CN1242803A - 草甘膦抗性转基因植物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及转基因甜菜植株,该植株由于cp4/epsps酶活性的表达而对每公顷约4至约18升Roundup
的处理有耐受性。植物可以其特异整合位点为特征。本发明进一步涉及可从所述植株得到的种子和产生所述植株的方法。

Description

草甘膦抗性转基因植物
本发明涉及能耐受草甘膦作为活性成分的除草剂处理的转基因甜菜植株。
甜菜田间的杂草是农场主的主要问题。它们与农作物竞争因此而降低产量。现在没有单一的除草剂能有效控制所有杂草而不损伤甜菜作物本身(Miller等，甜菜研究杂志，26：3-4，1989)。实际上，农场主使用除草剂的混合物，而它们也降低农作物生长。同时，已发展出对所述除草剂抗性的野草种类的数目持续增加(Schweizer等，甜菜研究杂志，28：1-23，1991)，由此加重了甜菜田间杂草控制问题。
Roundup是广谱的、环境上优选的抑制杂草和农作物种类的除草剂。本发明的内容中，1升除草剂Roundup溶液含有260g其活性成分，即被叶吸收的草甘膦(常用名为N-膦酰基甲基-甘氨酸)。到目前为止，在20年使用期间没有发展出草甘膦抗性杂草(Holt等，植物生理学年鉴，1993)；另外在甜菜中没有发现对草甘膦的耐受性。而且Roundup的预先使用在甜菜田间控制杂草方面比甜菜农业中常用的含有苯敌草、苯嗪草酮、甜菜呋的除草剂混合物更有效(Madsen等，杂草研究，35：105-111，1995)。
草甘膦通过不可逆地与5-烯醇丙酮酸莽草酸盐-3-磷酸合成酶(epsps)结合抑制芳香族氨基酸的生物合成。在叶绿体中，此酶催化莽草酸盐-3-磷酸和烯醇磷酸丙酮酸形成5-烯醇丙酮酸-3-磷酸和磷酸。在施用除草剂后约一周，可看到肉眼可见的效应，包括萎蔫、黄化后完全变褐，植物组织的萎凋和根的腐烂。
为赋予农作物种类草甘膦耐受性，研究集中于向植物导入能增加草甘膦耐受性的epsps基因。除了植物，细胞和真菌也天然地表达epsps酶活性。发现来自农杆菌属种类的cp4/epsps赋予对草甘膦的耐受性(Barry等，“氨基酸合成的抑制剂：赋予农作物植株对草甘膦耐受性的策略：，于：植物中氨基酸的生物合成和分子调控，Singh等(编辑)，美国植物生理学学会，第139-145页，1992)。将cp4/epsps基因导入大豆和油籽油菜在田间条件产生对叶面施用除草剂的耐受性(Delannay等，农作物科学，35：1461-1467，1995；Padgette等，农作物科学，35：1451-1461，1995)。
从农杆菌属种类LBAA分离的草甘膦氧化还原酶(gox)(Barry等，同上)将草甘膦降解成氨甲基膦酸(对植物无毒的化合物)。cp4/epsps和草甘膦氧化酶(gox)基因的结合已成功地用于得到对草甘膦有抗性的转基因小麦(Zhou等，植物细胞报告，15：159-163，1995)。
本发明的目的是提供对足以实现最佳除草剂活性的高剂量的草甘膦有耐受性的甜菜植株。这样的植株可进一步通过与优良甜菜株系回交来改良以优化农业特性如产量、病原体抗性等。
甜菜可以用根瘤农杆菌介导转化方法来转化(Fry等，植物分子生物学第三次国际会议，Tuscon，Arizona，USA；D′Halluin等，生物/技术，10：309-314，1992；Konwar，植物生化&生物技术杂志，3：37-41，1994)。农杆菌介导的转化常常导致多于一个拷贝的T-DNA整合入植物基因组。优选地将要整合的基因导入T-DNA，使它位于T-DNA右边则不是左边界附近，它几乎总是会转移至植物中。
根据本发明所述的植株对每公顷大约3×6升除草剂Roundup(每公顷约18升)的处理有耐受性。获得良好杂草控制的总标准剂量根据杂草压力在每公顷4-6升之间变动。在这些浓度时，除草剂处理不产生对植物活力和叶褪绿的任何可测到的影响。根据本发明所述的植株表现的耐受性由转基因表达的cp4/epsps酶活性赋予。本发明优选的实施方案已于1997年10月24日保存于国立工业和海洋微生物保藏有限公司(23St Macher Drive，Aberdeen AB2 1RY，ScotlandUK)，保藏号为97087006/2。
因此本发明涉及表达cp4/epsps酶活性的甜菜植株及其后代。具体地，本发明涉及对每公顷约4至约8升Roundup处理有耐受性的甜菜植株及其后代。
根据本发明所述的植株可以通过使用在T-DNA左和右边界序列间含有如SEQ ID No：5所述编码尤其是cp4/epsps的DNA片段的转化载体进行常规农杆菌介导的转化得到。
在本发明的范围内令人惊讶地发现，在转基因的基因组内缺失T-DNA左和右边界序列并导致转化载体DNA相当大部分的缺失而保留了编码cp4/epsps的DNA的转化结果(RRMax)提供了优良的草甘膦耐受性。特别是发现以SEQ ID No：1为特征的DNA片段整合入基因组高度重复的区域同时取代了该基因组重复序列的部分。与所用转化载体中与T-DNA右边界序列相连的转基因序列部分直接相邻的基因组DNA具有SEQ ID No：2中给出的序列。与整合的转基因DNA的另一末端直接相邻的基因组DNA具有SEQ ID No：3中给出的序列。新形成的基因组DNA排列的完整DNA序列在SEQ ID No：4中给出。
因此，本发明涉及甜菜植株及其后代，其中以SEQ ID No：1的核苷酸序列为特征的DNA形成植物基因组的部分，并且介所述的核苷酸序列取代了植物基因组内高度重复DNA序列。
此处优选的是其中与所述核苷酸序列直接连接的那些基因组部分分别以SEQ ID No：2和SEQ ID No：3的核苷酸序列为特征的甜菜植株及其后代。
进一步优选的是其中以SEQ ID No：4的核苷酸序列为特征的DNA形成植物基因组的部分的甜菜植株及其后代。
上述经操作已导入除草剂抗性的转基因种子和植株通过性繁殖或营养生长传代并因此可以在后代植株中保持和繁殖。通常所述的维持和繁殖使用已知的农业方法，这些方法发展来适应特别目的如耕种、插种或收获。正在生长的农作物易于受由昆虫或感染引起的侵袭和损伤，因此采取措施以控制植物病毒、昆虫、线虫和其它对提高产量不利的条件。这些措施包括机械措施如耕地或除去受侵染的植物和施用农业化学品如杀真菌剂、杀精剂、杀线虫剂、生长调节剂、成熟剂和杀昆虫剂。
根据本发明所述的转基因植物和种子的除草剂耐受性可进一步在植物育种中得到应用，以开发具有改良特性(如虫害、除草剂或逆境耐受性，改良的营养价值，提高的产量，引起更小的由于倒伏或断裂的损失的改良结构)的植物。各种育种步骤的特征在于成熟的人类干预如选择要杂交的株系、引导亲本株系的传粉或选择适当的后代植株。根据所需的特性采取不同的育种措施。相关技术在本领域内众所周知并且包括但不限于杂交、近交、回交育种、多线育种、品种掺合、种间杂交、非整倍体技术等。因此，根据本发明所述的转基因种子和植株可用于培育改良的植物株系，例如用于提高传统方法如除草剂或杀虫剂处理的效力或由于其修饰的遗传特性而允许用所述方法施用。选择性地，可以得到具有改良的逆境耐受性的新农作物，由于它们的优化遗传装备，产生比不能耐受相对不利发育条件的产品更高质量的收获产品。
在种子生产中，发芽质量和种子的均一性是必需的产品特征，而农场主收获和出售的种子的发芽质量和种子均一性并不重要。因为使农作物与其它农作物和杂草种子分开、控制种生疾病和生产具良好发芽率的种子是困难的，所以在培养、控制和销售纯种子领域有经验的种子生产者已开发了相当广泛和成熟的种子生产技术。因此农场主常用的方法是购买经鉴定符合特定质量标准的种子而不是使用从他自己的农作物收获的种子。用作种子的繁殖材料习惯用含有杀虫剂、杀昆虫剂、杀真菌剂、杀细菌剂、杀线虫剂、杀软体动物剂或其混合物的保护剂涂层处理。常规使用的保护剂涂层包含诸如克菌丹、萎锈灵、福美双(TMTD)、methalaxyl(Apron)和虫螨磷(Actellic)的化合物。如果需要，将这些化合物与其它载体、表面活性剂或配制领域常规使用的促进施用佐剂一起配制以提供针对由细菌、真菌或动物虫害引起的损伤的保护。保护剂涂层可以通过用液体制品浸渍繁殖材料或通过用混合的干或湿配方包裹来施用。也可能是其它施用方法如直接处理芽或果实。
本发明的另一方面提供新的农业方法如上面列举的方法，其特征在于使用根据本发明所述的转基因植物、转基因植物材料或转基因种子。
在另一实施方案中，本发明涉及来自转基因植物的转基因植物细胞、组织、器官、种子或植物部分。本发明也包括转基因植物后代及后代的转基因植物细胞、组织、器官、种子和植物部分。
本发明进一步涉及含有能表达cp4/epsps的具Roundup耐受性的甜菜种子的商品包及其使用说明。本发明内优选的是包含含有稳定整合入其基因的具有SEQ ID No：1所示核苷酸序列的DNA片段的转基因植物种子的商品包。
所用的转化方法学总结如下：
(a)用含有如SEQ ID No：5中所示的编码cp4/epsps的DNA片段的载体，使用根瘤农杆菌转化体外培养的甜菜子叶。
(b)在草甘膦存在时再生芽；
(c)将芽转移到温室的土壤中；
(d)用处理苗；
(e)对植株活力和叶褪绿进行目测评级；
(g)选择未受草甘膦处理影响的具有正常活力和叶子的完全正常的植株；并且
(h)使用传统育种技术繁殖所选植株。
具体地，在选择8-12周后，在约0.1至约10mM，优选地1mM草甘膦存在时再生芽。每个转基因芽进一步繁殖成10个拷贝，在将它转移至温室中生根前，可以用聚合酶链式反应(PCR)分析cp4/epsps转基因的存在。温室中光照条件是16小时光照和8小时黑暗，温度为22±2℃。在3-4叶期，用每公顷0.1-20升，优选地1升剂量的Roundup水溶液喷洒苗。草甘膦施用后2周基于0(死亡植株)到9(完受未受影响的植制)的等级对单个植物进行植株活力和植物褪绿的目测损伤评级。0-3的评级是易感植物的特征。3-7的评级表明耐受性的低至中间水平，8或9的评级表明耐受性的良好水平。具体地，评级有以下意义：
9：与未处理的对照相同的未受影响的植株
8：只有叶尖上很小的坏死，少于5％的叶面积受到影响并黄化
7：叶尖上很小的坏死开始卷曲，少于5％的叶面积受到影响并黄化
6，5，4：坏死和叶卷曲增强；叶变得比正常的更小
3，2：没有或非常有限的叶生长；所有的叶子卷曲并受坏死影响
1：无植物生长，最多5％的植株保持绿色
0：死亡植株
为收集田间实验数据，通过传统技术进一步繁殖或培育有正常活力并且不受草甘膦处理影响的(评分9)植株。
优选地，使用含有具有SEQ ID No：5给出序列的DNA片段的载体进行转化，其中DNA片段含有cp4/epsps和gox基因(都已被报道赋予某些植物种类对草甘膦的耐受性)和报告基因UidA基因(编码β-葡糖醛酸酶)。增强的35S启动子(odell等，自然313：810-812，1995)与UidA基因相连，玄参花叶病毒(FMV)启动子(Gouwda等，J.Cell.Biochem.Suppl.13D：301，1989)与cp4/epsps和gox基因相连。在cp4/epsps和gox基因的上游插入转运肽(Gasser等，生物化学杂志，263：4280-4289，1988)以将两个蛋白靶向叶绿体。
令人惊奇地发现，根据本发明产生的一个转化结果不受每公顷多达约3×6升(约18升)除草剂Roundup剂量的影响。分子分析表明：
·有整合于单一位点的单拷贝转基因DNA；
·整合的DNA编码cp4/epsps并对应于截短的载体DNA；
·整合的DNA取代了基因组DNA片段并具有SEQ ID No：1所示的序列；
·与整合的DNA直接相邻的基因组DNA的特征在于SEQ ID No：2和SEQ ID No：3的序列，导致SEQ ID No：4的新基因组序列排列；
·cp4/epsps和UidA基因是完整的，而gox因是截断的；
·其它载体序列不存在于转基因植物中。
目前可以知道这一信息，即来自根据本发明所述的特定转化结果的植株可以容易地通过PCR方法与其它甜菜植株区分开。适当的引物对组合使得可以特异地鉴定仅存在于直接或间接来自相同转化结果的植物的基因组DNA序列。这样的事件不以任何方式限制在由农杆菌介导的转化得到的那些结果，而也可以来自biolistic转化实验。
因此本发明涉及甜菜植株及其后代，其特征在于用其基因组DNA为模板的PCR导致以下片段的扩增：
当使用以SEQ ID No：B和SEQ ID No：a的序列为特征的寡核苷酸引物对时，739bp DNA片段；或者
当使用以SEQ ID No：D和SEQ ID No：e的序列为特征的寡核苷酸引物对时，834bp DNA片段；或者
当使用以SEQ ID No：A和SEQ ID No：b的序列为特征的寡核苷酸引物对时，1057bp DNA片段；或者
当使用以SEQ ID No：C和SEQ ID No：f的序列为特征的寡核苷酸引物对时，1224bp DNA片段。
实施例
以下实施例进一步描述了得到本发明和随后的结果时所用的材料和方法。它们通过举例说明提供，并且它们的复述不应认为是要求权利的本发明的限制。实施例1甜菜转化
用含有cp4/epsps和gox因(能赋予草甘膦耐受性)、nptII基因(典型对抗生素卡那素的抗性)及报告基因uidA(编码β-葡糖醛酸酶。GUS)的载体转化A1012基因型甜菜。nptII和uidA基因与加强的35S启动子(odell等，自然，313：810-812，1995)功能性连接，而cp4/epsps和gox基因在玄参花叶病毒(FMV)启动子(Gouwda等，J.Cell.Biochem.Suppl.13D：301，1989)的控制下。另外，cp4/epsps和gox基因在5′与转运肽(Gasser等，生物化学杂志，263：4280-4289，1988)连接以使两个蛋白靶向叶绿体。cp4/epsps和uidA使用E9 3′终止子序列，而gox和nptII使用相应的NOS 3′序列。
使用根瘤农杆菌转化体外培养的甜菜(Beta vulgaris.L)。使用1mM浓度的草甘膦作为选择剂，如Fry等(“使用根瘤农杆菌的基因型依赖的甜菜转化”，第三次植物分子生物学国际会议，Tuscon，Arizona，USA，1991)和Konwar(植物生物化学及生物技术杂志，3：37-41，1994)所述使植物再生。为杀灭根癌农杆菌，将子叶在含500mg/l头孢的MS培养基中培养三次(45-50rpm，60分钟)。在1mM草甘膦和500mg/l头孢噻肟上筛选8-12周(包括每三周转至新鲜培养基上)后分析再生芽。将每一转基因芽进一步微量繁殖(micropropagate)成十个拷贝，分析转基因的存在并转移至温室中生根。
聚合酶链式反应(PCR)用于确定cp4/epsps基因的存在。从再生的体外芽收集20mg植物材料至微量离心管。基本上按照Tai等，植物分子生物学报告，8：297-303，1990抽提总DNA。次要的改进是加入500μl含有50mM Na-EDTA，1.25％SDS(重量/体积)，0.38％Na-Bisulfite(重量/体积)和200μg/ml蛋白酶K的100mM Tris-HCl(pH8.0)并于65℃温育2小时。挑出未溶解的叶材料并于-20℃冷冻和沉淀总DNA 2小时。用Perkin-Elmer Gene-Amp PCR试剂盒(Perkin-Elmer公司)按照所含的说明进行PCR，使用含有10mMTris-HCl(pH8.3)，500mM KCL，30mM MgCl2，1.0％NonidetP-40(重量/体积)，24％蔗糖(重量/体积)中的0.4μM甲酚红和Taq Start Antibody(Clontech)的修饰的10×反应缓冲液。为扩增cp4/epsps序列，使用如下引物(Shah等，科学，233：478-481，1986)：5′-CAC CGG TCT TTT GGA AGG TGA AG-3′(SEQ ID NO：6)和5′-AAC GAG ACC CAT AAC GAG GAA GC-3′(SEQ ID NO：7).为扩增基因间调控序列(surA，surB)，使用如下引物：5′-AAA CAG TCC CGT GCA TCC CCA AC-3′(SEQ ID NO：8)和5′-GAC GCT CTC CTT GAT TCT GTC CC-3′(SEQ ID NO：9).
不同双元载体间未见到转化效率的不同。
将微量繁殖的芽转移到温室的土壤中。温室中的光照条件是200μmol m-2sec-1(Osram Power Star HQI-Z，400w)，16小时光照，8小时黑暗，温度为22±2℃。用Roundup处理来自260个独立转化子的三至四叶期小苗。使用刻度喷雾器以每公顷1升的剂量(360g.a.i.l-1)施用除草剂的水溶液。草甘膦施用后2周，基于0(完全叶坏死)至9(无可见影响)的等级，对每个植株进行植物毒性影响的目测损伤评级。对于75个不同的转化子，检测到的植物毒性效应在评分0-6之间变动。其它185个(75％)转化子评分为7或更高，这意味着在用除草剂处理之后，它们表现较少或不可见的影响。将它们与非转基因甜菜杂交以产生F1子代用于随后的田间实验评估。
进行田间实验以评估田间条件下的不同转化结果。每一块地包含三排，每排9米长，行间距0.5米。在每一块地插种一个不同的转化子。在子叶期每公顷1升(360g.a.i.l-1)的初始Roundup施用去除非转基因植物后，人工挑选各行至最终标准每20厘米1个植株。每一小块地分成独立处理的三部分。一部分用传统的除草剂苯嗪草酮(0.1kg a.i.ha-1)、苯敌草(0.2kg a.i.ha-1)和甜菜呋(0.1kg a.i.ha-1)处理。另一部分用每公顷2升Roundup处理2次(1400g a.i.ha-1)，第三部分用4升Roundup处理2次(2880ga.i.l-1)，在二叶期和四叶期处理植物。最后施用后二周，评估植物由于施用除草剂的植物毒性效应。发现症状从完全易感变化至完全耐受。观察到温室中评分和田间实验中评分的不同。这可能是由于温室和田间实验的环境不同，包括在玻璃下缺少紫外光。与用传统除草剂混合物处理相比，用不同剂量的Roundup处理的地区的植物间没有形态学或生理学上的变化。两个转化子在用每公顷2升2次和4升2次处理后，表现对Roundup的高度耐受性。
用Roundup喷酒后，通过植株活力(Tr.vig)和叶褪绿(Tr.ch1)评级测定耐受性。不同的评级有如下意义：
9：与未处理的对照相同的未受影响的植株
8：只有叶尖上很小的坏死，少于5％的叶面积受到影响并黄化
7：叶尖上很小的坏死开始卷曲，少于5％的叶面积受到影响并黄化
6，5，4：坏死和叶卷曲增强；叶变得比正常的更小
3，2：没有或非常有限的叶生长；所有的叶子卷曲并受坏死影响
1：无植物生长，最多5％的植株保持绿色
0：死亡植株
用1+4+4升Roundup/公顷(共9升/公顷)喷洒22个不同的转化结果(1-22项)和一个非转基因对照(23项)。目测损伤评级的结果在下表中给出。
  项   活力评级   褪绿评级
    1     9     9
    2     6     7
    3     2     3
    4     5     7
    5     9     8
    6     3     3
    7     7     7
    8     7     8
    9     4     6
    10     5     6
    11     5     5
    12     4     5
    13     9     9
    14     3     5
    15     4     4
    16     2     3
    17     1     1
    18     2     2
    19     6     8
    20     7     5
    21     4     5
    22     5     7
    23     0     0
(RRMax)(非转基因植物)实施例2  整合的转基因DNA的拷贝数
通过对在所用转化载体的左和右边界序列之外延伸的限制性片段的Southern印迹分析测定具有最高草甘膦耐受性的转化子(RRMax)的基因组内整合的转基因DNA的拷贝数。
按照Saghai-Maroof等，美国国家科学院院报，81：8014-8018，1984，从250mg冷冻干燥的甜菜材料分离来自RRMax和具有相同遗传学的非转基因植物的基因组DNA。所用转化载体的DNA作用为阳性对照。用120单位的限制性酶在400μl总体积中于37℃消化15μgDNA 4小时。使消化的DNA沉淀并重新溶解于50μl总体积中。消化的DNA、阳性对照质粒和标准的分子大小标记(用EcoRI和HindIII消化的λDNA)在0.8％琼脂糖凝胶上分离。用溴化乙锭观察DNA，并包括尺子进行摄影。然后将DNA转移到Hybond N+膜上并如Ausubel等(编辑)，于“现代分子生物学常用方法”，Green PublishingAssociates，Inc.和John Wiley&Sons，Inc.，New York，1987所述与探针杂交。
通过聚合酶链式反应(PCR，其中所用的转化载体作用为反应的模板DNA)制备与cp4/epsps基因序列(SEQ ID No：5)的975-1766碱基对和gox基因序列(SEQ ID No：5)的7108-7535碱基对互补的探针。cp4/epsps探针用于测定邻近右边界区域的插入数。gox探针用于测定邻近左边界区域的插入数。使用BIO 101(La Jolla，CA)的Geneclean II试剂盒纯化PCR产物。使用AmershamInternational(Little Chalfont，UK)的MegaprimeTM DNA标记系统进行探针的32P标记。
拷贝数测定可以通过对邻近右边界区域的基因组DNA的分析进行。用限制性酶NcoI消化基因组DNA，NcoI切割35s启动子和uidA基因间的和甜菜基因组内的质粒来源的序列。用cp4/epsps基因的内部PCR片段探测膜。用NcoI消化并用cp4/epsps探针杂交后，在RRMax中检测到4.7kb的单一条带。这证明了转移DNA在单一位点的单拷贝。
拷贝数测定可以通过对邻近左边界区域的基因组DNA的分析进行。用限制性酶HindIII消化基因组DNA，HindIII切割gox的FMV启动子和uidA基因的E93′终止子间的和甜菜基因组内的质粒来源的序列。在用HindIII消化并用gox探针杂交后，检测到转化子在RRMax中的2.0kb的单一条带。因为预期的最小片段大小是≥4.4kb，所以结果表面在转移入植物基因组DNA的过程中质粒DNA的截断。而且结果证明了转移DNA单拷贝整合在单一位点。实施例3  RRMax整合位点的序列分析
按照Saghai-Maroof等，同上，从250mg冷冻干燥的甜菜叶材料分离RRMax基因组DNA。制备在XhoI克隆位点中带有9-23kb大小插入的λFIXII噬菌体文库。并用cp4/epsps和gox探针探测以筛选覆盖整合结果的推测克隆。检测到与cp4/epsps或gox探针杂交的总共25个噬菌体。发现分别与cp4/epsps探针和gox探针杂交的2个克隆。纯化其中之一(Fritsch等，1987)并通过Southern印迹分析和PCR进一步评估。它含有15-16kb的基因组DNA插入，包括转基因DNA和侧翼的甜菜序列。所述侧翼序列通过PCR、使用与FMV启动子或gox基因序列匹配的引物结合与λFIXII克隆元件中的序列匹配的引物(详细的序列在下面1中给出)来扩增。整合的DNA/甜菜接合区域通过Sanger双脱氧介导的链终止法使用Applied Biosystem，373A型，2.1.1版测序。所用的测序引物在表2中给出。
表1用于扩增边界区域的引物
    引物     序列
    #3  5′-CAAGAAGGTTGGTATCGCTG-3′(SEQ ID NO：10)
    #7  5′-TCTTTTGTGGTCGTCACTGCGTT-3′(SEQ ID NO：11)
    #8  5′-GCGAGCTCTAATACGACTCACTAT-3′(SEQ ID NO：12)
    #9  5′-CGCGAGCTCAATTAACCCTCACT-3′(SEQ ID NO：13)
表2测序引物
   引物                     序列          说明
    S1  5′-TCTGTACCCTGACCTTGTTG-3′(SEQ ID NO：14)     测定右边界区域侧翼序列
    S3  5′-CGTGGATACCACATCGTGAT-3′(SEQ ID NO：15)     测定左边界区域侧翼序列
    S4  5′-ACCTTGGCTTGAAGTACTC-3′(SEQ ID NO：16)     测定左边界区域侧翼序列
序列分析表明整合在RRMax基因组中的转基因DNA具有SEQ IDNo：1中给出的核苷酸序列。整合起始点位于右边界序列和FMV启动子之间并终止于gox起始密码子下游的897碱基对。截短的gox基因的翻译终止密码子可在接合点下游的130和235碱基对找到。在gox起始密码子下游210碱基对识别了一个HindIII位点，而在下游650碱基对识别了一个转录终止信号(AATAAA)。SEQ ID No：2表示了与转基因DNA的右边界区域直接相连的基因组DNA序列，而SEQ ID No：3表示与转基因DNA的左边界区域直接相连的基因组DNA序列。实施例4  RRMax整合的转基因DNA的特征鉴定为进一步鉴定右边界区域，用限制性酶BamHI、HindIII、BcII或EcoRI消化基因组DNA和转化载体DNA。在Southern印迹分析中，用实施例2中所述的cp4/epsps PCR片段探测切开的DNA。与所用的限制性酶无关，用不同的限制性酶消化在Southern印迹分析中产生单一片段。检测到的片段大小在表3中表示。数据表明单一拷贝的DNA已转移至植物中，并且DNA向甜菜植株的转移导致cp4/epsps基因的完整转移。结果与实施例2中的拷贝数测定和实施例3的核苷酸序列一致。
表3 Southern印迹片段大小
    酶     RRMax   转化载体
  BamHI   ＞10kb     9.7kb
  HindIII   2.4kb     2.4kb
  BcII   3.2kb     2.9kb
  EcoRI   1.8kb     1.8kb
为进一步鉴定整合的转基因片段，用限制性酶NcoI、BamHI或HindIII消化来自RRMax的基因组DNA。作为对照，用相同的限制性酶消化转化载体DNA。用横跨SEQ ID No：5中uidA基因的3796-4837碱基对的PCR扩增的DNA片段探测印迹。检测到的片段大小在表4中表示。与所用的限制性酶无关，用不同的限制性酶消化在放射自显影胶片上产生单一信号，这表明DNA插入具有与所用转化载体的内部DNA相同的特征。
表4 Southern印迹片段大小
    酶   转化载体   RRMax
    NcoI   3.4kb   3.4kb
    BamHI   3.2kb   3.2kb
    HindIII   3.2kb   3.2kb
为进一步鉴定左边界区域，用限制性酶NcoI、BamHI、HindIII或EcoRI消化转化载体DNA。在Southern分析中用实施2中所述的goxPCR片段探测切开的DNA。检测到的片段大小在表5中表示。与所用的限制性酶无关，用不同的限制性酶消化在放射自显影胶片上产生单一片段。用限制性酶NcoI、BamHI、HindIII或EcoRI消化预期识别已知大小的内部片段。但是，这些限制性酶没有产生这样的预期大小的内部片段。这表明NcoI、BamHI、HindIII或EcoRI的限制性位点在转基因植物中缺乏。这些结果与通过测序发现的gox基因仅部分整合入植物的结果一致。用限制性酶HindIII消化产生的2kb片段，进一步确定了测序数据，即HindIII位点位于基因组中gox基因的下游。结果也表明转基因DNA的单拷贝已转移到植物中。它们与实施例2中的拷贝数测定和实施例3中的核苷酸序列分析的最初结果很好地相关。单一拷贝已整合入植物基因组，而gox基因部分缺失。
表5Southern印迹片段大小
    酶   转化载体   T9100152
    NcoI   2.5kb   3.0kb
    BamHI   2.9kb   ＞10kb
    HindIII   9.5kb   2.0kb
    EcoRI   1.6kb   3.6kb
实施例5其它载体DNA序列的缺失
为确定转化结果RRMax中oriV，ori-322，aad和nptII序列的缺失，Southern印迹分析可以使用覆盖oriV，ori-322，add和nptII的限制性酶/探针组合进行。
用限制性酶NspI消化转化载体DNA，NspI在17处位点切割质粒。为了分析，纯化覆盖oriV的NspI片段和覆盖ori-322和aad的片段并用于Southern印迹分析。具有SEQ ID No：26中给出的核苷酸序列的PCR扩增的片段用于探针nptII列。用BIO 101(La Jolla，CA)的Geneclean II试剂盒纯化。用Amersham International(Littlechalfont，UK)的MegaprimeTM DNA标记系统进行P32的标记。
用限制性酶BamHI消化RRMax的基因组DNA，BamHI在分别位于SEQID No：5的碱基对2321、5544和8413的三处位点切割转化载体DNA。相应Southern转移膜与覆盖oriV探针的杂交没有检测到信号，必然得出结论：oriV不存在于RRMax中。
相应Southern转移膜与覆盖ori-322和aad的探针的杂交没有检测到信号。必然得出结论：ori-322和aad序列不存在于RRMax中。
