CN1199684C

CN1199684C - 治疗乙肝的中药及其制备方法

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Publication number: CN1199684C
Application number: CN 03118126
Authority: CN
Inventors: 何述金
Original assignee: HUNAN XINHUI PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: HUNAN XINHUI PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2003-03-03
Filing date: 2003-03-03
Publication date: 2005-05-04
Anticipated expiration: 2023-03-03
Also published as: CN1435244A

Abstract

本发明公开了一种治疗乙肝的中药及其制备方法，该中药的配伍为：三七80份、郁金240份、蒺藜240份、姜黄80份、大黄(酒制)128份、黄芩160份、蜈蚣224份、山药720份、五味子64份。本发明具有抗乙肝病毒、抑制乙肝病毒复制、诱生干扰素、保肝降酶的显著作用且无毒副作用，是一种较好的治疗乙肝的中药。

Description

治疗乙肝的中药及其制备方法

技术领域：

本发明涉及一种用于治疗乙肝的中药及其制备方法。

技术背景：

近年来乙肝病患者日趋增多，尤其是乙肝病毒的感染已成为当前影响社会卫生的严重问题，而中国是乙肝病的高发区，有40％-60％的人受过乙肝病毒感染，10％的人携带乙肝表面抗原，乙肝发病机理是由于免疫调节功能紊乱，不能很好调节机体对乙肝病毒的免疫反应，使乙肝病毒得不到清除，肝细胞受损，乙肝病毒复制，目前某些西药制品类，如无环鸟苷、干扰素等虽有抗乙肝病毒作用，但因毒副作用大，反而可能会导致部分肝功能恶化，且价格昂贵，因此难以在临床推广应用。而目前一些中药虽然毒副作用小，但不能有效抗乙肝病毒并抑制其复制，不能诱生干扰素，因而治疗效果不佳。

发明内容：

本发明的目的是提供一种能抗乙肝病毒、抑制乙肝病毒复制、无毒副作用、保肝降酶并能诱生干扰素的治疗乙肝的中药及其制备方法。

本发明治疗乙肝的中药配伍为：三七80份、郁金240份、蒺藜240份、姜黄80份、大黄(酒制)128份、黄芩160份、蜈蚣224份、山药720份、五味子64份。

制备本发明治疗乙肝的中药方法依次包括以下步骤：

(1).三七粉碎成细粉，备用；

(2).五味子粉碎后，用90％乙醇加热回流提取3次，每次1小时，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩成浸膏，干燥，粉碎成细粉，备用；

(3).蒺藜、郁金、姜黄、黄芩、蜈蚣、山药加水煎煮40分钟，滤过，滤液备用；

(4).用上述工序(3)的药渣再加水煎煮30分钟后，加入大黄再煎煮二次，每次30分钟，合并煎液，滤过；

(5).将工序(3)、(4)之滤液合并，浓缩至60℃时相对密度为1.20的清膏，干燥，粉碎，加入上述工序(1)、(2)所得的两种细粉混匀，制成临床上口服可接受的任何剂型。

本发明中药主要通过口服方式施用于患者。

本发明中药以三七为君药，其性甘微苦温，入肝、胃经，具有止血散瘀、消肿定痛的功能，且能祛瘀生新；郁金、姜黄、蒺藜为臣药，其中郁金性寒味苦能行气化瘀。姜黄性温味辛，能活血祛瘀。蒺藜性温味苦，能疏肝理郁，三者同伍，助君药以行气理郁，且活血化瘀之功倍增；黄芩、大黄、蜈蚣、五味子、山药为佐，其中黄芩性寒味苦，能清热燥湿，清解余热。酒制大黄，性寒味苦能缓其通腑导滞之性，扬其活血通络之效，并能助君药化瘀通络之力，且能与黄芩共凑清热解毒之功。蜈蚣其性温味苦能直达病所，搜风解毒，散结通络。五味子性温味酸，能敛阴养营，并防姜黄，蜈蚣辛燥伤阴之弊。山药性平味甘，能健脾补虚，益气养胃，且能防大黄、黄芩苦寒，伤脾胃运化之功，故山药健脾固本，使其后天生化有源，并能运化水湿。因此，本发明中药共奏化瘀通络，清解余毒之功，通过中国医药科学医药生物技术研究所做的动物实验进一步验证了本发明具有抗乙肝病毒、抑制乙肝病毒复制、诱生干扰素、保肝降酶的显著作用且无毒副作用，是一种较好的治疗乙肝的中药。

