CN1138864A - 具有卵泡刺激作用的糖蛋白异构体的新组合物 - Google Patents
具有卵泡刺激作用的糖蛋白异构体的新组合物 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1138864A CN1138864A CN 95191276 CN95191276A CN1138864A CN 1138864 A CN1138864 A CN 1138864A CN 95191276 CN95191276 CN 95191276 CN 95191276 A CN95191276 A CN 95191276A CN 1138864 A CN1138864 A CN 1138864A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- isomer
- average
- iso
- fsh
- electric point
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/59—Follicle-stimulating hormone [FSH]; Chorionic gonadotropins, e.g. HCG; Luteinising hormone [LH]; Thyroid-stimulating hormone [TSH]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Abstract
本发明涉及具有卵泡刺激活性的糖蛋白异构体混合物，含有这种异构体的药用组合物以及诱导卵泡生长和成熟的方法。如果给予具有较高比例碱性异构体的药物组合物在受控促排卵中获得更好的结果。可获得更多的卵母细胞、剂量低以及所需治疗时间短。
Description
本发明涉及一种含有具卵泡刺激作用的异构体混合物的药用组合物，以及一种诱导卵泡生长和成熟的改进方法。
由垂体前叶生成的卵泡刺激素(FSH)通过对睾丸滋养细胞和卵巢颗粒细胞的调节作用，来刺激生殖腺的分化和成熟，从而在两性生殖中起重要作用。FSH以不同的分子形式(异构激素或异构体)从垂体前叶合成并分泌出来，它们在总体电荷，受体给合力，生物活性及血液保留时间方面均不相同。这种微小的异质性是由于糖基的含量和/或组成不同，尤其是唾液酸的不同造成的。已经从几种非哺乳动物和包括人在内的哺乳动物的垂体前叶、血和尿中分离并鉴定出多种促性腺激素。唾液酸含量较高相对呈酸性的FSH与大多数碱性异构体相比，其受体结合力和体外的生物活性均低。但是，由于其血液保留时间长，这些酸性的FSH在体内具有更强的生物活性(Ulloa-Aguirre et al.1988，Hum.Reprod.3，491-501)。
在体外受精(IVF)中，FSH用于排卵诱导及受控卵巢兴奋。促排卵的目的是增加用于IVF的可得到的成熟卵母细胞的数目和加强随后的胚转移(ET)。一般情况下，每次转移最多可植入3个胚胎。通常需要进行一次以上的治疗，在大多数不育症的临床病例中，将多余的胚胎或受精卵冰冻起来，在以后的疗程中继续进行转入。假设受精正常，得到的卵母细胞越多，可转移的胚胎也就越多，那么一个疗程后女性怀孕的机率也就越大。在男性不育的病例中，受精的机率、怀孕的机率也随得到的卵母细胞数目的增多而增大。
以前的结果表明，在正常月经的卵泡期和黄体期大多数循环中的FSH异构体的pI＜4.8，而在月经中期或在雌激素治疗后，循环中出现相当多的碱性FSH异构体(Padmanabhan et al.1988，J.Clin.Endocrinol.Metab.，67，465-473)。这提示，在卵泡期较多的酸性FSH异构体参加了卵泡的生长和补充。
迄今，从自然来源分离出的FSH制剂已经用于临床。市售制剂所含异构激素总体的分类情况已有报道(例如：Harlin etal.1986，Fert.Ster，46，1055-1061)。这些FSH组合物含有相对酸性的异构体激素成分。
令人惊奇地是，已经发现等电点位于和超出4.8至4.2这一范围的糖蛋白异构体的混合物具有卵泡刺激作用，此混合物含有15％以上等电点超过4.8以上的糖蛋白和30％以下等电点低于4.2的糖蛋白，与已知的糖蛋白组合物相比，将其应用于临床相同的病例时效果更好。
用重组DNA方法制备的本发明糖蛋白异构激素的组合物，已经进行了临床研究。根据等电点(pI)值不同对FSH异构激素进行的分离表明，本发明的制剂含有相对碱性的异构体。此处提到的等电点是用色谱聚焦的方法测定的(见实施例1)。
通常已知的糖蛋白异构激素组合物(其中在临床研究中以MetrodinR做为代表)具有较酸性的特征。
一种总体碱性较强的异构激素可更好地发挥促排卵作用，这一事实令人吃惊。因为在文献中一直认为体内的生物利用度是糖蛋白卵泡刺激效应的最重要的因素(欧洲专利申请EP 388，223)。碱性较强异构激素的半衰期短于酸性较强的异构体，这可能导致碱性异构体不太适用于IVF方案，从而背离本发明。
本发明的异构激素混合物优选含有较高比例的相对碱性的异构体糖蛋白。通过配制含有15％以上等电点超过4.8的异构体和30％以下的等电点低于4.2的异构体糖蛋白异构体组合物可实现这一方案，也可以选用15％以上等电点超过4.8的异构体和25％以下等电点低于4.2异构体的混合物，以及等电点超过4.8的异构体超过25％和等电点低于4.2的异构体少于25％的混合物和25％以上等电点超过4.8的异构体和20％以下的等电点低于4.2的异构体混合物。
