CN1241947C - 一种人参多糖制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种人参多糖的制备方法。该方法将人参或人参醇提后的药渣水煎提取,提取液过滤浓缩后醇沉,经离心得沉淀,沉淀经低温干燥得到人参多糖粗品;人参多糖粗品经多次水煮醇沉、过滤离心除杂,再经冻融离心、多次除杂蛋白,离心得上清液,上清液经减压浓缩、低温干燥得到人参多糖精品。得到的人参多糖精品通过药剂学上的方法,可制成各种剂型。使人参多糖注射液的产品质量得到有效提高,可充分发挥人参多糖增强机体免疫调节功能及增强化疗药物抗肿瘤作用,临床用于减轻肿瘤放化疗引起的副作用和作为肿瘤治疗的辅助用药。

Description

一种人参多糖制备方法
技术领域
本发明涉及一种人参多糖制备方法,属于中药制剂领域。
背景技术
人参多糖为中药人参的活性成份,为高分子葡聚糖。人参多糖能增强机体免疫调节功能及增强化疗药物抗肿瘤作用,对肿瘤有明显的抑制作用。实验表明,人参多糖能诱生肿瘤坏死因子和干扰素-γ,对肿瘤细胞有杀伤和抑制作用。肿瘤坏死因子是由激活的巨噬细胞/单核细胞系统产生的多功能蛋白分子,在机体内起着重要的生理作用。在体内肿瘤坏死因子可以通过3种途径发挥抗肿瘤作用:直接杀伤肿瘤细胞;作用于肿瘤血循环,导致肿瘤组织血供减少,从而影响肿瘤的生长;激活机体免疫系统的抗肿瘤作用。同时,肿瘤坏死因子还可介导炎性过程,减少网膜组织间皮细胞溶纤维蛋白活性,进而使网膜表面纤维蛋白增多,减少组织外渗。干扰素是细胞在受到刺激物作用后合成并释放出的蛋白性淋巴因子,其作用为:直接抗病毒作用;增强主要组织相容性抗原和肿瘤相关抗原的表达;增强自然杀伤细胞(NK)的细胞毒作用;增强抗体依赖性细胞的细胞毒作用;直接的抗细胞增殖作用和抗血管生成作用。同时人参多糖能增强T淋巴细胞及NK细胞活性,提高了机体的免疫调节功能,而有利于抗肿瘤作用的发挥。
人参多糖注射液的临床上作为注射剂使用时,现有给药途径均为肌肉注射,肌肉注射存在的主要问题为患者注射部位疼痛及长期注射可能出现局部红肿、淤血、肿块、甚至肌肉坏死等不良反应,而且生产所用原料由于制备工艺问题存在纯度不高问题,存在一定安全隐患。
发明内容
本发明的目的在于提供一种人参多糖的制备方法。
本发明所述制备方法包括:将人参或人参醇提后的药渣水煎提取,提取液过滤浓缩后醇沉,经离心得沉淀,沉淀经低温干燥得到人参多糖粗品;人参多糖粗品经多次水煮醇沉、过滤离心除杂,再经冻融离心、多次除杂蛋白,离心得上清液,上清液经减压浓缩、低温干燥得到人参多糖精品。
得到的人参多糖精品通过药剂学上的方法,可制成各种剂型,如注射液、片剂等;优选为注射液。
本发明所述的制备方法具体过程如下:
A)取人参,加入8~15倍重量水,煎煮2~3次,每次煎煮时间为30~90分钟,合并煎液,过滤,滤液减压浓缩至原体积的0.1~0.4倍;加入95%的乙醇使浓缩液含醇量为65~85%,0-8℃冷藏静置12~48小时,将冷藏后的药液用离心机低温离心20~40分钟(离心转速为3000~4000转/分),收集沉淀,沉淀低温干燥得人参多糖粗品;
B)人参多糖粗品加10~15倍重量水加热煮沸10~30分钟,降温,过滤,向滤液中加入95%的乙醇使含醇量为65~85%,0-8℃冷藏静置12~48小时,将冷藏后的药液用离心机在0-8℃下离心20~40分钟(离心转速为3000~4000转/分),收集沉淀;重复水煮醇沉、冷藏离心过程2~3次,得到人参多糖沉淀;人参多糖沉淀加10~20倍重量水溶解,药液用冷冻离心机在-10~-30℃冻实后,在0-8℃下融解离心20~30分钟(离心转速为3000~4000转/分),取上清液,上清液重复冻融离心1~2次后,将上清减压,减压浓缩,在0-8℃下干燥得到人参多糖精品。
上述制备方法也可以通过使用人参醇提后的药渣作为起始原料,通过上述过程实现。使用人参醇提后的药渣作为起始原料时,优选使用60-80%的醇溶液提取。
上述制备方法优选为:
A)取人参,第一次加12倍重量水煎煮1小时,第二次加10倍重量水煎煮50分钟,第三次加10倍重量水煎煮30分钟,合并煎液,过滤,滤液减压浓缩至原体积的0.2倍;加入95%的乙醇使浓缩液含醇量为75%,0-8℃冷减静置24小时,将冷藏后的药液用离心机在0-8℃下离心20分钟(离心转速为4000转/分),收集沉淀,沉淀在4℃下干燥得到人参多糖粗品;
B)人参多糖粗品加15倍重量水,加热煮沸20分钟,降温至50℃,过滤,向滤液中加入95%的乙醇使含醇量为80%,醇沉液冷藏,静置24小时,将冷藏后的药液用离心机在0-8℃下离心20分钟(离心转速为4000转/分),收集沉淀;重复水煮醇沉、冷藏离心过程2次,得人参多糖沉淀;人参多糖沉淀加20倍重量水溶解,用冷冻离心机在-20℃冻实后,在0-8℃下融解离心30分钟(离心转速为4000转/分),上清液重复冻融离心2次,上清液减压浓缩,在4℃下干燥得人参多糖精品。
经过上述方法制备的人参多糖,优选制成小容量注射剂;注射液为淡黄色清明液体,其规格可以为2ml、4ml、5ml、10ml,最优选规格为2ml、4ml,每ml含人参多糖量以半乳糖醛酸(C6H1007)计为3mg。
本发明所述人参多糖注射液临床应用时除肌肉注射外(一次4ml,一日2次),为避免肌肉注射时的疼痛和长期肌肉注射可能产生的不良反应,可通过静脉滴注给药,一次4ml~6ml(12mg~18mg),用5%葡萄糖注射液或0.9%氯化钠注射液稀释后缓慢滴注,一日1次。
本发明所述人参多糖注射液临床可与肿瘤化疗药(如环磷酰胺)配合使用,可有效减轻肿瘤放化疗引起的副作用,也可作为肿瘤治疗的辅助用药,本药物适合长期静脉滴注给药。
人参多糖能刺激机体的体液免疫和细胞免疫功能,对S-180、ESA、和u-14等动物移植肿瘤均有明显的抑制作用,与化疗药物配合使用时,人参多糖可增强化疗药物的抗肿瘤作用,又能降低环磷酰胺对骨髓和免疫功能的抑制作用。对CCl4引起的动物实验性肝损伤,人参多糖有治疗和预防作用,使SGPT降低。动物实验证明,人参多糖对应激性胃溃疡,消炎痛型,醋酸型和结扎胃幽门型溃疡均有一定的抑制作用。
通过本发明所述人参多糖的制备方法,能够获得高纯度人参多糖,用于人参多糖注射液的生产,可以使人参多糖注射液的产品质量得到有效提高,使其在热原、急性毒性试验等安全性指标方面达到更高水平,适合于长期静脉滴注。
急性毒性试验证明:给小白鼠尾静脉注射本发明所述人参多糖注射液,剂量为3g/kg,为成人每日临床剂量的10000~15000倍,小白鼠无死亡。热原检查试验表明,给兔静脉注射本发明所述人参多糖注射液,按中国药典2000年版方法检查热原,剂量按家兔每1kg注射1ml,符合规定。
人参多糖注射液静脉滴注给药,解决了肌肉注射时使注射部位疼痛及长期注射可能出现的局部红肿、淤血、肿块、甚至肌肉坏死等不良反应,具有生物利用度高、临床使用更方便、不良反应小、疗效迅速等优点,可充分发挥人参多糖增强机体免疫调节功能及增强化疗药物抗肿瘤作用,临床可与肿瘤化疗药(如环磷酰胺)配合使用,有效减轻肿瘤放化疗引起的副作用,也可作为肿瘤治疗的辅助用药。
具体实施方式
                         实施例1
取生晒参10kg,切碎,用75%乙醇煎煮回流提取4小时,提取后的药渣晾干,加水煎煮三次,第一次加12倍量水煎煮1小时,第二次加10倍量水煎煮50分钟,第三次加10倍量水煎煮30分钟,合并煎液,过滤,滤液减压浓缩至原体积的0.2倍;加入95%的乙醇使含醇量控制在75%,醇沉液冷藏,静置24小时,将冷藏后的药液用离心机低温离心20分钟(离心转速为4000转/分),收集沉淀,沉淀低温干燥得人参多糖粗品;人参多糖粗品加15倍量水加热煮沸20分钟,降温至50℃后,过滤,向滤液中加入95%的乙醇使含醇量控制在80%,醇沉液冷藏,静置24小时,将冷藏后的药液用离心机低温离心20分钟(离心转速为4000转/分),收集沉淀,重复水煮醇沉2次,冷藏离心得人参多糖沉淀;人参多糖沉淀加20倍量水溶解,-20℃冻实后融解,药液用冷冻离心机低温冻实后融解30分钟(离心转速为4000转/分),上清重复冻融离心2次,最后一次上清减压浓缩低温干燥得人参多糖精品50g(每克以半乳糖醛酸计含人参多糖250mg)。
取600ml的注射用水于浓配罐中,加入上述人参多糖精品24g(以半乳糖醛酸计含人参多糖6g)和氯化钠18g,搅拌使完全溶解,加入2g活性炭,加热煮沸15分钟,降温至50℃左右后脱炭过滤至稀配罐中,先定容到1800ml,加入1g亚硫酸氢钠和0.1g依地酸二钠,搅均,调节Ph值到5.3~5.5,检测药液含量,再定容至2000ml,中间体检验合格后,药液经终端过滤后灌装于2ml安瓿中,装量2ml,灭菌,即得2ml:4mg(以半乳糖醛酸计)规格人参多糖注射液。
                             实施例2
取生晒参10kg,切碎,用75%乙醇回流提取4小时,提取后的药渣晾干,加水煎煮2次,第一次加15倍量水煎煮90分钟,第二次加10倍量水煎煮60分钟,合并煎液,过滤,滤液减压浓缩至原体积的0.3倍;加入95%的乙醇使含醇量控制在85%,醇沉液冷藏,静置30小时,将冷藏后的药液用离心机低温离心30分钟(离心转速为3000转/分),收集沉淀,沉淀低温干燥得人参多糖粗品;人参多糖粗品加15倍量水加热煮沸30分钟,降温至40℃后,过滤,向滤液中加入95%的乙醇使含醇量控制在80%,醇沉液冷藏,静置36小时,将冷藏后的药液用离心机低温离心30分钟(离心转速为3000转/分),收集沉淀,重复水煮醇沉3次,冷藏离心得人参多糖沉淀;人参多糖沉淀加15倍量水溶解,-20℃冻实后融解,药液用冷冻离心机低温冻实后融解30分钟(离心转速为3000转/分),上清重复冻融离心1次,最后一次上清减压浓缩低温干燥得人参多糖精品45g(每克以半乳糖醛酸计含人参多糖280mg)。。
取600ml的注射用水于浓配罐中,加入上述人参多糖精品21.4g(以半乳糖醛酸计含人参多糖6g)和氯化钠18g,搅拌使完全溶解,加入2g活性炭,加热煮沸15分钟,降温至50℃左右后脱炭过滤至稀配罐中,先定容到1800ml,加入1g亚硫酸氢钠和0.1g依地酸二钠,搅均,调节Ph值到5.3~5.5,检测药液含量,再定容至2000ml,中间体检验合格后,药液经终端过滤后灌装于5ml安瓿中,装量4ml,灭菌,即得4ml:12mg(以半乳糖醛酸计)规格人参多糖注射液。
                          实施例3
取生晒参10kg,切碎,加水煎煮3次,第一次加15倍量水煎煮90分钟,第二次加12倍量水煎煮60分钟,第三次加10倍量水煎煮60分钟,合并煎液,过滤,滤液减压浓缩至原体积的0.3倍;加入95%的乙醇使含醇量控制在85%,醇沉液冷藏,静置36小时,将冷藏后的药液用离心机低温离心30分钟(离心转速为4000转/分),收集沉淀,沉淀低温干燥得人参多糖粗品;人参多糖粗品加10倍量水加热煮沸20分钟,降温至35℃后,过滤,向滤液中加入95%的乙醇使含醇量控制在80%,醇沉液冷藏,静置36小时,将冷藏后的药液用离心机低温离心30分钟(离心转速为4000转/分),收集沉淀,重复水煮醇沉3次,冷藏离心得人参多糖沉淀;人参多糖沉淀加20倍量水溶解,-20℃冻实后融解,药液用冷冻离心机低温冻实后融解30分钟(离心转速为4000转/分),上清重复冻融离心3次,最后一次上清减压浓缩低温干燥得人参多糖精品50g(每克以半乳糖醛酸计含人参多糖250mg)。。
取600ml的注射用水于浓配罐中,加入上述人参多糖精品24g(以半乳糖醛酸计含人参多糖6g)和氯化钠18g,搅拌使完全溶解,加入2g活性炭,加热煮沸15分钟,降温至50℃左右后脱炭过滤至稀配罐中,先定容到1800ml,加入1g亚硫酸氢钠和0.1g依地酸二钠,搅均,调节Ph值到5.3~5.5,检测药液含量,再定容至2000ml,中间体检验合格后,药液经终端过滤后灌装于10ml安瓿中,装量4ml,灭菌,即得10ml:30mg(以半乳糖醛酸计)规格人参多糖注射液。
                        实验例1
本实验例为本发明所述人参多糖注射液最优选规格2ml:4mg(以半乳糖醛酸计)的外观性状、pH值、蛋白质、异常毒性及其它规定的注射剂检查项目的检测。
√性    状  本品为淡黄色清明液体。
√pH    值  应为4.0~6.0(中国药典2000年版二部附录VI H)。
√蛋 白 质  取本品1ml,加30%磺基水杨酸溶液1ml,混匀,不得发生浑浊或沉淀。
√热    原  取本品,依法检查(中国药典2000年版二部附录XI D),剂量按家兔每1kg注射1ml,应符合规定。
√异常毒性  取本品,依法检查(中国药典2000年版二部附录VI C),按静脉注射法给药,应符合规定。
√其    他  应符合注射剂项下有关各项规定(中国药典2000版二部附录IB)。
                       实验例2
本实验例为本发明所述人参多糖注射液最优选规格2ml:4mg(以半乳糖醛酸计)的人参多糖定性测定。
取本品,加水制成每1ml含0.5mg的溶液,吸取0.2ml加0.25mol/L硼砂硫酸溶液3ml,混匀,水浴加热15分钟,取出,置冰水中5分钟,加入0.125Q%咔唑无水乙醇溶液2滴,混匀,室温放置1~2分钟,溶液呈紫红色。
                         实验例3
本实验例为本发明所述人参多糖注射液最优选规格2ml:4mg(以半乳糖醛酸计)的人参多糖定量测定。含人参多糖以半乳糖醛酸(C6H10O7)计算,应为标示量的90.0%~110.0%
含量测定精密量取本品1ml,置100ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液,另精密称取60℃减压干燥至恒重的半乳糖醛酸15mg置200ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取5ml,置10ml量瓶中,加水至刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密量取上述两种溶液各1ml,分别精密加入0.025mol/L硼砂硫酸液6ml,摇匀,水浴加热30分钟,放冷,各加0.125%咔唑无水乙醇液0.4ml,置水浴中加热10分钟,冷却,照分光光度法(中国药典2000年版二部附录VI A),在525nm的波长处测定吸收度,计算,即得。
通过三批测定,每ml含量结果见下表:
