CN1248293A - 淀粉分支酶表达的有义内含子抑制作用 - Google Patents

Abstract

描述一种抑制基因表达的方法。所述方法影响植物中的酶活性,它包括在植物(或其细胞,组织或器官)中表达核苷酸序列,其中核酸序列(部分或全部)编码A类SBE有义方向内含子;并且其中所述核苷酸序列不含正常时与所述内含子相连的外显子的有义序列。

Description

淀粉分支酶表达的有义内含子抑制作用

本发明涉及抑制基因表达，特别是抑制植物中基因表达的方法。本发明还涉及所述方法中使用的核苷酸序列。此外，本发明涉及对表达所述核苷酸序列有用的启动子。

淀粉是植物，特别是高等植物中主要的存储碳水化合物。淀粉的结构包括直链淀粉与支链淀粉。直链淀粉基本上由α-1-4-连接糖基的直链组成。支链淀粉包含一些α-1-6分支的α-1-4-连接糖基链。支链淀粉的分支性质是通过一种通常熟知的酶如淀粉分支酶(“SBE”)的特别作用而形成的。SBE通过α-1，6-葡萄糖苷分支键加入α-1，4葡萄糖苷，催化支链淀粉分子的分支点形成。直链淀粉与支链淀粉的生物合成以图解方式在图1中给出，而α-1，4-键与α-1，6键如图2所示。

在马铃薯中，已知存在两类SBE。在我们的共同未决国际专利申请PCT/EP96/03052和PCT/EP96/03053中，讨论了B类马铃薯SBE及其编码基因。在国际专利申请WO96/34968中，公开了A类马铃薯SBE及编码它的cDNA。

已知淀粉是重要的原料。淀粉广泛应用在食品，造纸和化学工业。然而，在这些工业应用中使用的大部分淀粉要经过化学，物理或酶学方法的收获后修饰，以获得具有某种所需功能性质的淀粉。

在过去的数年中，已经达到如愿的产生遗传修饰的植物，被修饰的植物能产生与收获后修饰淀粉相同的修饰淀粉。还知道通过表达反义核苷酸编码序列，可制备这种遗传修饰的植物。在这方面，JuneBourque提供了在植物中进行基因操作的反义策略的详细总结(Bourque 1995植物科学105第125-129页)。

WO96/34968讨论了使用A类和B类马铃薯SBE序列互补的反义序列下调马铃薯植株中SBE的表达。所使用的序列与SBE编码序列互补。

即使已知酶活性可受到具体核苷酸序列表达的影响(例如参见在Finnegan and MceLroy[1994]生物技术12 883-888的论述以及Matzke and Matzke[1995]TIG 11 1-3的论述)，仍需要一种更可靠和(或)更有效和(或)更专一的影响酶活性的方法。

本发明的第一方面提供了一种影响植物(或其细胞，组织或器官)中酶活性的方法，其中包括在植物(或其细胞，组织或器官)中表达一种核苷酸序列，其中所述核苷酸序列以有义方向部分或全部编码(是)马铃薯A类SBE基因内含子，以及以有义或反义方向部分或全部编码B类淀粉分支酶内含子的核苷酸序列；而其中所述核苷酸序列不含正常与所述内含子连结的有义外显子序列。

本发明的第二方面提供了影响产生淀粉的生物体(或其细胞，组织或器官)中酶活性的方法，包括在产淀粉生物体(或其细胞，组织或器官)中表达以反义方向部分或完全编码A类马铃薯淀粉分支酶的内含子的核苷酸序列，任选的，以及一种以反义或正义方向部分或完全编码B类淀粉分支酶的内含子的核苷酸序列；而其中所述核苷酸序列不含对于正常与所述内含子结合的外显子序列为正义的序列，并且其中淀粉分支酶活性受到影响和(或)支链淀粉的水平受影响和(或)淀粉组成被改变。

优选结合使用A类SBE基因有义内含子构建体与PCT/EP96/03053中定义的马铃薯B类SBE基因有义内含子构建体。然而，也可独立使用靶A类SBE基因，或与其他转基因，如其他有义和(或)反义转基因，例如来自SBE基因的反义内含子转基因结合使用以进一步改良马铃薯植物中的淀粉质量。

本发明的第三方面提供一种序列，包括如SEQ.I.D.NO.38给出的核苷酸序列或其变体，衍生物或同系物。

本发明的第四方面提供含如SEQ.ID.No.14给出的序列或其变体，衍生物或同系物的启动子。

本发明的第五方面提供能包含或表达本发明的构建体。

本发明的第六方面提供包含或表达本发明的载体。

本发明的第七方面提供包含或表达本发明的细胞，组织或器官。

本发明的第八方面提供包含或表达本发明的产转基因淀粉的生物体。本发明的第九方面提供从本发明获得的淀粉。

本发明的一个关键优点是它提供了制备修饰的淀粉的一种方法，而该方法不必须进行淀粉的收获后修饰。因此，本发明的方法排除了使用有害化学品的需要，所述化学品通常在淀粉的收获后修饰中使用。

此外，本发明特别提供遗传修饰的植物，所述植物能产生修饰的和(或)新型和(或)改进的淀粉，所述淀粉的性质将满足各种工业要求。

因此，本发明提供制备植物中特制淀粉的方法，该方法可代替淀粉的收获后修饰。

本发明还提供一种方法，该方法使被修饰的淀粉能通过一种比已知收获后修饰方法对环境更有益的方法进行制备，而收获后修饰的方法是依赖于使用有害化学品和大量能量的。

本发明的其他关键性优点是，与已知对酶活性有作用的方法相比它提供对酶活性有更可靠和(或)更有效和(或)更专一的影响的方法。就本发明的这个优点而言，应注意到SBEs编码区之间存在某些程度的同源性。然而，与SBEs内含子序列少有或没有同源性。因此，有义内含子的表达提供了选择性影响具体A类SBE表达的一种机制。这些有利的方面可被用于例如减少或消除具体的SBE酶并用另一种酶代替之，所用的酶可以是另一种分支酶或甚至是受影响的酶的重组体或甚至一种杂种酶，例如所述杂种酶可包括从一个来源的部分SBE酶和至少一部分另一来源的另一SBE酶。本发明的这种具体特征被包括在后文本发明对复合物方面更详细的讨论中。

因此，本发明提供选择性影响SBE活性的机制。这与先前的专业方法形成对照，所述方法依赖于使用反义外显子表达，依靠这种表达，不可能引入新的SBE活性而又对该活性没有影响。

在本发明的上下文中，B类SBE与SBE I是同义词：而A类SBE与SBE II是同义词。A类SBE在WO96/34968中有定义，本文引用为参考。优选使用的反义内含子构建体包括A类SBE的内含子1，它有2.0kb长并位于以A类SBE编码序列的第45个残基处开始的位置。所述内含子的边界可通过查询共有内含子边界序列进行计算，并在附图11中给出。所述内含子序列在SEQ.ID.No.38中给出。B类SBE基本上如本文和在PCT/EP96/03053中给出的序列所定义的。

就本发明的第一方面而言，优选分支酶活性受影响和(或)支链淀粉的水平受影响和(或)淀粉组成被改变。

就本发明的第一或第二方面而言，优选所述核苷酸序列不含对外显子是有义的序列。

就本发明的第四方面而言，优选所述启动子与目的基因(“GOI”)结合。

优选酶活性被降低或消除。

优选所述核苷酸序列编码有义方向的至少一个内含子的至少基本上全部序列。

所述核苷酸序列优选部分或全部编码两个或两个以上的内含子，并且其中每个内含子是有义方向的。

所述核苷酸序列优选包括至少350核苷酸(例如350bp)，更优选至少500核苷酸(例如500bp)。

所述核苷酸序列优选包含SEQ.ID.No.38中给出序列序列或其片段。

所述核苷酸优选通过含如SEQ.ID.No14给出序列或其变体，衍生物或同系物序列的启动子进行表达。

产生转基因淀粉的生物体优选是植物。

因此，本发明的一个优选方面涉及影响植物(或其细胞，组织或器官)的酶活性的方法，包括在所述植物(或其细胞，组织或器官)中表达一个核苷酸序列，其中所述核苷酸序列以有义方向部分或全部编码A类SBE内含子；其中所述核苷酸序列不含对于与该内含子正常连结的外显子为有义的序列；并且其中淀粉分支酶活性受影响和(或)支链淀粉的水平受影响和(或)淀粉组成被改变。

因此，本发明的更优选方面涉及影响植物(或其细胞，组织或器官)中的酶活性的方法，包括在所述植物(或其细胞，组织或器官)中表达一个核苷酸序列，其中所述核苷酸序列以有义方向(部分或全部)编码一个内含子；其中所述内含子序列不含对于与该内含子正常连结的外显子为有义的序列；其中淀粉分支酶受到影响和(或)支链淀粉水平受到影响和(或)淀粉组成被改变；并且其中所述核苷酸序列包含SEQ.ID.No.38给出的序列或其片段。

本发明涉及的术语“核苷酸”包括DNA和RNA。该术语优选意指DNA，更优选通过使用重组DNA技术制备的DNA。

术语“内含子”以其正常意义被用做意指核苷酸片段，通常指被转录但不编码部分或全部表达的蛋白质或酶之DNA。

术语“外显子”正常意义上被用做意指核苷酸片段，通常指编码部分或全部表达的蛋白质或酶的DNA。

因此，术语“内含子”指能转录成RNA分子的基因区域，但该区域在RNA被翻译成蛋白质前从所述RNA中被切除。相比之下，术语“外显子”指被转录成RNA并随后翻译成蛋白质的基因区域。

如果所产生的核苷酸序列能影响植物，或其细胞或组织中的酶活性，则本发明核苷酸序列所涉及的术语“变体”或“同系物”或“片段”包括从或向各自的核苷酸序列进行任何替代，变异，修饰，取代，缺失或添加一个(或多个)核酸，优选的其中所产生的核苷酸序列至少与SEQ.ID.No.38给出的序列有相同的效应。特别是，如果所产生的核苷酸序列具有影响符合本发明酶活性的能力，则术语“同系物”包含与结构类似性和(或)功能类似性相关的同源性。就序列同源性(即类似性)而言，优选含80％以上的同源性，更优选至少85％同源性，更优选至少90％同源性，甚至更优选至少95％同源性，更优选至少98％同源性。上述术语亦是所述序列的等位基因变异的同义词。

同样，如果所产生的启动子序列容许GOI表达，其中优选所产生的启动子序列有至少与SEQ.ID.No.14相同的效应，则本发明启动子所涉及的术语“变体”或“同系物”或“片段”包括从或向各自的启动子序列进行一个(或多个)核酸的任何替代，变异，修饰，取代，缺失或添加。特别是，如果所产生的启动子序列有能力容许表达GOI，如本发明的核苷酸序列，则术语“同系物”包括了结构类似性和(或)功能类似性方面的同源性。就序列同源性(即类似性)而言，优选含80％以上的同源性，更优选至少85％同源性，更优选至少90％同源性，甚至更优选至少95％同源性，更优选至少98％同源性。上述术语亦是所述序列的等位基因变异的同义词。

假设使用的是部分有义序列，所述部分序列影响酶活性，则本发明的内含子序列可以是本发明的内含子序列任何之一或全部，包括其部分序列。适当的部分序列的实例包括比SEQ.ID.No.38给出的全部有义序列的任何之一更短但包含了与各自的外显子相邻的序列或外显子。

就本发明的第二方面内容而言(即专一影响SBE活性)，如果所述核苷酸序列可影响SBE活性(优选所述核苷酸降低或消除SBE活性)，则本发明的核酸序列可包含A类或B类SBE基因的一个或多个有义或反义外显子序列(但不包含与所述内含子序列自然结合的有义外显子序列)，包括其完全或部分序列。本发明的第二方面的核苷酸序列优选不包括有义外显子序列。

术语“载体”包括表达载体和转化载体。术语“表达载体”意指能在体内或体外表达的构建体。术语“转化载体”意指能从一个物种转移到另一物种-如从大肠杆菌质粒到真菌或植物细胞，或从土壤杆菌到植物细胞的一种构建体。

术语“构建体”与术语“共轭体”，“盒”及“杂合体”是同义词，它与本发明的有义核苷酸序列方面有关，它包括与启动子直接或间接相连的本发明核苷酸序列。间接相连的实例是提供适当的间隔群，如内含子序列如本发明的启动子和核苷酸序列之间Sh1-内含子或ADH内含子。与本发明有关的术语“融合的”也同样包括直接或间接相连。所述术语不包括在其自然环境中与野生型SBE基因启动子相连的野生型SBE基因天然复合物。

所述构建体甚至包含或表达一种标记，该标记容许选择例如植物细胞中的遗传构建体，这种构建体已被转移进入所述细胞中。例如现有各种用于植物的标记，如甘露糖。标记的其他实例包括提供例如G418，潮霉素，博莱霉素，卡那霉素和庆大霉素抗生素抗性的标记。

本发明的构建体优选包括启动子。所述术语“启动子”以本专业的正常意义使用，例如Jacob-Monod基因表达理论中的RNA聚合酶结合部位。适当的启动子实例是那些能指导本发明核苷酸序列有效表达和(或)在具体类型的细胞中有效表达的启动子。组织特异性启动子的某些实例在WO 92/11375中有描述。

此外，所述启动子可包括保守区如Pribnow盒或TATA盒。所述启动子甚至可包括影响(如维持，增强，降低)本发明核苷酸序列表达水平的其他序列。此类序列的适当实例包括Sh1-内含子或ADH内含子。其他序列包括可诱导元件-如温度，化学试剂，光或应激诱导的元件。也可存在适合于增强转录或翻译的元件。后述元件的一个实例是TMV5’前导序列(参见Sleat基因217[1987]217-225；和Dawson植物分子生物学.23[1993]97)。

