CN1258436A - 一种荸荠脱毒种苗快速繁殖的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明一种荸荠脱毒种苗快速繁殖的方法,属于蔬菜种苗生产技术领域,专用于荸荠脱毒种苗的快速繁殖。包括:取荸荠茎尖为外植体,接种在附加0.01—10.0mg/l6－BA或KT或ZRs和0.02—8.0mg/lNAA的MS或White培养基体,培养30—60d后,将上述试管苗转接于附加:0.01—6.0mg/l6－BA,0—4.0mg/lNAA,50—180g/l糖,0.2—20mg/lPP333,MS或White培养基中,60—90d后即可形成大量球茎供移栽用。繁殖系数达20—42;试管球茎诱导率达90%以上,球茎鲜重达250mg以上。所形成的球茎可直接移栽田间生长,省工省力,速度快,脱毒效果好,适合工厂化育苗,可商品化生产。
Description
本发明一种荸荠脱毒种苗快速繁殖的方法，属于蔬菜种苗生产技术领域，专用于荸荠种苗的脱毒快繁。
荸荠(Elocharis tuberosa(Roxb.)Roem.ex schult)是莎草科荸荠属宿根性水生草本植物。是我国南方地区的传统特色水生蔬菜，具有很好的营养保健功能，也是我国重要的出口创汇蔬菜之一，因长期采用无性繁殖而使病毒积累，造成种性严重退化，球茎变小，品质变劣，影响了其在国际国内市场上的竞争力。努力改善荸荠球茎的质量和产量，解决生产上因病毒感染而致的“雄荸荠”问题是当务之急。目前普遍采用每年均进行严格的大田选种的方法来改善或缓解上述问题的发生，但劳动强度大，技术要求很高，不能真正彻底解决上述实践问题。
目前在许多无性繁殖作物上使用茎尖生长点培养脱毒苗，并快繁脱毒种苗应用生产，而尚未见荸荠茎尖脱毒快繁，并诱导形成试管球茎的研究报道。
本发明的目的是指提供一种荸荠脱毒种苗快速繁殖的方法，提出快速获得大量脱毒苗，试管苗健壮生长，诱导球茎形成，促进球茎膨大的最佳培养方案，可定向诱导球茎形成，且形成的球茎大，适合工厂化育苗，适于移栽田间生长。
本发明所提供的一种荸荠脱毒种苗快速繁殖的方法实施方案如下：
1.取荸荠茎尖为外植体，将茎尖外包叶鞘剥除后接种在附加0.01-10.0mg/l 6-BA或KT或ZRs和0.02-8.0mg/l NAA的MS或White培养基体。培养30-60d后，取试管苗基部继代培养。
2.诱导试管球茎与促进球茎膨胀：将上述试管苗转接于附加0.01-6.0mg/l 6-BA，0-4.0mg/l NAA，50-180g/l糖，0.2-20mg/l PP333，MS或White培养基中，60-90d后即可形成大量球茎供移栽用。
上述荸荠脱毒种苗快速繁殖的方法中，pH5.6-8.0，各阶段培养条件为：温度15-28℃，光照强度1800-2500lx，光照时间：4-20h/d。所用糖类指蔗糖、葡萄糖和白糖等，以蔗糖为最好。本发明与现有的技术相比，具有如下优点：
1.与目前采用的成熟球茎作种相比，本发明利用荸荠茎尖为外植体建立荸荠脱毒快繁体系，繁殖系数达20-42，可同时获大量脱毒苗，且不会发生变异，生长势旺，脱毒苗试管球茎诱导率达90％以上，鲜重达200克以上。可大大减少用种量，便于种苗的贮藏和运输，从而突破性地解决了种苗繁殖系数低、用种量大、运输和生产成本高、不利于优良品种的快速大面积推广应用的问题。
2.与目前普遍采用的从生长期即开始一直到种球采收持续进行的长时间选留种相比，本发明通过培育脱毒苗，诱导成试管球茎的途径，劳动强度小，持续时间短，脱毒效果好。
3.本发明还证明，温度和光照在荸荠球茎的形成与膨大中均具有重要的调控作用。本发明所提供的荸荠脱毒种苗快速繁殖的方法适用于各种荸荠品种。
实施例1：
1).脱毒试管苗的获得：供试品种为苏荠(Elocharis tuberosa(Roxb.)Roem.exSchult)。取荸荠茎尖为外植体，自来水冲洗后，用70％乙醇表面消毒30秒钟，再用0.1％氯化汞溶液消毒15-20分钟，无菌水冲洗4-5遍后，剥去外包叶鞘，切取茎尖后接种于三角瓶中，以MS为基本培养基，附加2.0mg/l 6-BA和0.1mg/l NAA。培养50d后，可获35苗。