此处将所用异构体的百分比定义为色谱聚焦后回收的免疫反应性异构体的相对含量。也可用比色测定法确定蛋白质的含量。
在本文所描述的临床研究中发现，就得到的卵母细胞的数目而言，两种FSH制剂即本发明的制剂和MetrodinR在促排卵中所得到的卵母细胞数是不同的。用本发明的制剂治疗可得到较多的卵母细胞。另外，所用FSH药量及治疗时间均显著降低。
本发明的糖蛋白混合物可从尿液中提取。对天然FSH制剂而言，异构体的数目和各自相对含量的多少取决于来源(垂体、血浆或尿液)，供体的年龄和内分泌状态，及用于其纯化的分离过程(Wide，1981，J.Chin.Endocrinol.Metab.55，682-688，Wide and Hobson，1983，J.Chin.Endocrinol Metab.56，371-375)。
或者糖蛋白也可以是重组糖蛋白。
对重组FSH(recFSH)来说，其电荷的异质性取决于生产recFSH所选择的宿主细胞系和细胞培养条件。对生产糖蛋白如FSH来讲，中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系是一个显然的选择，因为已知这种细胞系生成的带寡糖的糖蛋白与人类糖蛋白完全相同或相近(Sasaki.et al.，J.Biol.Chem.1987，262，12095-12076)。但是也可应用其它的缩主细胞系。
本发明的重组FSH制剂可通过被含有编码人类FSH(hFSH)的两种亚单位基因的质粒稳定转染的CHO细胞系生产。
这种CHO细胞系产生完整的、糖基化的h-FSH并将其分泌于培养基中，这是进一步纯化的来源。象这样的批量产品可按描述的方法制备(Van Wezenbeek et al.，1990，in：From Clone to Clinic，Kluwer.Academic Publishers，245-251)。先前的临床前研究表明，recFSH的受体结合力和体外及体内的效能与自然来源分离而得的FSH相当(Mannaerts ete al.1991，Endocrinology，129，2623-2630)。
可据色谱聚焦的特性来选择本发明的FSH制剂。另外，色谱聚焦特性受特定缩主细胞系的选择或培养条件适应的影响。
作为替代办法，本发明中的糖蛋白异构体混合物也可以从细胞系中直接分离而得，这些细胞系的糖蛋白基因表达已经被糖蛋白基因的调节序列的特定靶位点所启动(PCT申请WO 92/19255)。
除去野生型细胞系，通过在削弱了糖基化的细胞系中表达重组FSH也可获得碱性异构激素。这种细胞系可能是缺乏了N-乙酰葡萄糖胺转移酶的细胞系，或是缺失唾液酸向高尔基体转移的细胞系(Galway etal.1990，Endocrinology，127，93-100)。
本发明其他实施方案是通过酶或化学调节来获取碱性糖蛋白异构体混合物。这样处理后，部分糖链可被除去而不影响氨基酸序列。糖蛋白产品例如可用HF(Chen et al，1982，J.Biol.Chem.257，14446-14452)进行处理。部分脱唾液酸作用可通过神经氨酸酶的酶水解来进行(Vaitukaitis and Ross，1971，J.Clin.Endocrinol.Metab.33，308-311)。
通过从任一亚单位上除去一个或多个N-连接的寡糖链制备的具有生物活性的，即具有卵泡刺激活性的碱性糖蛋白激素混合物也是本发明的主题。通过编码糖蛋白基因的定点诱变可除去这些糖链。可以这种方法得到单个氨基酸的改变使得不含糖结合位点。因而，一个或数个糖链就不能结合到α或β亚单位上(Matzuk and Boime，1988，J.Cell Biol.106，1049-1059)。
根据本发明，相对碱性的异构激素的混合物可用于制备进行排卵诱导和受控卵巢兴奋治疗的药物。
因此，本发明就涉及到由这些糖蛋白异构体与药学上可接受的辅助混相混合而成的药用组合物。制备制剂及混合物的方法在Remington’s的Pharmaceutical Sciences，pp1463-1497中已有描述(16thed.1980，Mack Publ.Co.of Easton，Pa，USA)。例如，含有本发明药用组合物的安瓿可能含有1至1000μg的糖蛋白混合物(例如认为75IU为治疗量)。
本发明也涉及到诱导卵泡生长及成熟的改进方法，其中应用上述含有碱性糖蛋白异构体混合物的药用组合物。根据本发明，没有必要将服用酸性较强异构体混合物包括在治疗方案中。
此方法的另一点改进是重复给予含有卵泡刺激活性的一种糖蛋白异构体混合物的药用组合物，每一种组合物都有相同的方面，比如具有相同的异构特性。因此在冶疗中仅给予相对碱性的异构体就足够了。
这样的混合物也可通过仅仅分离出碱性异构体来制备，比如通过制备性色谱聚焦。优选等电点超过4.2的异构体。可在来源不同的糖蛋白制品上，比如从尿或重组DNA细胞系分离而获得的被化学或酶修饰或没被修饰的糖蛋白制剂上进行异构体混合物的分级分离。
本发明的药用组合物可与GnRH拮抗剂或激动剂及/或LH活性剂(比如HCG或LH)相结合用于临床治疗，以诱导促排卵。
实施例1
比较重组人类FSH(Org 32489)和尿FSH(MetrodinR)的FSH免疫反应性异构激素特征。
本研究对被hFSH编码基因转染的中国仓鼠卵巢细胞生成的几批Org 324 89(重组人类FSH，N.V.Organon)制品的异构激素特征进行测定并与市售尿hFSH，即MetrodinR进行比较。