相应Southern转移膜与nptII探针的杂交也未检测到信号，这证明nptII基因不存在于RRMax株系中。实施例6  RRMax株系的稳定性
如实施例2中所述的用限制性酶BcII消化基因组DNA并使用cp4/epsps基因作为探针进行Southern印迹分析。来自2和3代的四株植物和来自4代的5株植物用于此分析。另外，3株非转基因植物用作负对照。最初转化结果的分析得到3.2kb的单一片段。如果导入的DNA在代与代之间稳定遗传，那么预期在所有植株中有相同的3.2kb片段。
如实施例2中所述的用HindIII消化基因组DNA并用gox基因的内部片段作为探针进行Southern印迹分析。最初转化结果的分析得到2.0kb的单一片段。子代的Southern印迹分析也得到2.0kb的单一片段，表明特征的稳定遗传。实施例7  RRMax的PCR测定。
如实施例2中所述制备RRMax株系的基因组DNA。在PCR反应中，约0.5μg DNA用作模板DNA，且使用以表6中给出的序列为特征的特定引物组合，所述的特定组合和扩增片段的大小在表7中给出。在每个30-35扩增循环中，根据引物对组合，使用55℃和65℃之间的退火温度。
表6引物序列
  引物                           序列        说明
    A  5′-TCAACCTACAGCTGATTTGGACC-3′(SEQ ID NO：17) 邻近右边界接合点
    B  5′-GGACCGGAACGACAATCTGATC-3′(SEQ ID NO：18) 邻近右边界接合点
    C  5′-CTAGGGAAGTCCAAATCAGCCG-3′(SEQ ID NO：19) 邻近左边界接合点
    D  5′-TTTGGACCGGAACTTTCCAGAAG-3′(SEQ ID NO：20) 邻近左边界接合点
    a  5′-CTAACTTGCGCCATCGGAGAAAC-3′(SEQ ID NO：21) cp4/epsps基因内
    b  5′-GACTTGTCACCTGGAATACGGAC-3′(SEQ ID NO：22) cp4/epsps基因内
    c  5′-ATTCTTGAGCTCATCAAGCAGCC-3′(SEQ ID NO：23) cp4/epsps基因内
    e  5′-AAGGTTGGTATCGCTGGAGCTG-3′(SEQ ID NO：24) gox序列内
    f  5′-TCTCCACAATGGCTTCCTCTATG-3′(SEQ ID NO：25) gox序列内
表7特定引物组合
    组合     扩增的片段大小
    A+a     757bp
    A+b     1057bp
    A+c     2352bp
    B+a     739bp(SEQ ID NO：27)
    B+b     1039bp
    B+c     2334bp
    C+e     888bp
    C+f     1224bp
    D+e     834bp
    D+f     1178bp
                               序列表(1)基本信息
(i)申请人：NOVARTIS AG
  (A)街道：Schwarzwaldallee 215
  (B)城市：Basel
  (C)国家：瑞士
  (D)邮政编号：4058
  (E)电话：+41 61 324 11 11
  (F)传真：+41 61 322 75 32
(ii)发明名称：转基因植物
(iii)序列数：27
(iv)计算机可读形式
  (A)介质类型：软盘
  (B)计算机：IBM PC兼容机
  (C)操作系统：PC-DOS/MS-DOS
  (D)软件：PatentIn Release#1.0，版本#1.25(EPO)(2)关于SEQ ID NO：1的信息：
(i)序列特征
  (A)长度：8012个碱基对
  (B)类型：核酸
  (C)链型：双链
  (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA(基因组)
(iii)假设：无
(iii)反义：无
(xi)序列描述：SEQ ID NO：1：AACGACAATC TGATCCCCAT CAAGCTTGAG CTCAGGATTT AGCAGCATTC CAGATTGGGT       60TCAATCAACA AGGTACGAGC CATATCACTT TATTCAAATT GGTATCGCCA AAACCAAGAA      120GGAACTCCCA TCCTCAAAGG TTTGTAAGGA AGAATTCTCA GTCCAAAGCC TCAACAAGGT       180CAGGGTACAG AGTCTCCAAA CCATTAGCCA AAAGCTACAG GAGATCAATG AAGAATCTTC       240AATCAAAGTA AACTACTGTT CCAGCACATG CATCATGGTC AGTAAGTTTC AGAAAAAGAC       300ATCCACCGAA GACTTAAAGA TAGTGGGCAT CTTTGAAAGT AATCTTGTCA ACATCGAGCA       360GCTGGCTTGT GGGGACCAGA CAAAAAAGGA ATGGTGCAGA ATTGTTAGGC GCACCTACCA       420AAAGCATCTT TGCCTTTATT GCAAAGATAA AGCAGATTCC TCTAGTACAA GTGGGGAACA       480AAATAACGTG GAAAAGAGCT GTCCTGACAG CCCACTCACT AATGCGTATG ACGAACGCAG       540TGACGACCAC AAAAGAATTC CCTCTATATA AGAAGGCATT CATTCCCATT TGAAGGATCA       600TCAGATACTG AACCAATCCT TCTAGAAGAT CTAAGCTTAT CGATAAGCTT GATGTAATTG       660GAGGAAGATC AAAATTTTCA ATCCCCATTC TTCGATTGCT TCAATTGAAG TTTCTCCGAT       720GGCGCAAGTT AGCAGAATCT GCAATGGTGT GCAGAACCCA TCTCTTATCT CCAATCTCTC       780GAAATCCAGT CAACGCAAAT CTCCCTTATC GGTTTCTCTG AAGACGCAGC AGCATCCACG       840AGCTTATCCG ATTTCGTCGT CGTGGGGATT GAAGAAGAGT GGGATGACGT TAATTGGCTC       900TGAGCTTCGT CCTCTTAAGG TCATGTCTTC TGTTTCCACG GCGTGCATGC TTCACGGTGC       960AAGCAGCCGT CCAGCAACTG CTCGTAAGTC CTCTGGTCTT TCTGGAACCG TCCGTATTCC      1020AGGTGACAAG TCTATCTCCC ACAGGTCCTT CATGTTTGGA GGTCTCGCTA GCGGTGAAAC      1080TCGTATCACC GGTCTTTTGG AAGGTGAAGA TGTTATCAAC ACTGGTAAGG CTATGCAAGC      1140TATGGGTGCC AGAATCCGTA AGGAAGGTGA TACTTGGATC ATTGATGGTG TTGGTAACGG      1200TGGACTCCTT GCTCCTGAGG CTCCTCTCGA TTTCGGTAAC GCTGCAACTG GTTGCCGTTT      1260GACTATGGGT CTTGTTGGTG TTTACGATTT CGATAGCACT TTCATTGGTG ACGCTTCTCT      1320CACTAAGCGT CCAATGGGTC GTGTGTTGAA CCCACTTCGC GAAATGGGTG TGCAGGTGAA      1380GTCTGAAGAC GGTGATCGTC TTCCAGTTAC CTTGCGTGGA CCAAAGACTC CAACGCCAAT      1440CACCTACAGG GTACCTATGG CTTCCGCTCA AGTGAAGTCC GCTGTTCTGC TTGCTGGTCT      1500CAACACCCCA GGTATCACCA CTGTTATCGA GCCAATCATG ACTCGTGACC ACACTGAAAA      1560GATGCTTCAA GGTTTTGGTG CTAACCTTAC CGTTGAGACT GATGCTGACG GTGTGCGTAC      1620CATCCGTCTT GAAGGTCGTG GTAAGCTCAC CGGTCAAGTG ATTGATGTTC CAGGTGATCC      1680ATCCTCTACT GCTTTCCCAT TGGTTGCTGC CTTGCTTGTT CCAGGTTCCG ACGTCACCAT      1740CCTTAACGTT TTGATGAACC CAACCCGTAC TGGTCTCATC TTGACTCTGC AGGAAATGGG      1800TGCCGACATC GAAGTGATCA ACCCACGTCT TGCTGGTGGA GAAGACGTGG CTGACTTGCG      1860TGTTCGTTCT TCTACTTTGA AGGGTGTTAC TGTTCCAGAA GACCGTGCTC CTTCTATGAT      1920CGACGAGTAT CCAATTCTCG CTGTTGCAGC TGCATTCGCT GAAGGTGCTA CCGTTATGAA      1980CGGTTTGGAA GAACTCCGTG TTAAGGAAAG CGACCGTCTT TCTGCTGTCG CAAACGGTCT      2040CAAGCTCAAC GGTGTTGATT GCGATGAAGG TGAGACTTCT CTCGTCGTGC GTGGTCGTCC      2100TGACGGTAAG GGTCTCGGTA ACGCTTCTGG AGCAGCTGTC GCTACCCACC TCGATCACCG      2160TATCGCTATG AGCTTCCTCG TTATGGGTCT CGTTTCTGAA AACCCTGTTA CTGTTGATGA      2220TGCTACTATG ATCGCTACTA GCTTCCCAGA GTTCATGGAT TTGATGGCTG GTCTTGGAGC      2280TAAGATCGAA CTCTCCGACA CTAAGGCTGC TTGATGAGCT CAAGAATTCG AGCTCGGTAC      2340CGGATCCTCT AGCTAGAGCT TTCGTTCGTA TCATCGGTTT CGACAACGTT CGTCAAGTTC      2400AATGCATCAG TTTCATTGCG CACACACCAG AATCCTACTG AGTTCGAGTA TTATGGCATT      2460GGGAAAACTG TTTTTCTTGT ACCATTTGTT GTGCTTGTAA TTTACTGTGT TTTTTATTCG      2520GTTTTCGCTA TCGAACTGTG AAATGGAAAT GGATGGAGAA GAGTTAATGA ATGATATGGT      2580CCTTTTGTTC ATTCTCAAAT TAATATTATT TGTTTTTTCT CTTATTTGTT GTGTGTTGAA      2640TTTGAAATTA TAAGAGATAT GCAAACATTT TGTTTTGAGT AAAAATGTGT CAAATCGTGG      2700CCTCTAATGA CCGAAGTTAA TATGAGGAGT AAAACACTTG TAGTTGTACC ATTATGCTTA      2760TTCACTAGGC AACAAATATA TTTTCAGACC TAGAAAAGCT GCAAATGTTA CTGAATACAA      2820GTATGTCCTC TTGTGTTTTA GACATTTATG AACTTTCCTT TATGTAATTT TCCAGAATCC      2880TTGTCAGATT CTAATCATTG CTTTATAATT ATAGTTATAC TCATGGATTT GTAGTTGAGT      2940ATGAAAATAT TTTTTAATGC ATTTTATGAC TTGCCAATTG ATTGACAACA TGCATCAATC      3000GACCTGCAGC CACTCGAAGC GGCCGCGTTC AAGCTTCTGC AGGTCCGATG TGAGACTTTT      3060CAACAAAGGG TAATATCCGG AAACCTCCTC GGATTCCATT GCCCAGCTAT CTGTCACTTT      3120ATTGTGAAGA TAGTGGAAAA GGAAGGTGGC TCCTACAAAT GCCATCATTG CGATAAAGGA      3180AAGGCCATCG TTGAAGATGC CTCTGCCGAC AGTGGTCCCA AAGATGGACC CCCACCCACG      3240AGGAGCATCG TGGAAAAAGA AGACGTTCCA ACCACGTCTT CAAAGCAAGT GGATTGATGT      3300GATGGTCCGA TGTGAGACTT TTCAACAAAG GGTAATATCC GGAAACCTCC TCGGATTCCA      3360TTGCCCAGCT ATCTGTCACT TTATTGTGAA GATAGTGGAA AAGGAAGGTG GCTCCTACAA      3420ATGCCATCAT TGCGATAAAG GAAAGGCCAT CGTTGAAGAT GCCTCTGCCG ACAGTGGTCC      3480CAAAGATGGA CCCCCACCCA CGAGGAGCAT CGTGGAAAAA GAAGACGTTC CAACCACGTC      3540TTCAAAGCAA GTGGATTGAT GTGATATCTC CACTGACGTA AGGGATGACG CACAATCCCA      3600CTATCCTTCG CAAGACCCTT CCTCTATATA AGGAAGTTCA TTTCATTTGG AGAGGACACG      3660CTGACAAGCT GACTCTAGCA GATCTCCATG GTCCGTCCTG TAGAAACCCC AACCCGTGAA      3720ATCAAAAAAC TCGACGGCCT GTGGGCATTC AGTCTGGATC GCGAAAACTG TGGAATTGAT      3780CAGCGTTGGT GGGAAAGCGC GTTACAAGAA AGCCGGGCAA TTGCTGTGCC AGGCAGTTTT      3840AACGATCAGT TCGCCGATGC AGATATTCGT AATTATGCGG GCAACGTCTG GTATCAGCGC      3900GAAGTCTTTA TACCGAAAGG TTGGGCAGGC CAGCGTATCG TGCTGCGTTT CGATGCGGTC      3960ACTCATTACG GCAAAGTGTG GGTCAATAAT CAGGAAGTGA TGGAGCATCA GGGCGGCTAT      4020ACGCCATTTG AAGCCGATGT CACGCCGTAT GTTATTGCCG GGAAAAGTGT ACGTATCACC      4080GTTTGTGTGA ACAACGAACT GAACTGGCAG ACTATCCCGC CGGGAATGGT GATTACCGAC      4140GAAAACGGCA AGAAAAAGCA GTCTTACTTC CATGATTTCT TTAACTATGC CGGAATCCAT      4200CGCAGCGTAA TGCTCTACAC CACGCCGAAC ACCTGGGTGG ACGATATCAC CGTGGTGACG      4260CATGTCGCGC AAGACTGTAA CCACGCGTCT GTTGACTGGC AGGTGGTGGC CAATGGTGAT      4320GTCAGCGTTG AACTGCGTGA TGCGGATCAA CAGGTGGTTG CAACTGGACA AGGCACTAGC      4380GGGACTTTGC AAGTGGTGAA TCCGCACCTC TGGCAACCGG GTGAAGGTTA TCTCTATGAA      4440CTGTGCGTCA CAGCCAAAAG CCAGACAGAG TGTGATATCT ACCCGCTTCG CGTCGGCATC      4500CGGTCAGTGG CAGTGAAGGG CGAACAGTTC CTGATTAACC ACAAACCGTT CTACTTTACT      4560GGCTTTGGTC GTCATGAAGA TGCGGACTTA CGTGGCAAAG GATTCGATAA CGTGCTGATG      4620GTGCACGACC ACGCATTAAT GGACTGGATT GGGGCCAACT CCTACCGTAC CTCGCATTAC      4680CCTTACGCTG AAGAGATGCT CGACTGGGCA GATGAACATG GCATCGTGGT GATTGATGAA      4740ACTGCTGCTG TCGGCTTTAA CCTCTCTTTA GGCATTGGTT TCGAAGCGGG CAACAAGCCG      4800AAAGAACTGT ACAGCGAAGA GGCAGTCAAC GGGGAAACTC AGCAAGCGCA CTTACAGGCG      4860ATTAAAGAGC TGATAGCGCG TGACAAAAAC CACCCAAGCG TGGTGATGTG GAGTATTGCC      4920AACGAACCGG ATACCCGTCC TGCACGGGAA TATTTCGGCA TTTCGCCACT GGCGGAAGCA      4980ACGCGTAAAC TCGACCCGAC GCGTCCGATC ACCTGCGTCA ATGTAATGTT CTGCGACGCT      5040CACACCGATA CCATCAGCGA TCTCTTTGAT GTGCTGTGCC TGAACCGTTA TTACGGATGG      5100TATGTCCAAA GCGGCGATTT GGAAACGGCA GAGAAGGTAC TGGAAAAAGA ACTTCTGGCC      5160TGGCAGGAGA AACTGCATCA GCCGATTATC ATCACCGAAT ACGGCGTGGA TACGTTAGCC      5220GGGCTGCACT CAATGTACAC CGACATGTGG AGTGAAGAGT ATCAGTGTGC ATGGCTGGAT      5280ATGTATCACC GCGTCTTTGA TCGCGTCAGC GCCGTCGTCG GTGAACAGGT ATGGAATTTC      5340GCCGATTTTG CGACCTCGCA AGGCATATTG CGCGTTGGCG GTAACAAGAA AGGGATCTTC      5400ACTCGCGACC GCAAACCGAA GTCGGCGGCT TTTCTGCTGC AAAAACGCTG GACTGGCATG      5460AACTTCGGTG AAAAACCGCA GCAGGGAGGC AAACAATGAA TCAACAACTC TCCTGGCGCA      5520CCATCGTCGG CTACAGCCTC GGTGGGGAAT TCGAGCTCGC CCGGGGATCC TCTAGCTAGA      5580GCTTTCGTTC GTATCATCGG TTTCGACAAC GTTCGTCAAG TTCAATGCAT CAGTTTCATT      5640GCGCACACAC CAGAATCCTA CTGAGTTCGA GTATTATGGC ATTGGGAAAA CTGTTTTTCT      5700TGTACCATTT GTTGTGCTTG TAATTTACTG TGTTTTTTAT TCGGTTTTCG CTATCGAACT      5760GTGAAATGGA AATGGATGGA GAAGAGTTAA TGAATGATAT GGTCCTTTTG TTCATTCTCA      5820AATTAATATT ATTTGTTTTT TCTCTTATTT GTTGTGTGTT GAATTTGAAA TTATAAGAGA      5880TATGCAAACA TTTTGTTTTG AGTAAAAATG TGTCAAATCG TGGCCTCTAA TGACCGAAGT      5940TAATATGAGG AGTAAAACAC TTGTAGTTGT ACCATTATGC TTATTCACTA GGCAACAAAT      6000ATATTTTCAG ACCTAGAAAA GCTGCAAATG TTACTGAATA CAAGTATGTC CTCTTGTGTT      6060TTAGACATTT ATGAACTTTC CTTTATGTAA TTTTCCAGAA TCCTTGTCAG ATTCTAATCA      6120TTGCTTTATA ATTATAGTTA TACTCATGGA TTTGTAGTTG AGTATGAAAA TATTTTTTAA      6180TGCATTTTAT GACTTGCCAA TTGATTGACA ACATGCATCA ATCGACCTGC AGCCCAAGCT      6240TGAGCTCAGG ATTTAGCAGC ATTCCAGATT GGGTTCAATC AACAAGGTAC GAGCCATATC      6300ACTTTATTCA AATTGGTATC GCCAAAACCA AGAAGGAACT CCCATCCTCA AAGGTTTGTA      6360AGGAAGAATT CTCAGTCCAA AGCCTCAACA AGGTCAGGGT ACAGAGTCTC CAAACCATTA      6420GCCAAAAGCT ACAGGAGATC AATGAAGAAT CTTCAATCAA AGTAAACTAC TGTTCCAGCA      6480CATGCATCAT GGTCAGTAAG TTTCAGAAAA AGACATCCAC CGAAGACTTA AAGTTAGTGG      6540GCATCTTTGA AAGTAATCTT GTCAACATCG AGCAGCTGGC TTGTGGGGAC CAGACAAAAA      6600AGGAATGGTG CACAATTGTT AGGCGCACCT ACCAAAAGCA TCTTTGCCTT TATTGCAAAG      6660ATAAAGCAGA TTCCTCTAGT ACAAGTGGGG AACAAAATAA CGTGGAAAAG AGCTGTCCTG      6720ACAGCCCACT CACTAATGCG TATGACGAAC GCAGTGACGA CCACAAAAGA ATTCCCTCTA      6780TATAAGAAGG CATTCATTCC CATTTGAAGG ATCATCAGAT ACTGAACCAA TCCTTCTAGA      6840AGATCTCCAC AATGGCTTCC TCTATGCTCT CTTCCGCTAC TATGGTTGCC TCTCCGGCTC      6900AGGCCACTAT GGTCGCTCCT TTCAACGGAC TTAAGTCCTC CGCTGCCTTC CCAGCCACCC      6960GCAAGGCTAA CAACGACATT ACTTCCATCA CAAGCAACGG CGGAAGAGTT AACTGCATGC      7020AGGTGTGGCC TCCGATTGGA AAGAAGAAGT TTGAGACTCT CTCTTACCTT CCTGACCTTA      7080CCGATTCCGG TGGTCGCGTC AACTGCATGC AGGCCATGGC TGAGAACCAC AAGAAGGTTG      7140GTATCGCTGG AGCTGGAATC GTTGGTGTTT GCACTGCTTT GATGCTTCAA CGTCGTGGAT      7200TCAAGGTTAC CTTGATTGAT CCAAACCCAC CAGGTGAAGG TGCTTCTTTC GGTAACGCTG      7260GTTGCTTCAA CGGTTCCTCC GTTGTTCCAA TGTCCATGCC AGGAAACTTG ACTAGCGTTC      7320CAAAGTGGCT TCTTGACCCA ATGGGTCCAT TGTCCATCCG TTTCAGCTAC TTTCCAACCA      7380TCATGCCTTG GTTGATTCGT TTCTTGCTTG CTGGAAGACC AAACAAGGTG AAGGAGCAAG      7440CTAAGGCACT CCGTAACCTC ATCAAGTCCA CTGTGCCTTT GATCAAGTCC TTGGCTGAGG      7500AGGCTGATGC TAGCCACCTT ATCCGTCACG AAGGTCACCT TACCGTGTAC CGTGGAGAAG      7560CAGACTTCGC CAAGGACCGT GGAGGTTGGG AACTTCGTCG TCTCAACGGT GTTCGTACTC      7620AAATCCTCAG CGCTGATGCA TTGCGTGATT TCGATCCTAA CTTGTCTCAC GCCTTTACCA      7680AGGGAATCCT TATCGAAGAG AACGGTCACA CCATCAACCC ACAAGGTCTC GTGACTCTCT      7740TGTTTCGTCG TTTCATCGCT AACGGTGGAG AGTTCGTGTC TGCTCGTGTT ATCGGATTCG      7800AGACTGAAGG TCGTGCTCTC AAGGGTATCA CCACCACCAA CGGTGTTCTT GCTGTTGATG      7860CAGCTGTTGT TGCAGCTGGT GCACACTCCA AGTCTCTTGC TAACTCCCTT GGTGATGACA      7920TCCCATTGGA TACCGAACGT GGATACCACA TCGTGATCGC CAACCCAGAA GCTGCTCCAC      7980GTATTCCAAC TACCGATGCT TCTGGAAAGT TC                                    8012(2)关于SEQ ID NO：2的信息
(i)序列特征
  (A)长度：89个碱基对
  (B)类型：核酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA(基因组)
(iii)假设：无
(iii)反义：无
(xi)序列描述：SEQ ID NO：2：GGATTGTGTT TGGGTTTTGT CTGTGTGTTT AATGTGTTTA AGGGATGAAT TAGAATGCTC      60TTAATCAACC TACAGCTGAT TTGGACCGG                                        89(2)关于SEQ ID NO：3的信息：
(i)序列特征
  (A)长度：697个碱基对
  (B)类型：核酸
  (C)链型：双链
  (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA(基因组)
(iii)假设：无
(iii)反义：无
