CN105726643A - 一种治疗手足口病的复方桑黄药物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种治疗手足口病的复方桑黄药物及其制备方法，属于医药保健品技术领域。本发明将桑黄菌种接种于固体发酵培养基，发酵以获得桑黄菌丝体，随后经浸提、旋蒸、离心、复溶、去蛋白、除色素以及透析，从桑黄菌丝体中制备得到桑黄多糖，再配伍甘草、连翘和板蓝根的提取物混合配制成复方药物。制得的桑黄多糖复方药物能有效抗肠道病毒病71型，具有较好的治疗手足口病的作用。

Description

一种治疗手足口病的复方桑黄药物及其制备方法
技术领域
本发明属于医药保健品技术领域，具体涉及一种治疗手足口病的复方桑黄药物及其制备方法。
背景技术
手足口病是临床上以手、足、口、臀部斑丘疹、疱疹为特征的儿童急性传染病，多见于3岁以下婴幼儿。肠道病毒71型（EV71）是引起手足口病的最主要病原体之一，目前针对EV71病毒感染的主要防治方法有疫苗研发、免疫球蛋白治疗、抗病毒化学合成药物等。但是由于EV71病毒的血清分型较多，抗原极易发生变异，寻找有效的抗EV71和治疗手足口病的药物势在必行。
桑黄是珍贵的药用真菌，桑黄多糖具有抗氧化、抗肿瘤、抗菌、降血糖、抗纤维化和护肝等作用。甘草为药食兼用药材，食药用部位为根及根茎，具有泻火解毒、缓急止痛、补中益气、调和药性以及解百药之毒的功效。板蓝根，为十字花科植物菘蓝的干燥根，可入药，具有良好的清热解毒和抗病毒等功效。连翘是中药复方中常用的一味中药，连翘属植物富含萜类、木脂素类和黄酮类等化合物，具有抗病毒、抗内毒素和杀菌消炎等作用。
桑黄多糖配伍甘草、板蓝根和连翘混合提取物的药物复合物，在EV71感染的早期对病毒具有抑制作用，具有较好的防治手足口病的功效。
发明内容
本发明的目的在于提供一种治疗手足口病的复方桑黄药物及其制备方法。该复方药物富含的桑黄多糖，由固体培养基发酵桑黄菌丝体浸提后获得，再复配以甘草、板蓝根和连翘的提取物，能有效抗肠道病毒病71型，具有较好的治疗手足口病的作用。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种治疗手足口病的复方桑黄药物，按重量份数计，所述复方桑黄药物的原料包括：桑黄多糖15~25份和中药复方组合物2~6份；所述中药复方组合物的制备方法为：将甘草、板蓝根和连翘于60~65℃烘箱干燥，粉碎后过50~80目筛，取所得的甘草粉10~15份、板蓝根粉10~20份和连翘粉5~10份混匀，放入砂锅中添加蒸馏水1000份浸泡20~30min，大火加热煮沸后改文火熬制1~2h，过滤冷却后，3000~3500r/min离心，浓缩，冷冻干燥得到中药复方组合物。
所述的桑黄多糖的制备方法，包括以下步骤：
（1）桑黄菌种接种于固体发酵培养基上，固体发酵培养基的配方为：按质量百分数计，巨菌草35~45%，玉米粉20~25%，黄豆粉5~10%、小麦麸粉5~10%，CaSO41~2%，含水量20~35%，各组分的质量百分数之后为100%，pH为6~8；25~30℃避光培养30~35d，得到桑黄菌丝体；
（2）将步骤（1）得到的桑黄菌丝体于60~65℃烘箱干燥，粉碎后过50~80目筛，备用；
（3）将步骤（2）所得桑黄菌丝体粉末加入蒸馏水中，桑黄菌丝体粉末与蒸馏水质量体积比为1:30~40，70~85℃浸提2~4h，提取结束后，进行3500~4500r/min离心15~25min，取上清液备用，将离心的残渣重复提取2~3次，合并上清液；
（4）将步骤（3）得到的上清液在50~65℃、转速为40~60r/min进行旋转蒸发，将上清液浓缩为原来的1/10~1/5；
（5）往步骤（4）得到的浓缩液中加入3~4倍体积的95wt%乙醇，置于2~10℃中静置6~10h，3500~4500r/min离心15~25min，得沉淀物；