(一)、抗乙肝病毒实验：

实验1：一日龄北京雏鸭静脉注射鸭乙肝病毒，7天后开始给鸭口服本发明中药胶囊10天，观察药物对鸭血清鸭乙肝病毒DNA的影响，实验数据见表1和表2。

表1本发明中药治疗鸭乙肝病毒感染的效果(T₀给药前，T₅、T₁₀给药第5天、第10天P₃停药第3天、ACV无环鸟苷)

实验组别给药鸭 DHBV 感染鸭血清DHBV-DNA水平(OD值)及变化％

批次方案数 DNA T₀ T₅ T₁₀ P₃

I 0 5 X±SD 0.36±0.14 0.52±0.09 0.62±0.18 0.85±0.42

(病毒对照) 变化％ -44.44％ -73.22％ -133.33％

1g/kg Bid X 5 X±SD 0.44±0.21 0.53±0.26 0.53±0.24 0.74±0.36

10 PO 变化％ -20.45％ -20.45％ -68.18％

3g/kg 5 X±SD 0.43±0.27 0.40±0.29 0.56±0.28 0.24±0.17

变化％ 6.98％ -30.23％ 44.19％

5g/kg 5 X±SD 0.61±0.18 0.15±0.04 0.22±0.03 0.25±0.04

变化％ 75.41％ 63.93％ 59.02％

ACV 50mg/kg Tid X 5 X±SD 0.59±0.89 0.25±0.11 0.228±0.15 0.106±0.06

10 1P 变化％ 57.63％ 61.36％ 82.03％

II 0 同上 5 X±SD 0.58±0.06 0.67±0.11 0.67±0.18 0.44±0.24

(病毒对照) 变化％ -15.52％ -15.52％ 24.14％

1g/kg Bid X 5 X±SD 0.59±0.10 0.51±0.17 0.48±0.17 0.46±0.10

10 PO 变化％ 13.56％ 18.64％ 22.03％

3g/kg 5 X±SD 0.97±0.04 0.37±0.23 0.44±0.11 0.26±0.10

变化％ 61.68％ 54.44％ 73.20％

5g/kg 5 X±SD 0.72±0.10 0.30±0.22 0.40±0.16 0.23±0.15

变化％ 58.33％ 44.44％ 68.06％

III 0 同上 5 X±SD 0.25±0.04 0.41±0.19 0.35±0.07 0.31±0.05

(病毒对照) 变化％ -64.00％ -40.00％ -24.00％

1g/kg Bid X 6 X±SD 0.30±0.12 0.16±0.02 0.17±0.08 0.25±0.12

10 PO 变化％ 46.67％ 43.33％ 16.61％

3g/kg 5 X±SD 0.51±0.17 0.29±0.03 0.22±0.05 0.26+0.10

变化％ 43.14％ 56.86％ 49.02％

5g/kg 5 X±SD 0.43±0.07 0.28±0.09 0.19±0.09 0.19±0.13

变化％ 34.88％ 55.01％ 55.81％

表2：上述三批实验平均值

剂量组 (g/kg) 实验批次 T₅ T₁₀ P₃

1 3 13.24 13.84 9.85

3 3 17.33 27.02 55.47

5 3 56.21 54.73 50.96

从三批动物实验结果可见，大剂量组：每天5g/kg口服，1天2次，10天，有非常显著的抑制鸭血清DHBV-DNA水平，用药第5天三批动物实验中，第一批动物抑制75.41％，第二批动物抑制58.33％，第三批动物抑制34.88％，第10天分别抑制63.93％，44.44％和55.81％，停药后3天抑制百分率分别为59.02、68.06、55.81，鸭血清DHBV-DNA比治疗前有显著下降，停药后也无反跳，统计学有非常显著意义，三批实验重复性好。中剂量组3g/kg也有一定效果，三批动物实验中，第一批动物抑制效果不明显，第二、第三批动物实验在服药后第5、10天和停药后3天也有显著抑制效果。每天服1g/kg，1天2次，10天无抑制作用为无效剂量。

结论：本发明中药大中剂量在鸭体内能有效抑制乙肝病毒。

实验2：7-17日龄DHBV感染血清DHBV-DNA阳性北京鸭处死取肝脏，做原代鸭肝细胞培养，加入不同浓度本发明中药。

(1).毒性试验：加药第6天，观察细胞存活数目，计算药物对细胞的半数毒性和最大无毒浓度。实验数据见表3

表3本发明中药浸膏粉对鸭肝细胞的毒性

药品药物浓度(ug/ml) 细胞数目死亡率 TD50(ug/ml)

本发明中药 10000 ++++ 0

1000 ++++ 0 ＞10000

100 ++++ 0

0 ++++

无环鸟苷 1000 + 75

500 +++ 25 707.13

250 ++++ 0

125 ++++ 0

0 ++++

本发明中药浸膏粉的最小有毒浓度及半数有毒浓度(TD50)大于10000ug/ml，无环鸟苷的半数有毒浓度为707.13ug/ml。

动物的急、慢性毒性实验测得口服本发明中药最大耐受量20g/kg，相当于人体临床本发明中药日用量的500倍，动物仍未发现异常反应，且用药后动物饮食正常，行为活泼，血常规、肝、肾、胃等病理切片，经统计学处理无显著性差异(P＞0.05)。

(2)对DHBV感染鸭肝细胞培养内DHBV-DNA的抑制作用：

在最小有毒浓度以下设4个剂量组：3000ug/ml，1000ug/ml，333ug/ml，111ug/ml，可看出本发明中药对DHBV感染鸭原代肝细胞培养中DHBV的抑制作用。其实验数据见表4。

表4本发明中药对DHBV感染鸭原代细胞培养中DHBV-DNA的抑制作用

批次药物浓度(ug/ml) OD₄₉₇ 抑制百分率 ID50(ug/ml)

1 3000 0.09 90.03

1000 0.18 80.65

333 0.87 6.45 633.82

111 1.01 0

0 0.93

2 3000 0.27 76.92

1000 0.30 74.36

333 1.25 0 696.20 638.48±45.35

111 1.16 9.09

0 1.17

3 3000 0.22 83.08

1000 0.20 84.62

333 1.23 12.14 585.42

111 1.50 0

0 1.40

阳性对照药 500 0.20 54.57

无环鸟苷 250 0.21 52.27 238.70

125 0.36 18.18

0 0.44

实验表明：本发明中药浸膏粉在浓度为3000ug/ml和1000ug/ml时有明显的抑制DHBV-DNA的作用，半数抑制浓度(ID50)为638.48/ug/ml，选择指数大于15.67(见表5)，较无环鸟苷高，说明本发明中药浸膏粉在DHBV感染鸭原代肝细胞培养中能较好地选择性抑制DHBV-DNA的合成，能有效地抑制鸭乙肝病毒DNA的复制。综合实验2列出表5。

表5：本发明中药在DHBV感染鸭细胞中的抗DHBV效果

药品 TD50 ID50 SI

(ug/ml) (ug/ml)

本发明中药＞10000 638.48±45.35 15.67

无环鸟苷 707.13 238.70 2.96

结论：本发明中药浸膏粉的最小有毒浓度及半数有毒浓度(TD50)大于10000ug/ml，半数抑制浓度(ID50)为638.4ug/ml，选择指数大于15.67能有效地抑制鸭乙肝病毒DNA的复制，无毒副作用。

三.本发明中药对人外周白细胞诱生干扰素的试验：

取新鲜人外周血分离血细胞，将白细胞悬液及不同浓度本发明中药1mg/ml、0.5mg/ml、0.1mg/ml孵育收集上清为干扰素粗品，测OD值以抑制50％病变浓度为有效浓度。实验数据见表6。

表6

实验批数干扰素单位本发明药物浓度

1mg/ml 0.5mg/m l0.1mg/ml

I 1∶4 60％ 65.7％ 42.9％

1∶8 51.4％ 57.1％ 28.6％

1∶16 22.9％ 22.9％ 20％

II 1∶4 65.5％ 62.1％

1∶8 20.7％ 44.8％

1∶16 27.6％ 31.1％

实验结果表明在1mg/ml和0.5mg/ml浓度下能检测出诱生干扰素效果，有一定的诱生干扰素作用，以0.5mg/ml浓度最为适宜，可诱生干扰素6小时滴度80U±0单位/ml，说明本发明中药能诱生干扰素，可调节机体免疫功能。

四.对肝损伤的保护作用实验：

1.D-半乳糖胺试验：

昆明种小鼠18-22g，预先口服本发明中药浸膏粉3次，1小时后腹腔注射D-半乳糖胺800mg/kg，禁食16小时后，断头，测定血清谷丙转安酶(SGPT)及谷草转安酶(SGOT)，阳性对照组联苯双酯150mg/kg。结果见表7。

表7本发明中药浸膏粉对D-半乳糖胺引起小鼠肝损伤的保护作用

组别 SGPT u％±SD SGOT u％±SD

正常对照 253±89 581±101

联苯双酯150mg/kg 1324±806^** 806±453^**

D-半乳糖胺对照 2444±982 1575±648

本发明中药浸膏粉5g/kg 1442±830^** 761±514^**

本发明中药浸膏粉2.5g/kg 1771±990^** 1256±556

本发明中药浸膏粉1.25g/kg 2686±772^** 1338±398

与对照组比较^*P＜0.05，^**P＜0.01

结果表明：本发明中药2.5，5.0g/kg，对D-半乳糖胺所至小鼠肝损伤有保护作用。转氨酶明显降低。肝组织损伤明显减轻。

2.四氯化碳(CCl₄)试验：

把上述试验1中的D-半乳糖对胺换成四氯化碳(CCl₄)花生油溶液10ml/kg，试验结果见表8。

表8本发明中药浸膏粉CCl₄小鼠肝损伤的保护作用

组别 SGPT u％±SD SGOT u％±SD

正常对照 297±36 621±140

CCl₄对照 3467±1553 1632±502

联苯双酯150mg/kg 621±289^** 785±85^**

本发明中药浸膏粉5g/kg 632±316^** 809±92^**

本发明中药浸膏粉2.5g/kg 906±307^** 938±95^**

本发明中药浸膏粉1.25g/kg 1725±935^** 1142±180

与对照组比较 ^**P＜0.01

结果表明：本发明中药1.25，2.5，5.0g/kg，对四氯化碳(CCl₄)所至小鼠肝损伤均有保护作用，转氨酶明显降低，且有剂量效应关系，肝组织损伤明显减轻。

结论：本发明中药具有保肝降酶作用。

由上所述可以看出本发明中药能搜风解毒、舒肝养胃、用于乙肝瘀血阻络、肝郁脾困、肝肾阴虚症，与现有技术相比，其显著的优点是：该药品能诱生干扰素，可调节机体免疫功能，对乙肝及乙肝病毒持续携带者有良好的治疗效果，对于阻断肝病的慢性化发展，控制肝硬化、肝癌的发病率起到一定的防治作用，且药用安全，无毒副反应。

具体实施方式：

本实施方式的重量组成成分是：三七80g、郁金240g、蒺藜240g、姜黄80g、大黄(酒制)128g、黄芩160g、蜈蚣224g、山药720g、五味子64g。

其制备方法依次包括如下步骤：

(1).三七80g粉碎成细粉；

(2).取五味子64g粉碎后，用90％乙醇加热回流提取3次，每次1小时，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩成浸膏，干燥，粉碎成细粉，备用；

(3).蒺藜240克、郁金240克、姜黄80克、黄芩160克、蜈蚣224克、山药720克加水煎煮40分钟，滤过，滤液备用；

(5).将工序(3)、(4)之滤液合并，浓缩至相对密度为1.20(60℃)的清膏，干燥，粉碎，加入上述工序(1)、(2)两种细粉混匀，制粒，干燥，装入胶囊，约制成1000粒。

本发明中药可以制成临床上口服可以接受的任何剂型，如固体剂型-片剂、胶囊、粉剂、颗粒剂；膏状、流体状等。

Claims

1.一种治疗乙肝的中药，其配伍为：三七80份、郁金240份、蒺藜240份、姜黄80份、大黄(酒制)128份、黄芩160份、蜈蚣224份、山药720份、五味子64份。

2.一种制备权利要求1所述的治疗乙肝的中药方法，依次包括以下步骤：

(1).将80份三七粉碎成细粉，备用；

(2).将64份五味子粉碎后，用90％乙醇加热回流提取3次，每次1小时，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩成浸膏，干燥，粉碎成细粉，备用；

(3).取蒺藜240份、郁金204份、姜黄80份、黄芩160份、蜈蚣224份、山药720份加水煎煮40分钟，滤过，滤液备用；

(4).用上述工序(3)的药渣再加水煎煮30分钟后，加入大黄128份再煎煮二次，每次30分钟，合并煎液，滤过；