(xi)序列描述：SEQ ID NO：3：CGGTCCAAAT TTGTTTACAT TGTGTCCAAA TTTCGGCTGA TTTGGACTTC CCTAGCTATG       60CCAACTAAGC TAATAAAAAA CATGAAACAA CAATTACAAA CTGTCGAGCA CACCTTCTAC      120AAACTAGCTT AGATTTCTAT TGGAAGTTAC AAAACAGTAA AACTACCAAT AGGATACTAA      180ATTAAACATA TTAAACTATT ACTCCTCAAA AGCTTGTACA ATTTGCAGAA GAAATGATGG      240TTGCCCAAAA GCTTCAAAGG GAACCTGCTG GGAAGCCTGC TGGGACGCTG GGGATGCTGG      300CAGCAGCATA CCTTGGCTTG AAGTACTCTT CTCTCATTGG TTTTGCTTCC CTTGCCCATG      360TGGTCTTCAT ATGGCCTCAT TACTTCCCAA GGGCTTCAAA TCAGTAGGTG GTGGCAACCA      420AAAGCATCAA AAACATCTCC TAAAACTAGC TTATACAACC GGATTACATG AGCTTATACT      480AGCTTAACTC TTAAAGCATG ATTAACATAA TGATGTTTAA GGTGTCATTA AGTATTACTA      540ATCTTGCTTA AGTAGAGATT AACATAGGAT TAGCCTAATC AAGTTGCTTA AGTAAGGTTT      600TAGAATAAAC CGAGCTAGTT AGGCTTAAGT AGAGATTAAC ATAGGATTAG CCTAATCAAG      660TTGCTTAAGT AAGGTTTTAG AATAAACCGA GCTAGTT                               697(2)关于SEQ ID NO：4的信息：
(i)序列特征
  (A)长度：8798个碱基对
  (B)类型：核酸
  (C)链型：双链
  (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA(基因组)
(iii)假设：无
(iii)反义：无
(xi)序列描述：SEQ ID NO：4：GGATTGTGTT TGGGTTTTGT CTGTGTGTTT AATGTGTTTA AGGGATGAAT TAGAATGCTC        60TTAATCAACC TACAGCTGAT TTGGACCGGA ACGACAATCT GATCCCCATC AAGCTTGAGC       120TCAGGATTTA GCAGCATTCC AGATTGGGTT CAATCAACAA GGTACGAGCC ATATCACTTT       180ATTCAAATTG GTATCGCCAA AACCAAGAAG GAACTCCCAT CCTCAAAGGT TTGTAAGGAA       240GAATTCTCAG TCCAAAGCCT CAACAAGGTC AGGGTACAGA GTCTCCAAAC CATTAGCCAA       300AAGCTACAGG AGATCAATGA AGAATCTTCA ATCAAAGTAA ACTACTGTTC CAGCACATGC       360ATCATGGTCA GTAAGTTTCA GAAAAAGACA TCCACCGAAG ACTTAAAGTT AGTGGGCATC       420TTTGAAAGTA ATCTTGTCAA CATCGAGCAG CTGGCTTGTG GGGACCAGAC AAAAAAGGAA       480AGGTGCAGAA TTGTTAGGCG CACCTACCAA AAGCATCTTT GCCTTTATTG CAAAGATAAA       540GCAGATTCCT CTAGTACAAG TGGGGAACAA AATAACGTGG AAAAGAGCTG TCCTGACAGC       600CCACTCACTA ATGCGTATGA CGAACGCAGT GACGACCACA AAAGAATTCC CTCTATATAA       660GAAGGCATTC ATTCCCATTT GAAGGATCAT CAGATACTGA ACCAATCCTT CTAGAAGATC       720TAAGCTTATC GATAAGCTTG ATGTAATTGG AGGAAGATCA AAATTTTCAA TCCCCATTCT       780TCGATTGCTT CAATTGAAGT TTCTCCGATG GCGCAAGTTA GCAGAATCTG CAATGGTGTG       840CAGAACCCAT CTCTTATCTC CAATCTCTCG AAATCCAGTC AACGCAAATC TCCCTTATCG       900GTTTCTCTGA AGACGCAGCA GCATCCACGA GCTTATCCGA TTTCGTCGTC GTGGGGATTG       960AAGAAGAGTG GGATGACGTT AATTGGCTCT GAGCTTCGTC CTCTTAAGGT CATGTCTTCT      1020GTTTCCACGG CGTGCATGCT TCACGGTGCA AGCAGCCGTC CAGCAACTGC TCGTAAGTCC      1080TCTGGTCTTT CTGGAACCGT CCGTATTCCA GGTGACAAGT CTATCTCCCA CAGGTCCTTC      1140ATGTTTGGAG GTCTCGCTAG CGGTGAAACT CGTATCACCG GTCTTTTGGA AGGTGAAGAT      1200GTTATCAACA CTGGTAAGGC TATGCAAGCT ATGGGTGCCA GAATCCGTAA GGAAGGTGAT      1260ACTTGGATCA TTGATGGTGT TGGTAACGGT GGACTCCTTG CTCCTGAGGC TCCTCTCGAT      1320TTCGGTAACG CTGCAACTGG TTGCCGTTTG ACTATGGGTC TTGTTGGTGT TTACGATTTC      1380GATAGCACTT TCATTGGTGA CGCTTCTCTC ACTAAGCGTC CAATGGGTCG TGTGTTGAAC      1440CCACTTCGCG AAATGGGTGT GCAGGTGAAG TCTGAAGACG GTGATCGTCT TCCAGTTACC      1500TTGCGTGGAC CAAAGACTCC AACGCCAATC ACCTACAGGG TACCTATGGC TTCCGCTCAA      1560GTGAAGTCCG CTGTTCTGCT TGCTGGTCTC AACACCCCAG GTATCACCAC TGTTATCGAG      1620CCAATCATGA CTCGTGACCA CACTGAAAAG ATGCTTCAAG GTTTTGGTGC TAACCTTACC      1680GTTGAGACTG ATGCTGACGG TGTGCGTACC ATCCGTCTTG AAGGTCGTGG TAAGCTCACC      1740GGTCAAGTGA TTGATGTTCC AGGTGATCCA TCCTCTACTG CTTTCCCATT GGTTGCTGCC      1800TTGCTTGTTC CAGGTTCCGA CGTCACCATC CTTAACGTTT TGATGAACCC AACCCGTACT      1860GGTCTCATCT TGACTCTGCA GGAAATGGGT GCCGACATCG AAGTGATCAA CCCACGTCTT      1920GCTGGTGGAG AAGACGTGGC TGACTTGCGT GTTCGTTCTT CTACTTTGAA GGGTGTTACT      1980GTTCCAGAAG ACCGTGCTCC TTCTATGATC GACGAGTATC CAATTCTCGC TGTTGCAGCT      2040GCATTCGCTG AAGGTGCTAC CGTTATGAAC GGTTTGGAAG AACTCCGTGT TAAGGAAAGC      2100GACCGTCTTT CTGCTGTCGC AAACGGTCTC AAGCTCAACG GTGTTGATTG CGATGAAGGT      2160GAGACTTCTC TCGTCGTGCG TGGTCGTCCT GACGGTAAGG GTCTCGGTAA CGCTTCTGGA      2220GCAGCTGTCG CTACCCACCT CGATCACCGT ATCGCTATGA GCTTCCTCGT TATGGGTCTC      2280GTTTCTGAAA ACCCTGTTAC TGTTGATGAT GCTACTATGA TCGCTACTAG CTTCCCAGAG      2340TTCATGGATT TGATGGCTGG TCTTGGAGCT AAGATCGAAC TCTCCGACAC TAAGGCTGCT      2400TGATGAGCTC AAGAATTCGA GCTCGGTACC GGATCCTCTA GCTAGAGCTT TCGTTCGTAT      2460CATCGGTTTC GACAACGTTC GTCAAGTTCA ATGCATCAGT TTCATTGCGC ACACACCAGA      2520ATCCTACTGA GTTCGAGTAT TATGGCATTG GGAAAACTGT TTTTCTTGTA CCATTTGTTG      2580TGCTTGTAAT TTACTGTGTT TTTTATTCGG TTTTCGCTAT CGAACTGTGA AATGGAAATG      2640GATGGAGAAG AGTTAATGAA TGATATGGTC CTTTTGTTCA TTCTCAAATT AATATTATTT      2700GTTTTTTCTC TTATTTGTTG TGTGTTGAAT TTGAAATTAT AAGAGATATG CAAACATTTT      2760GTTTTGAGTA AAAATGTGTC AAATCGTGGC CTCTAATGAC CGAAGTTAAT ATGAGGAGTA      2820AAACACTTGT AGTTGTACCA TTATGCTTAT TCACTAGGCA ACAAATATAT TTTCAGACCT      2880AGAAAAGCTG CAAATGTTAC TGAATACAAG TATGTCCTCT TGTGTTTTAG ACATTTATGA      2940ACTTTCCTTT ATGTAATTTT CCAGAATCCT TGTCAGATTC TAATCATTGC TTTATAATTA      3000TAGTTATACT CATGGATTTG TAGTTGAGTA TGAAAATATT TTTTAATGCA TTTTATGACT      3060TGCCAATTGA TTGACAACAT GCATCAATCG ACCTGCAGCC ACTCGAAGCG GCCGCGTTCA      3120AGCTTCTGCA GGTCCGATGT GAGACTTTTC AACAAAGGGT AATATCCGGA AACCTCCTCG      3180GATTCCATTG CCCAGCTATC TGTCACTTTA TTGTGAAGAT AGTGGAAAAG GAAGGTGGCT      3240CCTACAAATG CCATCATTGC GATAAAGGAA AGGCCATCGT TGAAGATGCC TCTGCCGACA      3300GTGGTCCCAA AGATGGACCC CCACCCACGA GGAGCATCGT GGAAAAAGAA GACGTTCCAA      3360CCACGTCTTC AAAGCAAGTG GATTGATGTG ATGGTCCGAT GTGAGACTTT TCAACAAAGG      3420GTAATATCCG GAAACCTCCT CGGATTCCAT TGCCCAGCTA TCTGTCACTT TATTGTGAAG      3480ATAGTGGAAA AGGAAGGTGG CTCCTACAAA TGCCATCATT GCGATAAAGG AAAGGCCATC      3540GTTGAAGATG CCTCTGCCGA CAGTGGTCCC AAAGATGGAC CCCCACCCAC GAGGAGCATC      3600GTGGAAAAAG AAGACGTTCC AACCACGTCT TCAAAGCAAG TGGATTGATG TGATATCTCC      3660ACTGACGTAA GGGATGACGC ACAATCCCAC TATCCTTCGC AAGACCCTTC CTCTATATAA      3720GGAAGTTCAT TTCATTTGGA GAGGACACGC TGACAAGCTG ACTCTAGCAG ATCTCCATGG      3780TCCGTCCTGT AGAAACCCCA ACCCGTGAAA TCAAAAAACT CGACGGCCTG TGGGCATTCA      3840GTCTGGATCG CGAAAACTGT GGAATTGATC AGCGTTGGTG GGAAAGCGCG TTACAAGAAA      3900GCCGGGCAAT TGCTGTGCCA GGCAGTTTTA ACGATCAGTT CGCCGATGCA GATATTCGTA      3960ATTATGCGGG CAACGTCTGG TATCAGC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CTTGCT AACTCCCTTG GTGATGACAT CCCATTGGAT ACCGAACGTG GATACCACAT      8040CGTGATCGCC AACCCAGAAG CTGCTCCACG TATTCCAACT ACCGATGCTT CTGGAAAGTT      8100CCGGTCCAAA TTTGTTTACA TTGTGTCCAA ATTTCGGCTG ATTTGGACTT CCCTAGCTAT      8160GCCAACTAAG CTAATAAAAA ACATGAAACA ACAATTACAA ACTGTCGAGC ACACCTTCTA      8220CAAACTAGCT TAGATTTCTA TTGGAAGTTA CAAAACAGTA AAACTACCAA TAGGATACTA      8280AATTAAACAT ATTAAACTAT TACTCCTCAA AAGCTTGTAC AATTTGCAGA AGAAATGATG      8340GTTGCCCAAA AGCTTCAAAG GGAACCTGCT GGGAAGCCTG CTGGGACGCT GGGGATGCTG      8400GCAGCAGCAT ACCTTGGCTT GAAGTACTCT TCTCTCATTG GTTTTGCTTC CCTTGCCCAT      8460GTGGTCTTCA TATGGCCTCA TTACTTCCCA AGGGCTTCAA ATCAGTAGGT GGTGGCAACC      8520AAAAGCATCA AAAACATCTC CTAAAACTAG CTTATACAAC CGGATTACAT GAGCTTATAC      8580TAGCTTAACT CTTAAAGCAT GATTAACATA ATGATGTTTA AGGTGTCATT AAGTATTACT      8640AATCTTGCTT AAGTAGAGAT TAACATAGGA TTAGCCTAAT CAAGTTGCTT AAGTAAGGTT      8700TTAGAATAAA CCGAGCTAGT TAGGCTTAAG TAGAGATTAA CATAGGATTA GCCTAATCAA      8760GTTGCTTAAG TAAGGTTTTA GAATAAACCG AGCTAGTT                              8798(2)关于SEQ ID NO：5的信息：