分别经Diosynth和Organon(荷兰)获得纯化的(≥99％)Org32489原料和最后制剂产品。尿hFSH产品，即MetrodinR(Serono，罗马，意大利；标明752IU/安瓿的体内生物活性IS70/45)用作参比。总共12种Org 324 89批量产品，5种Org 324 89临床制剂(CP’s)和12种MetrodinR产品用于异构激素比较。在实验中符合CP规则的MetrodinR产品与Org324 89 CP产品进行了临床效能的比较(见实施例2)。
通过应用色谱聚焦，根据等电点(pI)不同分离出hFSH的不同异构激素。在应用对所有异构体都具有相似作用的抗体进行酶免疫测定对hFSH的定量后，可确定hFSH的分布。
在pH6-3范围内，在用多缓冲交换剂94(PBE-94；Pharmacia)装填和HCl调PH至6.2的0.034mol/L L-组氨酸(AldrichChmie，Steinheim，FRG)平衡的快速蛋白液相色谱柱(FPLC)HR5/20(Pharmacia，Woerden，荷兰)上进行色谱聚焦。使用前，每个色谱柱用53ml与蒸馏水按1∶11(V/V)比例稀释的PH值经HCl调至3.0的复合缓冲剂74洗脱(洗脱缓冲液)，直至得到一条PH值从6到3恒定降低的曲线。每次跑柱实验前，用洗脱缓冲液和2ml含有100μg/ml人类血清白蛋白(HSA，Behring，Marburg，FRG)的0.034mol/L L-组氨酸洗脱柱子。
根据体内的生物活性，将每种激素制剂中大约225IU的FSH溶于3ml平衡缓冲液内(贮存液)，从中取出2ml(150IU)上柱。随后用洗脱缓冲液洗脱色谱柱。以1ml/min的流速收集1ml的流份。收集53个流份后用2ml 2mol/L的NaCl上液柱，再收集7个流份。为了对FSH定量，将1、2、3流份以及4、5、6流份分别合并。所有其它的流份用含有1g/L的牛血清白蛋白(BSA，Sigma，St.Louis，MO，USA)的HAMF12和DMEM(Gibco，Grands Islands，NY，USA)之比为1∶1的混合液(Medium+)调至2.5ml。另外，0.3ml的FSH贮存液用2.2mlmedium+调至2.5ml。将每个流份上样于PD-10柱(Pharmacia)进行脱盐，柱用12ml medium+进行平衡。用3.5ml medium+洗脱后，收集的样品储存于-20℃直至进行FSH免疫活性测定。
按照先前描述的方法(Mannaerts et al.1991，Endocrinology，129，2623-2630)，用抗β捕获抗体(单克隆抗体4B)和HRP-标记的抗α检测抗体(单克隆抗体116B)进行双抗体夹层酶免疫检测来测定FSH的免疫反应性。这种检测方法只能检测出二聚体，并且能较好地不分主次地检测出所有的FSH。根据IS 70/45，此检测方法的灵敏度是0.4IU/L，检测内和检测之间的变异系数分别为7％和8％。与hLH和hCG的交叉反应分别为＜0.01％和＜0.01％。
为了对Org 324 89和Metrodin R的异构激素组成进行定量，色谱聚焦后FSH免疫反应的分布划分为以下6个PH范围：
＞5.3
5.30-4.81
4.80-4.20
4.19-3.60
3.59-3.00
＜3.00(盐组分)。
Org 324 89免疫聚焦后，选用这些PH值范围对FSH免疫反应的正态分布(钟形分布)进行对称分隔。每一PH范围内洗脱的FSH免疫活性量表达为总洗脱的FSH免疫活性的百分比。另外，也测定了回收率，即总洗脱的FSH免疫活性与上柱FSH免疫活性的百分比，PH值范围以及PH峰值。低于75％和高于125％的回收率均不合格，认为色谱聚焦过程失败。
Org 324 89和MetrodinR制品色谱聚焦后，其回收率、PH范围、PH峰值和FSH免疫活性的分布如表1所示。典型的Org 324 89色谱聚焦特征如图1所示。Org 324 89和MetrodinR色谱聚焦后的FSH免疫反应活性的回收率相类似，分别为93.7％(SD8.9)和89.1％(SD6.1)。PH在5.68(SD0.11)至3.18(SD0.09)范围内Org 324 89的FSH免疫反应活性呈钟形分布，PH为4.53(S在0.88)时，钟形位于峰值(n＝12)。MetrodinR的FSH免疫反应性分布在PH5.58(SD0.18)至3.07(SD0.05)之间，其峰值位于PH4.28(SD0.13)处(n＝12)。
在6个PH值范围内FSH免疫反应的分布表明，与MetrodinR相比Org 324 89含有的pI＞4.8相对呈碱性的异构体的百分率高大约两倍(20.9％对12.7％)，而pI＜4.2相对酸性异构体的百分率低大约2倍(21.1％对41.7％)(表1和表2)。另外，所有的MetrodinR制品在盐性组分中都含有较多的FSH免疫反应性(3.3％对Org 324 89的0.8％)，表明FSH异构体的pI＜3.0。
除去上述的Org 324 89的批量产品，同时也研究了5种临床制剂的色谱聚焦的特征。这些CP’s的FSH均值分布与批量产品的分布相似(表1)。象用于比较异构激素的12种Org32489的批量产品和Metrodin一样，用于比较临床效能的Org32489和Metrodin的临床制剂在碱性和酸性异构体的相对分布上表现相同的差异，即Org32489CP’s比Metrodin CP’s含有较多的碱性异构体(若pI＞4.8，17.1、20.2％比12.7％)。