2).试管球茎诱导及膨大：选用生长整齐一致的试管苗，切取幼苗基部接种于MS基本培养基中，附加蔗糖150g/l，PP333 0.3mg/l，灭菌前pH值调至6.5，培养室温度20℃±2℃，每日光照12h，光强2000lx左右，90d后统计球茎形成率为92％，并称量鲜重达260mg，球茎移栽大田成活率为93％。实施例2：
1)脱毒试管苗的获得：供试荸荠品种为桂林马蹄(Elocharis tuberosa(Roxb.)Roem.ex Schult.)，取桂林马蹄茎尖为外植体，自来水冲洗后，用70％乙醇表面消毒30秒钟，再用0.1％氯化汞溶液消毒15-20分钟，无菌水冲洗4-5遍后，剥去外包叶鞘，切取茎尖后接种于三角瓶中，以White基本培养基，附加0.5mg/l ZRs和2.0mg/l NAA，培养50d后，可获28苗。
2)试管球茎诱导及膨大：选用生长整齐一致的试管苗，切取幼苗基部接种于white基本培养基中，附加5.0mg/l 6-BA，3.5mg/l NAA，白糖90g/l，PP333 3.0mg/l，灭菌前将pH调至6.2。培养室温度为25℃±2℃，每日照光10h，光强2000lx左右，90d后统计球茎形成率为91％，并称量球茎鲜重为350mg，球茎移栽大田成活率96.2％。实施例3：
供试荸荠品种为桂林马蹄，取茎尖为外植体，按照以上方法，调整培养基成份和培养条件后实施结果如下：
1)试管苗培养基：MS+0.1mg/l 6-BA+1.0mg/l NAA；诱导球茎形成与促进球茎膨大培养基：MS+3.0mg/l 6-BA+0.5mg/l NAA+白糖60g/l+1.0mg/l PP333，80d后统计球茎形成率为88％，球茎鲜重为270mg，球茎移栽大田成活率为92％。
2)试管苗培养基：MS+2.0mg/l 6-BA+2.0mg/l NAA；诱导球茎形成与促进球茎的膨大的培养基：MS+1.4mg/l 6-BA+0.1mg/l NAA+蔗糖90g/l+PP3330.5mg/l，100d后统计球茎形成率为86％，球茎鲜重310mg，球茎移栽大田成活率96.8％。
3)试管苗培养基：MS+1.5mg/l KT+1.0mg/l NAA；诱导球茎形成与促进球茎膨大培养基：MS+0.6mg/l 6-BA+0.5mg/l NAA+白糖100mg/l+PP333 0.2mg/l，每天光照8h，温度22℃，80d生统计球茎形成率为95％，球茎鲜茎330mg，球茎移栽大田成活率98％。
4)试管苗培养基：MS+3.0mg/l KT+0.8mg/l NAA；诱导球茎形成与促进球茎膨大培养基：MS+0.2mg/l KT+0.8mg/l NAA；诱导球茎形成与促进球茎膨大培养基：MS+2.0mg/l 6-BA+0.2mg/l NAA+蔗糖100g/l+PP333 1.0mg/l，每天光照小时，温度18℃，85d后统计球茎形成率94％，球茎鲜重为380mg，球茎移栽大田成活率为98.5％。
5)试管苗培养基：MS+6.0mg/l KT+0.4mg/l NAA；诱导球茎形成与促进球茎膨大培养基：MS+8.0mg/l 6-BA+1.0mg/l NAA+白糖150g/l+PP333 1.5mg/l，每天光照14h，温度22℃，90d后统计球茎形成率为90％，球茎鲜重305mg，球茎移栽大田成活率93.5％。
6)试管苗培养基：MS+4.0mg/l KT+2.0mg/l NAA；诱导球茎形成与促进球茎膨大培养基：MS+5.0mg/l 6-BA+0.8mg/l NM+白糖120g/l+PP333 2.0mg/l，每天光照10h，温度20℃，90d后统计球茎形成率为94％，球茎鲜重320mg，球茎移栽大田成活率94％。
7)试管苗培养基：White+2.0mg/l 6-BA+0.5mg/l NAA；诱导球茎形成与促进球茎膨大培养基：White+5.0mg/l 6-BA+0.8mg/l NAA+蔗糖90g/l+PP333 1.0mg/l，每天光照10h，温度20℃，90d后统计球茎形成率为93％，球茎鲜重280mg，球茎移栽大田成活率93％。
8)试管苗培养基：White+5.0mg/l 6-BA+1.0mg/l NAA；诱导球茎形成与促进球茎膨大培养基：White+10mg/l 6-BA+3.0mg/lNAA+蔗糖60g/l+PP3333.0mg/l，每天光照10h，温度20℃，90d后统计球茎形成率为92％，球茎鲜重260mg，球茎移栽大田成活率90％。
9)试管苗培养基：White+3.0mg/l 6-BA+0.8mg/l NAA；诱导球茎形成与促进茎膨大培养基：White+10mg/l 6-BA+3.0mg/l NAA+60g/l+PP3333.0mg/l，每天光照10h，温度20℃，90d后统计球茎形成率为92％，球茎鲜重280mg，球茎移栽大田成活率90.5％。
10)试管苗培养基：White+5.0mg/l ZRs+1.0mg/l NAA；诱导球茎形成与促进茎膨大培养基：White+5.0mg/l 6-BA+0.8mg/l NAA+蔗糖90g/l+PP333 1.0mg/l，每天光照10h，温度20℃，90d后统计球茎形成率为91％，球茎鲜重270mg，球茎移栽大田成活率92％。
11)试管苗培养基：White+10mg/l ZRs+2.0mg/l NAA；诱导球茎形成与促进茎膨大培养基：White+10mg/l 6-BA+3.0mg/l NAA+蔗糖60g/l+PP333 3.0mg/l，每天光照10h，温度20℃，90d后统计球茎形成率为90％，球茎鲜重330mg，球茎移栽大田成活率95％。
12)试管苗培养基：MS+2.0mg/l ZRs+0.6mg/l NAA；诱导球茎形成与促进球茎膨大培养基：White+0.6mg/l 6-BA+0.5mg/l NAA+白糖100g/l+PP333 0.2mg/l，每天光照8h，温度22℃，80d后统计球茎形成率为92％，球茎鲜重310mg，球茎移栽大田成活率95％。
13)试管苗培养基：MS+1.0mg/l ZRs+0.2mg/l NAA；诱导球茎形成与促进球茎膨大培养基：White+0.6mg/l 6-BA+0.5mg/l NAA+白糖100g/l+PP333 0.2mg/l，每天光照8h，温度22℃，80d后统计球茎形成率为92％，球茎鲜重290mg，球茎移栽大田成活率92％。
14)试管苗培养基：White+5.0mg/l ZRs+1.0mg/l NAA；诱导球茎形成与促进茎膨大培养基：MS+5.0mg/l 6-BA+0.8mg/l NAA+蔗糖120g/l+PP333 1.5mg/l，每天光照10h，温度20℃，90d后统计球茎形成率为95％，球茎鲜重360mg，球茎移栽大田成活率97.8％。
15)试管苗培养基：White+1.0mg/l ZRs+0.6mg/l NAA；诱导球茎形成与促进茎膨大培养基：White+0.6mg/l 6-BA+0.5mg/l NAA+白糖100g/l+PP333 0.2mg/l，每天光照16h，温度25℃，90d后统计球茎形成率为89％，球茎鲜重230mg，球茎移栽大田成活率90％。
16)试管苗培养基：White+1.0mg/l ZRs+0.6mg/l NAA；诱导球茎形成与促进茎膨大培养基：MS+5.0mg/l 6-BA+0.8mg/l NAA+蔗糖120g/l+PP333 1.5mg/l，每天光照10h，温度20℃，90d后统计球茎形成率为96％，球茎鲜重330mg，球茎移栽大田成活率95％。
Claims (3)
1、一种荸荠脱毒种苗快速繁殖的方法，其实施步骤如下：
1.1)取荸荠茎尖为外植体，将茎失外包叶鞘剥除后接种在附加0.01-10.0mg/l 6-BA或KT或ZRs和0.02-8.0mg/l NAA的MS或White培养基体。培养30-60d后，取试管苗基部继代培养。
1.2)诱导试管球茎与促进球茎膨大：将上述试管苗转接于附加0.01-6.0mg/l6-BA，0-4.0mg/l NAA，50-180g/l糖，0.2-20mg/l PP333，MS或White培养基中，60-90d后即可形成大量球茎供移栽用。
2、根据权利要求1所述的一种荸荠脱毒种苗快速繁殖的方法，其特征在于：各阶段培养条件为，pH5.6-8.0，温度15-28℃，光照强度1800-2500lx，光照时间，4-20h/d。
3、根据权利要求1或2所述的一种荸荠脱毒种苗快速繁殖的方法，其特征在于：所用糖类指的是蔗糖、葡萄糖和白糖，以蔗糖为最好。
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1999
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