(i)序列特征
  (A)长度：8418个碱基对
  (B)类型：核酸
  (C)链型：双链
  (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA(基因组)
(iii)假设：无
(iii)反义：无
(xi)序列描述：SEQ ID NO：3：AAGCTTGAGC TCAGGATTTA GCAGCATTCC AGATTGGGTT CAATCAACAA GGTACGAGCC       60ATATCACTTT ATTCAAATTG GTATCGCCAA AACCAAGAAG GAACTCCCAT CCTCAAAGGT      120TTGTAAGGAA GAATTCTCAG TCCAAAGCCT CAACAAGGTC AGGGTACAGA GTCTCCAAAC      180CATTAGCCAA AAGCTACAGG AGATCAATGA AGAATCTTCA ATCAAAGTAA ACTACTGTTC      240CAGCACATGC ATCATGGTCA GTAACTTTCA GAAAAAGACA TCCACCGAAG ACTTAAAGTT      300AGTGGGCATC TTTGAAAGTA ATCTTGTCAA CATCGAGCAG CTGGCTTGTG GGGACCAGAC       360AAAAAAGGAA TGGTGCAGAA TTGTTAGGCG CACCTACCAA AAGCATCTTT GCCTTTATTG       420CAAAGATAAA GCAGATTCCT CTAGTACAAG TGGGGAACAA AATAACGTGG AAAAGAGCTG       480TCCTGACAGC CCACTCACTA ATGCGTATGA CGAACGCAGT GACGACCACA AAAGAATTCC       540CTCTATATAA GAAGGCATTC ATTCCCATTT GAAGGATCAT CAGATACTGA ACCAATCCTT       600CTAGAAGATC TAAGCTTATC GATAAGCTTG ATGTAATTGG AGGAAGATCA AAATTTTCAA       660TCCCCATTCT TCGATTGCTT CAATTGAAGT TTCTCCGATG GCGCAAGTTA GCAGAATCTG       720CAATGGTGTG CAGAACCCAT CTCTTATCTC CAATCTCTCG AAATCCAGTC AACGCAAATC       780TCCCTTATCG GTTTCTCTGA AGACGCAGCA GCATCCACGA GCTTATCCGA TTTCGTCGTC       840GTGGGGATTG AAGAAGAGTG GGATGACGTT AATTGGCTCT GAGCTTCGTC CTCTTAAGGT       900CATGTCTTCT GTTTCCACGG CGTGCATGCT TCACGGTGCA AGCAGCCGTC CAGCAACTGC       960TCGTAAGTCC TCTGGTCTTT CTGGAACCGT CCGTATTCCA GGTGACAAGT CTATCTCCCA      1020CAGGTCCTTC ATGTTTGGAG GTCTCGCTAG CGGTGAAACT CGTATCACCG GTCTTTTGGA      1080AGGTGAAGAT GTTATCAACA CTGGTAAGGC TATGCAAGCT ATGGGTGCCA GAATCCGTAA      1140GGAAGGTGAT ACTTGGATCA TTGATGGTGT TGGTAACGGT GGACTCCTTG CTCCTGAGGC      1200TCCTCTCGAT TTCGGTAACG CTGCAACTGG TTGCCGTTTG ACTATGGGTC TTGTTGGTGT      1260TTACGATTTC GATAGCACTT TCATTGGTGA CGCTTCTCTC ACTAAGCGTC CAATGGGTCG      1320TGTGTTGAAC CCACTTCGCG AAATGGGTGT GCAGGTGAAG TCTGAAGACG GTGATCGTCT      1380TCCAGTTACC TTGCGTGGAC CAAAGACTCC AACGCCAATC ACCTACAGGG TACCTATGGC      1440TTCCGCTCAA GTGAAGTCCG CTGTTCTGCT TGCTGGTCTC AACACCCCAG GTATCACCAC      1500TGTTATCGAG CCAATCATGA CTCGTGACCA CACTGAAAAG ATGCTTCAAG GTTTTGGTGC      1560TAACCTTACC GTTGAGACTG ATGCTGACGG TGTGCGTACC ATCCGTCTTG AAGGTCGTGG      1620TAAGCTCACC GGTCAAGTGA TTGATGTTCC AGGTGATCCA TCCTCTACTG CTTTCCCATT      1680GGTTGCTGCC TTGCTTGTTC CAGGTTCCGA CGTCACCATC CTTAACGTTT TGATGAACCC      1740AACCCGTACT GGTCTCATCT TGACTCTGCA GGAAATGGGT GCCGACATCG AAGTGATCAA      1800CCCACGTCTT GCTGGTGGAG AAGACGTGGC TGACTTGCGT GTTCGTTCTT CTACTTTGAA      1860GGGTGTTACT GTTCCAGAAG ACCGTGCTCC TTCTATGATC GACGAGTATC CAATTCTCGC      1920TGTTGCAGCT GCATTCGCTG AAGGTGCTAC CGTTATGAAC GGTTTGGAAG AACTCCGTGT      1980TAAGGAAAGC GACCGTCTTT CTGCTGTCGC AAACGGTCTC AAGCTCAACG GTGTTGATTG      2040CGATGAAGGT GAGACTTCTC TCGTCGTGCG TGGTCGTCCT GACGGTAAGG GTCTCGGTAA      2100CGCTTCTGGA GCAGCTGTCG CTACCCACCT CGATCACCGT ATCGCTATGA GCTTCCTCGT      2160TATGGGTCTC GTTTCTGAAA ACCCTGTTAC TGTTGATGAT GCTACTATGA TCGCTACTAG      2220CTTCCCAGAG TTCATGGATT TGATGGCTGG TCTTGGAGCT AAGATCGAAC TCTCCGACAC      2280TAAGGCTGCT TGATGAGCTC AAGAATTCGA GCTCGGTACC GGATCCTCTA GCTAGAGCTT      2340TCGTTCGTAT CATCGGTTTC GACAACGTTC GTCAAGTTCA ATGCATCAGT TTCATTGCGC      2400ACACACCAGA ATCCTACTGA GTTCGAGTAT TATGGCATTG GGAAAACTGT TTTTCTTGTA      2460CCATTTGTTG TGCTTGTAAT TTACTGTGTT TTTTATTCGG TTTTCGCTAT CGAACTGTGA      2520AATGGAAATG GATGGAGAAG AGTTAATGAA TGATATGGTC CTTTTGTTCA TTCTCAAATT      2580AATATTATTT GTTTTTTCTC TTATTTGTTG TGTGTTGAAT TTGAAATTAT AAGAGATATG      2640CAAACATTTT GTTTTGAGTA AAAATGTGTC AAATCGTGGC CTCTAATGAC CGAAGTTAAT      2700ATGAGGAGTA AAACACTTGT AGTTGTACCA TTATGCTTAT TCACTAGGCA ACAAATATAT      2760TTTCAGACCT AGAAAAGCTG CAAATGTTAC TGAATACAAG TATGTCCTCT TGTGTTTTAG      2820ACATTTATGA ACTTTCCTTT ATGTAATTTT CCAGAATCCT TGTCAGATTC TAATCATTGC      2880TTTATAATTA TAGTTATACT CATGGATTTG TAGTTGAGTA TGAAAATATT TTTTAATGCA      2940TTTTATGACT TGCCAATTGA TTGACAACAT GCATCAATCG ACCTGCAGCC ACTCGAAGCG      3000GCCGCGTTCA AGCTTCTGCA GGTCCGATGT GAGACTTTTC AACAAAGGGT AATATCCGGA      3060AACCTCCTCG GATTCCATTG CCCAGCTATC TGTCACTTTA TTGTGAAGAT AGTGGAAAAG      3120GAAGGTGGCT CCTACAAATG CCATCATTGC GATAAAGGAA AGGCCATCGT TGAAGATGCC      3180TCTGCCGACA GTGGTCCCAA AGATGGACCC CCACCCACGA GGAGCATCGT GGAAAAAGAA      3240GACGTTCCAA CCACGTCTTC AAAGCAAGTG GATTGATGTG ATGGTCCGAT GTGAGACTTT      3300TCAACAAAGG GTAATATCCG GAAACCTCCT CGGATTCCAT TGCCCAGCTA TCTGTCACTT      3360TATTGTGAAG ATAGTGGAAA AGGAAGGTGG CTCCTACAAA TGCCATCATT GCGATAAAGG      3420AAAGGCCATC GTTGAAGATG CCTCTGCCGA CAGTGGTCCC AAAGATGGAC CCCCACCCAC      3480GAGGAGCATC GTGGAAAAAG AAGACGTTCC AACCACGTCT TCAAAGCAAG TGGATTGATG      3540TGATATCTCC ACTGACGTAA GGGATGACGC ACAATCCCAC TATCCTTCGC AAGACCCTTC      3600CTCTATATAA GGAAGTTCAT TTCATTTGGA GAGGACACGC TGACAAGCTG ACTCTAGCAG      3660ATCTCCATGG TCCGTCCTGT AGAAACCCCA ACCCGTGAAA TCAAAAAACT CGACGGCCTG      3720TGGGCTTTCA GTCTGGATCG CGAAAACTGT GGAATTGATC AGCGTTGGTG GGAAAGCGCG      3780TTACAAGAAA GCCGGGCAAT TGCTGTGCCA GGCAGTTTTA ACGATCAGTT CGCCGATGCA      3840GATATTCGTA ATTATGCGGG CAACGTCTGG TATCAGCGCG AAGTCTTTAT ACCGAAAGGT      3900TGGGCAGGCC AGCGTATCGT GCTGCGTTTC GATGCGGTCA CTCATTACGG CAAAGTGTGG      3960GTCAATAATC AGGAAGTGAT GGAGCATCAG GGCGGCTATA CGCCATTTGA AGCCGATGTC      4020ACGCCGTATG TTATTGCCGG GAAAAGTGTA CGTATCACCG TTTGTGTGAA CAACGAACTG      4080AACTGGCAGA CTATCCCGCC GGGAATGGTG ATTACCGACG AAAACGGCAA GAAAAAGCAG      4140TCTTACTTCC ATGATTTCTT TAACTATGCC GGAATCCATC GCAGCGTAAT GCTCTACACC      4200ACGCCGAACA CCTGGGTGGA CGATATCACC GTGGTGACGC ATGTCGCGCA AGACTGTAAC      4260CACGCGTCTG TTGACTGGCA GGTGGTGGCC AATGGTGATG TCAGCGTTGA ACTGCGTGAT      4320GCGGATCAAC AGGTGGTTGC AACTGGACAA GGCACTAGCG GGACTTTGCA AGTGGTGAAT      4380CCGCACCTCT GGCAACCGGG TGAAGGTTAT CTCTATGAAC TGTGCGTCAC AGCCAAAAGC      4440CAGACAGAGT GTGATATCTA CCCGCTTCGC GTCGGCATCC GGTCAGTGGC AGTGAAGGGC      4500GAACAGTTCC TGATTAACCA CAAACCGTTC TACTTTACTG GCTTTGGTCG TCATGAAGAT      4560GCGGACTTAC GTGGCAAAGG ATTCGATAAC GTGCTGATGG TGCACGACCA CGCATTAATG      4620GACTGGATTG GGGCCAACTC CTACCGTACC TCGCATTACC CTTACGCTGA AGAGATGCTC      4680GACTGGGCAG