CN1224464A

CN1224464A - 一种新的生长因子和编码这种生长因子的基因序列

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Publication number: CN1224464A
Application number: CN96193035A
Authority: CN
Inventors: N·K·哈瓦德; G·威伯; S·格里穆德; M·诺登斯阔德; C·拉森
Original assignee: Amrad Operations Pty Ltd
Current assignee: CSL IP Investments Pty Ltd
Priority date: 1995-03-02
Filing date: 1996-02-22
Publication date: 1999-07-28
Anticipated expiration: 2016-02-22
Also published as: HU223438B1; HUP9800377A3; BR9607628A; FI973571A0; DE69630442D1; HK1002963A1; DE69630442T2; WO1996027007A1; JPH11500139A; NZ301611A; JP2001037493A; NO974035L; KR100414615B1; ATE252600T1; NO320839B1; KR19980702702A; FI120153B; EP0815221B1; CN1194090C; FI973571A

Abstract

本发明总的来说涉及具有类血管内皮生长因子性质之分离的分子和编码这种分子的基因序列。此分子在治疗学和诊断学的开发领域中是有用的,并且在治疗、预防和/或诊断需要提高或缩小脉管系统和/或血管渗透性的病症方面也是有用的。本发明的分子也是初级和中枢神经元有用的效应物并能够诱导星形神经胶质增殖。

Description

一种新的生长因子和编码这种生长因子的基因序列

本发明总的来说涉及具有类血管内皮生长因子性质之分离的分子和编码这种分子的基因序列。此分子在治疗学和诊断学的开发领域中是有用的，并且在治疗、预防和/或诊断需要提高或缩小脉管系统和/或血管渗透性的病症方面也是有用的。本发明的分子也是初级和中枢神经元有用的效应物并能够诱导星形神经胶质增殖。

在本说明书中作者所指出的出版物的文献细节收录在此说明书的结尾处。在此说明书中所指的核苷酸和氨基酸序列识别号(SEQ ID NO:)在文献之后限定。

在整个说明书中，除非上下文的含义有特殊要求，词汇“包含”应该理解为包括所述的要素或整体或要素与整体组，但不排除任何其它的要素或整体或要素与整体组。

血管内皮生长因子(下文称为“VEGF”)，也是作用于血管的渗透因子，是一种特异激活内皮组织的分泌性的、共价连接的同型二聚体糖蛋白(Senger等1993)。功能范围归于VIGF，例如和正常的血管生成有关，包括黄体的形成(Yau等，1993)、胎盘发育(Sharkey等，1993)、血管渗透性的调节(Senger等，1993)、炎症血管形成(Sunderkotter等，1994)、自体移植(Dissen等，1994)和人类疾病(如肿瘤促进的血管形成(Follunan和Shing,1992)、风湿性关节炎(Koch等，1994)以及和糖尿病相关的视网膜病(Folkman和Shing,1992))。

因此，VEGF是一种重要的分子，在研究基于VEGF或其活性的治疗剂、预防剂和诊断剂方面是具有潜在的价值的目标。也有必要鉴定用于VEGF替代物或/和VEGF结合的同系化合物或其它相关的分子。

在导致本发明的工作中，发明人寻找多重的内分泌瘤形成Ⅰ型敏感基因(MEN1)。令人惊奇地，发明人发现一种非MEN1候选基因的基因序列，然而是一种和VEGF具有一些相似性的新生长因子。并且，本发明的生长因子是初级和中枢神经元的效应物分子。

因此，本发明的一个方面包括生物学上分离的蛋白质分子，其包含下列氨基酸序列：

(ⅰ)和SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列具有至少15％的相似性(similarity)；和

(ⅱ)和SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列具有至少5％的不相似性(dissimilarity)；

本发明的另一方面提供了生物学上的分离蛋白质分子，其具有下列特征：

(ⅰ)包含一种和SEQ ID NO:2所示的全部或部分氨基酸序列具有至少大约15％的相似性但具有至少大约5％的不相似性的氨基酸序列；

(ⅱ)显示出至少一种与VEGF共同的性质。

本发明的一个相关的方面涉及具有下列特征的生物学上分离的蛋白质分子：

(ⅰ)包含一种和SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列具有至少大约15％的相似性但具有至少大约5％的不相似性的氨基酸序列；

(ⅱ)至少具有下列性质之一：

(a)诱导血管内皮细胞的能力；

(b)和flt-1/flk-1受体家族相互作用的能力；

(c)诱导细胞迁移、细胞生存和/或增加胞内碱性磷酸酶水平的能力。

“生物学上分离的”的意思是此分子至少经历一步生物源纯化。优选的是此分子是生物学上纯化的，即相对于此组合物中的其它化合物而言，这种组合物中含有至少大约20％，更优选的是至少大约40％，进一步优选的是至少大约65％，再优选的甚至是大约80-90％或更多的此种分子(以重量、活性或其它的方便手段测定)。最优选的是此种分子是序列纯化的。

本发明的另一个优选方面提供了重组形式的分子。

因此，本发明的这个方面提供了包含下列氨基酸序列的重组分子：

(ⅰ)和SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列具有至少15％的相似性；和

(ⅱ)和SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列具有至少5％的不相似性；

本发明的一个方面直接针对于具有下列特征的重组分子：

(ⅱ)显示出至少一种与VEGF共同的性质。

本发明的另一个相关的方面涉及具有下列特征的重组分子：

(ⅱ)至少具有下列性质之一：

(a)诱导血管内皮细胞的能力；

(b)和flt-1/flk-1受体家族相互作用的能力；

本发明也涉及编码和SEQ ID NO:1具有至少大约15％的相似性但具有至少大约5％的不相似性之蛋白质分子的基因组或部分基因组克隆。SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列相应于人类VEGF(本文称为“VEGF₁₆₅”)。因此，本发明的分子是类VEGF或是VEGF的同系物，但是包括和VEGF的氨基序列相似但不同的氨基酸序列。尽管本发明用人类的类VEGF分子举例，但这是为了理解本发明涉及其它哺乳动物的同源分子和编码序列，例如家畜动物(如羊、猪、马和母牛)、伴侣动物(如狗和猫)和实验动物(如小鼠、大鼠、兔和豚鼠)以及非哺乳动物(例如如家禽鸟的鸟类)、鱼和爬虫类动物。在最优选的实施方案中，VEGF分子是人类起源的，并且由定位在染色体11q13上的一个基因编码。并且，本发明延伸到编码目标VEGF分子的基因组序列或其部分。

优选的是和SEQ ID NO:2所示的全部或部分氨基酸序列的相似百分比至少是大约30％，更优选的至少是大约40％，还优选的至少是大约50％，再优选的至少是大约60-70％，最优选的甚至是80-95％。

在一个特别优选的实施方案中本发明的VEGF分子包含SEQ ID NO:4氨基酸序列或其部分、片断、衍生物或类似物。特别优选的相似性包括大约19-20％和29-30％。本文参照的衍生物也包含剪接(splice)变体。因此，本发明扩展到SOM175的剪接变体。本发明涉及的剪接变体之例子包括但不限于实质上如SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8和/或SEQ ID NO:10至少之一所示的氨基酸序列的变体或其突变体或衍生物或进一步的剪接变体。

另一个实施方案提供了具有下列特征的重组分子：

(ⅰ)具有一种实质上如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列或与其全部或部分具有至少大约15％的相似性(假如所说的氨基酸序列和SEQ ID NO:2中所示的全部或部分氨基酸序列具有至少大约5％的不相似性)的氨基酸序列；

(ⅱ)显示出至少一种与VEGF相同的生物学性质。

另一个实施方案提供了具有下列特征的重组分子：

(ⅰ)具有一种实质上如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列或与其全部或部分具有至少大约15％的相似性(假如所说的氨基酸序列和SEQ ID NO:2中所示的全部或部分氨基酸序列具有至少大约5％的不相似性)的氨基酸序列；

(ⅱ)显示出至少一种与VEGF相同的生物学性质。

另一个实施方案提供了具有下列特征的重组分子：

(ⅰ)具有一种实质上如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列或与其全部或部分具有至少大约15％的相似性(假如所说的氨基酸序列和SEQ ID NO:2中所示的全部或部分氨基酸序列具有至少大约5％的不相似性)的氨基酸序列；

(ⅱ)显示出至少一种与VEGF相同的生物学性质。

另一个实施方案提供了具有下列特征的重组分子：

(ⅰ)具有一种实质上如SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列或与其全部或部分具有至少大约15％的相似性(假如所说的氨基酸序列和SEQ ID NO:2中所示的全部或部分氨基酸序列具有至少大约5％的不相似性)的氨基酸序列；

(ⅱ)显示出至少一种与VEGF相同的生物学性质。

VEGF的这些性质至少包括下列之一：

(a)诱导血管内皮细胞的能力；

(b)和flt-1/flk-1受体家族相互作用的能力；

按照本发明的优选的相似性至少是大约40％，更优选的至少是大约50％，再更优选的至少是大约65％的相似性。

本发明的另一个方面涉及相当于SEQ ID NO:4所示之氨基酸序列的一部分或其剪接变体(如SEQ ID NO:6,SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10所示)或其化学相等物的肽片段。本发明的生物学上分离的或重组分子可以是天然葡基化的，或可以包含一种根据其分离或合成的细胞而改变的糖基化模式。如果此分子是在原核有机体中通过重组手段产生的，则其将是非葡基化的。此分子可以是全长天然产生的形式或缩短了的或其它的衍生形式。

本发明的另一个方面直接针对编码本文所述的类VEGF分子的核酸分子。更具体地说本发明提供了一种核酸分子，其包含实质上如SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列、或与其全部或部分具有至少15％的相似性的核苷酸序列、或在核苷酸序列和SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列具有至少15％的相似性但至少30％的不相似性时在较低严格条件下能和SEQ ID NO:3所示核苷酸序列的反向互补序列杂交的核苷酸序列。SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列文本也称为“SOM175”。优选的不相似性百分比是大约35％，更优选的是大约39％，更加优选的是大约40-50％或更大。

为了限定严格性水平，可以参照Sambrook等(1989)9.47-9.51页，其内容本文一并参考，其中公开的洗涤步骤被认为是高严格水平的。本文限定的较低严格水平如37-45℃下在4-6X SSC/0.1-0.5％W/V SDS中洗涤2-3小时。根据杂交所涉及的核酸的来源和浓度，可以使用其它严格条件，如介质严格条件，本文认为这种条件是45℃或以上的温度下在1-4XSSC/0.25-0.5％W/V SDS中洗涤2-3小时，或本文认为高度严格的条件是60℃下在0.1-1％SSC/0.1％w/vSDS中洗涤1-3小时。

本发明还涉及编码上文所描述的类VEGF分子的核酸分子，其和SEQ IDNO:3具有至少15％的同源性。优选的同源性水平至少是大约40％，更优选的是大约60-70％。

本发明还直接针对人类VEGF的鼠化合物(本文称为“mVRF”)。和人类VEGF相比，在整个编码区mVRF具有大约85％的等同性和92％的保守氨基酸残基。mVRF由包含实质上如图9所示的核苷酸序列的核酸分子编码。

本发明的类VEGF分子可以单独或与其它的分子(如VEGF)在治疗和/或诊断应用的开发领域中起作用。因此，本发明延伸到包含这种类VEGF分子或其部分、片断、衍生物、化合物或类似物以及一种或几种药学上可接受的载体和/或稀释剂的药物组合物。并且，本发明延伸到载体和包含这些载体的宿主细胞，这种载体包含SEQ ID NO:3所示的核酸序列或与其具有至少大约15％，更优选的是大约40％，更加优选的是大约60-70％的相似性，但具有至少大约30％，更优选的是大约39％的的不相似性的核苷酸序列。此外，本发明延伸到核酶和基于SEQ ID NO:3的反义分子以及类VEGF分子的中和抗体。这种分子在改善效果(例如，在导致血管形成或肿瘤血管形成的类VEGF基因表达过程中的效果)方面可以是有用的，

本发明的另一个方面涉及在哺乳动物中诱导星形神经胶质增殖的方法，所说的方法包括对所说的哺乳动物施用具有下列特征的有效量的重组蛋白质分子：

(ⅰ)包括和SEQ ID NO:2所示的序列具有至少大约15％的相似性但至少大约5％的不相似性的氨基酸序列；

(ⅱ)表现出至少一种与血管内皮生长因子(VEGF)共同的性质，所说的施用是在适于诱导星形神经胶质增殖的时间和条件下进行的。

优选的是这种重组蛋白质分子包含SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。

本发明的另一个方面提供了在哺乳动物中促进神经存活和/或增殖的方法，所说的方法包括对所说的哺乳动物施用具有下列特征的有效量的重组蛋白质分子：

(ⅱ)表现出至少一种与血管内皮生长因子(VEGF)共同的性质，所说的施用生物是在适于诱导星形神经胶质增殖的时间和条件下。

本发明也涉及类VEGF分子的抗体或编码类VEGF分子的基因的核酸探针，它们作为诊断剂是有用的。

参照下列非限制性图和/或实施例，进一步描述本发明。

在附图中：

图1VEGF₁₆₅的核苷酸序列[SEQ ID NO:1]和相应的氨基酸序列[SEQ IDNO:2]。

图2SOM175的核苷酸序列[SEQ ID NO:3]和相应的氨基酸序列[SEQ IDNO:4]。

图3用SOM175蛋白质序列进行的BLAST检索结果。

图4VEGF cDNA和SOM175 cDNA的BESTFIT序列对比。

图5VEGF₁₆₅和SOM175及其剪接变体在核苷酸水平上的多重序列对比。

图6VEGF₁₆₅和SOM175及其剪接变体在氨基酸水平上的多重序列对比。

图7SOM175和其剪接变体的图解表示。

图8(a)人类SOM175的基因组结构，显示外显子/内含子图谱。

图8(b)人类SOM175的基因组结构，显示外显子/内含子边界。

图9衍生于mVRF cDNA克隆的核苷酸和推定的肽序列。在左侧给出核苷酸编号，从起始密码子开始。在右侧对氨基酸进行编号，从除去推定的信号肽后的推定的成熟蛋白质的第一个残基开始。双划线为可变剪接区并包含每一个mRNA产生的肽序列。以黑体字表示聚腺苷酸化信号。下划线为mVRF₁₆₇和mVRF₁₈₆的起始和终止密码子并由方框表示3 UTR的多形AC重复。箭头表示内含子/外显子的边界位置。

图10人类和鼠VRF蛋白质同种型的BESTFIT序列对比。A:mVRF₁₆₇和hVRF₁₆₇。B:mVRF₁₈₆和hVRF₁₈₆，此点是该序列不同于167氨基酸同种型的分歧点。氨基酸的等同以垂直线表示，保守氨基酸序列由冒号表示。箭头表示推定的人类和小鼠VRF的信号肽切割位点。

图11VRF₁₆₇和mVEGF₁₈₈(Breier等，1992)肽序列的BESTFIT序列对比。箭头表示mVEGF的信号肽切割位点。垂直线表明相同的氨基酸，冒号表示保守取代。氨基酸的编号如图9之图例所描述。

图12VRF(既然小鼠和人类化合物的内含子/外显子组织几乎相同，所示的为属VRF基因)和其它人类VEGF/PIGF/PDG的基因家族的成员间的基因结构对比。方框代表外显子。填充和开放的区域分别表示蛋白质编码区和非翻译区。VRF的hatched区表明由VRF₁₈₆同种型的可变剪接形成的附加的3UTR序列。显示了潜在的可变剪接产物。

图13和mVRF cDNA克隆杂交的各种成年小鼠组织(如图所示)总RNA的Northern印迹放射自显影图。在所有的样品中检测到了一个1.3kb的主要转录物。

图14小鼠中mVRF和mRNA表达模式的薄膜放射自显影图(A-C)和暗视野显微图(D-E)。在E14小鼠胚(A)的发育心脏(Ha)和大脑皮层(Cx)中存在阳性信号。在该部分的其它组织中也存在较低的背景信号。在E17中由于较强的杂交信号，胚(B)和心脏(Ha)清晰可见。在背部和胸部支架的脂肪组织(Fa)中存在同样的强信号。在脊髓(SC)和舌(T)中存在适中的杂交信号。和E14胚相比，背景信号减弱。在年青的成年小鼠(C-D)中，在心脏和胸部支架周围的脂肪组织中存在阳性信号，而，例如，肺(Lu)是非标记的。心脏杂交信号分配在整个左心室中，包括乳头状肌肉(D)。在E17中，心脏和过量的冷探针杂交，没有阳性信号(E)。刻度线=0.5mm(A),1.2mm(B),1mm(C),0.3mm(D),0.1mm(E)。

图15暗视野(A和C)和明视野(B和D)显微图显示小鼠中脂肪组织(A-B)和脊髓(C-D)的mVRF mRNA表达。在脂肪(A)中存在强杂交信号，如苏丹黑染色区的强标记所示。在骨骼肌(A-B中的M)中也存在较弱的信号。在成年脊髓中(C)mVRF探针在灰质中给出了一种神经元染色模式。Toloudine复染色显示腹角中的运动神经元(D)、具有mVRF mRNA较强阳性的灰质后角和中央管周围(没有显示)较深部分的中间神经元。刻度线=0.1mm(A),0.1mm(B),0.25mm(C),0.015mm(D)。

图16VEGF对8天的胚鸡(E8)感觉神经元的作用，由％存活率、％轴突过生长率和轴突平均长度(μm)指标测定。

图17VEGF和SOM17S对小鸡神经胶质的作用。试验了CNS神经胶质、外围神经胶质和少突神经胶质细胞。

图18各种SOM175蛋白质对小鼠星形神经胶质细胞的作用。←³H(cpm)

1．FGF-2(10ng/ml)阳性对照

2．SOM_ΔX6*1ng/ml

3．SOM_ΔX6 10ng/ml

4．SOM_ΔX6 100ng/ml

5．SOM_ΔX6 1000ng/ml

6．SOM_ΔX6 1000ng/ml，没有肝素

7．SOMX6**1ng/ml

8．SOMX6 10ng/ml

9．SOMX6 100ng/ml

10．SOMX6 1000ng/ml

11．SOMX6 1000ng/ml，没有肝素*指没有外显子6的SOM175；**指SOM175。图19各种SOM175蛋白质对少突神经胶质细胞的作用。←³H(cpm)1．FGF-2(10ng/ml)阳性对照

2．SOM_ΔX6*1ng/ml

3．SOM_ΔX6 10ng/ml

4．SOM_ΔX6 100ng/ml

5．SOM_ΔX6 1000ng/ml

6．SOM_ΔX6 1000ng/ml，没有肝素

7．SOMX6**1ng/ml

8．SOMX6 10ng/ml

9．SOMX6 100ng/ml

10．SOMX6 1000ng/ml

11．SOMX6 1000ng/ml，没有肝素*指没有外显子6的SOM175；**指SOM175。图20各种SOM175蛋白质对小鼠前脑神经元的作用。←％存活率1．FGF-2(10ng/ml)阳性对照

2．SOM_ΔX6*1ng/ml

3．SOM_ΔX6 10ng/ml

4．SOM_ΔX6 100ng/ml

5．SOM_ΔX6 1000ng/ml

6．SOM_ΔX6 1000ng/ml，没有肝素

7．SOMX6**1ng/ml

8．SOMX6 10ng/ml

9．SOMX6 100ng/ml

10．SOMX6 1000ng/ml

11．SOMX6 1000ng/ml，没有肝素*指没有外显子6的SOM175；**指SOM175。

表1

序列识别号概述SEQ ID NO:1 VEGF₁₆₅的核苷酸序列SEQ ID NO:2 VEGF₁₆₅的氨基酸序列SEQ ID NO:3 SOM175(类VEGF分子)的核苷酸序列SEQ ID NO:4 SOM175的氨基酸序列SEQ ID NO:5没有外显子6的SOM175的核苷酸序列SEQ ID NO:6没有外显子6的SOM175的氨基酸序列SEQ ID NO:7没有外显子6和外显子7的SOM175的核苷酸序列SEQ ID NO:8没有外显子6和外显子7的SOM175的氨基酸序列SEQ ID NO:9没有外显子4的SOM175的核苷酸序列SEQ ID NO:10没有外显子4的SOM175的氨基酸序列SEQ ID NO:11寡核苷酸SEQ ID NO:12寡核苷酸SEQ ID NO:13寡核苷酸SEQ ID NO:14寡核苷酸实施例1

人类cDNA克隆

通过粘粒D11S750(Larsson等，1992)筛选人类胎脑文库(λzapⅡ,Stratagene)而分离原SOM175 cDNA。将质粒在体外切除并获得1.1kb的单一cDNA。用上文描述的SOM175插入片断作为探针，从人类胎脾文库(Strategane,Unizap)中分离三个独立的SOM175 cDNA克隆。得到的三个克隆是SOM175-4A、-5A和-6A。SOM175-5A是一个没有外显子4形式(SOM175-e4)的可变剪切克隆。利用文库(Stratagene)生产者推荐的杂交条件和SOM175的随机引物插入物进行杂交筛选。

从λGT11人类黑素瘤细胞株A2058文库(Clontech)中分离两部分的人类SOM175 cDNA。利用Church和Gilbsn描述的杂交条件(1984)进行cDNA筛选。在每一种情况下，通过衍生于SOM175的PCR产物的随机引物产生探针。

小鼠cDNA克隆

利用人类SOM175筛选小鼠新生全脑cDNA文库(Unizap,Stratagene)。分离了四个非嵌合的克隆：M175-A、B、C、D。所有的克隆都是部分cDNA并且M175-C包含几个内含子。三个cDNA都没有外显子6。

对另一个称为M1的克隆进行了完全测序，并且发现其包含附加5utr和3utr部分的完全开放读框。

实施例2

DNA序列分析

编辑了cDNA克隆(SOM175)的整个序列和其相应的氨基酸序列，如图2所示。利用MAP(GCG，威斯康星大学)方法筛选序列的开放读框。观察到了一个单一的672bp开放读框(参见图2)。看来似乎只有很少的5非翻译序列(2bp)。由于3非翻译区包含多聚腺苷酸信号和多聚A尾部，所以其似乎是完整的。

利用BLAST算法(在美国NCBI进行)进行数据库同源检索。分析表明对几种哺乳动物的VEGF形式具有同源性(参见图3)。利用BESTFIT方法(GCG,威斯康星的大学；见图4和5)测定SOM175和人类VEGF₁₆₅间的同源量。利用BESTFIT分析估计核苷酸同源性为69.7％和蛋白质同源性估计为至少33.3％等同和52.5％的保守。核苷酸序列的BLAST分析表明和人类表达序列尾端EST06302(Adams等，1993)几乎完全相配。

这些数据表明SOM175编码和VEGF具有相似结构的生长因子。两个基因在同一位置具有起始和终止密码子并共有不连续的同源模块。所有的8个半胱氨酸以及认为和二聚作用有关的许多其它VEGF残基是保守的。这些残基是半胱氨酸-7(Cysteine)、脯氨酸-70(Proline)、半胱氨酸-72、缬氨酸-74(Valine)、精氨酸-77(Arginine)、半胱氨酸-78、半胱氨酸-80、半胱氨酸-81、半胱氨酸-82、半胱氨酸-89、脯氨酸-91、半胱氨酸-122、半胱氨酸-124，如图6所示。如果给出VEGF和SOM175基因产物间的结构保守性，它们可能共有相似的功能。认为SOM175编码和VEGF共有一些特性但又具有其独有性质的类VEGF分子。图1显示VEGF₁₆₅的核苷酸序列和相应的氨基酸序列。

实施例3

利用Clustal方法(MegAlign软件，DNASTAR，威斯康星)分析VEGF165家族和SOM175家族(蛋白)间的相似百分比和差异百分比。结果如图2.1和2.2所示。将另一种的SOM175剪接形式简写为SOM715-e6，其缺失所有的外显子6；SOM715-e6和7缺失所有的外显子6和7；而SOM175-e4缺失所有的外显子4。图7显示SOM175的剪接显示。图8a和8b显示内含子/外显子边界的SOM175基因组图。

表2.1

A SOM175剪接变体和人类VEGF₁₆₅间的核苷酸相似百分比

VEGF₁₆₅ SOM175 SOM175-e6 SOM175-e6和SOM175-e4

7VEGF₁₆₅ *** 34.9 39.7 41.4 37.0SOM175 *** 98.9 95.1 99.2SOM175-e6 *** 98.8 84.0SOM175-e6和 *** 80.37SOM175-e4 ***

B SOM175剪接变体和人类VEGF₁₆₅间的核苷酸不同百分比

VEGF₁₆₅ SOM175 SOM175-e6 SOM175-e6和7SOM175-e4VEGF₁₆₅ *** 41.7 41.6 41.7 41.8SOM175 *** 0.2 0.2 0.0SOM175-e6 *** 0.0 0.2SOM175-e6和 *** 0.37SOM175-e4 ***

表2.2

A SOM175剪接变体和人类VEGF₁₆₅间的氨基酸相同百分比

VEGF₁₆₅ SOM175 SOM175-e6 SOM175-e6和7SOM175-e4VEGF₁₆₅ *** 31.4 42.3 33.5 40.6SOM175 *** 74.7 73.7 99.1SOM175-e6 *** 76.8 99.1SOM175-e6和 *** 99.17SOM175-e4 ***

B SOM175剪接变体和人类VEGF₁₆₅间的氨基酸不同百分比

EGF₁₆₅ SOM175 SOM175-e6 SOM175-e6和7SOM175-e4VEGF₁₆₅ *** 65.7 55.4 54.6 57.4SOM175 *** 19.9 4.2 0.0SOM175-e6 *** 0.0 0.0SOM175-e6和 *** 0.07SOM175-e4 ***

实施例4

生物分析确定SOM175的功能

分析评价SOM175是否和VEGF在内皮细胞功能、血管形成和创伤愈合方面具有相似活性。以受体结合分布研究结果为基础进行其它分析。

内皮细胞功能分析

内皮细胞增殖如Ferrara和Henzel及Gospodarowicz等(1989)中的描述进行内皮细胞生长测定。

血管渗透性分析如Miles和Miles(1952)中所描述进行此种在豚鼠中利用Miles实验的分析。

细胞粘着性分析分析了SOM175对多形核白细胞粘着在内皮细胞上的影响。

趋化性利用标准的Boyden室趋化性分析方法进行了这种分析。

血纤维蛋白溶酶原激活剂分析在加入SOM175后测定内皮细胞的血纤维蛋白溶酶原激活剂和血纤维蛋白溶酶原激活剂抑制剂的产生(Pepper等(1991))。

内皮细胞迁移测定如Montesano等(1986)所描述测定SOM175刺激内皮细胞迁移和形成管的能力。

血管生成测定

如Leung等(1989)所描述评价SOM175在小鸡绒毛膜尿囊膜中诱导血管形成的反应。

利用下列测定方法评估了SOM175可能的神经营养行为：

轴突过度生长测定和基因诱导(PC12细胞)

PC12细胞(嗜铬细胞瘤株)通过发展交感神经元的特征对NGF和其它的神经营养性因素发生反应，包括早期和晚期基因的诱导及轴突的扩展。将这些细胞暴露在SOM175中并检测其反应(Drinkwater等(1991)；和Drinkwater等(1993))。

由周围神经系统(PNS)培养的神经元

将下列PNS的初始培养物暴露在SOM175中并检测其任何反应：

-神经脊和背根神经节的感觉神经元

-交感干神经节的交感神经元

-瘤形神经节感觉神经元衍生的基板

-脊髓的运动神经元

如Suter等(1992)和Marinou等(1992)的描述进行测定。

只要观察到体外反应，就如Hendry等(1992)的描述进行性质(如摄取和逆行运输)测定。

神经再生(PNS)

只要观察到SOM175的神经营养作用，就通过Otto等(1989)、Yip等(1984)和Hendry等(1976)的方法分析其在axotomised感觉神经元、交感神经元和运动神经元再生方面的可能作用。

SOM175对CNS神经元的作用

如Hagg等(1992)、Williams等(1986)、Hefti(1986)和Kromer(1987)的描述测定SOM175促进中枢神经系统神经元生存能力。

创伤愈合

如Schilling等(1959)描述的和Hunt等(1967)利用的方法在能得到的临床最相关的模型中测定SOM175支持创伤愈合的能力。

生血系统

在生血系统的特定细胞群体中进行了各种体内和体外测定并列于下文：

茎干细胞

鼠

利用FACS纯化的细胞发展各种体外鼠茎干细胞的测定：

(a)重新定居的茎干细胞

这些是有能力重新定居致死照射小鼠骨髓之细胞，并具有Lin^-、Rh^hi、Ly-6A/E、C-kit表型。在这些细胞中单独或通过和多种因子共培养检验实验物质，之后通过³H胸腺嘧啶核甙结合测量细胞增殖。

(b)晚期茎干细胞

这些是具有相对很少骨髓重新定居能力的细胞，但能产生D13CFU-S。这些细胞具有Lin^-、Rh^hi、Ly-6A/E、C-kit表型。将实验物质和这些细胞培养一段时间，并将其注射到致死照射受者中，然后计算D13脾克隆数。

(c)祖代丰富细胞

这些是在体外对单一生长因子反应的细胞，并具有Lin^-、Rh^hi、Ly-6A/E、C-kit表型。此分析将表明SOM175是否能直接充当生血祖先细胞。将实验物质和这些细胞在琼脂培养基中培养，7-14天之后计算克隆数。

动脉粥样硬化

平滑肌在动脉粥样硬化的发展或发生中起重要作用，需要其表型由收缩状态变成合成状态。嗜细胞、内皮细胞、TB-淋巴细胞和血小板通过影响平滑肌细胞的生长和表型调节在动脉粥样硬化噬斑的发展过程中起作用。利用在多细胞环境中测定平滑肌细胞的增值率和表型调节的体外分析评价SOM175对平滑肌细胞的作用。此系统利用了改良的Rose室，其将不同类型的细胞接种在相反的盖玻片上。SOM175对骨的作用

如Lowe等(1991)描述的方法测定SOM175调节成骨细胞增殖的能力。如Lowe等(1991)描述的方法测定任何对骨吸收的影响。如Didy等(1994)描述的方法分析在胞内分子间对成骨细胞迁移和变化的作用(如cAMP的积累和碱性磷酸酶水平)。

对骨骼肌细胞的作用

可以如Ewton等(1980)和Gospodarowicz等(1976)的描述测定SOM175对成肌细胞增殖和肌管发育的作用。888

实施例5

鼠VRF克隆

cDNA分离

由λZap新生全脑的cDNA文库(Stratagene)中筛选鼠VRF(mVRF)克隆。从高密度滤膜中通过和³²P标记的682bp探针(探针如上文所述的方法通过PCR由hVRF cDNA(pSOM175)产生)杂交鉴定原发噬菌体。在65℃Church和Gilber(1984)描述的条件下进行杂交和尼龙膜(Hybond-N)的严格洗涤。挑出阳性噬斑，并将其纯化，在体外切割以产生含有pBluescript SK-中的cDNA克隆的细菌菌落。

基因组克隆的分离

由在λFixⅡ载体(Stratagene)中克隆的小鼠SV/129株文库中分离基因组克隆。利用mVRF cDNA的233-798核苷酸区的PCR扩增产生的32P标记的563bp探针筛选高密度滤膜(5×10⁴pfu/滤膜)(参见图9)。塞住(plug)阳性克隆并用含有400-800pfu的滤膜重新筛选。利用QIAGEN试剂盒或ZnCl₂纯化(Santos,1991)制备大规模噬菌体制剂。

核苷酸测序和分析

根据制造者的说明，利用带有应用生物系统公司的(ABI)染色末端测序试剂盒的各种以载体为基础的内部引物对cDNA的两条链进行测序。在ABI型373A自动DNA测序仪上分析序列。利用BESTFIT方法(GCG，威斯康星)进行肽同源比较。

内含子/外显子边界确定

以小鼠基因组DNA或mVRF基因组λ克隆作为模板，利用PCR进行外显子边界和侧翼区鉴定。在PCR中所用的鉴定内含子的引物来源于hVRF序列，为了使潜在的人类-小鼠序列错配退火，使用估计的Tm之下的温度(5-10℃)。通过琼脂糖凝胶电泳测定所有的PCR产物的大小，利用QIAquick旋转柱(Qiagen)纯化凝胶，并由这些产物直接对内含子/外显子边界测序。此外，由MVRF亚克隆基因组片段对一些剪接接合区进行测序。通过比较cDNA和基因组DNA序列鉴定内含子/外显子边界。

Northern分析

由一系列新鲜的正常成年小鼠组织(人脑、肾、肝脏、肌肉)利用Chomczynski和Sacchi(1987)的方法制备细胞总RNA。将20μg总RNA电穿孔，转移到尼龙膜(Hybond N,Amersham)中，并在标准的条件下杂交(Church和Gilnrty,1984)。在65℃下0.1 xSSC9(20xSSC是3M NaCl/0.3M柠檬酸三钠)、0.1％SDS中洗涤，并将其在70℃下暴露在带有增感屏的X射线胶卷中1-3天。

mVRF cDNA的描述

利用hVRF cDNA克隆通过筛选鼠cDNA文库分离鼠VRF化合物。回收和测序了0.8-1.5kb的5种大小的克隆。编辑cDNA序列，给出了覆盖整个开放读框(根据剪接形式为621bp或564bp，见下文)、3 UTR(379bp)以及5UTR的163bp的全长1041bp的cDNA序列(图9)。

推定的起始密码子与hVRF中的起始密码子位置匹配。一个非框架ATG的其它起始密码子定位在47位上，在上游观察到了两个终止密码子(分别是位9和33)，并和推断的起始密码子同在框内。

hVRF推定的N-末端信号肽似乎存在于具有81％等同性(17/21种氨基酸)的mVRF中。预计mVRF中的肽断裂发生在第21个残基后(图10)。这些数据表明成熟mVRF是分泌的，因此可能肯定起生长因子的作用。

关于hVRF，在通过文库筛选分离的cDNA中检测到了两种开放读框(0RFs)。发现5个克隆的4个是另外剪接的，并缺乏和hVRF外显子6同源的101bp片段。测定了mVRF两种同种型推定的肽系列，并和相应的人类同种型进行了比较(图10)。

编码mVRF186的信息包含621bp ORF，编码序列在+622位上终止，接近外显子7的末端(图9)。由于101bp的外显子6被剪接掉所引起的移码和在外显子8起点附近的+666位上引入了终止密码子(TGA)，编码mVRF167的较小信息实际上在+622位TAG的下游终止(图9)。

mVRF₁₈₆蛋白质与VEGF的氨基与中央部分具有较强的同源性，而富含丙氨酸的羧基末端则完全不同。mVRF₁₆₇具有这些相似性并也保留了对mVEGF直到C末端的同源性。(图11)。mVRF₁₆₇对hVRF₁₆₇的全部同源性分别是85％的等同性和92％的相似性(图10)。同样，mVRF₁₆₇和VEGF之间的同源性(Breier等，1992)分别是49％等同性和71％的保守氨基酸取代(图11)。

在mVRF cDNA中不存在典型脊椎动物的多聚腺苷酸信号(AATAAA)(Birnstiel，等1986)，而在小鼠和人类VRF cDNA的相似位置上存在密切匹配的序列GATAAA(图9)。和hVRF相比，发现mVRF在3UTR最远3末端含有AC二核苷酸重复(核苷酸位置从998到1011，图9)。在一些mVRF cDNA之间观察到了这种重复区的多形性，二核苷酸数目在7-11间变化。mVRF基因组描述

利用位于和相应的hVRF边界同源之序列两侧的引物，对内含子/外显子边界进行作图(表3)。mVRF的内含子Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ(表3，图12)小于hVRF的间插序列。通过对扩增的内含子和mVRF克隆的基因组部分测序，从mVRF的5UTR直到内含子Ⅵ(最大的间插区，2.2kb)对完整的基因组序列进行了编辑。在mVRF和hVRF的基因组结构间只有一个主要的区别，即关于这个cDNA序列，外显子7/内含子Ⅵ边界定位在10bp的再下游，因此，mVRF的外显子7为10bp，较hVRF中相应的外显子长。

在mVRF中外显子6和7邻接，这一点在人类化合物中也已发现。在mVRF和hVRF外显子6之间的较强同源性表明此序列不含有内含子序列，但编码VRF₁₈₆同种型的功能部分。

在VEGF基因家族的各种成员之间(VEGF、PIGF、hVRF)，内含子/外显子结构是保守的，因此mVRF的全部基因组结构和这些基因是非常相似的(图12)。

前面的比较图谱研究表明染色体11q13上的人类多种内分泌瘤形成类型1疾病基因座的周围区域和小鼠染色体19上的近接片断是同线的(Rochelle等，1992)。既然发明人已将hVRF基因作图到1kb人类MENI基因座上(参见上文)，非常可能鼠VRF基因应作图在染色体19的着丝粒附近。

mVRF的表达研究

成年小鼠组织(肌肉、心脏、肺脏和肝脏)RNA的Northern分析，显示表达似乎是普遍存在的，并主要以大小约为1.3kb的主带发生(图14)。这和hVRF中所观察的模式有些不同，其在所有检测的组织中都鉴定到了两个2.0kb和5.5kb的主带。1.3kb鼠信息很可能相当于人类较小的转录物，其大小的变化很可能是由于各自5UTRs长度的不同。

实施例6

鼠VEGF在出生前和出生后小鼠中的表达

动物

利用二氧化碳将怀孕期(n=4)和年轻的成年(n=2)小鼠(C57近亲交配株，ALAB，瑞典)杀死，并将有关的组织取出，冷冻成块。使用前，将组织保存在-70℃下。在此项研究中使用两种妊娠年龄：胚胎期8天(E8)、14和E17。

原位杂交组织化学

如原来的描述进行原位杂交(Dagerlind等，1992)。简言之，在低温控制器(Microm，德国)中切出横切面(14μm)，在含有探针的载物片上解冻(Fisher科学的，美国)，使用前保存在黑色密封的盒子中。合成的和编码mVRF的mRNA互补的42部分寡核苷酸的序列是ACCACCACCTCCCTGGGCTGGCATGTGGCACGTGCATAAACG[SEQ ID NO:11](和nt120-161互补)和AGTTGTTGACCACATTGCCCATGAGTTCCATGCTCAGAGGC[SEQ ID NO:12](和nt162-203互补)。为了检测另外两种剪接形式，使用了寡核苷酸GATCCTGGGGCTGGAGTGGGATGGATGATGTCAGCTGG[SEQ ID NO:13](和nt xxx-xxx互补)和GCGGGCAGAGGATCCTGGGG CTGTCTGGCCTCACAGCACT[SEQ ID NO:14]。利用比活性为7-10×10⁸cpm/μg的末端脱氧核苷酰转移酶(IBI，美国)将探针在3末端用脱氧腺苷-α[硫代]三膦酯(triphosphate)[³⁵S](NEN，美国)标记，并和没有预处理的区段(section)在42℃下杂交16-18小时。杂交混合物含有：50％v/v甲酰胺、4×SSC(1×SSC=0.15M NaCl和0.015M柠檬酸钠)、1×Denhardt溶液(聚乙烯吡咯烷酮、BSA和Ficoll各0.02％)、1％v/v sarcosyl(N-月桂酰肌氨酸；Sigma)、0.02M磷酸缓冲液(pH值7.0)、10％w/v葡聚糖硫酸盐(Pharmacia，瑞典)、250Clg ml酵母tRNA(Sigma)、500μg/ml共用的热变性鲑鱼精子DNA(Sigma)和200mM二硫苏糖醇(DTT；LKB，瑞典)。在对照区段中，通过向杂交混合物中加入20倍的过量未标记探针，检测了两种探针的特异性。此外，利用和本研究无关的探针杂交了邻近区段，其具有一种不同的表达模式。杂交后，将此区段在1×SSC中洗涤几次，在乙醇中脱水，然后浸在NTB2核径迹(nucleartrack)乳胶中(Kodak，美国)。3至5周后，将此区段在D-19显影液中显影(Kodak，美国)并放在盖玻片上(cover-slipped)。在某些情况下，此区段在浸入乳胶之前，在放射自显影胶片不显影(β-max放射自显影胶片Amersham公司，英国)。

四种不同的探针在所检查的组织中表现相同的杂交模式。已在E8胚中检测到了小鼠VRF的表达，在这种组织中，记录了遍布结构(最有可能相当于神经元管)的阳性信号。在E14小鼠胚的矢状(sagittal)部分中，在整个心脏和神经系统(特别是大脑皮层)(图14A)中存在最强的杂交信号。在所有其它的组织中存在较低水平的表达。在后一种妊娠年龄E17，高水平的mVRFmRNA信号局限在心脏和背部及颈部周围的棕色脂肪组织中(图14B)。在脊髓灰质和舌中存在清晰的阳性杂交信号(图14B)。相对于14天的胚，大脑皮层中的表达明显减少。在E14胚(如在肌中)中所见到的弱背景表达，在此妊娠年龄已明显降低。强mVRF mRNA杂交信号单独存在于年青成年小鼠的整个心脏和棕色脂肪中(图14C)。在整个心脏中的信号平均分配在整个心室壁上，包括乳头状肌肉(图14D)。在和过量冷探针杂交的心脏组织部分，在整个背景中没有记录到特异标记的信号(图14E)。

除了心脏，在胸部支架外侧的一些组织中存在mVRF mRNA，这些组织在形态上类似棕色脂肪。苏丹黑复染色证实了这一点，在相同的区域中显示很强的染色(图15A和15B)。在成年小鼠脊髓的横切面上，在整个灰质中，mVRF探针表现为神经元染色模式(图15C)。利用甲苯胺复染表明运动神经元在灰质腹侧(图15C和15D)，中间神经元(图15C)在灰质背侧和中央管周围，在很大程度上mVRF mRNA的阳性信号存在此处。

实施例7

VEGF和SOM175蛋白对小鸡感觉神经元的作用

利用了Nurcombe等(1992)的方法测定了VEGF和SOM175蛋白质对8天胚鸡感觉神经元的作用。利用每个测定孔的2000个细胞在48小时后记录神经元测定结果。利用³H胸腺嘧啶核甙计数获得结果。利用NGF作为阳性对照和各种浓度的VEGF、具有肝素的VEGF和具有肝素及5μM 5-氟尿嘧啶(5FU)的VEGF，测定神经元的百分比、轴突过生长和轴突平均长度。5FU能杀死神经胶质细胞。

结果如图16所示。结果表明VEGF在促进神经元存活方面是有效的，但需要神经胶质细胞的存在。图17表示VEGF和SOM175对三种类型的小鸡神经胶质的作用结果。实验的神经胶质是CNS神经胶质、外围神经胶质和CNS少突神经肢质细胞。在所有培养中，肝素的浓度是10μg/ml并在24小时记录测定结果。利用每孔2000个细胞以³H-胸腺嘧啶核甙测量结果。

结果表明在肝素存在的情况下，SOM175明显刺激小鸡的中央和周围神经元及星形神经胶质的增值，但小鸡的少突神经胶质细胞在分裂速率上表现负增加。

实施例8

SOM175蛋白对小鼠初级和中央神经元的作用

图7结果表明VEGF同种型通过星形神经胶质细胞媒介，影响小鸡的初级和中央神经元。在小鼠细胞中重复了类似的实验。

培养条件

按照“神经科学方法(vol.2)：细胞培养”(P.M.Conn编辑，学院出版社，San Diego,1990,33-46页用于星形神经胶质细胞，56-74页用于少突神经胶质细胞，87-102页用于中央神经元)所描述的方法，体外制备和培养所有实验的神经元和神经胶质细胞。

将细胞以2,000个细胞/孔的密度接种在用多聚L-鸟氨酸涂抹的24-孔培养群(Nunc)。在反相光线下，利用成熟的技术(Maruta等，1993)计算孔中的神经元，通过[³H]胸腺嘧啶核甙的吸收评价神经胶质细胞，以便下文监测细胞分裂速率。除了特别注明，任何时候培养基中都含有肝素(10μg/ml,低分子量组分，Sigma化学公司)。将5-氟-2-脱氧尿苷(Sigma)添加到神经元培养物中，以抑制背景神经胶质的生长。

通过³H胸腺嘧啶核甙的掺入分析神经胶质细胞的增值

在标准培养基中将细胞用³H胸腺嘧啶核甙(比活性为103μ Ci/μg，由0.1mCi/ml贮备浓度获得)脉冲14小时，使最终培养体积为20μl/孔。收获孔中的成分，并在硝酸纤维素纸上吸收(Titertek,Flow)。通过和typsin/versene(限制的CSL，维多利亚，澳大利亚)一起培养5分钟，除去仍然粘着的细胞。此过程进行两次。在标准的Titertek收获器(Flow)先用蒸馏水，然后用甲醇洗涤硝化纤维素盘。将硝化纤维素盘干燥，加入闪烁液体(包含5％v/vTriton-X)，并在闪烁计数器上对盘计数。

在小鼠星形神经肢质细胞培养物中，利用没有外显子6的SOM175制剂(SOM₁X6)，可以见到最大活性，此时，当和肝素一起使用时，对星形神经胶质细胞具有明显的刺激作用(图16)。对少突神经胶质细胞的增殖只有很少的刺激作用(图17)，对分离的前脑神经元的存活反应潜力则难以察觉(图18)。在三个图中每一点的标准差少于8％。

通过促进神经胶质细胞的增值，可以保存神经元的生存能力。并且，SOM₁X6是一个很好的星形神经胶质增殖的诱导剂，并可以协同星形神经胶质末梢(endfeet)的形成而表达。

表3

鼠VRF基因的剪接接合处5 UTR*…… 外显子 CCCAGgtacgtgcgt 内含子Ⅰ495bp

1＞223bpttccccacagGCCCC 外显子 2GAAAGgtaataatag 内含子Ⅱ288bp

43bpctgcccacagTGGTG 外显子 3TGCAGgtaccagggc 内含子196bp

197bp ⅢctgagcacagATCCT 外显子 4TGCAGgtgccagccc 内含子Ⅳ182bp

74bpctcttttcagACCTA 外显子 5GACAGattcttggtg 内含子Ⅴ191bp

36bpctcctcctagGGTTG 外显子 (没有内含

6101bp 子)CCCACTCCAGCCCCA 外显子 7TGTAGgtaaggagtc 内含子Ⅵ～2300b

135bp PcactccccagGTGCC 外显子 8AGAGATGGAGACACT

394bp

大写字母和小写字母分别表示外显子和内含子序列。

*表示外显子1的5末端还没有测定。

本领域技术人员清楚本文所描述的发明可以有一些变化和修改，而不仅仅是本文特定描述的这些。应该理解本发明包括这些变化和修改。本发明也包括此说明书中指出或表明的单独的或集合的所有步骤、特征、组合物和化合物，也包括所说的两个或多个步骤或特性的任何或全部组合。

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序列表

(1)一般信息：

(ⅰ)申请人：

(美国外的国家)AMRAD OPERATIONS PTY有限公司，

(仅美国)Hayward,N和Weber,G。

(ⅱ)发明名称：一种新的生长因子和编码这种生长因子的基因序列

(ⅲ)序列数：14

(ⅳ)通讯地址：

(A)收信人：DAVIES COLLISON CAVE

(B)街道：LITTLE COLLINS STREET

(C)城市：MELBOURNE

(D)州：VICTORIA

(E)国家：澳大利亚

(F)ZIP:3000

(ⅴ)计算机可读形式：

(A)介质类型：软盘

(B)计算机：IBM PC兼容机

(C)操作系统：PC-DOS/MS-DOS

(D)软件：Patentln Release#1.0，版本#1.25

(ⅵ)当前申请的数据：

(A)申请号：国际PCT

(B)申请日：1996-2-22

(ⅶ)在先申请的数据：

(A)申请号：AU PN1457

(B)申请日：1995-3-02

(A)申请号：AU PN6647

(B)申请日：1995-11-20

(A)申请号：AU PN7274

(B)申请日：1995-12-22

(ⅷ)律师/代理人信息：

(A)姓名：HUGHES DR,E JOHN L

(C)证书号：EJH/EK

(ⅸ)电信信息：

(A)电话：+61 3 9254 2777

(B)传真：+61 3 9254 2770

(2)SEQ ID NO:1信息：

(ⅰ)序列特征：

(A)长度：649个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：单链

(D)拓扑结构：线性

(ⅱ)分子类型：DNA

(ⅸ)特征：

(A)名称/关键词：CDS

(B)位置：17...589

(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:1:TCGGGCCTCC GAAACC ATG AAC TTT CTG CTG TCT TGG GTG CAT TGG AGC 49

Met Asn Phe Leu Leu Ser Trp Val His Trp Ser

1 5 10CTT GCC TTG CTG CTC TAC CTC CAC CAT GCC AAG TGG TCC CAG GCT GCA 97Leu Ala Leu Leu Leu Tyr Leu His His Ala Lys Trp Ser Gln Ala Ala

15 20 25CCC ATG GCA GAA GGA GGA GGG CAG AAT CAT CAC GAA GTG GTG AAG TTC 145Pro Met Ala Glu Gly Gly Gly Gln Asn His His Glu Val Val Lys Phe

30 35 40ATG GAT GTC TAT CAG CGC AGC TAC TGC CAT CCA ATC GAG ACC CTG GTG 193Met Asp Val Tyr Gln Arg Ser Tyr Cys His Pro Ile Glu Thr Leu Val

45 50 55GAC ATC TTC CAG GAG TAC CCT GAT GAG ATC GAG TAC ATC TTC AAG CCA 241Asp Ile Phe Gln Glu Tyr Pro Asp Glu Ile Glu Tyr Ile Phe Lys Pro60 65 70 75TCC TGT GTG CCC CTG ATG CGA TGC GGG GGC TGC TGC AAT GAC GAG GGC 289Ser Cys Val Pro Leu Met Arg Cys Gly Gly Cys Cys Asn Asp Glu Gly

80 85 90CTG GAG TGT GTG CCC ACT GAG GAG TCC AAC ATC ACC ATG CAG ATT ATG 337Leu Glu Cys Val Pro Thr Glu Glu Ser Asn Ile Thr Met Gln Ile Met

95 100 105CGG ATC AAA CCT CAC CAA GGC CAG CAC ATA GGA GAG ATG AGC TTC CTA 385Arg Ile Lys Pro His Gln Gly Gln His Ile Gly Glu Met Ser Phe Leu

110 115 120CAG CAC AAC AAA TGT GAA TGC AGA CCA AAG AAA GAT AGA GCA AGA CAA 433Gln His Asn Lys Cys Glu Cys Arg Pro Lys Lys Asp Arg Ala Arg Gln

125 130 135GAA AAT CCC TGT GGG CCT TGC TCA GAG CGG AGA AAG CAT TTG TTT GTA 481Glu Asn Pro Cys Gly Pro Cys Ser Glu Arg Arg Lys His Leu Phe Val140 145 150 155CAA GAT CCG CAG ACG TGT AAA TGT TCC TGC AAA AAC ACA GAC TCG CGT 529Gln Asp Pro Gln Thr Cys Lys Cys Ser Cys Lys Asn Thr Asp Ser Arg

160 165 170TGC AAG GCG AGG CAG CTT GAG TTA AAC GAA CGT ACT TGC AGA TGT GAC 577Cys Lys Ala Arg Gln Leu Glu Leu Asn Glu Arg Thr Cys Arg Cys Asp

175 180 185AAG CCG AGG CGG TGAGCCGGGC AGGAGGAAGG AGCCTCCCTC AGCGTTTCGG 629Lys Pro Arg Arg

190GAACCAGATC TCTCACCAGG 649

(2)SEQ ID NO:2信息：

(ⅰ)序列特征：

(A)长度：191个氨基酸

(B)类型：氨基酸

(D)拓扑结构：线性

(ⅱ)分子类型：蛋白质

(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:2:Met Asn Phe Leu Leu Ser Trp Val His Trp Ser Leu Ala Leu Leu Leu1 5 10 15Tyr Leu His His Ala Lys Trp Ser Gln Ala Ala Pro Met Ala Glu Gly

20 25 30Gly Gly Gln Asn His His Glu Val Val Lys Phe Met Asp Val Tyr Gln

35 40 45Arg Ser Tyr Cys His Pro Ile Glu Thr Leu Val Asp Ile Phe Gln Glu

50 55 60Tyr Pro Asp Glu Ile Glu Tyr Ile Phe Lys Pro Ser Cys Val Pro Leu65 70 75 80Met Arg Cys Gly Gly Cys Cys Asn Asp Glu Gly Leu Glu Cys Val Pro

85 90 95Thr Glu Glu Ser Asn Ile Thr Met Gln Ile Met Arg Ile Lys Pro His

100 105 110Gln Gly Gln His Ile Gly Glu Met Ser Phe Leu Gln His Asn Lys Cys

115 120 125Glu Cys Arg Pro Lys Lys Asp Arg Ala Arg Gln Glu Asn Pro Cys Gly

130 135 140Pro Cys Ser Glu Arg Arg Lys His Leu Phe Val Gln Asp Pro Gln Thr145 150 155 160Cys Lys Cys Ser Cys Lys Asn Thr Asp Ser Arg Cys Lys Ala Arg Gln

165 170 175Leu Glu Leu Asn Glu Arg Thr Cys Arg Cys Asp Lys Pro Arg Arg

180 185 190

(2)SEQ ID NO:3信息：

(ⅰ)序列特征：

(A)长度：1094个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：单链

(D)拓扑结构：线性

(ⅱ)分子类型：DNA

(ⅸ)特征：

(A)名称/关键词：CDS

(B)位置：3..624

(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:3:CC ATG AGC CCT CTG CTC CGC CGC CTG CTG CTC GCC GCA CTC CTG CAG 47

Met Ser Pro Leu Leu Arg Arg Leu Leu Leu Ala Ala Leu Leu Gln

1 5 10 15CTG GCC CCC GCC CAG GCC CCT GTC TCC CAG CCT GAT GCC CCT GGC CAC 95Leu Ala Pro Ala Gln Ala Pro Val Ser Gln Pro Asp Ala Pro Gly His

20 25 30CAG AGG AAA GTG GTG TCA TGG ATA GAT GTG TAT ACT CGC GCT ACC TGC 143Gln Arg Lys Val Val Ser Trp Ile Asp Val Tyr Thr Arg Ala Thr Cys

35 40 45CAG CCC CGG GAG GTG GTG GTG CCC TTG ACT GTG GAG CTC ATG GGC ACC 191Gln Pro Arg Glu Val Val Val Pro Leu Thr Val Glu Leu Met Gly Thr

50 55 60GTG GCC AAA CAG CTG GTG CCC AGC TGC GTG ACT GTG CAG CGC TGT GGT 239Val Ala Lys Gln Leu Val Pro Ser Cys Val Thr Val Gln Arg Cys Gly

65 70 75GGC TGC TGC CCT GAC GAT GGC CTG GAG TGT GTG CCC ACT GGG CAG CAC 287Gly Cys Cys Pro Asp Asp Gly Leu Glu Cys Val Pro Thr Gly Gln His80 85 90 95CAA GTC CGG ATG CAG ATC CTC ATG ATC CGG TAC CCG AGC AGT CAG CTG 335Gln Val Arg Met Gln Ile Leu Met Ile Arg Tyr Pro Ser Ser Gln Leu

100 105 110GGG GAG ATG TCC CTG GAA GAA CAC AGC CAG TGT GAA TGC AGA CCT AAA 383Gly Glu Met Ser Leu Glu Glu His Ser Gln Cys Glu Cys Arg Pro Lys

115 120 125AAA AAG GAC AGT GCT GTG AAG CCA GAC AGG GCT GCC ACT CCC CAC CAC 431Lys Lys Asp Ser Ala Val Lys Pro Asp Arg Ala Ala Thr Pro His His

130 135 140CGT CCC CAG CCC CGT TCT GTT CCG GGC TGG GAC TCT GCC CCC GGA GCA 479Arg Pro Gln Pro Arg Ser Val Pro Gly Trp Asp Ser Ala Pro Gly Ala

145 150 155CCC TCC CCA GCT GAC ATC ACC CAT CCC ACT CCA GCC CCA GGC CCC TCT 527Pro Ser Pro Ala Asp Ile Thr His Pro Thr Pro Ala Pro Gly Pro Ser160 165 170 175GCC CAC GCT GCA CCC AGC ACC ACC AGC GCC CTG ACC CCC GGA CCT GCC 575Ala His Ala Ala Pro Ser Thr Thr Ser Ala Leu Thr Pro Gly Pro Ala

180 185 190GCT GCC GCT GCC GAC GCC GCA GCT TCC TCC GTT GCC AAG GGC GGG GCT T 624Ala Ala Ala Ala Asp Ala Ala Ala Ser Ser Val Ala Lys Gly Gly Ala

195 200 205AGAGCTCAAC CCAGACACCT GCAGGTGCCG GAAGCTGCGA AGGTGACACA TGGCTTTTCA 684GACTCAGCAG GGTGACTTGC CTCAGAGGCT ATATCCCAGT GGGGGAACAA AGGGGAGCCT 744GGTAAAAAAC AGCCAAGCCC CCAAGACCTC AGCCCAGGCA GAAGCTGCTC TAGGACCTGG 804GCCTCTCAGA GGGCTCTTCT GCCATCCCTT GTCTCCCTGA GGCCATCATC AAACAGGACA 864GAGTTGGAAG AGGAGACTGG GAGGCAGCAA GAGGGGTCAC ATACCAGCTC AGGGGAGAAT 924GGAGTACTGT CTCAGTTTCT AACCACTCTG TGCAAGTAAG CATCTTACAA CTGGCTCTTC 984CTCCCCTCAC TAAGAAGACC CAAACCTCTG CATAATGGGA TTTGGGCTTT GGTACAAGAA 1044CTGTGACCCC CAACCCTGAT AAAAGAGATG GAAGGAAAAA AAAAAAAAAA 1094

(2)SEQ ID NO:4信息：

(ⅰ)序列特征：

(A)长度：207个氨基酸

(B)类型：氨基酸

(D)拓扑结构：线性

(ⅱ)分子类型：蛋白质

(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:4:Met Ser Pro Leu Leu Arg Arg Leu Leu Leu Ala Ala Leu Leu Gln Leu1 5 10 15Ala Pro Ala Gln Ala Pro Val Ser Gln Pro Asp Ala Pro Gly His Gln

20 25 30Arg Lys Val Val Ser Trp Ile Asp Val Tyr Thr Arg Ala Thr Cys Gln

35 40 45Pro Arg Glu Val Val Val Pro Leu Thr Val Glu Leu Met Gly Thr Val

50 55 60Ala Lys Gln Leu Val Pro Ser Cys Val Thr Val Gln Arg Cys Gly Gly65 70 75 80Cys Cys Pro Asp Asp Gly Leu Glu Cys Val Pro Thr Gly Gln His Gln

85 90 95Val Arg Met Gln Ile Leu Met Ile Arg Tyr Pro Ser Ser Gln Leu Gly

100 105 110Glu Met Ser Leu Glu Glu His Ser Gln Cys Glu Cys Arg Pro Lys Lys

115 120 125Lys Asp Ser Ala Val Lys Pro Asp Arg Ala Ala Thr Pro His His Arg

130 135 140Pro Gln Pro Arg Ser Val Pro Gly Trp Asp Ser Ala Pro Gly Ala Pro145 150 155 160Ser Pro Ala Asp Ile Thr His Pro Thr Pro Ala Pro Gly Pro Ser Ala

165 170 175His Ala Ala Pro Ser Thr Thr Ser Ala Leu Thr Pro Gly Pro Ala Ala

180 185 190Ala Ala Ala Asp Ala Ala Ala Ser Ser Val Ala Lys Gly Gly Ala

195 200 205

(2)SEQ ID NO:5信息：

(ⅰ)序列特征：

(A)长度：993个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：单链

(D)拓扑结构：线性

(ⅱ)分子类型：DNA

(ⅸ)特征：

(A)名称/关键词：CDS

(B)位置：3..566

(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:5:CC ATG AGC CCT CTG CTC CGC CGC CTG CTG CTC GCC GCA CTC CTG CAG 4Met Ser Pro Leu Leu Arg Arg Leu Leu Leu Ala Ala Leu Leu Gln

115 120 125AAA AAG GAC AGT GCT GTG AAG CCA GAT AGC CCC AGG CCC CTC TGC CCA 431Lys Lys Asp Ser Ala Val Lys Pro Asp Ser Pro Arg Pro Leu Cys Pro

130 135 140CGC TGC ACC CAG CAC CAC CAG CGC CCT GAC CCC CGG ACC TGC CGC TGC 479Arg Cys Thr Gln His His Gln Arg Pro Asp Pro Arg Thr Cys Arg Cys

145 150 155CGC TGC CGA CGC CGC AGC TTC CTC CGT TGC CAA GGG cGG GGC TTA GAG 527Arg Cys Arg Arg Arg Ser Phe Leu Arg Cys Gln Gly Arg Gly Leu Glu160 165 170 175CTC AAC CCA GAC ACC TGC AGG TGC CGG AAG CTG CGA AGG TGACACATGG 576Leu Asn Pro Asp Thr Cys Arg Cys Arg Lys Leu Arg Arg

180 185CTTTTCAGAC TCAGCAGGGT GACTTGCCTC AGAGGCTATA TCCCAGTGGG GGAACAAAGG 636GGAGCCTGGT AAAAAACAGC CAAGCCCCCA AGACCTCAGC CCAGGCAGAA GCTGCTCTAG 696GACCTGGGCC TCTCAGAGGG CTCTTCTGCC ATCCCTTGTC TCCCTGAGGC CATCATCAAA 756CAGGACAGAG TTGGAAGAGG AGACTGGGAG GCAGCAAGAG GGGTCACATA CCAGCTCAGG 816GGAGAATGGA GTACTGTCTC AGTTTCTAAC CACTCTGTGC AAGTAAGCAT CTTACAACTG 876GCTCTTCCTC CCCTCACTAA GAAGACCCAA ACCTCTGCAT AATGGGATTT GGGCTTTGGT 936ACAAGAACTG TGACCCCCAA CCCTGATAAA AGAGATGGAA GGAAAAAAAA AAAAAAA 993

(2)SEQ ID NO:6信息：

(ⅰ)序列特征：

(A)长度：188个氨基酸

(B)类型：氨基酸

(D)拓扑结构：线性

(ⅱ)分子类型：蛋白质

(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:6:Met Ser Pro Leu Leu Arg Arg Leu Leu Leu Ala Ala Leu Leu Gln Leu1 5 10 15Ala Pro Ala Gln Ala Pro Val Ser Gln Pro Asp Ala Pro Gly His Gln

20 25 30Arg Lys Val Val Ser Trp Ile Asp Val Tyr Thr Arg Ala Thr Cys Gln

35 40 45Pro Arg Glu Val Val Val Pro Leu Thr Val Glu Leu Met Gly Thr Val

85 90 95Val Arg Met Gln Ile Leu Met Ile Arg Tyr Pro Ser Ser Gln Leu Gly

100 105 110Glu Met Ser Leu Glu Glu His Ser Gln Cys Glu Cys Arg Pro Lys Lys

115 120 125Lys Asp Ser Ala Val Lys Pro Asp Ser Pro Arg Pro Leu Cys Pro Arg

130 135 140Cys Thr Gln His His Gln Arg Pro Asp Pro Arg Thr Cys Arg Cys Arg145 150 155 160Cys Arg Arg Arg Ser Phe Leu Arg Cys Gln Gly Arg Gly Leu Glu Leu

165 170 175Asn Pro Asp Thr Cys Arg Cys Arg Lys Leu Arg Arg

180 185

(2)SEQ ID NO:7信息：

(ⅰ)序列特征

(A)长度：858个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：单链

(D)拓扑结构：线性

(ⅱ)分子类型：DNA

(ⅸ)特征

(A)名称/关键词：CDS

(B)位置：3..431

(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:7:CC ATG AGC CCT CTG CTC CGC CGC CTG CTG CTC GCC GCA CTC CTG CAG 47

Met Ser Pro Leu Leu Arg Arg Leu Leu Leu Ala Ala Leu Leu Gln

115 120 125AAA AAG GAC AGT GCT GTG AAG CCA GAT AGG TGC CGG AAG CTG CGA AGG 431Lys Lys Asp Ser Ala Val Lys Pro Asp Arg Cys Arg Lys Leu Arg Arg

130 135 140TGACACATGG CTTTTCAGAC TCAGCAGGGT GACTTGCCTC AGAGGCTATA TCCCAGTGGG 491GGAACAAAGG GGAGCCTGGT AAAAAACAGC CAAGCCCCCA AGACCTCAGC CCAGGCAGAA 551GCTGCTCTAG GACCTGGGCC TCTCAGAGGG CTCTTCTGCC ATCCCTTGTC TCCCTGAGGC 611CATCATCAAA CAGGACAGAG TTGGAAGAGG AGACTGGGAG GCAGCAAGAG GGGTCACATA 671CCAGCTCAGG GGAGAATGGA GTACTGTCTC AGTTTCTAAC CACTCTGTGC AAGTAAGCAT 731CTTACAACTG GCTCTTCCTC CCCTCACTAA GAAGACCCAA ACCTCTGCAT AATGGGATTT 791GGGCTTTGGT ACAAGAACTG TGACCCCCAA CCCTGATAAA AGAGATGGAA GGAAAAAAAA 851AAAAAAA 858

(2)SEQ ID NO:8信息：

(ⅰ)序列特征：

(A)长度：143个氨基酸

(B)类型：氨基酸

(D)拓扑结构：线性

(ⅱ)分子类型：蛋白质

(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:8:Met Ser Pro Leu Leu Arg Arg Leu Leu Leu Ala Ala Leu Leu Gln Leu1 5 10 15Ala Pro Ala Gln Ala Pro Val Ser Gln Pro Asp Ala Pro Gly His Gln

20 25 30Arg Lys Val Val Ser Trp Ile Asp Val Tyr Thr Arg Ala Thr Cys Gln

35 40 45Pro Arg Glu Val Val Val Pro Leu Thr Val Glu Leu Met Gly Thr Val

85 90 95Val Arg Met Gln Ile Leu Met Ile Arg Tyr Pro Ser Ser Gln Leu Gly

100 105 110Glu Met Ser Leu Glu Glu His Ser Gln Cys Glu Cys Arg Pro Lys Lys

115 120 125Lys Asp Ser Ala Val Lys Pro Asp Arg Cys Arg Lys Leu Arg Arg

130 135 140

(2)SEQ ID NO:9信息：

(ⅰ)序列特征

(A)长度：910个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：单链

(D)拓扑结构：线性

(ⅱ )分子类型：DNA

(ⅸ)特征

(A)名称/关键词：CDS

(B)位置：3..305

(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:9:CC ATG AGC CCT CTG CTC CGC CGC CTG CTG CTC GCC GCA CTC CTG CAG 4

Met Ser Pro Leu Leu Arg Arg Leu Leu Leu Ala Ala Leu Leu Gln

65 70 75GGC TGC TGC CCT GAC GAT GGC CTG GAG TGT GTG CCC ACT GGG CAG CAC 287Gly Cys Cys Pro Asp Asp Gly Leu Glu Cys Val Pro Thr Gly Gln His80 85 90 95CAA GTC CGG ATG CAG ACC TAAAAAAAAG GACAGTGCTG TGAAGCCAGA 335Gln Val Arg Met Gln Thr

100CAGGGCTGCC ACTCCCCACC ACCGTCCCCA GCCCCGTTCT GTTCCGGGCT GGGACTCTGC 395CCCCGGAGCA CCCTCCCCAG CTGACATCAC CCATCCCACT CCAGCCCCAG GCCCCTCTGC 455CCACGCTGCA CCCAGCACCA CCAGCGCCCT GACCCCCGGA CCTGCCGCTG CCGCTGCCGA 515CGCCGCAGCT TCCTCCGTTG CCAAGGGCGG GGCTTAGAGC TCAACCCAGA CACCTGCAGG 575TGCCGGAAGC TGCGAAGGTG ACACATGGCT TTTCAGACTC AGCAGGGTGA CTTGCCTCAG 635AGGCTATATC CCAGTGGGGA ACAAAGAGGA GCCTGGTAAA AAACAGCCAA GCCCCCAAGA 695CCTCAGCCCA GGCAGAAGCT GCTCTAGGAC CTGGGCCTCT CAGAGGGCTC TTCTGCCATC 755CCTTGTCTCC CTGAGGCCAT CATCAAACAG GACAGAGTTG GAAGAGGAGA CTGGGAGGCA 815GCAAGAGGGG TCACATACCA GCTCAGGGGA GAATGGAGTA CTGTCTCAGT TTCTAACCAC 875TCTGTGCAAG TAAGCATCTT ACAACTGGCT CTTCC 910

(2)SEQ ID NO:10信息：

(ⅰ)序列特征：

(A)长度：101个氨基酸

(B)类型：氨基酸

(D)拓扑结构：线性

(ⅱ)分子类型：蛋白质

(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:10:Met Ser Pro Leu Leu Arg Arg Leu Leu Leu Ala Ala Leu Leu Gln Leu1 5 10 15Ala Pro Ala Gln Ala Pro Val Ser Gln Pro Asp Ala Pro Gly His Gln

20 25 30Arg Lys Val Val Ser Trp Ile Asp Val Tyr Thr Arg Ala Thr Cys Gln

35 40 45Pro Arg Glu Val Val Val Pro Leu Thr Val Glu Leu Met Gly Thr val

85 90 95Val Arg Met Gln Thr

100

(2)SEQ ID NO:11信息：

(ⅰ)序列特征：

(A)长度：42个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：单链

(D)拓扑结构：线性

(ⅱ)分子类型：寡核苷酸

(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:11:ACCACCACCT CCCTGGGCTG GCATGTGGCA CGTGCATAAA CG

(2)SEQ ID NO:12信息：

(ⅰ)序列特征：

(A)长度：42个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：单链

(D)拓扑结构：线性

(ⅱ)分子类型：寡核苷酸

(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:12:AGTTGTTTGA CCACATTGCC CATGAGTTCC ATGCTCAGAG GC

(2)SEQ ID NO:13信息：

(ⅰ)序列特征：

(A)长度：38个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：单链

(D)拓扑结构：线性

(ⅱ)分子类型：寡核苷酸

(ⅹⅱ)序列描述：SEQ ID NO:13:GATCCTGGGG CTGGAGTGGG ATGGATGATG TCAGCTGG

(2)SEQ ID NO:14信息：

(ⅰ)序列特征：

(A)长度：40个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：单链

(D)拓扑结构：线性

(ⅱ)分子类型：寡核苷酸

(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:14:GCGGGCAGAG GATCCTGGGG CTGTCTGGCC TCACAGCACT

Claims

1．一种生物学上分离的蛋白质分子，这种蛋白质分子具有下列特性：

(ⅰ)包含一种氨基酸序列，这种氨基酸序列和SEQ ID NO:2所示的序列具有至少大约15％的相似性但至少大约5％的不相似性；

(ⅱ)显示出至少一种与血管内皮生长因子(VEGF)共同的性质。

2．按照权利要求1的蛋白质分子，其中所说的分子具有至少下列性质之一：

(ⅰ)诱导血管内皮细胞的能力；

(ⅱ)和flt-1/flk-1受体家族相互作用的能力；和/或

(ⅲ)诱导细胞迁移、细胞生存和/或增加胞内碱性磷酸酶水平的能力。

3．按照权利要求1或2的蛋白质分子，其中所说的分子具有诱导星形神经胶质增殖的能力。

4．按照权利要求1的蛋白质分子，其中所说的分子是人类起源的。

5．按照权利要求1的蛋白质分子，其中所说的分子是非人类起源的。

6．按照权利要求5的蛋白质分子，其中所说的分子是家畜动物、伴侣动物、实验动物、鸟、鱼或爬虫类动物起源的。

7．按照权利要求5的蛋白质分子，其中所说的分子由定位在染色体11q13上的一个基因编码。

8．按照权利要求1的蛋白质分子，其中所说的和SEQ ID NO:2之相似性百分比是至少大约30％。

9．按照权利要求1的蛋白质分子，其中所说的和SEQ ID NO:2之相似性百分比是至少大约40％。

10．按照权利要求1的蛋白质分子，其中所说的和SEQ lD NO:2之相似性百分比是至少大约60-70％。

11．按照权利要求1的蛋白质分子，这种蛋白质分子包含如SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列或其部分、片断、衍生物或类似物。

12．按照权利要求1的蛋白质分子，这种蛋白质分子包含实质上如SEQID NO:6中所示的氨基酸序列或其部分、片断、衍生物或类似物。

13．按照权利要求1的蛋白质分子，这种蛋白质分子包含实质上如SEQID NO:8中所示的氨基酸序列或其部分、片断、衍生物或类似物。

14．按照权利要求1的蛋白质分子，这种蛋白质分子包含实质上如SEQID NO:10中所示的氨基酸序列或其部分、片断、衍生物或类似物。

15．一种具有下列特征的重组分子：

(ⅰ)具有实质上如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:2中所示的序列具有至少大约15％的相似性但具有至少大约5％的不相似性的氨基酸序列；

(ⅱ)显示出至少一种与VEGF共同的性质。

16．一种具有下列特征的重组分子：

(ⅰ)具有实质上如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:2中所示的序列具有至少大约15％的相似性但具有至少大约5％的不相似性的氨基酸序列；

(ⅱ)显示出至少一种与VEGF共同的性质。

17．一种具有下列特征的重组分子：

(ⅰ)具有实质上如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:2中所示的序列具有至少大约1 5％的相似性但具有至少大约5％的不相似性的氨基酸序列；

(ⅱ)显示出至少一种与VEGF共同的性质。

18．一种具有下列特征的重组分子：

(ⅰ)具有实质上如SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:2中所示的序列具有至少大约15％的相似性但具有至少大约5％的不相似性的氨基酸序列；

(ⅱ)显示出至少一种与VEGF共同的性质。

19．按照权利要求15或16或17或18的重组分子，这种重组分子具有下列特性之一：

(a)诱导血管内皮细胞的能力；

(b)和flt-1/flk-1受体家族相互作用的能力；和/或

20．一种按照权利要求15或16或17或18的重组分子，这种重组分子具有诱导星形神经胶质增殖的能力。

21．一种按照权利要求20的重组分子，其中所说的分子包含实质上如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。

22．一种相当于SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列的肽片断或其衍生物或化学上的相等物。

23．按照权利要求22的肽片段，这种肽片断具有SEQ ID NO:6所示的序列或其化学相等物。

24．按照权利要求22的肽片段，这种肽片断具有SEQ ID NO:8所示的序列或其化学相等物。

25．按照权利要求22的肽片段，这种肽片断具有SEQ ID NO:10所示的序列或其化学相等物。

26．一种核酸分子，这种核酸分子包含编码具有下列特征之蛋白质分子的核苷酸序列或与这种核苷酸序列互补的核苷酸序列：

(ⅰ)包含与SEQ ID NO:2所示的序列具有至少大约15％相似性但至少大约5％的不相似性的氨基酸序列；

(ⅱ)显示出至少一种与血管内皮生长因子(VEGF)共同的性质。

27．按照权利要求26的核酸分子，其中所说的蛋白质分子具有至少下列性质之一：

(ⅰ)诱导血管内皮细胞的能力；

(ⅱ)和flt-1/flk-1受体家族相互作用的能力；和/或

(ⅲ)诱导细胞迁移、细胞生存和/或增加胞内碱性磷酸酶水平的能力；

28．按照权利要求27的核酸分子，其中所说的蛋白质分子具有诱导星形神经胶质增殖的能力。

29．按照权利要求28的核酸分子，其中所说的分子编码实质上如SEQ IDNO:6所示的氨基酸序列。

30．按照权利要求1的核酸分子，其中所说的分子是人类起源的。

31．按照权利要求1的核酸分子，其中所说的和SEQ ID NO:2之相似百分比是至少大约30％。

32．按照权利要求26的核酸分子，这种核酸分子包含实质上如SEQ IDNO:3所示的核苷酸序列、或与其具有至少15％的相似性的核苷酸序列、或在核苷酸序列和SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列具有至少15％的相似性但至少30％的不相似性时在较低严格条件下能和SEQ ID NO:3所示核苷酸序列的反向互补序列杂交的核苷酸序列。

33．按照权利要求26的核酸分子，这种核酸分子编码人类VEGF的鼠同系物并包含实质上如图9所示的核苷酸序列。

34．一种药物组合物，这种组合物包含按照权利要求1或2或3或11的蛋白质分子和一种或几种药学上可接受的载体和/或稀释液。

35．一种制备具有下列特征之重组分子的方法：

(ⅰ)包含和SEQ ID NO:2所示的序列具有至少大约15％的相似性但至少大约5％的不相似性的氨基酸序列；

(ⅱ)显示出至少一种与血管内皮生长因子(VEGF)共同的性质。所说的方法包括使生长在有效合成所说的重组分子之条件下的合适宿主表达编码所说的重组分子之核酸分子并分离所说的重组分子。

36．一种按照权利要求35的方法，其中所说的核酸分子包括如SEQ IDNO:3所示的序列、或与其具有至少15％的相似性的核苷酸序列、或在核苷酸序列和SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列具有至少15％的相似性但至少30％的不相似性时在较低严格条件下能和SEQ ID NO:3所示核苷酸序列的反向互补序列杂交的核苷酸序列。

37．一种诱导哺乳动物星形神经肢质增殖的方法，所说的方法包括对所说的哺乳动物施用具有下列特征之有效量的重组蛋白质分子：

(ⅱ)显示出至少一种与血管内皮生长因子(VEGF)共同的性质。所说的施用是在适于诱导星形神经胶质增殖的时间和条件下进行的。

38．一种按照权利要求37的方法，其中所说的重组蛋白质分子包含实质上如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列或是其衍生物。

39．一种按照权利要求37的方法，其中所说的重组蛋白质分子包含实质上如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列或是其衍生物。

40．一种促进哺乳动物神经元生存和/或增殖的方法，所说的方法包括对所说的哺乳动物施用具有下列特征之有效量的重组蛋白质分子：

(ⅰ)包含和SEQ ID NO:2的序列具有至少大约15％的相似性但至少大约5％的不相似性的氨基酸序列；

41．按照权利要求40的方法，其中所说的重组蛋白质分子包含实质上如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列或是其衍生物。

41．按照权利要求37的方法，其中所说的重组蛋白质分子包含实质上如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列或是其衍生物。