CN1244682C - 镰孢霉菌 - Google Patents
镰孢霉菌 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1244682C CN1244682C CN 200310101180 CN200310101180A CN1244682C CN 1244682 C CN1244682 C CN 1244682C CN 200310101180 CN200310101180 CN 200310101180 CN 200310101180 A CN200310101180 A CN 200310101180A CN 1244682 C CN1244682 C CN 1244682C
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- present
- fermentation
- fusarium
- culture
- vinca
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Images
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及微生物技术领域，特别是涉及一种其发酵物具有药用功能的微生物。本发明所述的镰孢霉菌命名为Fusarium sp.Ym 37846，保藏在国家知识产权局指定的保藏单位，保藏编号为CCTCC NO：M203065。本发明所述的YM37846是从长春花植物体中分离筛选得到的，能够人工发酵产生与寄主植物相同或类似化合物的一株丝状真菌。本发明是通过长春花内生真菌的纯培养，以马铃薯培养基(PDA)为原料，采用现代微生物发酵技术，结合组合化学手段，寻找具有治疗人类肿瘤疾病药用成分另一类生物资源提供一种新途径。
Description
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，特别是涉及一种其发酵物具有药用功能的微生物。
背景技术
神经酰胺(Ceramide)类化合物，是一类具有药用、保健功能的化合物，其中部分化合物具有抑制人骨髓白血病细胞、人白血病淋巴细胞、人肝癌细胞、肺癌细胞等肿瘤细胞生长活性作用。此类化合物用微生物发酵方式获得尚未见报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种其发酵物具有药用功能的微生物—镰孢霉菌。
本发明所述的镰孢霉菌命名为Fusarium sp.Ym 37846，保藏在国家知识产权局指定的保藏单位，保藏编号为CCTCC NO：M203065。
本发明所述的镰孢霉菌系从夹竹桃科植物长春花(Catharanthus roseus(L.)G.Don)植物活体中分离得到的。现保藏在国家知识产权局专利局保藏单位保藏，保藏单位名称：中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2003年8月6日，保藏编号为M203065。
本发明所述的YM37846菌株的显微形态特征：
1、无性世代 菌丝白色有隔，分生孢子未观察到。
2、有性世代 未发现。
本发明所述的镰孢霉菌的固体培养特征：
1、PDA培养基28℃培养4天，菌落直径42mm，7天52mm，11天蔓延整个培养皿。菌丝白色，中部浅黄色微突，平长茸状，生长紧密，边缘整齐，背面淡黄色，后为褐色。
2、麦芽汁培养基28℃培养4天，菌落直径35mm，7天69mm，11天蔓延整个培养皿。菌丝浅红色，边缘白色，菌落平絮茸状，生长紧密，边缘整齐，背面浅褐色。
3、察贝克培养基28℃培养4天，菌落直径19mm，7天34mm，11天40mm。菌丝白色，中部紧密，扁平，凹陷，有的凸凹不平，短茸状，边缘弥散，不整齐，背面中部褐色，外缘黄色，边缘白色。
本发明所述的镰孢霉菌YM35852菌株液体发酵培养：
1、培养基PDA。摇瓶培养时间5-7天。培养温度30℃±2℃。
2、发酵培养特征：培养第1天，菌种有零星的白色菌丝点；培养第2天，长满白色菌丝；培养第3天，发酵液菌丝体密集，菌丝体呈淡褐色；培养第4天，长满浅褐色菌丝球，发酵液清亮，培养第5-7天，发酵液清亮褐色，菌丝体球状，浅褐色菌丝体。
3、YM37846菌株液体发酵5-7天后，对发酵液和菌体进行化学提取、分离，可得到四个抗肿瘤活性化合物，其中3个属神经酰胺类化合物，1个为生物碱类化合物。所得化合物目前结构尚不明确。
本发明所述的YM37846菌株液体发酵提取工艺为：菌种→试管斜面→种子培养→发酵培养→发酵物提取→分离化合物→有效成分。