正如所描述的，本发明的构建体与(或)载体可包括转录起始区，它可提供调节型或组成型表达。任何适当的启动子可被用于所述转录起始区，如组织特异性启动子。一方面，所述启动子优选是patatin启动子或E35S启动子。另一方面，所述启动子优选是SBE启动子。

例如，如果所述生物体是植物，则所述启动子可以是影响任何一种或多种种子，块茎，茎，新芽，根以及叶组织(优选块茎)中核苷酸序列的表达的启动子。作为实施例，本发明核苷酸序列的启动子可以是如1994年10月21日提交的我们的共同未决UK专利申请号9421292.5中描述的α-Amy 1启动子(另外称为Amy 1启动子，Amy 637启动子或α-Amy637启动子)。或者本发明的核苷酸序列的启动子可以是如1994年10月21日提交的我们的共同未决UK专利申请号9421286.7中描述的α-Amy 3启动子(另外称为Amy 3启动子，Amy 351启动子或α-Amy351启动子)。

本发明还包括使用启动子表达本发明核苷酸序列。其中所述启动子的一部分被失活，但其中所述启动子仍可行使启动子功能。在某些情况下，启动子的部分失活是有利的。特别是对早些时候提及的Amy351启动子，有可能失活其一部分以致所述部分失活的启动子以更专一的方式如仅在一种特异组织型或器官中表达本发明的核苷酸序列。术语“失活”指部分失活，其意义在于所述启动子的表达方式被修改但其中部分失活的启动子仍行使启动子功能。然而，如上所述，经过修饰的启动子能至少在一种(但非全部)原始启动子特异组织中表达编码本发明的酶的基因。部分失活的实施例包括改变启动子序列的折叠形式，或与部分核苷酸序列的结合种类，以使部分所述核苷酸序列不被例如RNA聚合酶识别。另一个(并且是优选的)部分灭活启动子的方法是将其截成片段。另一种方法是使一部分所述序列突变，以使RNA聚合酶不能与那个部分或另一部分结合。另一种修饰是使调节蛋白(例如已知丝状真菌的CreA蛋白质)的结合部位发生突变，以进行碳分解产物抑制，因而废除了天然启动子的分解产物抑制作用。

本发明的构建体与(或)载体可包括转录终止区。

本发明的核苷酸可以与另外的构建体结合的形式(但并不必须在同时进行)进行表达。因此，本发明还提供含第一构建体和第二构建体的构建体组合，所述第一构建体包含有效连接到第一启动子的本发明核苷酸序列；而第二构建体包含一个有效连接到第二启动子(它不必与第一启动子相同)的GOI。就本发明的此方面而言，构建体组合物可在相同的载体，质粒，细胞，组织，器官或生物体中存在。本发明的这方面还包括表达同样分子(优选在特异细胞或组织)，如恰在一个生物体(一般是一株植物)的一个特异性细胞或组织中表达的方法。就本发明的这方面内容而言，第二构建体不包括编码通常与所述野生型基因启动子结合的酶基因的天然组合物(当两者均存在于其自然环境中时)。

适当的组合物的一个实施例是含本发明核苷酸序列和启动子(如本发明的启动子)的第一构建体，以及含一个启动子(如本发明启动子)和一个GOI的第二构建体，其中GOI编码有义或反义方向的另一种淀粉分支酶。

有关本发明有义核苷酸方面的术语“构建体”和本发明的启动子方面的术语“构建体”在使用上是等价的。在这方面，所述术语包括直接或间接与GOI连接的本发明启动子。

就本发明的启动子方面或本发明的组合物方面而言，术语“GOI”指任何目的基因，这些基因并非必须编码蛋白质或酶-如后文所解释的。GOI可以是任何核苷酸序列，对正在研究的生物体而言(例如植物)它既可以是外来的也可以是天然的。

GOI的典型实例包括编码修饰代谢或分解代谢过程的其他蛋白质或酶的基因。所述GOI可编码引入或增强病原抵抗力的分子。

所述GOI甚至可以是修饰相关组织中存在的天然转录物表达过程的一种反义构建体。这种GOI的一个实例是本发明的核苷酸序列。

所述GOI甚至可编码对宿主生物体-例如植物而言是非天然的蛋白质。所述GOI可编码一种对动物或人类有益的化合物。例如，所述GOI可编码有药物活性的蛋白质或酶如治疗用化合物胰岛素，干扰素，人血清白蛋白，人生长因子和血液凝集因子中的任何之一。所述GOI甚至可编码给食品，饲料或作物以附加营养价值的蛋白质。典型实例包括能抑制抗营养性因子形成的植物蛋白质和有更多必需的氨基酸组成(例如比非转基因植物更高的赖氨酸含量)的植物蛋白质。所述GOI甚至可以编码用于食品加工的一种酶，如木聚糖酶和α-半乳糖苷酶。所述GOI甚至可以是编码害虫毒素，如α淀粉酶，蛋白酶或葡聚糖酶的反义转录物。或者，所述GOI可以是本发明的核苷酸序列。

所述GOI可以是编码阿拉伯呋喃糖苷酶的核苷酸序列，它是我们的共同未决UK专利申请9505479.7的主题。所述GOI可以是编码葡聚糖酶的核苷酸序列，它是我们的共同未决UK专利申请9505475.5的主题。所述GOI可以是编码α淀粉酶的核苷酸序列，它是我们的共同未决UK专利申请9413439.2的主题。所述GOI可以是编码α淀粉酶的核苷酸序列，它是我们的共同未决UK专利申请9421290.9的主题。所述GOI可以是编码葡聚糖裂解酶的核苷酸序列，它在我们的共同未决PCT专利申请PCT/EP94/03397中被描述。

另一方面，所述GOI甚至可以是与一个不同的启动子有效连接的本发明核苷酸序列。

所述GOI可包括编码一个或多个木聚糖酶，阿拉伯糖酶，乙酰酯酶，鼠李半乳糖醛酸酶，葡聚糖酶，果胶酶，分支酶或另一种碳水化合物修饰酶或蛋白酶的序列。或者，所述GOI可以是任何这些序列的反义序列。

如上所述，本发明提供一种选择性影响具体酶活性的机制。

在本发明的一个重要应用中，目前有可能通过表达所述具体基因组蛋白质或酶的有义内含子构建体和通过(例如在同时)表达所述酶或蛋白质的重组体来减少或消除编码基因组蛋白质或酶的基因组核苷酸序列的表达-换言之所述GOI是编码所述基因组酶或蛋白质的重组核苷酸序列。这种应用容许在缺乏(或降低了水平的)各自的基因组酶和蛋白质时表达所需要的重组酶或蛋白质。因此，所需要的重组酶和蛋白质从所述宿主生物体容易分离和纯化。本发明这个具体方面比先前的专业方法优越的多，例如先前的方法依赖于使用反义外显子表达，其方法也影响重组酶的表达。

因此，本发明的进一步内容涉及在宿主生物体中表达重组蛋白质或酶的方法，包括表达编码重组蛋白质或酶的核苷酸序列；和表达进一步的核苷酸序列，其中所述进一步核苷酸序列(部分或全部)，以有义方向编码内含子；其中所述内含子是与编码所述重组蛋白质或酶相应的蛋白质或酶基因组基因正常连接的内含子；而其中所述进一步核苷酸序列不含对于正常地与内含子结合的外显子序列为有义的序列。其他方面包括这些核苷酸序列的组合，包括其在构建体，载体，细胞，组织和转基因生物体中的整参入。

因此，本发明还涉及核苷酸序列组合，包括编码重组酶的第一个核苷酸序列和与以有义方向对应于内含子第二个核苷酸序列；其中所述内含子是与编码与所述重组酶对应的酶的基因组基因相连的内含子；而其中第二个核苷酸序列不含对于正常地与所述内含子连接的外显子序列为有义的序列。

所述GOI甚至可编码以反义方向一个或多个内含子，如一个或多个在所附序列表中给出的内含子。例如，本发明还包括表达例如一种与一个反义内含子结合的有义内含子(例如SEQ.ID.No.38)，所述反义内含子优选不与所述有义内含子序列互补(例如SEQ.ID.No.16)。

术语“细胞”，“组织”与“器官”包括细胞，组织与器官本身以及存在于生物体的相应部分。

与本发明有关的术语“生物体”包括可包含本发明核苷酸序列的任何生物体和(或)其中本发明核苷酸序列在所述生物体中存在时能被表达。所述生物体优选是产淀粉生物体如任一种植物，藻类，真菌，酵母和细菌以及它们的细胞系。所述生物体优选植物。

术语“产淀粉生物体”包括能生物合成淀粉的任何生物体。产淀粉生物体优选是植物。

如本文所使用的术语“植物”包括任何适当的被子植物，裸子植物，单子叶植物和双子叶植物。适当植物的典型实例包括蔬菜如马铃薯；谷物如小麦，玉米和大麦；水果；树木；花卉；和其他植物作物。所述术语优选指马铃薯。

本发明有关的术语“转基因生物体”包括含本发明核苷酸序列和(或)从中获得产物的任何生物体，和(或)本发明核苷酸序列可在所述生物体中表达。本发明核苷酸序列优选掺入所述生物体的基因组中。所述转基因生物体优选植物，更优选马铃薯。

为制备宿主生物体，可使用原核或真核生物体。适当的原核宿主实例包括大肠杆菌和枯草杆菌。本领域有关原核宿主的转化的论述在本领域已有充分的资料，例如参见Sambrook等(Sambrook等分子克隆：实验室手册，第二版，1989，冷泉港实验室出版)。

即使本发明的酶和编码同样物质的核苷酸序列在EP-B-0470145和CA-A-2006454中没有公开，这两个文献提供了一些有用的有关技术种类的背景评论，所述技术可用于制备本发明的转基因植物。某些背景论述目前被包括在下面评论中。

构建遗传修饰的植物的基本原理是在所述植物基因组中插入遗传信息以便获得一种稳定保持的插入遗传物质。

有一些用于插入所述遗传信息的技术。两个主要的方法是直接引入遗传信息和通过使用载体系统引入遗传信息。一般性技术综述可在Potrykus(植物生理学植物分子生物学年评[1991]42：205-225)和Christou(Agro-Food-Industry Hi-Tech 3/4月1994 17-27)的文章中找到。

因此，一方面，本发明涉及携带核苷酸序列或本发明构建体的载体系统，并且它能引入所述核苷酸序列和构建体到生物体，如植物的基因组中。

所述载体系统可包含一个载体，但它能够包含两个载体。在两个载体的情况，所述载体系统通常指双载体系统。双载体系统在Gynheung An等(1980)，双载体系统，植物分子生物学手册A3，1-19中有描述。

用给定的启动子或核苷酸序列或构建体转化植物细胞的一种广泛使用的系统是以使用根癌土壤杆菌的Ti质粒或发根土壤杆菌的质粒Ri为基础的，An等，(1986)，植物生理学.81，301-305和ButcherD.N.等(1980)，植物病理学家的组织培养法D.S.Ingrams和J.P.Helgeson编辑，203-208。已建立了几种不同的Ti和Ri质粒，它们适合于构建上述的植物或植物细胞构建体。此类Ti质粒的一个非限制性实例是pGV3850。

本发明的核苷酸序列与构建体应优选被插入到Ti质粒的T-DNA末端序列之间或与T-DNA相邻以避免破坏与T-DNA边界紧邻的序列，因为至少这些区域之一似乎是修饰过的T-DNA插入到所述植物基因组中所必须的。

从上述解释中应能理解，如果所述生物体是植物，本发明的载体系统优选包含感染植物(例如vir区)所必须的序列和至少一个T-DNA序列边界部分，所述边界部分位于与所述遗传构建体相同的载体上。

而且，所述载体系统优选根癌土壤杆菌Ti质粒或发根土壤杆菌Ri质粒或其衍生物。由于这些质粒是众所周知的并且在构建转基因植物中广泛使用，许多载体系统基于这些质粒或其衍生物而存在。

在构建转基因植物中，本发明的核苷酸序列与构建体首先在所述载体能在其中复制的微生物中构建，并且所述微生物易于在插入植物前进行处理。有用的微生物的一个实例是大肠杆菌，但有上述性质的其他微生物也可使用。当一个如上定义的载体系统的载体在大肠杆菌中构建时，如有必要，将其转移进入适当的土壤杆菌菌株，例如根癌土壤杆菌。因此，携带本发明核苷酸序列或构建体的Ti质粒优选被转移到适当的土壤杆菌菌株中，例如根癌土壤杆菌，以便获得一种携带本发明启动子或核苷酸序列或构建体的土壤杆菌细胞，其DNA随后被转移到要被修饰的植物细胞中。

例如，如果使用Ti或Ri质粒转化植物细胞，至少Ti与Ri质粒T-DNA的右边界然而通常所述T-DNA的右边界和左边界可与引入的基因序列侧翼连接。使用T-DNA转化植物细胞已被广泛研究，并在EP-A-120516；Hoekema，in：双元植物载体系统OffsetdrukkerijKanters B.B.，Alblasserdam，1985，第V章；Fraley等，Crit.Rev.Plant Sci.，4：1-46；和An等.，EMBO J.(1985)4：277-284中被描述。

通过土壤杆菌直接感染植物组织是一种广泛使用的简单技术，并在Butcher D.N.等(1981)，植物病理学家的组织培养法，D.S.Ingrams和J.P.Helgeson编辑203-208页中有描述。这方面的进一步论述参见Potrykus(植物生理学植物分子生物学年评[1991]42：205-225)和Christou(Agro-Food-Industry Hi-Tech 3/4月1994 17-27)。用这种技术，植物感染可在所述植物的某些部位或组织中或其上进行，即在叶片，根，茎部位或植物的其他部位上进行。