（6）向步骤（5）所得沉淀物中加入蒸馏水，沉淀物与蒸馏水的质量体积比为1:2~5，进行搅拌复溶；用Sevag法、聚酰胺法、三氯乙酸法和酶解法中一种或几种除蛋白3~5次，得到桑黄粗多糖溶液；
（7）将AB-8树脂加入到步骤（6）得到的桑黄粗多糖溶液中，混匀，震荡，除色素，其中AB-8树脂的质量为步骤（5）所得沉淀物质量的20~25倍；
（8）将步骤（7）得到的桑黄粗多糖溶液装入透析袋，蒸馏水透析8~10h，每3~4h换水，截留分子量12000~14000；
（9）收集步骤（8）得到的多糖透析液，浓缩，冷冻干燥，得到桑黄多糖。
如上所述的一种治疗手足口病的复方桑黄药物的制备方法：将桑黄多糖和中药复方组合物配伍制成药剂学上的剂型，或者与药剂学上所述的任一辅料混合制成药剂学上的剂型。
本发明的有益效果在于：本发明制备的复方桑黄药物富含桑黄多糖，再复配以甘草、板蓝根和连翘的提取物，各成分之间相辅相成，协同作用，具有很强的抗肠道病毒71型的效果，能有效控制由EV71引起的手足口病。
附图说明
图1为复方桑黄药物体外抗肠道病毒71型试验的细胞病变效果图。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明做进一步说明，但本发明不仅仅限于这些实施例。
实施例1
一种治疗手足口病的复方桑黄药物，按重量份数计，所述复方桑黄药物的原料包括：桑黄多糖15份和中药复方组合物2份；所述中药复方组合物的制备方法为：将甘草、板蓝根和连翘于60℃烘箱干燥，粉碎后过50目筛，取所得的甘草粉10份、板蓝根粉10份和连翘粉5份混匀，放入砂锅中添加蒸馏水1000份浸泡30min，大火加热煮沸后改文火熬制2h，过滤冷却后，3000r/min离心，浓缩，冷冻干燥得到中药复方组合物。
所述的桑黄多糖的制备方法，包括以下步骤：
（1）桑黄菌种接种于固体发酵培养基上，固体发酵培养基的配方为：按质量百分数计，巨菌草35%，玉米粉25%，黄豆粉10%、小麦麸粉8%，CaSO42%，含水量20%，pH为6；25℃避光培养30d，得到桑黄菌丝体；
（2）将步骤（1）得到的桑黄菌丝体于60℃烘箱干燥，粉碎后过50目筛，备用；
（3）将步骤（2）所得桑黄菌丝体粉末加入蒸馏水中，桑黄菌丝体粉末与蒸馏水质量体积比为1:30，70℃浸提4h，提取结束后，进行3500r/min离心25min，取上清液备用，将离心的残渣重复提取3次，合并上清液；
（4）将步骤（3）得到的上清液在50℃、转速为40r/min进行旋转蒸发，将上清液浓缩为原来的1/10；
（5）往步骤（4）得到的浓缩液中加入3倍体积的95wt%乙醇，置于2℃中静置6h，3500r/min离心25min，得沉淀物；
（6）向步骤（5）所得沉淀物中加入蒸馏水，沉淀物与蒸馏水的质量体积比为1:2，进行搅拌复溶；用Sevag法除蛋白3次，得到桑黄粗多糖溶液；
（7）将AB-8树脂加入到步骤（6）得到的桑黄粗多糖溶液中，混匀，震荡，除色素，其中AB-8树脂的质量为步骤（5）所得沉淀物质量的20倍；
（8）将步骤（7）得到的桑黄粗多糖溶液装入透析袋，蒸馏水透析8h，每3h换水，截留分子量12000；
（9）收集步骤（8）得到的多糖透析液，浓缩，冷冻干燥，得到桑黄多糖。
如上所述的一种治疗手足口病的复方桑黄药物的制备方法：将桑黄多糖和中药复方组合物配伍制成药剂学上的剂型，或者与药剂学上所述的任一辅料混合制成药剂学上的剂型。
实施例2
一种治疗手足口病的复方桑黄药物，按重量份数计，所述复方桑黄药物的原料包括：桑黄多糖25份和中药复方组合物6份；所述中药复方组合物的制备方法为：将甘草、板蓝根和连翘于65℃烘箱干燥，粉碎后过80目筛，取所得的甘草粉15份、板蓝根粉20份和连翘粉10份混匀，放入砂锅中添加蒸馏水1000份浸泡30min，大火加热煮沸后改文火熬制2h，过滤冷却后，3500r/min离心，浓缩，冷冻干燥得到中药复方组合物。
所述的桑黄多糖的制备方法，包括以下步骤：
（1）桑黄菌种接种于固体发酵培养基上，固体发酵培养基的配方为：按质量百分数计，巨菌草45%，玉米粉20%，黄豆粉5%、小麦麸粉5%，CaSO41%，含水量24%，pH为8；30℃避光培养35d，得到桑黄菌丝体；
（2）将步骤（1）得到的桑黄菌丝体于65℃烘箱干燥，粉碎后过80目筛，备用；
（3）将步骤（2）所得桑黄菌丝体粉末加入蒸馏水中，桑黄菌丝体粉末与蒸馏水质量体积比为1:40，85℃浸提2h，提取结束后，进行4500r/min离心15min，取上清液备用，将离心的残渣重复提取3次，合并上清液；
（4）将步骤（3）得到的上清液在65℃、转速为60r/min进行旋转蒸发，将上清液浓缩为原来的1/5；
（5）往步骤（4）得到的浓缩液中加入4倍体积的95wt%乙醇，置于2~10℃中静置10h，4500r/min离心15min，得沉淀物；
（6）向步骤（5）所得沉淀物中加入蒸馏水，沉淀物与蒸馏水的质量体积比为1:5，进行搅拌复溶；用聚酰胺法除蛋白5次，得到桑黄粗多糖溶液；
（7）将AB-8树脂加入到步骤（6）得到的桑黄粗多糖溶液中，混匀，震荡，除色素，其中AB-8树脂的质量为步骤（5）所得沉淀物质量的25倍；
（8）将步骤（7）得到的桑黄粗多糖溶液装入透析袋，蒸馏水透析9h，每4h换水，截留分子量14000；
（9）收集步骤（8）得到的多糖透析液，浓缩，冷冻干燥，得到桑黄多糖。
如上所述的一种治疗手足口病的复方桑黄药物的制备方法：将桑黄多糖和中药复方组合物配伍制成药剂学上的剂型，或者与药剂学上所述的任一辅料混合制成药剂学上的剂型。
实施例3
一种治疗手足口病的复方桑黄药物，按重量份数计，所述复方桑黄药物的原料包括：桑黄多糖20份和中药复方组合物4份；所述中药复方组合物的制备方法为：将甘草、板蓝根和连翘于62℃烘箱干燥，粉碎后过65目筛，取所得的甘草粉12份、板蓝根粉15份和连翘粉8份混匀，放入砂锅中添加蒸馏水1000份浸泡25min，大火加热煮沸后改文火熬制1.5h，过滤冷却后，3300r/min离心，浓缩，冷冻干燥得到中药复方组合物。
所述的桑黄多糖的制备方法，包括以下步骤：
（1）桑黄菌种接种于固体发酵培养基上，固体发酵培养基的配方为：按质量百分数计，巨菌草40%，玉米粉22%，黄豆粉7%、小麦麸粉10%，CaSO41%，含水量20%，pH为7；28℃避光培养33d，得到桑黄菌丝体；
（2）将步骤（1）得到的桑黄菌丝体于62℃烘箱干燥，粉碎后过65目筛，备用；
（3）将步骤（2）所得桑黄菌丝体粉末加入蒸馏水中，桑黄菌丝体粉末与蒸馏水质量体积比为1:35，80℃浸提3h，提取结束后，进行4000r/min离心20min，取上清液备用，将离心的残渣重复提取3次，合并上清液；
（4）将步骤（3）得到的上清液在60℃、转速为50r/min进行旋转蒸发，将上清液浓缩为原来的1/8；
（5）往步骤（4）得到的浓缩液中加入4倍体积的95wt%乙醇，置于5℃中静置8h，4000r/min离心20min，得沉淀物；
（6）向步骤（5）所得沉淀物中加入蒸馏水，沉淀物与蒸馏水的质量体积比为1:3，进行搅拌复溶；用三氯乙酸法和酶解法除蛋白4次，得到桑黄粗多糖溶液；
（7）将AB-8树脂加入到步骤（6）得到的桑黄粗多糖溶液中，混匀，震荡，除色素，其中其中AB-8树脂的质量为步骤（5）所得沉淀物质量的22倍；
（8）将步骤（7）得到的桑黄粗多糖溶液装入透析袋，蒸馏水透析10h，每4h换水，截留分子量13000；
（9）收集步骤（8）得到的多糖透析液，浓缩，冷冻干燥，得到桑黄多糖。
如上所述的一种治疗手足口病的复方桑黄药物的制备方法：将桑黄多糖和中药复方组合物配伍制成药剂学上的剂型，或者与药剂学上所述的任一辅料混合制成药剂学上的剂型。
测试例：复方桑黄药物体外抗肠道病毒71型试验
将非洲绿猴肾（Vero）细胞铺于12孔板中，放于37°C孵箱内培养，待单层细胞铺满12孔板中每孔的80%~90%时，每孔内先用100μL的10mg/mL浓度的复方桑黄药物预处理细胞2h，将完全DMEM培养基倒掉，再加入肠道病毒71型（moi=0.5）的病毒液用正常方法感染Vero细胞，分别设置正常对组、复方桑黄药物处理组及病毒对照组，18h后观察复方桑黄药物抑制肠道病毒71型诱导的细胞病变效应的效果。试验发现，加入复方桑黄药物处理组与病毒对照组相比，细胞病变效应明显减少，说明复方桑黄药物能有效抑制肠道病毒71型诱导的细胞病变效应。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

Claims (7)

1.一种治疗手足口病的复方桑黄药物，其特征在于：按重量份数计，所述复方桑黄药物的原料包括：桑黄多糖15~25份和中药复方组合物2~6份；所述中药复方组合物的制备方法为：将甘草、板蓝根和连翘于60~65℃烘箱干燥，粉碎后过50~80目筛，取所得的甘草粉10~15份、板蓝根粉10~20份和连翘粉5~10份混匀，放入砂锅中添加蒸馏水1000份浸泡20~30min，大火加热煮沸后改文火熬制1~2h，过滤冷却后，3000~3500r/min离心，浓缩，冷冻干燥得到中药复方组合物。
2.根据权利要求1所述的一种治疗手足口病的复方桑黄药物，其特征在于：所述的桑黄多糖的制备方法，包括以下步骤：
（1）桑黄菌种接种于固体发酵培养基上，25~30℃避光培养30~35d，得到桑黄菌丝体；
（2）将步骤（1）得到的桑黄菌丝体于60~65℃烘箱干燥，粉碎后过50~80目筛，备用；
（3）将步骤（2）所得桑黄菌丝体粉末加入蒸馏水中，桑黄菌丝体粉末与蒸馏水的质量体积比为1:30~40，70~85℃浸提2~4h，提取结束后，进行离心，取上清液备用，将离心的残渣重复提取2~3次，合并上清液；
（4）将步骤（3）得到的上清液进行旋转蒸发，将上清液浓缩为原来的1/10~1/5；
（5）往步骤（4）得到的浓缩液中加入3~4倍体积的95wt%乙醇，置于2~10℃中静置6~10h后，进行离心，得沉淀物；
（6）向步骤（5）所得沉淀物中加入蒸馏水，沉淀物与蒸馏水的质量体积比为1:2~5，进行搅拌复溶；用Sevag法、聚酰胺法、三氯乙酸法和酶解法中一种或几种除蛋白3~5次，得到桑黄粗多糖溶液；
（7）将AB-8树脂加入到步骤（6）得到的桑黄粗多糖溶液中，混匀，震荡，除色素，其中AB-8树脂的质量为步骤（5）所得沉淀物质量的20~25倍；
（8）将步骤（7）得到的桑黄粗多糖溶液装入透析袋，蒸馏水透析8~10h，每3~4h换水；
（9）收集步骤（8）得到的多糖透析液，浓缩，冷冻干燥，得到桑黄多糖。
3.根据权利要求2所述的一种治疗手足口病的复方桑黄药物，其特征在于：步骤（1）中所述的固体发酵培养基的配方为：按质量百分数计，巨菌草35~45%，玉米粉20~25%，黄豆粉5~10%、小麦麸粉5~10%，CaSO41~2%，含水量20~35%，各组分的质量百分数之后为100%；所述固体发酵培养基的pH为6~8。
4.根据权利要求2所述的一种治疗手足口病的复方桑黄药物，其特征在于：步骤（3）和步骤（5）中离心处理条件为：转速3500~4500r/min，离心时间15~25min。
5.根据权利要求2所述的一种治疗手足口病的复方桑黄药物，其特征在于：步骤（4）中旋转蒸发处理的条件为：温度50~65℃，转速40~60r/min。
6.根据权利要求2所述的一种治疗手足口病的复方桑黄药物，其特征在于：步骤（8）中透析袋的截留分子量为12000~14000。
7.一种制备如权利要求1所述的治疗手足口病的复方桑黄药物的方法，其特征在于：将桑黄多糖和中药复方组合物配伍制成药剂学上的剂型，或者与药剂学上所述的任一辅料混合制成药剂学上的剂型。
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