上述步骤中，发酵原料为马铃薯培养基(PDA)。本工艺适合于半知菌类丛梗孢科丝状真菌类微生物。
上述的YM37846液态发酵工艺中，发酵条件参数如下：
(1)发酵方式：液态发酵。
(2)菌种斜面：试管斜面菌种培养采用马铃薯葡萄糖固体培养基(固体PDA)。
(3)种子培养：种子培养为马铃薯葡萄糖液体培养基(液体PDA)。马铃薯葡萄糖培养基(PDA)制备：取新鲜马铃薯200克，去皮切成小块，加水1升煮沸30分钟，过滤弃马铃薯，滤液加水补足至1升，加入葡萄糖20克，PH自然。
上述马铃薯葡萄糖培养基中加入琼脂15克，即为固体PDA培养基。
(4)发酵培养：发酵的培养基马铃薯葡萄糖液体培养基(液体PDA)，PH自然。
(5)培养时间：试管斜面菌种活化培养48-72小时，种子摇床培养时间72-96小时，发酵培养时间5-7天。
(6)培养温度：试管斜面菌种培养温度28℃±2℃，种子摇床培养温度30℃±2℃，发酵培养温度为30℃±2℃。
(7)发酵物提取：发酵完毕，过滤，收集菌体和发酵液。按常规化学提取方法，采用乙酸乙酯萃取发酵液，菌体用乙酸乙酯浸泡过夜，提取三次。
(8)分离化合物：采用硅胶(Silica G)柱层析方法分离纯化获得神经酰胺类及生物碱类化合物。
本发明所述的YM37846是从长春花植物体中分离筛选得到的，能够人工发酵产生与寄主植物相同或类似化合物的一株丝状真菌。长春花主要药用成份为长春碱，具有降血压、镇静安神、抗单核细胞性白血病、以及抗肿瘤(淋巴瘤或绒毛膜上皮癌)。本发明是通过长春花内生真菌的纯培养，以马铃薯培养基(PDA)为原料，采用现代微生物发酵技术，结合组合化学手段，寻找具有治疗人类肿瘤疾病药用成分另一类生物资源提供一种新途径。
本发明经“体外抗肿瘤试验”结果对人骨髓白血病细胞K562的抑制生长率为74.86％，人白血病淋巴细胞MT-4的抑制率67.78％；对人肝癌细胞CA的抑制率77.73％：对人肺癌细胞HAS-84的抑制率62.5％。同时还发现有保湿和抑制黑色素形成，防止皮肤粗糙的作用。
附图说明
图1为YM37846菌丝体形态图。
具体实施方式
本发明实施例：
取编号YM37846菌种，在无菌条件下(无菌室或超净工作台)，用接种针挑取少许菌种，转接于已灭菌的固体PDA培养基试管(18×180mm)中，置培养箱内28℃±2℃活化培养48-72小时。
取出活化48-72小时的菌种，在无菌条件下，以同样方式接入活化好的菌种到已灭菌的种子液体PDA培养基中，在30℃±2℃下摇床培养72-96小时，即为YM37846种子。
发酵采用500毫升玻璃三角瓶，装入配制好的液体PDA培养基100毫升，15磅灭菌30分钟后，取出待冷却至30℃。在无菌条件下，取YM37846种子，接种于装有100毫升液体PDA培养基的500毫升玻璃三角瓶中，种子接种量为5-10％(v/w)，置30℃±2℃通气培养5-7天。在发酵期间，注意发酵室温度变化，检查有无染菌现象。
发酵完毕，过滤，收集菌体和发酵液。按常规化学提取方法，采用乙酸乙酯萃取发酵液，菌体用乙酸乙酯浸泡过夜，提取三次。采用硅胶(Silica G)柱层析方法分离纯化获得抑制上述4种肿瘤细胞生长的神经酰胺类及长春碱类化合物。
本发明所述的YM37846菌株18SRNA碱基组成系列：
NGNNNTGCTANTTTNNGTNAAANTNANNNACNTNNTCTNCNCTACNNNGNNAANNNCAATNNTGGATT
TAATNNNGTNGCNGANNGNNAGAANNTNCCNGTNTCGCNANTGATTGNNNNAANTNNNCTNTTTNTCC
NGNACTGGCNGAATNAACCAGGGTATTTATTAGATTAAAAACCAATGCCCTTCGGNGNTGACTGGTGA
TTCATGATANCTCCTCTAATCGNATGGNCTTGNGCCGGCGATGGNTCATTNAAATTTNTTCCCTATCA
ACTTTCGATGTTTGGGTATTGGCCAAACATGGTTGCAACGGGTAACGGAGGGTTAGGGCTCGACCCCG
GAGAAGGAGCCTGAGAAACGGCTACTACATCCAAGGAAGGCAGCAGGCGCGCAAATTACCCAATCCCG
ACACGGGGAGGTAGTGACAATAAATACTGATACAGGGCTCTTTTGGGTCTTGTCATTGGAATGAGTAC
AATTTAAATCCCTTAACGAGGAACAATTGGAGGGCAAGTCTGGTGCCAGCAGCCGCGGTAATTCCAGC
