CN1186437A - 银杏叶的提取物 - Google Patents

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Abstract

一种银杏的提取物是通过分离脂类部分,与醇混合,用有机溶剂提取以除去中性脂类,将醇性溶液溶于溶剂并经柱层离而制备的。一些提取介质用于柱层离以提取不同的部分。有兴趣的掺入局部应用组合物的部分具有脑苷脂类或二半乳糖基二甘油酯的特性。

Description

银杏叶的提取物
本发明涉及银杏(Ginkgo biloba)叶的一种新的提取物及其制备方法。
某些银杏叶的提取物广泛用于周围的和脑部动脉循环紊乱的治疗。各种制备这些提取物的方法在例如DE-B-1767098，DE-B-2117429，EP-A 0324197，EP-A 330567和EP-A 0436129中有过叙述。
本发明也提供了一种从银杏叶制备糖脂类(glycolipid)提取物的方法，包含的步骤为：
用有机溶剂提取叶子；
从叶中分离提取物；
冷却提取物以沉淀脂类部分；
从提取物中回收脂类部分；
将脂类部分与醇混合；
除去不溶性物质；
用有机溶剂提取醇性溶液以除去中性脂类；
用一些提取介质处理浓缩的醇性溶液；
纯化含有需要部分的提取介质；以及
从需要的部分中基本上除去伴随的提取介质以提供浓缩的提取物。
本发明的方法是一种从银杏叶中提取需要的部分，例如脑苷脂类，特别是二半乳糖基二甘油酯(digalactosyldiglycerides)的高效提取方法。
在本发明方法中，大体上是首先用有机溶剂例如丙酮/水提取银杏叶同时将得到的溶液用例如蒸发和冷却来浓缩。然后将溶液过滤并向沉淀中加入C1-C3醇类例如乙醇。溶液搅拌并再一次过滤。滤液用水调节并用适合的有机溶剂、特别是非极性溶剂例如庚烷提取。用非极性溶剂在应用柱层离前提取的特殊优点是此溶剂可以除去干提取物中的一大部分，典型地为30％。结果，增加了所需提取物的量，特别是二半乳糖基二甘油酯的量。醇性水相蒸发至干，或蒸发过滤并加入有机溶剂。形成的溶液过滤并以溶剂提取介质经层离分离法精制。
优选将浓缩的醇溶液溶解的有机溶剂与首先用于层离柱的提取介质相同。这可使层离过程最佳化。
在本发明优选实施方案中，已除去中性脂类的浓缩醇性溶液已用至少两种不同的提取介质处理。这种处理的优点是从用于柱的物质中提取所需的部分变得容易。
优选的提取介质至少有一种是有机溶剂。
在本发明的优选实施方案中，有机溶剂为丙酮和甲苯的混合物。我们发现这种溶剂在把感兴趣的提取物作为提取目标方面是有特别的优势的。混合物的力度依赖于做为目标的提取物。优选的有机溶剂为5％至80％丙酮/甲苯。在一种情况下，有机溶剂为20％至80％丙酮/甲苯，最优选的为40％至50％丙酮/甲苯。
在另一种情况下，银杏酸，通常是不需要的，作为被提取的对象时丙酮/甲苯优选的为5％至30％，特别是大致为20％。
在本发明的另一个实施方案中，用于处理已经除去中性脂类的浓缩醇性溶液的提取介质之一为有机溶剂和醇的混合物。优选的醇为C1至C3醇，特别是乙醇。在这种情况下，优选的溶剂为丙酮。提取的介质依赖于被提取的目标可以是5％至85％乙醇/丙酮。在一种情况下为8％乙醇/丙酮而另一种情况中为80％乙醇/丙酮。
提取介质之一可以是丙酮，它也是目标提取物的有用溶剂。
在本发明的一个优选实施方案中，醇溶液在用提取介质处理之前先被浓缩。典型的是蒸发缩浓醇性溶液。
在本发明的一个实施方案中，提取得到的所需部分经浓缩，再溶解和再通过柱层离操作得到更浓的所需部分。含有所需部分的介质优选的是用活性炭处理并过滤所需的提取物以除去活性炭来精制。
在本发明的一个优选实施方案中，浓缩的醇性溶液溶于40％丙酮/甲苯，用于柱层离，同时20％丙酮/甲苯，40％丙酮/甲苯，丙酮和8％乙醇/丙酮被相继用于该层离柱。在此情况下，将用丙酮提取的部分浓缩并再溶解于40％丙酮/甲苯中然后再通过柱层离操作。此情况中的一个提取物具有二半乳糖基二甘油酯的特性，另一个具有脑苷脂的特性。
在本发明的另一优选实施方案中，将浓缩的醇性溶液溶于80％丙酮/甲苯，用于柱层离，同时80％丙酮/甲苯，丙酮，和80％乙醇/丙酮相继用于该层离柱。在这种情况下，优选将用丙酮提取的部分浓缩、洗涤并干燥。此情况中的提取物具有二半乳糖基二甘油酯的特性。