一般而言，通过携带GOI(如本发明的核苷酸序列)和任意启动子的土壤杆菌直接感染植物组织，被感染植物的创伤方法例如通过用剪刀给所述植物切口或用针给所述植物穿刺或用砂纸摩擦植物。然后用土壤杆菌接种伤口。然后使被接种的植物或植物部分在适当的培养基上生长并使之发育成为成熟植株。

当植物细胞被构建时，这些细胞可按照众所周知的组织培养方法进行培养或维持，如通过在以必需生长因子如氨基酸，植物激素，维生素等补充的适当培养基中培养细胞。

可通过从细胞或组织再生植物的已知方法例如通过用抗生素筛选转化的幼苗并通过在含适当营养成分，植物激素等的培养基上进行再培养使转化细胞再生成为遗传修饰的植株。

有关植物转化的进一步论述可在EP-A-0449375中找到。

如CA-A-2006454中所报道的，有大量的克隆载体可供使用，它们含大肠杆菌复制系统和容许筛选转化细胞的标记。例如，所述载体包含pBR322，pUC系列，M13 mp系列，pACYC184等。在此方面，本发明的核苷酸或构建体可被引入到所述载体的适当限制部位。然后使用所含的质粒进行大肠杆菌转化。大肠杆菌细胞被培养在适当营养成分的培养基中，然后收获并裂解。然后回收所述质粒。就分析方法而言，一般使用序列分析，限制性分析，电泳和进一步的生化-分子生物学方法。每次操作后，所使用的DNA序列被限制性酶解并与下一个DNA序列连接。每个序列可被克隆在相同或不同的质粒中。

向植物中引入本发明的核苷酸序列或构建体后，进一步的DNA序列的存在和/或插入可能是必须的-如创建如上概述的组合系统(例如含构建体复合物的生物体)。

上述有关用本发明核苷酸转化原核生物与植物的补充资料可用于以本发明的启动子转化这些生物体。

总之，本发明涉及通过表达有义内含子序列影响酶活性。

本发明还涉及表达那些有义内含子有用的启动子。

按照布达佩斯条约，下述样品已于1995年7月13日被存放在公认的保藏所The National Collection of Industrial and MarineBacteria Limited(NCIMB)，23St Machar drive，Aberdeen，苏格兰，AB2 1RY联合王国：

NCIMB 40754(本文称之为pBEA11)；

NCIMB 40751(本文称之为λ-SBE3.2)，和

NCIMB 40752(本文称之为λ-SBE3.4)。

因此本发明的一个十分优选的实施方案涉及影响植物(或其细胞，组织或器官)中的酶活性的方法，包括在所述植物中(或其细胞，组织或器官)表达核苷酸序列，其中所述核苷酸序列(部分或全部)从有义方向编码内含子；其中所述核苷酸序列不含对于正常与所述内含子连接的外显子序列为有义的序列；其中淀粉分支酶活性受到影响和(或)支链淀粉的水平受到影响和(或)淀粉的组成被改变；并且其中所述核苷酸序列是SEQ.ID.No.38中给出的A类的内含子1，或A类SBE的任何其他内含子(包括其片段)的序列，并包括A类有义内含子序列与B类有义或反义内含子序列的组合。除内含子1以外的A类SBE内含子序列可通过例如对马铃薯A类SBE基因组DNA测序获得，所述DNA可通过用WO96/34968获得的A类SBE cDNA，按照本领域众所周知的方法例如Sambrook等的分子克隆：实验室手册，冷泉港，1989中给出的方法进行杂交筛选基因组DNA库而分离。

本发明现在将仅通过实施例的方式进行描述，其中，参考如下附图：

图1，图解表示直链淀粉与支链淀粉的生物合成；

图2，图解表示支链淀粉的α-1-4-键和α-1-6键；

图3，图解表示基因组SBE克隆的外显子-内含子结构；

图4，pPATA1质粒图，该质粒大小是3936bp；

图5，pABE7质粒图，该质粒大小是5106bp；

图6，pVctorIV Man质粒图，其大小是7080bp；

图7，pBEA11质粒图，其大小是9.54kb；

图8，其显示SBE的全基因组核苷酸序列，包括启动子，外显子与内含子；

图9，pVictor5a质粒图，其大小是9.12kb；

图10，pBEP2质粒图，其大小是10.32kb；

图11，其显示内含子1在A类与B类SBE基因中的位置；

图12，显示马铃薯A类SBE内含子1的序列；

图13，显示pSS15的结构；和

图14，显示pSS16的结构。

上述图1和2属于有关淀粉的一般性引言部分。如所述，图3是基因组SBE克隆的外显子-内含子结构的表达图解，其序列在图8中给出。这个含11.5kb碱基对的克隆包含14个外显子和13个内含子。所述内含子从5’末端到3’末端按增序编号，并分别与SEQ.ID.No.s 1-13对应。它们的各自反义内含子序列如SEQ.ID.No.s 15-27给出。

更详细而言，图3和8表示马铃薯SBE基因的11468碱基对的信息。从核苷酸1到2082的5’区含所述SBE基因的启动子区。一个位于核苷酸2048到2051的侯选TATA盒被框起。马铃薯SBE cDNA克隆(Poulsen & Kreiberg(1993)植物生理学。102：1053-1054)与外显子DNAs之间的同源性开始于2083bp并终止于9666bp。所述cDNA与外显子之间的同源性由上标符号表示，而翻译的氨基酸序列以外显子DNA下的单符号编码表示。内含子序列由下标符号表示。

图7是pBEA7的质粒图，它有9.54k碱基对大小。质粒pBEA11包含马铃薯SBE基因第一内含子序列。该第一内含子序列有1177碱基对(在图3中给出)并位于第一外显子与第二外显子之间。

本发明的这些实验和方面现做更详细的讨论。

实验方法

基因组SBE克隆的分离，并克隆入质粒并测序

含马铃薯SBE基因的各种克隆从Desiree马铃薯基因组库(Clontech Laboratories Inc.，Palo Alto CA，USA)用放射标记的马铃薯SBE cDNA(Poulsen & Keiberg(1993)植物生理学。102：1053-1054)为探针进行分离。分离的含SBE DNA的λ噬菌体片段(λSBE3.2-NCIMB40751-和λSBE-3.4-NCIMB40752)通过Southern分析进行鉴定，然后被亚克隆到pBluescript II载体中(ClontechLaboratories Inc.，Palo Alto CA，USA)。λSBE3.2含15kb马铃薯DNA插入片段，而λSBE-3.4含一个13kb马铃薯DNA插入片段。所得质粒被称为pGB3，pGB11，pGB15，pGB16和pGB25(参见如下讨论)。然后将各自的插入片段用Pharmacia Autoread测序试剂盒(Pharmacia，Uppsala)和A.L.F.DNA测序仪(Pharmacia，Uppsala)进行测序。

总共，一段11.5kb的B类SBE基因被测序。从上述质粒推导出所述序列，其中：pGB25含从1bp到836bp的序列，pGB15含从735到2580bp的序列，而pGB16含从2580bp到5093bp的序列，pGB11含从3348bp到7975bp的序列，而pGB3含从7533bp到11468bp的序列。

更详细而言，pGB3通过把从λSBE3.2分离的4kb EcoRI片段插入到pBluescript II SK(+)的EcoRI位点而构建。pGB11通过把从λSBE3.4分离的4.7kb XhoI片段插入到pBluescript II SK(+)的XhoI位点而构建。pGB15通过把从λSBE3.4分离的1.7kb SpeI片段插入到pBluescript II SK(+)的SpeI位点而构建。pGB16通过把从λSBE3.4分离的2.5kb SpeI片段插入到pBluescript II SK(+)的SpeI位点而构建。为构建pGB25，用引物5’GGA ATT CCA GTC GCA GTC TACATT AC3’(SEQ.ID.No.30)和5’CGG GAT CCA GAG GCA TTA AGA TTTCTG G3’(SEQ.ID.No31)和λSBE3.4作为模板产生一个PCR片段。

所述PCR片段用BamHI和EcoRI进行消化，并插入在用同样限制酶消化的pBluescript II SK(+)中。构建质粒pBEA11

通过PCR用寡核苷酸5’CGG GAT CCA AAG AAA TTC TCG AGG TTACAT GG3’(SEQ.ID.No.32)和5’CGG GAT CCG GGG TAA TTT TTA CTAATT TCA TG3’(SEQ.ID.No.33)并以含所述SBE基因的λSBE3.4噬菌体为模板扩增SBE内含子1。

用BamHI消化所述PCR产物并以有义方向插入到质粒pTATA(在WO94/24292)中有描述)patatin启动子和35S终止子之间的BamHI位点中。用KpbI消化这种构建体(pABE7)，并分离2.4kb“patatin启动子-SBE内含子1-35S终止子”KpbI片段，并插入到植物转化载体pVictorIV Man的KpnI位点而产生pBEA11。构建质粒pSS15

通过PCR从基因组SBEII亚克隆用引物5’-CGG GAT CCC GTA TGTCTC ACT GTG TTT GTG GC-3’(SEQ.ID.No.34)和5’-CGG GAT CCCCCT ACA TAC ATA TAT CAG ATT AG-3’(SEQ.ID.No.35)扩增马铃薯SBEII基因的2122bp内含子1序列。所述PCR产物用BamHI消化并以有义方向插入在植物转化载体的BamHI位点patatin启动子之后，其中NPTII基因用做选择性标记(参见图13)。构建质粒pSS16

通过PCR从基因组SBEII亚克隆用引物5’-CGG GAT CCC GTA TGTCTC ACT GTG TTT GTG GC-3’(SEQ.ID.No.34)和5’-CGG GAT CCCCCT ACA TAC ATA TAT CAG ATT AG-3’(SEQ.ID.No.35)扩增马铃薯SBEII基因的2122bp内含子1序列。所述PCR产物用BamHI消化并以有义方向插入在植物转化载体的BamHI位点patatin启动子之后，其中manA基因用做选择性标记(参见图14)。产生转基因马铃薯植株纯性储用培养物

Solanum tuberosum’Bintje’与’Dianella″的幼苗培养物被保持在按照Linsmaier，E.U.和Skoog，F.(1965)，生理学-植物。18：100-127配方并另外含2μM硫代硫酸银的培养基(LS)中，25℃，16小时光照/8小时黑暗。

约40天后，所述培养物被再培养。然后剪下所述幼苗的叶并切成结节片段(约0.8厘米)每段含一个结节。

接种马铃薯组织

从约40天龄幼苗培养的幼苗(高约5-6厘米)被切成结节内片段(约0.8厘米)。所述片段被放入含转化的根癌土壤杆菌的液体LS培养基中，所述根癌土壤杆菌含目的双元载体。所述土壤杆菌在YMB-培养基(磷酸氢二钾，三水(0.66克/升)；硫酸镁，七水(0.20克/升)；氯化钠(0.10克/升)；甘露糖醇(10.0克/升)；和酵母提取物(0.40克/升))含适当的抗生素(与土壤杆菌菌株的抗性基因相对应)中培养过夜达到在660nm(OD-660)光密度值约为0.8，离心并重悬浮于LS培养基中达到OD-660值为0.5。

所述片段被留在土壤杆菌悬液中30分钟，然后将所述片段在无菌滤纸上吸除多余的细菌。共培养

所述幼苗截段与细菌一起直接在含琼脂(8.0克/升)，2，4-二氯苯氧基乙酸(2.0毫克/升)和反式玉米素(0.5毫克/升)的LS培养基上共培养48小时。用无菌滤纸覆盖所述培养基与外植块，并将培养皿放置在25℃，16小时光照/8小时黑暗。“洗涤方法”

在共培养培养基上48小时后，所述截段被转移到装有含800毫克/升羧苄青霉素的液体LS培养基的容器中。轻微震摇所述容器并通过此方法将土壤杆菌从所述截段洗涤掉和(或)杀死。筛选

经过洗涤方法后，所述截段被转移到平板上，所述平板含LS培养基，琼脂(8克/升)，反式玉米素(1-5毫克/升)，赤霉酸(0.1毫克/升)，羧苄青霉素(800毫克/升)，并根据所使用的载体构建方法不同而含硫酸卡那霉素(50-100毫克/升)或膦基麦黄酮(1-5毫克/升)或甘露糖(5克/升)。所述截段在新鲜培养基中进行次级培养，每个培养3-4周。在3到4周中，从所述截段发育出幼苗并在3-4个月期间不断形成新的幼苗。再生幼苗的生根

再生幼苗被转移到含LS-培养基，琼脂(8克/升)和羧苄青霉素(800毫克/升)的生根培养基。再生幼苗的转基因基因型通过检测在含硫酸卡那霉素(200毫克/升)的上述培养基上的生根能力，通过进行NPTII检测(Radke，S.E.等，理论应用遗传学。(1988)，75：685-694)或通过进行Wang等(1993，NAR 21 4153-4154页)的PCR分析来证实。在任何这些检测中为非阳性的植株被丢弃或被用做对照。或者，通过按照Hodal，L.等(P1.Sci.(1992)，87：115-122)进行GUS测试共导入的β葡萄糖醛酸酶基因可证实所述转基因植株。转移到土壤

将新生根的植株(高度约2-3厘米)从生根培养基转移到土壤并放在生长室中(21℃，16小时光照200-400uE/m²/秒)。当这些植株完全长成时将其转移到温室，在那里这些植株继续生长直到发育出块茎并且植株的上部正在开始衰老。收获

在约3个月后收获所述马铃薯，然后进行分析。淀粉分支酶分析

所述转基因马铃薯品系中表达的SBE用Blennow与Johansson(植物化学(1991)30：437-444)描述的SBE检测法进行检测并通过标准的Western方法用直接抗A类和B类马铃薯SBE抗体进行检测。淀粉分析

从马铃薯块茎分离淀粉并分析直链淀粉：支链淀粉比例(Hovenkamp-Hermelink等(1988)马铃薯研究31：241-246)。此外，支链淀粉链长的分布通过在Dionex HPAEC上分析异淀粉酶消化的淀粉进行测定。异淀粉酶消化的淀粉中还原末端的数目通过N.Nelson(1944)生物化学杂志。153：375-380描述的方法进行测定。

结果显示为所述转基因植株中SBE合成水平和(或)SBE活性水平和(或)淀粉SBE成分的降低。构建SBE启动子构建体

从λ-SBE3.4使用引物：5’CCA TCG ATA CTT TAA GTG ATT TGATGG C3’(SEQ.ID.No.36)和5’CGG GAT CCT GTT CTG ATT CTT GATTTC C3’(SEQ.ID.No.37)扩增SBE启动子片段。

PCR产物用ClaI和BamHI消化。然后将产生的1.2kb片段插入到用ClaI和BglII线性化的pVictor5a(参见图9)，产生pBEP2(参见图10)。马铃薯块茎的淀粉分支酶的测定

用pBEA11转化的马铃薯植株的马铃薯切成小片并用Ultra-Turax匀浆器在提取缓冲液中(50mM Tris-HCI pH7.5，连二硫酸钠(0.1克/升)，和2mMDTT)匀浆；每10克块茎加入1克Dowex xl.。粗匀浆物通过miracloth滤器过滤并在4℃，24.700g离心10分钟。上清液用于淀粉分支酶检测。在25℃，400微升含0.1M柠檬酸钠pH7.0缓冲液，0.75毫克/毫升直链淀粉，5毫克/毫升小牛血清白蛋白和马铃薯提取物的体积中进行淀粉分支酶检测。50微升一份在0，15，30和60分钟时移出反应物到20微升3N HCI中。加入1毫升碘液并在620nm用ELISA分光光度计检测吸收值的降低。

在来自用pBEA11，pSS15和pSS16质粒转化的24只转基因Dianella马铃薯植株的块茎提取物中检测淀粉分支酶(SBE)水平。

结果表明BEA11，SS15和SS16转基因品系产生的块茎含有的B类和A类SBE水平仅分别是未被转化的Dianella植株中所发现的SBE水平的10％到15％。

在进一步的实验中，质粒pSS15与pBEA11被共转移到如上所述的马铃薯植株中。在共转染体中，当如上述进行分析时，观察到A类和B类SBE水平的同时降低。总结

上述实施例涉及分离和测序马铃薯SBE基因。这些实施例进一步证明有可能制备SBE内含子构建体。这些SBE内含子构建体可被引入到植物，如马铃薯植株中。在引入后，可达到植株中SBE合成水平和(或)SBE活性水平和(或)淀粉成分的降低。

不希望受到理论的限制，人们认为本发明表达的有义内含子核苷酸序列通过共抑制和(或)反式激活影响酶活性。这些机制的综述已由Finnegan和McElroy(1994生物技术12 pp883-887)和Matzke与Matzke(1995 TIG 11 No.1 pp1-3)所发表。通过这些机制，认为本发明的有义内含子降低植物酶活性

(特别是SBE的活性)的水平，从而认为SBE活性又影响直链淀粉：支链淀粉比例并因此影响支链淀粉的分枝形式。

因此，本发明提供一种方法，其中通过使用有义内含子序列降低SBE活性水平，从而有可能处理植物，或其组织或细胞(如马铃薯块茎)中的淀粉成分。

而且，同时减少或消除双重转化的马铃薯植株的A类和B类SBE序列，提供了用任意不同的SBE基因转化这类植物的可能性，因此容许按照期望的结果对淀粉中的分枝进行处理。

因此，总而言之本发明涉及SBE A类有义内含子序列在影响植物中A类SBE活性方法上的一个意外的用途。

在不偏离本发明的范围情况下，本发明的其他修饰方法对于本领域的技术人员来说是显而易见的。

下文给出一些序列列表，它们从SEQ.ID.No.1-SEQ.ID.No.38连续编号。简言之，SEQ.ID.No.1-SEQ.ID.No13描述有义内含子序列(基因组DNA)；SEQ.ID.No.14描述SBE启动子序列(基因组序列)；SEQ.ID.No.15-SEQ.ID.No.27描述反义内含子序列；而SEQ.ID.No.28描述与SBE启动子序列互补的序列-即反义方向的SBE启动子序列。包括启动子，外显子和内含子的SBE全基因组核苷酸序列在SEQ.ID.No.29中给出(参见图3和8，其中十分具体基因特征)。SEQ.ID.No.30到37显示上述方法中使用的引物。SEQ.ID.No.38显示A类马铃薯SBE基因的内含子1的核苷酸序列。序列表

(1)一般资料：

(i)申请人：

(A)名称：DANISCO A/S

(B)街：LANGEBROGADE 1

(C)城市：COPENHAGEN K

(E)国家：丹麦

(F)邮编：DK-1001

(ii)发明题目：基因表达的抑制

(iii)序列数目：38

(iv)计算机可读形式：

(A)介质类型：软盘

(B)计算机：IBM兼容个人计算机

(C)操作系统：PC-DOS/MS-DOS

(D)软件：PatentIn Release#1.0，Version#1.30(EPO)

(2)SEQ ID NO：1资料：

(i)序列特征：

(A)长度：1165碱基对

(B)类型：核酸

(C)链：单链

(D)拓扑结构：线形

(ii)分子类型：DNA(基因组)

(iii)假拟序列：否

(iv)反义序列：否

(xi)序列描述：SEQ ID NO：1：GTAATTTTTA CTAATTTCAT GTTAATTTCA ATTATTTTTA GCCTTTGCAT TTCATTTTCC     60AATATATCTG GATCATCTCC TTAGTTTTTT ATTTTATTTT TTATAATATC AAATATGGAA    120GAAAAATGAC ACTTGTAGAG CCATATGTAA GTATCATGTG ACAAATTTGC AAGGTGGTTG    180AGTGTATAAA ATTCAAAAAT TGAGAGATGG AGGGGGGGTG GGGGAAGACA ATATTTAGAA    240AGAGTGTTCT AGGAGGTTAT GGAGGACACG GATGAGGGGT AGAAGGTTAG TTAGGTATTT    300GAGTGTTGTC TGGCTTATCC TTTCATACTA GTAGTCGTGG AATTATTTGG GTAGTTTCTT    360GTTTTGTTAT TTGATCTTTG TTATTCTATT TTCTGTTTCT TGTACTTCGA TTATTGTATT    420ATATATCTTG TCGTAGTTAT TGTTCCTCGG TAAGAATGCT CTAGCATGCT TCCTTTAGTG     480TTTTATCATG CCTTCTTTAT ATTCGCGTTG CTTTGAAATG CTTTTACTTT AGCCGAGGGT     540CTATTAGAAA CAATCTCTCT ATCTCGTAAG GTAGGGGTAA AGTCCTCACC ACACTCCACT     600TGTGGGATTA CATTGTGTTT GTTGTTGTAA ATCAATTTT  TATACATAAT AAGTGGATTT     660TTTACAACAC AAATACATGG TCAAGGGCAA ACAGGGGAAC ACATAAAGGG TTCATTATAT     720GTCCAGGGAT ATGATAAAAA TTGTTTCTTT GTGAAAGTTA TATAAGATTT GTTATGGCTT     780TTGCTGGAAA CATAATAAGT TATAATGCTG AGATAGCTAC TGAAGTTTGT TTTTTCTAGC     840CTTTTAAATG TACCAATAAT AGATTCCGTA TCGAACGAGT ATGTTTTGAT TACCTGGTCA     900TGATGTTTCT ATTTTTTACA TTTTTTTGGT GTTGAACTGC AATTGAAAAT GTTGTATCCT     960ATGAGACGGA TAGTTGAGAA TGTGTTCTTT GTATGGACCT TGAGAAGCTC AAACGCTACT    1020CCAATAATTT CTATGAATTC AAATTCAGTT TATGGCTACC AGTCAGTCCA GAAATTAGGA    1080TATGCTGCAT ATACTTGTTC AATTATACTG TAAAATTTCT TAAGTTCTCA AGATATCCAT    1140GTAACCTCGA GAATTTCTTT GACAG                                          1165

(2)SEQ ID NO：2资料：

(i)序列特征：

(A)长度：317碱基对

(B)类型：核酸

(C)链：单链

(D)拓扑结构：线形

(ii)分子类型：DNA(基因组)

(iii)假拟序列：否

(iv)反义序列：否

(xi)序列描述：SEQ ID NO：2：GTATGTTTGA TAATTTATAT GGTTGCATGG ATAGTATATA AATAGTTGGA AAACTTCTGG     60ACTGGTGCTC ATGGCATATT TGATCTGTGC ACCGTGTGGA GATGTCAAAC ATGTGTTACT    120TCGTTCCGCC AATTTATAAT ACCTTAACTT GGGAAAGACA GCTCTTTACT CCTGTGGGCA    180TTTGTTATTT GAATTACAAT CTTTATGAGC ATGGTGTTTT CACATTATCA ACTTCTTTCA    240TGTGGTATAT AACAGTTTTT AGCTCCGTTA ATACCTTTCT TCTTTTTGAT ATAAACTAAC    300TGTGGTGCAT TGCTTGC                                                   317

(2)SEQ ID NO：3资料：

(i)序列特征：

(A)长度：504碱基对

(B)类型：核酸

(C)链：单链

(D)拓扑结构：线形

(ii)分子类型：DNA(基因组)

(iii)假拟序列：否

(iv)反义序列：否

(xi)序列描述：SEQ ID NO：3：GTAACAGCCA AAAGTTGTGC TTTAGGCAGT TTGACCTTAT TTTGGAAGAT GAATTGTTTA     60TACCTACTTT GACTTTGCTA GAGAATTTTG CATACCGGGG AGTAAGTAGT GGCTCCATTT    120AGGTGGCACC TGGCCATTTT TTTGATCTTT TAAAAAGCTG TTTGATTGGG TCTTCAAAAA    180AGTAGACAAG GTTTTTGGAG AAGTGACACA CCCCCGGAGT GTCAGTGGCA AAGCAAAGAT    240TTTCACTAAG GAGATTCAAA ATATAAAAAA AGTATAGACA TAAAGAAGCT GAGGGGATTC    300AACATGTACT ATACAAGCAT CAAATATAGT CTTAAAGCAA TTTTGTAGAA ATAAAGAAAG    360TCTTCCTTCT GTTGCTTCAC AATTTCCTTC TATTATCATG AGTTACTCTT TCTGTTCGAA    420ATAGCTTCCT TAATATTAAA TTCATGATAC TTTTGTTGAG ATTTAGCAGT TTTTTCTTGT    480GTAAACTGCT CTCTTTTTTT GCAG                                           504

(2)SEQ ID NO：4资料：

(i)序列特征：

(A)长度：146碱基对

(B)类型：核酸

(C)链：单链

(D)拓扑结构：线形

(ii)分子类型：DNA(基因组)

(iii)假拟序列：否

(iv)反义序列：否

(xi)序列描述：SEQ ID NO：4：GTAGGTCCTC GTCTACTACA AAATAGTAGT TTCCATCATC ATAACAGATT TTCCTATTAA     60AGCATGATGT TGCAGCATCA TTGGCTTTCT TACATGTTCT AATTGCTATT AAGGTTATGC    120TTCTAATTAA CTCATCCACA ATGCAG                                         146

(2)SEQ ID NO：5资料：

(i)序列特征：

(A)长度：218碱基对

(B)类型：核酸

(C)链：单链

(D)拓扑结构：线形

(ii)分子类型：DNA(基因组)

(iii)假拟序列：否

(iv)反义序列：否

(xi)序列描述：SEQ ID NO：5：GTTTTGTTAT TCATACCTTG AAGCTGAATT TTGAACACCA TCATCACAGG CATTTCGATT     60CATGTTCTTA CTAGTCTTGT TATGTAAGAC ATTTTGAAAT GCAAAAGTTA AAATAATTGT    120GTCTTTACTA ATTTGGACTT GATCCCATAC TCTTTCCCTT AACAAAATGA GTCAATTCTA    180TAAGTGCTTG AGAACTTACT ACTTCAGCAA TTAAACAG                            218

(2)SEQ ID NO：6资料：

(i)序列特征：

(A)长度：198碱基对

(B)类型：核酸

(C)链：单链

(D)拓扑结构：线形

(ii)分子类型：DNA(基因组)

(iii)假拟序列：否

(iv)反义序列：否

(xi)序列描述：SEQ ID NO：6：GTATTTTAAA TTTATTTCTA CAACTAAATA ATTCTCAGAA CAATTGTTAG ATAGAATCCA     60AATATATACG TCCTGAAAGT ATAAAAGTAC TTATTTTCGC CATGGGCCTT CAGAATATTG    120GTAGCCGCTG AATATCATGA TAAGTTATTT ATCCAGTGAC ATTTTTATGT TCACTCCTAT    180TATGTCTGCT GGATACAG                                                  198

(2)SEQ ID NO：7资料：

(i)序列特征：

(A)长度：208碱基对

(B)类型：核酸

(C)链：单链

(D)拓扑结构：线形

(ii)分子类型：DNA(基因组)

(iii)假拟序列：否

(iv)反义序列：否

(xi)序列描述：SEQ ID NO：7：GTTTGTCTGT TTCTATTGCA TTTTAAGGTT CATATAGGTT AGCCACGGAA AATCTCACTC     60TTTGTGAGGT AACCAGGGTT CTGATGGATT ATTCAATTTT CTCGTTTATC ATTTGTTTAT    120TCTTTTCATG CATTGTGTTT CTTTTTCAAT ATCCCTCTTA TTTGGAGGTA ATTTTTCTCA    180TCTATTCACT TTTAGCTTCT AACCACAG                                       208

(2)SEQ ID NO：8资料：

(i)序列特征：

(A)长度：293碱基对

(B)类型：核酸

(C)链：单链

(D)拓扑结构：线形

(ii)分子类型：DNA(基因组)

(iii)假拟序列：否

(iv)反义序列：否

(xi)序列描述：SEQ ID NO：8：GTATGTCTTA CATCTTTAGA TATTTTGTGA TAATTACAAT TAGTTTGGCT TACTTGAACA     60AGATTCATTC CTCAAAATGA CCTGAACTGT TGAACATCAA AGGGGTTGAA ACATAGAGGA    120AAACAACATG ATGAATGTTT CCATTGTCTA GGGATTTCTA TTATGTTGCT GAGAACAAAT    180GTCATCTTAA AAAAAACATT GTTTACTTTT TTGTAGTATA GAAGATTACT GTATAGAGTT    240TGCAAGTGTG TCTGTTTTGG AGTAATTGTG AAATGTTTGA TGAACTTGTA CAG           293

(2)SEQ ID NO：9资料：

(i)序列特征：

(A)长度：376碱基对

(B)类型：核酸

(C)链：单链

(D)拓扑结构：线形

(ii)分子类型：DNA(基因组)

(iii)假拟序列：否

(iv)反义序列：否

(xi)序列描述：SEQ ID NO：9：GTTCAAGTAT TTTGAATCGC AGCTTGTTAA ATAATCTAGT AATTTTTAGA TTGCTTACTT     60GGAAGTCTAC TTGGTTCTGG GGATGATAGC TCATTTCATC TTGTTCTACT TATTTTCCAA    120CCGAATTTCT GATTTTTGTT TCGAGATCCA AGTATTAGAT TCATTTACAC TTATTACCGC    180CTCATTTCTA CCACTAAGGC CTTGATGAGC AGCTTAAGTT GATTCTTTGA AGCTATAGTT    240TCAGGCTACC AATCCACAGC CTGCTATATT TGTTGGATAC TTACCTTTTC TTTACAATGA    300AGTGATACTA ATTGAAATGG TCTAAATCTG ATATCTATAT TTCTCCGTCT TTCCTCCCCC    360TCATGATGAA ATGCAG                                                    376

(2)SEQ ID NO：10资料：

(i)序列特征：

(A)长度：172碱基对

(B)类型：核酸

(C)链：单链

(D)拓扑结构：线形

(ii)分子类型：DNA(基因组)

(iii)假拟序列：否

(iv)反义序列：否

(xi)序列描述：SEQ ID NO：10：GTAAAATCAT CTAAAGTTGA AAGTGTTGGG TTTATGAAGT GCTTTAATTC TATCCAAGGA     60CAAGTAGAAA CCTTTTTACC TTCCATTTCT TGATGATGGA TTTCATATTA TTTAATCCAA    120TAGCTGGTCA AATTCGGTAA TAGCTGTACT GATTAGTTAC TTCACTTTGC AG            172

(2)SEQ ID NO：11资料：

(i)序列特征：

(A)长度：145碱基对

(B)类型：核酸

(C)链：单链

(D)拓扑结构：线形

(ii)分子类型：DNA(基因组)

(iii)假拟序列：否

(iv)反义序列：否

(xi)序列描述：SEQ ID NO：11：GTATATATGT TTTACTTATC CATGAAATTA TTGCTCTGCT TGTTTTTAAT GTACTGAACA     60AGTTTTATGG AGAAGTAACT GAAACAAATC ATTTTCACAT TGTCTAATTT AACTCTTTTT    120TCTGATCCTC GCATGACGAA AACAG                                          145

(2)SEQ ID NO：12资料：

(i)序列特征：

(A)长度：242碱基对

(B)类型：核酸

(C)链：单链

(D)拓扑结构：线形

(ii)分子类型：DNA(基因组)

(iii)假拟序列：否

(iv)反义序列：否

(xi)序列描述：SEQ ID NO：12：GTAAGGATTT GCTTGAATAA CTTTTGATAA TAAGATAACA GATGTAGGGT ACAGTTCTCT     60CACCAAAAAG AACTGTAATT GTCTCATCCA TCTTTAGTTG TATAAGATAT CCGACTGTCT    120GAGTTCGGAA GTGTTTGAGC CTCCTGCCCT CCCCCTGCGT TGTTTAGCTA ATTCAAAAAG    180GAGAAAACTG TTTATTGATG ATCTTTGTCT TCATGCTGAC ATACAATCTG TTCTCATGAC    240AG                                                                   242

(2)SEQ ID NO：13资料：

(i)序列特征：

(A)长度：797碱基对

(B)类型：核酸

(C)链：单链

(D)拓扑结构：线形

(ii)分子类型：DNA(基因组)

(iii)假拟序列：否

(iv)反义序列：否

(xi)序列描述：SEQ ID NO：13：GTACAGTTCT TGCCGTGTGA CCTCCCTTTT TATTGTGGTT TTGTTCATAG TTATTTGAAT     60GCGATAGAAG TTAACTATTG ATTACCGCCA CAATCGCCAG TTAAGTCCTC TGAACTACTA    120ATTTGAAAGG TAGGAATAGC CGTAATAAGG TCTACTTTTG GCATCTTACT GTTACAAAAC    180AAAAGGATGC CAAAAAAATT CTTCTCTATC CTCTTTTTCC CTAAACCAGT GCATGTAGCT    240TGCACCTGCA TAAACTTAGG TAAATGATCA AAAATGAAGT TGATGGGAAC TTAAAACCGC    300CCTGAAGTAA AGCTAGGAAT AGTCATATAA TGTCCACCTT TGGTGTCTGC GCTAACATCA    360ACAACAACAT ACCTCGTGTA GTCCCACAAA GTGGTTTCAG GGGGAGGGTA GAGTGTATGC    420AAAACTTACT CCTATCTCAG AGGTAGAGAG GATTTTTTCA ATAGACCCTT GGCTCAAGAA    480AAAAAGTCCA AAAAGAAGTA ACAGAAGTGA AAGCAACATG TGTAGCTAAA GCGACCCAAC    540TTGTTTGGGA CTGAAGTAGT TGTTGTTGTT GAAACAGTGC ATGTAGATGA ACACATGTCA    600GAAAATGGAC AACACAGTTA TTTTGTGCAA GTCAAAAAAA TGTACTACTA TTTCTTTGTG    660CAGCTTTATG TATAGAAAAG TTAAATAACT AATGAATTTT GCTAGCAGAA AAATAGCTTG    720GAGAGAAATT TTTTATATTG AACTAAGCTA ACTATATTCA TCTTTCTTTT TGCTTCTTCT    780TCTCCTTGTT TGTGAAG                                                   797

(2)SEQ ID NO：14资料：

(i)序列特征：

(A)长度：2169碱基对

(B)类型：核酸

(C)链：单链

(D)拓扑结构：线形

(ii)分子类型：DNA(基因组)

(iii)假拟序列：否

(iv)反义序列：否

(xi)序列描述：SEQ ID NO：14：ATCATGGCCA ATTACTGGTT CAAATGCATT ACTTCCTTTC AGATTCTTTC GAGTTCTCAT     60GACCGGTCCT ACTACAGACG ATACTAACCC GTGGAACTGT TGCATCTGCT TCTTAGAACT    120CTATGGCTAT TTTCGTTAGC TTGGCGTCGG TTTGAACATA GTTTTTGTTT TCAAACTCTT    180CATTTACAGT CAAAATGTTG TATGGTTTTT GTTTTCCTCA ATGATGTTTA CAGTGTTGTG    240TTGTCATCTG TACTTTTGCC TATTACTTGT TTTGAGTTAC ATGTTAAAAA AGTGTTTATT    300TTGCCATATT TTGTTCTCTT ATTATTATTA TCATACATAC ATTATTACAA GGAAAAGACA    360AGTACACAGA TCTTAACGTT TATGTTCAAT CAACTTTTGG AGGCATTGAC AGGTACCACA    420AATTTTGAGT TTATGATTAA GTTCAATCTT AGAATATGAA TTTAACATCT ATTATAGATG    480CATAAAAATA GCTAATGATA GAACATTGAC ATTTGGCAGA GCTTAGGGTA TGGTATATCC    540AACGTTAATT TAGTAATTTT TGTTACGTAC GTATATGAAA TATTGAATTA ATCACATGAA    600CGGTGGATAT TATATTATGA GTTGGCATCA GCAAAATCAT TGGTGTAGTT GACTGTAGTT    660GCAGATTTAA TAATAAAATG GTAATTAACG GTCGATATTA AAATAACTCT CATTTCAAGT    720GGGATTAGAA CTAGTTATTA AAAAAATGTA TACTTTAAGT GATTTGATGG CATATAATTT    780AAAGTTTTTC ATTTCATGCT AAAATTGTTA ATTATTGTAA TGTAGACTGC GACTGGAATT    840ATTATAGTGT AAATTTATGC ATTCAGTGTA AAATTAAAGT ATTGAACTTG TCTGTTTTAG    900AAAATACTTT ATACTTTAAT ATAGGATTTT GTCATGCGAA TTTAAATTAA TCGATATTGA    960ACACGGAATA CCAAAATTAA AAAGGATACA CATGGCCTTC ATATGAACCG TGAACCTTTG      1020ATAACGTGGA AGTTCAAAGA AGGTAAAGTT TAAGAATAAA CTGACAAATT AATTTCTTTT      1080ATTTGGCCCA CTACTAAATT TGCTTTACTT TCTAACATGT CAAGTTGTGC CCTCTTAGTT      1140GAATGATATT CATTTTTCAT CCCATAAGTT CAATTTGATT GTCATACCAC CCATGATGTT      1200CTGAAAAATG CTTGGCCATT CACAAAGTTT ATCTTAGTTC CTATGAACTT TATAAGAAGC      1260TTTAATTTGA CATGTTATTT ATATTAGATG ATATAATCCA TGACCCAATA GACAAGTGTA      1320TTAATATTGT AACTTTGTAA TTGAGTGTGT CTACATCTTA TTCAATCATT TAAGGTCATT      1380AAAATAAATT ATTTTTTGAC ATTCTAAAAC TTTAAGCAGA ATAAATAGTT TATCAATTAT      1440TAAAAACAAA AAACGACTTA TTTATAAATC AACAAACAAT TTTAGATTGC TCCAACATAT      1500TTTTCCAAAT TAAATGCAGA AAATGCATAA TTTTATACTT GATCTTTATA GCTTATTTTT      1560TTTAGCCTAA CCAACGAATA TTTGTAAACT CACAACTTGA TTAAAAGGGA TTTACAACAA      1620GATATATATA AGTAGTGACA AATCTTGATT TTAAATATTT TAATTTGGAG GTCAAAATTT      1680TACCATAATC ATTTGTATTT ATAATTAAAT TTTAAATATC TTATTTATAC ATATCTAGTA      1740AACTTTTAAA TATACGTATA TACAAAATAT AAAATTATTG GCGTTCATAT TAGGTCAATA      1800AATCCTTAAC TATATCTGCC TTACCACTAG GAGAAAGTAA AAAACTCTTT ACCAAAAATA      1860CATGTATTAT GTATACAAAA AGTCGATTAG ATTACCTAAA TAGAAATTGT ATAACGAGTA      1920AGTAAGTAGA AATATAAAAA AACTACAATA CTAAAAAAAA TATGTTTTAC TTCAATTTCG      1980AAACTAATGG GGTCTGAGTG AAATATTCAG AAAGGGGAGG ACTAACAAAA GGGTCATAAT      2040GTTTTTTTAT AAAAAGCCAC TAAAATGAGG AAATCAAGAA TCAGAACATA CAAGAAGGCA      2100GCAGCTGAAG CAAAGTACCA TAATTTAATC AATGGAAATT AATTTCAAAG TTTTATCAAA    2160ACCCATTCG                                                            2169

(2)SEQ ID NO：15资料：

(i)序列特征：

(A)长度：1165碱基对

(B)类型：核酸

(C)链：单链

(D)拓扑结构：线形

(ii)分子类型：DNA(基因组)