TCCAATAGCGTATATTAAAGTTGTTGTGGTTAAAAAGCTCGTAGTTGAACCTTGGGCCTGGCTGGCCG
GTCCGCCTCACCGCGTGTACTCGTCCGGCCGGGCCTTTCCCTCTGTGGAACCCCATGCCCTTCACTGG
GTGTGGTGGGGAAACAGGACTTTTACTGTGAAAAAATTAGAGTGCTCCAGGCAGGCCTATGCTCGAAT
ACATTAGCATGGAATAATAGAATAGGACGTGTGGTTCTATTTTGTTGGTTTCTAGGACCGCCGTAATG
ATTAATAGGGACAGTCGGGGGCATCAGTATTCAATTGTCAGAGGTGAAATTCTTGGATTTATTGAAGA
CTAACTACTGCGAAAGCATTTGCCAAGGATGTTTTCATTAATCAGGAACGAAAGTTAGGGGATCGAAG
ACGATCAGATACCGTCGTAGTCTTAACCATAAACTATGCCGACTAGGGATCGGACGGTGTTATTTTTT
GACCCGTTCGGCACCTTACGAGAAATCAAAGTGCTTGGGCTCCAGGGGGAGTATGGTCGCAAGGCTGA
AACTTAAAGAAATTGACGGAAGGGCACCACCAGGGGTGGAGCCTGCGGCTTAATTTGACTCAACACGG
GGAAACTCACCAGGTCCAGACACAATGAGGATTGACAGATTGAGAGCTCTTTCTTGATTTTGTGGGTG
GTGGTGCATGGCCGTTCTTAGTTGGTGGAGTGATTTGTCTGCTTAATTGCGATAACGAACGAGACCTT
AACCTGCTAAATAGCCCGTATTGCTTTGGCAGTACGCTGGCTTCTTAGAGGGACTATCGGCTCAAGCC
GATGGAAGTTTGAGGCAATAACAGGTCTGTGATGCCCTTAGATGTTCTGGGCCGCACGCGCGCTACAC
TGACGGAGCCAGCGAGTACTTCCTTGTCCGAAAGGTCCGGGTAATCTTGTTAAACTCCGTCGTGCTGG
GGATAGAGCATTGCAATTATTGCTCTTCAACGAGGAATCCCTAGTAAGCGCAAGTCATCAGCTTGCGT
TGATTACGTCCCTGCCCTTTGTACACACCGCCCGTCGCTACTACCGATTGAATGGCTCAGTGAGGCGT
CCGGACTGGCCCAGAGAGGTGGGCANCTACCACTCAGGGCCGGAAAGCTCNCCTGGT
Claims (1)
1、一种镰孢霉菌，其特征在于命名为镰孢霉菌(Fusarium)Ym 37846Fusarium sp.Ym 37846，保藏在国家知识产权局指定的保藏单位，保藏编号为CCTCC NO：M203065。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200310101180 CN1244682C (zh) | 2003-10-21 | 2003-10-21 | 镰孢霉菌 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200310101180 CN1244682C (zh) | 2003-10-21 | 2003-10-21 | 镰孢霉菌 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1609186A CN1609186A (zh) | 2005-04-27 |
| CN1244682C true CN1244682C (zh) | 2006-03-08 |
Family
ID=34756141
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 200310101180 Expired - Fee Related CN1244682C (zh) | 2003-10-21 | 2003-10-21 | 镰孢霉菌 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1244682C (zh) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100406549C (zh) * | 2005-11-14 | 2008-07-30 | 云南省微生物研究所 | 仙人掌内生真菌 |
