CN100456922C - 大蒜茎尖培养结合冷处理生产脱毒种苗的方法 - Google Patents

Abstract

一种农业技术领域的大蒜茎失培养结合冷处理生产脱毒种苗的方法，步骤为：(1)蒜瓣冷藏处理；(2)取材灭菌；(3)茎尖培养：在双筒解剖镜下剥取茎尖，将切下的茎尖生长点接种到事先配好的MS+BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L的培养基中，在25℃、光强30μmol·m^-2·s^-1、光照时间16hr/天的条件下培养，使茎尖成活并生长；(4)继代增殖培养：将诱导出的大蒜健壮幼苗转接到MS+BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L增殖培养基上，进行继代培养；(5)试管苗生根：经过几代增殖培养后，将生长健壮的试管苗转接到生根培养基MS+IBA0.5mg/L上生根，培养3周；(6)练苗移栽：试管苗生根后，在严格隔离的防虫网室中驯化培养，提高试管苗成活率。应用本发明获得的大蒜脱毒种苗的蒜头产量和蒜薹产量分别比用普通蒜头的生产田增产20%和30%以上。

Description

大蒜茎尖培养结合冷处理生产脱毒种苗的方法

技术领域

本发明涉及的是一种农业技术领域的方法，具体是一种大蒜茎尖培养生产脱毒苗的方法。

背景技术

大蒜是营养繁殖作物，在生产上是靠鳞茎进行无性繁殖的，体内病毒积累逐年增加，病毒病发生严重。据报道，带毒大蒜产量损失可达50％。同时，鳞茎变小，花茎褪绿，商品形状受到很大影响，难以达到国际市场的消费要求。感病蒜，瓣蒜小，出苗细弱，生长较慢，叶片窄，即使多施几次肥，一般也难以达到大瓣种蒜的生长速度；因而致使蒜头变小，单位产量下降。大蒜病毒病是影响大蒜生产的主要病害，目前还没有药剂可以治理。因此，应用组织培养和病毒检测技术培育、繁育脱毒种苗用于生产是防治病毒病的有效途径。由于组织培养获取大蒜无病毒苗排除了化学药剂的防治，所以对减少污染，防止公害，保护环境，增进健康也有积极的意义。

经对现有技术的文献检索发现，中国专利申请号：CN99114259.4，名称为：一种大蒜脱毒种苗快速繁殖的方法，该专利自述为：提供了一种大蒜脱毒种苗快速繁殖的方法，专用于大蒜脱毒种苗的快速繁殖。该方法取未熟蒜薹为外植体，通过对不同培养基、培养时间的选择、糖种类及浓度、激素配比的改变、新型植物激素茉莉酸及水杨酸的应用，可同时获得大量脱毒试管苗，繁殖基数达50-70；试管鳞茎诱导率达80％以上，鳞茎鲜重300mg以上。所形成的鳞茎可直接移栽田间生长，省工省力，速度快，脱毒效果好，适合工厂化育苗，可商品化生产。该项技术不足之处在于：要培养出大蒜小鳞茎后才应用于生产，增加了培养步骤，费时费工，增加了成本。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种大蒜茎尖培养结合冷处理生产脱毒种苗的方法，使其提高了脱毒效率，并且不用诱导小鳞茎，直接形成完整植株，建立一套简单、高效、稳定的生产大蒜脱毒种苗的体系，脱除病毒。本发明简化了大蒜脱毒过程，降低了生产脱毒苗的成本。

本发明是通过以下技术方案实现的，本发明包括以下步骤：

(1)蒜瓣冷藏处理：把收获的种蒜头放入冰箱内，低温贮藏。

(2)取材灭菌：将经过冷处理的蒜瓣，加入自来水，置于培养箱中培养，以打破蒜瓣的休眠，诱导其萌发成苗。然后用该萌发的大蒜幼苗作为外植体进行灭菌处理。

(3)茎尖培养：在双筒解剖镜下剥取茎尖，将切下的茎尖生长点接种到事先配好的MS+BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L的培养基中，在25℃、光强30μmol·m^-2·s^-1、光照时间16hr/天的条件下培养，使茎尖成活并生长。

(4)继代增殖培养：将诱导出的大蒜健壮幼苗转接到MS+BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L增殖培养基上，进行继代培养。

(5)试管苗生根：经过几代增殖培养后，将生长健壮的试管苗转接到生根培养基MS+IBA0.5mg/L上生根。

(6)练苗移栽：试管苗生根后，要在严格隔离的防虫网室中驯化培养，提高试管苗成活率。

本发明采用以茎尖培养结合冷处理的方法进行脱毒。大蒜组培脱毒技术的主要依据是病毒在植物体内分布并不均匀，某些器官或组织如茎尖等不带或少带病毒。其一，病毒在植物体内是通过微管系统传播的，而分生组织内部不存在微管系统；其二，分生组织内源生长激素含量较高，对病毒有钝化作用；其三，分生组织细胞分裂速度超过病毒的繁殖速度。因此，通过茎尖分生组织组培可以获得脱毒苗，在大蒜生产中通过这种方式都得到了较为理想的脱毒效果。应用这种方法，可以在实验室生产大量大蒜脱毒种苗，不受季节的限制，脱毒种苗可直接应用于生产，省时省力。

本发明获得的大蒜试管苗，用电子显微镜鉴定，电镜观察不到有病毒，脱毒完全。大田生产试验表明：利用脱毒种苗进行生产，比直接蒜头作种苗的生产田蒜头产量高出25％-30％，蒜薹产量高出20％以上，并且品质有明显改善。

具体实施方式

结合本发明的内容提供以下实施例，具体实施如下：

1.蒜瓣冷藏处理把收获的种蒜头装在塑料袋中，放入冰箱内，4℃低温贮藏，处理时间为14天。

2.取材灭菌将经过冷处理的蒜瓣，置于托盘中，加入自来水，置于30℃培养箱中培养3天，以打破蒜瓣的休眠，诱导其萌发成苗。选择生长健壮的蒜苗切去嫩叶及大部分蒜瓣，剥去蒜衣，用自来水冲洗2h后，在超净台上用70％酒精快速处理30s，用饱和漂白精液浸泡15min，然后用无菌水冲洗3遍。

3.茎尖培养在超净工作台上，将经过外植体消毒的蒜瓣、蒜苗切除外层鳞片，露出的基盘顶芽置于双目解剖镜下，由外向内逐层剥去幼叶及叶原基，直至闪亮半圆球的顶端分生组织充分暴露出来，切取茎尖生长点0.2mm大小接种于MS+BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L培养基上，光照31.25μmol·m^-2·s^-1，14h/d，温度25℃，培养30d。

4.继代增殖培养将分化的试管苗转接MS+BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L增殖培养基上，增殖培养过程中每隔30d继代一次。

5.试管苗生根经过几代增殖培养后，将生长健壮的试管苗转接到生根培养基MS+IBA0.5mg/L上生根，培养3周。生根率可达94.44％，平均单株生根数达20条，平均根长为2.0cm。

6.练苗移栽将生根试管苗瓶口打开，培养室内放置3天后取出，洗净其根部的培养基，移栽到严格隔离的防虫网室中，在2/3珍珠岩加1/3泥炭的炼苗基质上种植，温度保持在25℃，相对湿度90％，适当遮荫，后期逐渐通风，增加光照，常规管理。

大蒜脱毒种苗在上海嘉定大蒜生产基地进行试种，结果表明：脱毒种苗生产田的蒜头产量达到320公斤/亩，蒜薹产量达到600公斤/亩，分别比用普通蒜头的生产田增产28％和20％。

Claims (7)

1、一种大蒜茎尖培养生产脱毒苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)蒜瓣冷藏处理：把收获的种蒜头放入冰箱内，4℃低温贮藏，处理时间为14天；

(2)取材灭菌：将经过冷处理的蒜瓣，加入自来水，置于30℃培养箱中培养3天，，以打破蒜瓣的休眠，诱导其萌发成苗，然后用该萌发的大蒜幼苗作为外植体进行灭菌处理；

(3)茎尖培养：在双筒解剖镜下剥取茎尖，将切下的茎尖生长点接种到事先配好的MS+BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L的培养基中，在25℃、光强30μmol·m^-2·s^-1、光照时间16hr/天的条件下培养，使茎尖成活并生长；

(4)继代增殖培养：将诱导出的大蒜健壮幼苗转接到MS+BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L增殖培养基上，进行继代培养；

(5)试管苗生根：经过几代增殖培养后，将生长健壮的试管苗转接到生根培养基MS+IBA0.5mg/L上生根，培养3周；

(6)练苗移栽：试管苗生根后，在严格隔离的防虫网室中驯化培养，提高试管苗成活率。

2、根据权利要求1所述的大蒜茎尖培养生产脱毒苗的方法，其特征是，所述的步骤(1)中，把收获的种蒜头装在塑料袋中，放入冰箱内。

3、根据权利要求1所述的大蒜茎尖培养生产脱毒苗的方法，其特征是，所述的步骤(2)，用该萌发的大蒜幼苗作为外植体进行灭菌处理，具体为：选择生长健壮的蒜苗切去嫩叶及大部分蒜瓣，剥去蒜衣，用自来水冲洗2h后，在超净台上用70％酒精快速处理30s，用饱和漂白精液浸泡15min，然后用无菌水冲洗3遍。

4、根据权利要求1所述的大蒜茎尖培养生产脱毒苗的方法，其特征是，所述的步骤(3)，茎尖培养，具体为：在超净工作台上，将经过外植体消毒的蒜瓣、蒜苗切除外层鳞片，露出的基盘顶芽置于双目解剖镜下，由外向内逐层剥去幼叶及叶原基，直至闪亮半圆球的顶端分生组织充分暴露出来，切取茎尖生长点0.2mm大小接种于MS+BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L培养基上，温度25℃，培养30d。

5、根据权利要求1所述的大蒜茎尖培养生产脱毒苗的方法，其特征是，所述的步骤(4)，继代增殖培养，具体为：将分化的试管苗转接MS+BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L增殖培养基上，增殖培养过程中每隔30d继代一次。

6、根据权利要求1所述的大蒜茎尖培养生产脱毒苗的方法，其特征是，所述的步骤(5)，试管苗生根，具体为：经过几代增殖培养后，将生长健壮的试管苗转接到生根培养基MS+IBA0.5mg/L上生根，培养3周，生根率达94.44％，平均单株生根数达20条，平均根长为2.0cm。

7、根据权利要求1所述的大蒜茎尖培养生产脱毒苗的方法，其特征是，所述的步骤(6)，练苗移栽，具体为：将生根试管苗瓶口打开，培养室内放置3天后取出，洗净其根部的培养基，移栽到严格隔离的防虫网室中，在2/3珍珠岩加1/3泥炭的炼苗基质上种植，温度保持在25℃，相对湿度90％，适当遮荫，后期逐渐通风，增加光照，常规管理。