(iii)假拟序列：否

(iv)反义序列：是

(xi)序列描述：SEQ ID NO：15：CTGTCAAAGA AATTCTCGAG GTTACATGGA TATCTTGAGA ACTTAAGAAA TTTTACAGTA     60TAATTGAACA AGTATATGCA GCATATCCTA ATTTCTGGAC TGACTGGTAG CCATAAACTG    120AATTTGAATT CATAGAAATT ATTGGAGTAG CGTTTGAGCT TCTCAAGGTC CATACAAAGA    180ACACATTCTC AACTATCCGT CTCATAGGAT ACAACATTTT CAATTGCAGT TCAACACCAA    240AAAAATGTAA AAAATAGAAA CATCATGACC AGGTAATCAA AACATACTCG TTCGATACGG    300AATCTATTAT TGGTACATTT AAAAGGCTAG AAAAAACAAA CTTCAGTAGC TATCTCAGCA    360TTATAACTTA TTATGTTTCC AGCAAAAGCC ATAACAAATC TTATATAACT TTCACAAAGA    420AACAATTTTT ATCATATCCC TGGACATATA ATGAACCCTT TATGTGTTCA GAACTTTGCC    480CTTGACCATG TATTTGTGTT GTAAAAAATC CACTTATTAT GTATACATAA TTGATTTACA    540ACAACAAACA CAATGTAATC CCACAAGTGG AGTGTGGTGA GGACTTTACC CCTACCTTAC    600GAGATAGAGA GATTGTTTCT AATAGACCCT CGGCTAAAGT AAAAGCATTT CAAAGCAACG    660CGAATATAAA GAAGGCATGA TAAAACACTA AAGGAAGCAT GCTAGAGCAT TCTTACCGAG    720GAACAATAAC TACGACAAGA TATATAATAC AATAATCGAA GTACAAGAAA CAGAAAATAG    780AATAACAAAG ATCAAATAAC AAAACAAGAA ACTACCCAAA TAATTCCACG ACTACTAGTA    840TGAAAGGATA AGCCAGACAA CACTCAAATA CCTAACTAAC CTTCTACCCC TCATCCGTGT    900CCTCCATAAC CTCCTAGAAC ACTCTTTCTA AATATTGTCT TCCCCCACCC CCCCTCCATC    960TCTCAATTTT TGAATTTTAT ACACTCAACC ACCTTGCAAA TTTGTCACAT GATACTTACA   1020TATGGCTCTA CAAGTGTCAT TTTTCTTCCA TATTTGATAT TATAAAAAAT AAAATAAAAA   1080ACTAAGGAGA TGATCCAGAT ATATTGGAAA ATGAAATGCA AAGGCTAAAA ATAATTGAAA   1140TTAACATGAA ATTAGTAAAA ATTAC                                         1165

(2)SEQ ID NO：16资料：

(i)序列特征：

(A)长度：317碱基对

(B)类型：核酸

(C)链：单链

(D)拓扑结构：线形

(ii)分子类型：DNA(基因组)

(iii)假拟序列：否

(iv)反义序列：是

(xi)序列描述：SEQ ID NO：16：GCAAGCAATG CACCACAGTT AGTTTATATC AAAAAGAAGA AAGGTATTAA CGGAGCTAAA     60AACTGTTATA TACCACATGA AAGAAGTTGA TAATGTGAAA ACACCATGCT CATAAAGATT    120GTAATTCAAA TAACAAATGC CCACAGGAGT AAAGAGCTGT CTTTCCCAAG TTAAGGTATT    180ATAAATTGGC GGAACGAAGT AACACATGTT TGACATCTCC ACACGGTGCA CAGATCAAAT    240ATGCCATGAG CACCAGTCCA GAAGTTTTCC AACTATTTAT ATACTATCCA TGCAACCATA    300TAAATTATCA AACATAC                                                   317

(2)SEQ ID NO：17资料：

(i)序列特征：

(A)长度：504碱基对

(B)类型：核酸

(C)链：单链

(D)拓扑结构：线形

(ii)分子类型：DNA(基因组)

(iii)假拟序列：否

(iv)反义序列：是

(xi)序列描述：SEQ ID NO：17：CTGCAAAAAA AGAGAGCAGT TTACACAAGA AAAAACTGCT AAATCTCAAC AAAAGTATCA     60TGAATTTAAT ATTAAGGAAG CTATTTCGAA CAGAAAGAGT AACTCATGAT AATAGAAGGA    120AATTGTGAAG CAACAGAAGG AAGACTTTCT TTATTTCTAC AAAATTGCTT TAAGACTATA    180TTTGATGCTT GTATAGTACA TGTTGAATCC CCTCAGCTTC TTTATGTCTA TACTTTTTTT    240ATATTTTGAA TCTCCTTAGT GAAAATCTTT GCTTTGCCAC TGACACTCCG GGGGTGTGTC    300ACTTCTCCAA AAACCTTGTC TACTTTTTTG AAGACCCAAT CAAACAGCTT TTTAAAAGAT    360CAAAAAAATG GCCAGGTGCC ACCTAAATGG AGCCACTACT TACTCCCCGG TATGCAAAAT    420TCTCTAGCAA AGTCAAAGTA GGTATAAACA ATTCATCTTC CAAAATAAGG TCAAACTGCC    480TAAAGCACAA CTTTTGGCTG TTAC                                           504

(2)SEQ ID NO：18资料：

(i)序列特征：

(A)长度：146碱基对

(B)类型：核酸

(C)链：单链

(D)拓扑结构：线形

(ii)分子类型：DNA(基因组)

(iii)假拟序列：否

(iv)反义序列：是

(xi)序列描述：SEQ ID NO：18：CTGCATTGTG GATGAGTTAA TTAGAAGCAT AACCTTAATA GCAATTAGAA CATGTAAGAA     60AGCCAATGAT GCTGCAACAT CATGCTTTAA TAGGAAAATC TGTTATGATG ATGGAAACTA    120CTATTTTGTA GTAGACGAGG ACCTAC                                         146

(2)SEQ ID NO：19资料：

(i)序列特征：

(A)长度：218碱基对

(B)类型：核酸

(C)链：单链

(D)拓扑结构：线形

(ii)分子类型：DNA(基因组)

(iii)假拟序列：否

(iv)反义序列：是

(xi)序列描述：SEQ ID NO：19：CTGTTTAATT GCTGAAGTAG TAAGTTCTCA AGCACTTATA GAATTGACTC ATTTTGTTAA     60GGGAAAGAGT ATGGGATCAA GTCCAAATTA GTAAAGACAC AATTATTTTA ACTTTTGCAT    120TTCAAAATGT CTTACATAAC AAGACTAGTA AGAACATGAA TCGAAATGCC TGTGATGATG    180GTGTTCAAAA TTCAGCTTCA AGGTATGAAT AACAAAAC                            218

(2)SEQ ID NO：20资料：

(i)序列特征：

(A)长度：198碱基对

(B)类型：核酸

(C)链：单链

(D)拓扑结构：线形

(ii)分子类型：DNA(基因组)

(iii)假拟序列：否

(iv)反义序列：是

(xi)序列描述：SEQ ID NO：20：CTGTATCCAG CAGACATAAT AGGAGTGAAC ATAAAAATGT CACTGGATAA ATAACTTATC     60ATGATATTCA GCGGCTACCA ATATTCTGAA GGCCCATGGC GAAAATAAGT ACTTTTATAC    120TTTCAGGACG TATATATTTG GATTCTATCT AACAATTGTT CTGAGAATTA TTTAGTTGTA    180GAAATAAATT TAAAATAC                                                  198

(2)SEQ ID NO：21资料：

(i)序列特征：

(A)长度：208碱基对

(B)类型：核酸

(C)链：单链

(D)拓扑结构：线形

(ii)分子类型：DNA(基因组)

(iii)假拟序列：否

(iv)反义序列：是

(xi)序列描述：SEQ ID NO：21：CTGTGGTTAG AAGCTAAAAG TGAATAGATG AGAAAAATTA CCTCCAAATA AGAGGGATAT     60TGAAAAAGAA ACACAATGCA TGAAAAGAAT AAACAAATGA TAAACGAGAA AATTGAATAA    120TCCATCAGAA CCCTGGTTAC CTCACAAAGA GTGAGATTTT CCGTGGCTAA CCTATATGAA    180CCTTAAAATG CAATAGAAAC AGACAAAC                                       208

(2)SEQ ID NO：22资料：

(i)序列特征：

(A)长度：293碱基对

(B)类型：核酸

(C)链：单链

(D)拓扑结构：线形

(ii)分子类型：DNA(基因组)

(iii)假拟序列：否

(iv)反义序列：是

(xi)序列描述：SEQ ID NO：22：CTGTACAAGT TCATCAAACA TTTCACAATT ACTCCAAAAC AGACACACTT GCAAACTCTA     60TACAGTAATC TTCTATACTA CAAAAAAGTA AACAATGTTT TTTTTAAGAT GACATTTGTT    120CTCAGCAACA TAATAGAAAT CCCTAGACAA TGGAAACATT CATCATGTTG TTTTCCTCTA    180TGTTTCAACC CCTTTGATGT TCAACAGTTC AGGTCATTTT GAGGAATGAA TCTTGTTCAA    240GTAAGCCAAA CTAATTGTAA TTATCACAAA ATATCTAAAG ATGTAAGACA TAC           293

(2)SEQ ID NO：23资料：

(i)序列特征：

(A)长度：376碱基对

(B)类型：核酸

(C)链：单链

(D)拓扑结构：线形

(ii)分子类型：DNA(基因组)

(iii)假拟序列：否

(iv)反义序列：是

(xi)序列描述：SEQ ID NO：23：CTGCATTTCA TCATGAGGGG GAGGAAAGAC GGAGAAATAT AGATATCAGA TTTAGACCAT     60TTCAATTAGT ATCACTTCAT TGTAAAGAAA AGGTAAGTAT CCAACAAATA TAGCAGGCTG    120TGGATTGGTA GCCTGAAACT ATAGCTTCAA AGAATCAACT TAAGCTGCTC ATCAAGGCCT    180TAGTGGTAGA AATGAGGCGG TAATAAGTGT AAATGAATCT AATACTTGGA TCTCGAAACA    240AAAATCAGAA ATTCGGTTGG AAAATAAGTA GAACAAGATG AAATGAGCTA TCATCCCCAG    300AACCAAGTAG ACTTCCAAGT AAGCAATCTA AAAATTACTA GATTATTTAA CAAGCTGCGA    360TTCAAAATAC TTGAAC                                                    376

(2)SEQ ID NO：24资料：

(i)序列特征：

(A)长度：172碱基对

(B)类型：核酸

(C)链：单链

(D)拓扑结构：线形

(ii)分子类型：DNA(基因组)

(iii)假拟序列：否

(iv)反义序列：是

(xi)序列描述：SEQ ID NO：24：CTGCAAAGTG AAGTAACTAA TCAGTACAGC TATTACCGAA TTTGACCAGC TATTGGATTA     60AATAATATGA AATCCATCAT CAAGAAATGG AAGGTAAAAA GGTTTCTACT TGTCCTTGGA    120TAGAATTAAA GCACTTCATA AACCCAACAC TTTCAACTTT AGATGATTTT AC            172

(2)SEQ ID NO：25资料：

(i)序列特征：

(A)长度：145碱基对

(B)类型：核酸

(C)链：单链

(D)拓扑结构：线形

(ii)分子类型：DNA(基因组)

(iii)假拟序列：否

(iv)反义序列：是

(xi)序列描述：SEQ ID NO：25：CTGTTTTCGT CATGCGAGGA TCAGAAAAAA GAGTTAAATT AGACAATGTG AAAATGATTT     60GTTTCAGTTA CTTCTCCATA AAACTTGTTC AGTACATTAA AAACAAGCAG AGCAATAATT    120TCATGGATAA GTAAAACATA TATAC                                          145

(2)SEQ ID NO：26资料：

(i)序列特征：

(A)长度：242碱基对

(B)类型：核酸

(C)链：单链

(D)拓扑结构：线形

(ii)分子类型：DNA(基因组)

(iii)假拟序列：否

(iv)反义序列：是

(xi)序列描述：SEQ ID NO：26：CTGTCATGAG AACAGATTGT ATGTCAGCAT GAAGACAAAG ATCATCAATA AACAGTTTTC     60TCCTTTTTGA ATTAGCTAAA CAACGCAGGG GGAGGGCAGG AGGCTCAAAC ACTTCCGAAC    120TCAGACAGTC GGATATCTTA TACAACTAAA GATGGATGAG ACAATTACAG TTCTTTTTGG    180TGAGAGAACT GTACCCTACA TCTGTTATCT TATTATCAAA AGTTATTCAA GCAAATCCTT    240AC                                                                   242

(2)SEQ ID NO：27资料：

(i)序列特征：

(A)长度：797碱基对

(B)类型：核酸

(C)链：单链

(D)拓扑结构：线形

(ii)分子类型：DNA(基因组)

(iii)假拟序列：否

(iv)反义序列：是

(xi)序列描述：SEQ ID NO：27：CTTCACAAAC AAGGAGAAGA AGAAGCAAAA AGAAAGATGA ATATAGTTAG CTTAGTTCAA     60TATAAAAAAT TTCTCTCCAA GCTATTTTTC TGCTAGCAAA ATTCATTAGT TATTTAACTT    120TTCTATACAT AAAGCTGCAC AAAGAAATAG TAGTACATTT TTTTGACTTG CACAAAATAA    180CTGTGTTGTC CATTTTCTGA CATGTGTTCA TCTACATGCA CTGTTTCAAC AACAACAACT    240ACTTCAGTCC CAAACAAGTT GGGTCGCTTT AGCTACACAT GTTGCTTTCA CTTCTGTTAC    300TTCTTTTTGG ACTTTTTTTC TTGAGCCAAG GGTCTATTGA AAAAATCCTC TCTACCTCTG    360AGATAGGAGT AAGTTTTGCA TACACTCTAC CCTCCCCCTG AAACCACTTT GTGGGACTAC    420ACGAGGTATG TTGTTGTTGA TGTTAGCGCA GACACCAAAG GTGGACATTA TATGACTATT    480CCTAGCTTTA CTTCAGGGCG GTTTTAAGTT CCCATCAACT TCATTTTTGA TCATTTACCT    540AAGTTTATGC AGGTGCAAGC TACATGCACT GGTTTAGGGA AAAAGAGGAT AGAGAAGAAT    600TTTTTTGGCA TCCTTTTGTT TTGTAACAGT AAGATGCCAA AAGTAGACCT TATTACGGCT    660ATTCCTACCT TTCAAATTAG TAGTTCAGAG GACTTAACTG GCGATTGTGG CGGTAATCAA    720TAGTTAACTT CTATCGCATT CAAATAACTA TGAACAAAAC CACAATAAAA AGGGAGGTCA    780CACGGCAAGA ACTGTAC                                                   797