ATGAACATGG CATCGTGGTG ATTGATGAAA CTGCTGCTGT CGGCTTTAAC      4740CTCTCTTTAG GCATTGGTTT CGAAGCGGGC AACAAGCCGA AAGAACTGTA CAGCGAAGAG      4800GCAGTCAACG GGGAAACTCA GCAAGCGCAC TTACAGGCGA TTAAAGAGCT GATAGCGCGT      4860GACAAAAACC ACCCAAGCGT GGTGATGTGG AGTATTGCCA ACGAACCGGA TACCCGTCCT      4920GCACGGGAAT ATTTCGGCAT TTCGCCACTG GCGGAAGCAA CGCGTAAACT CGACCCGACG      4980CGTCCGATCA CCTGCGTCAA TGTAATGTTC TGCGACGCTC ACACCGATAC CATCAGCGAT      5040CTCTTTGATG TGCTGTGCCT GAACCGTTAT TACGGATGGT ATGTCCAAAG CGGCGATTTG      5100GAAACGGCAG AGAAGGTACT GGAAAAAGAA CTTCTGGCCT GGCAGGAGAA ACTGCATCAG      5160CCGATTATCA TCACCGAATA CGGCGTGGAT ACGTTAGCCG GGCTGCACTC AATGTACACC      5220GACATGTGGA GTGAAGAGTA TCAGTGTGCA TGGCTGGATA TGTATCACCG CGTCTTTGAT      5280CGCGTCAGCG CCGTCGTCGG TGAACAGGTA TGGAATTTCG CCGATTTTGC GACCTCGCAA      5340GGCATATTGC GCGTTGGCGG TAACAAGAAA GGGATCTTCA CTCGCGACCG CAAACCGAAG      5400TCGGCGGCTT TTCTGCTGCA AAAACGCTGG ACTGGCATGA ACTTCGGTGA AAAACCGCAG      5460CAGGGAGGCA AACAATGAAT CAACAACTCT CCTGGCGCAC CATCGTCGGC TACAGCCTCG      5520GTGGGGAATT CGAGCTCGCC CGGGGATCCT CTAGCTAGAG CTTTCGTTCG TATCATCGGT      5580TTCGACAACG TTCGTCAAGT TCAATGCATC AGTTTCATTG CGCACACACC AGAATCCTAC      5640TGAGTTCGAG TATTATGGCA TTGGGAAAAC TGTTTTTCTT GTACCATTTG TTGTGCTTGT      5700AATTTACTGT GTTTTTTATT CGGTTTTCGC TATCGAACTG TGAAATGGAA ATGGATGGTG      5760AAGAGTTAAT GAATGATATG GTCCTTTTGT TCATTCTCAA ATTAATATTA TTTGTTTTTT      5820CTCTTATTTG TTGTGTGTTG AATTTGAAAT TATAAGAGAT ATGCAAACAT TTTGTTTTGA      5880GTAAAAATGT GTCAAATCGT GGCCTCTAAT GACCGAAGTT AATATGAGGA GTAAAACACT      5940TGTAGTTGTA CCATTATGCT TATTCACTAG GCAACAAATA TATTTTCAGA CCTAGAAAAG      6000CTGCAAATGT TACTGAATAC AAGTATGTCC TCTTGTGTTT TAGACATTTA TGAACTTTCC      6060TTTATGTAAT TTTCCAGAAT CCTTGTCAGA TTCTAATCAT TGCTTTATAA TTATAGTTAT      6120ACTCATGGAT TTGTAGTTGA GTATGAAAAT ATTTTTTAAT GCATTTTATG ACTTGCCAAT      6180TGATTGACAA CATGCATCAA TCGACCTGCA GCCCAAGCTT GAGCTCAGGA TTTAGCAGCA      6240TTCCAGATTG GGTTCAATCA ACAAGGTACG AGCCATATCA CTTTATTCAA ATTGGTATCG      6300CCAAAACCAA GAAGGAACTC CCATCCTCAA AGGTTTGTAA GGAAGAATTC TCAGTCCAAA      6360GCCTCAACAA GGTCAGGGTA CAGAGTCTCC AAACCATTAG CCAAAAGCTA CAGGAGATCA      6420ATGAAGAATC TTCAATCAAA GTAAACTACT GTTCCAGCAC ATGCATCATG GTCAGTAAGT      6480TTCAGAAAAA GACATCCACC GAAGACTTAA AGTTAGTGGG CATCTTTGAA AGTAATCTTG      6540TCAACATCGA GCAGCTGGCT TGTGGGGACC AGACAAAAAA GGAATGGTGC AGAATTGTTA      6600GGCGCACCTA CCAAAAGCAT CTTTGCCTTT ATTGCAAAGA TAAAGCAGAT TCCTCTAGTA      6660CAAGTGGGGA ACAAAATAAC GTGGAAAAGA GCTGTCCTGA CAGCCCACTC ACTAATGCGT      6720ATGACGAACG CAGTGACGAC CACAAAAGAA TTCCCTCTAT ATAAGAAGGC ATTCATTCCC      6780ATTTGAAGGA TCATCAGATA CTGAACCAAT CCTTCTAGAA GATCTCCACA ATGGCTTCCT      6840CTATGCTCTC TTCCGCTACT ATGGTTGCCT CTCCGGCTCA GGCCACTATG GTCGCTCCTT      6900TCAACGGACT TAAGTCCTCC GCTGCCTTCC CAGCCACCCG CAAGGCTAAC AACGACATTA      6960CTTCCATCAC AAGCAACGGC GGAAGAGTTA ACTGCATGCA GGTGTGGCCT CCGATTGGAA      7020AGAAGAAGTT TGAGACTCTC TCTTACCTTC CTGACCTTAC CGATTCCGGT GGTCGCGTCA      7080ACTGCATGCA GGCCATGGCT GAGAACCACA AGAAGGTTGG TATCGCTGGA GCTGGAATCG      7140TTGGTGTTTG CACTGCTTTG ATGCTTCAAC GTCGTGGATT CAAGGTTACC TTGATTGATC      7200CAAACCCACC AGGTGAAGGT GCTTCTTTCG GTAACGCTGG TTGCTTCAAC GGTTCCTCCG      7260TTGTTCCAAT GTCCATGCCA GGAAACTTGA CTAGCGTTCC AAAGTGGCTT CTTGACCCAA      7320TGGGTCCATT GTCCATCCGT TTCAGCTACT TTCCAACCAT CATGCCTTGG TTGATTCGTT      7380TCTTGCTTGC TGGAAGACCA AACAAGGTGA AGGAGCAAGC TAAGGCACTC CGTAACCTCA      7440TCAAGTCCAC TGTGCCTTTG ATCAAGTCCT TGGCTGAGGA GGCTGATGCT AGCCACCTTA      7500TCCGTCACGA AGGTCACCTT ACCGTGTACC GTGGAGAAGC AGACTTCGCC AAGGACCGTG      7560GAGGTTGGGA ACTTCGTCGT CTCAACGGTG TTCGTACTCA AATCCTCAGC GCTGATGCAT      7620TGCGTGATTT CGATCCTAAC TTGTCTCACG CCTTTACCAA GGGAATCCTT ATCGAAGAGA      7680ACGGTCACAC CATCAACCCA CAAGGTCTCG TGACTCTCTT GTTTCGTCGT TTCATCGCTA      7740ACGGTGGAGA GTTCGTGTCT GCTCGTGTTA TCGGATTCGA GACTGAAGGT CGTGCTCTCA      7800AGGGTATCAC CACCACCAAC GGTGTTCTTG CTGTTGATGC AGCTGTTGTT GCAGCTGGTG      7860CACACTCCAA GTCTCTTGCT AACTCCCTTG GTGATGACAT CCCATTGGAT ACCGAACGTG      7920GATACCACAT CGTGATCGCC AACCCAGAAG CTGCTCCACG TATTCCAACT ACCGATGCTT      7980CTGGAAAGTT CATCGCTACT CCTATGGAGA TGGGTCTTCG TGTTGCTGGA ACCGTTGAGT      8040TCGCTGGTCT CACTGCTGCT CCTAACTGGA AGCGTGCTCA CGTTCTCTAC ACTCACGCTC      8100GTAAGTTGCT TCCAGCTCTC GCTCCTGCCA GTTCTGAAGA ACGTTACTCC AAGTGGATGG      8160GTTTCCGTCC AAGCATCCCA GATTCCCTTC CAGTGATTGG TCGTGCTACC CGTACTCCAG      8220ACGTTATCTA CGCTTTCGGT CACGGTCACC TCGGTATGAC TGGTGCTCCA ATGACCGCAA      8280CCCTCGTTTC TGAGCTCCTC GCAGGTGAGA AGACCTCTAT CGACATCTCT CCATTCGCAC      8340CAAACCGTTT CGGTATTGGT AAGTCCAAGC AAACTGGTCC TGCATCCTAA GTGGGAATTC      8400GAGCTCGGTA CCGGATCC                                                    8418(2)关于SEQ ID NO：6的信息：
(i)序列特征
  (A)长度：23个碱基对
  (B)类型：核酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA(基因组)
(iii)假设：无
(iii)反义：无
(xi)序列描述SEQ ID NO：6：CACCGGTCTT TTGGAAGGTG AAG                                              23(2)关于SEQ ID NO：7的信息：
(i)序列特征
  (A)长度：23个碱基对
  (B)类型：核酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA(基因组)
(iii)假设：无
(iii)反义：无
(xi)序列描述：SEQ ID NO：7：AACGAGACCC ATAACGAGGA AGC                                              23(2)关于SEQ ID NO：8的信息：
(i)序列特征
  (A)长度：23个碱基对
  (B)类型：核酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA(基因组)
(iii)假设：无
(iii)反义：无
(xi)序列描述：SEQ ID NO：8：AAACAGTCCC GTGCATCCCC AAC                                              23(2)关于SEQ ID NO：9的信息：
(i)序列特征
  (A)长度：23个碱基对
  (B)类型：核酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA(基因组)
(iii)假设：无
(iii)反义：无
(xi)序列描述：SEQ ID NO：9：GACGCTCTCC TTGATTCTGT CCC                                              23(2)关于SEQ ID NO：10的信息：
(i)序列特征
  (A)长度：20个碱基对
  (B)类型：核酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA(基因组)
(iii)假设：无
(iii)反义：无
(xi)序列描述：SEQ ID NO：10：CAAGAAGGTT GGTATCGCTG                                                  20(2)关于SEQ ID NO：11的信息：
(i)序列特征
  (A)长度：23个碱基对
  (B)类型：核酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA(基因组)
(iii)假设：无
(iii)反义：无
(xi)序列描述：SEQ ID NO：11：TCTTTTGTGG TCGTCACTGC GTT                                              23(2)关于SEQ ID NO：12的信息：
(i)序列特征
  (A)长度：24个碱基对
  (B)类型：核酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA(基因组)
(iii)假设：无
(iii)反义：无
(xi)序列描述：SEQ ID NO：12：GCGAGCTCTA ATACGACTCA CTAT                                             24(2)关于SEQ ID NO：13的信息：
(i)序列特征
  (A)长度：23个碱基对