包括Org32489和尿hFSH(即MetrodinR)色谱聚焦特征在内的比较研究提示，Org32489比Metrodin含有较多的pI＞4.8的碱性异构体和较少的pI＜4.2的酸性异构体。
实施例2
在接受IVF治疗的患者身上进行Org32489制品的效能比较研究。
研究设计
将研究设计成一个多中心的、随机的、评估人不知情及群体比较的研究，此研究中在接受体外受精(IVF)和胚胎植入(ET)治疗的垂体抑制的不育者身上比较Org32489和MetrodinR的可靠性和效能。大约1000名研究对象参入了实验研究，分别接受Org32489和MetrodinR治疗的人数之比为3∶2。研究时间不超过3个疗程，效能分析仅限于第一疗程。
以以下的标准为基础选择实验对象。
入选的标准
-检查时年龄最小不低于18岁，最大不超过39岁；
-实验对象的不育原因有可能经IVF治疗解除；
-以前最多接受过3次IVF、配子(GIFT)或合子(ZIFT)的输卵管内转移的尝试，其中至少一次收集到卵母细胞；
-正常排卵周期，平均时间为24-35天，个体本身存在多3天或少3天的变异(但从不超出24-35天的范围)；
-身体和精神健康；
-体重在理想体重的80％-130％之间；及
-自愿给出书面同意。
排除的标准
-由内分泌异常，比如催乳素过多、多囊卵巢综合征及缺乏卵巢功能引起的不育症；
-根据以下准则确定的男性不育症：每ml精液＜10×106个精子及/或形态正常的＜40％，及/或＜40％的精子活动正常；
-有使用GnRH类似物，FSH，hMG和/或hCG的禁忌症；
-能够干扰正常超声研究的任何卵巢和/或腹部异常；
-高血压(静坐时舒张压＞90mm Hg和/或收缩压＞150mmHg)；
-慢性心血管疾病、肝病、肾病或肺病；
-目前或曾经(12个月内)酗酒或滥用毒品；及
-检查前三个月内曾服用过所研究的药物。
治疗方案
月经周期的第一天开始进行布舍瑞林(Buserelin)治疗。实验对象警觉月经出血的第一天定为月经周期的第一天。服用布舍瑞林14至18天后当治疗已引起促性腺激素分泌不足的状态时(即血清E2＜50pg/ml)，开始服用Org32489(75IU/安瓿)或MetrodinR(75IU/安瓿)进行治疗。万一还没达到促性腺激素分泌不足的状态，则将Org32489或Metrodin治疗延期，并将布舍瑞林剂量加大到4×300g/天。在以后整个的治疗期间维持增加的布舍瑞林剂量直至FSH治疗结束。用布舍瑞林预处理不得超过5个星期。如果(激素水平)完全下调后，在FSH治疗的第一天已形成≥20mm的卵泡囊，那么在第一次FSH注射之前将卵泡囊刺穿。
在每个治疗周期中，根据下面的方案给药
| 布舍瑞林 | 剂量途径 | 4×150μg/天鼻腔给药 |
| Org32489/MetrodinR | 剂量途径 | 第1-4：150-225IU/天自第5天开始：据实验对象进行剂量调节肌肉注射 |
当出现至少3个≥17mm的卵泡时，给予HCG(10000IU)。置入的胚胎不超过3个，在自然周期或激发周期置入冷冻胚胎。如果不发生胚胎的转移则认为该周期作废。通过孕酮水平评估检测黄体期。注射10,000IU hCG后，至少给予两星期的黄体期支持物(比如3针1500IU的hCG或者至少每天肌肉注射50mg孕酮或者每天阴道内用400mg孕酮)。
统计分析
第一个治疗周期中得到的卵母细胞的总数是主要效能变量。第一治疗周期中其他要分析的变量有用于卵巢刺激的FSH安瓿的数量及FSH治疗的持续时间。通过联结各个实验中心结果的Cochran’s方法对这些参数的数值进行分析。此外，应用Wilcoxon rank sum检验和方差分析(AN OVA)进行检验Cochran’s方法的结果。
第一治疗周期的实验结果
对18个研究中心内共有981个实验对象开始FSH治疗。总共907名有过穿刺，其中Org32489组546名，Metrodin组361名。从穿刺实验对象的数量来看，可能有0.8的概率(所谓的实验能力)检测出两个治疗组之间至少存在1.2个卵母细胞的差异。
每个实验中心中每个治疗组获得的卵母细胞的数目如表3所示。在所有的实验中心内Org32489组获得的卵母细胞平均数比Metrodin组大。Org32489组和Metrodin组的总体平均卵母细胞数(全实验中心的加权均数)分别为10.84个和8.95个卵母细胞，导致Org32489组多1.89个卵母细胞的治疗差异。1.89个卵母细胞的差异比其标准误多5倍，并且差异非常显著(P＜0.0001)。95％的可信区间提示用Org32489治疗的对象比用MetrodinR治疗的对象最后平均至少多获得1.2、最多多获得2.6个卵母细胞。从获得的卵母细胞的总数中除去未成熟的卵母细胞并不影响治疗效果(见表4)。
每个研究中心内穿刺实验对象服用的总安瓿数列于表5。18个研究中心中有14个研究中心的Org32489用药总量低于MetrodinR的总量。总体平均FSH用量(各个中心的加权平均数)Org32489组为28.5安瓿，MetrodinR组为31.8安瓿，结果治疗差别为3.8安瓿，统计差异非常显著(P＜0.0001)。95％的可信区间提示，用Org32489治疗的对象比用MetrodinR治疗的对象少服用最少2.1，最多4.5个安瓿的药量。