| CN101195804B (zh) * | 2006-12-05 | 2011-02-09 | 上海中医药大学 | 蛇足石杉内生真菌及其应用 |
| CN106190864A (zh) * | 2015-02-06 | 2016-12-07 | 东南大学 | 一种镰孢霉菌1281‑2 |
| CN104862236A (zh) * | 2015-04-14 | 2015-08-26 | 东南大学 | 一种镰孢霉菌及其制备金钯纳米合金的方法 |
-
2003
- 2003-10-21 CN CN 200310101180 patent/CN1244682C/zh not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN1609186A (zh) | 2005-04-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN1796539A (zh) | 冬虫夏草大规模发酵生产及菌粉加工工艺 | |
| CN1880444A (zh) | 灰树花菌株、培养方法及其应用 | |
| CN114717155B (zh) | 一种用于防治党参根腐病的多粘类芽孢杆菌及其应用 | |
| CN112931534A (zh) | 一种链霉菌在生物防治中的应用 | |
| CN109082396B (zh) | 一种dsf群体感应信号分子淬灭菌及其在植物病害防治中的应用 | |
| CN101265451A (zh) | 蛇足石杉(Huperzia Serrata (Thunb.)Trev)的一种内生真菌 | |
| Wen et al. | Enhanced production of cordycepin by solid state fermentation of Cordyceps militaris using additives | |
| CN1831116A (zh) | 一株成团泛菌及其发酵培养方法与应用 | |
| CN117981773B (zh) | 一种翠绿聚孢霉在小麦赤霉病防治中的应用 | |
| CN101037656A (zh) | 一种枸骨内生真菌-哈茨木霉菌株l | |
| CN1244682C (zh) | 镰孢霉菌 | |
| CN1614003A (zh) | 蝉拟青霉新菌株的人工培养及其镇痛化合物的提取与利用 | |
| CN110699304A (zh) | 一种生防链霉菌 | |
| CN1398979A (zh) | 灰树花的发酵工艺及其多糖肽的生产方法 | |
| CN1478886A (zh) | 一种中国被毛孢液体菌种发酵工艺方法 | |
| CN1570078A (zh) | 青枯病生防菌anti－8098a及其培养基、培养方法和生防应用 | |
| Dulay et al. | The successful cultivation of Philippine wild mushroom Pycnoporus sanguineus (BIL7137) using rice straw and sawdust-based substrate | |
| CN101041840A (zh) | 倍半萜类化合物Trichothec－9－en－4－o1,12,13－epoxy－,acetate,(4β)－(8CI,9CI)的制备方法 | |
| CN1279159C (zh) | 白耙齿菌cz－81菌株及其人工培养方法 | |
| CN1880445A (zh) | 木蹄层孔菌及液体深层发酵制备木蹄层孔菌菌体的方法 | |
| CN101177666A (zh) | 产紫杉醇的新菌种及其选育和制备紫杉醇的方法 | |
| CN1715399A (zh) | 生产复合氨基酸的地衣芽孢杆菌菌株及养殖用氨基酸液肥制备方法 | |
| CN1827633A (zh) | 从蝉拟青霉培养物中提取n6－（2－羟乙基）腺苷的方法 | |
| CN100497589C (zh) | 尖镰孢霉 | |
| CN1256424C (zh) | 元江黑孢菌 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C19 | Lapse of patent right due to non-payment of the annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |