HU223438B1 - Új növekedési faktor és ezt kódoló génszekvencia - Google Patents
Új növekedési faktor és ezt kódoló génszekvencia Download PDFInfo
- Publication number
- HU223438B1 HU223438B1 HU9800377A HUP9800377A HU223438B1 HU 223438 B1 HU223438 B1 HU 223438B1 HU 9800377 A HU9800377 A HU 9800377A HU P9800377 A HUP9800377 A HU P9800377A HU 223438 B1 HU223438 B1 HU 223438B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- lake
- pro
- iii
- seq
- leu
- Prior art date
Links
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 title claims description 9
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 title description 5
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims abstract description 19
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims abstract description 18
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 9
- 230000002792 vascular Effects 0.000 claims abstract description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 5
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 55
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 claims description 49
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 claims description 48
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 44
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 44
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 39
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 39
- 101000808011 Homo sapiens Vascular endothelial growth factor A Proteins 0.000 claims description 35
- 102000058223 human VEGFA Human genes 0.000 claims description 35
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 35
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 33
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 33
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 12
- RNKSNIBMTUYWSH-YFKPBYRVSA-N L-prolylglycine Chemical compound [O-]C(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 RNKSNIBMTUYWSH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 10
- 108010029020 prolylglycine Proteins 0.000 claims description 10
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 claims description 10
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 claims description 8
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 claims description 8
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 8
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 7
- 102000016549 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-2 Human genes 0.000 claims description 7
- 108010053099 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-2 Proteins 0.000 claims description 7
- 108010060035 arginylproline Proteins 0.000 claims description 7
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 claims description 7
- 230000037041 intracellular level Effects 0.000 claims description 7
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 claims description 7
- 108010002311 N-glycylglutamic acid Proteins 0.000 claims description 6
- GLEOIKLQBZNKJZ-WDSKDSINSA-N Pro-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 GLEOIKLQBZNKJZ-WDSKDSINSA-N 0.000 claims description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 6
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 108010014614 prolyl-glycyl-proline Proteins 0.000 claims description 6
- LQJAALCCPOTJGB-YUMQZZPRSA-N Arg-Pro Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O LQJAALCCPOTJGB-YUMQZZPRSA-N 0.000 claims description 5
- 101100381481 Caenorhabditis elegans baz-2 gene Proteins 0.000 claims description 5
- 101100372762 Rattus norvegicus Flt1 gene Proteins 0.000 claims description 5
- FFOKMZOAVHEWET-IMJSIDKUSA-N Ser-Cys Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O FFOKMZOAVHEWET-IMJSIDKUSA-N 0.000 claims description 5
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 claims description 5
- 230000006576 neuronal survival Effects 0.000 claims description 5
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims description 5
- YUGFLWBWAJFGKY-BQBZGAKWSA-N Arg-Cys-Gly Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O YUGFLWBWAJFGKY-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims description 4
- 108010065920 Insulin Lispro Proteins 0.000 claims description 4
- CUTPSEKWUPZFLV-WISUUJSJSA-N Thr-Cys Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O CUTPSEKWUPZFLV-WISUUJSJSA-N 0.000 claims description 4
- 108010068380 arginylarginine Proteins 0.000 claims description 4
- GJLXVWOMRRWCIB-MERZOTPQSA-N (2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-acetamido-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanamide Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(N)=O)C1=CC=C(O)C=C1 GJLXVWOMRRWCIB-MERZOTPQSA-N 0.000 claims description 3
- BRPMXFSTKXXNHF-IUCAKERBSA-N (2s)-1-[2-[[(2s)-pyrrolidine-2-carbonyl]amino]acetyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)CNC(=O)[C@H]1NCCC1 BRPMXFSTKXXNHF-IUCAKERBSA-N 0.000 claims description 3
- BCSYBBMFGLHCOA-ACZMJKKPSA-N Cys-Glu-Cys Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O BCSYBBMFGLHCOA-ACZMJKKPSA-N 0.000 claims description 3
- YQAQQKPWFOBSMU-WDCWCFNPSA-N Glu-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O YQAQQKPWFOBSMU-WDCWCFNPSA-N 0.000 claims description 3
- QVFGXCVIXXBFHO-AVGNSLFASA-N Leu-Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O QVFGXCVIXXBFHO-AVGNSLFASA-N 0.000 claims description 3
- ALGGDNMLQNFVIZ-SRVKXCTJSA-N Lys-Lys-Asp Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N ALGGDNMLQNFVIZ-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims description 3
- AIXUQKMMBQJZCU-IUCAKERBSA-N Lys-Pro Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O AIXUQKMMBQJZCU-IUCAKERBSA-N 0.000 claims description 3
- IHCXPSYCHXFXKT-DCAQKATOSA-N Pro-Arg-Glu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O IHCXPSYCHXFXKT-DCAQKATOSA-N 0.000 claims description 3
- CYQQWUPHIZVCNY-GUBZILKMSA-N Pro-Arg-Ser Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O CYQQWUPHIZVCNY-GUBZILKMSA-N 0.000 claims description 3
- IURWWZYKYPEANQ-HJGDQZAQSA-N Pro-Thr-Glu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O IURWWZYKYPEANQ-HJGDQZAQSA-N 0.000 claims description 3
- AIOWVDNPESPXRB-YTWAJWBKSA-N Pro-Thr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@@H]2CCCN2)O AIOWVDNPESPXRB-YTWAJWBKSA-N 0.000 claims description 3
- UPLYXVPQLJVWMM-KKUMJFAQSA-N Ser-Phe-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O UPLYXVPQLJVWMM-KKUMJFAQSA-N 0.000 claims description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 3
- PAPSMOYMQDWIOR-AVGNSLFASA-N Arg-Lys-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O PAPSMOYMQDWIOR-AVGNSLFASA-N 0.000 claims description 2
- FVBZXNSRIDVYJS-AVGNSLFASA-N Arg-Pro-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N FVBZXNSRIDVYJS-AVGNSLFASA-N 0.000 claims description 2
- OAGVHWYIBZMWLA-YFKPBYRVSA-N Glu-Gly-Gly Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O OAGVHWYIBZMWLA-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 2
- NMROINAYXCACKF-WHFBIAKZSA-N Gly-Cys-Cys Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O NMROINAYXCACKF-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims description 2
- HWMQRQIFVGEAPH-XIRDDKMYSA-N Leu-Ser-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 HWMQRQIFVGEAPH-XIRDDKMYSA-N 0.000 claims description 2
- KLSUAWUZBMAZCL-RHYQMDGZSA-N Leu-Thr-Pro Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O KLSUAWUZBMAZCL-RHYQMDGZSA-N 0.000 claims description 2
- AIQWYVFNBNNOLU-RHYQMDGZSA-N Leu-Thr-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O AIQWYVFNBNNOLU-RHYQMDGZSA-N 0.000 claims description 2
- FDBTVENULFNTAL-XQQFMLRXSA-N Leu-Val-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N FDBTVENULFNTAL-XQQFMLRXSA-N 0.000 claims description 2
- AFLBTVGQCQLOFJ-AVGNSLFASA-N Lys-Pro-Arg Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O AFLBTVGQCQLOFJ-AVGNSLFASA-N 0.000 claims description 2
- GVKINWYYLOLEFQ-XIRDDKMYSA-N Lys-Trp-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O GVKINWYYLOLEFQ-XIRDDKMYSA-N 0.000 claims description 2
- SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-valine Natural products CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- ILMLVTGTUJPQFP-FXQIFTODSA-N Pro-Asp-Asp Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O ILMLVTGTUJPQFP-FXQIFTODSA-N 0.000 claims description 2
- WSRWHZRUOCACLJ-UWVGGRQHSA-N Pro-Gly-His Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1NCCC1)C1=CN=CN1 WSRWHZRUOCACLJ-UWVGGRQHSA-N 0.000 claims description 2
- KWMZPPWYBVZIER-XGEHTFHBSA-N Pro-Ser-Thr Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O KWMZPPWYBVZIER-XGEHTFHBSA-N 0.000 claims description 2
- ZIFYDQAFEMIZII-GUBZILKMSA-N Ser-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O ZIFYDQAFEMIZII-GUBZILKMSA-N 0.000 claims description 2
- XPYNXORPPVTVQK-SRVKXCTJSA-N Val-Arg-Met Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)N XPYNXORPPVTVQK-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims description 2
- SDHZOOIGIUEPDY-JYJNAYRXSA-N Val-Ser-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 SDHZOOIGIUEPDY-JYJNAYRXSA-N 0.000 claims description 2
- JSOXWWFKRJKTMT-WOPDTQHZSA-N Val-Val-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N JSOXWWFKRJKTMT-WOPDTQHZSA-N 0.000 claims description 2
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 108010006664 gamma-glutamyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 claims description 2
- XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N glycyl-glycyl-glycine Natural products NCC(=O)NCC(=O)NCC(O)=O XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 claims description 2
- 230000007511 neuronal proliferation Effects 0.000 claims description 2
- 108010031719 prolyl-serine Proteins 0.000 claims description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims 34
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims 34
- 239000004575 stone Substances 0.000 claims 3
- FTAPDLRVRYASRX-UHFFFAOYSA-N 1,3-oxazolidine-2-carboxamide Chemical compound NC(=O)C1NCCO1 FTAPDLRVRYASRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 101100334117 Caenorhabditis elegans fah-1 gene Proteins 0.000 claims 2
- 206010029897 Obsessive thoughts Diseases 0.000 claims 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 claims 2
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 claims 2
- BECXEHHOZNFFFX-IHRRRGAJSA-N Arg-Ser-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O BECXEHHOZNFFFX-IHRRRGAJSA-N 0.000 claims 1
- ZTRJUKDEALVRMW-SRVKXCTJSA-N Asn-His-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N ZTRJUKDEALVRMW-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims 1
- IBLAOXSULLECQZ-IUKAMOBKSA-N Asn-Ile-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O IBLAOXSULLECQZ-IUKAMOBKSA-N 0.000 claims 1
- PYXXJFRXIYAESU-PCBIJLKTSA-N Asp-Ile-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O PYXXJFRXIYAESU-PCBIJLKTSA-N 0.000 claims 1
- SPWXXPFDTMYTRI-IUKAMOBKSA-N Asp-Ile-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O SPWXXPFDTMYTRI-IUKAMOBKSA-N 0.000 claims 1
- JGLWFWXGOINXEA-YDHLFZDLSA-N Asp-Val-Tyr Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 JGLWFWXGOINXEA-YDHLFZDLSA-N 0.000 claims 1
- TULNGKSILXCZQT-IMJSIDKUSA-N Cys-Asp Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O TULNGKSILXCZQT-IMJSIDKUSA-N 0.000 claims 1
- DVKQPQKQDHHFTE-ZLUOBGJFSA-N Cys-Cys-Asn Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CS)N)C(=O)N DVKQPQKQDHHFTE-ZLUOBGJFSA-N 0.000 claims 1
- SKSJPIBFNFPTJB-NKWVEPMBSA-N Cys-Gly-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)CNC(=O)[C@H](CS)N)C(=O)O SKSJPIBFNFPTJB-NKWVEPMBSA-N 0.000 claims 1
- WTNLLMQAFPOCTJ-GARJFASQSA-N Cys-His-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)NC(=O)[C@H](CS)N)C(=O)O WTNLLMQAFPOCTJ-GARJFASQSA-N 0.000 claims 1
- OZHXXYOHPLLLMI-CIUDSAMLSA-N Cys-Lys-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O OZHXXYOHPLLLMI-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims 1
- FNXOZWPPOJRBRE-XGEHTFHBSA-N Cys-Val-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CS)N)O FNXOZWPPOJRBRE-XGEHTFHBSA-N 0.000 claims 1
- WOMUDRVDJMHTCV-DCAQKATOSA-N Glu-Arg-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O WOMUDRVDJMHTCV-DCAQKATOSA-N 0.000 claims 1
- SRZLHYPAOXBBSB-HJGDQZAQSA-N Glu-Arg-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O SRZLHYPAOXBBSB-HJGDQZAQSA-N 0.000 claims 1
- LXAUHIRMWXQRKI-XHNCKOQMSA-N Glu-Asn-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)C(=O)O LXAUHIRMWXQRKI-XHNCKOQMSA-N 0.000 claims 1
- FKGNJUCQKXQNRA-NRPADANISA-N Glu-Cys-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O FKGNJUCQKXQNRA-NRPADANISA-N 0.000 claims 1
- VGUYMZGLJUJRBV-YVNDNENWSA-N Glu-Ile-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O VGUYMZGLJUJRBV-YVNDNENWSA-N 0.000 claims 1
- KXRORHJIRAOQPG-SOUVJXGZSA-N Glu-Tyr-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)C(=O)O KXRORHJIRAOQPG-SOUVJXGZSA-N 0.000 claims 1
- NTOWAXLMQFKJPT-YUMQZZPRSA-N Gly-Glu-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)CN NTOWAXLMQFKJPT-YUMQZZPRSA-N 0.000 claims 1
- GULGDABMYTYMJZ-STQMWFEESA-N Gly-Trp-Asp Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O GULGDABMYTYMJZ-STQMWFEESA-N 0.000 claims 1
- WSDOHRLQDGAOGU-BQBZGAKWSA-N His-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 WSDOHRLQDGAOGU-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims 1
- NDKSHNQINMRKHT-PEXQALLHSA-N His-Ile-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)N NDKSHNQINMRKHT-PEXQALLHSA-N 0.000 claims 1
- CWJQMCPYXNVMBS-STECZYCISA-N Ile-Arg-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)N CWJQMCPYXNVMBS-STECZYCISA-N 0.000 claims 1
- FCWFBHMAJZGWRY-XUXIUFHCSA-N Ile-Leu-Met Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)N FCWFBHMAJZGWRY-XUXIUFHCSA-N 0.000 claims 1
- TUYOFUHICRWDGA-CIUDSAMLSA-N Ile-Met Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCSC TUYOFUHICRWDGA-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims 1
- FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N L-Phenylalanyl-L-lysin Natural products NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- WMTOVWLLDGQGCV-GUBZILKMSA-N Leu-Glu-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N WMTOVWLLDGQGCV-GUBZILKMSA-N 0.000 claims 1
- DSFYPIUSAMSERP-IHRRRGAJSA-N Leu-Leu-Arg Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N DSFYPIUSAMSERP-IHRRRGAJSA-N 0.000 claims 1
- UCNNZELZXFXXJQ-BZSNNMDCSA-N Leu-Leu-Tyr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 UCNNZELZXFXXJQ-BZSNNMDCSA-N 0.000 claims 1
- QUCDKEKDPYISNX-HJGDQZAQSA-N Lys-Asn-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O QUCDKEKDPYISNX-HJGDQZAQSA-N 0.000 claims 1
- QBGPXOGXCVKULO-BQBZGAKWSA-N Lys-Cys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O QBGPXOGXCVKULO-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims 1
- HGNRJCINZYHNOU-LURJTMIESA-N Lys-Gly Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O HGNRJCINZYHNOU-LURJTMIESA-N 0.000 claims 1
- OWRUUFUVXFREBD-KKUMJFAQSA-N Lys-His-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O OWRUUFUVXFREBD-KKUMJFAQSA-N 0.000 claims 1
- QCZYYEFXOBKCNQ-STQMWFEESA-N Lys-Phe Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 QCZYYEFXOBKCNQ-STQMWFEESA-N 0.000 claims 1
- MSSABBQOBUZFKZ-IHRRRGAJSA-N Lys-Pro-His Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCCN)N)C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O MSSABBQOBUZFKZ-IHRRRGAJSA-N 0.000 claims 1
- UAPZLLPGGOOCRO-IHRRRGAJSA-N Met-Asn-Phe Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)N UAPZLLPGGOOCRO-IHRRRGAJSA-N 0.000 claims 1
- QTZXSYBVOSXBEJ-WDSKDSINSA-N Met-Asp Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O QTZXSYBVOSXBEJ-WDSKDSINSA-N 0.000 claims 1
- SXWQMBGNFXAGAT-FJXKBIBVSA-N Met-Gly-Thr Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O SXWQMBGNFXAGAT-FJXKBIBVSA-N 0.000 claims 1
- PHURAEXVWLDIGT-LPEHRKFASA-N Met-Ser-Pro Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N PHURAEXVWLDIGT-LPEHRKFASA-N 0.000 claims 1
- HATVCTYBNCNMAA-AVGNSLFASA-N Pro-Leu-Met Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O HATVCTYBNCNMAA-AVGNSLFASA-N 0.000 claims 1
- DWGFLKQSGRUQTI-IHRRRGAJSA-N Pro-Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 DWGFLKQSGRUQTI-IHRRRGAJSA-N 0.000 claims 1
- SNGZLPOXVRTNMB-LPEHRKFASA-N Pro-Ser-Pro Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O SNGZLPOXVRTNMB-LPEHRKFASA-N 0.000 claims 1
- AWJGUZSYVIVZGP-YUMQZZPRSA-N Pro-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 AWJGUZSYVIVZGP-YUMQZZPRSA-N 0.000 claims 1
- YAAPRMFURSENOZ-KATARQTJSA-N Thr-Cys-Lys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N)O YAAPRMFURSENOZ-KATARQTJSA-N 0.000 claims 1
- JAJOFWABAUKAEJ-QTKMDUPCSA-N Thr-Pro-His Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)N)O JAJOFWABAUKAEJ-QTKMDUPCSA-N 0.000 claims 1
- AZZLDIDWPZLCCW-ZEWNOJEFSA-N Tyr-Ile-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O AZZLDIDWPZLCCW-ZEWNOJEFSA-N 0.000 claims 1
- MJXNDRCLGDSBBE-FHWLQOOXSA-N Val-His-Trp Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)C(=O)O)N MJXNDRCLGDSBBE-FHWLQOOXSA-N 0.000 claims 1
- 108010038633 aspartylglutamate Proteins 0.000 claims 1
- 239000013256 coordination polymer Substances 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims 1
- 239000010437 gem Substances 0.000 claims 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 claims 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 claims 1
- 108010028295 histidylhistidine Proteins 0.000 claims 1
- 108010064235 lysylglycine Proteins 0.000 claims 1
- 108010038320 lysylphenylalanine Proteins 0.000 claims 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims 1
- 108010053725 prolylvaline Proteins 0.000 claims 1
- 108010020532 tyrosyl-proline Proteins 0.000 claims 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 34
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 abstract description 21
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 8
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 5
- 239000012636 effector Substances 0.000 abstract description 4
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000008728 vascular permeability Effects 0.000 abstract description 4
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 abstract description 3
- 230000010005 growth-factor like effect Effects 0.000 abstract description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 abstract description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract description 3
- 101001069926 Homo sapiens Grainyhead-like protein 3 homolog Proteins 0.000 description 47
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 46
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 23
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 23
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 22
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 22
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 21
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 21
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 15
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 15
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 14
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 14
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 12
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 12
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 12
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 12
- 108010073925 Vascular Endothelial Growth Factor B Proteins 0.000 description 11
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 11
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 11
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 10
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 9
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 9
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 9
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 8
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 8
- OLIFSFOFKGKIRH-WUJLRWPWSA-N Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN OLIFSFOFKGKIRH-WUJLRWPWSA-N 0.000 description 8
- HMNSRTLZAJHSIK-YUMQZZPRSA-N Pro-Arg Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 HMNSRTLZAJHSIK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 8
- ITDWWLTTWRRLCC-KJEVXHAQSA-N Tyr-Thr-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@H](O)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 ITDWWLTTWRRLCC-KJEVXHAQSA-N 0.000 description 8
- 102100038217 Vascular endothelial growth factor B Human genes 0.000 description 8
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 8
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 8
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 8
- 108010004914 prolylarginine Proteins 0.000 description 8
- YBAFDPFAUTYYRW-YUMQZZPRSA-N Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 7
- ULZCYBYDTUMHNF-IUCAKERBSA-N Gly-Leu-Glu Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O ULZCYBYDTUMHNF-IUCAKERBSA-N 0.000 description 7
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 7
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 7
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 7
- LZLREEUGSYITMX-JQWIXIFHSA-N Ser-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CO)N)C(O)=O)=CNC2=C1 LZLREEUGSYITMX-JQWIXIFHSA-N 0.000 description 7
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 7
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 7
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 6
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 6
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 6
- 210000001044 sensory neuron Anatomy 0.000 description 6
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 6
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 5
- IEFJWDNGDZAYNZ-BYPYZUCNSA-N Gly-Glu Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O IEFJWDNGDZAYNZ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 5
- LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N Leu-Thr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 5
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 5
- 101000742578 Mus musculus Vascular endothelial growth factor B Proteins 0.000 description 5
- 101100205189 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) leu-5 gene Proteins 0.000 description 5
- DCHQYSOGURGJST-FJXKBIBVSA-N Pro-Thr-Gly Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(O)=O DCHQYSOGURGJST-FJXKBIBVSA-N 0.000 description 5
- YYLHVUCSTXXKBS-IHRRRGAJSA-N Tyr-Pro-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YYLHVUCSTXXKBS-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 4
- WIDZHJTYKYBLSR-DCAQKATOSA-N Leu-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O WIDZHJTYKYBLSR-DCAQKATOSA-N 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 4
- FKYWFUYPVKLJLP-DCAQKATOSA-N Ser-Pro-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CO FKYWFUYPVKLJLP-DCAQKATOSA-N 0.000 description 4
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 4
- 210000003486 adipose tissue brown Anatomy 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 4
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 4
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 4
- 230000002518 glial effect Effects 0.000 description 4
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 4
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 4
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000002889 sympathetic effect Effects 0.000 description 4
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 4
- 108020003589 5' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 3
- 101000933702 Arabidopsis thaliana Zinc finger CCCH domain-containing protein 2 Proteins 0.000 description 3
- 102000003974 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 3
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 3
- 101000742579 Homo sapiens Vascular endothelial growth factor B Proteins 0.000 description 3
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 3
- NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 3
- KGCLIYGPQXUNLO-IUCAKERBSA-N Leu-Gly-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O KGCLIYGPQXUNLO-IUCAKERBSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 3
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 108091036066 Three prime untranslated region Proteins 0.000 description 3
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 210000000609 ganglia Anatomy 0.000 description 3
- 210000004884 grey matter Anatomy 0.000 description 3
- 210000005003 heart tissue Anatomy 0.000 description 3
- 102000044219 human GRHL3 Human genes 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 3
- 210000002241 neurite Anatomy 0.000 description 3
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 3
- 210000004248 oligodendroglia Anatomy 0.000 description 3
- 210000001428 peripheral nervous system Anatomy 0.000 description 3
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 3
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 3
- WTHNBLKUMCPUFE-UHFFFAOYSA-N (4-oxo-1,3,2,4lambda5-dioxathiaphosphetan-4-yl) phosphono hydrogen phosphate Chemical compound OP(=O)(O)OP(=O)(O)OP1(=O)OSO1 WTHNBLKUMCPUFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- 238000010600 3H thymidine incorporation assay Methods 0.000 description 2
- XPSGESXVBSQZPL-SRVKXCTJSA-N Arg-Arg-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O XPSGESXVBSQZPL-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- IJYZHIOOBGIINM-WDSKDSINSA-N Arg-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N IJYZHIOOBGIINM-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- PPMTUXJSQDNUDE-CIUDSAMLSA-N Asn-Glu-Arg Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N PPMTUXJSQDNUDE-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- HZZIFFOVHLWGCS-KKUMJFAQSA-N Asn-Phe-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O HZZIFFOVHLWGCS-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FLQAKQOBSPFGKG-CIUDSAMLSA-N Glu-Cys-Arg Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N FLQAKQOBSPFGKG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- 101001001487 Homo sapiens Phosphatidylinositol-glycan biosynthesis class F protein Proteins 0.000 description 2
- 108091026898 Leader sequence (mRNA) Proteins 0.000 description 2
- KFKWRHQBZQICHA-STQMWFEESA-N Leu-Phe Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 KFKWRHQBZQICHA-STQMWFEESA-N 0.000 description 2