每个实验中心穿刺对象的FSH治疗时间如表6。18个实验中心内有13个实验中心的Org32489组的治疗时间短于Metrodin组。总体平均治疗时间(各个中心的加权均数)Org32489组和Metrodin组分别为10.7天和11.3天，结果两组之间存在0.6天的差异，此差异具有非常显著的统计差异性(P＜0.0001)。95％的可信区间提示，用Org32489治疗的对象比用MetrodinR治疗的对象其治疗时间平均至少短0.3天，最多0.9天。
Wicoxon rank sum检验和方差分析的结查证明了以上的发现。
因此，就通过显著低的FSH药量和显著短的治疗时间所获得的卵母细胞数而言，可以得出以下的结论：在本研究中通过Org32489治疗的促排卵优于MetrodinR。
附图说明
图1：色谱聚焦后特定Org32489制剂的FSH免疫反应性的分布。将一种制剂的特征分布作为示例。上、下两图代表独立的实验(Sf＝盐组分)。总回收率分别为91.9％和91.3％。
表1
色谱聚焦后，12种Org32489原料产品、5种Org32489终产品即临床制剂(CP’s)和12种MetrodinR产品的平均回收率、PH范围、PH峰值和PH区段内FSH免疫反应性的分布。
| Org32489原料 CP’s | MetrodinR | ||
| n回收率pH范围pH峰 | 1293.7±8.9％5.68-3.184.53 | 584.2±3.6％5.60-3.134.52 | 1289.1±6.1％5.58-3.074.28 |
| FSH分布：pH范围＞5.35.30-4.814.80-4.204.19-3.603.59-3.00＜3.0 | 2.0％18.9％58.2％18.6％1.7％0.8％ | 2.2％18.0％55.5％21.7％2.0％0.8％ | 1.3％11.4％45.6％33.8％4.6％3.3％ |
表2
用于比较临床效能的Org32489和MetrodinRCP’s的碱性异构体和酸性异构体的百分率；分别定义为pI＞4.8和pI＜4.2的FSH免疫反应性(见实施例2)。
| 制剂 | 异构激素分配％碱性 ％酸性(pI＞4.8) (pI＜4.2) | |
| 0rg32489：原料n＝12临床制剂效果的比较研究(n＝2)MetrodinR：原料＝12临床制剂效果的比较研究(n＝3) | 17.112.711.9 | 21.123.941.744.4 |
表3
获得的卵母细胞总数的统计分析(Cochran方法)
包括全部穿刺对象
| 获得的卵母细胞总数 | 组别 | Org32489减Metrodin | ||||
| 周期1 | Org32489 | Metrodin | 治疗差异评估 | 评估的标准误 | 90％可信区间(P-值) | |
| 联合中心 | n中心调节的均值交互作用检测 | 54610.84 | 3618.95 | 1.89 | 0.37 | 1.2 to 2.6(＜0.0001)(0.88) |
| 中心123456789101112131415161718 | n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值 | 6712.541212.6749.50117.911315.463012.60447.23197.682710.784111.12249.50169.383311.706412.808312.482713.701713.291416.43 | 4111.8078.7154.0075.43810.38179.53245.21156.60199.79259.08148.71138.622210.454612.17599.811712.761311.23911.67 | 0.733.955.502.485.093.072.021.080.992.040.790.761.240.622.670.942.064.76 | 1.333.641.741.893.202.041.011.921.580.961.561.851.471.291.132.401.933.77 | |
表4
得到的成熟卵母细包数量的统计分析(Cochran方法)
包括全部的穿刺对象
| 获得的成熟卵母细胞数 | 组别 | Org32489减Metrodin | ||||
| 周期1 | Org32489 | Metrodin | 治疗差异的评估 | 评估的标准误 | 95％的可信区间(P值) | |
| 联合中心 | n中心调节的均值交互作用检验 | 5448.55 | 3616.76 | 1.79 | 0.33 | 1.1 to 2.4(＜0.0001)(0.89) |
| 中心123456789101112131415161718 | n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值 | 6712.481210.9245.75107.501313.233010.53447.23194.372710.59416.93248.17166.813310.946412.59837.392712.561713.291310.31 | 4111.2977.4351.6075.4388.25178.35245.21154.27199.74255.40147.21137.15229.824611.35594.851711.241311.2398.11 | 1.183.494.152.074.982.182.020.100.861.530.95-0.341.121.252.541.322.062.20 | 1.313.101.242.023.201.811.011.301.590.991.271.981.481.330.792.331.932.78 | |