(2)SEQ ID NO：28资料：

(i)序列特征：

(A)长度：2169碱基对

(B)类型：核酸

(C)链：单链

(D)拓扑结构：线形

(ii)分子类型：DNA(基因组)

(iii)假拟序列：否

(iv)反义序列：是

(xi)序列描述：SEQ ID NO：28：CGAATGGGTT TTGATAAAAC TTTGAAATTA ATTTCCATTG ATTAAATTAT GGTACTTTGC     60TTCAGCTGCT GCCTTCTTGT ATGTTCTGAT TCTTGATTTC CTCATTTTAG TGGCTTTTTA    120TAAAAAAACA TTATGACCCT TTTGTTAGTC CTCCCCTTTC TGAATATTTC ACTCAGACCC    180CATTAGTTTC GAAATTGAAG TAAAACATAT TTTTTTTAGT ATTGTAGTTT TTTTATATTT    240CTACTTACTT ACTCGTTATA CAATTTCTAT TTAGGTAATC TAATCGACTT TTTGTATACA    300TAATACATGT ATTTTTGGTA AAGAGTTTTT TACTTTCTCC TAGTGGTAAG GCAGATATAG    360TTAAGGATTT ATTGACCTAA TATGAACGCC AATAATTTTA TATTTTGTAT ATACGTATAT     420TTAAAAGTTT ACTAGATATG TATAAATAAG ATATTTAAAA TTTAATTATA AATACAAATG     480ATTATGGTAA AATTTTGACC TCCAAATTAA AATATTTAAA ATCAAGATTT GTCACTACTT     540ATATATATCT TGTTGTAAAT CCCTTTTAAT CAAGTTGTGA GTTTACAAAT ATTCGTTGGT     600TAGGCTAAAA AAAATAAGCT ATAAAGATCA AGTATAAAAT TATGCATTTT CTGCATTTAA     660TTTGGAAAAA TATGTTGGAG CAATCTAAAA TTGTTTGTTG ATTTATAAAT AAGTCGTTTT     720TTGTTTTTAA TAATTGATAA ACTATTTATT CTGCTTAAAG TTTTAGAATG TCAAAAAATA     780ATTTATTTTA ATGACCTTAA ATGATTGAAT AAGATGTAGA CACACTCAAT TACAAAGTTA     840CAATATTAAT ACACTTGTCT ATTGGGTCAT GGATTATATC ATCTAATATA AATAACATGT     900CAAATTAAAG CTTCTTATAA AGTTCATAGG AACTAAGATA AACTTTGTGA ATGGCCAAGC     960ATTTTTCAGA ACATCATGGG TGGTATGACA ATCAAATTGA ACTTATGGGA TGAAAAATGA    1020ATATCATTCA ACTAAGAGGG CACAACTTGA CATGTTAGAA AGTAAAGCAA ATTTAGTAGT    1080GGGCCAAATA AAAGAAATTA ATTTGTCAGT TTATTCTTAA ACTTTACCTT CTTTGAACTT    1140CCACGTTATC AAAGGTTCAC GGTTCATATG AAGGCCATGT GTATCCTTTT TAATTTTGGT    1200ATTCCGTGTT CAATATCGAT TAATTTAAAT TCGCATGACA AAATCCTATA TTAAAGTATA    1260AAGTATTTTC TAAAACAGAC AAGTTCAATA CTTTAATTTT ACACTGAATG CATAAATTTA    1320CACTATAATA ATTCCAGTCG CAGTCTACAT TACAATAATT AACAATTTTA GCATGAAATG    1380AAAAACTTTA AATTATATGC CATCAAATCA CTTAAAGTAT ACATTTTTTT AATAACTAGT    1440TCTAATCCCA CTTGAAATGA GAGTTATTTT AATATCGACC GTTAATTACC ATTTTATTAT    1500TAAATCTGCA ACTACAGTCA ACTACACCAA TGATTTTGCT GATGCCAACT CATAATATAA    1560TATCCACCGT TCATGTGATT AATTCAATAT TTCATATACG TACGTAACAA AAATTACTAA    1620ATTAACGTTG GATATACCAT ACCCTAAGCT CTGCCAAATG TCAATGTTCT ATCATTAGCT    1680ATTTTTATGC ATCTATAATA GATGTTAAAT TCATATTCTA AGATTGAACT TAATCATAAA    1740CTCAAAATTT GTGGTACCTG TCAATGCCTC CAAAAGTTGA TTGAACATAA ACGTTAAGAT    1800CTGTGTACTT GTCTTTTCCT TGTAATAATG TATGTATGAT AATAATAATA AGAGAACAAA    1860ATATGGCAAA ATAAACACTT TTTTAACATG TAACTCAAAA CAAGTAATAG GCAAAAGTAC    1920AGATGACAAC ACAACACTGT AAACATCATT GAGGAAAACA AAAACCATAC AACATTTTGA    1980CTGTAAATGA AGAGTTTGAA AACAAAAACT ATGTTCAAAC CGACGCCAAG CTAACGAAAA    2040TAGCCATAGA GTTCTAAGAA GCAGATGCAA CAGTTCCACG GGTTAGTATC GTCTGTAGTA    2100GGACCGGTCA TGAGAACTCG AAAGAATCTG AAAGGAAGTA ATGCATTTGA ACCAGTAATT    2160GGCCATGAT                                                            2169

(2)SEQ ID NO：29资料：

(i)序列特征：

(A)长度：11469碱基对

(B)类型：核酸

(C)链：双链

(D)拓扑结构：线形

(ii)分子类型：DNA(基因组)

(iii)假拟序列：否

(iv)反义序列：否

(xi)序列描述：SEQ ID NO：29：ATCATGGCCA ATTACTGGTT CAAATGCATT ACTTCCTTTC AGATTCTTTC GAGTTCTCAT      60GACCGGTCCT ACTACAGACG ATACTAACCC GTGGAACTGT TGCATCTGCT TCTTAGAACT     120CTATGGCTAT TTTCGTTAGC TTGGCGTCGG TTTGAACATA GTTTTTGTTT TCAAACTCTT     180CATTTACAGT CAAAATGTTG TATGGTTTTT GTTTTCCTCA ATGATGTTTA CAGTGTTGTG     240TTGTCATCTG TACTTTTGCC TATTACTTGT TTTGAGTTAC ATGTTAAAAA AGTGTTTATT     300TTGCCATATT TTGTTCTCTT ATTATTATTA TCATACATAC ATTATTACAA GGAAAAGACA     360AGTACACAGA TCTTAACGTT TATGTTCAAT CAACTTTTGG AGGCATTGAC AGGTACCACA     420AATTTTGAGT TTATGATTAA GTTCAATCTT AGAATATGAA TTTAACATCT ATTATAGATG     480CATAAAAATA GCTAATGATA GAACATTGAC ATTTGGCAGA GCTTAGGGTA TGGTATATCC     540AACGTTAATT TAGTAATTTT TGTTACGTAC GTATATGAAA TATTGAATTA ATCACATGAA     600CGGTGGATAT TATATTATGA GTTGGCATCA GCAAAATCAT TGGTGTAGTT GACTGTAGTT     660GCAGATTTAA TAATAAAATG GTAATTAACG GTCGATATTA AAATAACTCT CATTTCAAGT     720GGGATTAGAA CTAGTTATTA AAAAAATGTA TACTTTAAGT GATTTGATGG CATATAATTT     780AAAGTTTTTC ATTTCATGCT AAAATTGTTA ATTATTGTAA TGTAGACTGC GACTGGAATT     840ATTATAGTGT AAATTTATGC ATTCAGTGTA AAATTAAAGT ATTGAACTTG TCTGTTTTAG     900AAAATACTTT ATACTTTAAT ATAGGATTTT GTCATGCGAA TTTAAATTAA TCGATATTGA     960ACACGGAATA CCAAAATTAA AAAGGATACA CATGGCCTTC ATATGAACCG TGAACCTTTG     1020ATAACGTGGA AGTTCAAAGA AGGTAAAGTT TAAGAATAAA CTGACAAATT AATTTCTTTT     1080ATTTGGCCCA CTACTAAATT TGCTTTACTT TCTAACATGT CAAGTTGTGC CCTCTTAGTT     1140GAATGATATT CATTTTTCAT CCCATAAGTT CAATTTGATT GTCATACCAC CCATGATGTT     1200CTGAAAAATG CTTGGCCATT CACAAAGTTT ATCTTAGTTC CTATGAACTT TATAAGAAGC     1260TTTAATTTGA CATGTTATTT ATATTAGATG ATATAATCCA TGACCCAATA GACAAGTGTA     1320TTAATATTGT AACTTTGTAA TTGAGTGTGT CTACATCTTA TTCAATCATT TAAGGTCATT     1380AAAATAAATT ATTTTTTGAC ATTCTAAAAC TTTAAGCAGA ATAAATAGTT TATCAATTAT     1440TAAAAACAAA AAACGACTTA TTTATAAATC AACAAACAAT TTTAGATTGC TCCAACATAT     1500TTTTCCAAAT TAAATGCAGA AAATGCATAA TTTTATACTT GATCTTTATA GCTTATTTTT     1560TTTAGCCTAA CCAACGAATA TTTGTAAACT CACAACTTGA TTAAAAGGGA TTTACAACAA     1620GATATATATA AGTAGTGACA AATCTTGATT TTAAATATTT TAATTTGGAG GTCAAAATTT     1680TACCATAATC ATTTGTATTT ATAATTAAAT TTTAAATATC TTATTTATAC ATATCTAGTA     1740AACTTTTAAA TATACGTATA TACAAAATAT AAAATTATTG GCGTTCATAT TAGGTCAATA     1800AATCCTTAAC TATATCTGCC TTACCACTAG GAGAAAGTAA AAAACTCTTT ACCAAAAATA     1860CATGTATTAT GTATACAAAA AGTCGATTAG ATTACCTAAA TAGAAATTGT ATAACGAGTA     1920AGTAAGTAGA AATATAAAAA AACTACAATA CTAAAAAAAA TATGTTTTAC TTCAATTTCG     1980AAACTAATGG GGTCTGAGTG AAATATTCAG AAAGGGGAGG ACTAACAAAA GGGTCATAAT     2040GTTTTTTTAT AAAAAGCCAC TAAAATGAGG AAATCAAGAA TCAGAACATA CAAGAAGGCA     2100GCAGCTGAAG CAAAGTACCA TAATTTAATC AATGGAAATT AATTTCAAAG TTTTATCAAA     2160ACCCATTCGA GGATCTTTTC CATCTTTCTC ACCTAAAGTT TCTTCAGGGG TAATTTTTAC     2220TAATTTCATG TTAATTTCAA TTATTTTTAG CCTTTGCATT TCATTTTCCA ATATATCTGG     2280ATCATCTCCT TAGTTTTTTA TTTTATTTTT TATAATATCA AATATGGAAG AAAAATGACA     2340CTTGTAGAGC CATATGTAAG TATCATGTGA CAAATTTGCA AGGTGGTTGA GTGTATAAAA     2400TTCAAAAATT GAGAGATGGA GGGGGGGTGG GGGAAGACAA TATTTAGAAA GAGTGTTCTA     2460GGAGGTTATG GAGGACACGG ATGAGGGGTA GAAGGTTAGT TAGGTATTTG AGTGTTGTCT     2520GGCTTATCCT TTCATACTAG TAGTCGTGGA ATTATTTGGG TAGTTTCTTG TTTTGTTATT     2580TGATCTTTGT TATTCTATTT TCTGTTTCTT GTACTTCGAT TATTGTATTA TATATCTTGT     2640CGTAGTTATT GTTCCTCGGT AAGAATGCTC TAGCATGCTT CCTTTAGTGT TTTATCATGC     2700CTTCTTTATA TTCGCGTTGC TTTGAAATGC TTTTACTTTA GCCGAGGGTC TATTAGAAAC     2760AATCTCTCTA TCTCGTAAGG TAGGGGTAAA GTCCTCACCA CACTCCACTT GTGGGATTAC     2820ATTGTGTTTG TTGTTGTAAA TCAATTATGT ATACATAATA AGTGGATTTT TTACAACACA     2880AATACATGGT CAAGGGCAAA GTTCTGAACA CATAAAGGGT TCATTATATG TCCAGGGATA     2940TGATAAAAAT TGTTTCTTTG TGAAAGTTAT ATAAGATTTG TTATGGCTTT TGCTGGAAAC     3000ATAATAAGTT ATAATGCTGA GATAGCTACT GAAGTTTGTT TTTTCTAGCC TTTTAAATGT     3060ACCAATAATA GATTCCGTAT CGAACGAGTA TGTTTTGATT ACCTGGTCAT GATGTTTCTA     3120TTTTTTACAT TTTTTTGGTG TTGAACTGCA ATTGAAAATG TTGTATCCTA TGAGACGGAT     3180AGTTGAGAAT GTGTTCTTTG TATGGACCTT GAGAAGCTCA AACGCTACTC CAATAATTTC     3240TATGAATTCA AATTCAGTTT ATGGCTACCA GTCAGTCCAG AAATTAGGAT ATGCTGCATA     3300TACTTGTTCA ATTATACTGT AAAATTTCTT AAGTTCTCAA GATATCCATG TAACCTCGAG     3360AATTTCTTTG ACAGGCTTCT AGAAATAAGA TATGTTTTCC TTCTCAACAT AGTACTGGAC     3420TGAAGTTTGG ATCTCAGGAA CGGTCTTGGG ATATTTCTTC CACCCCAAAA TCAAGAGTTA     3480GAAAAGATGA AAGGGTATGT TTGATAATTT ATATGGTTGC ATGGATAGTA TATAAATAGT     3540TGGAAAACTT CTGGACTGGT GCTCATGGCA TATTTGATCT GTGCACCGTG TGGAGATGTC     3600AAACATGTGT TACTTCGTTC CGCCAATTTA TAATACCTTA ACTTGGGAAA GACAGCTCTT     3660TACTCCTGTG GGCATTTGTT ATTTGAATTA CAATCTTTAT GAGCATGGTG TTTTCACATT     3720ATCAACTTCT TTCATGTGGT ATATAACAGT TTTTAGCTCC GTTAATACCT TTCTTCTTTT     3780TGATATAAAC TAACTGTGGT GCATTGCTTG CATGAAGCAC AGTTCAGCTA TTTCCGCTGT     3840TTTGACCGAT GACGACAATT CGACAATGGC ACCCCTAGAG GAAGATGTCA AGACTGAAAA     3900TATTGGCCTC CTAAATTTGG ATCCAACTTT GGAACCTTAT CTAGATCACT TCAGACACAG     3960AATGAAGAGA TATGTGGATC AGAAAATGCT CATTGAAAAA TATGAGGGAC CCCTTGAGGA     4020ATTTGCTCAA GGTAACAGCC AAAAGTTGTG CTT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(2)SEQ ID NO：30资料：