- JGKHAFUAPZCCDU-BZSNNMDCSA-N Leu-Tyr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C([O-])=O)CC1=CC=C(O)C=C1 JGKHAFUAPZCCDU-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 2
- KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-proline Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 2
- 102000001938 Plasminogen Activators Human genes 0.000 description 2
- 108010001014 Plasminogen Activators Proteins 0.000 description 2
- FFSLAIOXRMOFIZ-GJZGRUSLSA-N Pro-Gly-Trp Chemical compound N([C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)O)C(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCCN1 FFSLAIOXRMOFIZ-GJZGRUSLSA-N 0.000 description 2
- ZKQOUHVVXABNDG-IUCAKERBSA-N Pro-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 ZKQOUHVVXABNDG-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- RVQDZELMXZRSSI-IUCAKERBSA-N Pro-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 RVQDZELMXZRSSI-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- GVUVRRPYYDHHGK-VQVTYTSYSA-N Pro-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 GVUVRRPYYDHHGK-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 2
- 102000016971 Proto-Oncogene Proteins c-kit Human genes 0.000 description 2
- 108010014608 Proto-Oncogene Proteins c-kit Proteins 0.000 description 2
- PVDTYLHUWAEYGY-CIUDSAMLSA-N Ser-Glu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O PVDTYLHUWAEYGY-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- WBAXJMCUFIXCNI-WDSKDSINSA-N Ser-Pro Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O WBAXJMCUFIXCNI-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- YCUVUDODLRLVIC-UHFFFAOYSA-N Sudan black B Chemical compound C1=CC(=C23)NC(C)(C)NC2=CC=CC3=C1N=NC(C1=CC=CC=C11)=CC=C1N=NC1=CC=CC=C1 YCUVUDODLRLVIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 2
- 210000004960 anterior grey column Anatomy 0.000 description 2
- 238000000211 autoradiogram Methods 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 2
- 210000003710 cerebral cortex Anatomy 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 230000035605 chemotaxis Effects 0.000 description 2
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 2
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 2
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 230000010595 endothelial cell migration Effects 0.000 description 2
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 2
- KZNQNBZMBZJQJO-YFKPBYRVSA-N glyclproline Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 108010077515 glycylproline Proteins 0.000 description 2
- 230000002607 hemopoietic effect Effects 0.000 description 2
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 description 2
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000005462 in vivo assay Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 2
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 210000002161 motor neuron Anatomy 0.000 description 2
- 206010051747 multiple endocrine neoplasia Diseases 0.000 description 2
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 2
- 230000014511 neuron projection development Effects 0.000 description 2
- 230000000508 neurotrophic effect Effects 0.000 description 2
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 2
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 2
- 210000003540 papillary muscle Anatomy 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 229940127126 plasminogen activator Drugs 0.000 description 2
- 108010090894 prolylleucine Proteins 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- 108010026333 seryl-proline Proteins 0.000 description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- 150000004992 toluidines Chemical class 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 238000011714 129 mouse Methods 0.000 description 1
- 108020005345 3' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- HJAICMSAKODKRF-GUBZILKMSA-N Arg-Cys-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O HJAICMSAKODKRF-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- JQFZHHSQMKZLRU-IUCAKERBSA-N Arg-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N JQFZHHSQMKZLRU-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- CLICCYPMVFGUOF-IHRRRGAJSA-N Arg-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O CLICCYPMVFGUOF-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- ROWCTNFEMKOIFQ-YUMQZZPRSA-N Arg-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N ROWCTNFEMKOIFQ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- OVQJAKFLFTZDNC-GUBZILKMSA-N Arg-Pro-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O OVQJAKFLFTZDNC-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- QCTOLCVIGRLMQS-HRCADAONSA-N Arg-Tyr-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)C(=O)O QCTOLCVIGRLMQS-HRCADAONSA-N 0.000 description 1
- QJMCHPGWFZZRID-BQBZGAKWSA-N Asn-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O QJMCHPGWFZZRID-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- GADKFYNESXNRLC-WDSKDSINSA-N Asn-Pro Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O GADKFYNESXNRLC-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- VBKIFHUVGLOJKT-FKZODXBYSA-N Asn-Thr Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)O VBKIFHUVGLOJKT-FKZODXBYSA-N 0.000 description 1
- PSZNHSNIGMJYOZ-WDSKDSINSA-N Asp-Arg Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N PSZNHSNIGMJYOZ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- ICAYWNTWHRRAQP-FXQIFTODSA-N Asp-Arg-Cys Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)CN=C(N)N ICAYWNTWHRRAQP-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- BSWHERGFUNMWGS-UHFFFAOYSA-N Asp-Ile Chemical compound CCC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(O)=O BSWHERGFUNMWGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HRVQDZOWMLFAOD-BIIVOSGPSA-N Asp-Ser-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)C(=O)O HRVQDZOWMLFAOD-BIIVOSGPSA-N 0.000 description 1
- 208000037260 Atherosclerotic Plaque Diseases 0.000 description 1
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- RGTVXXNMOGHRAY-WDSKDSINSA-N Cys-Arg Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N RGTVXXNMOGHRAY-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- OABOXRPGTFRBFZ-IMJSIDKUSA-N Cys-Cys Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O OABOXRPGTFRBFZ-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- QQAYIVHVRFJICE-AEJSXWLSSA-N Cys-Val-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N QQAYIVHVRFJICE-AEJSXWLSSA-N 0.000 description 1
- 108010008286 DNA nucleotidylexotransferase Proteins 0.000 description 1
- 102100029764 DNA-directed DNA/RNA polymerase mu Human genes 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 108091060211 Expressed sequence tag Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- LSPKYLAFTPBWIL-BYPYZUCNSA-N Glu-Gly Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O LSPKYLAFTPBWIL-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- WVTIBGWZUMJBFY-GUBZILKMSA-N Glu-His-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WVTIBGWZUMJBFY-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- YSWHPLCDIMUKFE-QWRGUYRKSA-N Glu-Tyr Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 YSWHPLCDIMUKFE-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- JLXVRFDTDUGQEE-YFKPBYRVSA-N Gly-Arg Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N JLXVRFDTDUGQEE-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- RJIVPOXLQFJRTG-LURJTMIESA-N Gly-Arg-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CCCN=C(N)N RJIVPOXLQFJRTG-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- PROLDOGUBQJNPG-RWMBFGLXSA-N His-Arg-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N)C(=O)O PROLDOGUBQJNPG-RWMBFGLXSA-N 0.000 description 1
- YBDOQKVAGTWZMI-XIRDDKMYSA-N His-Trp-Ser Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC3=CN=CN3)N YBDOQKVAGTWZMI-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 1
- 101000946124 Homo sapiens Lipocalin-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000582631 Homo sapiens Menin Proteins 0.000 description 1
- 101000595923 Homo sapiens Placenta growth factor Proteins 0.000 description 1
- LLZLRXBTOOFODM-QSFUFRPTSA-N Ile-Asp-Val Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)N LLZLRXBTOOFODM-QSFUFRPTSA-N 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WGNOPSQMIQERPK-GARJFASQSA-N Leu-Asn-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N WGNOPSQMIQERPK-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- WGNOPSQMIQERPK-UHFFFAOYSA-N Leu-Asn-Pro Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CC(=O)N)C(=O)N1CCCC1C(=O)O WGNOPSQMIQERPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100034724 Lipocalin-1 Human genes 0.000 description 1
- ISHNZELVUVPCHY-ZETCQYMHSA-N Lys-Gly-Gly Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O ISHNZELVUVPCHY-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- 108091027974 Mature messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 206010073150 Multiple endocrine neoplasia Type 1 Diseases 0.000 description 1
- 101100102907 Mus musculus Wdtc1 gene Proteins 0.000 description 1
- BACYUWVYYTXETD-UHFFFAOYSA-N N-Lauroylsarcosine Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)N(C)CC(O)=O BACYUWVYYTXETD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007072 Nerve Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 1
- 108020004711 Nucleic Acid Probes Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- BNRFQGLWLQESBG-YESZJQIVSA-N Phe-Lys-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)N)C(=O)O BNRFQGLWLQESBG-YESZJQIVSA-N 0.000 description 1
- 102100035194 Placenta growth factor Human genes 0.000 description 1
- 102000010752 Plasminogen Inactivators Human genes 0.000 description 1
- 108010077971 Plasminogen Inactivators Proteins 0.000 description 1
- LNLNHXIQPGKRJQ-SRVKXCTJSA-N Pro-Arg-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 LNLNHXIQPGKRJQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- VJLJGKQAOQJXJG-CIUDSAMLSA-N Pro-Asp-Glu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O VJLJGKQAOQJXJG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- SGCZFWSQERRKBD-BQBZGAKWSA-N Pro-Asp-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 SGCZFWSQERRKBD-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- VTFXTWDFPTWNJY-RHYQMDGZSA-N Pro-Leu-Thr Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O VTFXTWDFPTWNJY-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- FHZJRBVMLGOHBX-GUBZILKMSA-N Pro-Pro-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@H](NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H]1CCCN1)C(O)=O FHZJRBVMLGOHBX-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- CZCCVJUUWBMISW-FXQIFTODSA-N Pro-Ser-Cys Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O CZCCVJUUWBMISW-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- FIODMZKLZFLYQP-GUBZILKMSA-N Pro-Val-Ser Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FIODMZKLZFLYQP-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 208000017442 Retinal disease Diseases 0.000 description 1
- 206010038923 Retinopathy Diseases 0.000 description 1
- 241000220317 Rosa Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- SWIQQMYVHIXPEK-FXQIFTODSA-N Ser-Cys-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O SWIQQMYVHIXPEK-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- NUEHQDHDLDXCRU-GUBZILKMSA-N Ser-Pro-Arg Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O NUEHQDHDLDXCRU-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- VGQVAVQWKJLIRM-FXQIFTODSA-N Ser-Ser-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O VGQVAVQWKJLIRM-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- VLMIUSLQONKLDV-HEIBUPTGSA-N Ser-Thr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O VLMIUSLQONKLDV-HEIBUPTGSA-N 0.000 description 1
- ATEQEHCGZKBEMU-GQGQLFGLSA-N Ser-Trp-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)NC(=O)[C@H](CO)N ATEQEHCGZKBEMU-GQGQLFGLSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- MXDOAJQRJBMGMO-FJXKBIBVSA-N Thr-Pro-Gly Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O MXDOAJQRJBMGMO-FJXKBIBVSA-N 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- MYVYPSWUSKCCHG-JQWIXIFHSA-N Trp-Ser Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)=CNC2=C1 MYVYPSWUSKCCHG-JQWIXIFHSA-N 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- CXWJFWAZIVWBOS-XQQFMLRXSA-N Val-Lys-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N CXWJFWAZIVWBOS-XQQFMLRXSA-N 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 230000001919 adrenal effect Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 210000001643 allantois Anatomy 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 230000006427 angiogenic response Effects 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 description 1
- 108010077245 asparaginyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010093581 aspartyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 210000003050 axon Anatomy 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000001593 cAMP accumulation Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 238000003352 cell adhesion assay Methods 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 238000002701 cell growth assay Methods 0.000 description 1
- 108091092328 cellular RNA Proteins 0.000 description 1
- 210000002230 centromere Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 1
- 210000004246 corpus luteum Anatomy 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 150000001945 cysteines Chemical class 0.000 description 1
- 108010004073 cysteinylcysteine Proteins 0.000 description 1
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 108010054813 diprotin B Proteins 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- ODKNJVUHOIMIIZ-RRKCRQDMSA-N floxuridine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(F)=C1 ODKNJVUHOIMIIZ-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 230000000762 glandular Effects 0.000 description 1
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 210000001357 hemopoietic progenitor cell Anatomy 0.000 description 1
- 102000047681 human MEN1 Human genes 0.000 description 1
- 102000056450 human PIGF Human genes 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 108010044056 leucyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 238000010232 migration assay Methods 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 210000003098 myoblast Anatomy 0.000 description 1
- 210000001087 myotubule Anatomy 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 239000003900 neurotrophic factor Substances 0.000 description 1
- 239000002853 nucleic acid probe Substances 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 230000007030 peptide scission Effects 0.000 description 1
- 210000002856 peripheral neuron Anatomy 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 208000028591 pheochromocytoma Diseases 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000028742 placenta development Effects 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000002797 plasminogen activator inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000019705 regulation of vascular permeability Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 1
- 210000005241 right ventricle Anatomy 0.000 description 1
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 description 1
- 108700004121 sarkosyl Proteins 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 210000002363 skeletal muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 230000003393 splenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 1
- 230000002227 vasoactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002861 ventricular Effects 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 description 1
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 description 1
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Neurology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
A találmány általánosan egy vaszkuláris endoteliális növekedésifaktor-szerű tulajdonságokkal rendelkező izolált molekulára és egy ezt kódológénszekvenciára vonatkozik. A molekula számos, növelt vagy csökkentérrendszeri és/vagy vaszkuláris permeabilitást igénylő állapotokkezelésében, megelőzésében és/vagy diagnosztizálásában használatosterápiás készítmény és diagnosztikum kifejlesztésében hasznosítható. Atalálmány szerinti molekula a primer és a központi neuronok hasznoseffektora, és képes asztroglia proliferációt is kiváltani. A találmánya fenti tulajdonságú rekombináns molekula előállítására, és amolekulát tartalmazó gyógyszerkészítményre is vonatkozik. ŕ
Description
KIVONAT
A találmány általánosan egy vaszkuláris endoteliális növekedésifaktor-szerű tulajdonságokkal rendelkező izolált molekulára és egy ezt kódoló génszekvenciára vonatkozik. A molekula számos, növelt vagy csökkent érrendszeri és/vagy vaszkuláris permeabilitást igénylő állapotok kezelésében, megelőzésében és/vagy diagnosztizálásában használatos terápiás készítmény és diagnosztikum kifejlesztésében hasznosítható. A találmány szerinti molekula a primer és a központi neuronok hasznos effektora, és képes asztroglia proliferációt is kiváltani.
A találmány a fenti tulajdonságú rekombináns molekula előállítására, és a molekulát tartalmazó gyógyszerkészítményre is vonatkozik.
A leírás terjedelme 76 oldal (ezen belül 52 lap ábra)
HU 223 438 B1
HU 223 438 Β1
A találmány általánosan egy vaszkuláris endoteliális növekedésifaktor-szerű tulajdonságokkal rendelkező izolált molekulára és egy ezt kódoló génszekvenciára vonatkozik. A molekula számos, növelt vagy csökkent érrendszeri és/vagy vaszkuláris permeabilitást igénylő állapotok kezelésében, megelőzésében és/vagy diagnosztizálásában használatos terápiás készítmény és diagnosztikum kifejlesztésében hasznosítható. A találmány szerinti molekula a primer és a központi neuronok hasznos effektora, és képes asztroglia proliferációt is kiváltani.
A nukleotid- és aminosavszekvenciákra vonatkozó szekvenciaazonosító számokat, melyekre a leírásban hivatkozunk, a leírás végén adjuk meg.
A leírás során, hacsak a szövegkörnyezetből másképp nem adódik, a „tartalmaz” szó vagy változatai, mint például a „tartalmazzák” vagy „tartalmazó”, úgy értelmezendő, hogy valami magában foglal egy meghatározott elemet vagy egységet, vagy az elemek vagy egységek csoportját, de nem zár ki más egyéb elemet, egységet, vagy elemek vagy egységek csoportját.
A vaszkuláris endoteliális növekedési faktor (melyre ezután „VEGF”-ként hivatkozunk), amelyet vazoaktív permeabilitási faktorként is ismerünk, egy szekretált, kovalensen kapcsolt homodimer glikoprotein, mely specifikusan aktiválja az endoteliális szöveteket (Senger D. R., Van De Water L., Brown L. F., Nagy J. A., Yeo K. T., Berse B., Jackman R. W., Dvorak A. M., Dvorak H. F (1993) Cancer Metastasis Rév., 12, 303-324). A VEGF-nek számos funkciót tulajdonítanak, például részt vesz normális angiogenezisben, ez magában foglalja a sárgatest képzését (Yan Z., Weich
H. A., Bemart W., Breckwoldt M., Neulen J. (1993) J. Clin. Endocrinol. Metab. 77, 1723-1725) és placenta kialakulását (Sharkey A. M., Chamock-Jones D. S., Boocock C. A., Brown K. D., Smith S. K, (1993) J. Repród. Fertil. 99, 609-615), a vaszkuláris permeabilitás szabályozását (Senger és munkatársai, 1993, fentebb), a gyulladásos angiogenezist (Sunderkotter C., Steinbrink K., Goebeler M., Bhardway R., Sorg E. (1993) J. Leukocyt., Bioi. 55, 410-422) és az autotranszplantációt (Dissen G. A., Lara Η. E., Fabrenbach W. H., Costa Μ. E., Ojeda S. R. (1994) Endocrinology 134, 1146-1154) és humán betegségeket, például a tumorkiváltó angiogenezist (Folkman J. és Shing Y. (1992) J. Bioi. Chem. 267, 10931-10934), a reumatoid artritiszt (Koch A. E., Harlow L. A., Haines G. K. Amento E. P., Unemoti E. N., Wong W. L., Popé R. M., Ferrara N., (1994) J. Immunoi. 152, 4149-4156) és a retinopátiával összefüggő diabéteszt (Folkman J. és Shing Y. (1992) J. Bioi. Chem. 267, 10931-10934).
A VEGF tehát egy fontos molekula, mely a VEGFen vagy aktivitásain alapuló terápiás, profilaktikus és diagnosztikai szerek kutatásának potenciálisan értékes céljává teszi. Szükség van a homológok vagy egyéb rokon molekulák azonosítására is, hogy azokat a VEGF alternatívájaként vagy a VEGF-fel együtt alkalmazhassuk.
A találmányhoz vezető munkában a feltalálók a sokszoros endokrin neoplázia I. típusú érzékenységi génjét (MEN1) keresték. Meglepő módon felfedeztük, hogy egy génszekvencia, mely lehetséges ΜΕΝ 1-ként nem kerülhetett szóba, egy új növekedési faktor, mely némileg hasonlít a VEGF-hez. Továbbá a találmány szerinti növekedési faktor a primer és központi neuronok egyik effektor molekulája.
Következésképpen a találmány egyik tárgya egy olyan aminosavszekvenciát tartalmazó proteinszerű molekula, mely:
(i) egy olyan aminosavszekvenciát tartalmaz, mely legalább körülbelül 15%-ban hasonlít a 2. azonosító számon bemutatott szekvenciához és (ii) legalább körülbelül 5%-ban eltér a 2. azonosító számon bemutatott szekvenciától.
A találmány egy másik tárgya egy biológiailag izolált, a következő tulajdonságokkal rendelkező proteinszerű molekula, mely (i) egy olyan aminosavszekvenciát tartalmaz, mely legalább körülbelül 15%-ban hasonlít és legalább körülbelül 5%-ban eltér a 2. azonosító számon bemutatott szekvenciától;
(ii) legalább egy, a VEGF-fel közös tulajdonságot mutat.
A találmány egy biológiailag izolált, a következő tulajdonságokkal rendelkező proteinszerű molekulára is vonatkozik:
(i) egy olyan aminosavszekvenciát tartalmaz, mely legalább körülbelül 15%-ban hasonlít és legalább körülbelül 5%-ban eltér a 2. azonosító számon bemutatott szekvenciától;
(ii) a következő tulajdonságok legalább egyikét mutatja:
(a) képes a vaszkuláris endoteliális sejtek indukálására (b) képes kölcsönhatásba lépni az flt-l/flk-1 receptorcsaláddal; és/vagy (c) képes indukálni a sejtmigrációt, a sejttúlélést és/vagy képes az alkalikus foszfatáz intracelluláris szintjének növelésére.
A „biológiailag izolált” azt jelenti, hogy a molekula a biológiai forrásból kiindulva legalább egy tisztítási lépésen átesik. Előnyösen az, hogy a molekula biológiailag tiszta, azt is jelenti, hogy egy elegy legalább körülbelül 20%, még előnyösebben legalább körülbelül 40%, ennél is előnyösebben legalább körülbelül 65%, még ennél is előnyösebben legalább körülbelül 80-90% molekulát vagy többet tartalmaz az elegyben lévő egyéb vegyületekhez képest, tömeg, aktivitás alapján vagy egyéb megfelelő módszerrel meghatározva.
A találmány egy másik előnyös megvalósítási módja a molekulát rekombináns formában biztosítja.
A találmány ezen aspektus szerint egy olyan aminosavszekvenciát tartalmazó rekombináns molekulát biztosít, mely (i) legalább körülbelül 15%-ban hasonlít a 2. azonosító számon bemutatott szekvenciához és (ii) legalább 5%-ban eltér a 2. azonosító számon bemutatott szekvenciától.
A találmány egy ezzel összefüggő megvalósítási módja egy olyan rekombináns molekulára irányul, mely a következő tulajdonságokkal rendelkezik:
HU 223 438 Bl (i) egy olyan aminosavszekvenciát tartalmaz, mely legalább körülbelül 15%-ban hasonlít és legalább körülbelül 5%-ban eltér a 2. azonosító számon bemutatott szekvenciától;
(ii) legalább egy, a VEGF-fel közös tulajdonságot mutat.
A találmány egy másik megvalósítási módja a következő tulajdonságokkal rendelkező rekombináns molekulára vonatkozik:
(i) egy olyan aminosavszekvenciát tartalmaz, mely legalább körülbelül 15%-ban hasonlít és legalább körülbelül 5%-ban eltér a 2. azonosító számon bemutatott szekvenciától;
(ii) a következő tulajdonságok legalább egyikét mutatja:
(a) képes a vaszkuláris endoteliális sejtek indukálására (b) képes kölcsönhatásba lépni az flt-l/flk-1 receptorcsaláddal; és/vagy (c) képes indukálni a sejtmigrációt, a sejttúlélést, és/vagy képes az alkalikus foszfatáz intracelluláris szintjének növelésére.
A találmány szintén magában foglalja azokat a genomiális vagy részleges genomiális kiónokat, melyek olyan fehérjeszerű molekulát kódolnak, mely legalább körülbelül 15%-ban hasonlít és legalább körülbelül 5%-ban eltér az 1. azonosító számú szekvenciától.
A 2. azonosító számú szekvenciában bemutatott aminosavszekvencia a humán VEGF-nek (ezután „VEGF165”-ként hivatkozunk rá) felel meg. Következésképpen a találmány szerinti molekula VEGF-szerű, vagy a VEGF egy homológja, de olyan aminosavszekvenciát tartalmaz, mely hasonló, de nem azonos a VEGF aminosavszekvenciájával. Bár a találmányt egy humán VEGF-szerű molekulát alkalmazva szemléltetjük, értelemszerűen a találmány magában foglalja a többi emlősből, mint például a haszonállatokból (például juhokból, disznókból, lovakból és szarvasmarhákból), hobbiállatokból (például kutyákból és macskákból) és laboratóriumi tesztállatokból (például egerekből, patkányokból, nyulakból és tengerimalacokból), valamint nem emlős állatokból, például madarakból (például baromfi) halakból és kétéltűekből származó homológ molekulákat és kódolószekvenciákat. A legelőnyösebb megvalósítási módban a VEGF-szerű molekula humán eredetű, és egy 1 lql3 kromoszómán elhelyezkedő gén kódolja. A találmány tehát kiteljed az adott VEGF-szerű molekulát kódoló genomiális szekvenciára vagy részére.
Előnyösen, a százalékos hasonlóság a 2. azonosító számú szekvenciában bemutatott aminosavszekvencia egészéhez vagy részéhez legalább körülbelül 30%-os, előnyösebben legalább körülbelül 40%-os, még előnyösebben legalább körülbelül 50%-os, ennél is előnyösebben legalább körülbelül 60-70%-os, még ennél is előnyösebben legalább körülbelül 80-95%-os.
Egy különösen előnyös megvalósítási módban a találmány szerinti VEGF-szerű molekula a 4. azonosító számú szekvenciában bemutatott aminosavszekvenciát vagy egy részét, fragmensét, származékát vagy analógját tartalmazza. Különösen előnyös, ha a hasonlóság 19-20% és 29-30% körüli. A származékok, melyekre utaltunk, a splice-variánsokat is magukban foglalják. Következésképpen a találmány kiterjed a SOM 175 splicevariánsára is. Találmány szerinti splice-variánsok azok a variánsok, amelyek lényegében a 6. azonosító számú szekvencia, 8. azonosító számú szekvencia és/vagy a
10. azonosító számú szekvencia legalább egyikében bemutatott aminosavszekvenciával rendelkeznek, vagy ezek mutánsai, származékai vagy további splice-variánsai, de a variánsok nem korlátozódnak kizárólag ezekre.
Egy másik megvalósítási mód a következő jellemzőkkel bíró rekombináns molekulát szolgáltatja:
(i) aminosavszekvenciája lényegében olyan, mint amit a 4. azonosító számú szekvenciában bemutatunk, vagy legalább körülbelül 15%-ban hasonlít ahhoz vagy részéhez, feltéve, hogy legalább körülbelül 5%-ban eltér a 2. azonosító számú szekvenciában bemutatott aminosavszekvencia egészétől vagy részétől;
(ii) legalább egy, a VEGF-fel közös biológiai tulajdonságot mutat.
Egy másik megvalósítási mód a következő jellemzőkkel bíró rekombináns molekulát szolgáltatja:
(i) aminosavszekvenciája lényegében olyan, mint amit a 6. azonosító számú szekvenciában bemutatunk, vagy legalább körülbelül 15%-ban hasonlít ahhoz vagy részéhez, feltéve, hogy legalább körülbelül 5%-ban eltér a 2. azonosító számú szekvenciában bemutatott aminosavszekvencia egészétől vagy részétől;
(ii) legalább egy, a VEGF-fel közös biológiai tulajdonságot mutat.
Egy másik megvalósítási mód a következő jellemzőkkel bíró rekombináns molekulát szolgáltatja:
(i) aminosavszekvenciája lényegében olyan, mint amit a 8. azonosító számú szekvenciában bemutatunk, vagy legalább körülbelül 15%-ban hasonlít ahhoz vagy részéhez, feltéve, hogy legalább körülbelül 5%-ban eltér a 2. azonosító számú szekvenciában bemutatott aminosavszekvencia egészétől vagy részétől;
(ii) legalább egy, a VEGF-fel közös biológiai tulajdonságot mutat.
Egy másik megvalósulási mód a következő jellemzőkkel bíró rekombináns molekulát szolgáltatja:
(i) aminosavszekvenciája lényegében olyan, mint amit a 10. azonosító számú szekvenciában bemutatunk, vagy legalább körülbelül 15%-ban hasonlít ahhoz vagy részéhez, feltéve, hogy legalább körülbelül 5%-ban eltér a 2. azonosító számú szekvenciában bemutatott aminosavszekvencia egészétől vagy részétől;
(ii) legalább egy, a VEGF-fel közös biológiai tulajdonságot mutat.
A VEGF ezen tulajdonságai a következő jellemzők legalább egyikét foglalják magukban:
(a) képes a vaszkuláris endoteliális sejtek indukálására, (b) képes kölcsönhatásba lépni az flt-l/flk-1 receptorcsaláddal;
(c) képes indukálni a sejtmigrációt, a sejttúlélést és/vagy képes az alkalikus foszfatáz intracelluláris szintjének növelésére.
HU 223 438 Β1
A találmány szerint a hasonlóság előnyösen legalább körülbelül 40%-os, még előnyösebben legalább körülbelül 50%-os, és ennél is előnyösebben legalább körülbelül 65%-os.
A találmány egy további tárgya egy olyan peptidffagmentum, mely a 4. azonosító számú szekvenciában bemutatott aminosavszekvencia egy részének vagy egy splice-variánsának, például a 6. azonosító számú szekvenciában, a 8. azonosító számú szekvenciában vagy a 10. azonosító számú szekvenciában bemutatottnak, vagy ezek kémiai ekvivalensének felel meg. A találmány szerinti biológiailag izolált vagy rekombináns molekula lehet természetesen glikozilált, vagy tartalmazhat egy megváltozott glikozilációs mintázatot, attól a sejttől függően, melyből izolálták vagy amelyben szintetizálták. Például ha rekombináns módon prokariótákban termelnénk, a molekula glikozilálatlan lenne. A molekula lehet teljes hosszúságú, a természetben előforduló formában, vagy lehet csonkolt vagy egyéb származék.
A találmány még egy másik tárgya az itt leírt VEGF-szerű molekulát kódoló nukleinsavmolekula. Még jellemzőbben, a találmány egy olyan nukleinsavmolekulát biztosít, mely lényegében a 3. azonosító számú szekvenciaként bemutatott nukleotidszekvenciát tartalmazza, vagy legalább 15%-ban hasonlít annak egészéhez vagy részéhez, vagy kevéssé szigorú körülmények között képes hibridizálni a 3. azonosító számú szekvenciaként bemutatott nukleotidszekvencia reverz komplementeréhez, feltéve, hogy a nukleotidszekvencia legalább 15%-ban hasonlít és legalább 30%-ban eltér a 3. azonosító számú szekvenciában bemutatott nuklkeotidszekvenciától. A 3. azonosító számú szekvenciában bemutatott nukleotidszekvenciát „SOM175”nek is nevezzük. Előnyösen a százalékos eltérés körülbelül 35%, még előnyösebben körülbelül 39% és ennél is előnyösebben körülbelül 40-50% vagy nagyobb.
Abból a célból, hogy meghatározzuk a körülmények szigorúságát, referenciaként Sambrook J., Fritsch E. F., Maniatis T., (1989) Molekuláris klónozás - Laboratóriumi kézikönyvére hivatkozunk (Molecular Cloning: A Laboratory Manual) - 2. kiadás, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y.), a 9.47-9.51 oldalakra, mely referenciaként épül be a leírásba, és ahol a bemutatott mosási lépések a nagyon szigorú körülményeknek felelnek meg. A kevésbé szigorú körülményeket úgy határozzuk meg, hogy az eljárás 4-6 xSSC/0,1-0,5 vegyes% SDS-ben történik 37-45 °C-on 2-3 órán át.
A hibridizációban részt vevő nukleinsav forrásától és koncentrációjától függően, a szigorú körülmények egy másik alternatív feltételei is alkalmazhatóak, például a közepesen szigorú körülményeknek tekintjük a következőket: 1-4xSSC/0,25-0,5 vegyes% SDS-t, 45 °C-on vagy magasabb hőmérsékleten, 2-3 órán át, vagy nagyon szigorú körülményeknek tekintjük a 0,1 -1 χ SSC/0,1 vegyes% SDS-t, 60 °C-on 1-3 órán át.
A találmány magában foglal egy olyan nukleinsavmolekulát, mely egy VEGF-szerű molekulát kódol, mely, ahogy fentebb leírtuk, legalább 15%-os nukleotidszekvencia-homológiával rendelkezik a 3. azonosító számú szekvenciához viszonyítva. Előnyösen a homológiaszint legalább körülbelül 40%, még előnyösebben 60-70% körüli.
A találmány továbbá a humán VEGF egérfélékben megtalálható homológjára („mVRF”-nek nevezzük) vonatkozik. Az mVRF hozzávetőleg 85%-ban azonos és 92%-os aminosavmaradék-konzervációval rendelkezik a teljes kódoló régióban összehasonlítva a humán VEGFfel. Az mVRF-et lényegében a 9. ábrán bemutatott nukleotidszekvenciát tartalmazó nuklelinsavmolekula kódolja.
A találmány szerinti VEGF-szerű molekulák egy sor terápiás és/vagy diagnosztikai alkalmazás kifejlesztésében hasznosíthatók önmagukban vagy más molekulákkal, például a VEGF-fel kombinációban. A találmány tehát kiterjed a VEGF-szerű molekulát vagy részeit, ffagmenseit, származékait, homológjait vagy analógjait egy vagy több gyógyászatilag elfogadható hordozóval és/vagy oldószerrel együtt tartalmazó gyógyszerkészítményekre. Továbbá, a találmány kiterjed a 3. azonosító számú szekvenciában bemutatott nukleinsavszekvenciát, vagy egy olyan nukleinsavszekvenciát tartalmazó vektorokra is, mely legalább körülbelül 15%-ban, még előnyösebben körülbelül 40%-ban, és ennél is előnyösebben 60-70%-ban hasonlít, de legalább 30%-ban és még előnyösebben 39%-ban eltér attól, továbbá a találmány kiterjed a vektorokat tartalmazó gazdasejtekre is. Továbbá, a találmány kiterjed a 3. azonosító számú szekvencián alapuló ribozimokra és antiszensz molekulákra, valamint a VEGF-szerű molekulákat semlegesítő antitestekre is. Az ilyen molekulák a hatások javításában, például az angiogenezishez vagy a tumorok vaszkularizációjához vezető VEGF-szerű gének overexpressziójában lehetnek hasznosak.
A találmány egy másik aspektusból az asztroglia proliferáció indukálási eljárására vonatkozik emlősökben, ahol az említett eljárás során az említett emlősnek a következő tulajdonságokkal rendelkező rekombináns proteinszerű molekulát adjuk be hatásos mennyiségben:
(i) a 2. azonosító számú szekvenciában bemutatott szekvenciához legalább körülbelül 15%-ban hasonló és legalább 5%-ban eltérő aminosavszekvenciát tartalmaz;
(ii) legalább egy, a vaszkuláris endoteliális növekedési faktorral (VEGF) közös tulajdonságot mutat, és a beadást az asztroglia proliferáció indukálásához megfelelő időben és körülmények között végezzük el.
Előnyösen a rekombináns proteinszerű molekula a
3. vagy 6. azonosító számú szekvenciában bemutatott aminosavszekvenciát tartalmazza.
A találmány egy további tárgya a neurontúlélést és/vagy -proliferációt elősegítő eljárás, ahol az említett eljárás során az említett emlősnek egy olyan rekombináns proteinszerű molekulát adunk be hatásos mennyiségben, mely (i) egy, a 2. azonosító számú szekvenciában bemutatott szekvenciához legalább körülbelül 15%-ban hasonló és legalább körülbelül 5%-ban eltérő aminosavszekvenciát tartalmaz;
HU 223 438 Β1 (ii) legalább egy, a vaszkuláris endoteliális növekedési faktorral (VEGF) közös tulajdonságot mutat, és a beadást az asztroglia proliferáció indukálásához megfelelő időben és körülmények között végezzük el.
Előnyösen a rekombináns proteinszerű molekula a
3. vagy 6. azonosító számú szekvenciában bemutatott aminosavszekvenciát tartalmazza.
A találmány szintén magában foglalja a VEGF-szerű molekula elleni antitesteket és a VEGF-szerű molekulát kódoló génhez alkalmazható nukleinsavpróbákat, melyek diagnosztikai ágensekként használhatók.
A találmányt a továbbiakban a következő, nem korlátozó jellegű ábrákra és/vagy példákra hivatkozva írjuk le. Az ábrák ismertetése:
1. ábra: A VEGF 165 nukleotidszekvenciája (1.
azonosító számú szekvencia) és az ennek megfelelő aminosavszekvencia (2. azonosító számú szekvencia).
2. ábra: A SOM175 nukleotidszekvenciája (3. azonosító számú szekvencia) és az ennek megfelelő aminosavszekvencia (4. azonosító számú szekvencia).
3. ábra: A SOM 175 fehérjeszekvenciával végzett
BLAST-keresés eredményei
4. ábra: A VEGF cDNS és a SOM175 cDNS
BESTFIT-illesztése.
5. ábra: A VEGF165 sokszoros illesztése a
SOM175-tel és splice-variánsaival nukeotidszinten.
6. ábra: A VEGF165 sokszoros illesztése a
SOM175-tel és splice-variánsaival aminosavszinten.
7. ábra: A SOM 175 és splice-variánsainak diagramos bemutatása.
8. A. ábra: A humán SOM 175 genomiális szerkezetének diagramos ábrázolása az exon/intron térkép bemutatásával.
8. B. ábra: A humán SOM 175 genomiális szerkezetének diagramos ábrázolása az exon/intron határok bemutatásával.
9. ábra: Az mVRF cDNS kiónokból származó nukleotid- és megjósolt peptidszekvenciák. A nukleotidok számozását a bal oldalon adjuk meg, az iniciációs kodon A-jától kezdve. Az aminosavakat jobb oldalon számoztuk, a megjósolt érett fehérje első gyökétől kezdve, miután a feltételezett szignálpeptidet eltávolítottuk. A váltakozó splicing-on átesett régiókat vastagon aláhúztuk, és mindegyik az mRNS-ből kapott peptidszekvenciát is tartalmazza. Félkövér betűkkel jelöltünk meg egy potenciális poliadenilációs szignált. Az mVRF(67 és az mVRFl86 startés stopkodonjait aláhúztuk, és a 3’ UTR-ben lévő polimorf AC-ismétlődést téglalappal jelöljük. Az intron/exon határok helyzetét kis nyíllal jelöljük.
10. ábra: A humán és az egérfélék VRF protein izoformáinak BESTFIT-illesztése. A: mVRF167 és hVRF,67. B: mVRF186 és hVRF186 abból a pontból kiindulva, ahol a szekvenciák a megfelelő 167 aminosavas izoformáktól eltérnek. Az aminosavazonosságokat függőleges vonalakkal és a konzerválódott aminosavakat kettősponttal jelöljük. Egy nyíl jelöli a humán és az egér-VRF megjósolt szignálpeptid-hasítási helyét.
11. ábra: Az mVRF167 és az mVEGF188 peptidszekvenciák BESTFIT-illesztése (Breier G. Albrecht U., Sterrer S. és Risau W. (1992) Development 114, 521-532). Egy nyíl jelzi az mVEGF szignálpeptid hasítási helyét. Az aminosavazonosságokat függőleges vonalakkal és a konzervatív helyettesítéseket kettősponttal jelöljük. Az aminosavak számozása olyan, mint amit a
9. ábra magyarázatában leírtunk.
12. ábra: A VRF (egy általános VRF gént mutatunk be, mivel az egér és a humán homológ intron/exon szerveződése majdnem azonos) és a humán VEGF/PIGF/PDGF géncsalád egyéb tagjai közötti összehasonlítás. Az exonokat téglalapokkal jelöltük. A fehérjekódoló régiókat és a nem átíródó régiókat sűrűn vonalkázott, illetve üres szakaszokkal jelöljük. A VRF-ben a vonalkázott régiók a VRF,86 izoforma alternatív splicingje által kialakult járulékos 3’ UTR-szekvenciát jelölik. Mindegyik gén potenciális változó scplicing termékeit bemutatjuk.
13. ábra: Egy mVRF cDNS kiónnal hibridizált, különböző felnőtt egérszövetekből származó (ahogy azt jelöltük) össz-RNS Northern foltjának autoradiogramja. Mindegyik mintában egy 1,3 kb-os nagy transzkriptumot mutattunk ki.
14. ábra: Egér-mVRF és -mRNS expressziós mintázatát illusztráló film autoradiogramok (A-C) és sötét hátterű mikrogramok. Az E14 egérembrióban (A) pozitív jelek vannak jelen a kialakuló szív (Ha) és az agykéreg (Cx) felett. Egy alacsony háttérjel a metszetben lévő többi szövetben is jelen van. Az E17 embrióban (B) a szív (Ha) tisztán látható egy erős hibridizációs jelnek köszönhetően. Egy azonos erősségű jel van jelen a barna zsírszövet (Fa) fölött a háton és a mellkas körül. Egy mérsékelt hibridizációs jel van a gerincvelő (SC) és a nyelv (T) fölött. A háttérjel lecsökkent összehasonlítva az E14 embrióval. A fiatal felnőtt egérben (C-D) pozitív jelek vannak a szív (Ha) és a mellkas körüli zsírszövet (Fa) felett, míg például a tüdők (Lu) nem jelölődtek. A szív feletti hibridizációs jel egyenletesen oszlik el a teljes jobb kamra felett, beleértve a papilláris izmokat (D). Az El7-ben, ahol a szívet a hidegpróba feleslegével hibridizáltuk, pozi5
HU 223 438 Β1 tív szignál nincs jelen (E). Skálacsíkok=0,5 mm (A), 1,2 mm (Β), 1 mm (C),
0,3 mm (D), 0,1 mm (E).
15. ábra: Sötét (A és C) és világos hátterű (B és D) mikrogramok, melyek az mVRF mRNS 5 expressziót mutatják egérzsírszövetben (A-B) és -gerincvelőben (C-D). Egy erős hibridizációs jel van jelen a zsír felett (A), ahogy azt az erős jelződés mutatja a szudánfeketével festett metszeteken (B). 10 Szintén van egy gyenge jel a vázizomban (M az A-B-ben). A felnőtt gerincvelőben (C) az mVRF-próbák egy neuronos festődési mintázatot adnak a szürkeállomány felett. A toluidinfestés megmutatta, hogy 15 a ventrális szarvban lévő motoneuronok (D) , a dorzális szarv mélyebben fekvő részeiben és a központi csatorna körül lévő intemeuronok (nem mutatjuk) erősen pozitívok az mVRF mRNS-re. Skálacsí- 20 kok=0,l mm (A), 0,1 mm (B), 0,25 mm (C), 0,015 mm (D).
16. ábra: A VEGF hatása 8 napos csirkeembrióérzőneuronokra, a %-os túléléssel, a %-os neuritkinövéssel és az átlagos neurit- 25 hosszal (pm) meghatározva.
17. ábra: A VEGF és a SOM 175 hatásai a csirkegliára. CNS gliát, perifériás gliát és a CNS oligodendrocitákat vizsgáltunk.
18. ábra: Különböző SOM 175 fehérjék hatása az 30 egér asztrogliasejtjeire. 3H (cpm)
1. FGF-2 (10 ng/ml) pozitív kontroll
2. SOMAX6* 1 ng/ml
3. SOMAX6 10 ng/ml
4. SOMAX6 100 ng/ml 35
5. SOMAX6 1000 ng/ml
6. SOMAX6* 1000 ng/ml, heparin nélkül *
**
7. SOMX6** 1 ng/ml
8. SOMX6* 10 ng/ml
9. SOMX6 100 ng/ml
10. SOMX6 1000 ng/ml
11. SOMX6 1000 ng/ml, heparin nélkül a 6. exon nélküli SOM175-öt jelöli a SOMI75-öt jelöli
19. ábra: Különböző SOM 175 fehérjék hatása az egér oligodendrogliasejtjeire. 3H (cpm)
1. FGF-2 (10 ng/ml) pozitív kontroll
2. SOMAX6* 1 ng/ml
3. SOMAX6 10 ng/ml
4. SOMAX6 100 ng/ml
5. SOMAX6 1000 ng/ml
6. SOMAX6* 1000 ng/ml, heparin nélkül
7. SOMX6** 1 ng/ml
8. SOMX6* 10 ng/ml
9. SOMX6 100 ng/ml
10. SOMX6 1000 ng/ml
11. SOMX6 1000 ng/ml, heparin nélkül a 6-os exon nélküli SOM175-öt jelöli a SOM175-öt jelöli
20. ábra: Különböző SOM 175 fehérjék hatása az egér előagysejtjeire. %-os túlélés
1. FGF-2 (10 ng/ml) pozitív kontroll
2. SOMAX6* 1 ng/ml
3. SOMAX6 10 ng/ml
4. SOMAX6 100 ng/ml
5. SOMAX6 1000 ng/ml
6. SOMAX6* 1000 ng/ml, heparin nélkül
7. SOMX6** 1 ng/ml
8. SOMX6* 10 ng/ml
9. SOMX6 100 ng/ml
10. SOMX6 1000 ng/ml
11. SOMX6 1000 ng/ml, heparin nélkül a 6-os exon nélküli SOM175-öt jelöli a SOM175-öt jelöli
1. táblázat
A szekvenciaazonosító számok összefoglalása
1. azonosító számú szekvencia a VEGF 165 nukleotidszekvenciája
2. azonosító számú szekvencia a VEGF 165 aminosavszekvenciája
3. azonosító számú szekvencia a SOM 175 (VEGF-szerű molekula) nukleotidszekvenciája
4. azonosító számú szekvencia a SOM175 aminosavszekvenciája
5. azonosító számú szekvencia 6. exon nélküli VEGF 165 nukleotidszekvenciája
6. azonosító számú szekvencia a 6. exon nélküli VEGF165 aminosavszekvenciája
7. azonosító számú szekvencia a 6. és 7. exon nélküli VEGF 165 nukleotidszekvenciája
8. azonosító számú szekvencia a 6. és 7. exon nélküli VEGF 165 aminosavszekvenciája
9. azonosító számú szekvencia a 4. exon nélküli VEGF 165 nukleotidszekvenciája
10. azonosító számú szekvencia a 4. exon nélküli VEGF165 aminosavszekvenciája
11. azonosító számú szekvencia oligonukleotid
12. azonosító számú szekvencia oligonukleotid
13. azonosító számú szekvencia oligonukleotid
14. azonosító számú szekvencia oligonukleotid
A leírásban (igénypontokban) alkalmazott „szélsőségesen szigorú” kifejezés a következő körülményekre utal: (0,l-l)xSSC/0,l t% SDS, 60 °C, 1-3 óra.
1. példa: Humán cDNS klánok
Az eredeti SOM175 cDNS-t úgy izoláltuk, hogy a gQ humán magzatiagy-könyvtárat (ÁzapII, Stratagene) a
HU 223 438 Β1
D11S750 kozmiddal (Larsson C., Weber G., Kvanta E., Lewis C., Janson M., Jones C., Glaser T., Evans G., Nordenskjold M., (1992) Hűm. Génét. 89, 187-193) szkríneltük. A plazmidot „ in vivő ” hasítottuk, és egyetlen 1,1 kb-os cDNS-t kaptunk. Szintén izoláltunk há- 5 rom független SOM 175 cDNS kiónt egy humán magzatilép-könyvtárból (Stratagene, Unizap) próbaként a fentebb említett SOM 175 inszertumot alkalmazva. Három kiónt kaptunk: SOM175-4A, -5A és -6A.
A SOM 175-5A egy olyan váltakozó splicingon átesett 10 klón, melyből a 4. exon hiányzik (SOM175-e4). Ezeket a könyvtárszkríneléseket a könyvtár gyártója (Stratagene) által javasolt hibridizációs körülményeket és SOM 175 random primerizált inszertumát alkalmazva hajtottuk végre.
Szintén izoláltunk két részleges humán SOM 175 cDNS-t egy A2058 humán melanóm-asejtvonal XGTll könyvtárból (Clontech). A cDNS könyvtár szkríneléseket Church és Gilbert által leírt hibridizációs körülményeket alkalmazva hajtottuk végre (Church G. és Gilbert W. (1984) Proc. Natl. Acad.
Sci. USA 18, 1991-1995). Minden esetben a próbát a SOM 175 (18f-700r)-ből származó PCR termék random primerizálásával állítottuk elő.
Egér-cDNS-klönok
Humán SOM175-öt alkalmaztunk egy egér újszülött teljes agy-cDNS-könyvtárának (Unizap, Stratagene) szkrínelésére. Négy nem kiméra kiónt izoláltunk: Ml75-A, B, C, D. Mindegyik klón részleges cDNS volt, és az M175-C néhány intront tartalmazott. 30 Ezek közül a cDNS-ek közül háromból hiányzott a 6. exon.
Egy másik, Ml-nek nevezett kiónt teljesen megszekvenáltunk, és úgy találtuk, hogy a teljes nyitott leolvasási keretet, valamint az 5’ UTR egy részét és a teljes 3’ 35 UTR-t tartalmazta.
2.példa: DNS-szekvencia-analízis
A cDNS klón (SOM175) teljes szekvenciáját összeállítottuk, és a 2. ábrán mutatjuk be a megfelelő ami- 40 nosavszekvenciával együtt. Ezt a szekvenciát nyitott leolvasási keretekre szkríneltük a MAP programot (GCG, University of Wisconsin) használva. Egyetlen 672 bp-os nyitott leolvasási keretet figyeltünk meg (lásd a 2. ábrát). Úgy tűnik, hogy van egy kicsi 5’ nem 45 átíródó régió (2 bp). A 3’ nem átíródó régió teljesnek tűnik, mivel tartalmaz egy poliadenilációs szignált és egy poli-A farkat.
Adatbázisos homológiakereséseket hajtottunk végre a BLAST algoritmust alkalmazva (NCBI, USA). Ez az analízis homológiát tárt fel a VEGF néhány emlősformájával (lásd a 3. ábrát). A SOM 175 és a humán VEGF 165 közötti homológia mértékét BESTFIT programmal (GCG, University of Wisconsin; lásd a 4. és 5. ábrát) határoztuk meg. A nukleotidhomológiát 69,7%nak értékeltük, és a fehéqehomológiával kapcsolatban 33,3% azonosságot és 52,5%-os konzerválódást becsültünk a BESTFIT-analízist használva. A nukleotidszekvencián végzett BLAST-analízis kimutatta, hogy majdnem teljesen illeszkedik az EST06302 humán expresszált szekvenciarésszel (humán expressed seqence tag, Adams M. D., Soares Μ. B., Kerlavage A. R., Fields 15 C, Venter J. C., (1993) Natúré Génét., 4, 373-380).
Ezek az adatok azt jelzik, hogy a SOM 175 egy olyan növekedési faktort kódol, mely szerkezetileg hasonlít a VEGF-re. Mindkét génnél a start- és a stopkodon hasonló helyzetűnek mutatkozott, és elkülönült ho20 mológiablokkokat alkotott. Mind a 8 cisztein és a többi olyan VEGF aminosavgyök, melyről úgy gondoljuk, hogy részt vesz a dimerizációban, konzerválódott. Ezek a gyökök a cisztein-47, prolin-70, cisztein-72, valin-74, arginin-77, cisztein-78, glicin-80, cisztein-81, cisztein25 82, cisztein-89, prolin-91, cisztein-122, cisztein-124, melyeket a 6. ábrán mutatunk be. Mivel adott a szerkezeti konzerváció a VEGF és a SOM 175 géntermék között, lehetséges, hogy van funkcionális hasonlóság is. Feltételeztük, hogy a SOM 175 egy VEGF-szerű molekulát kódol, melynek néhány tulajdonsága azonos a VEGF-fel, de vannak saját egyedi tulajdonságai is. A VEGF 165 nukleotidszekvenciáját és a megfelelő aminosavszekvenciát az 1. ábrán mutatjuk be.
3. példa
A VEGF165 család és a SOM175 család (fehéq'e) közötti százalékos hasonlóságot és különbözőséget a Clustar eljárást alkalmazva analizáltuk (MegAlign Software, DNASTAR, Wisconsin). Az eredményeket a 2.1. és 2.2. táblázatban mutatjuk be. A SOM 175 alternatív splicingon átesett formáit SOM175-e6-ként rövidítjük, azokban az esetekben, melyekben a teljes 6. exon hiányzik; SOM175-e6-nak és 7-nek, melyeknél a teljes 6. és 7. exon kivágódott; és SOM175-e4-nek azokban az esetekben, melyekben a teljes 4. exon hiányzik. A SOM 175 splicingon átesett formáit a 7. ábrán mutatjuk be. Az intron/exon határokat bemutató SOM 175 genomiális térképet a 8A. és 8B. ábrán mutatjuk be.
2.1. táblázat
A) Százalékos hasonlóság a SOM 175 splice-variánsok és a humán VEGF 165 között
VEGF 165 | SOM 175 | SOM175-e6 | SOM175-e6&7 | SOM175-C4 | |
VEGF 165 | *** | 34,9 | 39,7 | 41,4 | 37,0 |
SOM 175 | **♦ | 98,9 | 95,1 | 99,2 | |
SOM175-e6 | ♦ ** | 98,8 | 84,0 | ||
SOM175-e6&7 | *** | 80,3 | |||
SOM175-e4 | **♦ |
HU 223 438 Bl
B) Százalékos nukleotiddivergencia a SOM 175 splice-variánsok és a humán VEGF165 között
VEGF 165 | SOM 175 | SOM175-e6 | SOM175-e6&7 | SOM175-e4 | |
VEGF165 | *** | 41,7 | 41,6 | 41,7 | 41,8 |
SOMI 75 | *** | 0,2 | 0,2 | 0,0 | |
SOM175-e6 | *** | 0,0 | 0,2 | ||
SOM175-e6&7 | *** | 0,3 | |||
SOM175-e4 | *** |
2.2. táblázat
A) Százalékos aminosavazonosság a SOM 175 splice-variánsok és a humán VEGF165 között
VEGF 165 | SOM 175 | SOM175-e6 | SOM175-e6&7 | SOM175-e4 | |
VEGF 165 | *** | 31,4 | 42,3 | 33,5 | 40,6 |
SOMI 75 | *** | 74,7 | 73,7 | 99, 1 | |
1 SOM175-e6 | 76,8 | 99,1 | |||
SOM175-e6&7 | **♦ | 99,1 | |||
1 SOM175-e4 | ♦♦♦ |
B) Százalékos aminosavdivergencia a SOM 175 splice-variánsok és a humán VE6F165 között
VEGF 165 | SOM 175 | SOM175-e6 | SOM175-e6&7 | SOM175-e4 | |
VEGF 165 | *** | 65,7 | 55,4 | 54,6 | 57,4 |
SOM 175 | *** | 19,9 | 4,2 | 0,0 | |
1 SOM175-e6 | *** | 0,0 | 0,0 | ||
| SOM175-e6&7 | 0,0 | ||||
1 SOM175-e4 | ♦♦♦ |
4. példa: Bioesszék a SOMI 75 funkciójának meghatározására
Esszéket végzünk annak értékelésére, hogy a SOM 175 hasonló aktivitásokkal rendelkezik-e, mint a VEGF az endoteliális sejtfunkcióban, az angiogenezisben és a sebgyógyulásnál. Egyéb, receptorkötési megoszlási tanulmányokon alapuló esszéket is végrehajtunk.
Endoteliális sejtfunkció esszék
Endoteliális sejt proliferáció: Endoteliális sejt növekedési esszék, melyeket Ferrara N. és Henzel W. J. (1989) Biochem. Biophys. Rés. Commun. 161, 851-858, valamint Gospodarowicz D, Abraham J. A. és Schilling J. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86, 7311-7315, írtak le.
Vaszkuláris permeábilitási esszé: Ezt az esszét, mely a Miles-tesztet alkalmazza tengerimalacokban, úgy hajtjuk végre, ahogy azt Miles A. A. és Miles E. M. (1952;/. Physiol. (Lond) 118: 228-257, leírták.
Sejtadhéziós esszé: A SOM175-nek a polimorfok endoteliális sejtekhez történő adhéziójára gyakorolt hatását elemezzük.
Kemotaxis: Ezt a standard Boyden-kamra kemotaxis esszét alkalmazva hajtjuk végre.
Plazminogén aktivátor esszé: Endoteliális sejteket tesztelünk plazminogén aktivátor és plazminogén aktivátor inhibitor termelésre SOM 175 hozzáadása mellett (Pepper M. S., Ferrara N, Őrei L., Montesano R. (1991) Biochem. Biophis. Rés. Commun. 181, 902-906).
Endoteliális sejtmigrációs esszé: A SOM 175 azon képességét, hogy stimulálja-e az endoteliális sejtek migrációját és ércsővé alakulását, Montestano és munkatársai által leírt módon vizsgáljuk (Montesano R., Vassalli
J. D., Baird A., Guillemin R és Őrei L. (1986) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 83, 7297-7301).
Angiogenezis esszé
Csirke allantoiszburok-membránjában mérjük az angiogén válasz SOM 175 indukcióját, ahogy azt OZUS Leung D. W., Cachianes G., Kuang W-J., Goeddel D. V. és Ferrara N. (1989) Science 246: 1306-1309, leírták.
A SOM 175 lehetséges neurotróf hatását a következő esszéket alkalmazva vizsgáljuk:
Neuritkinövési esszé és génindukció (PC12 sejtek)
A PC 12 sejtek [egy feokromocitóma (mellékvese velőállományának daganata) sejtvonal] válaszreakciót mutatnak az NGF-re és más neurotróf faktorokra, azáltal, hogy kialakulnak a szimpatikus neuronok jellemzői, melyek magukban foglalják a korai és késői gének indukcióját és a neuritok kialakítását. Ezeket a sejteket SOM175-tel kezeljük, és a válaszreakciót nyomon kö8
HU 223 438 Β1 vetjük (Drinkwater C. C., Suter U. Angst C. és Shooter E. M. (1991) Proc. Roy. Soc. Lond. (B sorozat), 246, 307-313; Drinkwater C. C., Barker P. A., Suter U. és Shooter E. M. (1993) J. Bioi. Chem., 268, 23202-23207).
A perifériás idegrendszerből (PNS) tenyésztett neuronok
A következő neuronok primer tenyészeteit SOM 175tel kezeljük, és nyomon követjük a válaszreakciókat:
- érző neuronok az idegtaréj és a hátsó ideggyök ganglionjaiból
- szimpatikus neuronok a szimpatikus lánc ganglionjaiból
- a csomós ganglionok érző neuronjaiból származó kezdemények
- a gerincvelő mozgató neuronjai
Az esszéket Suter U., Angst C., Tien C-L., Drinkwater C. C., Lindsay R. M. és Shooter E. M. (1992) J. Neurosci., 12, 306-318; Tischer E., Mitchell R., Hartman T., Silva M., Gospadarowicz D., Fiddes J. C. és Abraham J. (1991) J. Bioi. Chem. 266, 11947-11954, és Martinou J. C., Martinou I. és Kató A. C. (1992) Neuron, 8, Ί3Ί-Ί4Α írták le.
Ahol in vitro válaszreakciót figyelünk meg, in vivő esszéket hajtunk végre olyan tulajdonságok vizsgálatára, mint például a felvétel és az ellentétes irányú transzport, oly módon ahogy azt Hendry I. A., Murphy M., Hilton D. J., Nicola N. A. és Bartlett P. F. (1992) J. Neurosci. 12, 3427-3434, leírta.
Idegregeneráció (PNS)
Ahol a SOM 175 neurotróf hatásait megfigyeltük, elemezzük a lehetséges szerepét az axonjuktól megfosztott érző neuronok, szimpatikus neuronok és motoneuronok regenerációjában Ottó D., Frotscher M. és Unsicker K. (1989) J. Neurosci. Rés., 22, 83-91; Yip N. K., Rich K. M., Lampe P. A. és Johnson E. M. Jr. (1984) J. Neurosci. 4, 2986-2992 és Hendry I. A. és Campbell J. (1976)7. Neurocytol., 5, 351-360, módszerével.
A SOMI 75 CNS neuronokra gyakorolt hatásai
A SOM 175 azon képességét, hogy elősegíti-e a központi idegrendszer neuronjainak a túlélését, úgy analizáljuk, ahogy azt Hagg T., Quon D., Higaki J. és Varon S. (1992) Neuron, 8, 145-158; Williams L. R., Varon S., Peterson G. M., Wictorin K., Fischer W., Bjorklund A és Gage F. H. (1986) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83, 9231-9235; Hefti S. (1986) J. Neurosci., 6, 2155-2162 és Kromer A. F, (1987) Science, 235, 214-216, leírták.
Sebgyógyulás
A SOM 175 azon képességét, hogy segíti-e a sebgyógyulást, a legtöbb klinikailag fontos és hozzáférhető modellen teszteljük, ahogy azt Schilling és munkatársai (1959) Surgery, 46: 702- 710, leírták és Hunt és munkatársai (1967) Am. J. Surgery, 114: 302-307, alkalmazták.
A hemopoietikus rendszer
A hemopoietikus rendszer specifikus sejtpopulációinak számos in vitro és in vivő esszéje hozzáférhető, és ezeket a következőkben vázlatosan ismertetjük:
Őssejtek
Egérfélék
Egy sor új in vitro egérfélék őssejtjére vonatkozó esszét fejlesztettünk ki, FSC-tisztított sejteket alkalmazva.
(a) Őssejtek újratermelése
Ezek azok a sejtek, melyek képesek a letálisan besugárzott egércsontvelőt újratermelni, és Lin~, Rhhi, Ly6A/E+, c-kit+ fenotípusúak. A tesztanyagot ezeken a sejteken önmagában vagy több faktorral együtt inkubálva vizsgáljuk, melyet a sejtproliferáció 3H-timidin beépüléses mérésével követünk.
(b) Késői állapotú őssejtek
Ezek azok a sejtek, melyek összehasonlítva kisebb csontvelő-újratermelést mutattak, de képesek Dl3 CFUS-t létrehozni. Ezek a sejtek is Lin~, Rhhi, Ly-6A/E+, ckit+ fenotípusúak. A tesztanyagot egy adott időn át inkubáljuk ezekkel a sejtekkel, letálisan besugárzott recipiensekbe injekciózzuk, és a Dl3 lépkolóniák számát számláljuk.
(c) Progenitorban dús sejtek
Ezek azok a sejtek, melyek in vitro válaszreakciót mutatnak egyetlen növekedési faktorra, és Lin~, Rhhi, Ly-6A/E+, c-kit+ fenotípusúak. Ez az esszé megmutatja, hogy vajon a SOM 175 képes-e közvetlenül hatni a hemopoietikus progenitor sejtekre. A tesztanyagot ezekkel a sejtekkel agartenyészetben inkubáljuk, és a kolóniák számát 7-14 nap után számláljuk meg.
Ateroszklerózis
A simaizomsejtek döntő szerepet játszanak az ateroszklerózis kifejlődésében vagy iniciációjában azáltal, hogy fenotípusán meg kell változniuk ahhoz, hogy az összehúzódási állapotból a szintézis állapotába kerüljenek. A makrofágok, endoteliális sejtek, Tlimfociták és vérlemezkék mindegyike szerepet játszik az ateroszklerotikus plakkok kialakulásában oly módon, hogy hatással vannak a simaizomsejtek növekedésére és fenotípusos változásaira. Egy olyan in vitro esszét alkalmazunk a SOM175 simaizomsejtekre gyakorolt hatásának vizsgálatára, mely a simaizomsejtek proliferációs rátáját és fenotípusos változásait méri egy többsejtes környezetben. A rendszer egy módosított Rose-kamrát alkalmaz, melyben különböző sejttípusok vannak beágyazva a szemben álló fedőlemezekre.
A SOM175 hatása a csontra
A SOM 175 azon képességét, hogy hogyan szabályozza az oszteoblasztok proliferációját, oly módon vizsgáljuk, ahogy azt Lowe C., Comish J., Callon K., Martin T. J. és Reid I. R. (1991) J. Boné Mineral Rés., 6, 1277-1283, leírták. A csontreszorpcióra gyakorolt hatását Lowe C., Comish J., Martin T. J. és Reid I. R. (1991) Calcif. Tissue Int., 49, 394-397, által leírt módon vizsgáltuk. Az oszteoblasztmigrációra és az intracelluláris molekulák változásaira (például a cAMP-akkumulációra, alkalikusfoszfatáz-szintekre) gyakorolt hatásait úgy analizáljuk, ahogy azt Midy V. és Plouet J. (1994) Biochem. Biophys. Rés. Commun., 799:380-386, leírták.
HU 223 438 Β1
Vázizomsejtekre gyakorolt hatások
A SOM 175 mioblasztok proliferációjára és a miotubulusok kialakulására gyakorolt hatásai úgy határozhatóak meg, ahogy azt Ewton D. Z. és Florini J. R. (1980) Endocrinology, 106: 577-583; és Gospadarowicz D., Weseman J., Morgan J. S. és Lindstrom J. (1976) J. CellBiol., 70:395 -405; leírták.
5. példa: Egérfélék VE6F-jének klónozása cDNS-ek izolálása
Egérfélék VRF-jének (mVRF) kiónjait szelektáltunk egy lambda Zap újszülött teljes agy-cDNSkönyvtárából (Stratagene). A nagy sűrűségű szűrőkről (5 x1ο4 pfú/lemez) primer fágot azonosítottunk egy 682 bp-os 32P-vel jelölt próbával, melyet PCR-rel egy hVRF cDNS-ből (pSOM175) állítottunk elő, melyet fentebb leírtunk. A hibridizációt és a nejlonmembránok (Hybond-N) szigorú körülmények közötti mosását 65 °C-on, olyan körülmények között hajtottuk végre, melyeket Church és Gilbert (1984, lásd fentebb) írtak le. A pozitív plakkokat felszúrtuk, tisztítottuk és in vivő kivágtuk, hogy olyan bakteriális telepeket képezzünk, melyek a cDNS kiónokat pBluescript SK-ban tartalmazzák.
Genomiális kiónok izolálása
Genomiális kiónokat izoláltunk egy lambda Fix II vektorba (Stratagene) klónozott SV/129 egértörzskönyvtárból. A nagy sűrűségű szűrőket (5 χ 104 pfú/szűrő) egy 563 bp-os 32P-vel jelölt próbával szkríneltük, melyet az mVRF cDNS 233-798-as nukleotidrégiójának (lásd a 9. ábrát) PCR-amplifíkációjával hoztunk létre. A pozitív kiónokat kivágtuk, és újra szkríneltük 400-800 pfu-t tartalmazó szűrőkkel. Nagyméretű fágkészítményeket készítettünk QIAGEN lambda-kitet vagy ZnCl2-tisztítást alkalmazva [Santos M. A. (1991) Nucleic Acids Rés. 19, 5442)
Nukleotidszekvenálás és -analízis
A cDNS-eket mindkét szálon megszekvenáltuk több vektoralapú és belső prímért alkalmazva az Applied Biosystems Incorporated (ABI) festékterminátor szekvenáló kitjeivel a gyártó útmutatásait követve. A szekvenciákat egy ABI Model 373A automata DNSszekvenálóval analizáltuk. A peptidhomológiaillesztéseket a BESTFIT programot (GCG, Wisconsin) alkalmazva hajtottuk végre.
Az exon/intron határok azonosítása
Az exon határok és a határoló régiók azonosítását templátként egér genomiális DNS-t vagy mVRF genomiális lambda-klónokat használó PCR-rel hajtottuk végre. A PCR-ben az intronok azonosításához használt primerek a hVRF-szekvenciából származtak, és 5-10 °Cos, a becsült Tm alatti anneálási hőmérsékletet alkalmaztunk, hogy figyelembe vegyük a lehetséges humánegér szekvenciaeltéréseket. Az összes PCR terméket méret szerint elkülönítettük agaróz-gélelektroforézissel, és géltisztításnak vetettük alá QIAquick spinoszlopokat (Qiagen) alkalmazva, és az intron/exon határokat közvetlenül ezekből a termékekből szekvenáltuk meg. Továbbá, néhány splice-illesztést is megszekvenáltunk az mVRF szubklónozott genomiális fragmenseiből. Az intron/exon határokat úgy azonosítottuk, hogy összehesonlítottuk a cDNS-t a genomiális DNSszekvenciákkal.
Northern analízis
Össz-sejt-RNS-t készítettünk friss normál felnőttegér-szövetekből (agy, vese, máj, izom) Chomczynski P. és Sacchi N. (1987) Analyt. Biochem. 162, 156-159, módszerét alkalmazva. Az össz-DNS 20 pgját elektroforetizáltuk, egy nejlonmembránra (Hybond N., Amersham) vittük át, és standard körülmények között (Church G. és Gilbert W. (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 18, 1991-1995) hibridizáltuk. A szűrőket 65 °C-on 0,1 x SSC (20 χ SSC az 3M NaCL/0,3M trinátrium-citrát), 0,1% SDS-ben mostuk, és röntgenfilmre exponáltuk a szűrőket felerősítve, -70 °C-on 1-3 napon át.
Az m VRF cDNS-ek jellemzése
Egérfélék VRF homológjait izoláltunk egy egérfélék könyvtárának hVRF cDNS kiónnal történő szkrínelésével. Öt kiónt, melyek mérete 0,8-1,5 kb közötti volt, kinyertünk és megszekvenáltunk. A cDNSszekvenciákat összeillesztettük, hogy egy teljes 1041 bp hosszúságú cDNS-szekvenciát adjon, mely a teljes nyitott leolvasási keretet (621 vagy 564 bp, a splice-alaktól függően, lásd lentebb) és a 3’ UTR (379bp), valamint az 5’ UTR 163 bp-ját lefedi (lásd 9. ábra).
A megjósolt iniciációs kodon a hVRF startkodonjának helyzetéhez illeszkedik. Egy másik, kereten kívüli ATG-t lokalizáltunk a -47-es helyzetben, és két terminációs kodont figyeltünk meg upstream irányban (-9-es, illetőleg -33-as pozíciók) a feltételezett iniciációs kodonnal helyes leolvasási keretben.
Úgy tűnik, hogy a hVRF megjósolt N-terminális szignálpeptidje az mVRF-ben 81%-os egyezéssel (17/21 aminosav) van jelen. Ezek az adatok azt sejtetik, hogy az érett mVRF úgy szekretálódik és elképzelhetően úgy működik, mint egy növekedési faktor.
Hasonlóan a hVRF-hez, két nyitott leolvasási keretet (ORF) mutattunk ki a könyvtár szkrínelésével izolált cDNS-ekben. Úgy találtuk, hogy az öt klón közül négy alternatív splicing-on esett át, és hiányzik belőlük egy 10 bp-os, a hVRF 6. exonjával homológ ffagmens. Meghatároztuk az mVRF két izoformájának megjósolt peptidszekvenciáját és a megfelelő humán izoformákhoz illesztettük (10. ábra).
Az mVRF186-ot kódoló érett mRNS egy 621 bp-os ORF-et tartalmaz olyan kódolószekvenciákkal, melyek a +622-es helyzetben végződnek, a 7. exon végénél (9. ábra). A kisebbik mRNS, mely az mVRF167-et kódolja, valójában a +622-es TAG helytől downstream irányban végződik, melynek egy leolvasási keret az oka, amelyet a 10 bp-os 6. exon splicing általi kivágódása és egy stopkodon (TGA) beépülése eredményezett a +666-os helyzetben, a 8. exon kezdetének közelében (9. ábra).
Az mVRFlg6 fehéije erősen homológ a VEGF amino- és központi részével, még a karboxilvég teljesen eltérő, és alaninban gazdag. Az mVRF167 szintén rendelkezik ezekkel a hasonlóságokkal és megtartja a homoló10
HU 223 438 Β1 giát a mVEGF-hez jobbra a C-terminális felé (11. ábra). Az mVRF(67 összhomológiája a hVRF167hez 85% azonosság illetőleg 92%-os hasonlóság volt (10. ábra). Hasonlóan az mVRF167 és az mVEGF (Breier és munkatársai, 1992, fentebb) közötti hasonlóság 49%-os azonosság illetőleg 71 %-os konzervatív aminosavhelyettesítés volt (11. ábra).
Az mVRF cDNS-ben nem volt jelen a hitelesen elismert gerinces poliadenilációs szignál (AATAAA) (Bimstiel M. L., Busslinger M. és Strub K. (1985) Cell 41, 349-359), sőt mindkét egér és humán VRF cDNS-ben hasonló helyzetben egy szorosan illeszkedő GATAAA szekvencia volt jelen (9. ábra). Szemben a hVRF-fel, úgy találtuk, hogy az MVRF egy AC dinukleotidismétlődést tartalmaz a 3’ UTR szélső 3’ végén (998—1011-es nukleotidhelyzet, 9. ábra). Ennek az ismétlődő régiónak a polimorfizmusát figyeltük meg néhány mVRF cDNS-ben, ahol a dinukleotidok száma 7 és 11 között változott.
Az m VRF genomiális jellemzése
Az intron/exon határokat olyan primereket alkalmazva térképeztük, melyeket a megfelelő hVRF határokkal homológ szekvenciák szegélyeztek. Az mVRF I., III., IV. és VI. intronja kisebb volt mint a hVRF közbenső szekvenciái. A teljes genomiális szekvenciát összeállítottuk az mVRF 5’ UTR-étől az VI. intronig, mely a legnagyobb közbenső régió (2,2 kb), az mVRF amplifikállt intronjainak és klónozott genomiális részeinek megszekvenálásával. A genomiális szerkezetben csak egyetlen nagy különbség volt az mVRF és a hVRF között, és ez az volt, hogy az mVRF 7. exon/VI. intron közötti határa 10 bázispárral lejjebb helyezkedett el a cDNS-szekvenciához viszonyítva, ezért a 7. exon az mVRF-ben 10 bpral hosszabb volt minta hVRF megfelelő exonja.
Az mVRF-ben a 6. és 7. exon szomszédos, ahogy az a humán homológok esetében is megtalálható. Az erős homológia az mVRF és a hVRF 6. exonja között (10. ábra) azt sejteti, hogy ez a szekvencia nem egy megőrződött intronszekvencia, hanem inkább a VRF186 izoforma funkcionális része.
Az általános exon/intron szerkezet konzerválódott a VEGF géncsalád különböző tagjai (VEGF, PIGF, hVRF) között, és ezért nem meglepő, hogy az mVRF gén általános genomiális szerveződése nagyon hasonlít ezekhez a génekhez (12. ábra).
A korábbi összehasonlító térképezési vizsgálatok kimutatták, hogy az 1-es típusú humán sokszoros endokrin neoplázia betegség lókusza a 1 lql3 kromoszómán illeszkedik az egér 19-es kromoszómájának proximális szegmensével (Rochell J. M., Watson M. L., Oakey R. J. és Seldin M. F. (1992) Genomics 14, 26-31). Mivel a hVRF gént a humán MEN1 lokusz (lásd fentebb) 1 kb-án belülinek térképeztük, a legvalószínűbb, hogy a egérfélék VRF génje a 19-es kromoszóma centromerjének közelébe esik.
Az m VRF expressziós vizsgálatai
Felnőttegér-szövetekből (izom, szív, tüdő és máj) származó RNS Northern analízise azt mutatta, hogy az expresszió mindenütt előfordul, és elsődlegesen egy hozzávetőleg 1,3 kb méretű fő sávként fejeződik ki (14. ábra). Ez némiképp különbözik a hVRF-nél megfigyelt mintázattól, ahol két fő csíkot, egy 2,0 kb-osat és egy 5,5 kb-osat azonosítottunk mindegyik vizsgált szövetben. Az 1,3 kb-os egérfélék mRNS-e valószínűleg a rövidebb humán transzkriptumnak felel meg, és méretváltozását legvalószínűbb, hogy a hozzá tartozó 5’UTR-ek hosszának eltérése okozza.
6. példa: Egérfélék VEGF-expressziójaprenatális és posztnatális egerekben
Időzített vemhes (n=4) és fiatal felnőtt (n=2) egereket (C57 beltenyésztett törzs, ALAB, Svédország) szén-dioxiddal megöltünk, és a fontos szöveteket kiemeltük és lefagyasztottuk. A szöveteket -70 °C-on tartottuk további felhasználásig. Két gesztációs kort alkalmaztunk ebben a vizsgálatban 8 napos (E8), 14 napos, és E17 embrionális kort.
In situ hibridizációs hisztokémia
In situ hibridizációt hajtottunk végre egy már korábban leírt módon (Dagerlind A., Friberg K., Beán A. J. és Hokfelt T. (1992) Histochemistry 98, 39-49). Röviden, egy kriosztátban (Microm, Németország) keresztirányú metszeteket (14 pm) vágtunk, Probe-On lemezekre (Fisher Scientific, USA) olvasztottunk, és fekete zárt dobozokban tároltuk -70 °C-on a felhasználásig. Az mVRF-et kódoló mRNS-sel komplementer szintetikus 42-mer oligonukleotidok szekvenciája ACCACCACCTCCCTGGCATGTGGCACGTGCATAAACG (11. azonosító számú szekvencia) (komplementer a 120-161. nukleotidokkal) és
AGTTGTTTGACCACATTGCCCATGAGTTCCATGCTCAGAGGC (12. azonosító számú szekvencia) (komplementer a 162-203. nukleotidokkal) volt. A két alternatív splice alak detektálásához a GATCCTGGGGCTGGAGTGGGATGGAGTGATGTCAGCTGG (13. azonosító számú szekvencia) (komplementer az xxx-xxx nukleotidokkal) és GCGGGCAGAGGATCCTGGGGCTGTCTGGCCTCACAGCACT (14. azonosító számú szekvencia) volt. A próbákat 3’ végükön dezoxi-adenozin-alfa[tio]trifoszfáttal [35S] (NEN, USA) jelöltük terminális transzferázt alkalmazva (IBI, USA) 7-10χ 108 cpm/pg specifikus aktivitással, és a metszetekhez hibridizáltuk előkezelés nélkül 16-18 órán át 42 °C-on. A hibridizációs elegy tartalmazott 50 tf% formamidot, 4xSSC-t (1 xSSC=l,15 M NaCl és 0,015 M nátrium-citrát), 1 χ Dendhardt-oldatot (0,02% poli(vinil-pirrolidon), 0,02% BSA és 0,02% Ficoll), 1 tf% szarkozilt (N-lauroil-szarkozin, Sigma), 0,02 M foszfátpuffert (pH 7,0), 10 vegyes% dextrán-szulfátot (Pharmacia, Svédország), 250 pg/ml élesztő- tRNS-t (Sigma), 500 pg/ml hődenaturált lazacsperma- DNS-t (Sigma), és 200 mM ditiotreitolt (DTT; LKB, Svédország). A kontrollmetszeteken a próbák mindegyikét úgy ellenőriztük, hogy hússzoros fölöslegben jelöletlen próbát adtunk a hibridizációs elegyhez. Valamint a szomszédos metszetekhez egy olyan próbát adtunk, melyek nem tartoztak ehhez a vizsgálathoz, és eltérő expressziós mintázatot mutattak. A hibridizációt követően a metszeteket néhányszor 1 χ SSC-ben mostuk 55 °Con, etanolban víztelenítettük és NTB2 „nuclear track”
HU 223 438 Bl emulzióba (Kodak, USA) tettük. 3-5 hét múlva a metszeteket D-19 előhívóban előhívtuk (Kodak, USA) és fedőlemezzel lefedtük. Néhány esetben a metszeteket az emulzióba helyezés előtt egy autoradiográfiás filmmel (Beta-max autoradiográfiás film Amersham Ltd., Nagy Britannia) helyeztük szembe.
Az összes vizsgált szövet közül négy különböző próba azonos hibridizációs mintát adott. Egér-VRF-expressziót mutattunk ki már az E8 embrióban is, melynél a pozitív jelölődés leginkább az idegcsőnek megfelelő szerkezeteknél volt kimutatható. Az E14 egérembrió szagittális metszeteiben a legerősebb hibridizációs jel a szív és az idegrendszer, különösen az agykéreg felett volt megtalálható (14A. ábra). Az összes többi szövetben egy alacsonyabb szintű expresszió volt jelen. Egy későbbi gesztációs korban, az E17-nél egy magas mVRF mRNS jel csak a szívnél és a barna zsírszövetnél volt jelen a háton és a nyak körül (14B. ábra). Tisztán látható pozitív jel volt jelen a gerincvelő szürkeállományában és a nyelvben (14B. ábra).
Az expresszió az agykéregben tisztán láthatóan lecsökkent összehasonlítva a 14 napos metszettel. Az E14 embrióban látható gyenge háttérexpresszió, például az izomban, lecsökkent ebben a gesztációs korban. Erős mVRF mRNS hibridizációs jel kizárólag a szív és a barna zsírszövet felett volt jelen a fiatal felnőtt egérben (14C. ábra). A szív feletti szignál egyenletesen oszlott el a teljes kamrafal felett, magában foglalva a papilláris izmokat (14D. ábra). Hidegpróba feleslegével hibridizált szívszövet metszeteken a háttérjelen kívül nem mutattunk ki specifikus jelölődést (14E. ábra).
A szíven kívül mVRF mRNS jelek voltak jelen bizonyos szövetekben a mellkason kívül, mely morfológiailag a barna zsírszövethez hasonlított. Ezt szudánfekete festéssel igazoltuk, mellyel erős festődést mutattunk ki ugyanezeken a területeken (15A. és 15B. ábra). A felnőtt egér gerincvelőjének keresztmetszetein az mVRF próbák idegsejt-festődési mintázatot mutattak a szürkeállomány felett (15C. ábra). Toluidinnal történő festés megmutatta, hogy a ventrális szarvban lévő mozgató neuronok (15C. és 15D. ábra) és a dorzális szarv mélyebben fekvő részein és a központi csatorna körül elhelyezkedő intemeuronok (15C. ábra) azok, melyeknél nagymértékű pozitív mVRF mRNS jel volt.
7. példa: A VEGP és a SOMI 75 fehérjék hatása csirke érző neuronjaira
A VEGF és a SOM 175 fehérjék hatását a 8. embrionális nap korú csirke érző neuronjaira, Nurcombe és munkatársai módszere szerint határoztuk meg (Nurcombe és munkatársai (1992) Development 116: 1175-1183). A neuronesszét a 48. órában olvastuk le 2000 sejtet alkalmazva vizsgálati üregenként. Az eredményeket 3H-timidin-számlálással kaptuk. A neuronok százalékos túlélését, a neuritkinövést és a pm-ben mért átlagos neurithosszt úgy határoztuk meg, hogy pozitív kontrollként NGF-et alkalmaztunk, és a VEGF különböző koncentrációit és heparin jelenlétében lévő VEGF-et, és heparin és 5 μΜ 5’-fluor-uracil (5FU) jelenlétében lévő VEGF-et alkalmaztunk. 5 FU elpusztítja a gliasejteket.
Az eredményeket a 16. ábrán mutatjuk be. Az eredmények azt mutatják, hogy a VEGF hatásos a neurontúlélés elősegítésében, de ehhez a gliasejtek jelenlétére van szükség. A 17. ábra bemutatja 3 csirkegliatípuson a VEGF és a SOM 175 hatásának eredményét. A tesztelt gliasejtek CNS glia, perifériális gliasejtek és CNS oligodendrociták voltak. Mindegyik sejttenyészetben 10 pg/ml heparint alkalmaztunk, és az esszét a 24. órában olvastuk le. Az eredményeket a 3Htimidin mennyiségmérésével kaptuk 2000 sejtet alkalmazva üregenként. Az eredmények azt mutatták, hogy a központi és a perifériás neuronoknál az asztroglia proliferációját a SOM 175 jelentősen stimulálta heparin jelenlétében, de a csirkeoligodendrociták a megoszlás mértékének jelentéktelen növekedését mutatták.
8. példa: A SOMI 75 fehérjék hatásai egér primer és központi neuronjaira
A 7. példa eredményei azt mutatják, hogy a VEGF izoformája hatással van a csirke primer és központi neuronjaira az asztrogliasejtek közreműködésével. Hasonló kísérleteket hajtottunk végre egérsejteken.
Tenyésztési körülmények
Az összes in vitro kísérlethez neuronokat és gliasejteket preparáltunk és tenyésztettünk a „Methods in Neurosciences (2. kötet): Cell Culture”, szerkesztő: P. M. Conn, Academic Press, San Diego, 1990, 33-46. oldalain leírt módszerek szerint az asztrogliasejtek esetén és a 87-102. oldalakon leírtak szerint a központi neuronok esetén.
A sejteket 24 üreges tenyésztőclusterekbe (Nunc) helyeztük, poli-L-omitinnal (0,1 mg/ml, 1 óra) fedtük, 2000 sejt/üreg sűrűségnél. 48 órás tenyésztés után a neuronokat összeszámoltuk az üregekben inverz fázisú fény alatt, ismert módszereket alkalmazva (Maruta és munkatársai (1993) Growth Factors 8: 119-134), és a gliasejteket a [3H]-timidin-felvétellel mértük, hogy nyomonkövessük a sejtmegoszlás mértékét. A tenyészközegben mindig volt heparin (10 pg/ml, alacsony molekulatömegű frakció, Sigma Chemical Corp.), kivéve ahol ezt jelezzük. Az idegsejttenyészeteket 5 mM 5fluor-2-dezoxi-uridinnel (Sigma) egészítettük ki, hogy gátoljuk a háttér-glianövekedést.
3H-timidin-beépülési esszé a gliasejt-proliferáció vizsgálatára
A sejteket 14 órán át 3H-timidinnel (specifikus aktivitás 103 pCi/pg) adagokban kezeltük egy 0,1 mCi/ml törzskoncenttrátumból standard tápközegben, a végső inkubációs térfogat 20 μΐ/üreg volt. Az üregek tartalmát összegyűjtöttük, és nitrocellulóz papírra (Titertek, Flow) abszorbeáltuk. A fennmaradó adherens sejteket tripszin/verzénnel (CSL Limited, Victoria, Ausztrália) történő 5 perces inkubálással távolítottuk el. Ezt az eljárást kétszer hajtottuk végre. A nitrocellulóz lemezeket egy standard Titertek gyűjtőben (Flow) mostuk, először desztillált vizet majd metanolt alkalmazva. A nitrocellulóz lemezeket megszárítottuk, szcintillációs folyadékot (5 tf% TritonX-t tartalmaz) adtunk hozzá, és a lemezeket egy szcintillációs számlálóban mértük.
HU 223 438 Β1
A legnagyobb aktivitást az 6. exon nélküli SOMI 75 preparátumaival (SOMAX6) láttuk az egér- asztrogliasejttenyészetekben, ahol szignifikáns proliferációstimulus volt, amikor heparinnal együtt alkalmaztuk (17. ábra). Az oligodendrogliasejtek proliferációjához kicsi stimulust adott (17. ábra), és az izolált előagyneuronok túlélési válaszának nagyon kevéssé felismerhető felszabadulását okozta (18. ábra). A standard hiba mindegyik grafikon minden egyes pontjánál kevesebb mint 8% volt.
A neuronok életképessége fenntartható a gliasejtproliferáció elősegítésével. Továbbá, a S0MAX6 az asztrogliaproliferációt jól indukálja, és lehet, hogy az asztroglia-végtalpacska kialakulásával együtt fejeződik ki a központi idegrendszer endoteliális sejtjeiben.
A szakterületen jártas szakemberek tudják, hogy az itt leírt találmánynak egyéb változatai és módosításai is lehetségesek, mint amit kifejezetten leírtunk. Érthető, hogy a találmány magában foglalja az összes ilyen változatot és módosítást. A találmány szintén magában foglalja az összes olyan lépést, jellemzőt, készítményt és vegyületet, és az említett lépések vagy jellemzők közül bármely kettőnek vagy többnek bármely és minden kombinációját, melyre a leírásban önmagában vagy együttesen hivatkoztunk vagy megjelöltünk.
3. táblázat
Egérfélék VRF gén splice-illesztései
5’UTR*... | 1. exon >223 bp | CCCAGgtacgtgcgt | I. intron 495 bp | |
ttccccacatGCCCC | 2. exon | 43 bp | GAAAGgtaataatag | II. intron 288 bp |
ctgcccacagTGGTG | 3. exon | 197 bp | TGCAGgtaccagggc | III. intron 196 bp |
ctgagcacagATCCT | 4. exon | 74 bp | TGCAGgtgccagccc | IV. intron 182 bp |
ctcttttcagACCTA | 5. exon | 36 bp | GACAGattcttggtg | V. intron 191 bp |
ctcctcctagGGTTG | 6. exon | 101 bp | (nincs intron) | |
CCCACTCCAGCCCA | 7. exon | 135 bp | TGTAGgtaaggagtc | VI. intron ~2200 bp |
cactccccagGTGCC | 8. exon | 394 bp | AGAGATGGAGACACT |
A kis- és nagybetűk az exon- illetőleg az intronszekvenciákat jelölik.
* Azt jelzi, hogy az 1. exon 5’ végét még nem határoztuk meg.
Szekvencialista (1) Általános információk:
(i) Bejelentő:
(USA-n kívüli országokban): AMRAD OPERATIONS PTY. LTD. (csak az USA-ban): Hayward N. és Weber G.
(ii) A találmány címe: Új növekedési faktor és ezt kódoló génszekvencia (iii) A szekvenciák száma: 14 (iv) Levelezési cím:
(A) Cím: Davies Collison Cave (B) Utca: 1 Little Collison Street (C) Város: Melbume (D) Állam: Victoria (E) Ország: Ausztrália (F) Postai irányítószám: 3000 (v) Számítógéppel feldolgozható forma:
(A) Hordozó típusa: floppy lemez (B) Számítógép: IBM PC kompatibilis (C) Operációs rendszer: PC-DOS/MS-DOS (D) Szoftver: Patentln Release #1.0, Version #1.25 (vi) A bejelentés adatai:
(A) Bejelentés száma: PCT (B) Bejelentés napja: 1996. február 22.
(vi) Korábbi bejelentés adatai:
(A) Bejelentés száma: AU PN1457 (B) Bejelentés napja: 1995. márc. 2.
(A) Bejelentés száma: AU PN6647 (B) Bejelentés napja: 1995. nov. 20.
(A) Bejelentés száma: AU PN7274 (B) Bejelentés napja: 1995. dec. 22.
HU 223 438 Β1 (viii) Meghatalmazott/képviselő adatai:
(A) Név: Hughes Dr. E. John L.
(C) Hivatkozási/lista szám: EJH/EK (ix) Telekommunikációs információk:
(A) Telefon: +61 3 9254 2777 (B) Telefax: +61 3 9254 2770 (2) Információk az 1. azonosító számú szekvenciához:
(i) Szekvenciajellemzők:
(A) Hossza: 649 bázispár (B) Típusa: nukleinsav (C) Száltípus: egyszálú (D) Topológia: lineáris (ii) Molekulatípus: DNS (ix) Jellemző:
(A) Név/Kulcs: CDS (B) Elhelyezkedés: 17...589 (xi) A szekvencia leírása: 1. azonosító számú szekvencia:
TCGGGCCTCC GAAACC ATG AAC TTT CTG CTG TCT TGG GTG CAT TGG AGC 49
Me t Asn Phe Leu Leu Ser Trp Va1 His Trp Ser
5 10
CTT GCC | TTG Leu | CTG Leu 15 | CTC TAC | CTC CAC CAT | GCC Al a | AAG Ly s | TGG TCC CAG GCT GCA | 97 | ||||||||
Leu | Al a | Leu | Tyr | Leu | Hi s | Hi s 20 | Trp | Ser | Gin 25 | Al a | Al a | |||||
CCC | ATG | GCA | GAA | GGA | GGA | GGG | CAG | AAT | CAT | CAC | GAA | GTG | GTG | AAG | TTC | 145 |
Pro | Me t | Al a 30 | Glu | Gly | Gly | Gly | Gin 35 | Asn | Hi s | Hi s | Glu | Val 40 | Val | Ly s | Phe | |
ATG | GAT | GTC | TAT | CAG | CGC | AGC | TAC | TGC | CAT | CCA | ATC | GAG | ACC | CTG | GTG | 193 |
Me t | Asp 45 | Val | Ty r | Gin | Arg | Ser 50 | Tyr | Cy s | Hi s | Pro | I le 55 | Glu | Thr | Leu | Val | |
GAC | ATC | TTC | CAG | GAG | TAC | CCT | GAT | GAG | ATC | GAG | TAC | ATC | TTC | AAG | CCA | 241 |
Asp 60 | I le | Phe | Gin | Glu | Tyr 65 | Pro | As p | Glu | I le | Glu 70 | Tyr | 11 e | Phe | Ly s | Pro 75 | |
TCC | TGT | GTG | CCC | CTG | ATG | CGA | TGC | GGG | GGC | TGC | TGC | AAT | GAC | GAG | GGC | 289 |
Ser | Cy s | Val | Pro | Leu 80 | Me t | Arg | Cy s | Gly | Gly 85 | Cy s | Cy s | Asn | As p | Glu 90 | Gly | |
CTG | GAG | TGT | GTG | CCC | ACT | GAG | GAG | TCC | AAC | ATC | ACC | ATG | CAG | ATT | ATG | 337 |
Leu | Glu | Cy s | Val 95 | Pro | Thr | Glu | Glu | Ser 100 | Asn | I le | Thr | Me t | Gin 105 | I le | Me t | |
CGG | ATC | AAA | CCT | CAC | CAA | GGC | CAG | CAC | ATA | GGA | GAG | ATG | AGC | TTC | CTA | 385 |
Arg | I le | Ly s 110 | Pro | Hi s | Gin | Gly | Gin 115 | Hi s | I le | Gly | Glu | Me t 120 | Ser | Phe | Leu | |
CAG | CAC | AAC | AAA | TGT | GAA | TGC | AGA | CCA | AAG | AAA | GAT | AGA | GCA | AGA | CAA | 433 |
Gin | Hi s 125 | Asn | Ly s | Cy s | Glu | Cy s 130 | Arg | Pro | Ly s | Ly s | Asp 135 | Arg | Al a | Arg | Gin | |
GAA | AAT | CCC | TGT | GGG | CCT | TGC | TCA | GAG | CGG | AGA | AAG | CAT | TTG | TTT | GTA | 481 |
Glu 140 | As n | Pro | Cy s | Gly | Pro 145 | Cy s | Ser | Glu | Arg | Arg 150 | Ly s | Hi s | Leu | Phe | Val 155 |
HU 223 438 Β1
CAA | GAT | CCG | CAG | ACG | TGT | AAA | TGT | TCC | TGC | AAA | AAC | ACA | GAC | TCG | CGT |
Gin | Asp | Pro | Gin | Thr 160 | Cy s | Lys | Cy s | Ser | Cy s 165 | Ly s | Asn | Thr | As p | Ser 170 | Arg |
TGC | AAG | GCG | AGG | CAG | CTT | GAG | TTA | AAC | GAA | CGT | ACT | TGC | AGA | TGT | GAC |
Cy s | Lys | Al a | Arg | Gin | Leu | Glu | Leu | Asn | Glu | Arg | Thr | Cy s | Arg | Cy s | Asp |
175 180 185
529
577
AAG CCG AGG CGG TGAGCCGGGC AGGAGGAAGG AGCCTCCCTC AGCGTTTCGG Lys Pro Arg Arg
190
GAACCAGATC TCTCACCAGG (2) Információk a 2. azonosító számú szekvenciához:
(i) Szekvenciajellemzők:
(A) Hossza: 191 aminosav (B) Típusa: aminosav (C) Száltípus: egyszálú (D) Topológia: lineáris (ii) Molekulatípus: protein (xi) A szekvencia leírása: 2. azonosító számú szekvencia:
629
649
Me t 1 | Asn | Phe | Leu | Leu 5 | Ser | Trp | Va 1 | Hi s | Trp 10 | Ser | Leu | Al a | Leu | Leu 15 | Leu |
Tyr | Leu | Hi s | Hi s 20 | Al a | Lys | Trp | Ser | Gin 25 | Al a | Al a | Pro | Me t | Al a 30 | Glu | Gly |
G1 y | Gly | Gin 35 | Asn | Hi s | Hi s | Glu | Val 40 | Val | Lya | Phe | Me t | Asp 45 | Va 1 | Tyr | Gin |
Arg | Ser 50 | Tyr | Cy s | Hi s | Pro | I le 55 | Glu | Thr | Leu | Va 1 | As p 60 | I le | Phe | Gin | Glu |
Tyr 65 | Pro | Asp | Glu | 11 e | Glu 70 | Tyr | I le | Phe | Lys | Pro 75 | Ser | Cy s | Va 1 | Pro | Leu 80 |
Me t | Arg | Cy s | Gly | Gly 85 | Cy s | Cy s | Asn | As p | Glu 90 | G1 y | Leu | Glu | Cy s | Va 1 95 | Pro |
Thr | Glu | Glu | Ser 100 | As n | I le | Thr | Me t | Gin 105 | I le | Me t | Arg | I le | Ly s 110 | Pro | Hi s |
Gin | Gly | Gin 115 | Hi s | I le | Gly | Glu | Me t 120 | Ser | Phe | Leu | Gin | Hi s 125 | Asn | Lys | Cy s |
Glu | Cy s 130 | Arg | Pro | Ly s | Lys | As p 135 | Arg | Al a | Arg | Gin | Glu 140 | Asn | Pro | Cy s | Gly |
Pro 145 | Cy s | Ser | Glu | Arg | Arg 150 | Lys | Hi s | Leu | Phe | Va 1 155 | Gin | Asp | Pro | Gin | Thr 160 |
Cy s | Ly s | Cy s | Ser | Cy s 165 | Ly s | Asn | Tn r | As p | Ser 170 | Arg | Cy s | Ly s | Al a | Arg 175 | Gin |
Leu | Glu | Leu | Asn | Glu | Arg | Thr | Cy s | Arg | Cy s | As p | Ly s | Pro | Arg | Arg |
180 185 190
HU 223 438 Β1 (2) Információk a 3. azonosító számú szekvenciához:
(i) Szekvenciajellemzók:
(A) Hossza: 1094 bázispár (B) Típusa: nukleinsav (C) Száltípus: egyszálú (D) Topológia: lineáris (ii) Molekulatípus: DNS (ix) Jellemző:
(A) Név/Kulcs: CDS (B) Elhelyezkedés: 3...624 (xi) A szekvencia leírása: 3. azonosító számú szekvencia:
CC ATG AGC CCT CTG CTC CGC CGC CTG CTG CTC GCC GCA CTC CTG CAG 47
Me t Ser Pro Leu Leu Arg Arg Leu Leu Leu Alá Alá Leu Leu Gin
10 15
CTG GCC CCC GCC | CAG GCC CCT | GTC TCC CAG | CCT GAT GCC CCT GGC CAC | 95 | ||||||||||||
Leu | Al a | Pro | Al a | Gin 20 | Al a | Pro | Va 1 | Ser | Gin 25 | Pro | As p | Al a | Pro | Gly 30 | Hi s | |
CAG | AGG | AAA | GTG | GTG | TCA | TGG | ATA | GAT | GTG | TAT | ACT | CGC | GCT | ACC | TGC | 143 |
Gin | Arg | Lys | Val 35 | Va 1 | Ser | Trp | I le | As p 40 | Val | Tyr | Thr | Arg | Alá 45 | Thr | Cy s | |
CAG | CCC | CGG | GAG | GTG | GTG | GTG | CCC | TTG | ACT | GTG | GAG | CTC | ATG | GGC | ACC | 191 |
Gin | Pro | Arg 50 | Glu | Val | Val | Val | Pro 55 | Leu | Thr | Val | Glu | Leu 60 | Me t | Gly | Thr | |
GTG | GCC | AAA | CAG | CTG | GTG | CCC | AGC | TGC | GTG | ACT | GTG | CAG | CGC | TGT | GGT | 239 |
Val | Al a 65 | Ly s | Gin | Leu | Val | Pro 70 | Ser | Cys | Val | Thr | Val 75 | Gin | Arg | Cys | Gly | |
GGC | TGC | TGC | CCT | GAC | GAT | GGC | CTG | GAG | TGT | GTG | CCC | ACT | GGG | CAG | CAC | 287 |
Gly 80 | Cys | Cys | Pr o | As p | As p 85 | Gly | Leu | Glu | Cys | Va 1 90 | Pro | Thr | Gly | Gin | Hi s 95 | |
CAA | GTC | CGG | ATG | CAG | ATC | CTC | ATG | ATC | CGG | TAC | CCG | AGC | AGT | CAG | CTG | 335 |
Gin | Va 1 | Arg | Me t | Gin 100 | I le | Leu | Me t | I le | Arg 105 | Tyr | Pro | Ser | Ser | Gin 110 | Leu | |
GGG | GAG | ATG | TCC | CTG | GAA | GAA | CAC | AGC | CAG | TGT | GAA | TGC | AGA | CCT | AAA | 383 |
Gly | Glu | Me t | Ser 115 | Leu | Glu | Glu | Hi s | Ser 120 | Gin | Cy s | Glu | Cys | Arg 125 | Pro | Lys | |
AAA | AAG | GAC | AGT | GCT | GTG | AAG | CCA | GAC | AGG | GCT | GCC | ACT | CCC | CAC | CAC | 431 |
Ly s | Ly s | Asp 130 | Ser | Al a | Val | Lys | Pro 135 | As p | Arg | Al a | Al a | Thr 140 | Pro | Hi s | Hi s | |
CGT | CCC | CAG | CCC | CGT | TCT | GTT | CCG | GGC | TGG | GAC | TCT | GCC | CCC | GGA | GCA | 479 |
Arg | Pro 145 | Gin | Pro | Arg | Ser | Val 150 | Pro | Gly | Trp | Asp | Ser 155 | Al a | Pro | Gly | Al a | |
CCC | TCC | CCA | GCT | GAC | ATC | ACC | CAT | CCC | ACT | CCA | GCC | CCA | GGC | CCC | TCT | 527 |
Pro 160 | Ser | Pro | Al a | As p | I le 165 | Thr | Hi s | Pro | Thr | Pro 170 | Al a | Pro | Gly | Pro | Ser 175 | |
GCC | CAC | GCT | GCA | CCC | AGC | ACC | ACC | AGC | GCC | CTG | ACC | CCC | GGA | CCT | GCC | 575 |
Al a | Hi s | Alá | Al a | Pro | Ser | Thr | Thr | Ser | Al a | Le u | Thr | Pro | Gly | Pro | Al a |
180 185 190
HU 223 438 Β1
GCT GCC GCT GCC GAC GCC GCA GCT TCC TCC GTT GCC AAG GGC GGG GCT T Alá Alá Alá Alá Asp Alá Alá Alá Ser Ser Val Alá Lys Gly Gly Alá
195 200 205
AGAGCTCAAC CCAGACACCT GCAGGTGCCG GAAGCTGCGA AGGTGACACA TGGCTTTTCA GACTCAGCAG GGTGACTTGC CTCAGAGGCT ATATCCCAGT GGGGGAACAA AGGGGAGCCT GGTAAAAAAC AGCCAAGCCC CCAAGACCTC AGCCCAGGCA GAAGCTGCTC TAGGACCTGG GCCTCTCAGA GGGCTCTTCT GCCATCCCTT GTCTCCCTGA GGCCATCATC AAACAGGACA GAGTTGGAAG AGGAGACTGG GAGGCAGCAA GAGGGGTCAC ATACCAGCTC AGGGGAGAAT GGAGTACTGT CTCAGTTTCT AACCACTCTG TGCAAGTAAG CATCTTACAA CTGGCTCTTC CTCCCCTCAC TAAGAAGACC CAAACCTCTG CATAATGGGA TTTGGGCTTT GGTACAAGAA CTGTGACCCC CAACCCTGAT AAAAGAGATG GAAGGAAAAA AAAAAAAAAA (2) Információk a 4. azonosító számú szekvenciához:
(i) Szekvenciajellemzők:
(A) Hossza: 207 aminosav (B) Típusa: aminosav (C) Száltípus: egyszálú (D) Topológia: lineáris (ii) Molekulatípus: protein (xi) A szekvencia leírása: 4. azonosító számú szekvencia:
624
684
744
804
864
924
984
1044
1094
Me t 1 | Ser | Pro | Leu | Leu 5 | Arg | Arg | Leu | Leu | Leu 10 | Al a | Al a | Leu | Leu | Gin 15 | Leu |
A1 a | Pro | A1 a | Gin 20 | Al a | Pro | Va 1 | Ser | Gin 25 | Pro | As p | Al a | Pro | Gly 30 | Hi s | Gin |
Arg | Ly s | Val 35 | Val | Ser | Trp | Ile | As p 40 | Va 1 | Tyr | Thr | Arg | Al a 45 | Thr | Cy s | Gin |
Pro | Arg 50 | Glu | Val | Val | Val | Pro 55 | Leu | Thr | Val | Glu | Leu 60 | Me t | Gly | Thr | Val |
A1 a 65 | Ly s | G1 n | Leu | Va 1 | Pro 70 | Ser | Cy s | Val | Thr | Va 1 75 | Gin | Arg | Cy s | Gly | Gly 80 |
Cy s | Cy s | Pro | Asp | As p 85 | Gly | Leu | Glu | Cy s | Va 1 90 | Pro | Thr | Gl y | Gl n | Hi s 95 | Gin |
Val | Arg | Me t | Gin 100 | Ile | Leu | Me t | Ile | Arg 105 | Tyr | Pro | Ser | Ser | Gin 110 | Leu | Gly |
Glu | Me t | Ser 115 | Leu | Glu | Glu | Hi s | Ser 120 | Gl n | Cy s | Gl u | Cy s | Arg 125 | Pro | Ly s | Lys |
Lys | Asp 130 | Ser | A1 a | Val | Lys | Pr o 135 | Asp | Arg | Al a | Al a | Thr 140 | Pro | Hi s | His | Arg |
Pro 145 | Gin | Pro | Arg | Ser | Val 150 | Pro | Gly | Trp | Asp | Ser 155 | Al a | Pro | Gly | Al a | Pro 160 |
Ser | Pro | A1 a | Asp | Ile 165 | Th r | Hi s | Pro | Thr | Pro 170 | Al a | Pro | Gly | Pro | Ser 175 | Al a |
Hi s | A1 a | Alá | Pro 180 | Ser | Thr | Thr | Ser | Al a 185 | Leu | Thr | Pro | Gly | Pro 190 | Al a | Al a |
A1 a | A1 a | A1 a 195 | As p | Al a | Al a | Al a | Ser 200 | Ser | Val | Al a | Ly s | Gly 205 | Gly | Al a |
HU 223 438 BI (2) Információk az 5. azonosító számú szekvenciához:
(i) Szekvenciajellemzők:
(A) Hossza: 993 bázispár (B) Típusa: nukleinsav (C) Száltípus: egyszálú (D) Topológia: lineáris (ii) Molekulatípus: DNS (ix) Jellemző:
(A) Név/Kulcs: CDS (B) Elhelyezkedés: 3...566 (xi) A szekvencia leírása: 5. azonosító számú szekvencia:
CC ATG AGC CCT CTG CTC CGC CGC CTG CTG CTC GCC GCA CTC CTG CAG 47
Me t Ser Pro Leu Leu Arg Arg Leu Leu Leu Alá Alá Leu Leu Gin
10 15
CTG Leu | GCC A1 a | CCC GCC | CAG GCC | CCT GTC TCC CAG CCT GAT GCC CCT GGC CAC | 95 | |||||||||||
Pro | A1 a | G1 n 20 | A1 a | Pro | Va 1 | Ser | Gin 25 | Pro | Asp | A1 a | Pro | Gly 30 | Hi s | |||
CAG | AGG | AAA | GTG | GTG | TCA | TGG | ATA | GAT | GTG | TAT | ACT | CGC | GCT | ACC | TGC | 143 |
Gin | Arg | Ly s | Va 1 35 | Val | Ser | Trp | I le | Asp 40 | Va 1 | Tyr | Thr | Arg | A1 a 45 | Thr | Cy s | |
CAG | CCC | CGG | GAG | GTG | GTG | GTG | CCC | TTG | ACT | GTG | GAG | CTC | ATG | GGC | ACC | 191 |
Gin | Pro | Arg 50 | Glu | Val | Val | Val | Pro 55 | Leu | Thr | Val | Glu | Leu 60 | Me t | Gly | Thr | |
GTG | GCC | AAA | CAG | CTG | GTG | CCC | AGC | TGC | GTG | ACT | GTG | CAG | CGC | TGT | GGT | 239 |
Val | A1 a 65 | Ly s | Gin | Leu | Val | Pro 70 | Ser | Cy s | Val | Thr | Val 75 | Gin | Arg | Cy s | Gly | |
GGC | TGC | TGC | CCT | GAC | GAT | GGC | CTG | GAG | TGT | GTG | CCC | ACT | GGG | CAG | CAC | 287 |
Gly 80 | Cy s | Cy s | Pro | As p | Asp 85 | Gly | Leu | Glu | Cy s | Va 1 90 | Pro | Thr | Gly | Gin | Hi s 95 | |
CAA | GTC | CGG | ATG | CAG | ATC | CTC | ATG | ATC | CGG | TAC | CCG | AGC | AGT | CAG | CTG | 335 |
Gin | Va 1 | Arg | Me t | Gin 100 | I le | Leu | Me t | I le | Arg 105 | Tyr | Pro | Ser | Ser | Gin 110 | Leu | |
GGG | GAG | ATG | TCC | CTG | GAA | GAA | CAC | AGC | CAG | TGT | GAA | TGC | AGA | CCT | AAA | 383 |
Gly | Glu | Me t | Ser 115 | Leu | Glu | Glu | Hi s | Ser 120 | Gin | Cy s | Glu | Cy s | Arg 125 | Pro | Ly s | |
AAA | AAG | GAC | AGT | GCT | GTG | AAG | CCA | GAT | AGC | CCC | AGG | CCC | CTC | TGC | CCA | 431 |
Ly s | Ly s | Asp 130 | Ser | A1 a | Val | Ly s | Pro 135 | Asp | Ser | Pro | Arg | Pro 140 | Leu | Cy s | Pro | |
CGC | TGC | ACC | CAG | CAC | CAC | CAG | CGC | CCT | GAC | CCC | CGG | ACC | TGC | CGC | TGC | 479 |
Arg | Cy s 145 | Thr | Gin | Hi s | Hi s | Gin 150 | Arg | Pro | Asp | Pro | Arg 155 | Thr | Cy s | Arg | Cy s | |
CGC | TGC | CGA | CGC | CGC | AGC | TTC | CTC | CGT | TGC | CAA | GGG | CGG | GGC | TTA | GAG | 527 |
Arg 160 | Cy s | Arg | Arg | Arg | Ser 165 | Phe | Leu | Arg | Cy s | Gin 170 | Gly | Arg | G1 y | Leu | Glu 175 | |
CTC Le u | AAC Asn | CCA Pro | GAC As p | ACC Thr 180 | TGC Cy s | AGG Arg | TGC Cy s | CGG Arg | AAG Ly s 185 | CTG Leu | CGA Arg | AGG Arg | TGACACATGG | 576 |
HU 223 438 Bl
CTTTTCAGAC TCAGCAGGGT GACTTGCCTC AGAGGCTATA TCCCAGTGGG GGAACAAAGG GGAGCCTGGT AAAAAACAGC CAAGCCCCCA AGACCTCAGC CCAGGCAGAA GCTGCTCTAG GACCTGGGCC TCTCAGAGGG CTCTTCTGCC ATCCCTTGTC TCCCTGAGGC CATCATCAAA CAGGACAGAG TTGGAAGAGG AGACTGGGAG GCAGCAAGAG GGGTCACATA CCAGCTCAGG GGAGAATGGA GTACTGTCTC AGTTTCTAAC CACTCTGTGC AAGTAAGCAT CTTACAACTG GCTCTTCCTC CCCTCACTAA GAAGACCCAA ACCTCTGCAT AATGGGATTT GGGCTTTGGT ACAAGAACTG TGACCCCCAA CCCTGATAAA AGAGATGGAA GGAAAAAAAA AAAAAAA (2) Információk a 6. azonosító számú szekvenciához:
(i) Szekvenciajellemzők:
(A) Hossza: 188aminosav (B) Típusa: aminosav (C) Száltípus: egyszálú (D) Topológia: lineáris (ii) Molekulatípus: protein (xi) A szekvencia leírása: 6. azonosító számú szekvencia:
636
696
756
816
876
936
993
Me t 1 | Ser | Pro | Leu | Leu 5 | Arg | Arg | Leu | Leu | Leu 10 | A1 a | A1 a | Leu | Leu | Gin 15 | Leu |
A1 a | Pro | A1 a | Gin 20 | A1 a | Pro | Val | Ser | Gin 25 | Pro | As p | A1 a | Pro | Gly 30 | Hi s | Gin |
Arg | Ly s | Val 35 | Val | Ser | Trp | I le | As p 40 | Va 1 | Tyr | Thr | Arg | A1 a 45 | Thr | Cy s | Gin |
Pro | Arg 50 | Glu | Val | Val | Val | Pro 55 | Le u | Thr | Val | Glu | Leu 60 | Me t | Gly | Thr | Val |
A1 a 65 | Ly s | Gin | Leu | Val | Pro 70 | Ser | Cys | Val | Thr | Val 75 | G1 n | Arg | Cys | Gly | Gly 80 |
Cy s | Cy s | Pro | As p | Asp 85 | Gly | Leu | Glu | Cy s | Va 1 90 | Pro | Thr | Gly | Gin | Hi s 95 | Gin |
Val | Arg | Me t | Gin 100 | I le | Leu | Me t | I le | Arg 105 | Tyr | Pro | Ser | Ser | Gin 110 | Leu | Gly |
Glu | Me t | Ser 115 | Leu | Glu | Glu | Hi s | Ser 120 | Gin | Cy s | Glu | Cys | Arg 125 | Pro | Ly s | Ly s |
Ly s | Asp 130 | Ser | A1 a | Val | Ly s | Pro 135 | As p | Ser | Pro | Arg | Pro 140 | Leu | Cy s | Pro | Arg |
Cy s 145 | Thr | Gin | Hi s | Hi s | Gin 150 | Arg | Pro | As p | Pro | Arg 155 | Thr | Cy s | Arg | Cys | Arg 160 |
Cy s | Arg | Arg | Arg | Ser 165 | Phe | Leu | Arg | Cy s | Gin 170 | Gly | Arg | Gly | Leu | Glu 175 | Leu |
Asn | Pro | Asp | Thr 180 | Cys | Arg | Cy s | Arg | Ly s 185 | Leu | Arg | Arg |
(2) Információk a 7. azonosító számú szekvenciához:
(i) Szekvenciajellemzők:
(A) Hossza: 858 bázispár (B) Típusa: nukleinsav (C) Száltípus: egyszálú (D) Topológia: lineáris (ii) Molekulatípus: DNS
HU 223 438 Β1 (ix) Jellemző:
(A) Név/Kulcs: CDS (B) Elhelyezkedés: 3.. .431 (xi) A szekvencia leírása: 7. azonosító számú szekvencia:
CC ATG AGC CCT CTG CTC CGC CGC CTG CTG CTC GCC GCA CTC CTG CAG 47
Me t Ser Pro Leu Leu Arg Arg Leu Leu Leu Alá Alá Leu Leu Gin
1 | 5 | 10 | 15 |
CTG GCC CCC GCC CAG | GCC CCT GTC TCC CAG | CCT GAT GCC CCT | GGC CAC 9 5 |
Leu Alá Pro Alá Gin | Alá Pro Val Ser Gin | Pro Asp Alá Pro | Gly His |
20 | 25 | 30 | |
CAG AGG AAA GTG GTG | TCA TGG ATA GAT GTG | TAT ACT CGC GCT | ACC TGC 143 |
Gin Arg Lys Val Val | Ser Trp Ile Asp Val | Tyr Thr Arg Alá | Thr Cys |
35 | 40 | 45 | |
CAG CCC CGG GAG GTG | GTG GTG CCC TTG ACT | GTG GAG CTC ATG | GGC ACC 191 |
Gin Pro Arg Glu Val | Val Val Pro Leu Thr | Val Glu Leu Me t | Gly Thr |
50 | 55 | 60 | |
GTG GCC AAA CAG CTG | GTG CCC AGC TGC GTG | ACT GTG CAG CGC | TGT GGT 239 |
Val Alá Lys Gin Leu | Val Pro Ser Cys Val | Thr Val Gin Arg | Cys Gly |
65 | 70 | 75 | |
GGC TGC TGC CCT GAC | GAT GGC CTG GAG TGT | GTG CCC ACT GGG | CAG CAC 287 |
Gly Cys Cys Pro Asp | Asp Gly Leu Glu Cys | Val Pro Thr Gly | Gin His |
80 | 85 | 90 | 95 |
CAA GTC CGG ATG CAG | ATC CTC ATG ATC CGG | TAC CCG AGC AGT | CAG CTG 335 |
Gin Val Arg Met Gin | Ile Leu Me t I 1 e Arg | Tyr Pro Ser Ser | Gin Leu |
100 | 105 | 110 | |
GGG GAG ATG TCC CTG | GAA GAA CAC AGC CAG | TGT GAA TGC AGA | CCT AAA 383 |
Gly Glu Me t Ser Leu | Glu Glu His Ser Gin | Cys Glu Cys Arg | Pro Lys |
115 | 120 | 125 | |
AAA AAG GAC AGT GCT | GTG AAG CCA GAT AGG | TGC CGG AAG CTG | CGA AGG 431 |
Lys Lys Asp Ser Alá | Val Lys Pro Asp Arg | Cys Arg Lys Leu | Arg Arg |
130 | 135 | 140 | |
TGACACATGG CTTTTCAGAC TCAGCAGGGT GACTTGCCTC AGAGGCTATA TCCCAGTGGG 491 | |||
GGAACAAAGG GGAGCCTGGT AAAAAACAGC CAAGCCCCCA AGACCTCAGC CCAGGCAGAA 551 | |||
GCTGCTCTAG GACCTGGGCC TCTCAGAGGG CTCTTCTGCC ATCCCTTGTC TCCCTGAGGC 611 | |||
CATCATCAAA CAGGACAGAG TTGGAAGAGG AGACTGGGAG GCAGCAAGAG GGGTCACATA 671 | |||
CCAGCTCAGG GGAGAATGGA GTACTGTCTC AGTTTCTAAC CACTCTGTGC AAGTAAGCAT 731 | |||
CTTACAACTG GCTCTTCCTC CCCTCACTAA GAAGACCCAA ACCTCTGCAT AATGGGATTT 791 | |||
GGGCTTTGGT ACAAGAACTG TGACCCCCAA CCCTGATAAA AGAGATGGAA GGAAAAAAAA 851 | |||
AAAAAAA | 858 |
(2) Információk a 8. azonosító számú szekvenciához:
(i) Szekvenciajellemzők:
(A) Hossza: 143 aminosav (B) Típusa: aminosav (C) Száltípus: egyszálú (D) Topológia: lineáris (ii) Molekulatípus: protein
HU 223 438 Β1 (xi) A szekvencia leírása: 8. azonosító számú szekvencia:
Me t 1 | Ser | Pro | Leu | Leu 5 | Arg | Arg | Leu | Leu | Leu 10 | Al a | Al a | Leu | Leu | Gin 15 | Leu |
Al a | Pro | Al a | Gin 20 | Al a | Pro | Val | Ser | Gin 25 | Pro | As p | Al a | Pro | Gly 30 | Hi s | Gin |
Arg | Ly s | Val 35 | Val | Ser | Trp | I le | As p 40 | Val | Tyr | Thr | Arg | Al a 45 | Thr | Cys | Gin |
Pro | Arg 50 | Glu | Val | Val | Val | Pro 55 | Leu | Thr | Val | Glu | Leu 60 | Me t | Gly | Thr | Val |
Al a 65 | Lys | Gin | Leu | Val | Pro 70 | Ser | Cys | Val | Thr | Val 75 | Gin | Arg | Cy s | Gly | Gly 80 |
Cys | Cy s | Pro | Asp | As p 85 | Gly | Leu | Glu | Cys | Va 1 90 | Pro | Thr | Gly | Gin | Hi s 95 | Gin |
Val | Arg | Me t | Gin 100 | I 1 e | Leu | Me t | I le | Arg 105 | Tyr | Pro | Ser | Ser | Gin 110 | Leu | Gly |
Glu | Me t | Ser 115 | Leu | G1 u | Glu | Hi s | Ser 120 | Gin | Cys | Glu | Cys | Arg 125 | Pro | Lys | Ly s |
Ly s | As p | Ser | Al a | Va 1 | Lys | Pro | As p | Arg | Cy s | Arg | Ly s | Leu | Arg | Arg |
130 135 140 (2) Információk az 9. azonosító számú szekvenciához:
(i) Szekvenciajellemzők:
(A) Hossza: 910 bázispár (B) Típusa: nukleinsav (C) Száltípus: egyszálú (D) Topológia: lineáris (ii) Molekulatípus: DNS (ix) Jellemző:
(A) Név/Kulcs: CDS (B) Elhelyezkedés: 3...305 (xi) A szekvencia leírása: 9. azonosító számú szekvencia:
CC ATG AGC CCT CTG CTC CGC CGC CTG CTG CTC GCC GCA CTC CTG CAG 47
Me t Ser Pro Leu Leu Arg Arg Leu Leu Leu Alá Alá Leu Leu Gin
10 15
CTG GCC CCC | GCC CAG | GCC CCT | GTC Val | TCC Ser | CAG Gin 25 | CCT GAT GCC CCT GGC CAC | 95 | |||||||||
Leu | Al a | Pro | Al a | Gin 20 | Al a | Pro | Pro Asp Alá | Pro | Gly 30 | Hi s | ||||||
CAG | AGG | AAA | GTG | GTG | TCA | TGG | ATA | GAT | GTG | TAT | ACT | CGC | GCT | ACC | TGC | 143 |
Gin | Arg | Ly s | Val | Val | Ser | Trp | I le | Asp | Val | Tyr | Thr | Arg | Al a | Thr | Cys | |
35 | 40 | 45 | ||||||||||||||
CAG | CCC | CGG | GAG | GTG | GTG | GTG | CCC | TTG | ACT | GTG | GAG | CTC | ATG | GGC | ACC | 191 |
Gin | Pro | Arg | Glu | Va 1 | Val | Val | Pro | Leu | Thr | Va 1 | Glu | Leu | Me t | Gly | Thr | |
50 | 55 | 60 | ||||||||||||||
GTG | GCC | AAA | CAG | CTG | GTG | CCC | AGC | TGC | GTG | ACT | GTG | CAG | CGC | TGT | GGT | 239 |
Va 1 | Al a | Ly s | Gin | Leu | Val | Pro | Ser | Cys | Va 1 | Thr | Va 1 | Gin | Arg | Cy s | Gly |
70 75
HU 223 438 Β1
GGC TGC TGC | CCT GAC | GAT Asp 85 | GGC CTG GAG TGT GTG CCC ACT | GGG CAG CAC Gly Gin His 95 | 287 | ||||||||||
Gly 80 | Cy s | Cy s | Pro | Asp | Gly | Leu | Glu | Cy s | Va 1 90 | Pro | Thr | ||||
CAA | GTC | CGG | ATG | CAG | ACC | TAAAAAAAAG GACAGTGCTG TGAAGCCAGA | 335 | ||||||||
Gin | Val | Arg | Me t | Gin | Thr | ||||||||||
100 |
CAGGGCTGCC ACTCCCCACC ACCGTCCCCA GCCCCGTTCT GTTCCGGGCT GGGACTCTGC 395
CCCCGGAGCA CCCTCCCCAG CTGACATCAC CCATCCCACT CCAGCCCCAG GCCCCTCTGC 455
CCACGCTGCA CCCAGCACCA CCAGCGCCCT GACCCCCGGA CCTGCCGCTG CCGCTGCCGA 515
CGCCGCAGCT TCCTCCGTTG CCAAGGGCGG GGCTTAGAGC TCAACCCAGA CACCTGCAGG 575
TGCCGGAAGC TGCGAAGGTG ACACATGGCT TTTCAGACTC AGCAGGGTGA CTTGCCTCAG 635
AGGCTATATC CCAGTGGGGA ACAAAGAGGA GCCTGGTAAA AAACAGCCAA GCCCCCAAGA 695
CCTCAGCCCA GGCAGAAGCT GCTCTAGGAC CTGGGCCTCT CAGAGGGCTC TTCTGCCATC 755
CCTTGTCTCC CTGAGGCCAT CATCAAACAG GACAGAGTTG GAAGAGGAGA CTGGGAGGCA 815
GCAAGAGGGG TCACATACCA GCTCAGGGGA GAATGGAGTA CTGTCTCAGT TTCTAACCAC 875
TCTGTGCAAG TAAGCATCTT ACAACTGGCT CTTCC 910 (2) Információk a 10. azonosító számú szekvenciához:
(i) Szekvenciajellemzők:
(A) Hossza: 101 aminosav (B) Típusa: aminosav (C) Száltípus: egyszálú (D) Topológia: lineáris (ii) Molekulatípus: protein (xi) A szekvencia leírása: 10. azonosító számú szekvencia:
Me t 1 | Ser | Pro | Leu | Leu 5 | Arg | Arg | Leu | Leu | Leu 10 | Al a | Al a | Leu | Leu | Gin 15 | Leu |
Al a | Pro | Al a | Gin 20 | Al a | Pro | Val | Ser | Gin 25 | Pro | Asp | Al a | Pro | Gly 30 | Hi s | Gin |
Arg | Ly s | Val 35 | Val | Ser | Trp | I le | As p 40 | Val | Tyr | Thr | Arg | Al a 45 | Thr | Cy s | Gin |
Pro | Arg 50 | Glu | Val | Va 1 | Va 1 | Pro 55 | Leu | Thr | Val | Glu | Leu 60 | Me t | Gly | Thr | Val |
Al a 65 | Ly s | Gin | Leu | Va 1 | Pro 70 | Ser | Cy s | Val | Thr | Val 75 | Gin | Arg | Cy s | Gly | Gly 80 |
Cy s | Cy s | Pro | As p | Asp 85 | Gly | Leu | Glu | Cy s | Val 90 | Pro | Thr | Gly | Gin | Hi s 95 | Gin |
Va 1 Arg Met Gin Thr 100 (2) Információk all. azonosító számú szekvenciához:
(i) Szekvenciajellemzők:
(A) Hossza: 42 bázispár (B) Típusa: nukleinsav (C) Száltípus: egyszálú (D) Topológia: lineáris (ii) Molekulatípus: oligonukleotid (xi) A szekvencia leírása: 11. azonosító számú szekvencia:
ACCACCACCT CCCTGGGCTG GCATGTGGCA CGTGCATAAA CG 42
HU 223 438 Β1 (2) Információk a 12. azonosító számú szekvenciához:
(i) Szekvenciajellemzők:
(A) Hossza: 42 bázispár (B) Típusa: nukleinsav (C) Száltípus: egyszálú (D) Topológia: lineáris (ii) Molekulatípus: oligonukleotid (xi) A szekvencia leírása: 12. azonosító számú szekvencia:
AGTTGTTTGA CCACATTGCC CATGAGTTCC ATGCTCAGAG GC 42 (2) Információk a 13. azonosító számú szekvenciához:
(i) Szekvenciajellemzők:
(A) Hossza: 38 bázispár (B) Típusa: nukleinsav (C) Száltípus: egyszálú (D) Topológia: lineáris (ii) Molekulatípus: oligonukleotid (xi) A szekvencia leírása: 13. azonosító számú szekvencia:
GATCCTGGGG CTGGAGTGGG ATGGATGATG TCAGCTGG 38 (2) Információk a 14. azonosító számú szekvenciához:
(i) Szekvenciajellemzők:
(A) Hossza: 40bázispár (B) Típusa: nukleinsav (C) Száltípus: egyszálú (D) Topológia: lineáris (ii) Molekulatípus: oligonukleotid (xi) A szekvencia leírása: 14. azonosító számú szekvencia:
GCGGGCAGAG GATCCTGGGG CTGTCTGGCC TCACAGCACT 40
Claims (36)
1. Izolált polipeptid, mely a következő tulajdonságok; közül legalább egy tulajdonsággal rendelkezik:
(i) képes a vaszkuláris endoteliális sejtek szaporodásának indukálására (ii) képes kölcsönhatásba lépni az flt-l/flk-1 receptorcsaláddal; és/vagy (iii) képes indukálni a sejtmigrációt, a sejttúlélést és/vagy az alkalikus foszfatáz intracelluláris szintjének növelését, és tartalmaz
a) egy aminosavszekvenciát, amelyet a SEQ ID No: 3 nukleotidszekvencia vagy egy olyan nukleotidszekvencia kódol, amely a SEQ ID No: 3mal vagy ennek komplementer alakjával szélsőségesen szigorú körülmények között hibridizálni képes; vagy
b) a SEQ ID No: 4 szerinti aminosavszekvenciát, vagy ennek a polipeptidnek egy csonkolt alakja, amely az (i)—(iii) tulajdonságok közül legalább egyikkel rendelkezik.
2. Az 1. igénypont szerinti izolált polipeptid, amely olyan aminosavszekvenciát tartalmaz, amelyet a SEQ ID No: 3 nukleotidszekvencia kódol.
3. Az 1. igénypont szerinti izolált polipeptid, amely olyan aminosavszekvenciát tartalmaz, amelyet a SEQ ID No: 5 nukleotidszekvencia kódol.
4. Az 1. igénypont szerinti izolált polipeptid, amely olyan aminosavszekvenciát tartalmaz, amelyet a SEQ ID No: 7 nukleotidszekvencia kódol.
5. Az 1. igénypont szerinti izolált polipeptid, amely olyan aminosavszekvenciát tartalmaz, amelyet a SEQ ID No: 9 nukleotidszekvencia kódol.
6. Az 1. igénypont szerinti izolált polipeptid, amely a SEQ ID No: 4 aminosavszekvenciát tartalmazza.
7. Az 1. igénypont szerinti izolált polipeptid, amely a SEQ ID No: 6 aminosavszekvenciát tartalmazza.
8. Az 1. igénypont szerinti izolált polipeptid, amely a SEQ ID No: 8 aminosavszekvenciát tartalmazza.
9. Az 1. igénypont szerinti izolált polipeptid, amely a SEQ ID No: 10 aminosavszekvenciát tartalmazza.
10. Az 1 -9. igénypontok bármelyike szerinti izolált polipeptid, amely humán eredetű.
11. Az 1-10. igénypontok bármelyike szerinti izolált polipeptid, amely képes indukálni az asztrogiális szaporodást.
12. Az 1-10. igénypontok bármelyike szerinti izolált polipeptid, amely képes elősegíteni a neuronok túlélését és/vagy szaporodását emlősökben.
HU 223 438 Β1
13. Izolált nukleinsavmolekula, amely a SEQ ID No: 3 nukleotidszekvenciát, vagy egy olyan nukleotidszekvenciát tartalmaz, amely a SEQ ID No: 3 nukleotidszekvenciával vagy ennek komplementer alakjával rendkívül szélsőséges körülmények között hibridizálni képes.
14. A 13. igénypont szerinti izolált nukleinsavmolekula, amely a SEQ ID No: 3 nukleotidszekvenciát tartalmazza.
15. A 13. igénypont szerinti izolált nukleinsavmolekula, amely a SEQ ID No: 5 nukleotidszekvenciát tartalmazza.
16. A 13. igénypont szerinti izolált nukleinsavmolekula, amely a SEQ ID No: 7 nukleotidszekvenciát tartalmazza.
17. A 13. igénypont szerinti izolált nukleinsavmolekula, amely a SEQ ID No: 9 nukleotidszekvenciát tartalmazza.
18. A 13. igénypont szerinti izolált nukleinsavmolekula, amely a SEQ ID No: 4 szerinti aminosavszekvenciával rendelkező polipeptidet vagy ennek csonkolt alakját kódolja, amely a következő tulajdonságok közül legalább egy egyikkel rendelkezik:
(i) képes a vaszkuláris endoteliális sejtek szaporodásának indukálására (ii) képes kölcsönhatásba lépni az flt-l/flk-1 receptorcsaláddal; és/vagy (iii) képes indukálni a sejtmigrációt, a sejttúlélést és/vagy az alkalikus foszfatáz intracelluláris szintjének növelését.
19. A 13. igénypont szerinti izolált nukleinsavmolekula, amely egy, a SEQ ID No: 4 aminosavszekvenciával rendelkező polipeptidet kódol.
20. A 13. igénypont szerinti izolált nukleinsavmolekula, amely egy, a SEQ ID No: 6 aminosavszekvenciával rendelkező polipeptidet kódol.
21. A 13. igénypont szerinti izolált nukleinsavmolekula, amely egy, a SEQ ID No: 8 aminosavszekvenciával rendelkező polipeptidet kódol.
22. A 13. igénypont szerinti izolált nukleinsavmolekula, amely egy, a SEQ ID No: 10 aminosavszekvenciával rendelkező polipeptidet kódol.
23. A 13-22. igénypontok bármelyike szerinti izolált nukleinsavmolekula, amely a következő tulajdonságok közül legalább egy tulajdonsággal rendelkező polipeptidet kódol:
(i) képes a vaszkuláris endoteliális sejtek szaporodásának indukálására (ii) képes kölcsönhatásba lépni az fkt-l/flk-1 receptorcsaláddal; és/vagy (iii) képes indukálni a sejtmigrációt, a sejttúlélést és/vagy az alkalikus foszfatáz intracelluláris szintjének növelését, vagy ennek egy csonkolt alakját kódolja, amely az (i)—(iii) tulajdonságok közül legalább egyikkel rendelkezik.
24. A 23. igénypont szerinti izolált nukleinsavmolekula, amely egy olyan polipeptidet kódol, amely továbbá képes az asztrogliális szaporodás indukálására.
25. A 23. igénypont szerinti izolált nukleinsavmolekula, amely egy olyan polipeptidet kódol, amely továbbá képes a neuronok túlélésének és/vagy szaporodásának elősegítésére emlősökben.
26. A 13-25. igénypontok bármelyike szerinti izolált nukleinsavmolekula vagy az általa kódolt polipeptid, ahol a molekula vagy a polipeptid humán eredetű.
27. A 13-26. igénypontok bármelyike szerinti izolált nukleinsavmolekula által kódolt polipeptid elleni izolált semlegesítő antitest.
28. Az 1-10. igénypontok bármelyike szerinti polipeptid elleni izolált semlegesítő antitest.
29. Eljárás az 1-10. igénypontok bármelyike szerinti polipeptid előállítására, azzal jellemezve, hogy alkalmas gazdaszervezetben, amelyet a polipeptid szintézisének megfelelő körülmények között tenyésztünk, kifejezünk egy nukleinsavmolekulát, amely az 1-10. igénypontok bármelyike szerinti polipeptidet kódolja.
30. Antiszensz molekula, amely hibridizál egy, a 13-26. igénypontok bármelyike szerinti nukleinsavmolekulához vagy ennek komplementeréhez.
31. Készítmény, amely egy, az 1-10. igénypontok bármelyike szerinti polipeptidet, egy vagy több gyógyászatilag elfogadható vivőanyagot és/vagy hígítót tartalmaz.
32. A 13-26. igénypontok bármelyike szerinti nukleinsavmolekulát tartalmazó gazdasejt.
33. Egy olyan polipeptid alkalmazása, amely a következő tulajdonságok közül legalább egy tulajdonsággal rendelkezik:
(i) képes a vaszkuláris endoteliális sejtek szaporodásának indukálására (ii) képes kölcsönhatásba lépni az fkt-l/flk-1 receptorcsaláddal; és/vagy (iii) képes indukálni a sejtmigrációt, a sejttúlélést; és/vagy az alkalikus foszfatáz intracelluláris szintjének növekedését, és tartalmaz
a) egy aminosavszekvenciát, amelyet a SEQ ID No: 1, 3, 5, 7 vagy 9 nukleotidszekvencia, vagy egy olyan nukleotidszekvencia kódol, amely a SEQ ID No: 1, 3, 5, 7 vagy 9-cel, vagy ennek komplementer alakjával szélsőségesen szigorú körülmények között hibridizálni képes; vagy
b) a SEQ ID No: 2,4, 6, 8 vagy 10 szerinti aminosavszekvenciát, vagy e polipeptid csonkolt alakjának, amely az (í)—(iii) tulajdonságok közül legalább egyikkel rendelkezik, alkalmazása gyógyszer előállítására, amely az asztrogliális szaporodást indukálja, emlősben.
34. A 33. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a polipeptid egy olyan aminosavszekvenciát tartalmaz, amelyet a SEQ ID No: 3; SEQ ID No: 5; SEQ ID No:
7 vagy a SEQ ID No: 9 nukleotidszekvencia kódol.
35. A 33. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a polipeptid a SEQ ID No: 4; SEQ ID No: 6; SEQ ID No:
8 vagy a SEQ ID No: 10 aminosavszekvenciát tartalmazza.
36. A 33-35. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, ahol a polipeptid vagy az azt kódoló nukleotidszekvencia humán eredetű.
HU 223 438 Β1
Int. Cl.7: C 12 N 15/12
52/1
HU 223 438 Β1
Int. Cl.7: C 12 N 15/12
1 TCGGCCTCC GAAACC ATG AAC TTT CTG
Met Asn Phe Leu
50 CTT GCC TTG CTG CTC TAC CTC CAC Leu Alá Leu Leu Leu Tyr Leu His
1.(i) ábra
HU 223 438 Β1
Int. Cl.7: C 12 N 15/12
52/3
CTG TCT TGG GTG CAT TGG AGC 49
Leu Ser Trp Val His Trp Ser
5 10
CAT GCC AAG TGG TCC CAG GCT GCA 97
I • His Alá Lys Trp Ser Gin Alá Alá 20 25
AAT CAT CAC GAA GTG GTG AAG TTC 145
1.(ii) ábra
HU 223 438 Β1
Int Cl.7: C 12 N 15/12
52/4
160
530 TGC AAG GCG AGG CAG CTT GAG TTA Cys Lys Alá Arg Gin Leu Glu Leu
175
578 AAG CCG AGG CGG TGAGCCGGGC AGGAG Lys Pro Arg Arg
190
630 GAACCAGATC TCTCACCAGG
1.(iii) ábra
HU 223 438 BI
Int. Cl.7: C 12 N 15/12
52/5
CCA AAG AAA GAT AGA GCA AGA CAA 433
GAAGG AGCCTCCCTC AGCGTTTCGG 629
649
1. (iv) ábra
HU 223 438 Β1
Int. Cl.7: C 12 N 15/12
52/6
HU 223 438 BI
Int. Cl.7: C 12 N 15/12
52/7
1 CC ATG AGC CCT CTG CTC CGC CGC I
Met Ser Pro Leu Leu Arg Arg
1 5
48 CTG GCC CCC GCC CAG GCC CCT GTC Leu Alá Pro Alá Gin Alá Pro Val
96 CAG AGG AAA GTG GTG TCA TGG ATA Gin Arg Lys Val Val Ser Trp He
144 CAG CCC CGG GAG GTG GTG GTG CCC · Gin Pro Arg Glu Val Val Val Pro
50 55
192 GTG GCC AAA CAG CTG GTG CCC AGC Val Alá Lys Gin Leu Val Pro Ser
65 70
240 GGC TGC TGC CCT GAC GAT GGC CTG Gly Cys Cys Pro Asp Asp Gly Leu
80 85
288 CAA GTC CGG ATG CAG ATC CTC ATG Gin Val Arg Met Gin Ile Leu Met
100
336 GGG GAG ATG TCC CTG GAA GAA CAC Gly Glu Met Ser Leu Glu Glu His
115
2.(i) ábra
HU 223 438 Β1
Int. Cl.7: C 12 N 15/12
52/8
CTG CTG CTC GCC GCA CTC CTG CAG 47
Leu Leu Leu Alá Alá Leu Leu Gin
10 15
TCC CAG CCT GAT GCC CCT GGC CAC 95
Ser Gin Pro Asp Alá Pro Gly His
GAT GTG TAT ACT CGC Asp Val Tyr Thr Arg
TTG ACT GTG GAG CTC Leu Thr Val Glu Leu
TGC GTG ACT GTG CAG Cys Val Thr Val Gin
GAG TGT GTG CCC ACT Glu Cys Val Pro Thr 90
ATC CGG TAC CCG AGC Ile Arg Tyr Pro Ser
105
AGC CAG TGT GAA TGC Ser Gin Cys Glu Cys 120
GCT ACC TGC 143 Alá Thr Cys
ATG GGC ACC 191
Met Gly Thr
CGC TGT GGT 239
Arg Cys Gly
GGG CAG CAC 287
Gly Gin His
AGT CAG CTG 335
Ser Gin Leu
110
AGA CCT AAA 383
Arg Pro Lys
125
2.(ii) ábra
HU 223 438 Β1
Int. Cl.7: C 12 N 15/12
52/9
160 165
528 GCC CAC GCT GCA CCC AGC ACC ACC Alá His Alá Alá Pro Ser Thr Thr
180
576 GCT GCC GCT GCC GAC GCC GCA GCT Alá Alá Alá Alá Asp Alá Alá Alá
195
2. (iii) ábra
HU 223 438 Β1
Int. Cl.7: C 12 N 15/12
52/10
GAC AGG GCT GCC ACT CCC CAC CAC 431
Asp Arg Alá Alá Thr Pro His His
140
GGC TGG GAC TCT GCC CCC GGA GCA 479
2. (iv) ábra
HU 223 438 Β1 Int. Cl.’: C 12 N 15/12
52/11
AGAGCTCAAC CCAGACACCT GCAGGTGCCG
GACTCAGCAG GGTGACTTGC CTCAGAGGCT
GGTAAAAAAC AGCCAAGCCC CCAAGACCTC GCCTCTCAGA GGGCTCTTCT GCCATCCCTT j GAGTTGGAAG AGGAGACTGG GAGGCAGCAA
GGAGTACTGT CTCAGTTTCT AACCACTCTG
CTCCCCTCAC TAAGAAGACC CAAACCTCTG
CTGTGACCCC CAACCCTGAT AAAAGAGATG
2.(v) ábra
HU 223 438 Β1
Int. Cl.7: C 12 N 15/12
52/12
GAAGCTGCGA AGGTGACACA TGGCTTTTCA 684
ATATCCCAGT GGGGGAACAA AGGGGAGCCT 744
AGCCCAGGCA GAAGCTGCTC TAGGACCTGG 804
GTCTCCCTGA GGCCATCATC AAACAGGACA 864
GAGGGGTCAC ATACCAGCTC AGGGGAGAAT 924
TGCAAGTAAG CATCTTACAA CTGGCTCTTC 984
CATAATGGGA TTTGGGCTTT GGTACAAGAA 1044
GAAGGAAAAA AAAAAAAAAA 1094
2. (vi) ábra
HU 223 438 Β1
Int. Cl.7: C 12 N 15/12
52/13
HU 223 438 Β1
Int. Cl.7: C 12 N 15/12
52/14
VEGF HUMÁN VEGF HUMÁN VASZKULÁRIS ENDOTÉLIÁLIS (VASZKULÁRIS 215 AA.
HOSSZ = 215
PONTSZÁM= 181 (92,4 BIT'), AZONOSSÁGOK = 33/75 (44%),
VÁRT · = 6,46-20, POZITÍVOK = 48/75
AZONOSSÁGOK = 12/19 (63%), POZITÍVOK = 16/19
KÉRDÉS: 110 QLGEMSLEEHSQCECRPKK 128 ++GEMS +H+ CECRPKK
TÁRGY’: 116 HIGEMSFLQHNKCECRPKK 134
PONTSZÁM= 72 (36,8 BIT ) , . VÁRT = 0.0046,
AZONOSSÁGOK = 14/21 (66%), POZITÍVOK= 15/21
KÉRDÉS: 202 RCQGRGLELNPDTCRCRKLRR 222
RC +R LELN TCRC K RR
TÁRGY: 195 RCKARQLELNERTCRCDKPRR 215
PONTSZÁM= 46 (23,5 BIT, ) , VÁRT. =47.,
AZONOSSÁGOK = 6/10 (60%), POZITÍVOK = 9/10
KÉRDÉS: 187 DPRTCRCRCR 196
DP+TC+C C+
TÁRGY: 181 DPQTCKCSCK 190
3.(i) ábra
HU 223 438 Β1
Int. Cl.7: C 12 N 15/12
52/15
NÖVEKEDÉSI FAKTOR PREKURZOR (VEGF)
P = 6,4e-20 (64%)
MGTVAKQLVPSCVTVQRCGGCCPDDGLECV 90 + PSCV + RCGGCC D+GLECV
PDEIEYIFKPSCVPLMRCGGCCNDEGLECV 95
POISSON P(2) = 9rle-12 (84%)
POISSON P(3) = 3,6e-18 (71%)
POISSON P(4) = 7,3e-10 (90%)
3. (ii) ábra
HU 223 438 Bl
Int. Cl.7: C 12 N 15/12
52/16
HU 223 438 Β1
Int. Cl.7: C 12 N 15/12
52/17
Gap súlyozás Hossz súlyozás Minőség
Arány
Százalékos hasonlóság
3,00 Átlagos illeszkedés 0,100 Átlagos eltérés
Ιθθζ 9 Hossz:
0,175 Gapok
Százalékos 69,703 azonosság:
1,000 -0,900 739 30
69,703
2 8 ATGAGCCCTCTGCTCCGCCGCCTGC mi i mm i 11
17 ATGAACTTTCTGCT.....GTCT. .
68 TGCAGCTGGCCCCCGCCCAGGCCCC
III III II I III III
57 TGCTGCTCTACCTCCACCATGCCAA
118 CACCAGAGGA............. ..
Illll
106 AGAAGGAGGAGGGCAGAATCATCAC
140 GTGTATACTCGC.GCTACCTGCCAG ii ni iii mi min
152 GTCTATCAGCGCAGCTA.CTGCCAT
194 T. . . . GA.....CTGTGGAGCTCAT
I II III III II
201 TCCAGGAGTACCCTGATGAGATCGA
235 CCCAGCTGCGTGACTGTGCAGCGCT
II III III I II III I
239 CCATCCTGTGTGCCCCTGATGCGAT
285 CCTGGAGTGTGTGCCCACTGGGCAG
1111111 i 11!111111111 I II
289 CCTGGAGTGTGTGCCCACTGAGGAG
4.(i) ábra
HU 223 438 Bl
Int. Cl.7: C 12 N 15/12
HU 223 438 BI
Int. Cl.7: C 12 N 15/12
52/19
330 CCTCATGATCCGGTACC I
IMII I
339 GGATCAAACCTCA C
369 GTCCCTGGAAGAACACAGCCAGTGT
III II Ilii Ilin.
376 GAGCTTCCTACAGCACAACAAATGT
419 GTGCTGTGAAGCCAGACAGGGCTGC
I III lllll I
423 G........AGCAAGACAAG.....
469 CGTTCTGTTCCGGGCTGGGACTCTG '
I II II III II
443 ...TGTGGGCCTTGCTCAGA.....
519 CATCACCCATCCCACTCCAGCCCCA
468 ......................... ·
569 GC..........ACCACCAGCGCCC
II III
469 GCATTTGTTTGTACAA.........
609 TGCCGACGCCGCAGCTTCCTCCGTT
Ilii I III II Ilii
509 TG. CAAAAACACAGACTC. . GCGTT
657 AACCCAGACACCTGCAGGTGCCGGA
III I
554 AACGAACGTACTTGCAGATGTGACA
4. (iii) ábra
HU 223 438 Β1
Int. Cl.7: C 12 N 15/12
52/20
CGAGCAGTCAGC . . . TGGGGGAGAT
I II I Ilii I II mii
CAAG. . GCCAGCACATAGGAGAGAT
GAATGCAGACCTAAAAAAAAGGACA
Ilii Ilii III III II II I
GAATGCAGACC. . .AAAGAAAGATA
CACTCCCCACCACCGTCCCCAGCCC
I Ilii
...........AAAATCCC......
CCCCCGGAGCACCCTCCCCAGCTGA
Ilin I
...GCGGAGAA..............
GGCCCCTCTGCCCACGCTGCACCCA
I
........................A
TGACCCCCGGACCTGCCGCTGCCGC
II II I III II II I . GATCCGCAGACGTGTAAATGTTCC
GCCAAGGGCGGGGC..TTAGAGCTC
II Ilii III I III I
GC..AAGGCGAGGCAGCTTGAGTTA
AGCTGCGAAGGTGA
AGCCGAGGCGGTGA
4. (iv) ábra
368
375
418
422
468
442
518
467
568
468
608
508
656
553
695
592
HU 223 438 Bl
Int. Cl.7: C 12 N 15/12
52/21
HU 223 438 Β! Int.Cl.’: C 12N 15/12
52/22
165SOMSQ.MSF.msf MSF:687 Type: D 1995. június 20, kedd Check:3140
VEGF165 SOMI75
SOM175-e6
SOM175-e6&7
SOM175-e4
ATGAACTTTCTGCTGTCTTGGGTG
ATGAGCCCTCTGCTCCGCCGCCTG
ATGAGCCCTCTGCTCCGCCGCCTG
ATGAGCCCTCTGCTCCGCCGCCTG
ATGAGCCCTCTGCTCCGCCGCCTG
VEGF165 SOMI75
SOM175-e6
SOM175-e6&7
SOM175-e4
CACCCATGGCAGAAGGAGGAGGGC
TGCCCCTGGCCACCAGAGGAAAGT
TGCCCCTGGCCACCAGAGGAAAGT
TGCCCCTGGCCACCAGAGGAAAGT
TGCCCCTGGCCACCAGAGGAAAGT
VEGF165 SOMI75
SOM175-e6
SOM175-e6&7
SOM175-e4
161
CCAATCGAGACCCTGGTGGACATC GTGGTGGTGCCCTTGACTG.TGGA GTGGTGGTGCCCTTGACTG.TGGA GTGGTGGTGCCCTTGACTG.TGGA GTGGTGGTGCCCTTGACTG.TGGA
VEGF165
SOM175
SOM175-e6
SOM175-e6&7
SOM175-e4
241
GATGCGATGCGGGGGCTGCTGCAA
GCAGCGCTGTGGTGGCTGCTGCCC
GCAGCGCTGTGGTGGCTGCTGCCC
GCAGCGCTGTGGTGGCTGCTGCCC
GCAGCGCTGTGGTGGCTGCTGCCC
5.(i) ábra
HU 223 438 Β1
Int. Cl.7: C 12 N 15/12
52/23
CATTGGAGCCTTGCCTTGCTGCTCTACC
CTGCTCGCCGCACTCCTGCAGCTGGCCC
CTGCTCGCCGCACTCCTGCAGCTGGCCC
CTGCTCGCCGCACTCCTGCAGCTGGCCC
CTGCTCGCCGCACTCCTGCAGCTGGCCC
AGAATCATCACGAAGTGGTGAAGTTCAT
GGTGTCATGGATAGATGTGTATACTCGC
GGTGTCATGGATAGATGTGTATACTCGC
GGTGTCATGGATAGATGTGTATACTCGC
GGTGTCATGGATAGATGTGTATACTCGC
TTCCAGGAGTACCCTGATGAGATCGAGT GCTCATGGGCACCGTGGCCAAAC..AGC GCTCATGGGCACCGTGGCCAAAC..AGC GCTCATGGGCACCGTGGCCAAAC..AGC GCTCATGGGCACCGTGGCCAAAC..AGC
TGACGAGGGCCTGGAGTGTGTGCCCACT
TGACGATGGCCTGGAGTGTGTGCCCACT
TGACGATGGCCTGGAGTGTGTGCCCACT
TGACGATGGCCTGGAGTGTGTGCCCACT
TGACGATGGCCTGGAGTGTGTGCCCACT
5.(ii) ábra
HU 223 438 Β1
Int. Cl.7: C 12 N 15/12
52/24
TCCACCATGCCAAGTGGTCCCAGGCTG. CCGCCCAGGCCCCTGTCTCCCAGCCTGA CCGCCCAGGCCCCTGTCTCCCAGCCTGA CCGCCCAGGCCCCTGTCTCCCAGCCTGA CCGCCCAGGCCCCTGTCTCCCAGCCTGA
160
GGATGTCTATCAGCGCAGCTACTGCCAT
G.....CTACCTGC. CAGCC. CCGGGAG
G.....CTACCTGC . CAGCC . CCGGGAG
G.....CTACCTGC. CAGCC. CCGGGAG
G.....CTACCTGC. CAGCC. CCGGGAG
240
ACATCTTCAAGCCATCCTGTGTGCCCCT
TGGTGCCCAG......CTGCGTGACTGT
TGGTGCCCAG......CTGCGTGACTGT
TGGTGCCCAG......CTGCGTGACTGT
TGGTGCCCAG......CTGCGTGACTGT
320
GAGGAGTCCAACATCACCATGCAGATTA GGGCAGCACCAAGTCCGGATGCAGATCC GGGCAGCACCAAGTCCGGATGCAGATCC GGGCAGCACCAAGTCCGGATGCAGATCC GGGCAGCACCAAGTCCGGATGCAGA. . .
5. (iii) ábra
HU 223 438 B1
Int. Cl.7: C 12 N 15/12
52/25
VEGF165 SOMI 7 5
SOMl75-e6
SOM175-e6&7
SOMl75-e4
VEGF165 SOMI 7 5
SOM175-e6
SOM175-e6&7
SOM175-e4
VEGF165 SOMI 7 5
SOMl75-e6
SOM175-e6&7
SOMl75-e4
VEGF165 SOMI75
SOM175-E6
SOM175-e6&7
SOM175-e4
VEGF165
SOM175
SOM175-e6
SOM175-e6&7
SOM175-e4
321
TGCGGATCAAACCTCACCAAGGCC TCATGATCCGG...TACCCGAGCA TCATGATCCGG...TACCCGAGCA TCATGATCCGG...TACCCGAGCA
401
AAGAAAGATAG........AGCAA
AAAAAGGACAGTGCTGTGAAGCCA
AAAAAGGACAGTGCTGTGAAGCCA
AAAAAGGACAGTGCTGTGAAGCCA
AAAAAGGACAGTGCTGTGAAGCCA
481
...........AAGCA........
CTCTGCCCCCGGAGCACCCTCCCC
CTCTGCCCCCGGAGCACCCTCCCC
561
A...............GATCCGCA
GCACCACCAGCGCCCTGACCCCCG
GCACCACCAGCGCCCTGACCCCCG
GCACCACCAGCGCCCTGACCCCCG
641
TTGAGTTAAACGAACGTACTTGCA
TAGAGCTCAACCCAGACACCTGCA
TAGAGCTCAACCCAGACACCTGCA
TAGAGCTCAACCCAGACACCTGCA
5.(iv) ábra
HU 223 438 Β1
Int. Cl.7: C 12 N 15/12
52/26
AGCACATAGGAGAGATGAGCTTCCTACA
GTCAGCTGGGGGAGATGTCCCTGGAAGA
GTCAGCTGGGGGAGATGTCCCTGGAAGA
GTCAGCTGGGGGAGATGTCCCTGGAAGA
GACAAGAA....AATCCCTGTGG.....
GACAGGGCTGCCACTCCCCACCACCGTC
GATAG.......................
GATAG.......................
GACAGGGCTGCCACTCCCCACCACCGTC
AGCTGACATCACCCATCCCACTCCAGCC ..........................cc
AGCTGACATCACCCATCCCACTCCAGCC
GACGTGTAAATGTTCCTGCAAAAAC. AC GACCTGCCGCTGCCGCTGCCGACGCCGC GACCTGCCGCTGCCGCTGCCGACGCCGC
GACCTGCCGCTGCCGCTGCCGACGCCGC
687
GATGTGACAAGCCGAGGCGGTGA GGTGCCGGAAGCTGCGAAGGTGA GGTGCCGGAAGCTGCGAAGGTGA . GTGCCGGAAGCTGCGAAGGTGA GGTGCCGGAAGCTGCGAAGGTGA
5. (v) ábra
HU 223 438 Bl
Int. Cl.7: C 12 N 15/12
52/27
400
GCACAACAAATGTGAATGCAGACC. . .A ACACAGCCAGTGTGAATGCAGACCTAAA ACACAGCCAGTGTGAATGCAGACCTAAA ACACAGCCAGTGTGAATGCAGACCTAAA ......................CCTAAA
480
.........GCCTTGCTCAGAGCGGAGA
CCCAGCCCCGTTCTGTTCCGGGCTGGGA
CCCAGCCCCGTTCTGTTCCGGGCTGGGA
560
.........TTTGTT.....TGTAC. .A
CCAGGCCCCTCTGCCCACGCTGCACCCA
CCAGGCCCCTCTGCCCACGCTGCACCCA
CCAGGCCCCTCTGCCCACGCTGCACCCA
640
AGACTCG. . CGTTGCAAGGCGAGGCAGC AGCTTCCTCCGTTGCCAAGGGCGGGGCT AGCTTCCTCCGTTGCCAAGGGCGGGGCT
AGCTTCCTCCGTTGCCAAGGGCGGGGCT
5.(vi) ábra
HU 223 438 Β1
Int. Cl.7: C 12 N 15/12
52/28
6.(i) ábra cn
KJ
KJ to
6.(ii) ábra
52/30
6.(iii) ábra cn
KJ •X.
ω
CM CM rfj · 0 · co ·
5 · tó 0 g tó g <
co ·
5 · « q >
5 tó CO tó
2 tó
Q 0 tó g ΪΗ J tó tó tó < < tó tó Q Q tó tó >
CO
O tó
HU 223 438 Bl Int. Cl7; C 12 N 15/12 tó tó
Q < 0 > tó co u co tó
W ►J rií
O <
w < q < 0 < tó < < tó tó tó < <
tó <
< · 0 · co · 2 .· tó 0 tó tó tó <
•j tó >h o<
tó tó tó tó
2 tó
52/29
<4 tó 0 2 co ω w tó tó
tó E-< 0 co CO tó 0 < tó *í 0 tó tó tó tó tó
Q 0 tó g tó
tó tó 2 co
0 > tó E*· H tó
Ο» tó tó W tó tó > ’ tó ’ tó * g tó
Ό •H >
:O
K
Sin r-irtó rj 0 2 W O 5 co τ5 •<-C >
:O in μ ιοιη tó rH O g W O > CO in
KO
Ό
-H >
:O
M in
ΗΓ tó *-i 0 2 W O > co
Sin rCC tó d 0 2 w o > co g tó
«s >
V£)U J
ΗΓtó *-í 0 g w o > co
101 r-irtó
O g tó O > co '3
N cn cn o
x:
£m tó í 0 2 w o > co
0 tó 'p
M cn w o x: Jtn «-ΐΓ* tó H 0 g w o > co io'
HU 223 438 Β1
Int. Cl.7: C 12 N 15/12
52/30 o in <£> in t-1 in CM cH t—1 r-1 ω ω £ £ w ω
0 Οι ο in r* r—I t—I
Eh <y 0
Ch o t-H CM o in kő m o rr- r* t—I CM cn cm r-l CM
04 04
Q 04
U) 0 £ £ W W 0 0
Q 0
04 04
H £ κ o* ex ω 0 0 CX 04 £ > 04 · tó tó Η H £ £ £ J
S H £ 5 tó 0 £ H 04 3 tó 0
Η H ex CX| £ £
A
Eh £
Eh
H
Q • (ii) ábra
ΙΟ
0 0 tó tó • tó
W £ κ ex
Eh £
£ 0 CX 04 0 < 0 Q 0 04 w ex < ω £ >
H E-< 04 04 > > O 0 W W A J 0 0
0 04 > 0
04 tó £ 04 W & CX 04
CX 0 < 0 tó CX
HU 223 438 Β1
Int. Cl.7: C 12 N 15/12
52/31
(0
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
AUPN1457A AUPN145795A0 (en) | 1995-03-02 | 1995-03-02 | A novel growth factor and a genetic sequence encoding same |
AUPN6647A AUPN664795A0 (en) | 1995-11-20 | 1995-11-20 | A novel growth factor and a genetic sequence encoding same |
AUPN7274A AUPN727495A0 (en) | 1995-12-22 | 1995-12-22 | A novel growth factor and a genetic sequence encoding same-II |
PCT/AU1996/000094 WO1996027007A1 (en) | 1995-03-02 | 1996-02-22 | A novel growth factor and a genetic sequence encoding same |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
HUP9800377A1 HUP9800377A1 (hu) | 1998-06-29 |
HUP9800377A3 HUP9800377A3 (en) | 2000-12-28 |
HU223438B1 true HU223438B1 (hu) | 2004-07-28 |
Family
ID=27157841
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
HU9800377A HU223438B1 (hu) | 1995-03-02 | 1996-02-22 | Új növekedési faktor és ezt kódoló génszekvencia |
Country Status (16)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20070135344A1 (hu) |
EP (1) | EP0815221B1 (hu) |
JP (2) | JPH11500139A (hu) |
KR (1) | KR100414615B1 (hu) |
CN (1) | CN1194090C (hu) |
AT (1) | ATE252600T1 (hu) |
BR (1) | BR9607628A (hu) |
CA (1) | CA2214439C (hu) |
DE (1) | DE69630442T2 (hu) |
ES (1) | ES2206558T3 (hu) |
FI (1) | FI120153B (hu) |
HK (1) | HK1002963A1 (hu) |
HU (1) | HU223438B1 (hu) |
NO (1) | NO320839B1 (hu) |
NZ (2) | NZ301611A (hu) |
WO (1) | WO1996027007A1 (hu) |
Families Citing this family (19)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5928939A (en) | 1995-03-01 | 1999-07-27 | Ludwig Institute For Cancer Research | Vascular endothelial growth factor-b and dna coding therefor |
WO1996039421A1 (en) * | 1995-06-06 | 1996-12-12 | Human Genome Sciences, Inc. | Human vascular endothelial growth factor 3 |
PT848755E (pt) | 1995-09-08 | 2003-12-31 | Genentech Inc | Proteina relacionada com o vegf |
DE69634412T3 (de) | 1995-09-29 | 2013-07-04 | Vegenics Pty Ltd | Regulierte gene und ihre verwendungen |
AU1116297A (en) | 1995-11-08 | 1997-05-29 | Immunex Corporation | Flk-1 binding protein |
US6994989B1 (en) | 1995-11-08 | 2006-02-07 | Immunex Corp. | FLK-1 binding proteins |
DK0956339T3 (da) | 1996-08-23 | 2006-01-30 | Licentia Oy | Rekombinant vaskulær endotelcellevækstfaktor D (VEGF-D) |
JP2001524828A (ja) * | 1997-04-25 | 2001-12-04 | コラテラル・セラピューティクス | 切断型vegf関連蛋白質 |
JP2002502608A (ja) | 1998-02-06 | 2002-01-29 | コラテラル・セラピューティックス・インコーポレイテッド | 血管新生促進因子である血管内皮細胞成長因子:vegfの変異体 |
ATE451389T1 (de) | 1998-11-10 | 2009-12-15 | Ludwig Inst Cancer Res | Von blutplättchen abstammender wachstumsfaktor d, dafür kodierende dns und deren verwendungen |
US7105481B2 (en) | 1998-11-10 | 2006-09-12 | Ludwig Institute For Cancer Research | Method for stimulating connective tissue growth or wound healing |
JP4739526B2 (ja) | 1998-12-07 | 2011-08-03 | ザイモジェネティクス, インコーポレイテッド | 成長因子相同体zvegf3 |
US6783953B1 (en) | 1998-12-22 | 2004-08-31 | Janssen Pharmaceutica N.V. | Vascular endothelial growth factor-X |
AUPQ568100A0 (en) * | 2000-02-16 | 2000-03-09 | Amrad Operations Pty. Limited | A method for producing recombinant molecules |
US7026462B2 (en) | 2000-12-07 | 2006-04-11 | Sangamo Biosciences, Inc. | Regulation of angiogenesis with zinc finger proteins |
US7067317B2 (en) | 2000-12-07 | 2006-06-27 | Sangamo Biosciences, Inc. | Regulation of angiogenesis with zinc finger proteins |
US7981863B2 (en) * | 2001-09-19 | 2011-07-19 | Neuronova Ab | Treatment of Parkinson's disease with PDGF |
US7358085B2 (en) | 2005-02-28 | 2008-04-15 | Sangamo Biosciences, Inc. | Anti-angiogenic methods and compositions |
CN100448892C (zh) * | 2006-08-02 | 2009-01-07 | 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 | 抗肿瘤血管内皮生长因子受体vegf-r2抗原及其编码基因与应用 |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5073492A (en) * | 1987-01-09 | 1991-12-17 | The Johns Hopkins University | Synergistic composition for endothelial cell growth |
US5332671A (en) * | 1989-05-12 | 1994-07-26 | Genetech, Inc. | Production of vascular endothelial cell growth factor and DNA encoding same |
US5219739A (en) * | 1989-07-27 | 1993-06-15 | Scios Nova Inc. | DNA sequences encoding bVEGF120 and hVEGF121 and methods for the production of bovine and human vascular endothelial cell growth factors, bVEGF120 and hVEGF121 |
US5194596A (en) * | 1989-07-27 | 1993-03-16 | California Biotechnology Inc. | Production of vascular endothelial cell growth factor |
US5338671A (en) * | 1992-10-07 | 1994-08-16 | Eastman Kodak Company | DNA amplification with thermostable DNA polymerase and polymerase inhibiting antibody |
ES2249762T3 (es) * | 1994-03-08 | 2006-04-01 | Human Genome Sciences, Inc. | Factor de crecimiento del endotelio vascular 2. |
US5607918A (en) * | 1995-03-01 | 1997-03-04 | Ludwig Institute For Cancer Research | Vascular endothelial growth factor-B and DNA coding therefor |
US5928939A (en) * | 1995-03-01 | 1999-07-27 | Ludwig Institute For Cancer Research | Vascular endothelial growth factor-b and dna coding therefor |
-
1996
- 1996-02-22 HU HU9800377A patent/HU223438B1/hu active IP Right Grant
- 1996-02-22 NZ NZ301611A patent/NZ301611A/en not_active IP Right Cessation
- 1996-02-22 CN CNB961930357A patent/CN1194090C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1996-02-22 AT AT96902810T patent/ATE252600T1/de active
- 1996-02-22 EP EP96902810A patent/EP0815221B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-02-22 CA CA002214439A patent/CA2214439C/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-02-22 WO PCT/AU1996/000094 patent/WO1996027007A1/en active IP Right Grant
- 1996-02-22 DE DE69630442T patent/DE69630442T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-02-22 BR BR9607628-3A patent/BR9607628A/pt not_active Application Discontinuation
- 1996-02-22 KR KR1019970706109A patent/KR100414615B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1996-02-22 NZ NZ337634A patent/NZ337634A/en not_active IP Right Cessation
- 1996-02-22 JP JP8525903A patent/JPH11500139A/ja not_active Withdrawn
- 1996-02-22 ES ES96902810T patent/ES2206558T3/es not_active Expired - Lifetime
-
1997
- 1997-09-01 FI FI973571A patent/FI120153B/fi not_active IP Right Cessation
- 1997-09-02 NO NO19974035A patent/NO320839B1/no not_active IP Right Cessation
-
1998
- 1998-03-13 HK HK98102112A patent/HK1002963A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2000
- 2000-06-14 JP JP2000178462A patent/JP3683778B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2006
- 2006-11-20 US US11/602,055 patent/US20070135344A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
HUP9800377A3 (en) | 2000-12-28 |
BR9607628A (pt) | 1999-11-30 |
FI973571A0 (fi) | 1997-09-01 |
DE69630442D1 (de) | 2003-11-27 |
HK1002963A1 (en) | 1998-09-30 |
DE69630442T2 (de) | 2004-08-19 |
WO1996027007A1 (en) | 1996-09-06 |
CN1224464A (zh) | 1999-07-28 |
JPH11500139A (ja) | 1999-01-06 |
NZ301611A (en) | 2000-02-28 |
JP2001037493A (ja) | 2001-02-13 |
NO974035L (no) | 1997-11-03 |
KR100414615B1 (ko) | 2004-05-27 |
ATE252600T1 (de) | 2003-11-15 |
NO320839B1 (no) | 2006-01-30 |
KR19980702702A (ko) | 1998-08-05 |
FI120153B (fi) | 2009-07-15 |
EP0815221B1 (en) | 2003-10-22 |
CN1194090C (zh) | 2005-03-23 |
FI973571A (fi) | 1997-10-30 |
ES2206558T3 (es) | 2004-05-16 |
CA2214439A1 (en) | 1996-09-06 |
JP3683778B2 (ja) | 2005-08-17 |
NZ337634A (en) | 2001-06-29 |
HUP9800377A1 (hu) | 1998-06-29 |
NO974035D0 (no) | 1997-09-02 |
US20070135344A1 (en) | 2007-06-14 |
EP0815221A1 (en) | 1998-01-07 |
EP0815221A4 (en) | 1998-12-09 |
CA2214439C (en) | 2002-12-17 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20070135344A1 (en) | Novel growth factor and a genetic sequence encoding same | |
KR100924183B1 (ko) | 신규 섬유아세포 성장 인자 (fgf23) 및 그의 이용 방법 | |
CA2160937C (en) | Survival motor neuron (smn) gene: a gene for spinal muscular atrophy | |
Schaeren‐Wiemers et al. | Identification of new oligodendrocyte‐and myelin‐specific genes by a differential screening approach | |
US5814478A (en) | Tyrosine kinase receptors and ligands | |
JP4403443B2 (ja) | Ly6h遺伝子 | |
Heller et al. | Analysis of function and expression of the chick GPA receptor (GPAR α) suggests multiple roles in neuronal development | |
KR100227240B1 (ko) | 섬모형 신경성인자 수용체 | |
US6413740B1 (en) | Tyrosine kinase receptors and ligands | |
EP0960937B1 (en) | Novel semaphorin gene: semaphorin y | |
PT97821A (pt) | Processo de preparacao de sequencias de acido nucleico e de aminoacidos de cntfr de preparacao de sistemas de ensaio e de composicoes farmaceuticas,e processo de diagnostico e de identificacao de moleculas homologas a cntf e cntfr | |
AU707513B2 (en) | A novel growth factor and a genetic sequence encoding same | |
US7160991B1 (en) | Vascular endothelial growth factor polypeptides | |
KR20030074588A (ko) | 글리코실화 vegf-b 및 가용성 vegf-b 의 양을증가시키는 방법 | |
WO1998022504A1 (fr) | Nouveaux genes de semaphorine (i) | |
PL185293B1 (pl) | Izolowany polipeptyd, izolowana cząsteczka kwasu nukleinowego, sposób otrzymywania polipeptydu, cząsteczka antysensowna, środek farmaceutyczny, komórka gospodarza oraz wektor | |
US6291651B1 (en) | Antibodies to a novel src-family kinase | |
US5952213A (en) | Src-family kinase and methods of use thereof | |
JP2000300264A (ja) | リンパ−造血細胞の増殖を抑制するタンパク質 | |
CA2455413A1 (en) | Mammalian neuralized family transcriptional regulators and uses therefor | |
WO1997017982A1 (en) | Methods and compositions for hair growth promotion | |
US6268216B1 (en) | Reagents and methods for the screening of compounds useful in the treatment of neurological diseases | |
US6384204B1 (en) | Reagents and methods for the screening of compounds useful in the treatment of neurological diseases | |
CA2357987A1 (en) | Genetic sequence related to bone diseases |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
HFG4 | Patent granted, date of granting |
Effective date: 20040510 |