  (B)类型：核酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA(基因组)
(iii)假设：无
(iii)反义：无
(xi)序列描述：SEQ ID NO：13：CGCGAGCTCA ATTAACCCTC ACT                                              23(2)关于SEQ ID NO：14的信息：
(i)序列特征
  (A)长度：20个碱基对
  (B)类型：核酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA(基因组)
(iii)假设：无
(iii)反义：无
(xi)序列描述SEQ ID NO：14：TCTGTACCCT GACCTTGTTG                                                  20(2)关于SEQ ID NO：15的信息：
(i)序列特征
  (A)长度：20个碱基对
  (B)类型：核酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA(基因组)
(iii)假设：无
(iii)反义：无
(xi)序列描述：SEQ ID NO：15：CGTGGATACC ACATCGTGAT                                                  20(2)关于SEQ ID NO：16的信息：
(i)序列特征
  (A)长度：19个碱基对
  (B)类型：核酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA(基因组)
(iii)假设：无
(iii)反义：无
(xi)序列描述：SEQ ID NO：16：ACCTTGGCTT GAAGTACTC                                                   19(2)关于SEQ ID NO：17的信息：
(i)序列特征
  (A)长度：23个碱基对
  (B)类型：核酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA(基因组)
(iii)假设：无
(iii)反义：无
(xi)序列描述：SEQ ID NO：17：TCAACCTACA GCTGATTTGG ACC                                              23(2)关于SEQ ID NO：18的信息：
(i)序列特征
  (A)长度：22个碱基对
  (B)类型：核酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA(基因组)
(iii)假设：无
(iii)反义：无
(xi)序列描述：SEQ ID NO：18：GGACCGGAAC GACAATCTGA TC                                               22(2)关于SEQ ID NO：19的信息：
(i)序列特征
  (A)长度：22个碱基对
  (B)类型：核酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA(基因组)
(iii)假设：无
(iii)反义：无
(xi)序列描述：SEQ ID NO：19：CTAGGGAAGT CCAAATCAGC CG                                               22(2)关于SEQ ID NO：20的信息：
(i)序列特征
  (A)长度：23个碱基对
  (B)类型：核酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA(基因组)
(iii)假设：无
(iii)反义：无
(xi)序列描述：SEQ ID NO：20：TTTGGACCGG AACTTTCAG AAG                                               23(2)关于SEQ ID NO：21的信息：
(i)序列特征
  (A)长度：23个碱基对
  (B)类型：核酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA(基因组)
(iii)假设：无
(iii)反义：无
(xi)序列描述：SEQ ID NO：21：CTAACTTGCG CCATCGGAGA AAC                                              23(2)关于SEQ ID NO：22的信息：
(i)序列特征
  (A)长度：23个碱基对
  (B)类型：核酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA(基因组)
(iii)假设：无
(iii)反义：无
(xi)序列描述SEQ ID NO：22：GACTTGTCAC CTGGAATACG GAC                                              23(2)关于SEQ ID NO：23的信息：
(i)序列特征
  (A)长度：23个碱基对
  (B)类型：核酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA(基因组)
(iii)假设：无
(iii)反义：无
(xi)序列描述：SEQ ID NO：23：ATTCTTGAGC TCATCAAGCC                                                  23(2)关于SEQ ID NO：24的信息：
(i)序列特征
  (A)长度：22个碱基对
  (B)类型：核酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：  DNA(基因组)
(iii)假设：无
(iii)反义：无
(xi)序列描述：SEQ ID NO：24：AAGGTTGGTA TCGCTGGAGC TG                                               22(2)关于SEQ ID NO：25的信息：
(i)序列特征
  (A)长度：23个碱基对
  (B)类型：核酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA(基因组)
(iii)假设：无
(iii)反义：无
(xi)序列描述：SEQ ID NO：25：TCTCCACAAT GGCTTCCTCT ATG                                              23(2)关于SEQ ID NO：26的信息：
(i)序列特征
  (A)长度：671个碱基对
  (B)类型：核酸
  (C)链型：双链
  (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA(基因组)
(iii)假设：无
(iii)反义：无
(xi)序列描述：SEQ ID NO：26：CAAGATGGAT TGCACGCAGG TTCTCCGGCC GCTTGGGTGG AGAGGCTATT CGGCTATGAC       60TGGGCACAAC AGACAATCGG CTGCTCTGAT GCCGCCGTGT TCCGGCTGTC AGCGCAGGGG      120CGCCCGGTTC TTTTTGTCAA GACCGACCTG TCCGGTGCCC TGAATGAACT CCAGGACGAG      180GCAGCGCGGC TATCGTGGCT GGCCACGACG GGCGTTCCTT GCGCAGCTGT GCTCGACGTT      240GTCACTGAAG CGGGAAGGGA CTGGCTGCTA TTGGGCGAAG TGCCGGGGCA GGATCTCCTG      300TCATCTCACC TTGCTCCTGC CGAGAAAGTA TCCATCATGG CTGATGCAAT GCGGCGGCTG      360CATACGCTTG ATCCGGCTAC CTGCCCATTC GACCACCAAG CGAAACATCG CATCGAGCGA      420GCACGTACTC GGATGGAAGC CGGTCTTGTC GATCAGGATG ATCTGGACGA AGAGCATCAG      480GGGCTCGCGC CAGCCGAACT GTTCGCCAGG CTCAAGGCGC GCATGCCCGA CGGCGAGGAT      540CTCGTCGTGA CCCATGGCGA TGCCTGCTTG CCGAATATCA TGGTGGAAAA TGGCCGCTTT      600TCTGGATTCA TCGACTGTGG CCGGCTGGGT GTGGCGGACC GCTATCAGGA CATAGCGTTG      660GCTACCCGTG A                                                           671(2)关于SEQ ID NO：27的信息：
(i)序列特征
  (A)长度：739个碱基对
  (B)类型：核酸
  (C)链型：双链
  (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：  DNA(基因组)
(iii)假设：无
(iii)反义：无
(xi)序列描述：  SEQ ID NO：27：GGACCGGAAC GACAATCTGA TCCCCATCAA GCTTGAGCTC AGGATTTAGC AGCATTCCAG       60ATTGGGTTCA ATCAACAAGG TACGAGCCAT ATCACTTTAT TCAAATTGGT ATCGCCAAAA      120CCAAGAAGGA ACTCCCATCC TCAAAGGTTT GTAAGGAAGA ATTCTCAGTC CAAAGCCTCA      180ACAAGGTCAG GGTACAGAGT CTCCAAACCA TTAGCCAAAA GCTACAGGAG ATCAATGAAG      240AATCTTCAAT CAAAGTAAAC TACTGTTCCA GCACATGCAT CATGGTCAGT AAGTTTCAGA      300AAAAGACATC CACCGAAGAC TTAAAGTTAG TGGGCATCTT TGAAAGTAAT CTTGTCAACA      360TCGAGCAGCT GGCTTGTGGG GACCAGACAA AAAAGGAATG GTGCAGAATT GTTAGGCGCA      420CCTACCAAAA GCATCTTTGC CTTTATTGCA AAGATAAAGC AGATTCCTCT AGTACAAGTG      480GGGAACAAAA TAACGTGGAA AAGAGCTGTC CTGACAGCCC ACTCACTAAT GCGTATGACG      540AACGCAGTGA CGACCACAAA AGAATTCCCT CTATATAAGA AGGCATTCAT TCCCATTTGA      600AGGATCATCA GATACTGAAC CAATCCTTCT AGAAGATCTA AGCTTATCGA TAAGCTTGAT      660GTAATTGGAG GAAGATCAAA ATTTTCAATC CCCATTCTTC GATTGCTTCA ATTGAAGTTT      720CTCCGATGGC GCAAGTTAG                                                   739

Claims (17)

1.表达cp4/epsps酶活性的甜菜植株及其后代。
2.根据权利要求1所述的植株，对每公顷约4升至约18升Roundup的处理有耐受性。
3.根据权利要求1所述的植株，其特征在于当使用以SEQ IDNo：18和SEQ ID No：2的序列为特征的寡核苷酸引物对时，以其基因组DNA为模板的PGR扩增产生739bp的DNA片段。
4.根据权利要求3所述的植株，其中以SEQ ID No：27的核苷酸序列为特征的DNA形成植物基因组的部分。
5.根据权利要求1所述的植株，其特征在于当使用以SEQ IDNo：20和SEQ ID No：24的序列为特征的寡核苷酸引物对时，以其基因组DNA为模板的PCR扩增产生834bp的DNA片段。
6.根据权利要求1所述的植株，其特征在于当使用以SEQ IDNo：17和SEQ ID No：22的序列为特征的寡核苷酸引物对时，以其基因组DNA为模板的PCR扩增产生1057bp的DNA片段。
7.根据权利要求1所述的植株，其特征在于当使用以SEQ IDNo：19和SEQ ID No：25的序列为特征的寡核苷酸引物对时，以其基因组DNA为模板的PCR扩增产生1224bp的DNA片段。
8.根据权利要求1所述的植株，其中以SEQ ID No：1的核苷酸序列为特征的DNA形成植物基因组的部分。
9.根据权利要求8所述的植株，其中所述的核苷酸序列取代了高度重复的DNA序列。
10.根据权利要求8所述的植株，其中基因组的部分与以SEQ IDNo：2和SEQ ID No：3的核苷酸序列为特征的所述的核苷酸序列直接相连。
11.根据权利要求9所述的植株，其中DNA的特征在于SEQ IDNo：4的核苷酸序列形成植物基因组的部分。
12.根据权利要求1-11中的任意一项所述的植株的种子。
13.根据权利要求8所述的植株的种子，以登记号NCIMB97087006/2保藏。
14.产生根据权利要求1所述的甜菜植株的方法，包括
(a)用携带含有编码cp4/epsps的DNA片段的载体的农杆菌转化体外培养的甜菜子叶；
(b)在草甘膦存在时再生芽；
(c)将芽转移到温室的土壤中；
(d)用草甘膦处理苗；
(e)以0-9的等级对植株活力和叶褪绿进行目测评级；
(g)选择植株活力和叶褪绿评级为9的植株；并且
(h)通过传统育种技术繁殖所选植株。
15.根据权利要求14所述的方法，其中编码cp4/epsps蛋白的载体是含有具有SEQ ID No：5中给出的核苷酸序列的DNA片段的载体。
16.根据权利要求14所述的方法，其中通过PCR分析再生芽中编码cp4/epsps的DNA的存在。
17.草甘膦耐受性甜菜植株及其后代，可通过用使cp4/epsps在植物中表达的基因进行农杆菌介导的转化得到，其中所述的植株缺失左和右T-DNA边界序列。
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