具有促进成骨细胞和成纤维细胞增殖、碱性磷酸酶活性增高的作用。另外还发现当血清中OGP浓度超过某一临界点以后，其作用反而转为抑制，也就是说OGP的作用呈显双向表现。
有关体内实验报道和我们预实验研究显示，人工合成的OGP注人大鼠体内可促进成骨细胞增殖，促进机体成骨作用，提高骨小梁密度。
本发明的目的是提供具有下列结构通式的OGP多肽或其医药上可接受的盐的药物组合物：
R1-Ala-Leu-Lys-Arg-Glu-Arg-Gly-Thr-Leu-Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly-R2
其中R1代表选自CH3COO-或NH2-末端；R2代表-NH2或-OH末端。
其中所说的药物组合物是以OGP多肽作为活性成份与药用载体组成的，并且可以含OGP为0.01～99.99％与含药用载体为99.99％～0.01％的任意比例配成100％的组成。
可使用常规肽化学合成技术，以固相法或液相方法合成本发明的OGP的药物组合物中主要成分OGP，但较好是使用固相合成方法(例如参见Birr，C.，Aspect of the Merrifield Peptide Synthesis，Springer-Verlag，Heidelberg，1978；Stewart et al.，Solid Phase PeptideSynthesis，2nd.ed.，Pierce Chem.Co.，Rockford，IL，1984；Barany，G.and Merrifield R.B.in The Peptides，Vol.2；Gross，E.& Meienhoffer J.，eds.，Academic Press，New York，pp3-284，1979)。也可以重组DNA技术制得。
本发明的另一目的是提供了上述成骨生长肽(OGP多肽)的制备方法，该方法按照已设计好的和给定的氨基酸序列，利用适当的活化剂和缩合剂将经适当保护基团保护的肽链C末端氨基酸残基连接到固相载体上。其中所述的固相载体为二乙烯苯交联的聚苯乙烯、聚丙烯酰胺树脂、Kiseseguhr聚酰胺、控制孔径的玻璃纤维或小珠、纤维素、聚丙烯膜和丙烯酸包被的聚苯乙烯载体。优选的固相载体包括二乙烯苯交联的聚丙烯树脂、氯甲基树脂、羟甲基树脂、对位乙酰甲基树脂、二苯甲胺(BHA)树脂、4-甲基二苯甲胺(MBHA)树脂、4-(2′，-4′-二甲氧基苯基氨甲基)-苯氧基甲基树脂、2，4-二甲氧基苯甲氨胺树脂及(2，4-二甲氧基苯基-Fmoc-氨甲基)-苯氧基乙酰氨基-正亮氨酰-MBHA树脂(即Rink Amide MBHA树脂)。
优选的α-氨基酸的保护基团是9-芴甲氧羰酰基(Fmoc)保护基团。
当使用Fmoc系统进行固相合成时，可选用下列被保护的氨基酸残基：Fmoc-Leu，Fmoc-Thr(But)，Fmoc-Gly，Fmoc-Lys(Boc)，Fmoc-Gln，Fmoc-Tyr(But)和Fmoc-Arg(PMC)。当使用Boc系统进行固相合成时，可选用下列被保护的氨基酸残基：Boc-Lys(ClZ)，Boc-Thr(Bzl)，B0c-Leu，Boc-Gly，Boc-Arg(Tos)，Boc-Gln，Boc-Tyr(Brz)。
可使用肽化学合成领域内已知的各种偶联剂和偶联方法偶联各氨基酸残基，例如可使用二异丙基碳二亚胺(DIC)、二环己基碳二亚胺(DCC)进行直接偶联，或通过活性酯例如五氟苯酯，或使用Fmoc-氨基酸-羧酸酐。可以使用羟基苯骈三氮唑(HOBt)或7-氮杂羟基苯骈三唑(HOAt)或用2-(1H-苯骈三唑-1-基)，1，1，3，3-四脲六氟磷酸酯(HBTU)活化氨基酸。
可以用手工方法或合成仪完成上述人降钙素类似物多肽的合成，但为方便起见，最好使用可从市场上购得的多肽自动合成仪，例如由Applied Biosystems公司生产的ABI 430A型或ABI 431A型肽。在Fmoc合成系统中，首先将C端第一个氨基酸(C端Fmoc-Pro)装在含羟基树脂的反应器中，按照给定的氨基酸序列由C端逐个向N端延伸。其中用Fmoc保护各种氨基酸的α-氨基。各氨基酸的侧链保护基分别为：Thr用叔丁基(But)保护；Arg用Mtr保护；Lys用Boc保护；Tyr用But保护。使用HOBT和DCC活化各氨基酸的羧端，并完成氨基酸分子间的缩合。
合成完成后，用含有或不含还原剂(如巯基乙醇)的三氟乙酸水溶液将合成的OGP肽从树脂上切割下来并去除各保护基。可用过滤法或乙醚沉淀法分离得到粗肽。将所得产物的溶液冻干后，用凝胶过滤或反相高压液相层析法纯化所需的肽。
在Boc保护系统的固相合成中，典型的是使用PAM树脂。不同的是用Boc保护各种氨基酸α-氨基。氨基酸侧链保护基团分别是：Lys用氯苄氧羰(CL-Z)保护ε-氨基；Arg用甲苯磺酰基(Tos)保护，Thr用苄基(Bzl)保护侧链羟基；Tyr用BrZ保护。在去保护、中和、偶联的循环中，用TFA/二氯甲烷(DCM)除去保护基团(Boc)并用二异丙基乙胺(DIEA)/二氯甲烷中和。肽链缩合完成后，用含对甲酚(5-10％)的氟化氢(HF)，在0℃下处理1-2小时，将肽链从树脂上切下，同时除去所有保护基团。以10％-50％乙酸(含少量巯基乙醇)抽提肽，并进行多肽的氧化。冻干后进一步用分子筛Sephadex G10或Tsk-40f分离纯化，然后再经高压液相色谱C8柱纯化，得到HPLC纯的OGP多肽。
可用已知方法将按上述方法或以重组DNA技术制得的OGP肽制成其医药上可接受的盐，特别是碱加成盐。例如，可按本领域技术人员熟知的方法，用适当的碱处理这些肽，制得酸性氨基酸的碱加成盐。
可按制药领域已知的常规方法，将本发明的OGP制成适合临床上特定给药方式的药物组合物。例如可在本发明的降钙素类似物中加入适当的载体或稀释剂，如水、生理盐水、等渗葡萄糖溶液以制成可经胃肠道以外途径给药的溶液剂、注射剂、乳剂、滴鼻剂、滴眼剂。也可加入淀粉、乳糖、滑石粉、蔗糖、葡萄糖或甘油、液体石蜡、脂质体或明胶等赋形剂或载体，将本发明的OGP制成可经胃肠道途径给药的栓剂、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊剂或脂质体包裹剂。这些制剂中除含有活性成分和适当的载体或赋形剂外，还可根据需要添加其他一些辅助成分，例如一种或多种稀释剂、填充剂、乳化剂、防腐剂、表面活性剂、吸收促进剂、缓冲剂、香味剂及着色剂。
本发明的再一个目的是提供上述药物组合物在人和哺乳动物体中具提高成骨细胞，成纤维细胞的活性，增加骨量，防止骨丢失。以及在制备用于防治和治疗骨质疏松症，促进骨折骨愈合，缩短愈合时间及创伤伤口愈合的药物中的应用。
我们利用大鼠骨质疏松模型所做的体内实验结果表明，与目前临床上普遍使用的并具有较强的提高骨量，防止骨丢失的鲑鱼降钙素相比，本发明的OGP药物组合物具有提高成骨细胞和成纤维细胞的活性，同时促进骨量增加，防止骨丢失。相比较，鲑鱼降钙素主要是通过抑制破骨细胞的活性而达到提高骨量，而本发明的OGP药物组合物主要促进成骨细胞的活性，通过成骨的增加来提高骨量，具有提高骨量峰值，减缓骨丢失时间等优点。可用于预防和治疗骨折愈合和骨质疏松症，促进骨折后骨愈合及创伤伤口的愈合等作用。另外，本发明的OGP的药物组合物中发挥药效作用的主要成分具有与天然存在的人OGP结构完全相同的结构，从而显著避免了长期使用后可能造成的免疫原性。
如前所述，本发明的OGP的药物组合物具有显著的提高成骨细胞和成纤维细胞的活性，同时促进骨量增加，防止骨丢失作用。优于目前临床上普遍使用的鲑鱼降钙素。比较鲑鱼降钙素，其主要是抑制破骨细胞的活性而达到提高骨量，而本发明的OGP药物组合主要促进成骨细胞的活性，通过成骨的增加来提高骨量。具有提高骨量峰值，减缓骨丢失时间的优点。
成骨生长肽在骨质疏松症动物模型中促进骨量的研究
本实验观察成骨生长肽(OGP)对骨量增加的研究，为治疗骨质疏松症找到安全有效的药物。
将50只SD大鼠，鼠龄12周，体重平均240克，经低钙饲料(Ca：0.1％，P：0.6％)，饲养6个月成为骨质疏松模型，然后随机分为5组，每组10只，改为普通饲料(Ca：1.1％，P：1.1％)，喂养。分组实验如下：A组(低剂量OGP)0.2ug/0.5ml；B组(高剂量OGP)2ug/o.5ml；C组(鲑鱼降钙素)0.1ug/o.5ml；D组(生理盐水)0.5ml对照，分别项部皮下隔日注射，共12周。然后进行如下检测。
1)骨密度测定：每组随机抽取6-7只，共33只，用0.25％的戊巴比妥钠(50mg/kg体重)进行腹腔麻醉，分别测定腰椎3水平、右侧股骨颈和胫骨上端的骨密度(BMD)。
2)心脏采血5ml，分别进行血清碱性磷酸酶(AKP)和骨钙素(BGP)的测定。
3)骨组织形态学计量：大鼠处死前14天，每日以0.25％盐酸四环素(35ml/kg)腹腔内注射2天，再于处死前4天，以同样剂量注射2天。过量戊巴比妥钠腹腔麻醉后，截取腰3椎体，去除软组织，丙酮固定，已醇上升梯度脱水，甲基丙烯酸甲酯包埋后进行锥体失状面不连续不脱钙切片，厚度为12μ和5μ两种。12μ切片为不染色荧光观察用，5μ切片用1％甲苯胺蓝染色。切片用Olympus Vanox-1显微镜进行观察。结构测量参数用自动图形软件Mias-300进行分析：①TBV(％)，为一定范围切片内骨小梁体积；②骨小梁平均宽度，MTT(μm)；③骨皮质平均厚度，MTC(μm)。
4)扫描电镜观察：取腰3锥体，去除软组织，将其横断锯开，生理盐水冲洗干净，先用2.5％戊二醛和1％锇酸双重固定，系列酒精脱水，醋酸正戊酯置换，CO2临界点干燥(HCP-2型)，离子溅射仪(IB-3型)喷金，然后用日立S-520扫描电镜观察。
5)透射电镜观察：将右侧股骨头沿额状面对剖，用2.5％戊二醛固定2小时，梯度酒精、丙酮脱水，环氧树脂包埋，LKB-1型超薄切片机切片，JEM-1200EX透射电镜观察。
6)统计学处理：全部数据均进行方差分析和t检验。
各检测指标如下所述：1、第12周时SD大鼠体重测量结果：
表1 各组体重测量结果(g)组 A B C D别 n＝10 n＝10 n＝10 n＝10平均值 446.5±21.8 445.5±21.2 447.0±24.4 449.0±26.4
从表1中可以看出，A、B、C和D各组相差不大，经t检验，P＞0.05，统计学上无差异，说明实验用药后各组大鼠体重无明显变化。2、骨密度测量结果：
表2 各组的股骨、胫骨、腰椎BMD值(X±SD，g/cm)组别 股骨 胫骨 腰骨A(n＝7) 0.2548±0.0177 0.2623±0.0234 0.2434±0.0270B(n＝7) 0.2742±0.0264 0.2649±0.0258 0.2816±0.0667C(n＝6) 0.2635±0.0517 0.2997±0.0416 0.2675±0.0320D(n＝6) 0.1741±00.0241 0.1686±0.0177 0.1880±00093
从表2中可以看出，D组的股骨、胫骨、腰椎BMD值明显低于A、B、C各组，经t检验，P＜0.01，统计学上有显著差异。而A、B、C各组之间，经t检验，P＞0.05统计学上无差异。说明实验用药后对照组骨质明显疏松，而治疗组骨密度上升，提示治疗有效。3、血清碱性磷酸酶(AKP)和骨钙素(BGP)测量结果：
表3-1 各组血清碱性磷酸酶(AKP)测量结果(X±SD，U/L)组 A B C D别 n＝10 n＝10 n＝10 n＝10平均值 169.7±16.4 165.8±11.7 100.8±9.3 83.4±9.5
从3-1可以看出，A、B二组明显高于D组，P＜0.001，统计学上有高度显著性差异。同时A、B二组也高于C组，P＜0.01，有显著性差异。而C组与E组之间，P＞0.05，无差异。说明成骨肽在提高AKP酶的含量上比鲑鱼降钙素有效，而鲑鱼降钙素对提高AKP酶含量上促进作用不大。
表3-2 各组血清骨钙素(BGP)测量结果(X±SD，ng/ml)组 A B C D别 n＝10 n＝10 n＝10 n＝10平均值 2.17±0.20 2.02±0.19 1.43.8±0.15 1.21±0.09
表3-2可以看出，A、B二组与D组之间，P＜0.05，统计学上差异。而C组与D组，P＞0.05，无差异。说明成骨肽能够提高骨钙素(BGP)含量，而鲑鱼降钙素作用不大。4、骨组织形态计量结果：
表4 各组腰椎骨组织形态计量结果(X±S，n＝4)组别 TBV MTT MTCA 37.16±2.56 152.35±8.49 250.93±20.81B 38.35±2.95 145.10±10.05 249.66±20.72C 37.62±2.89 147.83±10.60 248.57±21.14D 15.08±1.38 64.66±4.93 238.69±14.37
从表4中可以看出，A、B、C各组与D组之间，P＜0.001，有高度显著性差异。而A、B、C各组之间，P＞0.05，无差异。说明治疗组在提高骨量，防止骨丢失上方面要好于对照组。5、扫描电镜观察结果：生理盐水对照组骨小梁有破坏、吸收，表现为骨小梁变细、变尖、断裂，骨小梁间的空隙增大，高倍镜下骨小梁表明出现骨吸收(图1)。而OGP治疗组则骨小梁粗大、完整，连续性好(图2)。6、透射电镜观察结果：生理盐水对照组骨细胞多处于退变相，胞核固缩，核/浆比例大，出现较多空泡，胞质减少，陷窝间隙絮状物增多，陷窝壁有嗜锇板层(图3)。而OGP治疗组骨细胞多处于成骨相，胞质丰富，核/浆比例小，陷窝间隙小(图4)。7、光学显微镜观察结果：生理盐水对照组骨小梁不脱钙切片的光镜表现，骨小梁变细(图5)，而OGP治疗组骨小梁不脱钙切片的光镜表现，骨小梁粗大，连续性完整(图6)。生理盐水对照组不脱钙切片，荧光标记较少、较暗(图7)，而OGP治疗组不脱钙切片，荧光标记较多、较亮(图8)。
人工合成的OGP具有促进成骨细胞和成纤维细胞增殖，提高成骨细胞AKP的活性，增加全身骨形成和骨小梁的体积，防止骨丢失，也能诱导骨质疏松症治疗中的新骨积聚，提高骨的生物力学特性。促进机体受伤后伤口的愈合，促进受损伤的骨髓愈合，为骨质疏松症和骨折治疗提供一个新的途径。
图1 生理盐水对照组骨小梁变细、间隙增大(SEM，X100)图2 OGP治疗组骨小梁粗大、间隙小、连续性完整(SEM，X100)图3 对照组骨细胞呈退变相、核固缩、胞浆少、陷窝扩大
(TEM，X6000)图4 OGP治疗组骨细胞呈成骨相、有较多细胞质和细胞器、
陷窝狭小(TEM，X6000)图5 对照组骨小梁不脱钙切片的光镜表现，骨小梁变细
(甲苯胺兰染色，X100)图6 OGP治疗组骨小梁不脱钙切片的光镜表现，骨小梁粗大，
连续性完整(甲苯胺兰染色，X100)图7 对照组不脱钙切片，荧光标记较少、较暗
(荧光显微镜，X100)图8 OGP治疗组不脱钙切片，荧光标记较多、较亮
(荧光显微镜，X100)
本发明的药物组合物的用量将取决于待治疗的疾病的性质和严重程度、病人的体重、一般健康状况、给药途径等多种因素。一般说来，本发明药物组合物的用量每天每公斤体重大约0.5至5微克，较好为1-2微克/每公斤体重。
可通过各种常规给药途径使用本发明的药物组合物，例如可经胃肠道内、皮下、皮内、鼻内、静脉内、肌肉内、直肠内、眼内等途径给药，但其中优选的给药途径是肌肉内注射、皮下注射、鼻喷雾或口服给药。
实施例1：(1)用Boc系统合成下列结构(1)OGP肽：NH2-Ala-Leu-Lys-Arg-Glu-Arg-Gly-Thr-Leu-Try-Gly-Phe-Gly-Gly-OH(1)
将起始PAM树脂(1g，0.5mmol)装于ABI 430自动多肽合成仪反应器中，按下表所示步骤由C端向N端缩合各个被保护的氨基酸。每一步反应完成后，经氮气正压作用过滤从树脂上除去各试剂。其中C端第一个被保护氨基酸Boc-Gly与树脂的缩合反应按下表中第5～14步骤进行，其余氨基酸的缩合均按第1～14步骤进行。
| 步骤 | 试剂 | 试剂用量(ml) | 重复次数 | 混合时间(分) |
| 1 | DCM | 30 | 3 | 2 |
| 2 | TFA/DCM | 30 | 1 | |
| 3 | TFA/DCM | 30 | 15 | |
| 4 | DCM | 30 | 3 | 2 |
| 5 | DIEA/DMF | 30 | 1 | |
| 6 | DIEA/DMF | 30 | 10 | |
| 7 | DMF | 30 | 3 | 2 |
| 8 | DCM | 30 | 3 | 2 |
| 9 | Boc-氨基酸，2mmolHOBT/DCC 溶于DMF | 20 | 120 | |
| 10 | DCM | 30 | 3 | 2 |
| 11 | DMF | 30 | 3 | 2 |
| 12 | DCM | 30 | 3 | 2 |
| 13 | Boc-氨基酸，1mmolHOBT/DCC 溶于DMF | 20 | 120 | |
| 14 | 重复10～12步骤 | |||
| 15 | 重复1～14步进行C端氨基酸逐个向N端的延伸反应 |
每个氨基酸缩合反应平均进行2小时。每进入下一个氨基酸缩合循环前用茚三酮法测定游离氨基以确定缩合是否完全[Kaiser E T，et al.Anal.Biochem.34：595-598，1969]。按上述反应步骤由C端氨基酸逐个向N端延伸肽链后得到目的肽链树脂，将树脂从反应器中移出后进行真空干燥。(2)肽链树脂的氟化氢(HF)切割反应
将干燥的肽链树脂(1g)和对甲酚(ml)置于反应器中。于容器外置干冰/乙醇冷浴冷却，并收集约20ml液态HF，然后在冰浴下搅拌反应1小时。反应完成后，移去冰浴，于真空下蒸发除去HF。向反应器内加入无水乙酸乙酯将树脂洗三次(每次30ml)，然后滤去试剂。用50％乙酸抽提粗肽2次(每次5ml)。合并所得滤液，用100ml去离子水稀释后进行冷冻干燥以去除溶剂。(3)OGP粗肽的纯化
称取上述粗产物50mg，溶于1ml 1N乙酸中，将所得溶液过Sephadex G10柱(2.0×25cm)，1N乙酸洗脱以脱盐。收集全排峰后进行冷冻干燥，得脱盐粗品37mg。进一步将所得脱盐品过高压液相反向层析柱Beckman Octyl C18，10mm×25cm。收集主峰，合并后真空除去乙腈，并冷冻干燥。纯化后的样品纯度达95％以上，氨基酸组成分析及质谱分析结果均符合理论值。实施例2：(1)用Fmoc系统合成OGP肽：
将起始Rink Amide羟基树脂(1g，0.45mmol)装于30ml小瓶内，并用DCM处理30分钟。按下表所示步骤由C端向N端逐个缩合各个被保护的氨基酸。每步反应完成后，经负压作用过滤去除各试剂，并使之与肽树脂分离。其中C端第一个被保护氨基酸Fmoc-Gly与树脂的缩合反应按下表中步骤1～15进行，其余氨基酸的缩合均按1～15进行。
| 步骤 | 试剂 | 试剂用量(ml) | 重复次数 | 混合时间(分) |
| 1 | DMF | 20 | 3 | 2 |
| 2 | 六氢吡啶/DCM | 20 | 5 | |
| 3 | 六氢吡啶/DCM | 20 | 15 | |
| 4 | DCM | 20 | 3 | 2 |
| 5 | DMF | 20 | 2 | |
| 6 | 二氧六环/H2O | 20 | 2 | |
| 7 | DMF | 20 | 3 | 2 |
| 8 | DCM | 20 | 3 | 2 |
| 9 | Fmoc-AA，1.5mmolHOBT/DCC 溶于DMF | 15 | 120 | |
| 10 | DCM | 20 | 3 | 2 |
| 11 | 乙醇 | 20 | 3 | 2 |
| 12 | DMF | 20 | 3 | 2 |
| 13 | DCM | 20 | 3 | 2 |
| 14 | Fmoc-AA，0.5mmolHOBT/DCC 溶于DMF | 15 | 120 | |
| 15 | 重复10～13步骤 | |||
| 16 | 重复1～15完成C端氨基酸逐个向N端的延伸 |
每个氨基酸缩合反应平均进行2小时。每进入下一个氨基酸缩合循环前用茚三酮法测定游离氨基以确定缩合是否完全。按上述反应步骤由C端氨基酸逐个向N端延伸肽链后得到目的肽链树脂，将树脂从反应器中移出后进行真空干燥。(2)肽链树脂的TFA切割反应
将干燥的肽链树脂(0.5g)和间甲苯酚(0.5ml)置于反应器中并在冰浴中预冷30分钟。加入0.5ml水，9mlTFA在冰浴条件下搅拌反应1小时。滤去反应液，由少量TFA将残余树脂洗三次，再用DCM洗三次，然后合并滤液。真空抽气蒸发除去DCM和TFA。待液体基本抽干成粘稠状时，加入预冷的乙酸乙酯，迅速振摇后逐渐析出固体形式粗肽并离心沉淀之。(3)纯化方法同上述实施例1中(3)方法。实施例3、OGP冻于品针制备方法每安培瓶装OGP 100μg(HPLC鉴定纯度达98％以上)
20％甘露醇 1ml
6％低分子右旋糖酐 9mg低分子右旋糖酐规格：分子量10,000～20,000符合注射用质量标准溶解于0.5ml超纯水中，经冷冻干燥得冻干品针剂稀释用水为生理盐水，用量每次1ml。
Claims (7)
1、一种含成骨生长肽(OGP)的药物组合物，其特征在于其中所说的药物组合物是以OGP多肽作为活性成份与药用载体组成的，并且可以含OGP为0.01～99.99％与含药用载体为99.99％～0.01％的任意比例配成100％的组成。
2、一种如权利要求1所述的含成骨生长肽(OGP)的药物组合物的制备方法，其特征在于将成骨生长肽(OGP)与药用载体配制而成，并且其中所述的药用载体为药物常规用的稀释剂、填充剂、乳化剂、防腐剂、表面活性剂、吸收促进剂、缓冲剂、香叶剂及着色剂、
3、一种如权利要求1和2所述的含成骨生长肽(OGP)的药物组合物的制备方法，其特征在于其中发挥药效的主要成分是利用常规的固相多肽合成技术和/或基因工程技术制得的。
4、一种如权利要求3所述的含成骨生长肽(OGP)的药物组合物的制备方法，其特征在于其中所述的固相载体是二乙烯苯交联的聚苯乙烯、聚丙烯酰胺树脂、Kiseseguhr聚酰胺、控制孔径的玻璃纤维或小珠、纤维素、聚丙烯膜和丙烯酸包被的聚苯乙烯载体。优选的固相载体包括二乙烯苯交联的聚丙烯树脂、氯甲基树脂、羟甲基树脂、对位乙酰甲基树脂、4-甲基二苯甲胺(MBHA)树脂、4-(2′，-4′-二甲氧基苯基氨甲基)-苯氧基甲基树脂、2，4-二甲氧基苯甲氨胺树脂及(2，4-二甲氧基苯基-Fmoc-氨甲基)-苯氧基乙酰氨基-正亮氨酰-MBHA树脂(即Rink Amide MBHA树脂)，优选的α-氨基酸的保护基团是9-芴甲氧羰酰基(Fmoc)保护基团。
5、一种如权利要求3所述的含成骨生长肽(OGP)的药物组合物的制备方法，其特征在于其中当使用Fmoc系统进行固相合成时，可选用下列被保护的氨基酸残基：Fmoc-Leu，Fmoc-Thr(But)，Fmoc-Gly，Fmoc-Lys(Boc)，Fmoc-Gln(Trt)，Fmoc-Tyr(But)和Fmoc-Arg(PMC)。当使用Boc系统进行固相合成时，可选用下列被保护的氨基酸残基：Boc-Lys(ClZ)，Boc-Thr(Bzl)，Boc-Leu，Boc-Gly，Boc-Arg(Tos)，Boc-Gln，Boc-Tyr(Brz)。
6、一种如权利要求3所述的含成骨生长肽(OGP)的药物组合物的制备方法，其特征在于其中的偶联剂是二异丙基碳二亚胺(DIC)、二环己基碳二亚胺(DCC)进行直接偶联，或通过活性酯例如五氟苯酯，或使用Fmoc-氨基酸-羧酸酐。可以使用羟基苯骈三氮唑(HOBt)或7-氮杂羟基苯骈三唑(HOAt)或用2-(1H-苯骈三唑-1-基)，1，1，3，3-四脲六氟磷酸酯(HBTU)活化氨基酸。
7、一种如权利要求1所述的成骨生长肽(OGP)的药物组合物的应用，其特征在于该药物组合物在制备用于防治和治疗骨质疏松症，预防骨折，缩短骨折愈合时间和提高骨折愈合质量及创伤伤口愈合的药物中的应用。
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