(i)序列特征：

(A)长度：26碱基对

(B)类型：核酸

(C)链：单链

(D)拓扑结构：线形

(ii)分子类型：其他核酸

(A)描述：/desc＝″合成的DNA引物″

(iii)假拟序列：否

(iv)反义序列：是

(xi)序列描述：SEQ ID NO：30：

GGAATTCCAG TCGCAGTCTA CATTAC     26

(2)SEQ ID NO：31资料：

(i)序列特征：

(A)长度：28碱基对

(B)类型：核酸

(C)链：单链

(D)拓扑结构：线形

(ii)分子类型：其他核酸

(A)描述：/desc＝″合成的DNA引物″

(iii)假拟序列：否

(iv)反义序列：是(xi)序列描述：SEQ ID NO：31：CGGGATCCAG AGGCATTAAG ATTTCTGG    28(2)SEQ ID NO：32资料：(i)序列特征：(A)长度：32碱基对(B)类型：核酸(C)链：单链(D)拓扑结构：线形(ii)分子类型：其他核酸(A)描述：/desc＝″合成的DNA引物″(iii)假拟序列：否(iv)反义序列：是(xi)序列描述：SEQ ID NO：32：CGGGATCCAA AGAAATTCTC GAGGTTACAT GG     32(2)SEQ ID NO：33资料：(i)序列特征：(A)长度：32碱基对(B)类型：核酸(C)链：单链(D)拓扑结构：线形(ii)分子类型：其他核酸(A)描述：/desc＝″合成的DNA引物″(iii)假拟序列：否(iv)反义序列：是(xi)序列描述：SEQ ID NO：33：CGGGATCCGG GGTAATTTTT ACTAATTTCA TG     32(2)SEQ ID NO：34资料：(i)序列特征：(A)长度：32碱基对(B)类型：核酸(C)链：单链(D)拓扑结构：线形(ii)分子类型：其他核酸(A)描述：/desc＝″合成的DNA引物″(iii)假拟序列：否(iv)反义序列：是(xi)序列描述：SEQ ID NO：34：CGGGATCCCG TATGTCTCAC TGTGTTTGTG GC    32(2)SEQ ID NO：35资料：(i)序列特征：(A)长度：32碱基对(B)类型：核酸(C)链：单链(D)拓扑结构：线形(ii)分子类型：其他核酸(A)描述：/desc＝″合成的DNA引物″(iii)假拟序列：否(iv)反义序列：是(xi)序列描述：SEQ ID NO：35：CGGGATCCCC CTACATACAT ATATCAGATT AG    32(2)SEQ ID NO：36资料：(i)序列特征：(A)长度：28碱基对(B)类型：核酸(C)链：单链(D)拓扑结构：线形(ii)分子类型：其他核酸(A)描述：/desc＝″合成的DNA引物″(iii)假拟序列：否(iv)反义序列：是(xi)序列描述：SEQ ID NO：36：CCATCGATAC TTTAAGTGAT TTGATGGC  28(2)SEQ ID NO：37资料：(i)序列特征：(A)长度：28碱基对(B)类型：核酸(C)链：单链(D)拓扑结构：线形(ii)分子类型：其他核酸(A)描述：/desc＝″合成的DNA引物″(iii)假拟序列：否(iv)反义序列：是(xi)序列描述：SEQ ID NO：37：CGGGATCCTG TTCTGATTCT TGATTTCC  28(2)SEQ ID NO：38资料：(i)序列特征：(A)长度：2122碱基对(B)类型：核酸(C)链：单链(D)拓扑结构：线形(ii)分子类型：DNA(基因组)(iii)假拟序列：否

(iv)反义序列：否

(xi)序列描述：SEQ ID NO：38：GTATGTCTCA CTGTGTTTGT GGCTGTGTGT GTTTTTTTCT CTGTCTTTTT GTGTTTTGTG      60TAATTGGGGC TCTTTAAAGT TGGTATTGTG TATACCCTTT TGAGTATAGT CTTTGAGGAA     120GCAAAATGAT GAATCTTGAT TGACATTAGT AAGGGTTGTA ACTTTTTGAA GTTTGGTTAG     180GTGTAATTGA GTTTGGCTTG TGTGTCTGTG TGTCGAGGTT ATTTTTTTGG TTTGTGTTAT     240TGGGGATTCT TAAAAGTTGG TATTGTGTAT ACCCTTTTGA GTATAGTCTT TGAGGAAGCA     300AAAATGATGA ATCTTGATTG GCATTAGTAA AGGTTGTAGC TTTTTGAAGT GTGGTTAGGT     360GTAATTGAGT TTGGCTTGTG TGTCTGTGTG TTTTGGAATC CTGATGTGTG TCAAGTCCTG     420ATATGGGTCG AGGTTCTTTC TTTGGTTTGT GTAATTGGGG GTTCTTAAAA GTTGGTATTA     480TGTACCTTTT TAAGAATAGT GTCTGAGAAA GCAAAATCGA TGAATTTTGA TTGACAGCAT     540ATTCTTTGAG AAAGCAAAAA ATGGTGAGTT TTCATGGAGA AACTTGATTG ACATTACTAA     600AGGTAGCAAC TTTTTCAACT CCTGATATGG GTCAAGGTTC TTTGTTTGGT TTGTGTAATT     660TGGGGTTCTT TGAAGTTTTG AGAAAGAAAA ATTATGATTT TTCATGGAGA AATTTGATTT     720ACATTAATAA AGGTAGTAGC TTTTTAAAGT GTGGTCAGCT GTAATGAGTT CAGCTTGGTT     780TAAAGGGGCC CTACATATGG TGCTTTCTGG TGAGATATTT GTTGCTCCAC CATACGAGTT     840ATAAGAATCA TAGTGTTAGG ATCTTTTTTC TTTTTTTTTT CATTTTTCAC TTGACTAGCT     900ACTAGAGGAG TGATCTTGAC GGCGGAAAAT CTTAGAAAGG GGAAGGTTGT TTGCATCAAC     960TGGTGTTATA TGTGCAAGGA GACGGGAGAT GATGTAGATC ATCTTCTTCT TCATTGTGGT     1020CTTTCCATGA GGTTATGATG TGATATGTTT GAATGGTTTG GTACTTCTTG GCTATGCCAA     1080GAACTGTGAA AGAATTGATA TTCAGTTGGA AGTGTGGAGT TGGAAGAGTG GAAGAATTGA     1140CACTTGGTTC CATTAGCTTT AATGTGGGTG GTGTGGAGAG AGAGAGAAAT AGGAGAGCTT     1200TTGAGGGGGT AGAGTTGAGC TTTCCTCAGT TGAGAAGTAG CCTTTGATAT CTTTTTTTTT     1260TTTTTTTGTA CACCCATAGA ATTCCCAATT GTATAGAAGA TTGGGTGGAG TTTGTAGAGA     1320ATCATCTTTT GTAGTAGATT CTTTACCTTT TGGTATATCC ATTGTATACA GCCAGGCCTT     1380TGACTATGTT TATGAATGAA TATACATTAC TTGAAAAAAA AAGAAGTGAA GCCAGTCTGT     1440TGTACCTTTG TAGACAATGT TGTTGCAGCA TCTTGATAAT TCCCTGAAAA TTGTCTCCCT     1500GAAGGAATAG TTTGGTTGAT ATTGATTATT TCTTGGTTTG TTTAATTCGG TGTTCTTGAA     1560GGCCATTTTA AATCCTTTGA CATTGTTAAA GGTGTTTACA AGTGTTGGTC TGGGTTTAAA     1620AGCACCTCTT GTATGGTGCT TTCTGGAGTG ATCTTTCTTC CTCCAAAAGA GAAGTTGCAA     1680GAATCAGTGT GTGTACTTTT TTCTCTTGTA TGATCAGATC TTTTTTCAAT TTTTCCGTTT     1740TAGTTGATTT ATCCATATAG TGAAAGTTGG TGTCATAGTT GCTGTTTGTG GACTTCCTGT     1800AAAAGTTTTT TGATATACTT AAAAAATTGT CACACAGAAG AAAGAGTTTT TTACCATTAC     1860TTAAGCTAGA TGGGACTGTT TGATTCTTAG ACCAAATAAT GAACCTTTTT GTTCTCTTAA     1920CGTGTACTTG AAATAGTTTG GTAAAATTGT GATAGGAAAA AAGATAATTC TTGATTGCTT     1980TTGGAGCATC ACTTCTAATC ATAAAAGTCT TTGCTCTCTT CAACCATGAA TGATAAATTG     2040GACACTTATG TGGCCCTAAG TTGCTCTCAG TAGTGGTCTT TAATTGTGGA GATATAACTA     2100ATCTGATATA TGTATGTAGG GA                                              2122

Claims (19)

1.一种影响植物(或其细胞，组织或器官)中酶活性的方法，包括在所述植物(或其细胞，组织或器官)中表达以反义方向部分或完全编码A类马铃薯淀粉分支酶的内含子的核苷酸序列，任选的，以及一种以反义或正义方向部分或完全编码B类淀粉分支酶的内含子的核苷酸序列；并且其中所述核苷酸序列不含对于正常与所述内含子连接的外显子序列为有义的序列。

2.权利要求1的方法，其中淀粉分支酶活性受影响和/或其中支链淀粉水平受影响和/或淀粉组成被改变。

3.影响产淀粉生物体(或其细胞，组织或器官)中酶活性的方法，包括在产淀粉生物体(或其细胞，组织或器官)中表达以反义方向部分或完全编码A类马铃薯淀粉分支酶的内含子的核苷酸序列，任选的，以及一种以反义或正义方向部分或完全编码B类淀粉分支酶的内含子的核苷酸序列；其中所述核苷酸序列不含正常与所述内含子结合的外显子序列的有义序列；并且其中淀粉分支酶活性受影响和/或支链淀粉水平受影响和/或淀粉组成被改变。

4.权利要求1到3的方法，其中所述核苷酸序列不含对于外显子序列为有义的序列。

5.前述权利要求任何之一的方法，其中所述酶活性被降低或消除。

6.前述权利要求任何之一的方法，其中所述核苷酸序列以有义方向编码至少基本上全部的至少一个内含子。

7.前述权利要求任何之一的方法，其中所述核苷酸序列以有义方向编码全部的至少一个内含子。

8.前述权利要求任何之一的方法，其中所述核苷酸序列包括如SEQ.ID.No.38给出的序列，或其变体，衍生物或同系物。

9.前述权利要求任何之一的方法，其中所述核苷酸序列通过一个含SEQ.ID.No.14给出序列或其变体，衍生物或同系物的启动子进行表达。

10.含SEQ.ID.No.14中给出的序列或其变体，衍生物或同系物的启动子。

11.与目的基因(“GOI”)组合的权利要求10的启动子。

12.可包含或表达本发明权利要求10到11任何之一的构建体。

13.包含或表达本发明权利要求10到12任何之一的载体。

14.一种核苷酸序列的组合，其中包含编码重组酶的第一核苷酸序列；和以有义方向与A类SBE内含子对应的第二核苷酸序列；其中所述内含子是与编码所述重组酶相应的酶的基因组基因连接的内含子；并且其中第二核苷酸序列不含正常地与所述内含子连接的对外显子序列为有义的序列。

15.包含或表达本发明权利要求10到14任何之一的细胞，组织或器官。

16.包含或表达本发明权利要求10到15任何之一的转基因产淀粉生物体。

17.权利要求16的转基因产淀粉生物体，其中所述生物体是植物。

18.从本发明前述权利要求任何之一获得的淀粉。

19.在宿主生物体中表达重组蛋白质或酶的方法，包括表达编码重组蛋白质或酶的核苷酸序列；和表达进一步的核苷酸序列；其中进一步的核苷酸序列以有义方向部分或全部编码A类SBE内含子；其中所述内含子是正常与基因组基因结合的内含子，所述基因组基因编码对应于所述重组蛋白或酶的蛋白质或酶；并且其中所述进一步核苷酸序列不含对于正常与所述内含子结合的外显子序列为有义的序列。

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