表5
FSH用药总量的统计分析(Cochran方法)
包括全部的穿刺对象
| 给予FSH小瓶/安瓿的总数 | 组别 | Org32489减Metrodin | ||||
| 周期1 | Org32489 | Metrodin | 治疗差异的评估 | 评估的标准误 | 95％的可信区间(P-值) | |
| 联合中心 | n中心调节的均值交互作用检验 | 54628.49 | 36131.82 | -3.33 | 0.62 | -4.5 to -2.1(＜0.0001)(0.06) |
| 中心123456789101112131415161718 | n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值 | 6729.291228.08439.501136.361330.543026.874427.071949.262735.044135.702430.751632.383327.616430.598323.672723.261725.791426.93 | 4138.13727.43542.60737.86842.001728.762433.831548.771932.792537.881438.071332.002229.004631.225928.191728.471333.23935.56 | -8.840.65-3.10-1.49-11.46-1.90-6.770.502.25-2.18-7.320.38-1.39-0.62-4.52-5.21-7.44-8.63 | 3.442.808.105.494.862.952.215.663.093.592.786.012.151.291.442.653.643.33 | |
表6
FSH治疗时间的统计分析(Cochran方法)
包括全部的穿刺对象
| FSH治疗期限(天) | 组别 | Org32489减Metrodin | ||||
| 周期1 | Org32489 | Metrodin | 治疗差异评估 | 评估的标准误 | 95％的可信区间(P-值) | |
| 联合中心 | n中心调节的均值交互作用检验 | 54610.66 | 36111.27 | -0.60 | 0.13 | -0.9 to -0.3(＜0.0001)(0.02) |
| 中心123456789101112131415161718 | n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值n均值 | 6711.99129.08413.751111.64139.923010.834412.411913.112711.154112.242411.331612.25338.556410.098310.812710.961710.06149.79 | 4113.7379.00514.00711.57811.381711.242413.461513.531910.262512.721412.931311.23228.454610.335912.021711.821311.77911.33 | -1.750.08-0.250.06-1.45-0.40-1.05-0.430.88-0.48-1.601.020.09-0.23-1.21-0.86-1.71-1.55 | 0.650.661.411.150.690.500.550.960.590.430.571.080.350.350.370.480.670.84 | |
Claims (9)
1.含有等电点位于和超出4.8至4.2范围具有卵泡刺激作用的糖蛋白激素异构体混合物并与药学上可接受的辅助剂混合的药用组合物，其特征在于等电点在4.8以上的异构体超过15％，而等电点低于4.2的异构体低于30％。
2.根据权利要求1的组合物，其特征在于等电点在4.8以上的异构体超过15％，而等电点低于4.2的异构体低于25％。
3.根据权利要求2的组合物，其特征在于等电点在4.8以上的异构体超过25％，而等电点低于4.2的异构体低于25％。
4.根据权利要求3的组合物，其特征在于等电点在4.8以上的异构体超过25％，而等电点低于4.2的异构体低于20％。
5.根据权利要求1-4之一的组合物，其特征在于糖蛋白是重组卵泡刺激激素。
6.据权利要求1-5之一的组合物，其特征在于糖蛋白经酶或化学处理修饰。
7.根据权利要求5的组合物，其特征在于通过去除至少一个N-连接的寡糖链来修饰重组卵泡刺激激素。
8.一种诱导女性卵泡生长和发育的方法，包括服用权利要求1-7的药用组合物。
9.在排卵周期中，通过服用含具有卵泡刺激活性的糖蛋白异构体混合物的相同药用组合物来诱导卵泡生长和成熟的方法，其特征在于所述异构体的等电点在4.2以上。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP94200140.5 | 1994-01-20 | ||
| EP94200140 | 1994-01-20 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1138864A true CN1138864A (zh) | 1996-12-25 |
Family
ID=8216602
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 95191276 Pending CN1138864A (zh) | 1994-01-20 | 1995-01-20 | 具有卵泡刺激作用的糖蛋白异构体的新组合物 |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0739352A1 (zh) |
| JP (1) | JPH09508114A (zh) |
| CN (1) | CN1138864A (zh) |
| AU (1) | AU1575195A (zh) |
| BR (1) | BR9506557A (zh) |
| CA (1) | CA2181711A1 (zh) |
| FI (1) | FI962923A (zh) |
| HU (1) | HUT76660A (zh) |
| WO (1) | WO1995019991A1 (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5968547A (en) | 1997-02-24 | 1999-10-19 | Euro-Celtique, S.A. | Method of providing sustained analgesia with buprenorphine |
| EP1135154B1 (en) * | 1998-12-01 | 2003-05-07 | Akzo Nobel N.V. | Improvement of folliculogenesis |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1057895B (it) * | 1975-02-17 | 1982-03-30 | Serono Lab | Gonadotropina corionica umana parzialmente desalinizzata per indurre l'ouvulazione |
| US5260421A (en) * | 1987-12-21 | 1993-11-09 | Applied Research Systems Ars Holding N.V. | Site-directed mutagenesis modified glycoprotein hormones |
| US5087615A (en) * | 1989-03-17 | 1992-02-11 | Applied Research Systems Ars Holding N.V. | Novel method of ovulation induction in humans |
-
1995
- 1995-01-20 CN CN 95191276 patent/CN1138864A/zh active Pending
- 1995-01-20 AU AU15751/95A patent/AU1575195A/en not_active Abandoned
- 1995-01-20 CA CA 2181711 patent/CA2181711A1/en not_active Abandoned
- 1995-01-20 WO PCT/EP1995/000212 patent/WO1995019991A1/en not_active Application Discontinuation
- 1995-01-20 JP JP7519345A patent/JPH09508114A/ja active Pending
- 1995-01-20 EP EP95907574A patent/EP0739352A1/en not_active Withdrawn
- 1995-01-20 BR BR9506557A patent/BR9506557A/pt not_active Application Discontinuation
- 1995-01-20 HU HU9601975A patent/HUT76660A/hu unknown
-
1996
- 1996-07-19 FI FI962923A patent/FI962923A/fi not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| BR9506557A (pt) | 1997-10-28 |
| HUT76660A (en) | 1997-10-28 |
| CA2181711A1 (en) | 1995-07-27 |
| FI962923A0 (fi) | 1996-07-19 |
| EP0739352A1 (en) | 1996-10-30 |
| FI962923A (fi) | 1996-07-19 |
| AU1575195A (en) | 1995-08-08 |
| WO1995019991A1 (en) | 1995-07-27 |
| HU9601975D0 (en) | 1996-09-30 |
| JPH09508114A (ja) | 1997-08-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Mclachlan et al. | Plasma inhibin levels during gonadotropin-induced ovarian hyperstimulation for IVF: a new index of follicular function? | |
| Lents et al. | Central and peripheral administration of kisspeptin activates gonadotropin but not somatotropin secretion in prepubertal gilts | |
| Blank et al. | Actions of CRF and its analogs | |
| Ludwig et al. | Ovarian stimulation: from basic science to clinical application | |
| CN1553808A (zh) | 人绒毛膜促性腺激素在控制性超排卵中的应用 | |
| Kawai et al. | Adaptation of pancreatic islet B-cells during the last third of pregnancy: regulation of B-cell function and proliferation by lactogenic hormones in rats | |
| CN1826135A (zh) | FSH和hCG的单一组合 | |
| KR20170137041A (ko) | 불임 치료용 조성물 | |
| CA2707352C (en) | Activity of recombinant equine follicle stimulating hormone | |
| US6194384B1 (en) | Long-acting galenical formulation for GRF peptides | |
| Lunenfeld | Development of gonadotrophins for clinical use | |
| EP0299050B1 (en) | Isolation of single chain proteins with fsh suppressing activity from follicular fluid | |
| CN1138864A (zh) | 具有卵泡刺激作用的糖蛋白异构体的新组合物 | |
| CN1553810A (zh) | 人绒毛膜促性腺激素和黄体生成激素在控制性超排卵中的应用 | |
| EP0474787B1 (en) | A process for treating infertility and an agent for use in the process | |
| CN1684737A (zh) | 控制性超排卵方法及该方法使用的药物试剂盒 | |
| EA013975B1 (ru) | Мутантный fsh и способы его применения | |
| van Wely et al. | Gonadotropins in ovarian stimulation | |
| US5538948A (en) | Method for treating infertility comprising administering GnRH analog, gonadotrophins, and growth hormone | |
| SE505316C3 (sv) | Användning av proteinet S-100b för framställning av läkemedel för nervceller | |
| Hugues et al. | Comparison of recombinant and urinary follicle-stimulating hormone preparations in short-term gonadotropin releasing hormone agonist protocol for in vitro fertilization-embryo transfer. | |
| EP3985018B1 (en) | Gbd-sstad-sstad recombinant protein and method for producing and using same | |
| Ludwig et al. | Ovarian stimulation: from basic science to clinical application | |
| Gonadotropin | Human Menopausal | |
| AU2005272919A1 (en) | Methods for treating premature infants |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C01 | Deemed withdrawal of patent application (patent law 1993) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |