CN108096523A - 一种禽用抗肝炎病毒的组合物、制备方法及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种禽用抗肝炎病毒组合物，其特征是：包括三七提取物2份，人参提取物2份、郁金提取物2份，蒺藜提取物2份，片姜黄提取物1.5份，酒大黄提取物3份，黄芪提取物4份，蜈蚣提取物3份，山药提取物3份，五味子提取物3份，板蓝根提取物3份，恩替卡韦0.01份。本发明采用黄芪提取物，人参提取物、茯苓提取物，黄芪提取物，当归提取物，白芍提取物，细辛提取物，五味子提取物是精选的采用对传染性肝炎病毒有阻断作用的药材，同时这些提取物也能够对受损后的细胞进行修复。能够有效治愈传染肝炎病毒传播，增强鸭的免疫力。

Description

一种禽用抗肝炎病毒的组合物、制备方法及应用
技术领域
本发明涉及一种养殖技术领域，特别是涉及一种禽用抗肝炎病毒的组合物、制备方法及应用。
背景技术
病毒感染是一大类严重威胁禽畜健康的疾病，然而现在由于疫苗和抗病毒西药的广泛使用，导致很多类型的病毒发生了抗药性，禽病毒性肝炎是由鸭肝炎病毒引起的雏鸭的一种急性接触性传染病。临床上以上发病急、传播快、死亡率高，剖检肝脏有明显出血点和出血斑为特征。其为养殖过程带来较大的经济损失，实践中，通常采用提前接种疫苗或者西药完成预防病害的效果，但是这样容易使禽类产生抗药性，进而对消费者健康产生影响，现有技术中，缺少一种能够抗病毒同时避免病毒产生抗药性的药物，使得能够安全地对禽类病毒性肝炎进行防治。
因此本领域技术人员致力于开发一种能够抗病毒同时避免病毒产生抗药性的药物，使得能够安全地对禽类病毒性肝炎进行防治。
发明内容
有鉴于现有技术的上述缺陷，本发明所要解决的技术问题是提供一种能够抗病毒同时避免病毒产生抗药性的药物，使得能够安全地对禽类病毒性肝炎进行防治。
为实现上述目的，本发明提供了一种禽用抗肝炎病毒组合物，包括三七提取物2份，人参提取物2份、郁金提取物2份，蒺藜提取物2份，片姜黄提取物1.5份，酒大黄提取物3份，黄芪提取物4份，蜈蚣提取物3份，山药提取物3份，五味子提取物3份，板蓝根提取物3份，恩替卡韦0.01份。
较佳的，还包括禽用抗病毒卵黄抗体70-80份，禽用抗病毒转移因子1.8份和α-干扰素1.2份。
较佳的，所述禽用抗病毒卵黄抗体为抗鸭病毒性肝炎卵黄抗体，所述禽用抗病毒转移因子为抗鸭病毒性肝炎转移因子。
较佳的，所述蜈蚣提取物为包括头足在内的整体蜈蚣提取物。
较佳的，一种禽用抗肝炎病毒冻干粉，主要由以下重量份数的组分组成：包括三七提取物2份，人参提取物2份、郁金提取物2份，蒺藜提取物2份，片姜黄提取物1.5份，酒大黄提取物3份，黄芪提取物4份，蜈蚣提取物3份，山药提取物3份，五味子提取物3份，板蓝根提取物3份，恩替卡韦0.01份。
较佳的，还包括以下重量份数的组分：抗鸭病毒性肝炎病毒卵黄抗体80份，抗鸭肝炎性病毒转移因子1.8份和α-干扰素1.2份。
较佳的，包括链霉素1份和以重量份计0.05％的多维生素。
一种禽用抗肝炎病毒冻干粉制备方法，包括以下步骤：
(1)分离毒株制备鸭肝炎Ⅰ型疫苗，灭活后制得乳油剂鸭肝炎Ⅰ型疫苗备用；
(2)中药提取液的制备：按照如权利要求1所述的重量配比，取相同份数的中药材，采用常规水煎制备所述中药材的提取液；
(3)将步骤(2)中的中药材提取液进行浓缩，浓缩至1g/ml的药液；
(4)将步骤(3)中的药液进行3000r/ml进行离心，离心20min，得上清液；
(5)将步骤(4)中的药液用0.22μm进行微孔滤膜过滤，高压蒸汽灭菌，4℃冷藏备用；
(6)免疫健康鸭群制备高免蛋：取步骤(1)制备的疫苗接种健康鸭群，当抗体效价达到1:256时，收集高免蛋清理、消毒后晾干备用；
(7)分离高免蛋卵黄：取步骤(6)制备的高免蛋分离卵黄，加入等体积的无菌水，充分搅拌至颜色发白的卵黄溶液，将卵黄溶液置于60-65℃的水浴中加热10-15min。再加入PH为4.9-5.2的预冷酸化水，加入量为卵黄溶液体积的4-5倍，混匀后室温下静置沉淀，取得上清液后离心分离；
(8)取步骤(7)离心后的上清液，过滤，使得滤液中禽用抗病毒卵黄抗体的干重为70-80份，在浓缩液中加入步骤(5)的灭菌药液，防腐剂0.01份，灭活剂0.2份，链霉素1份，耐热冻干保护剂3份，恩替卡韦0.01份，0.05％的维生素1份，混匀后预冻、冻干备用；
(9)以重量份数剂，在步骤(8)的干粉中加入禽用抗鸭病毒性肝炎转移因子1.8份和α-干扰素1.2份即可。
较佳的，所述禽用抗鸭病毒性肝炎转移因子的制备方法为：
(1)取刚屠宰的新鲜健康猪脾，用生理盐水反复冲洗后灭菌并去膜、脂肪、筋等；
(2)组织捣碎机以5000r/min的速度进行捣碎，共3次，每次间隔5min；
(3)冷却捣碎机，冷却后的细胞培养液以1500r/min的速度离心10min；
(4)去除离心液的上清液，续加氯化铵液，离心并去红细胞；
(5)利用小牛血清培养液制成猪脾细胞培养液；
(6)取步骤(5)中的猪脾细胞培养液100μl,加入质量浓度为100g/L的乙肝疫苗100μl；
(7)取步骤(6)中的猪脾细胞培养液,加入质量浓度为20g/L的乙肝疫苗50μl；
(8)将步骤(7)中的培养液加入蒸馏水1:1稀释，-25℃反复冻融6次，自来水融化后装入透析袋中；
(9)用1:4蒸馏水作为透析外液，4℃透析48h，取得透析液，4℃保存或冻干备用。
一种禽用抗肝炎病毒冻干粉作为饲料添加剂的应用，其特征是:包括以下步骤，将禽用抗病毒冻干粉以2.8％的量加入禽用饲料中即可。
本发明的有益效果是：本发明采取三七提取物、人参提取物、郁金提取物，蒺藜提取物，片姜黄提取物，酒大黄提取物，黄芪提取物，蜈蚣提取物，山药提取物，五味子提取物，板蓝根提取物，恩替卡韦等药材，精选的采用对肝炎病毒有阻断作用的药材，同时这些提取物也能够对受损后的细胞进行修复。能够有效治愈禽类肝炎，并且防止禽类肝炎病毒传播，增强禽类的免疫力。本发明较为常用的是用于鸭类肝炎，也可用于其他禽类的肝炎防治。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明：
实施例1，一种禽用抗肝炎病毒组合物，包括三七提取物2份，人参提取物2份、郁金提取物2份，蒺藜提取物2份，片姜黄提取物1.5份，酒大黄提取物3份，黄芪提取物4份，蜈蚣提取物3份，山药提取物3份，五味子提取物3份，板蓝根提取物3份，恩替卡韦0.01份。
还包括禽用抗病毒卵黄抗体80份，禽用抗病毒转移因子1.8份和α-干扰素1.2份。
所述禽用抗病毒卵黄抗体为抗鸭病毒性肝炎卵黄抗体，所述禽用抗病毒转移因子为抗鸭病毒性肝炎转移因子。
所述蜈蚣提取物为包括头足在内的整体蜈蚣提取物。
一种禽用抗肝炎病毒冻干粉，主要由以下重量份数的组分组成：包括三七提取物2份，人参提取物2份、郁金提取物2份，蒺藜提取物2份，片姜黄提取物1.5份，酒大黄提取物3份，黄芪提取物4份，蜈蚣提取物3份，山药提取物3份，五味子提取物3份，板蓝根提取物3份，恩替卡韦0.01份。
特别的，还包括以下重量份数的组分：抗鸭病毒性肝炎病毒卵黄抗体80份，抗鸭肝炎性病毒转移因子1.8份和α-干扰素1.2份。
特别的，还包括链霉素1份和以重量份计0.05％的多维生素。
一种禽用抗肝炎病毒冻干粉制备方法，包括以下步骤：
(1)分离毒株制备鸭肝炎Ⅰ型疫苗，灭活后制得乳油剂鸭肝炎Ⅰ型疫苗备用；
(2)中药提取液的制备：按照如权利要求1所述的重量配比，取相同份数的中药材，采用常规水煎制备所述中药材的提取液；
(3)将步骤(2)中的中药材提取液进行浓缩，浓缩至1g/ml的药液；
(4)将步骤(3)中的药液进行3000r/ml进行离心，离心20min，得上清液；
(5)将步骤(4)中的药液用0.22μm进行微孔滤膜过滤，高压蒸汽灭菌，4℃冷藏备用；
(6)免疫健康鸭群制备高免蛋：取步骤(1)制备的疫苗接种健康鸭群，当抗体效价达到1:256时，收集高免蛋清理、消毒后晾干备用；
(7)分离高免蛋卵黄：取步骤(6)制备的高免蛋分离卵黄，加入等体积的无菌水，充分搅拌至颜色发白的卵黄溶液，将卵黄溶液置于60-65℃的水浴中加热10-15min。再加入PH为4.9-5.2的预冷酸化水，加入量为卵黄溶液体积的4-5倍，混匀后室温下静置沉淀，取得上清液后离心分离；
(8)取步骤(7)离心后的上清液，过滤，使得滤液中禽用抗病毒卵黄抗体的干重为70-80份，在浓缩液中加入步骤(5)的灭菌药液，防腐剂0.01份，灭活剂0.2份，链霉素1份，耐热冻干保护剂3份，恩替卡韦0.01份，0.05％的维生素1份，混匀后预冻、冻干备用；
(9)以重量份数剂，在步骤(8)的干粉中加入禽用抗鸭病毒性肝炎转移因子1.8份和α-干扰素1.2份即可。
特别的，所述禽用抗鸭病毒性肝炎转移因子的制备方法为：
(1)取刚屠宰的新鲜健康猪脾，用生理盐水反复冲洗后灭菌并去膜、脂肪、筋等；
(2)组织捣碎机以5000r/min的速度进行捣碎，共3次，每次间隔5min；
(3)冷却捣碎机，冷却后的细胞培养液以1500r/min的速度离心10min；
(4)去除离心液的上清液，续加氯化铵液，离心并去红细胞；
(5)利用小牛血清培养液制成猪脾细胞培养液；
(6)取步骤(5)中的猪脾细胞培养液100μl,加入质量浓度为100g/L的乙肝疫苗100μl；
(7)取步骤(6)中的猪脾细胞培养液,加入质量浓度为20g/L的乙肝疫苗50μl；
(8)将步骤(7)中的培养液加入蒸馏水1:1稀释，-25℃反复冻融6次，自来水融化后装入透析袋中；
(9)用1:4蒸馏水作为透析外液，4℃透析48h，取得透析液，4℃保存或冻干备用。
一种禽用抗肝炎病毒冻干粉作为饲料添加剂的应用，其特征是:包括以下步骤，将禽用抗病毒冻干粉以2.8％的量加入禽用饲料中即可。
试验方法：选取1月龄鸭200只，其中100只作为攻毒组隔离饲养，100只作为空白对照组隔离饲养，100作为试验组按照本发明的方式进行饲养，试验组采用实施例1制备的冻干粉，饲养方式为自由采食，自由饮水，24h后取试验组、对照组和攻毒组的鸭肌注接种稀释后的鸭传染性肝炎病毒液，感染后继续饲养，治疗时对照组和试验组每100ml注射液中分别含有冻干粉1g，采用肌注方式给药，0.1ml/kg体重，每日2次，攻毒组肌生理盐水，用法同上，120h后得到表1结果如下：
组别 病鸭数/只 治愈数/只 有效数/只 治愈率/％
试验数 100 85 15 85％
攻毒组 100 16 8 /
空白对照组 0 / / /
由表1可知，本发明的治愈率为85％，治愈效果较好。同时保存容易，易被鸭群所接受。
以上详细描述了本发明的较佳具体实施例。应当理解，本领域的普通技术人员无需创造性劳动就可以根据本发明的构思作出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域中技术人员依本发明的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案，皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。

Claims (10)

1.一种禽用抗肝炎病毒组合物，其特征是：包括三七提取物2份，人参提取物2份、郁金提取物2份，蒺藜提取物2份，片姜黄提取物1.5份，酒大黄提取物3份，黄芪提取物4份，蜈蚣提取物3份，山药提取物3份，五味子提取物3份，板蓝根提取物3份，恩替卡韦0.01份。
2.如权利要求1所述的禽用抗肝炎病毒组合物，其特征是：还包括禽用抗病毒卵黄抗体70-80份，禽用抗病毒转移因子1.8份和α-干扰素1.2份。
3.如权利要求1所述的禽用抗肝炎病毒组合物，其特征是：所述禽用抗病毒卵黄抗体为抗鸭病毒性肝炎卵黄抗体，所述禽用抗病毒转移因子为抗鸭病毒性肝炎转移因子。
4.如权利要求1所述的禽用抗肝炎病毒组合物，其特征是：所述蜈蚣提取物为包括头足在内的整体蜈蚣提取物。
5.一种禽用抗肝炎病毒冻干粉，其特征是：主要由以下重量份数的组分组成：包括三七提取物2份，人参提取物2份、郁金提取物2份，蒺藜提取物2份，片姜黄提取物1.5份，酒大黄提取物3份，黄芪提取物4份，蜈蚣提取物3份，山药提取物3份，五味子提取物3份，板蓝根提取物3份，恩替卡韦0.01份。
6.根据权利要求4所述禽用抗肝炎病毒冻干粉，其特征是：还包括以下重量份数的组分：抗鸭病毒性肝炎病毒卵黄抗体80份，抗鸭肝炎性病毒转移因子1.8份和α-干扰素1.2份。
7.如权要求4或5所述的禽用抗肝炎病毒冻干粉，其特征是：包括链霉素1份和以重量份计0.05％的多维生素。
8.一种禽用抗肝炎病毒冻干粉制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)分离毒株制备鸭肝炎Ⅰ型疫苗，灭活后制得乳油剂鸭肝炎Ⅰ型疫苗备用；
(2)中药提取液的制备：按照如权利要求1所述的重量配比，取相同份数的中药材，采用常规水煎制备所述中药材的提取液；
(3)将步骤(2)中的中药材提取液进行浓缩，浓缩至1g/ml的药液；
(4)将步骤(3)中的药液进行3000r/ml进行离心，离心20min，得上清液；
(5)将步骤(4)中的药液用0.22μm进行微孔滤膜过滤，高压蒸汽灭菌，4℃冷藏备用；
(6)免疫健康鸭群制备高免蛋：取步骤(1)制备的疫苗接种健康鸭群，当抗体效价达到1:256时，收集高免蛋清理、消毒后晾干备用；
(7)分离高免蛋卵黄：取步骤(6)制备的高免蛋分离卵黄，加入等体积的无菌水，充分搅拌至颜色发白的卵黄溶液，将卵黄溶液置于60-65℃的水浴中加热10-15min。再加入PH为4.9-5.2的预冷酸化水，加入量为卵黄溶液体积的4-5倍，混匀后室温下静置沉淀，取得上清液后离心分离；
(8)取步骤(7)离心后的上清液，过滤，使得滤液中禽用抗病毒卵黄抗体的干重为70-80份，在浓缩液中加入步骤(5)的灭菌药液，防腐剂0.01份，灭活剂0.2份，链霉素1份，耐热冻干保护剂3份，恩替卡韦0.01份，0.05％的维生素1份，混匀后预冻、冻干备用；
(9)以重量份数剂，在步骤(8)的干粉中加入禽用抗鸭病毒性肝炎转移因子1.8份和α-干扰素1.2份即可。
9.如权利要求8所述的禽用抗肝炎病毒冻干粉制备方法，其特征是：所述禽用抗鸭病毒性肝炎转移因子的制备方法为：
(1)取刚屠宰的新鲜健康猪脾，用生理盐水反复冲洗后灭菌并去膜、脂肪、筋等；
(2)组织捣碎机以5000r/min的速度进行捣碎，共3次，每次间隔5min；
(3)冷却捣碎机，冷却后的细胞培养液以1500r/min的速度离心10min；
(4)去除离心液的上清液，续加氯化铵液，离心并去红细胞；
(5)利用小牛血清培养液制成猪脾细胞培养液；
(6)取步骤(5)中的猪脾细胞培养液100μl,加入质量浓度为100g/L的乙肝疫苗100μl；
(7)取步骤(6)中的猪脾细胞培养液,加入质量浓度为20g/L的乙肝疫苗50μl；
(8)将步骤(7)中的培养液加入蒸馏水1:1稀释，-25℃反复冻融6次，自来水融化后装入透析袋中；
(9)用1:4蒸馏水作为透析外液，4℃透析48h，取得透析液，4℃保存或冻干备用。
10.一种如权利要求4或5所述的一种禽用抗肝炎病毒冻干粉作为饲料添加剂的应用，其特征是:包括以下步骤，将禽用抗病毒冻干粉以2.8％的量加入禽用饲料中即可。
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