  批号   人参多糖(mg/ml)
  20030801   2.94
  20030802   3.06
  20030803   2.97
                       实验例4
本例为本发明人参多糖注射液注射液与化疗药物配合使用治疗失去手术时机的原发非小细胞肺癌与单独使用化疗药物治疗的临床对比,说明本发明人参多糖注射液与化疗药物配合使用对治疗恶性肿瘤具有减毒增效作用。
临床背景及治疗方法:
原发非小细胞肺癌病例共72例,随机分为治疗组(用人参多糖注射液配合化疗药物治疗),对照组(单纯用化疗药物治疗);其中治疗组35例,男性20例,女性15例,对照组37例,男性25例,女性12例。
治疗组:人参多糖注射液每日一次,一次4ml~6ml(12mg~18mg),用5%葡萄糖注射液或0.9%氯化钠注射液稀释后缓慢滴注,30天为一疗程,化疗采用EP方案,连用2-3个周期;对照组采用EP单纯化疗。
治疗结果:
1.对瘤体病灶疗效评定结果:瘤体不同程度缩小,主要表现对瘤体的稳定作用,治疗组缓解率71.4%,对照组缓解率67.6%,两组无明显差异性。
2.对生存质量和主要症状作用:治疗组病人生存质量普遍提高,karnofky评分平均提高10-20分;对照组karnofky评分提高10分5例,不变22例。治疗组与对照组karnofky评分差异有显著性。治疗前后治疗组神疲乏力、心悸气短、自汗盗汗症状的缓解率均较对照组高。
3.对骨髓造血功能的影响,观察白细胞功能,治疗组对造血系统有较好保护作用,治疗前后白细胞未见明显减少,对照组出现抑制、白细胞明显减少等毒副作用,治疗组明显优于对照组。
结论:
本发明所述人参多糖注射液能刺激机体的体液免疫和细胞免疫功能,与化疗药物配合使用时,人参多糖可增强化疗药物的抗肿瘤作用,又能降低化疗药物对骨髓和免疫功能的抑制作用,有保护骨髓造血功能、升高白细胞作用,从而提高病人生存质量,本药物适合长期静脉滴注给药。

Claims (3)

1、一种人参多糖制备方法,所述的制备方法具体过程如下:
A)取人参,加入8~15倍重量水,煎煮2~3次,每次煎煮时间为30~90分钟,合并煎液,过滤,滤液减压浓缩至原体积的0.1~0.4倍;加入95%的乙醇使浓缩液含醇量为65~85%,0-8℃冷藏静置12~48小时,将冷藏后的药液用离心机低温离心20~40分钟,离心转速为3000~4000转/分,收集沉淀,沉淀低温干燥得人参多糖粗品;
B)人参多糖粗品加10~15倍重量水加热煮沸10~30分钟,降温,过滤,向滤液中加入95%的乙醇使含醇量为65~85%,0-8℃冷藏静置12~48小时,将冷藏后的药液用离心机在0-8℃下离心20~40分钟,离心转速为3000~4000转/分,收集沉淀;重复水煮醇沉、冷藏离心过程2~3次,得到人参多糖沉淀;人参多糖沉淀加10~20倍重量水溶解,药液用冷冻离心机在-10~-30℃冻实后,在0-8℃下融解离心20~30分钟,离心转速为3000~4000转/分,取上清液,上清液重复冻融离心1~2次后,将上清减压,减压浓缩,在0-8℃下干燥得到人参多糖精品。
2、根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于步骤A)中,使用人参醇提后的药渣作为起始原料,替代人参。
3、根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于使用60-80%的醇溶液提取,得到人参醇提后的药渣作为起始原料。
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