CN1222295C - 中性白细胞功能抑制剂 - Google Patents

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Abstract

葡糖胺盐可有效抑制中性白细胞功能，因此，它对于疾病的预防和/或治疗是有益的，该疾病是由于中性白细胞的活性氧和抗菌蛋白质的过多细胞外释放所引起的，如呼吸疾病综合症和成人呼吸疾病综合症。因此，葡糖胺盐的用途在于可以提供中性白细胞功能抑制剂，用于疾病的预防和/或治疗，该疾病是由于中性白细胞的活性氧和抗菌蛋白质的过多细胞外释放所引起的，还提供这种疾病的预防和/或治疗的方法。

Description

中性白细胞功能抑制剂
                          发明背景
1)发明领域
本发明涉及中性白细胞功能的抑制剂(以下称为“中性白细胞功能抑制剂”)，其每个均包含葡糖胺盐作为活性成分。这些中性白细胞功能抑制剂可用于药物、饮料、食品等，预防和治疗由中性白细胞功能兴奋所引起的疾病，例如，呼吸疾病综合症(RDS)、成人呼吸疾病综合症(ARDS)和其它中性白细胞相关的炎症。
b)相关技术的描述
中性白细胞是白细胞中一种重要的小粒。当外源性物质如细菌侵入活体，中性白细胞迁移至被侵入的部位，摄取外源性物质，产生活性氧，且同时释放抗菌蛋白质(颗粒)如溶菌酶和防御素，并在抗菌蛋白质的作用下和在各种酸水解酶的作用下，它对排出外源性物质起重要作用。然而，这些活性氧和抗菌蛋白质的过多细胞外释放引起组织的损伤，且在某些情况中，进一步加剧由外源性物质侵入所出现的急性炎症。在某些特殊的疾病如呼吸窘迫综合症，成人呼吸窘迫综合症和其它中性白细胞相关的炎症的情况中，已知中性白细胞的这一作用对这些疾病具有不利作用。
已经生产出葡糖胺盐，特别是硫酸盐或盐酸盐，例如，通过JP1-28757B或美国专利3,683,076中公开的方法生产。美国专利3,683,076还公开了胶囊或片剂形式的葡糖胺盐作为关节炎治疗剂，等等。然而，关于葡糖胺盐对白细胞的作用是绝对未知的。
                          发明概述
在外源性物质侵入进活体中时，中性白细胞在保护活体免受外源性物质损伤中起重要作用。然而，如上所述，在某些情况中，中性白细胞的功能可能在活体上引起负面的作用。本发明的目的是提供一种用于预防或减轻可能由这种负面作用所产生的疾病的药物或组合物。
本发明人已经进行了各种葡糖胺盐作用的研究，所述葡糖胺盐是聚葡糖胺的水解产物且是基本上没有毒性的。因此，出乎意料地发现葡糖胺盐具有抑制中性白细胞一一种白细胞的重要成员的功能的作用，例如，迁移能力，摄取外源性物质的作用，颗粒释放能力，活性氧释放能力等，这使本发明得以完成。
因此本发明一方面提供了一种包含葡糖胺盐作为活性成分的中性白细胞功能抑制剂。
本发明另一方面还提供了一种包含葡糖胺盐作为活性成分的疾病的预防或治疗剂，该疾病是由于中性白细胞的活性氧和抗菌蛋白质的过多细胞外释放引起的。
本发明又一方面还提供了一种包含葡糖胺盐作为活性成分的用于疾病的饮料或食品，该疾病是由于中性白细胞的活性氧和抗菌蛋白质的过多细胞外释放引起的。
特别地，该疾病可以是呼吸疾病综合症或成人呼吸疾病综合症。
本发明还有一方面，提供了一种呼吸疾病综合症或成人呼吸疾病综合症的预防或治疗的方法，包含给药于人有效量的葡糖胺盐。
本发明还有一方面，提供了葡糖胺盐用于呼吸疾病综合症或成人呼吸疾病综合症的预防或治疗的用途。
特别地，葡糖胺盐可以从由葡糖胺硫酸盐，葡糖胺盐酸盐，葡糖胺醋酸盐，葡糖胺柠檬酸盐和葡糖胺苹果酸盐组成的组中选择。
葡糖胺盐可以显著地抑制中性白细胞的迁移能力和摄取作用、颗粒从中性白细胞中的释放、及中性白细胞的活性氧的释放。因此，这些葡糖胺盐作为中性白细胞功能抑制剂，且可以用于药物、饮料、食品等，用于中性白细胞功能兴奋所引起的疾病的预防和/或治疗，例如，呼吸疾病综合症、成人呼吸疾病综合症和其它中性白细胞相关的炎症，。
                          附图简述
图1是在FMLP刺激的条件下，作为所加入的葡糖胺盐浓度的函数的由中性白细胞所产生的活性氧量变化的条线图；
图2是通过调理素作用的酵母聚糖(OPZ)的摄取，作为所加入的葡糖胺盐浓度的函数的由中性白细胞所产生的活性氧量变化的条线图；
图3表示依据指数，作为所加入的葡糖胺盐浓度的函数的由中性白细胞所摄取的OPZ数量的变化的条线图；
图4表示通过OPZ的摄取，作为所加入的葡糖胺盐浓度的函数的从中性白细胞中释放的溶菌酶的活性的变化的条线图；
图5表示作为所加入的葡糖胺盐浓度的函数的中性白细胞迁移能力的变化的条线图。
               发明详述和优选实施方案
对在本发明中使用的葡糖胺盐没有特别的限制，只要是在药物学上可接受的范围内。无机酸盐和有机酸盐都是可用的。然而，通常使用无机酸盐如硫酸盐和盐酸盐，在本发明中盐酸盐是优选的。在本发明中，可用的有机酸盐的实例可以包括醋酸盐、柠檬酸盐和苹果酸盐。
根据本发明的中性白细胞功能抑制剂可以由葡糖胺盐单独组成，但是通常，可以通过将葡糖胺盐与药物、饮料或食品添加剂如载体、赋形剂和辅剂(矫正剂、甜味剂、粘合剂等)配制成液体或固体制剂，如片剂、颗粒剂、粉剂、胶囊剂或凝胶或通过本领域已知的方法配制成组合物如健身饮料或食品来提供。载体和赋形剂的实例可以包括水和糖类。抑制剂中葡糖胺盐的含量可以是，但是不限制于，一般0.2％(重量；这将在以下同样适用)或更多，优选1％或更多，可以至100％。
因此，此处使用的术语“中性白细胞功能抑制剂”可以包括葡糖胺盐本身，通过将葡糖胺盐与赋形剂等混合和配制所得到的制剂，和通过将葡糖胺盐与饮料或食品混合所得到的那些产品。
当通过将葡糖胺盐加入到饮料或食品中以本发明中性白细胞抑制剂形式摄取时，使葡糖胺盐与适宜的饮料或食品混合。对可以与葡糖胺盐混合的饮料或食品没有特别的限制。
饮料或食品的例子例如有乳制饮料如牛奶，饮料如健身饮料，和食品如火腿或香肠。
在这种饮料或食品中，葡糖胺盐的含量没有特别地限制，通常可以是0.1％或更多，优选0.3％或更多，更优选0.5％或更多，所有含量均是基于整个饮料或食品的量。对含量的上限没有特别的限制，但是从味觉等的角度看，上限一般可以是10％，优选5％，更优选4％。
作为本发明中性白细胞功能抑制剂的葡糖胺盐的每个成人的每日剂量可以是，但是不限制于，一般0.3g或更多，优选0.5g或更多，更优选1g或更多。对上限没有特别的限制，因为葡糖胺盐实际上是没有毒性的，但是上限可以是一般20g，优选10g，更优选5g。
根据本发明的中性白细胞功能抑制剂可作为组织损伤的预防和/或治疗剂，该组织损伤是由于中性白细胞的活性氧和抗菌蛋白质的过多细胞外释放引起的，例如，呼吸窘迫综合症和成人呼吸窘迫综合症。因为当外源性物质如细菌的侵入，中性白细胞参与急性炎症的发病，人们认为由于葡糖胺盐对中性白细胞功能的抑制作用，它们可以抑制中性白细胞相关的炎症。因此，也认为这些葡糖胺盐可作为这种类型炎症的抑制剂。
以下将特别根据下列实施例对本发明进行说明。
实施例1
1.制备渗出豚鼠腹腔的中性白细胞
将糖原溶液(0.17％糖原-0.9％NaCl溶液)给药于豚鼠的腹腔。大约15个小时后，用0.4％柠檬酸钠-0.9％NaCl溶液清洗腹腔以收集渗出物。该渗出物包含95％或更高纯度的中性白细胞。在用磷酸盐缓冲液(PH7.4)清洗腹腔渗出物两次之后，将中性白细胞悬浮在磷酸盐缓冲液(PH7.4)中以制备中性白细胞悬浮液。
2.用葡糖胺盐抑制中性白细胞功能
通过本文随后描述的方法相对葡糖胺盐对中性白细胞功能的抑制作用进行了研究，该研究涉及活性氧的产生、对颗粒组分的摄取作用和细胞外释放作用。结果在图1-图4中表示。每一个数据均表示为三个或更多样品的平均值+标准偏差S.D.。另外，使用AVOVA进行测试。
(1)葡糖胺盐对活性氧产生的抑制作用
分别将0.01mM，0.1mM和1mM葡糖胺盐酸盐加入到中性白细胞悬浮液
(中性白细胞浓度：106个细胞/mL)的等分试样中，接下来在37℃培养20分钟。向每一种反应混合物中，加入N-甲酰基-1-甲二磺酰基-1-亮氨酰-1-苯丙氨酸(FMLP；10-7)或受调理素作用的酵母多糖(OPZ；OPZ对中性白细胞的数量比：1∶6)作为迁移因子以刺激中性白细胞30分钟。通过细胞色素c减少的方法测量所产生的活性氧。
加入FMLP所得到的结果在图1中表示，而加入OPZ所得到的结果在图2中表示。
结果：从图1和图2中可以很明显地看出，葡糖胺盐酸盐以浓度-依赖性方式抑制通过FMLP或受调理素作用的酵母多糖的活性氧的形成。
(2)葡糖胺盐对中性白细胞摄取能力的抑制作用
分别将0.01mM，0.1mM和1mM葡糖胺盐酸盐加入到中性白细胞悬浮液(中性白细胞浓度：107个细胞/mL)的等分试样中，接下来在37℃培养20分钟。向每一种反应混合物中，加入受调理素作用的酵母多糖(OPZ；OPZ对中性白细胞的数量比：1∶6)，接着反应30分钟。在显微镜下确定由中性白细胞所摄取的酵母的数量，并以摄取指数的方式表达。结果在图3中表示。
结果：葡糖胺盐以浓度-依赖性的方式抑制中性白细胞的调理素作用的酵母聚糖的摄取。
(3)葡糖胺盐对从中性白细胞的细胞外颗粒组分释放的抑制作用
分别将0.01mM，0.1mM和1mM葡糖胺盐酸盐加入到中性白细胞悬浮液(中性白细胞浓度：107个细胞/mL)的等分试样中，接下来在37℃培养20分钟。向每一种反应混合物中，加入受调理素作用的酵母多糖(OPZ；OPZ对中性白细胞的数量比：1∶6)，接着反应30分钟。离心反应混合物，收集上清液，然后，通过溶壁微球菌细胞的比色定量溶解测量释放到细胞外面的颗粒酶、溶菌酶的活性。结果在图4中表示。
结果：从图4中可以很容易地看出，葡糖胺盐显著地抑制通过受调理素作用的酵母多糖的从中性白细胞的细胞外颗粒酶释放。
(4)中性白细胞迁移能力的抑制
通过使用迁移因子测量中性白细胞的迁移能力，该迁移因子是通过将新鲜的血清与酵母反应产生的组成因子C5a。特别描述的是，分别将0.01mM，0.1mM和1mM葡糖胺盐酸盐加入到中性白细胞悬浮液(中性白细胞浓度：3×106个细胞/mL)的等分试样中，接下来在37℃培养20分钟。将反应混合物分别放置在Boyden室中，每个室均装备有3μm孔径的硝化纤维膜，然后在37℃培养20分钟。反应之后，在显微镜下测量中性白细胞迁移的距离。结果在图5中表示。
结果：从图5中很容易地看到，葡糖胺盐以浓度-依赖性的方式抑制嗜中性白细胞的迁移能力。

Claims (4)

1.葡糖胺盐在制备预防或治疗呼吸疾病综合症或成人呼吸疾病综合症的药物中的用途。
2.根据权利要求1的用途，其中所述的葡糖胺盐是从由葡糖胺硫酸盐，葡糖胺盐酸盐，葡糖胺醋酸盐，葡糖胺柠檬酸盐和葡糖胺苹果酸盐组成的组中选择的。
3.葡糖胺盐在制备饮料或食品中的用途，所述饮料或食品用于呼吸疾病综合症或成人呼吸疾病综合症。
4.根据权利要求3的用途，其中所述的葡糖胺盐是从由葡糖胺硫酸盐，葡糖胺盐酸盐，葡糖胺醋酸盐，葡糖胺柠檬酸盐和葡糖胺苹果酸盐组成的组中选择的。
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