SE520353C2 - Transgen sockerbetsplanta vilken uttrycker cp4/epsps- enzymaktivitet - Google Patents

Transgen sockerbetsplanta vilken uttrycker cp4/epsps- enzymaktivitet

Info

Publication number
SE520353C2
SE520353C2 SE9902189A SE9902189A SE520353C2 SE 520353 C2 SE520353 C2 SE 520353C2 SE 9902189 A SE9902189 A SE 9902189A SE 9902189 A SE9902189 A SE 9902189A SE 520353 C2 SE520353 C2 SE 520353C2
Authority
SE
Sweden
Prior art keywords
dna
seq
plant
sequence
iii
Prior art date
Application number
SE9902189A
Other languages
English (en)
Other versions
SE9902189L (sv
SE9902189D0 (sv
Inventor
Marie Mannerloef
Paul Peter Tenning
Per Steen
Original Assignee
Syngenta Participations Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Syngenta Participations Ag filed Critical Syngenta Participations Ag
Publication of SE9902189D0 publication Critical patent/SE9902189D0/sv
Publication of SE9902189L publication Critical patent/SE9902189L/sv
Publication of SE520353C2 publication Critical patent/SE520353C2/sv

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/1085—Transferases (2.) transferring alkyl or aryl groups other than methyl groups (2.5)
    • C12N9/1092—3-Phosphoshikimate 1-carboxyvinyltransferase (2.5.1.19), i.e. 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8201—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation
    • C12N15/8202—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation by biological means, e.g. cell mediated or natural vector
    • C12N15/8205—Agrobacterium mediated transformation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8274—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for herbicide resistance
    • C12N15/8275—Glyphosate

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Pretreatment Of Seeds And Plants (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Description

520 353 2 (epsps). Inom kloroplasten katalyserar detta enzym reaktionen av shikimat-3-fosfat och fosfoe- mat-3-fosfatsyntas nolpyruvat för att bilda 5-enolpyruvylshikimat-3-fosfat och fosfat. Cirka en vecka efter herbicidens pàförande, kan synliga effekter ses, vilka inkluderar att växten vissnar, gulnar följt av att den blir fullständigt brun, att växtvävnad förstörs och att rötterna sönderdelas.
För att ge arter av gröda tolerans mot glyfosfat, har fokus inriktats pà att införa epsps-gener i plantorna med förmåga att öka toleransen för glyfosfat. Förutom växter uttrycker bakterier och svampar naturligt epsps- enzymaktivitet. Cp4/epsps fràn Agrobacterium sp. CP4 vi- ”Inhi- sade sig ge tolerans mot glyfosfat (Barry et al., bitors of Amino Acid Biosynthesis: Strategies for Impar- ting Glyphosate Tolerance to Crop Plants”, i: Biosynthe- sis and Molecular Regulation of Amino Acids in Plants, (eds), American Society of Plant Physiolo- l39-l45, 1992). i sojaböna och oljefröraps gav tolerans för att påföra Singh et al gists, sid. Införande av cp4/epsps-genen herbiciden pá bladen under fältförhàllanden (Delannay et al., 1461-1467, 1995; Padgette et al., Sci. 35: 1995).
Glyfosfatoxidasreduktas stam LBAA (Barry et al., Crop Sci. 35: Crop 1451-1461, (gox) som isolerats fràn som ovan) Achromobacter sp. bry- ter ned glyfosfat till aminometylfosfonsyra, som är en förening som är icke-toxisk för plantan. En kombination av cp4/epsps och glyfosfatoxidas(gox)generna har med framgång använts för att erhålla transgent vete (Zhou et al., Plant Cell Rep. 15: 159-163, 1995) glyfosfat. som tolererar Ändamålet med föreliggande uppfinning är att till- handahàlla sockerbetsplantor som tolererar glyfosfat i doser som är tillräckligt höga för att åstadkomma optimal herbicid aktivitet. Sådana plantor kan ytterligare för- bättras genom att korsas tillbaka med elitsockerbetalin- jer för att optimera de agronoma egenskaperna såsom utby- te, patogenresistens o.s.v. 10 15 20 25 30 35 vw M . . .. .. .ß »- ß »r -~ ». -. - . -= a 1 »i f. .l .. c » u s f., . a : 4 v.. s 1, 4 _ . .A 4 . n . - . . .; 3 Sockerbetor kan transformeras med användning av Ag- robacterium tumefaciensmedierad transformation. (Fry et al, Third international congress of plant mol. biol., Tuscon, Arizona, USA; D'Halluin et al, Bio/Technology 10: 309-314, 1992; J. Plant Biochem & Biotech 3: 37- 41, 1994). ofta i att mer än en kopia av ifrågavarande T-DNA integ- Konwar, Agrobakteriemedierad transformation resulterar reras i plantans genom. Genen som skall integreras införs företrädesvis i ifrågavarande T-DNA så att den lokalise- ras nära den högra gränsen för ifrågavarande T-DNA, vil- ken, i motsats till den vänstra gränsen, nästan alltid kommer att överföras till plantan.
Plantor enligt föreliggande uppfinning tolererar be- handling med mer än ca 3 gånger 6 liter av herbiciden Roundup® per hektar (ca 18 liter per hektar). Den totala standarddosen för att erhålla god ogräskontroll varierar mellan 4 och 6 liter per hektar, beroende på ogrästryck.
Vid dessa koncentrationer utövar herbicidbehandlingen ingen påvisbar effekt på plantans vigör och bladens klo- ros. Toleransen som uppvisas av plantorna enligt uppfin- ningen ges av en transgent uttryckt cp4/epsps-enzymakti- vitet. En föredragen utföringsform av föreliggande upp- finning har deponerats hos the National Collections of (23 St Machar Dri- den 24 Industrial and Marine Bacteria Limited ve, Aberdeen AB2 1RY, Skottland, Storbritannien) oktober 1997 under accessionsnr NCIMB 40905.
Föreliggande uppfinning avser sålunda en sockerbets- planta inklusive avkomlingarna därav som uttrycker cp4/- epsps-enzymaktivitet. Uppfinningen avser särskilt en soc- kerbetsplanta samt avkomlingarna därav som tolererar be- handling med ca 4 till ca 18 liter Roundup® per hektar.
Plantor enligt föreliggande uppfinning kan erhållas genom agrobakteriemedierad transformation av rutinkarak- tär med användning av en transformationsvektor som inne- håller mellan de högra och vänstra gränssekvenserna för ifrågavarande T-DNA en DNA-bit såsom beskrivits i SEQ ID NR: 5 som kodar för bl.a. cp4/epsps. 10 15 20 25 30 35 520 353 4 Det visade sig överraskande inom ramen för förelig- gande uppfinning, att en transformationshändelse (RRMax) som saknar de vänstra och högra gränssekvenserna för ifrågavarande T-DNA inom det transgena genomet och som resulterar i borttagande av en väsentlig del av ifrågava- rande transformationsvektor-DNA medan det DNA som kodar för cp4/epsps bibehålles, tillhandahåller överlägsen gly- fosfattolerans. Särskilt har en DNA-del som kännetecknas av SEQ ID NR:l erhållits integrerad in i en kraftigt re- petitiv region av genomet och ersätter samtidigt en del av nämnda repetitiva genomsekvens. Det genoma DNA som är direkt närliggande till den del av den transgena sekven- sen vilken i den använda transformationsvektorn är kopp- lad till den högra gränssekvensen för ifrågavarande T- DNA, har sekvensen som ges i SEQ ID NR: 2. Det genoma DNA som är direkt närliggande till den andra änden av ifråga- varande integrerade transgena DNA har sekvensen som ges SEQ ID NR:3. Den kompletta DNA-sekvensen för det nyligen bildade genoma DNA-arrangemanget ges i SEQ ID NR: 4.
Föreliggande uppfinning avser sålunda en sockerbets- planta inklusive avkomlingarna därav, vari DNA känneteck- nas av att nukleotidsekvensen enligt SEQ ID NR:l bildar en del av plantans genom och nämnda nukleotidsekvens er- sätter företrädesvis starkt repetitiva DNA-sekvenser inom plantans genom.
Föredragen häri är en sockerbetsplanta inklusive av- komlingarna därav, i vilken de delarna av genomet som är direkt kopplade till nämnda nukleotidsekvens kännetecknas av nukleotidsekvenserna SEQ ID NR: 2 respektive SEQ ID NR: 3.
Vidare är en sockerbetsplanta inklusive avkomlingar- na därav föredragen, vari DNA kännetecknat av nukleotid- sekvensen SEQ ID NR: 4 bildar en del av plantans genom.
Herbicidtoleransen som manipulerats in i de transge- na fröna och plantorna som nämnts ovan överförs genom sexuell reproduktion eller vegetativ tillväxt och kan så- lunda bibehàllas och förökas hos avkomlingarnas plantor. 10 15 20 25 30 35 520 353 5 I allmänhet använder nämnda bibehållande och förökning kända agrikulturella metoder som utvecklats för att passa specifika ändamål sàsom att odla, sä eller skörda. Efter- som den växande grödan är känslig för angrepp och skador orsakade av insekter eller infektioner, vidtas åtgärder för att kontrollera plantsjukdomar, insekter, nematoder och andra negativa tillstànd för att förbättra utbytet.
Dessa inbegriper mekaniska àtgärder sàsom odling av jor- den eller att avlägsna infekterade plantor, sàväl som att páföra agrokemikalier såsom fungicider, gametocider, ne- maticider, tillväxtreglerare, mognadsmedel och insektici- der.
Herbicidtoleransen hos de transgena plantorna och fröna enligt uppfinningen kan vidare användas i växtför- ädling med målet att utveckla plantor med förbättrade egenskaper sàsom tolerans mot pest, herbicider eller stress, förbättrat näringsvärde, förbättrat utbyte eller förbättrad struktur som orsakar mindre förluster från plantor som slås ned eller krossas. De olika förädlings- stegen kännetecknas av väldefinierade ingrepp av männi- skan sàsom att välja de linjer som skall korsas, direkt polymering av föräldralinjerna eller att välja lämpliga avkomlingsplantor. Beroende pà de önskade egenskaperna vidtas olika förädlingsàtgärder. De relevanta teknikerna är välkända inom tekniken och inbegriper men är inte be- gränsade till hybridisering, inavel, àterkorsningsföräd- ling, multilinjeförädling, varierad blandning, interspe- cifik hybridisering, aneuploida tekniker, etc. De trans- gena fröerna och plantorna enligt uppfinningen kan sålun- da användas för förädling av förbättrade växtlinjer, vil- ka t.ex. ökar effektiviteten hos konventionella metoder sàsom herbicid- eller pesticidbehandling eller som medger att sådana metoder kan avvaras tack vare deras modifiera- de genetiska egenskaper. Alternativt kan nya grödor med förbättrad stresstolerans erhållas, vilka pà grund av de- ras optimerade genetiska utrustning, ger skördade produk- 10 15 20 25 30 35 520 353 6 ter med bättre kvalitet än produkter som inte kunde klara jämförbara ogynnsamma utvecklingsförhållanden.
Vid fröframställning är kvaliteten på grobarheten och frönas jämnhet väsentliga produktegenskaper, medan kvaliteten på grobarhet och jämnheten hos de frön som skördats och sålts av bonden inte är viktig. Eftersom det är svårt att hålla en gröda fri från andra grödor och ogräsfrön, för att kontrollera fröburna sjukdomar och för att framställa frön med god grobarhet har en ganska om- fattande och väldefinierad praxis för fröproduktion ut- vecklats av fröproducenter, vilka har erfarenhet inom tekniken att odla, konditionera och sälja rena fröer. Det är sålunda vanligt att bonden köper kvalitetsmärkt frö som uppfyller en specifik kvalitetsstandard i stället för att använda frön som skördats från hans egen gröda. För- ökningsmaterial som skall användas som utsäde behandlas vanligen med en skyddande beläggning som innefattar her- bicider, insekticider, fungicider, baktericider, nemati- cider, molluskicider eller blandningar därav. Vanligen använda skyddande beläggningar innefattar föreningar så- som captan, karboxin, tiram (TMTD®), metalaxyl (Apron®) och primifos-metyl (Actellic®). Om så önskas, kan dessa föreningar formuleras tillsammans med ytterligare bärare, i ytaktiva medel eller påföringsbefrämjande adjuvanser som vanligen används inom formuleringstekniken för att tillhandahålla skydd mot skador orsakade av angrepp av bakterier, svampar eller skadedjur. De skyddande belägg- ningarna kan pàföras genom att impregnera fortplantnings- materialet med en vätskeformig formulering eller genom att belägga det med en kombinerad våt och torr formule- ring. Andra pàföringsmetoder är också möjliga såsom di- rekt behandling på knopparna eller frukten.
Det är en ytterligare aspekt av uppfinningen att tillhandahålla nya jordbruksmetoder såsom metoderna som exemplifierats ovan, vilka kännetecknats av användningen av transgena växter, transgent växtmaterial eller trans- gent frö enligt föreliggande uppfinning. lO 15 20 25 30 35 520 353 7 I en annan utföringsform avser föreliggande uppfin- ning en transgen växtcell, vävnad, frö eller växt- organ, del som erhållits från den transgena växten. Också trans- gena avkomlingar från växten såväl som transgena växtcel- ler, vävnader, organ, fröer och växtdelar som erhållits från avkomlingarna innefattas i uppfinningen.
Uppfinningen avser vidare en kommersiell bag som in- nehåller sockerbetsfrö som har förmåga att uttrycka cp4/- epsps som är tolerant mot Roundup®, tillsammans med på- skrivna instruktioner för användning därav. Föredraget inom denna uppfinning är en kommersiell bag som innefat- tar frö från en transgen växt som innefattar en del av DNA som har nukleotidsekvensen som avbildas i SEQ ID NR: l stabilt integrerat i dess genom.
Den använda transformationsmetodologin kan summeras som följer: (a) tranformering av in vitro odlade sockerbetskotyledon med användning av agrobacterium tumefaciens med en vektor som innefattar en bit av DNA som kodar för cp4/epsps såsom beskrivits i SEQ ID NR: 5; (b) regenerering av skott i närvaro av glyfosfat; (c) överföring av skotten till jord i växthus; (d) behandling av de små plantorna med glyfosfat; (e) visuellt gradera plantvigör och lövkloros; (g) att välja fullständigt normala plantor med normal vigör och med löv som inte är påverkade av glyfos- fatbehandling; och (h) föröka de valda plantorna med användning av konven- tionella förädlingstekniker.
Närmare bestämt regenereras skott i närvaro av ca 0,1 till ca 10 mM, 8-12 veckors urval. Varje transgent skott förökas vidare företrädesvis ca lmM glyfosfat efter i tio kopior, vilka eventuellt kan analyseras med avseen- de på närvaro av cp4/epsps-transgenen med användning av polymeraskedjereaktion (PCR) innan den överförs till växthus för att slå rot. 10 15 20 25 30 35 520 353 8 Ljusförhållandena i växthuset är 16 timmars ljus och 8 timmars mörker med en temperatur på 22 i 2°C. I ett stadium med tre till fyra blad, sprutas den lilla plantan med en vattenlösning av Roundup® med en dos på 0,1 till 20 l, företrädesvis 1 liter per hektar. Visuell skadevär- dering med avseende på plantvigör och plantkloros baserat pà en skala från O (död planta) till 9 (fullständigt opå- verkad planta) görs pà enskilda plantor 2 veckor efter glyfosfatpàföring. En värdering pà O till 3 är känneteck- nande för känsliga plantor. En värdering på 3 till 7 an- ger en toleransnivà pà låg till medel och en värdering på 8 till 9 anger en god toleransnivà. Närmare bestämt har värderingen följande betydelse: 9 W Opåverkad planta identisk med obehandlad kontroll 8 m Endast mycket liten nekros på bladens toppar med mindre än 5% av bladytan påverkad och gul 7 m Mycket litet nekros på bladens toppar, vilka bör- jar krökas; mindre än 5% av bladytan är påverkad och gul e,5,4 ökande nekros den blddkrökning; bladen blir mind- re än normala 3,2 m Ingen eller mycket begränsad bladtillväxt; alla blad är krökta och påverkade av nekros 1 W Ingen bladtillväxt; upp till 5% av plantan för- blir grön O m Död planta För att samla data fràn fältet förökas och förädlas vidare försöksplantor med normal vigör och opåverkade av glyfosfatbehandling (värdering 9) med konventionell tek- nik.
Transformering genomförs företrädesvis med använd- ning av en Ti-vektor innefattande en del av DNA med sek- vensen som ges i SEQ ID NR: 5 innehållande cp4/epsps och gox-generna vilka båda har rapporterats ge glyfosfattole- rans hos vissa växtsorter och reportergenen uidA som ko- dar för ß-glukuronidasenzymet. Den förstärkta 35S-promo- torn (Odell et al., Nature 313: 810-812, 1985) kopplas lO 15 20 25 30 35 v» _ t. I ,.,,, u! .Vvrj ; i! i. «- = ~ - , 9 e» :v «- n. e I« :i » :.,» - 1 . n-u 1 -v i v, , . . .. . a, i f a » - w = '= 9 till uidA-genen, figworthmosaikvirus (FMV)-promotorn (Gouwda et al., J. Cell. Biochem. Suppl. l3D: 301, 1989) till CP4/epsps och gox-generna. Uppströms om cp4/epsps och gox-generna sätts en transitpeptid in för att uppnå målsökning hos båda proteinerna till kloroplasten.
Ett transformationsfall som genererades i enlighet med föreliggande uppfinning visade sig överraskande vara opàverkat av doser av upp till 3 gånger 6 liter (ca 18 liter) av herbiciden Roundup® per hektar. Molekylanalys avslöjar att I det finns en enda kopia av transgent DNA integrerat vid ett enda lokus; 0 ifrågavarande integrerade DNA kodar för cp4/epsps och motsvarar trunkerat vektor-DNA; 0 ifrågavarande integrerade DNA ersätter en del av ge- nomiskt DNA och har sekvensen som visas i SEQ ID NR: l; I ifrågavarande genoma DNA som är direkt närliggande ifrågavarande integrerade DNA kännetecknas av sek- Venserna SEQ ID NR: 2 Och SEQ ID NR: rar i det nya genoma sekvensarrangemanget SEQ ID NR: 4; 0 cp4/epsps- och uidA-generna är intakta medan goxge- 3 och resulte- nen är trunkerad; 0 andra vektorsekvenser är inte närvarande i de trans- gena plantorna.
Nu då denna information är tillgänglig kan plantor härledda från ett av de specifika transformationsfallen enligt uppfinningen lätt särskiljas från andra socker- betsplantor genom PCR: Lämpliga primerparskombinationer gör det möjligt att specifikt identifiera genoma DNA-sek- venser, vilka endast är närvarande i plantor som direkt eller indirekt är ett resultat av identiska transforma- tiontonsfall. Sådana fall är inte på något sätt begränsa- de till dem, som erhållits genom agrobakteriemedierad transformation utan kan även vara ett resultat av biolis- tiska transformationsförsök. -..«» 10 15 20 25 30 35 . .- .= -v " . . u. ... - . H I _ _ , , .. _ _ , .. .f -I :_ , . . x. : f _ .--" I'.......---;' _ . j” É".'.. -_1- *_,".. -H H . f » fi ' * 10 Föreliggande uppfinning avser sålunda vidare en soc- kerbetsplanta inklusive avkomlingarna därav som känne- tecknas av att PCR-amplifiering med sitt genoma DNA som templat resulterar i amplifiering av ett DNA-fragment på 739 bp när ett par av oligonukleotid- primers används som kännetecknas av sekvenserna SEQ ID NR: B och SEQ ID NR: a; eller ett DNA-fragment pà 834 bp när ett par av oligonukleotid- primers används som kännetecknas av sekvenserna SEQ ID NR: D och SEQ ID NR: e; eller ett DNA-fragment pà 1057 bp när ett par av oligonukleo- tidprimers används som kännetecknas av sekvenserna SEQ ID NR: A och SEQ ID NR: b; eller ett DNA-fragment pà 1224 bp när ett par av oligonukleo- tidprimers används som kännetecknas av sekvenserna SEQ ID NR: C OCh SEQ ID NR: f.
EXEMPEL Följande exempel beskriver ytterligare materialen och metoderna som används för att utföra uppfinningen och de påföljande resultaten. De ges som illustration och de- ras beskrivning skall inte anses som en begränsning av uppfinningen som den anges i kraven.
Exempel l Sockerbetstransformation Sockerbeta av genotypen AlO12 transformeras med en vektor som innehåller en cp4/epsps och en gox-gen med förmåga att ge glyfosfattolerans, nptll-genen, som ger resistens mot antibiotikan kanamycin och reportergenen uidA som ko- dar för ß-glukuronidas (GUS). nptll- och uidA-generna är funktionellt kopplade till den förstärkta 358-promotorn (Odell et al., Nature 313: 810-812, 1985) medan cp4/- epsps- och gox-generna är under kontroll av figworth mo- saikvirus (FMV)-promotorn (Gouwda et al., J. Cell. Bio- chem. Suppl. 13D: 301, 1989). Dessutom är cp4/epsps- och gox-generna kopplade till en transitpeptid (Gasser et al., J. Biol. Chem. 263: 4280-4289, 1988) belägen 5' där- 10 15 20 25 30 35 520 s5zš¥ëäFff*¿*7 ll om för att målsöka båda proteinerna till kloroplasten. cp4/epsps och uidA använder E9 3'-terminatorsekvenserna medan gox och nptll använder motsvarande NOS 3'-sekven- sen. trans- In vitroodlad sockerbeta (Beta vulgaris. L) formeras med A. tumefaciens. Plantor regenereras såsom beskrivits av Fry et al. (”Genotype-independent transfor- mation of sugarbeet using Agrobacterium tumefaciens”, Third international congress of plant mol. biol., Tuscon, Arizona, USA, 1991) och Konwar (J. Plant Biochem & Bio- tech 3: 37-41, 1994) med användning av glyfosfat vid en koncentration på 1 mM som selektionsmedel. För att elimi- nera A. tumefaciens inkuberas kotyledonen tre gånger i MS-medium innehållande 500 mg/lit. cefotaxim (60 min. vid 45-50 rpm). kors selektion på 1 mM glyfosfat, Regenererade skott analyseras efter 8-12 vec- 500 mg/lit. cefotaxim inklusive överföring till färskt media var tredje vecka.
Varje transgent skott mikroförökas vidare till 10 kopior, analyseras med avseende på närvaron av transgenen och överförs till växthus för att rotas.
Polymeraskedjereaktion (PCR) används för att verifi- era närvaron av cp4/epsps-genen. Tjugo mg våxtmaterial uppsamlas i ett eppendorfrör från skott regenererade in vitro. Totalt DNA extraheras huvudsakligen enligt Tai et al, Plant Mol. Biol. 297-303, 1990. eringar är tillsättning av 500 ul av 100 mM Tris-HCl pH 8,0 innehållande 50 mM Na-EDTA, 1,25% SDS 0,38% Na-bisulfit (vikt/volym) och 200 pg/ml proteinas K Rep 8: Mindre modifi- (vikt/volym), och inkubering vid 65°C i två timmar. Olöst bladmaterial fångas upp och total DNA fälls och fryses i 2 timmar vid -20°C. PCR genomförs enligt instruktionerna som inklude- ras i Perkin-Elmer Gene-Amp PCR-kit (Perkin-Elmer Corp.) med användning av en modifierad 10x reaktionsbuffert som består av 100 mM Tris-HCl pH 8,3, 500 mM KCl, 30 mM MgCl2, 1,0% Nonidet P-40 (vikt/volym), i 24% sackaros (vikt/volym) och Taq Start Antibody (Clon- 0,4 uM cresol red tech). För amplifiering av cp4/epsps-sekvenserna används 10 15 20 25 30 35 520 353 12 följande primers (Shah et al., Science 233: 478-481, 1986): 5'-CAC CGG TCT TTT GGA AGG TGA AG-3' (SEQ ID NR: 6) Och 5'-AAC GAG ACC CAT AAC GAG GAA GC-3' (SEQ ID NR: 7) För amplifiering av en genomisk internkontrollsek- används följande primers: (SEQ ID NR; s) (SEQ ID NR: 9). vens (surA, surB) 5'-AAA CAG TCC CGT GCA TCC CCA AC-3' 5'-GAC GCT CTC CTT GAT TCT GTC CC-3' Ingen variation i transformationseffektivitet syns och mellan olika binära plasmider. Mikroförökade skott över- Ljusförhàllandena i växthuset 400 W), 16 förs till jord i växthuset. är 200 pmol m* sec4y (Osram Power Star HQI-Z, timmars ljus, 8 timmars mörker och en temperatur pà 22 i 2°C. Vid ett stadium med tre till fyra blad behandlas de små plantorna som är härledda fràn 260 oberoende transformanter med Roundup®. En kalibrerad spruta används för att pàföra en vattenlösning av herbiciden vid en dos pà 1 liter per hektar (360 g.a.i.l¿). Visuell skadevärde- ring med avseende pà fytotoxiska effekter, baserat pà en skala fràn 0 (komplett bladnekros) till 9 effekter) görs pà individuella plantor 2 veckor efter (inga synliga glyfosfatpàföringen. Pà 75 olika transformanter upptäck- tes fytotoxiska effekter som varierar från ett poängvärde pà 0-6. De andra 185 (71%) ängvärde pà 7 eller mer, vilket betyder att de visar transformanterna fär ett po- mindre eller inga synliga effekter efter behandling med herbiciden. Dessa korsas vidare med icke-transgena soc- kerbetor för att producera F1-avkommor för efterföljande utvärdering i fältförsök.
Fältförsök genomförs för att utvärdera de olika transformationsfallen under fältförhàllanden. Jordbiten består av tre rader, varje rad 9 meter läng, med ett av- stånd mellan raderna pà 0,5 m. En enskild transformant radsàs pà varje jordbit. Efter en första Roundup®-pàför- ing med 1 liter per hektar (360 g a.i.l4), vid kotyle- donstadiet, för att eliminera icke-transgena segregerande plantor väljs raderna för hand till ett slutligt bestànd 10 15 20 25 30 35 520 353 13 på en planta per 20 cm. Varje jordbit delas i tre delar En jordbit behandlas med de kon- ventionella herbiciderna metamitron 0,1 kg a.i.had, fen- som behandlas oberoende. medifan 0,2 kg a.i.ha4 och etofumesat 0,1 kg a.i.ha4.
Den andra jordbiten behandlas med 2 gånger 2 liter per hektar (1440 g a.i.l'1) av Roundup® och den tredje jordbi- ten behandlas med 2 gånger 4 liter (2880 g a.i.l*) av Roundup®. Plantorna behandlas i ett stadium med två blad och i ett stadium med fyra blad. Två veckor efter den sista påföringen poängsätts plantorna med avseende på fy- totoxiska effekter orsakade av herbicidpåföringen. Symp- tom som varierar från fullständigt känsliga till full- ständigt toleranta erhålles. Skillnader mellan poängsätt- ning i växthuset och poängsättning i fältförsöket obser- veras. Dessa beror troligen pà miljöskillnader mellan växthuset och fältförsöket inklusive frånvaro av UVB-ljus under glas. Det fanns inga morfologiska eller fysiologis- ka förändringar mellan plantor från jordbitar behandlade med olika doser av Roundup®, jämfört med behandlingarna med en konventionell herbicidblandning. Två transforman- ter visar stor tolerans för Roundup® efter behandling med 2 gånger 2 liter och 2 gånger 4 liter per hektar.
Efter sprutning med Roundup® mättes toleransen genom att gradera plantvigör (Tr.vig) och bladkloros (Tr.chl).
De olika graderna har följande betydelse: 9 W Opåverkad planta identisk med obehandlad kontroll 8 M Endast mycket litet nekros på bladens toppar med mindre än 5% av bladytan påverkad och gul 7 M Mycket litet nekros på bladens toppar med början till krökning; mindre än 5% av bladytan är påver- kad och gul 6,5,4 u Ökande nekros och bladkrökning; bladen blir mind- re än normalt 3,2 W Ingen eller mycket begränsad bladtillväxt; alla blad är krökta och påverkade av nekros 1 W Ingen planttillväxt; upp till 5% av plantan för- blir grön 520 353 l4 O m Död planta 22 olika transformationsfall (notering l-22) och l icke-transgen kontroll (notering 23) sprutas med 1 + 4 +4 liter Roundup®/Ha (totalt 9 l/ha). Resultaten av den vi- suella skadevärderingen ges i följande tabell.
NoTERING VIGÖRVÅRDERING KLoRosvÅRDE- RING (RRMaX) \DG7\10\U'|r$>L»)l\J|-' l-JP* b-'G }-' k) F* UJ P »ä- F' U'| |-' ON F* \I |-' m F* KO k) O [O F' l\) k) (icke transgen kontroll) 9 9 6 7 2 3 5 7 9 8 3 3 7 7 7 8 4 6 5 6 5 5 4 5 9 9 3 5 4 4 2 3 l l 2 2 6 8 7 5 4 5 5 7 O O h.) bd 10 15 20 25 30 35 520 353 15 Kopietal för ifrågavarande integrerade trans- gena DNA Exempel 2 Kopietalet för ifrågavarande transgena DNA som inte- grerats i genomet för den transformant med den högsta (RRMax) bestäms genom Southernblot- glyfosfattoleransen analys av restriktionsfragmenten som sträcker sig bortom de högra och vänstra gränssekvenserna hos den använda transformationsvektorn. Genomiskt DNA fràn RRMax och en icke-transgen planta med samma genetik isoleras frän 250 mg av frystorkat bladmaterial fràn sockerbeta enligt Sag- Natl. Acad. Sci. USA 8l:80l4- DNA frán den använda transformationsvektorn hai-Maroof et al., Proc. 8018, 1984. fungerar som positiv kontroll. 15 pg av DNA spjälkas med 120 enheter av restriktionsenzym i 4 timmar vid 37°C i en total volym på 400 ul. Ifràgavarande spjälkade DNA fälls och löses äter i en total volym pà 50 ul. Spjälkat DNA, positiv plasmidkontroll och molekylmarkörstorlekstandard (Lambda spjälkad med EcoRI och HindIII) O,8% agarosgel. DNA visualiseras med etidiumbromid och separeras pä en ett fotografi inklusive en linjal tas. Ifràgavarande DNA överförs därefter till ett Hybond N+membran och hybridi- seras till proben såsom beskrivits av Ausubel et al. (eds) i: Publishing Associates, New York, 1987.
Prober som är komplementära till baspasren 975-1766 ”Current protocols in molecular biology”, Green Inc. och John Wiley & Sons, Inc., hos cp4/epsps gensekvensen (SEQ ID NR: 5) och basparen (SEQ ID NR: 5) genom polymeraskedjereaktion (PCR), varvid den använda 7108-7535 hos gox-gensekvensen framställs transformationsvektorn fungerar som templat-DNA för reak- tionen. cp4/epsps-proben används för att bestämma antalet insatta DNA-fragment som flankerar den högra gränsregio- nen. Gox-proben används för att bestämma antalet insatta DNA-fragment som flankerar den vänstra gränsregionen.
PCR-produkterna renas med användning av Geneclean II® Kit fràn BIO lOl (La Jolla, CA). Märkning av proben med ”P uppnås med användning av MegaprimeTM DNA-märkningssystem fràn Amersham International (Little Chalfont, UK). 10 15 20 25 30 35 .n L- 520 353 16 Bestämning av kopietal kan genomföras genom analys av genomiskt DNA som flankerar den högra gränsregionen.
Genomiskt DNA spjälkas med restriktionsenzymet Ncol, som klipper de plasmidhärledda sekvenserna mellan 35S-promo- torn och uidA-genen och inom sockerbetsgenomet. Membranet förses med en prob av det interna PCR-fragmentet fràn cp4/epsps-genen. Efter spjälkning med Ncol och hybridise- ring med cp4/epsps-proben detekteras ett enda band pá 4,7 kb i RRMaX. Detta visar en enda kopia av överfört DNA på ett enda lokus.
Bestämning av kopietal kan även genomföras genom analys av genomiskt DNA som flankerar den vänstra gräns- regionen. Genomiskt DNA spjälkas med restriktionsenzymet Hindlll som klipper de plasmidhärledda sekvenserna mellan E9 3'-terminatorn hos uidA-genen och FMV-promotorn hos gox-genen och inom sockerbetsgenomet. Efter spjälkning med Hindlll och hybridisering med gox-proben, detekteras ett enda band pà ca 2,0 kb för transformanten RRMax. Ef- tersom den minsta förväntade fragmentstorleken är 2 4,4 kb, indikerar resultatet en trunkering av ifrågavarande plasmid-DNA under överföringen till plantans genomiska DNA. Hur som helst, enda kopia av överfört DNA integreras vid ett enda lokus. resultatet bekräftar att endast en Exempel 3 Sekvensanalys av RRMax-integrationssätet Genomisk RRMax DNA isoleras från 250 mg av frystor- kat bladmaterial fràn sockerbeta enligt Saghai-Maroof et al. Som ovan. Ett ÄFIXII-fagbibliotek med insatta DNA- sekvensstorlekar pà 9-23 kb i ett Xhol-kloningssäte fram- ställs (beställd med Stratagene) och försedd med prob av cp4/epsps och gox-prober för att selektera för förmodade kloner som täcker integrationsfallet. Totalt 25 fager de- tekteras, vilka hybridiserar till cp4/epsps eller gox- proben. Tvá kloner visade sig hybridisera till cp4/epsps- proben respektive gox-proben. En av dem renas (Fritsch et al., 1987) analys och PCR. Den innehåller en 15-16 kb insatt DNA- och utvärderas vidare genom southernblot- 10 15 20 25 520 355 ä ïïf* 17 sekvens av genomiskt DNA inklusive ifrågavarande transge- na DNA och de flankerande sockerbetssekvenserna. Nämnda flankerande sekvenser amplifieras genom PCR med använd- ning av en primer som matchar FMV-promotorn eller gox- gensekvenser i kombination med en primer som matchar en sekvens i ÄFIXII-kloningskassetten (detaljerade sekvenser ges i Tabell 1 nedan). De integrerade DNA/sockerbetsöver- gàngsregionerna sekveneras genom Sanger dideoximedierad kedjetermineringsmetoden med användning av Applied Biosy- modell 373A, version 2.1.1. Primers som använts stems, för sekvenering ges i Tabell 2.
Tabell 1: Primers använda för amplifiering av gränsregio- Ile rnâ PRIMER SEKVENS #3 5'-CAAGAAGGTTGGTATCGCTG-3' (SEQ ID NR: 10) #7 5'~TCTTTTGTGGTCGTCACTGCGTT-3' (SEQ ID NR: 11) #8 5'-GCGAGCTCTAATACGACTCACTAT-3' (SEQ ID NR: 12) #9 5'-CGCGAGCTCAATTAACCCTCACT-3' (SEQ ID NR: 13) Tabell 2: Sekveneringsprimers PRIMER SEKVENS BESKRIVNING S1 5'-TCTGTACCCTGACCTTGTTG-3' För att sekvenera den (SEQ ID NR; 14) flankerande högra gräns- regionen S3 5'-CGTGGATACCACATCGTGAT-3' För att sekvenera den (SEQ ID NR: 15) flankerande vänstra gränsregionen S4 5'-ACCTTGGCTTGAAGTACTC-3' För att sekvenera den (SEQ IDD NR: 16) flankerande vänstra gränsregionen Sekvensanalays avslöjade att ifrågavarande transgena DNA som integrerats i genomet för RRMax har nukleotidsek- vensen som ges i SEQ ID NR:1. Integrationens startpunkt ligger mellan den högra gränssekvensen och FMV-promotorn och slutar 897 baspar nedströms om gox-startkodonet.
Translationsstoppkodon för den trunkerade gox-genen kan 10 15 20 25 30 -- f- * . -- «~ ;'.,I'... .'.- '- - ; _ . a 18 hittas 130 och 235 baspar nedströms om förbindelsesätet.
Ett Hindlll-säte identifieras 210 baspar nedströms och en transkriptionstermineringssignal (AATAAA) SEQ ID NR: DNA-sekvens hos ifrågavarande genoma DNA som är direkt 650 baspar ned- ströms om gox-startkodonet. 2 beskriver den kopplat till den högra gränsregionen hos ifrågavarande transgena DNA och SEQ ID NR: 3 den DNA-sekvens hos ifrå- gavarande genoma DNA som är direkt kopplat till den vänstra gränsregionen hos ifrågavarande transgena DNA.
Karaktärisering av ifrågavarande transgena DNA som integrerats av RRMax Exempel 4: För att ytterligare karaktärisera den högra gränsre- gionen, spjälkas genomiskt DNA från RRMaX och transforma- tionsvektor-DNA med antingen restriktionsenzym BamHl, Hindlll, Bcll eller EcoRl. ifrågavarande klippta DNA med en prob av cp4/epsps PCR- I southernblot-analys förses fragmentet som beskrivits i Exempel 2. Oberoende av det använda restriktionsenzymet, ger spjälkning med de olika restriktionsenzymerna upphov till ett enda fragment i southernblot-analys. Storleken hos de detekterade frag- menten anges i Tabell 3. Data visar att en enda kopia av DNA överfördes till plantan och att DNA-överföringen till sockerbetsplantan resulterade i fullständig överföring av cp4/epsps-genen. Resultaten är i överensstämmelse med re- sultaten från kopietalbestämningen i Exempel 2 och nukle- otidsekvensanalysen från Exempel 3.
Tabell 3: Southernblot-fragmentstorlekar ENZYM RRMax TRANSFORMATIONSVEKTOR BamHl > 10 kb 9,7 kb Hindlll 2,4 kb 2,4 kb Bcll 3,2 kb 2,9 kb EcoRl 1,8 kb 1,8 kb 10 l5 20 25 30 , H H n. .n - ' " 'i ß '* ' _ :\ ,, I. I: D , , .. 2() ""I ï3~«-~--= r n. , = v =' 5 3553 _... , H Ä a f ~ '* ^ 19 För att ytterligare karaktärisera den integrerade delen av transgent DNA, spjälkas genomiskt DNA fràn RRMax med antingen restriktionsenzym Ncol, BamHl eller Hindlll.
Som kontroll spjälkas transformationsvektor-DNA med samma restriktionsenzymer. Blotten förses med en prob av ett PCR-amplifierat DNA-fragment som omspänner basparen 3796- 4837 av uidA-genen i SEQ ID NR: 5. De detekterade frag- mentens storlek anges i Tabell 4. Oberoende av använt re- striktionsenzym, ger spjälkning med de olika restrik- tionsenzymerna upphov till en enda signal på den autora- diografa filmen, vilket demonstrerar att den insatta DNA- sekvensen har samma kännetecken som ifrågavarande interna DNA fràn den använda transformationsvektorn.
Tabell 4: Southernblot-fragmentstorlek ENZYM TRANSFORMSTIONSVEKTOR RRMax Ncol 3,4 kb 3,4 kb BamHl 3,2 kb 3,2 kb Hindlll 3,2 kb 3,2 kb För att ytterligare karaktärisera den vänstra gräns- regionen spjälkas genomiskt DNA fràn RRMax och transfor- mationsvektor-DNA med antingen restriktionsenzym Ncol, BamHl, Hindll eller EcoRl. ifrågavarande klippta DNA med en prob av gox-PCR-fragmen- I southernblot-analys förses tet som beskrivits i Exempel 2. Storleken pà de detekte- rade fragmenten anges i Tabell 5. Oberoende av det använ- da restriktionsenzymet, ger spjälkning med de olika re- striktionsenzymerna upphov till ett enda fragment pà den autoradiografa filmen. Spjälkning med antingen restrik- tionsenzym Ncol, BamHl eller EcoRl förväntas identifiera ett internt fragment av känd storlek. Inga av dessa res- triktionsenzymer ger emellertid upphov till ett sådant internt fragment av den förväntade storleken. Detta indi- kerar att restriktionssätena för Ncol, BamHl och EcoRl är frånvarande i den transgena plantan. Resultaten är i «-r.-e 10 15 20 25 30 520 353 20 överensstämmelse med de resultat som erhållits genom sek- venering där det visade sig att gox-genen endast delvis var integrerad i plantan. Spjälkning med restriktionsen- zym Hindlll ger upphov till ett fragment pà ca 2 kb, vil- ket ytterligare bekräftas i de sekveneringsdata där ett Hindlll-säte är lokaliserat nedströms gox-genen i geno- met. Resultaten visar också att en enda kopia av ifräga- varande transgena DNA har överförts till plantan. De kor- relerar bra med de primära resultaten fràn kopietalsbe- stämningen i Exempel 2 och nukleotidsekvensanalysen i Ex- empel 3. En enda kopia integreras i plantgenomet medan gox-genen delvis avlägsnas.
Tabell 5: Southernblot-fragmentstorlekar ENZYM TRANSFORMSTIONSVEKTOR T9l0Ol52 Ncol 2,5 kb 3,0 kb BamHl 2,9 kb > 10 kb Hindlll 9,5 kb 2,0 kb EcoRl 1,6 kb 3,6 kb Exempel 5: Frånvaro av andra vektor DNA-sekvenser För att verifiera frånvaron av oriV-, ori-322-, aad- och nptll-sekvenserna i transformationsfallet RRMax kan southernblot-analys genomföras med användning av restrik- tionsenzym/probkombinationer som täcker oriV, ori-322, aad och nptll.
Transformationsvektor DNA spjälkas med restriktions- enzym Nspl som klipper plasmiden pà 17 ställen. För ana- lysändamàl renas ett Nspl-fragment som täcker oriV och ett fragment som täcker ori-322 och aad och används för southernblot-analys. Ett PCR-amplifierat fragment med nukleotidsekvensen som ges i SEQ ID NR: 26 används för att framställa prober för nptll-sekvenser. Alla fragment renas med Geneclean II® Kit fràn BIO 101 (La Jolla, CA). 10 15 20 25 30 35 1~'*_', ,...:-'I_ ..; .f f- -1 I' . 1 u. va i ) _., _. 520 553 21 Märkning med ”P erhålles med Megaprime“*DMA-märk- ningssystem från Amersham International (Little Shalfont, UK): Genomiskt DNA från RRMax klyvs med restriktionsenzy- met BamHl som klipper transformationsvektor-DNA på tre ställen, belägna vid basparen 2321, 5544 och 8413 hos SEQ ID NR: 5. föringsmembranet med proben som täcker oriV misslyckades Hybridisering av det motsvarande southern-över- med att detektera en signal. Slutsatsen måste dras att oriV inte är närvarande i RRMax.
Hybridisering av det motsvarande southern-överför- ingsmembranet med proben som täcker ori-322 och aad miss- lyckades med att detektera en signal. Slutsatsen måste dras att ori-322 och aad-sekvenserna inte är närvarande i RRMax.
Hybridisering av det motsvarande southern-överför- ingsmembranet med nptll-proben misslyckades också med att detektera en signal, vilket visar att en nptll-gen inte är närvarande i linje RRMax.
Exempel 6 Stabilitet hos RRMax-linjen Spjälkning av genomiskt DNA med restriktionsenzymet Bcll och southernblot-analys med användning av cp4/epsps- genen som prob genomförs såsom beskrivits i Exempel 2.
Fyra plantor fràn generationerna 2 och 3 och fem plantor från generation 4 används för denna analys. Dessutom an- vänds tre icke-transgena plantor som negativ kontroll.
Analys av det primära transformationsfallet resulterar i ett enda fragment pà 3,2 kb. Southernblot-analys av ef- terkommande generationer resulterar också i ett enda fragment på 3,2 kb. Om ifrågavarande införda DNA ärvs stabilt- från generation till generation, förväntas samma fragment pà 3,2 kb hos alla plantor.
Spjälkning av genomiskt DNA med Hindlll och soutern- blot-analys med användning av ett internt fragment av gox-genen som prob genomförs såsom beskrivits i Exempel 2. Analys av det primära transformationsfallet resulterar 10 15 _ H -~ eflà >- i ',,"..'u . z ' - ' ' af o I -' i f- -f f' , ..,v I» :' 5.. v ; _ , 1 .- Ä » I f ^* ' i' 22 i ett enda fragment på 2,0 kb. Southernblot-analys av de efterkommande generationerna resulterar också i ett enda fragment pà 2,0 kb, vilket indikerar ett stabilt arv av de karaktäristiska draget.
Exempel 7 PCR-karaktärisering av RRMax Genomiskt DNA fràn linje RRMax framställs sásom be- skrivits i Exempel 2. Ca 0,5 pg av DNA används som temp- lat-DNA i en PCR-reaktion med användning av specifika kombinationer av primers som kännetecknas av sekvenserna som ges i Tabell 6. Nämnda specifika kombinationer och storleken för de amplifierade fragmenten ges i Tabell 7.
Beroende pà primerparkombinationen används en hybridise- ringstemperatur pà mellan 55°C och 65°C i var och en av de 30-35 amplifieringscyklerna.
Tabell 6: Primersekvenser PRIMER SEKVENS BESKRIVNING A 5'TCAACCTACAGCTGATTTGGACC-3' Nära den högra gränsför- (SEQ ID NR: 17) bindelsen B 5'-GGACCGGAACGACAATCTGATC-3' Nära den högra gränsför- (SEQ ID NR: 18) bindelsen C 5'-CTAGGGAAGTCCAAATCAGCCG-3' Nära den vänstra gräns- (SEQ ID NR; 19) förbindelsen D 5'-TTTGGACCGGAACTTTCCAGAAG-3' Nära den vänstra gräns- (SEQ ID NR. 20) förbindelsen a 5'-CTAACTTGCGCCATCGGAGAAAC-3' Inom cp4/epsps-genen (SEQ ID NR: 21) b 5'-GACTTGTCACCTGGAATACGGAC-3' Inom cp4/epsps-genen (SEQ ID NR: 22) c 5'-ATTCTTGAGCTCATCAAGCAGCC-3' Inom cp4/epsps-genen (SEQ ID NR: 23) e 5'-AAGGTTGGTATCGCTGGAGCTG-3' Inom gox-sekvensen (SEQ ID NR. 24) f 5'-TCTCCACAATGGCTTCCTCTATG-3' Inom gox-sekvensen (SEQ ID NR; 25) 520 353 à*ffiÅ"¥”~= 23 Tabell 7: Specifika primerkombinationer Kombination Storlek på amplifierat fragment A + a 757 bp A + b 1057 bp A + c 2352 bp B + a 739 bp (SEQ ID NR: 27) B + b 1039 bp B + c 2334 bp c + e sas bp c + f 1224 bp D + e 834 bp D f 1178 bp 520 24 SEKVENSLISTA (1) ALLMÄN INFORMATION: (i) SÖKANDE; (A) NAMN; NovARTIs AG (B) GATA: Schwarzwaldallee 215 (C) STAD: Basel (E) LAND: Schweiz (F) PosTKoD (zIP)= 4058 (G) TELEFON; + 41 61 324 11 11 (H) TELEFAX; + 41 61 322 75 32 (ii) UPPFINNINGENS TITEL: Transgen planta. (iii) ANTAL SEKVENSER: 27 (iv) FORM LÃSBAR I DATOR: (A) MEDIUMTYP: Floppy disk (B) DATOR: IBM PC compatible (C) OPERATIVSYSTEM: PC-DOSÅMS-DOS (D) MJUKVARA: Patentln Release #l.O, version) #l.25 (EPO) 1 (2) INFORMATION OM SEK. ID. NR: l: (i) SEKVEN§KARAKTÃRISTIK: (A) LANGD: 8012 baspar (B) TYP¿ nukleinsyra (C) STRANGTYP: dubbel (D) TOPOLOGI: linjär (ii) MOLEKYLTYP: (genomisk) (iii) HYPOTETISK: nej (iii) ANTI-sENsE= nej (Xi) SEKVENSBESKRIVNING: SEK.ID.NR: l NKEHÜVHC ¶¶flÉOI3fl'GM%CTK¥G CK3EENNfl“AGGMIETKICAGÅTKIET ¶3¥flCANÜ\PßGTNI%ßC CNHMKEKKT TÄTRÜVUHT G3HflOGX3\AAN33$GAA GGNKÉCGÜXTCCKEANISTTKH%N3¶\N$UflTCKE.GKIÄNKEC'KEACNKET CAGIHÉCMÉAGTÛKIÉAACERFUGOÜÄAAMIKACMSGN¶flCNHG.N%%ÄKflTC AAÜUQAGUÄAACUMHGTTCCMIFCKR3CAHBHGGKIAGUUGTTKÉAGNUANEE ATGÜMII$A.GACTH¥VEÉ TNFKIIIIT CTPK§VAGTI$flCTKHÉE.ACNRIEGCA 60 120 180 240' 300 360 AAAGCATCTT AAATAACGU3 TGACGACCAC TCAGA¶%C¶G GAGGAAGATC GAAAïCCAGT AGCTTÄICCG TGAGCTTCGT AAGCAGCCGT AGGTGACAAG TCGTATCACC TATGGGTGCC TGGACTCCTT GACTAÉGGGT CACTAAGCGT GTCTGAAGAC CACCTACAGG CAACACCCCA GATGCTTCAA CNHXIHXÉT ATCCTCTACT CCTTÄACGTT TGCCGACATC TGTTCGTTCT CGACGAGTAT CGGTTTCGAA 520 353 25 GGGGACCAGA CAAAAAAGGA AEGGTGCAGA AITGTTQGGC TGCCTTT%HT GCAAAGATAA AGCAGATTCC GAAAAGAGCT GTCCTGACAG CCCACTCACT AAAAGAATTC CCTCTNINTA AGAAGGCÄTT AACCAAKCCT AAAAITTTCA Tɶ%GAAGAT AICCCCAITC CTAAGCTTAT TTCGAETGCT AGCAGAAICT GCAHUÄÉFST GCAGAACCCA CAACGCAAAT CTCCCTTÉEC GEH¶¶É¶É¶G AHTTCGTCGT CGTGGGGATT GAAGAAGAGT CCTCTT%AGG CCAGCAACTG TCAIGTCHTC CTCGTAAGTC TGTTTCCACG CÉCHÉÉHÉÉT TCTATCTCCC ACAGGTCCTT CATGTTTGGA GGTCTTTTGG AAGGTGAAGA TGTT%ECAAC AGAATCOGIA AGGAAGGTGA TÉCETGGATC GCTCCTGAGG CTDÉPRÄÉHS CCANRXIHC GGTGATCGTC GTACCTNU33 GGTÄTCACCA GGTTTKXHG GAAGGTCGTG GCTTTCCCAT TTÉÉHGAACC GAN¶K¥flCA TÉfi%CTTTGA CCAAETÉTCC GAALÜKXKÉDS CTCCTCTCGA TT¶%CGNTPT GTGTGTTGAA TTÉIFEHTÄC CHTCCGCTCA CHÉHTÉECGÅ CTAACCTTÄC GTAAGCTCAO TGGTKXHCC CAACCCGTAC ACCCACGTCT AGGGTGTTÄC CÉÉHTGCAGC TTAAGGAAAG TTTCGGTAAC CGATAGCACT CCCACTTCGC CTTÉXIFRÄSA AGTGAAGTCC GCCAATCATG CGTTGAGACT CGGTCAAGTG CTTGCTTGTT TGGTCTCAIC TGCTGGTGGA TCÉÄGTACAA AAEGCGTHFS CAETCCCATT CGATAAGCTT TCAAHTGAAG TÉEÉETÉECT AAGACGCAGC GGGAIGACGT GCGHGCAIGC TCTGGAACOG GGTCTCGCTA ACTGGTAAGG AJTGATGGTG GCTGCAACTG TTCHTRXHG GAAÄHIXHG CCAAAGACTC GEÉÉHTCIGC ACTCGTGACC GATGCTGACG ATTGATGTTC CCAGGTTCCG THEKHÉÉGC GAAGNSÉFÄS GCACCT%CCA GTGGGGAACA ACGAACGCAG TGAAGGATCA GATGTÄAKTG TTTCTCCGRT CCAAHCTÉHC AGCATCCACG TANTRIIHC TCCGTÉETCC GCGGTGAAAC CTÄEGCAAGC TTGGTAACGG TGCAGGTGAA CAACGCCAAT T¶ÉEflÉEHCT ACACTGAAAA GTGRXIHÄC CAGGTGATCC ACGTCACCAT AGGAAAïGGG CTGACTU333 TGTTCCAGAA GACCGTGCTC CTTCTATGNT TGCAÉTCGCT GAAGGTGCTA CCEHÉÉEGAA CGACCGTCTT TÉHÉKÉÉHCG CAAACGGTCT 420 480 540 600 660 720 780 840 900 960 1020 1080 1140 1200 1260 1320 1380 1440 1500 1560 1620 1680 1740 1800 1860 1920 1980 2040 CAAGCTCAAC TGACGGTAAG TEHCGCTÄUS TGCTACTHU3 T%AGAICGAA CGGATCCTCT AAIGCATCAG GGGAAAACTG TTTGAARTIA CCTCTAATGA TTCÉCTÉGGC GTAIGTCCTC TTÉHÉÄGATT AIGAAAATKT GACCTGCAGC CAACAAAGGG AETGTGAAGA AAGGCCATCG AGGAGCATCG GATGGTCCGA TTGCCCAGCT AIGCCATCAT CAAAGATGGA TTCAAAGCAA CT%ECCTTCG GGU3PK¥flT GGTCTCGGTA AïCGCT%CTA CTCÉCCGACA AGCTAGAGCT TTTCÉETGCG TTTÉTCTTGT TCGAACTGU3 AETCTCAAAT TAAGAGATAT CCGAAGTTAA AACAAATATA TRIKHTTTA C¶%AICATU3 ¶¶¶TT%AïGC CACTCGAAGC TAATATCCGG TÄGTGGÅAAA TTGAAGATGC TGGAAAAAGA TGHGAGACTT AHCTGTCACT TGCGATAAAG CCCCCACCCA GRIHHTGNT CAAGACCCTT GCGAÉGAAGG ACGCTTCTGG TINHÄIÉHÛT GCTTCCCAGA CTAAGGCTGC TTCGTTCGTA CACACACCAG ACCRTTDÉTT AAAEGGAAAT TAATNTENTT GCAAACKTTT TÄEGAGGAGT TTTTCAGACC GACÄTTEND3 CHTTÄTAHTT AETTTEEGAC GGCCGCGTTC AAACCTCCTC GGAAGGTGGC CECTGCCGAC AGACGTTCCA TTCÅACAAAG TT%JTGfiGAA GAAAGGCCAT CGAGGAGCAT GTGATAICTC CCTCTAEATA 520 353 26 TGAGACTUÉT CEHTTÉEGAA GTTCATGGAT TTGAÉGAGCT TCÉECGGTTT AAICCTÉCTG GHGCTTGTAA GGAEG8AGAA TÉHTTTTTCT TGTTTTGAGT AAAACACTTG T%GAAAAGCT AACTFKIHT Aï%GTT%TAC TTGCCARTF3 AAGCTTCTGC GGAïTCCÄTT TCCTQCAAAT AGTGGTCCCA ACCACGTCTT GGTÄA¶%ECC GAï%GTGGAA CGTHEVEET CGTGGAAAAA CACTGACGTA CTCGTCGTGC GCTACCCACC AACCCTGTTA mmm CAAGAAETCG CGACAACGTT AGTTCGAGTA TTTÄCÜGUGT GAGTTAATGA CTINTTUGTT AAAANUÉDQT TÄGTTGTACC GCAAHDÉTIA TÄIGTAATTT TCATGGHTTT AETGACAACA AGGTCCGATG GCCCAGCTNT GCCAECÄTTG AAGAEGGACC CAAAGCAAGT GGAAACCTCC AAGGAAGGTG GCCUÉKIIE GAAGACGTTC AGGGAIGACG TCGATCACCG CÉEHTGAIGA AGCflIXH%C TTÉEGGCHTT TTTTTÉHTCG AEGATHDQST CAAAICGTGG AETÉTGCTTA CTGAATACAA TCCAGAATCC GT%GTTGAGT TGCATCAATC TGAGACTTTT CU3R3Kfl¶T CGATAAAGGA CCCACCCACG GGATTGATGT TCGGATTCCA GCTCCTACAA ACAGTGGTCC CAACCACGTC CACAATCCCA AGGAAGTTCA TTTCAETTGG AGAGGACACG 2100 2160 2220 2280 2340 2400 2460 2520 2580 2640 2700 2760 2820 2880 2940 3000 3060 3120 3180 3240 3300 3360 3420 3480 3540 3600 3660 -f.,» CTGACAAGCT GACTCTÄGCA ATCAAAAAAC TCGACGGCCT CAGCGHTGGT GGGAAAGCGC AACGATCAGT TCGCCGAEGC GAAGTCTTTA TACCGAAAGG ACTCATTACG GCAAAGTGTG ACGCCAETTG AAGCCGHUGT GTTTGTGTGA ACAACGAACT GAAAACGGCA AGAAAAAGCA CGCAGCGTAA TGCTCT%CAC CAÉGTCGCGC AAGAC¶ÉH%A GTCASCGTTG AACTGCGTGA GXEKHHTGC CTGTGCGTCA CGGTCAGTGG GGCTTTGGTC GTGCACGACC CCTHMXIHG ACTOCTGCTC AAAGAACTGT AïT%AAGAGC AACGAACCGG ACGCGTAAAC CACACCGATA TATGTCCAAA TGGCAGGAGA GGGCTGCACT AKGTAICACC AAGTGGTGAA CAGCCAAAAG CAGTGAAGGG GTCAIGAAGA ACGCNTTAAT AAGAGAIGCT T{EEK¶T¶%A ACAGCGAAGA TGATAGCGCG ATACCCGTCC TCGACCCGAC CCATCAGCGA GCGGCGATTT AACTGCATCA CAAIGTACAC GKIHYHTTGA GATCTCCAIG GFÄIXEHTC GTTACAAGAA AGATKTHIÉP TTGGGCAGGC GGTCAATAAT CACGCCGTAT GAACTGGCAG GTCTTACTTC CACGCCEEAC CCACGCGTCT TGCGGATCAA TCCGCACCTC CCAGACAGAG CGAACAGTTC TGCGGACTTA GGACTGGATT CGACTGGGCA CIHCTCTTIA GGCAGTCAAC TGACAAAAAC TGCACGGGAA GCGTCCGATC TC¶C¶TTGAT GGAAACGGCA GCCGAET%HC CGACNRÉDQS TCGCGTCAGC 520 353 27 AGTCTGGATC AGCCGGGCAA AAHTÉHGCGG CAGCGTNPÜS CAGGAAGTGA GHTQETGCCG ACT%ECCCGC CAÉGAITTCT PEEEGGGTGS GTUSNCBHQC CAGGTGGTU3 TGGCAACCGG TÉHGATNUÛT CTGAITQACC CGTGGCAAAG GGGGCCAACT GAEGAACAIG GGCHTHRÉPT GGGGAAACTC CACCCAAGCG T%¶TTCGGCA ACCTGCGTCA GTGCTGTGCC GAGAAGGTAC AÉCACCGAAT AGTGAAGAGT TAGAAACCCC AACCCGTGAA GCGAAAACTG TGGAAETGAT TÜYKHÉHGCC AGGCAGTTTT GCAACGTCTG GTEECQGCGC TGCTGCGTTT CGATGCGGTC TGGAGCATCA GGGCGGCTÄT GGAAAAGTGT ACGTATCACC CGGGAAIGGT GATTACCGAC TT%AC¶%EGC CGGAATCCAT ACGATÄECAC OGRQGFSNSS AGGTGGTGGC CAAIGGTGAT CAACTGGACA AGGCACTÄGC GTGAAGGTTA TCTCT%IGAA ACCCGCTTCG ACAAACCGTT GAïTCGATAA CCÉVKXIÉPAC GCATCGTGGT TCGAAGCGGG AGCAAGCGCA TGGTGAIGTG TTTCGCCACT ÄUÉHVHGTT TGAACCGTTA TGGAAAAAGA ACGGCGTGGA AIÉÉKIKÉHQÉ CGTCGGCAÉC CTECÉTTÅCT GÉRQÛDSNUS CRIIBUTÅC GATTGATGAA CAACAAGCCG CTTACAGGCG GAGTÄITGCC GGCGGAAGCA CÉGCGACGCT TTECGGAIGG ACTTCTGGCC T%CGTT%GCC AIGGCTGGAT Gcccmcmc GIGAAcAGGr AmcAAmït 3720 3780 3840 3900 3960 4020 4080 4140 4200 4260 4320 4380 4440 4500 4560 4620 4680 4740 4800 4860 4920 4980 5040 5100 5160 5220 5280 5340 .U »- JL-a GCCGAITTTG ACTCGCGACC AACTRIXHG CCAICGTCGG GCTTTCGTTC GCGCACACAC TGTACCNTTT GPSAAATGGA AAETÉATATT T%IGCAAACA TAATAEGAGG ATASTTTCAG TTAGACRTTT TTÉKHTTETA TGCAITTTET TGAGCTCAGG ACTTTÉHTCA AGGAAGAÄTT GCCAAAAGCT CAIGCAICÅT GCATCTTTGA AGGANKXHG ATAAAGCÅGA ACAGCCCACT TATAAGAAGG AGAECTCCAC AGGCCACTNT 520 353 28 CGACCTCGCA AGGCATATTG CGCGTF3333 GCAAACCGAA GTCGGCGGCT TTTCHÉEIGC AAAAACCGCA GCAGGGAGGC AAACAAIGAA CTACAGCCTC GTATCAÉCGG CAGAATCCTA GTKIKXHTC AAÉGGATGGA AJTTGTTTTT TTTTÉHTTTG AGTAAAACAC ACCTAGAAAA AIGAACTTTC PJT%E%GTTA GACTTGCCAA AETTQGCAGC AAITGGT%ïC CÉCAGTCCAA ACAGGAGAKC GGTCAGTAAG AAGTAÄPCTT CAGAATTGTT TTCCTCTNST CACTÄAHGCG CAITCÄHTCC ANRIXHTCC GGRIXHCCT GGTGGGGAAT TTTCGACAAC CTGAGTTCGA TAAET¶%CTG GAAGAGTTAA TÉHCHTEHTT AGTAAAAA¶G T¶Éfl¥¥§PU3T GCTGCAAAIG TCGAGCTCGC GTTÉEHY¶U¥3 GTAITÉEGGC TÉHTTTTT%T TGAAEGATAT TÉHCEAATCG ACCAETÉTGC TTÉCTGAATA GTAACAAGAA AAAAACGCTG TCAACAACTC CCGGGGATCC T¶C%AEGCAT AETGGGAAAA GAATTTGAAA TGGCCTCTAA TTEETÉECTA CAAGTAÜGDC CTTINPGIAA TTTTCCAGAA TCCTTÉHÉÉG TAcIcAmGA mGATIGACA ATIccAGAfIT GccAAAAccA AGccIcAAcA ÅAIGAAGAAT TrrcAGAAAA cIcAAcAmG AGc-cGcAccr AcAAcIc-:GGG TAmAccAAc CATPIGAAGG mvmfxccmr TTÉÄACGGAC TTTGTAGTR3 ACAEGCAECA GGGTTCAATC AGAAGGAACT AGGTCAGGGT CTTCÄATCAA AGACATCCAC AGCAGCTGGC ACCAAAAGCA AACAAAATAA GCAGTGACGA ATCATCAGAT CTTCCGCTAC TTÄAGTCCTC AGTQTGAAAA ATCGACCTGC AACAAGGTAC CCCAÉCCTCA ACAGAGTCTC AGTAAACTAC CGAAGACTTA TTGTGGGGAC CGTGGAAAAG CCACAAAAGA ACTGAACCAA TAEGGTTGCC AGGGATCTTC GACTGGCATG TCTÅGCTAGA CAGTTPCHTT CTATCGAACT TTCEETCTCA TTATAAGAGA TGACCGAAGT GGCAACAAAT AETCTÄAICA THTTTTTTAA AGCCCAAGCT GAGCCATAIC AAGGTTPGTA CAAACCATTA TGTTCCAGCA AAGTTNGÛQS CAGACAAAAA TAÉTGCAAAG AGCTÉHÉIÉG AETCÉIÉCTA TCCTTCTÄGA CCAGCCACCC 5400 5460 5520 5580 5640 5700 5760 5820 5880 5940 6000 6060 6120 6180 6240 6300 6360 6420 6480 6540 6600 6660 6720 6780 6840 6900 6960 GEGGIHÄA GIETRIBG GBHÛGIEG TÉÉUMIÉPEAC CAAATGGCT TCNKIIHTG CTAAGGCACT AGGCTGAEGC CAGACTTCGC AAATCCTCAG AGGGAATCCT AGACTGAAGG CFKITRÉPHÉT TCCCAITGGA GTAITCCAAC CAACGACATT TCCGAÉTGGA AGCTGGAATC CTTGAÄTGAT CEEHTÉÉÉCC TCÉTGACCCA GTTGATTCGT CCGTAACCTC TÉGCCACCTT CAAGGACCGT CGCTGATGCA TATCGAAGAG TTTCÄTCGCT TÉEHÉIÉÉÉÉ TGCAGCPQÉT TACCGAACGT TACCGATGCT 520 353 29 ACTTCCATCA CAAGCAACGG CGGAAGAGTT AAGAAGAAGT TTGAGACTCT CTCTTÄCCTT AACTGCAIGC AGGCCAIGGC TGAGAACCAC GTHXÉRÉPPT GCACTGCTTT GAÉGCTTCAA CCAAACCCAC CAGGTGAAGG TGCTTCÉTTC GTDSTDSCAA TGTCCAEGCC AGGAAACTTG ATGGGTCCAT TGTCCAECCG TTTCAGCTAC TTCTTGCTTG CTGGAAGACC7AAACAAGGTG ATCAAGTCCA CHIKXIHTT GNRUHKHÉE ATCCGTCACG AAGGTCACCT TÄCÉEHGTÉC GSNQÉPDQQS AACTTCGTCG TCTCAACGGT TTGCGTGAIT TCGATCCTAA CTTGTCTCAC AACGGTCACA CCATCAACCC ACAAGGTCTC AACGGTGGAG AGTTCÉHGTC TGCTCGTGTT AAGGGTAECA CCACCACCAA CGGTGTTCÉT GCACACTCCA AGTCTCETGC TAACTCCCTT GGATACCACA TCGTGATCGC CAACCCAGAA TCTCGAAAGT TC (2) 1NFoRMATIoN om SEK. ID. NR; 2; ( i) sEKvEN§sÄRDRAG= (A) LANGD: 89 baspar (ii) (iii) (iii) (Xi) (B) TYP¿ nukleinsyra (C) sTRANGTYP= dubbel (D) TOPOLOGI: MOLEKYLTYP: linjär (genomisk) HYPOTETISK: nej ANTI-SENSE: nej SEKVENSBESKRIVNING: SEK.ID.NR: 2 AAcnx3ucc ccnymxflTA AAQAAGGTB: ccnxnncnr GGTAACGCTG ACTAGCGTTC TTTCCAACCA AAGGAGCAAG ¶¶cccTcAcG cGTcGAGAAs GTTCGTACTC Gcc¶¶¶nccA GTGACTCTCT A¶cccA¶Tcc GCTGTTGAIG GsnyurwcA GCTGCTCCAC GGAz¶cnGTT TGGGTTTPGT cTc¶GTGT¶T AAmGTG¶1TA AGGGAJGAAT TAGAAIGCTC 7020 7080 7140 7200 7260 7320 7380 7440 7500 7560 7620 7680 7740 7800 7860 7920 7980 8612 60 ,.,.. ,. v- ' " _ , .. U *_ , .. - ~ .Û u-I I, .= 4 - ' t, . . z = f' ' . a: fl ' . » -» . .< ~- I n. .v.- ~~I : _ v n, fn . v . ~ ' ,.. . . . .- __ ,, .- _ , . . ~ 30 TTAHHÜVKE TNHMIHÉET TKI§KIEG INFORMATION OM SEK. ID. NR: 3: (1) sEKvEN§KARAKTÄRIsTIK= (A) LANGD: 697 baspar (B) TYP¿ nukleinsyra (C) STRANGTYP: dubbel (D) TOPOLOGI: linjär (ii) MOLEKYLTYP: (genomisk) (iii) HYPOTETISK: nej (iii) ANTI-SENSE: nej (Xi) SEKVENSBESKRIVNING: SEK.ID.NR: 3: cccnanuuurïwcrrmmmm nynxmxuwß TTnxxxncæ.TTnxymn¶c ccmuxnæmc ccAm:mvææ ¶mmuøøAAA.cunæuvmwA.cAurmmmaA.cn:KxmßcA<3mrTKnmc Amunnøcmrmynwnnmm-nxnasrmæ AMvmmsmN\AAcmMxAArAßGNmmnnA ArmumcynxïmmumflwrrAcnxflcmuxAan¶cmm3\AmTnxnææA Tnxxcmuæcxmnxmmx;Gmmxmanccxmmxønr'nxßmxæflscayuccmß cAscmxnflm.ccrnxxn¶c Amxmmntsw cnrnxmncc Trrnxnïcc crnaxxxnc ¶GGn3Kmya'Am3xxntAm TACTHIXAA @xxn¶cAAA wcmzmmxnc GnxxAAccA AAAscATcAA.AAAcA1cTcc TAAAACTAGC TTATAQAACC Gcyrnmnflc AGCTTATACT Aæxflïææcïc TTAAAGcA¶c AaTnAcAmAA.TcAn:rrnAA @cn:n3u¶m.AGTxTmAcrA Amcrnxnïn AGTAGAsAmT AACATAGGAT TAGCCTAATC AAGrnxfl¶A.AsTAAsGT¶T TQGAATAQAC cGAGcTAcIT Ascc¶¶nAsT AQAGAITAAC ATAGGAITAG CCTAATCAAG TKIflTNKH“ANIHTTUM3AKHVQCGEÄGCHKHT (2) INFORMATION OM SEK. ID. NR: 4: (i) sEKvEN§KARAKTÅRIsTIK= (A) LANGD: 8798 baspar (B) TYP¿ nukleinsyra (C) sTRANGTYP= dubbel (D) ToPoLoGI= linjär (ii) MoLEKYLTYP= DNA (genomisk) 89 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 697 (iii) (iii) (Xi) GGATUSHÉTT TTÉATCAACC TCAGGRTTIA AHTCAÅÄTF3 GANTUCTCAG AAGCTACAGG AECAIGGTCA TTTGAAAGTA TGGTGCAGAÅ GCAGATTCCT CCACTCACTA GAAGGCATTC TAAGCTT%ïC TCGAITGCTT CAGAACCCAT AAGAAGAGTG GTTTCCACGG PJÉHTTGGAG GETÉJCAACA ACTTGGAHCA TTCGGTAACG GATAGCACTT 520 s5s¿PïfißíF“ HYPOTETISK: nej ANTI-SENSE: nej 31 SEKVENSBESKRIVNING: SEK.ID.NR: 4: TGGGTTTRST T%CAGCTGAT GCAGCATTCC GTATCGCCAA TCCAAAGCCT AGATCAAEGA GTAAGTTTCÄ AJCTTGTCAA TTGTTÉGGCG CTAGTACAAG AEGCGTEIGA PJTCCCNTTT GATAAGCTTG CAAITGAAGT C¶É¶¶%HCTC AGACGCAGÖA GGATGACGTT CGTGCATGCT CTGGAACCGT GTCTCGCTAG CTGGTAAGGC TTGAÉGGTGT CRXÜVKÉGG TCHTKIHGA CHXFDSTGTTT TTGGACCGGA AGNTFQQÉTT AACCAAGAAG CAACAAGGTC AGAAHCTTCA GAAAAAGACA CATCGAGCAG CACCTACCAA TGGGGAACAA CGAACGCAGT GAAGGATCAT AIGTAAITGG TTCTCCGRU3 CAATCTCTCG GCATCCACGA AAETGGCTCT TCACGGTGCA CCGTAÉTCCA CGGTGAAACT T%HGCAAGCT TYXÉIAPKXXFÉ AATGIGIWA AGGGNIGAAT AccAcAAfxcr eAwccccAfn: cAAmAAcAA GGrAcGAccc GAAcICccAT ccïcAAAocr AGGGrAcAGA GICICCAAAC AfrcAAAGrAA AcrAcïcx-Ic 'mcAccGAAG ACITAAAGIT cxcccmmc GGGAccAGAc AAccAmw-r cccmATIG AATAACGIGG AAAAGAGCIG GAcGAccAcA AAAaAAmcc CAGATACIGA AccAAfrccIT AGGAAGAICA AAATITICAA ecccAAcfx-TA GCAGAATCIG AAATCCAGIC AAcccAAAfrc GcrrAmcGA mccrccïc GAGcncc-:fïc cIvrrAAGGr AGCAGCCGIC cAccAAcïcc GGIcAcAAGr crAfrcrcccA CGTAICACCG Gfmnmcczx ATGGGTGCCA GAAfxcccrAA GGAcIccrm cmcmAGcc Acrmcccm fmcmccïcr ACTAAGCGTC CAAEGGGTCG TÄGAAIGCTC ATNKUKHTT TWÉHÉAGGAA CEITÉGCCAA CAGCACAEGC AGHIIXEHC AAAAAAGGAA CAAAGATAAA TCIEGACAGC CTCTATATAA CTAGAAGAIC TCCCCAHTCT CANRXÉRFRS TÉEI¶T%TCG GTGGGGAETG CATGTCTTCT TCGTAAGTCC CNÄIKIHTC AGGTGAAGAT GGAAGGTGAT TCEÉÉÉCGAT TTÄCGAHTTC TGfl3PB3AAC 60 120 180 240 300 360 i 42o 480 540 600 660 720 780 840 900 960 1020 1080 1140 1200 1260 1320 1380 1440 CCACTTCGCG TTGCGTGGAC GTGAAGTCCG CCAATCATGA GTR¶K¥K¶G GGTCAAGTGA GGTCTCATCT GTTCCAGAN3 GCKTRIIHG GACCGTCTTT GAGACTTYHC GCAGCTÉRIS TTÉ%EGGNTT TGÅÜHKIHC CAECGGTTTC ATCCTACTGA TÉKHTGTÄAT GATGGAGAAG GTTTTTTCTC GHTTTGAGTA AAACNÉPUÉT AGAAAAGCTG ACTTTCCTTT TAGTTAIÄCT AAAEGGGTGT CAAAGACTCC C¶ÉEHY¥KKJÄ AÉGCTGACGG TTGATGTTCC CAGGTTCCGA TGACTCÉCCA AAGACGTGGC ACCGTGCTCC AAGGTGCTAC crAcccAccr AccCIGPrAc 'IGAIGGCIGG AAGAATICGA GACAACGPIC GTICGAGTAT TrAcIcmrr AGTrAAmAA Trpmncfxm AAAATGIGIC AGnGTAccA CAAAIGPTAC AttGrAAHw CNDQSÄTTFS 520 353 GCAGGTGAAG AACGCCAATC CACTGAAAAG TGTGCGTACC AGGTGATCCA CGTCACCATC GGAAATGGGT TGACTTGCGT TTÉÉEIGATC CEHT%IGAAC AAACGGTCTC CGATCACCGT TGTTGATGAT GCTCGGTACC GU3¥KHTCA TNRXXEÜTG TTTTÉHTCGG TGATAIGGTC IGTGTTGAAT AAATCGTGGC TT%IGCTTÄT TGAATACAAG CCAGAAICCT TAGTTGAGTA 32 TCTGAAGACG ACC¶%CAGGG AACACCCCAG AIGCTTCAAG ATCCGTCTTC TCCTCTACTG CTTÄACGTTT GCCGACAECG GACGAGTAEC AAGCTCAACG GACGGTAAGG ATCGCTAïGA GCTACTAÉGA AAGAECGAAC GGATCCTCTA AÉGCATCAGT GGAAAACTGT TTTTCGCTRT TTGAANTINT CÉÉÉÉAEGAC TCACTAGGCA TÅFÉKIHÉT TÉHCÅGAITC 'IGAAAATATT GTGATOGTCT TACCT%IGGC GTATCACCAC CEÉTCCCRTT TGATGAACCC AAGR¶flÉ$A CTECTTTGAA CAAITCTCGC AACTCCGTGT GTGTTGAITG GTCTCGGTAA GCTKIICGT TCGCTACTAG TCTCCGACAC GCTAGAGCTT TTCÄITGCGC TÉTTCETGTA CGAACTGTGA TTCTCAAHTT AAGAGATNU3 CGAAGTTAAT ACAAATATAT TÉHÉHTTTEG TEASCÉHTGC T¶TT%AEGCA TÉXDNÉTIACC TÉHT%TCGAG TAACCTTACC TAAGCTCACC AACCCGTACT CCCACGTCTT GGGDGTIACT TÉHTGCAGCT TAAGGAAAGC CGATGAAGGT CGCTTCTGGA TNRIXHÉÉC CTTCCCAGAG TAAGGCUQÜT ¶3?EKIfl%T ACACACCAGA CCAITTÉHTG AAIGGAAATG AATATTNTTT cAAAcATrIT w ATGAGGAGTA TTTCAGACCT ACA¶TT%HGA TTTATAATEA TTTTÉHGACT 1500 'l560 1620 1680 1740 1800 1860' 1920 1980 2040 2100 2160 2220 2280 2340 2400 2460 2620 2580 2640 2700 2760 2820 2880 2940 3000 3060 TGCCAAETGA GAETCEÉJTC CEÉÄCAANUS GTGGTCCCAA CCACGTCTTC GTAATATCCG ATAGTGGAAA GTTGAAGAEG ACTGACGTAA GGAAGTTCAT TCCGTCCTGT GTCTGGATCG GCCGGGCAAT AETÄEGCGGG AGCGTATCGT AGGAAGTGAT TTÉHTCCCGG CTATCCCGCC AEGATTUÉTT CCTQQÉDQGA TTGACTGGCA AGGTGGTTGC GGCAACCGGG GTGATATCTA TGATTÄACCA GTGGCAAAGG TTGACAACAT GGTCCGAEGT CCCAGCTÄIC CCATCAETGC AGATGGACCC AAAGCANÉRS GAAACCTCCT GGGAzGAcGc Twcurrnxæa AGAAAccccA CGAAAACTGT IGCTGTGCCA CAACGTCTGG Gcnxxnfiwc GGAGCATCAG GAAAAsTcTA GGGAxn3:ns TAAcTA¶Gcc CGATATCACC Gswccwcscc AACTGGACAA ¶cuvxx:rrAT cccccïïccc cAAAcccrn: AHTCGATAAC 520 353 33 GcATcAAmcG ACCTGCAGCC ACTCGAAGCG GAGAc¶¶¶¶C AACAAAGGGT AATÅECCGGA ¶cncAcTr1A'rn:n:AAGAm AGTGGAAAAG šATAAAGGAA AGcccAaCGT TGAAGA¶ccc ccAcccAcGA GGAøcA:cGT GGAAAAAQAA GA¶1cæaGTG AmcGTccGAT GTGAGACTTT cGGA¶TccAT TGCCCAGCTA TCTGTCACTT CTCCTACAAA TcccAmcAaT ccGAmAAAsG CAGTGGTCCC AAAGATGGAC ccccAcccAc AAccAcGTcT ¶cAAAscAAs TGGAmTGAmG AcAAmcccAc Tnmccïwccc AAGACCCTTC GAQGACACGC TGACAAGCTG ACTCTAGCAQ ACCCGTGAAA TCAAAAAACT cGAccGccTc GGAA:TGAmc AGCGITGGTG GGAAAQCGCG GGCAQTTTIA ACGATCAGTT cGccGA1ccA ¶%mcAscccs AAs¶c¶¶¶æm ACCGAAAGGT GA¶ccGcTcA cTcAxTæcGG CAAAQTGTGG GGCGGCTATA ccccAm¶¶cA AGCCGATGTC CGTATCACCG ¶¶¶cncnGAA CAACGAACTG ATTACCGACG AAAACGGCAA GAAAAAGCAG GGAATccAmc GCAGCGTAAT GcTcTAcAcc GTGGTGACGC AIGTCGCGCA AGACTGTAAC AAxcG¶cA¶c TCAGCGTTGA Acmaazngwr GGCACTAGCG cGAc¶¶¶ccA AGTGGTGAAT CTCTATGAAC TGTGCGTCAC AGCCAAAAGC GTCGGCATCC GGTcm:nxx:As¶cAAsGGc ïwcfiïwæcwc Gcwïïcnntß TcAïGAAsAT GTGCTGAIGG TGCACGACCA CGCATTAATG AACCTCCTCG GAAGGTGGCT TÉEGCCGACA GACGTTCCAA TCAACAAAGG TÉETGTGAAG AAAGGCCATC GAGGAGCATC TGATAICTCC CTCTATHÉAA ATCTCCNU33 TQIIEHTCA TTÄCAAGAAA GNTÅTUÜÉIA TGGGCAGGCC GTCAATAATC ACGCCGTÉTG AACTGGCAGA TCTT%CTTCC PEECCGAACA CACGCGTCTG GCGGATCAAC CCGCACCTCT CAGACAGAGT GAACAGTTCC GCGGACTT%C GACTGGATTG 3120 3180 3240 3300 3360 3420 3480 3540 3600 3660 3220 3780 3840 3900 3960 4020 4080 4140 4200 4260 4320 4380 4440 4500 04560 4620 4680 4740 GGGCCAACIC AKEAACATGG GCATTCSGPIT GGGAAACTCA AGAAGGTACT 'ICACCGAATA GTGAAGAGTA C AACAATGAAT CGAGCICGCC .TTCGICAAGT TATTNIGGCA GITITPTATT GAATGATATG CTACCGTACC 'ICGCATTACC CITACGCPGA AGAGATGCIC CA ATTGATGAAA CGGCTITAAC CGAAGCGGGC AACAAGCCGA AAGAACIGTA 520 353 GCAAGCGCAC TTACAGGCGA GGIGATGIGG AGTATTGCCA 'ITCGCCACIG 'IGTAINIGTTC 'IGCGACGCIC GAACCGTTAT TACGGATGGT GGAAAAAGAA CGGCGTGGÅT ACGTTAGCCG 'ICAGIGTGCA TA 'IGAACAGGTA 'IGGAATTICG TAACAAGAAA AAAACGCIGG CÅACAAÜÉT CGGGGATCCT 'TCAATGCATC 'ITGGGAAAAC GTCCITTIGT Iïfinnncnïc AAa¶¶cAAAT GTCAAATCGT GGCCTCTAAT ccATTA1ccT TA1¶cmc¶80 TACTQAATAC AAsTA1cTcc ITTCCAGAAT ccTn:0:m;A ITGTAGTTGA GTAïGAAAAT CATGCPIFCAA 'ICGACCIGCA GGGATCPICA ACTGGCATGA CCPGGCGCAC CTAGCTAGAG AGTITCATIG TATCGAACIG 'ICATICICAA TATAAGAGAT GACCGAAGIT GCAACAAATA 'ITCTAATCAT ATITTITAAT GCCCAAGCPT 34 ¶¶8AAGAscT ACGAACCGGA CGOGTAAACT AcAccGAmAc ATGHCCAAAG GGCAGGAGAA GGc1GcAcTc ficnwacmccc ccsxrrrnac CTCGCGACCG AQTTCGGTGA CATCGTCGGC CTTTCGTTCG cccAcAcAcc GTAccxrrns IGAAATQGAA A1TAAmATmA AJGCAAACAT AATATGAGGA 1wa¶¶TcAGA TAGAcATrmA ¶a:rrrATAA cxwafiïïmac GAGCICAGGA GA CIÛICITPAG GCAGTCAACG GATAGCGCGI' TA CGACCCGACG CATCAGCGAT CGGCGATTTG ACIGCATCAG AATÛPACACC CGICITIGAT GACAAAAACC GCACIBGGAAT CGICCGATCA CICITIGATG GAAACGGCAG CCGATTATCA GACATGTGGA GACCTCGCAA GGcA¶æfl¶Gc CAAACCGAAG TCGGCGGCTT AAAACCGCAG CAGGGAGGCA TAcAsccTcG GTGGGGAATT TATcAæccGT ITCGACAACG AGAATCCTAC 10w@fl¶cGAG Ificncxflïcr AATTTACTGT ATGGATGGAG AAGAGTTAAT 1¶¶cH¶¶11T cwcrrurrns ITTGTTTTCA GTAAAAATGT GTAAAACACT TGTAGTTGTA CCTAGAAAAG CTGCAAATGT Tfiwæmflïïcc ¶¶1AmGTAAT ¶¶8ïAsTTAm AcTcA¶GGAT Ac¶¶GccAAT TcAmTGAcAA 'ITTAGCAGCA 'PICCAGATIG 4800 4860 4920 4980 5040 5100 5160 5220 5280 5340 5400 5460 5520 5580 5640 5700 5760 5820 5880 5940 6000 6060 6120 6180 6240 6300 63160 GGTTCAATCA GAAGGAACTC CCATCCTCAA_ GGTCAGGGTA TTCÄATCAAA GACAICCACC GCAGCTGGCT CCAAAAGCAT ACAAAATAAC CAGTGACGAC TCATCAGATA TTCCGCTACT TAAGTCCTCC AAGCAACGGC TGAGACTCFC GGCCATGGCT CACTGCTTR3 AGGTGAAGGT GTCCATGCCA GTCCATCCT TGGAAGACCA TGTGCCTTF3 AGGTCACCTT ACÉTCGTCGT CGAICCT%AC CATCAACCCA GTTYXIKFÜÉT CACCACCAAC ACAAGGTACG CAGAGTC¶ÉC GTAAACTACT GAAGACTTAA TGTGGGGACC CÉTTGCCTPT GTGGAAAAGA CACAAAAGAA CTGAACCAAT HKIHTGCCT GGAAGAGITA ïcrmccïfic GAGAAccAcA AmcrIcAAc GCPICmCG GGAAAcnGA 'mcAGcrAcr AAcAAGmGA AfrcAAcfrccr AccGK-:TACC CICAACGGTG TIGIcIcAcG CAAGGICICG GCIcGIC-'ITA GGIGPICHG AACTCCCTU3 ,, 6» _.. 6 . H . f . '.. .. -; j , . . 6, -f }':, 466- ~ *_" 6. ' _' . . 4 .
AGCCATATCA AGGTTTGTAA AAACCATTAG GTTCCAGCAC AGTTEGTGGG AGACAAAAAA AETGCAAAGA GCTGTCCTGA TTÉIKÉÉEÉT CCTTCT%GAA CAGCCACCCG ACTGCAIGCA CHÉHKIÉPTAC AGAAGGTTGG GTCGTGGHTT GTAACGCTGG CTAGCGTTCC TTCCAACCAT AGGAGCAAGC TGGCTGAGGA GTGGAGAAGC TTCGTACTCA CCTTTÄCCAA TGACUÉDÜTT TCGGAÉTCGA CKCHTGAÉGC GTGATGACAT 35 CTTINTDZAA AïTÉEH%ECG CCAAAACCAA GGAAGAAITC TCEGTCCAAA GCCTCAACAA CCAAAAGCTA RRXBHCNFS CAICTTTGAA GGAATGGTGC TAAAGCAGAT CAGCCCACTC AEEAGAAGGC GAICTCCACA GGCCACTATG CAAGGCTAAC cGAfr-Iccccr TATCGCIGGA cAAGcrrAcc TIGcncAAc AAAGIGGCIT cucccncc; TAAGGcAcIc GGcIcAmcr AGAcrrçGcc AAfrccïcAcc GGGAATCCTT GACTGAAGGT AGCTGTTGTT CCCAETGGAT CAGGAGATCA GTCAGTAAGT AGTAATCTÛ3 AGAHTDSTÉA TÉIHCÉEGTA ACTAHFQÜÉT AETCEHTCCC NRIXHTCCT GHIIÉCCTT AACGACATTA CCGAETGGAA GCTGGAATCG TTGAETGATC GGTTCCTCCG CTTGACCCAA TTGAITCGTT CGTAACCTCA AGCCACCTTA AAGGACCGTG GCTGAIGCHT ATCGAAGAGA TTCÉECGCTA GÉKXXÉTCA GCAGCTGGTG ACCGAACGTG ATGAAGAATC TTCAGAAAAA TCAACATCGA GGCGCACCTA CAAGTGGGGA AIGACGAACG CTÉTGCTCTC TCAACGGACT CTRXÉHÉEC AGAAGAAGTT ACTGCATGCA TTGGTGTTTG CAAACCCACC TTGTTCCAAT TGGGTCCNTT TCETGCTTGC TCAAGTCCAC TCCGTCACGA GAGGTTGGGA TGGÉKBHTT ACGGTCACAC ACGGTGGAGA AGGGTATCAC CACACTCCAA cATAcCAcAT 6420 - 6480 6540 6600 6660 6720 6780 6840 6900 6960 7020 7080 7140 7200 7260 7320 7380 7440 7500 7560 7620 7680 7740 7800 7860 7920 7980 8040 520 353 36 CGTGAECGCC AACCCAGAAG CTGCTCCACG TEETCCAACT ACCGATGCTT CTGGAANGTT CCGGTCCAAA TTUSTTTACA TTGTCHCCAA AITTCGGCTG AÉTTGGACTT CCCTAGCTAT GCCAACTAAG CTAATAÄAAA ACAÉGAAACA ACAAETÄCAA ACÉGTCGAGC ACACCTTCTA CAAACTÄGCT TAGAETTCTA TTGGAAGTIA CAAAACAGTA~AAACTÄCCAA TAGGATACTA AAHTÄAACAT A¶T%AACTAT TACTCCTCAA AAGCTUSIAC AATTTGCAGA AGAANDSHFS GTTGCCCAAA AGCTTCAAAG GGAACCTGCT GÉGAAGCCTG CTGGGACGCT GGGGHFQCD3 GCAGCAGCAT ACCTTGGCTT GAAGTACTCT TCEÉECÉETG GTTTTÉKHTC CCTTGCCCAT GTGGTCTTCA TAEGGCCTCA TTACTTCCCA AGGGCTTCAA AECAGTAGGT GGBQQCAACC AAAAGCATCA AAAACAECTC CTAAAACTAG CTTATACAAC CGGA¶T%CAT GAGCTTATAC T%GCTTAÅCT CTTEAAGCAT GATTAACATA.HR3NU3TTIA AGGTGTCATT AAGTNTIACT AATCTTGCTT AAGTAGAGAT TAACAEÄGGA TTAGCCTAAT CAAGTTGCTT AAGTANQÉTT TTÄGAATAAA CCGAGCTAGT TAGGCTTÉAG T%GAGATTAA CATAGGÄTTA GCCTAAÉCAA GTÉGCTTAAG T%AGGTTTIA GAAÉÄAACCG AGCTNGTT (2) INFORMATION OM SEK. ID. NR: 5: (i) sEKvEN§KARAKTÄRIsTIK= (A) LANGD: 8418 baspar (B) TYP nukleinsyra (C) STRANGTYP: dubbel (D) TOPOLOGI: linjär (ii) MOLEKYLTYP: (genomisk) (iii) HYPOTETISK: nej (iii) ANTI-sENsE= nej (Xi) sEKvENsBEsKR1vN:NG= sEK.ID.NR= 5; AAsc¶TcAcc TcAsGATTTA GcAscAmTcc AsAx¶ccGTT CAATCAACAA GGTACGAGCC AinmcAcT¶T AxTcAAA:¶c GTATccccAA AAccAAGAAs GAACTCCCAT CCTCAAAGGT TTGTAAGGAA GAATTCTCAG TCCAAAGCCT CAACAAGGTC AsGGTAcAsA GTCTCCAAAC CATTAGCCAA AAGCTACAGG AsÅTcAAmGA AGAAxtfl¶cA AICAAAGTAA ACTACTGTTC CAGCACAIGC ATCAIGGTCA GTAAGTTTCA GAAAAAGACA TCCACCGAAG ACTTAAAGTT 8100 8160 8220 8280 8340 8400 8460 8520 8580 _8640 8700 8760 8798 60 120 180 240 300 AGTGGGCATC AAAAAAGGAA CAAAGATAAA TCCTGACAGC CTCT%JÄTAA CTAGAAGAIC TCCCCÄTBÛT CAAIGGTGTG TCCCTTÄECG G¶33X¥flTG CEHÉHÉETCT TCGTAAGTCC CAGGTCCTTC AGGTGAAGAT GGAAGGTGAT TTACGAÃTTC 1ÉHÉHTGAAC TCCAGTTACC TRIIXHÉAA ^TÉHT%TCGAG TAACCTTÄCC TAAGCTCACC GGTTGCTGCC AACCCGTACT CIIÉKIIRÜPT GGGTGTTACT TGTTGCAGCT TTTGAAAGTA GCAGAITCCT CCACTCACTA GAAGGCAÉTC T%AGCTT%TC TCGATTGCTT CAGAACCCAT AAGAAGAGTG GHTTCÉECGG AmI-TIGGAG cfrrAfrcAAcA AcnGGAmA trfrcccrAAcc GATAGCACIT ccAcr-Icscc mcccfficscAc GmAAGmcG ccAAmAfrcA GHGAGACIG GGTCAAGTGA GGTCTCATCT GCTGGTGGAG GTTCCAGAAG GCNTUÜÄÉUS 520 553 AHCTTGTCAA TTÉHTÄGGCG CÉEGTACAAG ATGCGTATGA AETCCCNTTP GATAAGCTTG CAAITGAAGT CEÉETÉHCTC AGACGCAGCA GGHRHMIHT CGTGCATGCT CTGGAACCGT GFÜKIIfl%G CTGGTAAGGC TTÉEEGGTGT CTGCAACTGG TCATTGGTGA AAATGGGTGT CAAAGACTCC CTCGTGACCA AEGCTGACGG TTGATGTTCC CAGGTTCCGA TGACTCTGCA AAGACGTGGC ACCGTGCTCC AAGGTGCTAC 37 CAICGAGCAG CTGGCTTGTG GGGACCAGAC CACCTACCAA AAGCATCTTT GCCTTTHTR3 TGGGGAACAA AATAACGTGG AAAAGAGCTG CGAACGCAGT GACGACCACA AAAGAAETCC GAAGGAECAT CAGATACTGA.ACCAATCCTT AIGTAAETGG AGGAAGATCA AAHTTTTCAA TÉÉECCGAIG GCGCAAGTTA GCAGAAECTG CAAÉCTCTCG AAHHI¶KHC ANIXUVUHÉ GCAÉCCACGA GCTT%TCCGA TTTCGTCGTC ANTHXXHCT ¶3MIIflÉ{A CCGTÄHTCCA CGGTGAAACT TÉTGCAAGCT TÉÉHÄACGGT TRIIIHTTG CEKHÉÉÉÉÉC GCAGGTGAAG AACGCCAAIC CACTGAAAAG TGTGCGTACC AGGTGAECCA CGTCACCATC GGAAAEGGGT TGACTFQIÉF TTCT%HGAHC cšfrrAflcAAc GAGCTTCGTC AGCAGCCGTC GGTGACAAGT CGTATCACCG AIGGGTGCCA GGACHÉEHTG ACTATGGGTC ACTAAGCGTC TCTGAAGACG ACCTACAGGG AACACCCCAG ATGCTTCAAG ATCCGTCTTG TCCTCTÉCTG CTTÄACGTTT GCCGACATCG GACGAGTATC GGTTTGGAAG CÉCETÄAGGT CAGCAACTGC CTATCTCCCA GHÉHTTTGGA GAATCCGTAA CAAIGGGTCG GTGATCGTCT T%CCTATGGC GTNK3¥IEC AAGGTCGTGG CHTTCCCATT TGAIGAACCC AAGTGATCAA CTECTTTGAA CAAHTCÉCGC AACTCCCTGT 360 420 480 540 600 660 720 780 840 900 960 1020 1080 1140 ' 1200 1260 1320 1380 1440 1500 1560 1620 1680 1740 1800 1860 1920 1980 TAAGGAAAGC cAcccïmï-r oGAmAAGGfr GAGAcmcIc cGcrImcGA GcAccImcG TA crmccAGAs nc-.Aqcczxw frAAscclcc-r fxGAmAGcm fmcfrrccrAfr cmcccnwc AcAcAccAGA AfxccrAcïcA ccATI-Icnc mcrIcrAAT AAmGAAAm GATGGAGAAG AATAITAm ewmwrcm cAAAcAm-IT cfmncAcrA AmAcßAcTA AAAcAcncT 'ITIÉAGACCT AGAAAAGCIG AcAfrrrAfxcA Acrmccrwr TITATAATrA TAGITATAcr TITrAmAcr mccAAmcA GcccccTrcA Aecnwmczx AAccIcc-Icc GATmcAfic GAAGGmGcr ccrAcAAAfrc "xbmccGAcA GmGIcccAA GAcGfmccAA ccAccfrcm fmAAcAAAGc crAATAmcc TATIGIGAAG ATAGIGGAAA AAAGoccAm GTIcAAGAm aAGGAGcAæ GfmGAAAAAG TGATATCTCC ACTGACGTAA 520 ass Si? ~ CIGCIGICGC 'Iccfmcrccs crAcccAÉÉcr AcccIcrrAc mmcccïcs AAGAAmCGA GAcAAccIm GTICGAGTAT TTACIGIGIT AGTIAAIGAA 'mzwmcmc Ammïcm AGncfrAccA cAAAmflAc AmTAATrrr cAIcGATrIc wGAcAAcAT GGTCCGAIGT cccAc-crmc ccAfxcAncc AGAmCAccc AAAGCAAGIG GAAAccIccr AGGAAGmGG ccmccccA AAGAcèTIcc GGGATGACGC 38 AAACGGICIC AAGcIcAAcG Iccïccïccr GAcGGTAAGG cGAmAcccr AfmscrAmA fLGnGAmAT ccrAcrAfrcA fxcmcGAscr AAGAfrcGAAc GcIcGGrAcc GGATccmrA ATGCATCAGT TNRIXFHTG 'I'I'I'TA'I'I'C*GG GGAAAACFST TTTTCGCTAT TGATATGGTC CTTTDGPDZA TGTGPK¥%T TR¶Ußfl¶%T AANFIÉDQQC CTCTAATGAC TTÄEGCTTET TCACTAGGCA TGAATACAAG THUÉDÜÉDÜT CCAGAAICCT TÉHCÄGAETC TAGTTGAGTA TGAAAATATT GCATCAATCG ACCTGCAGCC GAGACTTTTC AACAAAGGGT TGTCACTTTA TTGTGAAGAT GATAAAGGAA AGGCCATCGT CCACCCACGA GGAGCATCGT GATIGAIGIG cGGATIccAT cmcrAcAAA cAcIccIccc AAccAccwr ACAAICCCAC AEGGTCCGAT TGCCCAGCTA TGCCNÛÜNPT AAAGATGGAC TCAAAGCAAG T%ïCCTTCGC GTGTTGAETG GTCEÉXKFEAA Gcmzcïccr ' TCGCTACTAG TCECCGACAC GCTAGAGCTT TTCEETGCGC TTTTCTTGTA CXHVXIHFDSA TTCTCAANTT AAGAGATAEG CGAAGTTAAT ACAAATATAT TGTGTTTT%G TÄATCAETGC TTTTÄAEGCA ACTCGAAGCG AAEÄTCCGGA AGTGGAAAAQ TGAAGATGCC GGAAAAAGAA GTGAGACTTT TÉHÉHÉECÉT GCGATAAAGG CCCCACCCAC TGGKTPGNUS AAGACCCTTC 2040 2100 2160 2220 2280 2340 2400 2460 2520 2580 2640 2700 2760 2820 2880 2940 3000 3060 3120 3180 3240 3300 3360 3420 3480 3540 3600 CflC¶%EÄTAA PHÉÃÉKÉÉGG TÄIXEHTCA TTECAAGAAA GAT%šTCGTA TGGGCAGGCC GTCAATAATC ACGCCGTATG AACTGGCAGA TCÉTÄCTTCC ACGCOGAACA CACGCGTCTG GCGGATCAAC CCGCACCTCT CAGACAGAGT GAACAGTTCC GCGGACTTAC GNÜKIEHTG GACTGGGCAG CflIflÉE¶T%G GCAGTCAACG GACAAAAACC GCACGGGAAT CGTCCGATCA CÉCÉTTGATG GAAACGGCAG CCGATTATCA GACATGTGGA GGAAGTTCAT TCCGTCCDÉT GTCTGGAÉCG GCCGGGCAAT AET%IGCGGG AGCGTAICGT AGGAAGTGAT TTÄETGCCGG CTÄTCCCGCC AEGHTTUÉTT TTGACTGGCA AGGTGGTTGC GGCAACCGGG GTGATAICTA TGATTAACCA GTGGCAAAGG GGGCCAACTC AIGAACAEGG GCATTGGTTT GGGAAACTCA ACCCAAGCGT AITTCGGCAT AGAAGGTACT TCACCGAATA GREUÉEGTA 520 sszåfïüßffi* 39 TTÉÅHTTGGA GAGGACACGC TGACAAGCTG AGAAACCCCA ACCCGTGAAA TCAAAAAACT CGAAAACTGT CAACGTCDQS GGAGCAECAG GAAAAGTGTA GGGARDGSRS TAACTQIGCC CGATATCACC AACTGGACAA 1ruuxx:rnAm cccccTTccc cAAAccc1¶c A0Tc@ATAAc cTAccGTAcc cmaccwccms ccAAscGGcc ccAAccGcAc cænGA¶3n33 1¶ccccAcns 1002006010 cuvxix3rrAT CIXXIÉDQGAT TCAGTGTGCA GGAHPDSNFC GGCNGTPPIA T%ICAGCGCG GÄHXIEHCA GGCGGCTHTA CGTATCACCG AJTÄCCGACG GGAAICCATC AAEGGTGAIG GGCACTAGCG CECTÄIGAAC GHCGGCATCC T¶LïTT%CTG GHXflÉ%EGG TCGCATTACC PHTGATGAAA AACAAGCCGA TTÉCAGGCGA AGTATBä3IÄ GCGGAAGCAA TGCGACGCTC TACGGATGGT ACGTTAGCCG TGCCTGGATA AGOGTHÄÉRS ACGATCNÉPT AAGTCTTÉNT C¶C%ET%CGG G3I3flTTGA AAAACGGCAA GCAGCGTAAT AIGHCGCGCA GGACTTDGCA TG¶3IflIEC TGCACGACCA CTT%CGCTGA CTGCÜQÉDÉT AAGAACTGTA TTÄAAGAGCT ACGAACCGGA CGCGTAAACT ACACCGATAC AIÉTCCAAAG GGCAGGAGAA GGCHIYKHC TGTNRHKIE ACTÉTÄGCAG CGACGGCCTG GGAAAGCGCG CGCCGAEGCA ACCGAAAGGT AGCCGATGTC CAACGAACTG GAAAAAGCAG GCTCTACACC AGACTGTAAC ACFRIHÉÉT AEHÉEHÉHUNT AGCCAAAAGC AGTGAAGGGC TCAIGAAGAT CGCATTÄAEG AGAGAÉGCTC CIIIÉPPIAAC CAGCGAAGAG GATAGCGCGT TACCCGTCCT CGACCCGACG CATCAGCGAT CGGCGAETTG ACTGCAïCAG AATGTACACC OÉKHÉTGÅT 3660 3720 3780 3840 3900 3960 4020 4080 4140 4200 4260 4320 4380 4440 4500 4560 4620 4680 4740 4800 4860 4920 4980 5040 5100 5160 5220 5280 CGCGTCAGCG GGCATÉITGC CAGGGAGGCA GTGGGGAÄTT TTCGACAACG TGAGTTCGAG P@H¶¶?L¶GT AAGAGTT%AT CTCTT%ETTG GTAAAAATGT TGTÄGTTGTA CRI3¥@JGT TTT%ïGTAAT ACTCATGGAT TGAETGACAA TTCCAGATU3 CCAAAACCAA GCCTCAACAA AIGAAGAATC TTCAGAAAAA TCAACATCGA GGCGCACCTA CAAGTGGGGA ATGACGAACG AHTTGAAGGA CTNUÄIKHC AACAATGAAT CGAGCTCGCC TAITAmGcA GITTPPIAIT GAAmATAm TIGTGIGIm GTCAAAICGT ccAfITAmcr TACIGAATAC HWCCAGAAT WGTAGHGA cAmcAfrcAA GGPICAAICA GAAGGAACIC GGTCAGGGTA TICAAICAAA cAcAfrccAcc Gczxcclcccr CCAAAAGCAT ACAAAATAAC CAGIGACGAC 'ICATCAGATA TTCCGCTACT TGAACAGGTA TAACAAGAAA AAAACGCTGG CAACAACTCT CGGGGATCCT TCAAIGCATC TTGGGAAAAC CGGTTPDÛQC GTOCTTTDÉT AATTTGAAAT GGCCTCTAHT TNTHUKHQG AAGTATGTCC CCTTGTCAGA GTÄJGAAAAT TCGACCTGCA ACAAGGTÄCG CCAÉCCTCAA CAGAGTCTCC GTAAACTACT GAAGACTTAA TGTGGGGACC CHTTGCCTTT GRX¥¥@AGA CACÅAAAGAA CTGAACCAAT 520 553 40 TGGANTTU33 GGGATCTTCA ACTGGCATGA CCTGGCGCAC CTAGCTAGAG AGTTTCATTG ÜGPPTPKÉPT TATCGAACTG TCAITCTCAA TATAAGAGAT GACCGAAGTT CCGAITTTGC CTCGCGACCG ACfHIXHGA CNUSÉHÄIÄÉ GACCTCGCAA CAAACCGAAG AAAACCGCAG TACAGCCTCG CTT¶ÉEflTCG~T%ECAICGGT CGCACACACC GTACCNTPH3 TGAAAEGGAA AflT%AINTIA AEGCAAACAT AATÄIGAGGA AGAATCCTAC AmGGAmcGAs zqwcærrrrr ¶¶¶cu¶¶¶cA GTAAAACACT GCAACAAATA TÅITTTCAGA CCTEGAAAAG TCHTÉHÉHTT TÄGACNTTIA TGAACETTCC TTC¶%AICAT TGCTTTETAA TTATAGTTHT A$¶TTTT%AT GCCCAAGCTT GCAITTT%EG GAGCTCAGGA ACTTGCCAAT TTTEGCAGCA AGCCATATCA CTTÜ%ETCAA AITGGTATCG AGGTTTGTAA AAACCAITEG GTTCCAGCAC PEH¶%GTCGG AGACAAAAAA AHTGCAAAGA GCTGTCCTGA TTCCCTCTAT GGAAGAAETC CCAAAAGCTA Kflïïflfäïš CEECÉTTGAA GGAATGGTGC TAAAGCAGAT CAGCCCACTC ATAAGAAGGC 'ICAGICCAAA cAGGAGAmA GICAGTAAGT AGTAAICITG AGAAnGrrA 'ICcICrAGrA ACrAAIGCGT AHTCEETCCC cCnCrAGAA GAICICCACA ATGGCHCCI CEÉÉGGCTCA GGCCACTAEG GTCGCTCCTT 5340 5400 5460 5520 5580 5640 5700 5760 5820 5880 5940 6000 6060 6120 6180 6240 6300 6360 6420 6480 6540 6600 6660 6720 6780 6840 6900 CÉTCCAECAC AGAAGANÉTT ACTGCAIGCA TTGGTGTTU3 CAAACCCACC TTÉHTCCÄAT TGGGTCCATT TYHTÉIHTGC TCÅAGTCCAC TCCGTCACGA GAGGTTGGGA TGCGTGÄTTT ACGGTCACAC ACGGTGGAGA AGGGT%ICAC CACACTCCAA GATACCACAT CTGGAAAGTT TCGCTGGTCT GTAMGTUJÜT GHTTCCGTCC ACGTTÉTCTA CCCTÉEHTTC CAAACOGTTT GAGCTCGGTA (2) 60 AAscAAcGcc ¶cAsAcn:n: GGccAxcccT cmïmxnfiwc AGGTGAAGGT GTccAmcccA GTCCATCCGT ¶cGAAGAccA zcncxxflqïc AsG¶cAccTr paflwccïccw cGAmccTAAc cAxcAAcccA Grnaynsnsr cAccAccAAc cncncïïccw cnncæacccc CATCGCTACT cAcTcc1ccT ICCAGCTCTC AAGCATCCCA CGCTTTCGGT mmm cscmmrnxzr CCGGATCC (i) 520 353 š*?üfl“fï 7 TCAACGGACT TAAGTCCTCC GCTGCCTTCC TCTTÄCCTTC GAGAACCACA AIGCTTCAAC GGAAACTTGA TTCAGCTACT AACAAGGHGA ATCAAGTCCT ACCGTGTACC CTCAACGGTG TTÉHÉÉCACG CAAGGTCTCG GCTCGTGTTA GÉKHHIHTG AACTCCCTPG AACCCAGAAG CCTATGGAGA CCTÄACTGGA GCTCCTGCCA GNTKIIHTC CACGGTCACC GCAGGTGAGA AAGTCCAAGC INFORMATION OM SEK. 41 cAsccAcccG CAAQGCTAAC AACGACATIA AcTccA¶GcA GGTGTGGCCT CQGATPGGAA cflGAccTmAc cGA:¶ccccT ocnxaxznzm AGAAGGTTGG TATCGCTGGA GCTGGAATCG cncnncsmrr cAAøcTTAcc.¶1GAz¶cAmc GTAACGCTGG TTGCTTCAAC GGTPÛCTCCG C¶%GCGTTCC AAAGTGGCTT CÉTGACCCAAI TTCCAACCAT CAEGCCTTGG TUSNTDSÉTT AGGAGCAAGC TAAGGCACTC CGTAACCTCA TÉEEHGAGGA GGCTGAIGCT AGCCACCTTA GHGGAGAAGC AGACTTCGCC AAGGACCGTG TTCGTÄCTCA AAICCTCAGC GCTGATGCAT CETT¶%CCAA GGGAAECEET ATCGAAGAGA TGACTCÉÉÉT GTTTCGTCGT TTCAïCGCTA TCGGAETCGA GACTGAAGGT CGTGCTCTCA CHÉHTGATGC AGCUÉTDGTT GCAGCTGGTG GTGATGACAT CCCATTGGAT ACCGAACGTG CTGCTCCACG TEETCCAACT ACCGAHGCTT TGGGTCTTCG TGTTGCTGGA ACCGTTGAGT AGCGTGCTCA CGTTCTCT%C ACTCACGCTC GTTCTGAAGA ACGTTÄCTCC AAGTGGATGG CAGTGAETGG TCGTGCTACC CGTACTCCAG TCGGTÉIGAC TGGTGCTCCA AIGACCGCAA AGACCTCTAT CGACATCTCT CCAÄTCGCAC AAACTGGTCC TGCATCCTAA GHGGGAAETC ID. NR: 6: SEKVENSKARAKTÃRïSTIK: 6960 7020 77080 7140 7200 7260 7320 7380 7440 7500' 7560 7620 7680 7740 7800 7860 7920 7980 8040 8100 8160 8220 8280 8340 8400 8418 520 353 42 LÃNGD: 23 baspar TYP¿ nukleinsyra STRANGTYP: enkel A B C D TOPOLOGI: linjär ( /\r\r\/\ §«\/\/\f (ii) MOLEKYLTYP: DNA (genomisk) (iii) HYPOTETISK: nej (iii) ANTI-sENsE= nej (Xi) SEKVENSBESKRIVNING: SEK.ID.NR: CNJIIHIET TRI¥$GGK3AAG (2) INFORMATION OM SEK. ID. NR; 7; (i) sEKvENsKARAKTÄRIsTIK= (A) LANGD: 23 baspar (B) TYP¿ nukleinsyra (C) STRANGTYP; enkel (D) TOPOLOGI= linjär (ii) MOLEKYLTYP: DNA (genomisk) (iii) HYPOTETIsK= nej (iii) ANTI-sENsE= nej (Xi) SEKVENSBESKRIVNING: SEK.ID.NR: AACGMQKIÉ NUUKEN3¥\AGC (2) INFORMATION OM SEK. ID. NR: 8; (i) sEKvENsKARAKTÅRIsTIK= (A) LANGD: 23 baspar (B) TYP¿ nukleinsyra (C STRANGTYP: enkel (D) TOPOLOGI= linjär (ii) MOLEKYLTYP: DNA (genomisk) (iii) HYPOTETIsK= nej (iii) ANTI-SENSE: nej (Xi) SEKVENSBESKRIVNING: SEK.ID.NR: 6: 23 23 .,)=. 529 353 ¿ß§¿¿ 43 ANKEGKIE GKIÉÉKXIÉAAC (2) INFORMATION OM SEK. ID. NR: 9: (i) SEKVENSKARAKTÅRISTIK: (A) LANGD: 23 baspar (B) TYP¿ nukleinsyra (C) STRANGTYP: enkel (D) TOPOLOGI: linjär (ii) MOLEKYLTYP: DNA (genomisk) (iii) HYPoTETIsK= nej (iii) ANTI-sENsE= nej (Xi) SEKVENSBESKRIVNING: SEK.ID.NR: GNIITCKIÉTfl¶flTCH¶?CCC (2) INFORMATION oM SEK. ID. NR; io; (i) sEKvENsKARAKTÅRIsTIK= (A) LANGD: 20 baspar (B) TYP¿ nukleinsyra (C) sTRANGTYP= enkel (D) ToPoLoGI= linjär (ii) MOLEKYLTYP: DNA (genomisk) (iii) HYPoTETIsK= nej (iii) ANII-sENsE= nej (Xi) SEKVENSBESKRIVNING: SEK.ID.NR: CAN3UKIHT“GGTNRIIflG (2) INFORMATION OM SEK. ID. NR: ll: (i) SEKVENSKARAKTÅRISTIK5 (A) LANGD: 23 baspar (B) TYP¿ nukleinsyra (C) STRANGTYP: enkel (D) TOPOLOGI: linjär (ii) MOLEKYLTYP: DNA (genomisk) (iii) HYPOTETISK: nej (iii) ANTI-sENsE= nej .H e- 23 9: 23 lO: 20 520 353 a 44 (Xi) SEKVENSBESKRIVNING: SEK.ID.NR: ll: TCTFHGÜHSTCGKECTXIGTT 23 (2) INFORMATION OM SEK. ID. NR: 12: (i) SEKVENSKARAKTÃRISTIK: (A) LANGD: 24 baspar (B) TYP¿ nukleinsyra (C) STRANGTYP: enkel (D) ToPoLoGI= linjär (ii) MOLEKYLTYP: DNA (genomisk) (iii) HYPoTETIsK= nej (iii) ANTI-SENSE: nej (Xi) SEKVENSBESKRIVNING: SEK.ID.NR: 12: GoGmxnxflA.ummxmcTcAcnnT 24 (2) INFORMATION OM SEK. ID. NR: 13: (i) sEKvEN§KARAKTÄRIsTIK= (A) LANGD: 23 baspar (B) TYP¿ nukleinsyra (C) STRANGTYP: enkel (D) ToPoLoGI= linjär (ii) MOLEKYLTYP: DNA (genomisk) (iii) HYPOTETISK: nej (iii) ANTI-sENsE= nej (Xi) SEKVENSBESKRIVNING: SEK.ID.NR: 13: CGO$MIHCÄ.NTH¥KKï¶C ACT 23 (2) INFORMATION OM SEK. ID. NR: 14: (i) SEKVENSKARAKTÄRISTIK: (A) LANGD: 20 baspar (B) TYP¿ nukleinsyra (C) STRANGTYP: enkel (D) TOPOLOGI: linjär i...- 520 353 45 (ii) MoLEKYLTYP= DNA (genomisk) (iii) HYPoTETIsK= nej (iii) ANTI-SENSE: nej (Xi) SEKVENSBESKRIVNING: SEK.ID.NR: TCKHÄGXfl'GMETflHTG (2) INFORMATION OM SEK. ID. NR: 15: (i) SEKVEN§KARAKTÃRISTIK: (A) LANGD: 20 baspar (B) TYP¿ nukleinsyra (C) STRANGTYP: enkel (D) ToPoLoGI= linjär (ii) MOLEKYLTYP: DNA (genomisk) (iii) HYPOTETISK: nej (iii) ANTI-SENSE: nej (Xi) SEKVENSBESKRIVNING: SEK.ID.NR: CGKIEIMKINUHCGKET (2) INFORMATION OM SEK. ID. NR; 16; (i) sEKvBN§KARAKTÅRIsTIK= (A) LANGD: 19 baspar (B) TYP¿ nukleinsyra (C) STRANGTYP: enkel (D) ToPoLoGI= linjär (ii) MOLEKYLTYP: DNA (genomisk) (iii) HYPoTETIsK= nej (iii) ANTI-SENSE: nej (Xi) SEKVENSBESKRIVNING: SEK.ID.NR: ÅCCTKIXHT GMKHQCÜI (2) INFORMATION OM SEK. ID. NR: 17: (i) SEKVENSKARAKTÅRISTIK: 14: 20 15: 20 16: 19 520 353 46 (A) LÃNGD: 23 baspar (B) TYP¿ nukleinsyra (C) STRANGTYP: enkel (D) ToPoLoGI= linjär (ii) MOLEKYLTYP: DNA (genomisk) (iii) HYPOTETISK: nej (iii) ANTI-sENsE= nej (Xi) sEKvENsBEsKRIvNING= sEK.ID.NR= 17; TCAMIfl%CA(XHGATTKI3ACC, 23 (2) INFORMATION OM SEK. ID. NR: 18: (i) sEKvEN§KARAKTÄRIsTIK= (A) LANGD: 22 baspar (B) TYP¿ nukleinsyra (C) STRANGTYP: enkel (D) ToPoLoGI= linjär (ii) MOLEKYLTYP: DNA (genomisk) (iii) HYPOTETISK: nej (iii) ANTI-SENSE: nej (Xi) SEKVENSBESKRIVNING: SEK.ID.NR: 18: GGNIEGNKÉGNÜUHCREÅTC 22 (2) INFORMATION oM SEK. ID. NR; 19: (i) sEKvEN§KARAKTÄRIsTIK= '(A) LANGD: 22 baspar (B) TYP¿ nukleinsyra (C) STRANGTYP: enkel (D) ToPoLoGI= linjär (ii) MOLEKYLTYP: DNA (genomisk) (iii) HYPoTETIsK= nej (iii) ANTI-SENSE; nej (Xi) SEKVENSBESKRIVNING: SEK.ID.NR: 19: ;;,,» 520 353 47 CTM3I¶UKH'CCAANRBEE G3 (2) INFORMATION OM SEK. ID. NR: 20: (i) SEKVENSKARAKTÃRISTIK: (A) LANGD: 23 baspar (B) TYP¿ nukleinsyra (C) STRANGTYP: enkel (D) TOPOLOGI: linjär (ii) MOLEKYLTYP: DNA (genomisk) (iii) HYPOTETISK: nej (iii) ANTI-SENSE: nej (Xi) SEKVENSBESKRIVNING: SEK.ID.NR: TTPÄHKIEE AACTPHXUMEAAG (2) INFORMATION OM SEK. ID. NR: 21: (i) sEKvEN§KARAKTÅR1sTIK= (A) LANGD: 23 baspar (B) TYP¿ nukleinsyra (C) STRANGTYP: enkel (D) TOPOLOGI: linjär (ii) MOLEKYLTYP: DNA (genomisk) (iii) HYPOTETISK: nej (iii) ANTI-sENsE= nej (Xi) SEKVENSBESKRIVNING: SEK.ID.NR: CTAACTKIÉ CCND33¶M¥\AAC (2) INFORMATION OM SEK. ID. NR; 22; (i) sEKvENsKARAKTÅRIsTIK= (A) LANGD: 23 baspar (B) TYP¿ nukleinsyra (C) STRANGTYP: enkel (D) TOPOLOGI= linjär (ii) MOLEKYLTYP= DNA (genomisk) (iii) HYPOTETIsK= nej (iii) ANTI-sENsE= nej 20: 21: 22 23 23 -1.». ~.~\. :ns l u :I :I iY 1 rn... ..... ....
..... .., . .. H.~.. . ._§=,. - . . _.. . . . . .. _ ,. 48 (Xi) SEKVENSBESKRIVNING: SEK.ID.NR: 22: Gmnwcnfiæ cKxæNmmc<¶æ 23 (2) INFORMATION OM SEK. ID. NR: 23: (i) sEKvEN§KARAKTÅRIsTIK= (A) LANGD: 23 baspar (B) TYP¿ nukleinsyra (C) STRANGTYP: enkel (D) TOPOLOGI: linjär (ii) MOLEKYLTYP: DNA (genomisk) (iii) HYPoTETIsK= nej (iii) ANTI-SENSE: nej (Xi) SEKVENSBESKRIVNING: SEK.ID.NR: 23: ATICITGAGC 'ICATCIAAGCA GCC 23 (2) INFORMATION OM SEK. ID. NR: 24: (i) SEKVEN§KARAKTÄRISTIK: (A) LANGD: 22 baspar (B) TYP¿ nukleinsyra (C) STRANGTYP: enkel (D) TOPOLOGI: linjär (ii) MOLEKYLTYP: DNA (genomisk) (iii) HYPOTETISK: nej (iii) ANTI-SENSE: nej (Xi) SEKVENSBESKRIVNING: SEK.ID.NR: 24: AAGGTIGGTA 'ICGCIGGAGC 'IG _ 22 (2) INFORMATION OM SEK. ID. NR: 25: (i) sEKvEN§KARAKTÄRIsTIK= (A) LANGD: 23 baspar (B) TYP¿ nukleinsyra (C) STRANGTYP: enkel (D) ToPoLoGI= linjär .mm (Xi) 520 353 MOLEKYLTYP: HYPOTETISK: nej ANTI-SENSE: nej 49 DNA (genomisk) SEKVENSBESKRIVNING: SEK.ID.NR: 25: TCRXECNHTGKHÉCCTCTPHG (2) INFORMATION OM SEK. (i) (ii) (iii) (iii) (Xi) ÜQQNKIET ÜIEGNYQC CGOÄKXHTC GCNIIIEGC Gflïfiflyßß DUHCKECC CNNEGÜÉG G3WGUKTC CKÉÜXHGA TCRIHHTCA GIMEGIHG (2) INFORMATION OM SEK.
ID. NR: SEKVENSKARAKTÃRISTIK: (A) LÅNGD= 671 baspar (B) TYP¿ nukleinsyra (C) sTRANGTYP= enkel (D) TOPOLOGI: MOLEKYLTYP: DNA HYPOTETISK: nej ANTI-SENSE: nej linjär 26: (genomisk) SEKVENSBESKRIVNING: SEK.ID.NR: 26: ¶XEO3FGG N¶KEÅHIE TTPFKHÉAA TNHIHCGCT RRKIIIHÉC GGNKX¥%GC CNIIENKT CCCNKIIGA ¶X%CKHGG A TKHÉGIIC CRIXCKEH GNIEAXHG GQIEGEKE GEWEANHÄ CRXKIEUTC GTHIII%GG GCNGGHGG GIEGIHGT ÜIEGKXCC GIETHIIT Tflïßüyßß ¶IE¶¶flGG GNIEÜ3%G GNKEGÉHG CKFAGGII GIEAUHCA GKIEGHCC ID. NR: 27: myßanmrrcaxnwnym uxnanc¶:Aaxæmxßc Kmmnmwrcømwæwæ axæmxncrccnxaanw wxraxnaxaæucmxnc cnyuccuu~@xxæ@ans a¶Am¶wa;cNKnmxnA xKnGæmsAAßmxmm3m @3ucoxxm.cxxnmmnm TcGnxywAA'nxnø1n¶T GCflHCMI%(3fl%GGHTG 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 671 23 1~=|» .,»,. 520 353 50 (1) sEKvEN§KARAKTÅRIsTIK= (A) LANGD= 739 baspar (B) TYP¿ nukleinsyra (c) sTRANGTYP= dubbel (D) ToPoLoGI= linjär (ii) MoLEKYLTYP= DNA (genomisk) (iii) HYPOTETISK: nej (iii) ANTI-SENSE: nej (Xi) SEKVENSBESKRIVNING: SEK.ID.NR: 27: G¶EÜIÄMÉGMENKflGA ATKEGHCAA¶3flCNEG GJEGNQGAACRIÉNKI NÉQGBENSGGHENEGT ANKflTCNfl'CNUGTN¥E AAANEMFHC GMIEAMFE TG¶GCMIH'GIflTGKIE CCÜKEA¥Q.G3flCTFNE GG¶%CN@A'B¥ßGKIEA ANIEMflGA(I%O3KÉAA NX¥flCNKÅ(¥flÅCH¶%C GH%TKEN3GN%&¶3ßA (IICCGNIGGC GCAAGITAG TÜÜIYÜÉÅA(XHTGMIHC.HQHHTTNIÉÄGCHTKIÉG ¶MEEGG3fl'HREETTHfl'¶3U%TRIfl'HKIßCN¥% ¶3%AXflTT(fl%N3¶%GAATKfiCNflC(UENÄIHCA CKXÄANKEXTTMII?AAA(Xfl%CNX¥G.NKEA¶3Vß TÄCKHflCCA(XECHRX3fl'CNRIHÉNÉFAAGTFKEGA TUQAÉHÄG'KIßCNKflT'H¶WAGflVfl'CTKHCNME GMIÉGN3Q(AAMEEANK3G¶IEGNHT'GTH¥ïEGCA CTTTHTKI3\AAGNDU¥&fl AGNTKIflIfl'AGTACAN3U3 AMEGCKHC CR¶(ÅG3IIACK3ETNH'GIHÉTQKB AGANFKIKÉ'CTRENHUE&.AG3¶flïCÄT ÛKIFHTTGA OMHCCTKH'H$VK%TCN\AGCTHflÉGA'HVGCPKET ATTTKBVHC CÜÜHÉÉHTC GÄTKXITÉÄ.HTR¶VKHTT 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 739

Claims (9)

10 15 20 25 30 35 .- Uf: 520 353 7A-, v. 51
1. Sockerbetsplanta, inklusive avkomlingar därav, vilken (vilka) uttrycker cp4/epsps-enzymaktivitet, k ä n n e t e c k n a d d ä r a v, att PCR-amplifiering med dess genoma DNA som templat resulterar i amplifiering av ett 739 bp DNA-fragment när ett par av oligonukleotid- primers används, vilka är karakteriserade genom Sekvenserna SEQ ID NR: 18 och SEQ ID NR: 21.
2. Planta enligt krav 1 vari DNA karakteriserat genom nukleotidsekvensen enligt SEQ ID NR: 27 bildar en del av plantans genom.
3. Planta enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a d d ä r a v, att PCR-amplifiering med dess genoma DNA som templat resulterar i amplifiering av ett 834 bp DNA- fragment när ett par av oligonukleotidprimers används, vilka är karakteriserade genom sekvenserna SEQ ID NR: 20 och SEQ ID NR: 24.
4. Planta enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a d d ä r a v, att PCR-amplifiering med dess genoma DNA som templat resulterar i amplifiering av ett 1057 bp DNA- fragment när ett par av oligonukleotidprimers används, vilka karakteriseras genom sekvenserna SEQ ID NR: 17 och SEQ ID NR: 22.
5. Planta enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a d a v att PCR-amplifiering med dess genoma DNA som templat resulterar i amplifiering av ett 1224 bp DNA-fragment när ett par av oligonukleotidprimers används, vilka karakte- riseras genom sekvenserna SEQ ID NR: 19 och SEQ ID NR: 25.
6. Planta enligt krav 1, vari DNA karakteriserat ge- nom nukleotidsekvensen SEQ ID NR:4 bildar en del av plan- tans genom.
7. Planta enligt krav 6, vari nukleotidsekvensen SEQ ID NR: 1 ersätter kraftigt repetitiva DNA-sekvenser.
8. Planta_enligt krav 6, vari de delar av genomet som är direkt kopplade till nämnda nukleotidsekvens a. u' u v - | » v m . J f- .u 1 1 1 o . Ü."- . a. . . . 1 . J - u .H fl; v. . . .., , 1 . . a 1 ,, , . , ' ' I I H .. 52 är karakteriserade genom nukleotidsekvenserna SEQ ID NR: 2 och SEQ ID NR: 3.
9. Frö fràn en planta enligt något av kraven l-8.
SE9902189A 1997-10-31 1999-06-10 Transgen sockerbetsplanta vilken uttrycker cp4/epsps- enzymaktivitet SE520353C2 (sv)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US11200397P 1997-10-31 1997-10-31
PCT/EP1998/006859 WO1999023232A1 (en) 1997-10-31 1998-10-29 Glyphosate resistant transgenic plants

Publications (3)

Publication Number Publication Date
SE9902189D0 SE9902189D0 (sv) 1999-06-10
SE9902189L SE9902189L (sv) 1999-08-19
SE520353C2 true SE520353C2 (sv) 2003-07-01

Family

ID=22341613

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SE9902189A SE520353C2 (sv) 1997-10-31 1999-06-10 Transgen sockerbetsplanta vilken uttrycker cp4/epsps- enzymaktivitet

Country Status (20)

Country Link
US (2) US6204436B1 (sv)
EP (1) EP0950109A1 (sv)
JP (1) JP2001503280A (sv)
CN (1) CN1148453C (sv)
AU (1) AU1558099A (sv)
CA (1) CA2279258A1 (sv)
CZ (1) CZ300208B6 (sv)
DE (1) DE19881833B4 (sv)
DK (1) DK199900916A (sv)
FI (1) FI991221A (sv)
GB (1) GB2337263A (sv)
HK (1) HK1025360A1 (sv)
HU (1) HUP0001729A3 (sv)
PL (1) PL197872B1 (sv)
RU (1) RU2224024C2 (sv)
SE (1) SE520353C2 (sv)
SK (1) SK88599A3 (sv)
TR (1) TR199901515T1 (sv)
UA (1) UA85364C2 (sv)
WO (1) WO1999023232A1 (sv)

Families Citing this family (41)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5633435A (en) 1990-08-31 1997-05-27 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthases
PL197872B1 (pl) * 1997-10-31 2008-05-30 Syngenta Participations Ag Roślina buraka cukrowego wyrażająca aktywność enzymu cp4/epsps oraz jej rośliny potomne, transgeniczne nasiona rośliny buraka cukrowego wyrażające aktywność enzymu cp4/epsps oraz sposób wytwarzania transgenicznych roślin
US6489542B1 (en) 1998-11-04 2002-12-03 Monsanto Technology Llc Methods for transforming plants to express Cry2Ab δ-endotoxins targeted to the plastids
JP4803935B2 (ja) * 1999-10-08 2011-10-26 アフィニアム・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド Ｆａｂｉ阻害剤
DE60033959T2 (de) * 1999-12-07 2007-11-22 Monsanto Technology Llc Regenerierung und transformation von zuckerrüben
PT1240340E (pt) 1999-12-16 2012-08-01 Monsanto Technology Llc Construções de dna para expressão de polipéptidos heterólogos em plantas
US7105718B2 (en) 2000-03-31 2006-09-12 The Regents Of The University Of Colorado Compositions and methods for regulating metabolism in plants
EP1366070A2 (en) 2000-10-25 2003-12-03 Monsanto Technology LLC Cotton event pv-ghgt07(1445) and compositions and methods for detection thereof
AU2002230899B2 (en) 2000-10-30 2006-11-09 Monsanto Technology Llc Canola event PV-BNGT04(RT73) and compositions and methods for detection thereof
WO2002044407A2 (en) 2000-11-30 2002-06-06 Ses Europe N.V. Glyphosate resistant transgenic sugar beet characterised by a specific transgene insertion (t227-1), methods and primers for the detection of said insertion
AU2002255913B2 (en) * 2001-03-27 2007-10-18 Syngenta Seeds, Inc. Uses of white corn hybrids
EP1560584B1 (en) * 2001-04-06 2009-01-14 Affinium Pharmaceuticals, Inc. Fab i inhibitors
EG26529A (en) 2001-06-11 2014-01-27 مونسانتو تكنولوجى ل ل سى Prefixes for detection of DNA molecule in cotton plant MON15985 which gives resistance to damage caused by insect of squamous lepidoptera
BR0312771A (pt) * 2002-07-18 2005-05-03 Monsanto Technology Llc Métodos para usar polinucleotìdeos artificiais e composições destes para reduzir silenciamento de transgene
DK1575951T3 (da) * 2002-12-06 2014-09-15 Debiopharm Int Sa Heterocykliske forbindelser, fremgangsmåder til fremstilling deraf og deres anvendelse i terapi
US7566817B2 (en) 2003-01-31 2009-07-28 Monsanto Technology Llc Glyphosate tolerant alfalfa events and methods for detection
CN103088017B (zh) 2003-02-12 2016-04-13 孟山都技术有限公司 棉花事件mon 88913及其组合物和检测方法
SI1597373T1 (sl) * 2003-02-20 2012-11-30 Kws Saat Ag Sladkorna pesa odporna proti glifosatu
US7335816B2 (en) * 2003-02-28 2008-02-26 Kws Saat Ag Glyphosate tolerant sugar beet
JP4880448B2 (ja) * 2003-03-17 2012-02-22 アフィナム ファーマシューティカルズ，インコーポレーテッド 複数の抗生物質を含む組成物、及びそれを用いる方法
AU2004299829B2 (en) 2003-12-15 2007-08-16 Monsanto Technology Llc Corn plant MON88017 and compositions and methods for detection thereof
WO2007053131A2 (en) 2004-06-04 2007-05-10 Affinium Pharmaceuticals, Inc. Acrylamide derivatives as antibiotic agents
BRPI0512589A (pt) * 2004-06-24 2008-03-25 Monsanto Technology Llc epsps resistente a glifosato microbiano reivindicação de prioridade
DE102004057291C5 (de) * 2004-11-26 2010-08-26 Südzucker AG Mannheim/Ochsenfurt Lagerungsinduzierte Promotoren
PT1885176T (pt) 2005-05-27 2016-11-28 Monsanto Technology Llc Evento mon89788 de soja e métodos para a sua deteção
US20090156578A1 (en) * 2005-12-05 2009-06-18 PAULS Henry 3-Heterocyclylacrylamide Compounds as Fab I Inhibitors and Antibacterial Agents
CN101437843B (zh) * 2006-01-23 2013-08-07 密歇根州立大学评议会 抗草甘膦植物的育种方法及组合物
CA2647270A1 (en) * 2006-03-27 2007-10-04 Monsanto Technology Llc Methods of producing and using cold temperature tolerant plants, seeds, and crops
ES2498976T3 (es) 2006-05-26 2014-09-26 Monsanto Technology, Llc Planta y semilla de maíz correspondiente al evento transgénico MON89034 y procedimientos para su detección y uso
CA2658506C (en) 2006-07-20 2016-01-26 Affinium Pharmaceuticals, Inc. Acrylamide derivatives as fab 1 inhibitors
US8263613B2 (en) * 2007-02-16 2012-09-11 Affinium Pharmaceuticals, Inc. Salts, prodrugs and polymorphs of fab I inhibitors
WO2010135324A1 (en) 2009-05-18 2010-11-25 Monsanto Technology Llc Use of glyphosate for disease suppression and yield enhancement in soybean
KR101720885B1 (ko) 2012-06-19 2017-03-28 데비오팜 인터네셔날 에스 에이 (e)-n-메틸-n-((3-메틸벤조푸란-2-일)메틸)-3-(7-옥소-5,6,7,8-테트라히드로-1,8-나프티리딘-3-일)아크릴아미드의전구약물 유도체
CN103695446B (zh) * 2013-01-31 2016-08-03 北京未名凯拓作物设计中心有限公司 一种来源于恶臭假单胞菌的epsp合酶基因及其应用
LT3419628T (lt) 2016-02-26 2021-01-25 Debiopharm International Sa Medikamentas diabetinėms pėdų infekcijoms gydyti
DE102016106656A1 (de) 2016-04-12 2017-10-12 Kws Saat Se Kernkodierte männliche Sterilität durch Mutation in Cytochrom P450 Oxidase
DE102016015741A1 (de) 2016-04-12 2017-11-30 Kws Saat Se Kernkodierte männliche Sterilität durch Mutation in Cytochrom P450 Oxidase
CN107164514A (zh) * 2017-06-22 2017-09-15 中华人民共和国黄埔出入境检验检疫局 转基因甜菜gtsb77品系特异性实时荧光pcr检测引物、探针、方法和试剂盒
EP3628738A1 (en) * 2018-09-25 2020-04-01 KWS SAAT SE & Co. KGaA Method for controlling weed beets and other weeds
EP3628160A1 (en) 2018-09-25 2020-04-01 KWS SAAT SE & Co. KGaA Use of glyphosate herbicide for controlling unwanted vegetation in beta vulgaris growing areas
CN111118055A (zh) * 2020-01-03 2020-05-08 鲁东大学 高糖品种甜菜转基因体系的建立方法

Family Cites Families (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4535060A (en) 1983-01-05 1985-08-13 Calgene, Inc. Inhibition resistant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthetase, production and use
US5094945A (en) 1983-01-05 1992-03-10 Calgene, Inc. Inhibition resistant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthase, production and use
US4940835A (en) 1985-10-29 1990-07-10 Monsanto Company Glyphosate-resistant plants
CA1313830C (en) * 1985-08-07 1993-02-23 Dilip Maganlal Shah Glyphosate-resistant plants
US4971908A (en) 1987-05-26 1990-11-20 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthase
US5145783A (en) 1987-05-26 1992-09-08 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-endolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthase
US5312910A (en) 1987-05-26 1994-05-17 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthase
US7705215B1 (en) 1990-04-17 2010-04-27 Dekalb Genetics Corporation Methods and compositions for the production of stably transformed, fertile monocot plants and cells thereof
US5550318A (en) 1990-04-17 1996-08-27 Dekalb Genetics Corporation Methods and compositions for the production of stably transformed, fertile monocot plants and cells thereof
US5484956A (en) 1990-01-22 1996-01-16 Dekalb Genetics Corporation Fertile transgenic Zea mays plant comprising heterologous DNA encoding Bacillus thuringiensis endotoxin
WO1991010725A1 (en) 1990-01-22 1991-07-25 Dekalb Plant Genetics Fertile transgenic corn plants
AU655197B2 (en) 1990-06-25 1994-12-08 Monsanto Technology Llc Glyphosate tolerant plants
US5633435A (en) 1990-08-31 1997-05-27 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthases
FR2673643B1 (fr) 1991-03-05 1993-05-21 Rhone Poulenc Agrochimie Peptide de transit pour l'insertion d'un gene etranger dans un gene vegetal et plantes transformees en utilisant ce peptide.
US5631152A (en) 1994-10-26 1997-05-20 Monsanto Company Rapid and efficient regeneration of transgenic plants
AU712463B2 (en) * 1996-03-29 1999-11-04 Monsanto Europe S.A. New use of N-(phosphonomethyl)glycine and derivatives thereof
US5859348A (en) 1996-07-17 1999-01-12 Board Of Trustees Operating Michigan State University Imidazolinone and sulfonyl urea herbicide resistant sugar beet plants
US6376754B1 (en) 1997-03-07 2002-04-23 Asgrow Seed Company Plants having resistance to multiple herbicides and its use
EP1894467A3 (en) 1997-04-03 2008-07-16 DeKalb Genetics Corporation Use of glyphosate resistant maize lines
PL197872B1 (pl) * 1997-10-31 2008-05-30 Syngenta Participations Ag Roślina buraka cukrowego wyrażająca aktywność enzymu cp4/epsps oraz jej rośliny potomne, transgeniczne nasiona rośliny buraka cukrowego wyrażające aktywność enzymu cp4/epsps oraz sposób wytwarzania transgenicznych roślin

Also Published As

Publication number Publication date
GB2337263A (en) 1999-11-17
CN1148453C (zh) 2004-05-05
RU2224024C2 (ru) 2004-02-20
DE19881833T1 (de) 2000-02-10
DK199900916A (da) 1999-06-28
HUP0001729A2 (hu) 2000-09-28
FI991221A0 (sv) 1999-05-28
US6531649B1 (en) 2003-03-11
UA85364C2 (uk) 2009-01-26
GB9915068D0 (en) 1999-08-25
US6204436B1 (en) 2001-03-20
HK1025360A1 (en) 2000-11-10
JP2001503280A (ja) 2001-03-13
CZ300208B6 (cs) 2009-03-18
CN1242803A (zh) 2000-01-26
FI991221A (sv) 1999-05-28
SE9902189L (sv) 1999-08-19
HUP0001729A3 (en) 2002-04-29
CA2279258A1 (en) 1999-05-14
CZ235199A3 (cs) 1999-09-15
AU1558099A (en) 1999-05-24
DE19881833B4 (de) 2007-05-10
TR199901515T1 (xx) 2000-11-21
EP0950109A1 (en) 1999-10-20
GB2337263A8 (en) 2000-02-24
PL197872B1 (pl) 2008-05-30
WO1999023232A1 (en) 1999-05-14
WO1999023232B1 (en) 1999-07-15
PL334135A1 (en) 2000-02-14
SK88599A3 (en) 2000-03-13
SE9902189D0 (sv) 1999-06-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SE520353C2 (sv) Transgen sockerbetsplanta vilken uttrycker cp4/epsps- enzymaktivitet
KR100431366B1 (ko) 히드록시-페닐 피루베이트 디옥시게나아제의 유전자의 디엔에이서열 및 특정 제초제에 내성인 히드록시-페닐 피루베이트 디옥시게나아제 유전자 함유식물의 생산
WO2009085982A1 (en) Method to enhance yield and purity of hybrid crops
BR112018001306A2 (pt) molécula de ácido nucleico, método para a detecção da presença do dna de um evento de soja transgênico dbn9004, kit de detecção de dna, célula ou parte de planta, método para a produção ou cultivo de uma planta de soja tolerante a um herbicida glifosato e/ou um herbicida glufosinato, método para a proteção de uma planta contra o dano causado por um herbicida e/ou controle de ervas daninhas em um campo, método para o retardo da resistência a inseto e produto agrícola ou commodity
CA3188280A1 (en) Generation of plants with improved transgenic loci by genome editing
US20230146220A1 (en) Plant terminator for transgene expression
US12043840B2 (en) 3&#39;UTR sequence for transgene expression
US20240011043A1 (en) Generation of plants with improved transgenic loci by genome editing
Konagaya et al. Application of the acetolactate synthase gene as a cisgenic selectable marker for Agrobacterium-mediated transformation in Chinese cabbage (Brassica rapa ssp. pekinensis)
CN110881367A (zh) 一种玉米事件t抗-4及其使用方法
US20230313221A1 (en) Expedited breeding of transgenic crop plants by genome editing
EP4396357A1 (en) Methods and compositions for ppo herbicide tolerance
US20230024164A1 (en) Compositions and genome editing methods for improving grain yield in plants
US20200392528A1 (en) Improved plant epsp synthases and methods of use
US20240294937A1 (en) Genome editing of transgenic crop plants with modified transgenic loci
US20240309392A1 (en) Plant promoter for transgene expression
US20190062381A1 (en) Genetically altered plants having weeping phenotype
WO2023129099A1 (en) Developing orobanche (orobanche spp., phelipanche spp.) resistance in tomato (solanum lycopersicum), using gene editing technology (crispr)
WO2024047605A1 (en) Methods and compositions for ppo herbicide tolerance
CA3188282A1 (en) Expedited breeding of transgenic crop plants by genome editing
CN117512162A (zh) 转基因大豆事件xp-2及其检测方法
WO1996038034A1 (fr) Plantes resistant aux virus exprimant la synthetase de l&#39;acide 2&#39;,5&#39;-oligoadenylique et la ribonuclease l provenant de cellules animale, et leur methode d&#39;obtention
US20020002711A1 (en) Process for transforming germineae and the products thereof

Legal Events

Date Code Title Description
NUG Patent has lapsed