在本发明的更优选实施方案中，用有机剂溶剂处理醇性溶液以除去中性脂类，之后，醇性溶液经浓缩并过滤。在此情况下，优选的是将沉淀溶于50％丙酮/甲苯，用于柱层离，同时将50％丙酮/甲苯和8％乙醇/丙酮相继用于该层离柱。优选的是将乙醇/丙酮部分浓缩，再溶于70％丙酮/甲苯并再通过柱层离操作。此情况中的提取物具有特别高纯度的二半乳糖基二甘油酯特性，纯度大于80％，在某些情况下近于95％。
本发明也提供包含本发明提取物的一种局部使用的组合物。
参考下列的实施例对本发明作更详细的叙述。
实施例1
第一步
60千克磨细的银杏叶用500升60％丙酮水混合物于55-60℃温度下在逆流提取装置中提取。
提取液与叶分离并用蒸发法浓缩。
第二步
浓缩液冷却至8-10℃，并在此温度保持3小时。
沉淀的脂类用滗析法回收。
回收的脂类溶于搅拌的2.9千克丙酮和0.7千克去离子水的溶液中。进一步加入30千克去离子水。
溶液连续搅拌并冷却至8-10℃，并在滗析前维持至少3小时。
第三步
第二步得到的湿的滗析脂类加到80千克乙醇中并搅拌3小时。
不溶的物质用滗析法除去。
第四步
第三步得到的乙醇溶液调节至含12-15％的水。
溶液用60升庚烷提取。
乙醇-水相蒸发至含高于85％干提取物。
第五步
由第四步得到的含有提取物的醇性溶液溶于40％丙酮/甲苯，并在大气温下保持过夜。
此溶液过滤并用于装有18千克硅胶的填充柱。将下列溶剂泵至并通过层离柱：200升20％丙酮/甲苯，400升40％丙酮/甲苯，100升丙酮和120升8％乙醇/丙酮。
第六步
应用于柱的第三种提取介质(丙酮)提取的所需部分经蒸发并再溶解于40％丙酮/甲苯，之后，用上述相同的条件再通过柱操作，同时收集三个主要部分。
第七步
活性炭(1份)加入到所需的丙酮溶液中(10份干提取物)并将溶液搅拌30分钟并过滤。得到的溶液经蒸发得120g棕绿色固体。此部分用HPLC层离和质谱鉴定其特性。
用第一种(20％丙酮/甲苯)提取溶剂实质上除去了所有的中性脂类和银杏酸的提取物用HPLC分析，显示具有三个主峰。
第一个峰被定性为单半乳糖基二甘油酯。第三个峰被定性为二半乳糖基二甘油酯，这是所需要的提取物。在单和二半乳糖基二甘油酯之间洗脱的峰，在性质上看可能是脑苷脂类。
上述第六步得到的三个部分中的第二部分含有高于70至80％的相当于第二个主峰的物质。这个部分在性质上可能是脑苷脂类。
实施例2
第一步
35千克磨细的银杏叶用280升60％丙酮水混合物在逆流提取装置中在55-60℃温度下提取。
提取液与叶分离并用蒸发法浓缩。
第二步
浓缩液冷却至8-10℃，同时在此温度下保持3小时。
沉淀的脂类用滗析法回收。
回收的脂类溶于搅拌的1.4千克丙酮和1.0千克去离子水的溶液中。进一步加入18千克去离子水。
溶液连续搅拌并冷却到8-10℃，在滗析前保持至少3小时。
第三步
第二步得到的湿的滗析的脂类加至34千克乙醇中并搅拌3小时。
不溶性物质用滗析法去除。
第四步
第三步得到的乙醇溶液调节至含12-15％水。
溶液用40升庚烷提取。
乙醇-水相蒸发至含高于85％的干提取物。
第五步
第四步得到的提取物溶于80％丙酮/甲苯中并在大气温度下保持过夜。
此溶液经过滤后用于装有18千克硅胶的填充柱。将下列溶剂泵至并通过该柱：140升80％丙酮/甲苯，130升丙酮和120升80％乙醇/丙酮。
第六步
丙酮部分蒸发，将得到的物质用丙酮洗几次。半固体物干燥得浅黄色固体，用HPLC分析鉴定和定量为95％纯度的二半乳糖基二甘油酯(45g)。
二半乳糖二甘油酯的甘油酯部分用水解和甲酯的气相层离分析鉴定。
C16：0    15.3％
C16：1    10.4％
C18：0    2.9％
C18：2    8.0％
C18：3    55.7％
其它      17.7％
实施例3
第一步
60千克磨细的银杏叶用500升60％丙酮水混合物在逆流提取装置中于55-60℃温度下提取。
提取液与叶分离然后用蒸发法浓缩。
第二步
浓缩物冷却至8-10℃，并在此温度下保持3小时。
沉淀的脂类用滗析法回收。
回收的脂类溶解于搅拌的2.9千克丙酮和0.7千克去离水的溶液中。进一步加入30千克去离子水。
此溶液连续搅拌并冷却至8-10℃，在滗析前至少保持3小时。
第三步
第二步得到的湿滗析脂类加入到80千克乙醇中并搅拌3小时。
不溶性物质用滗析法除去。
第四步
第三步得到的乙醇溶液调节至含12-15％的水。
此溶液用60升庚烷提取。
蒸发乙醇并将得到的溶液过滤。
第五步
第四步得到的沉淀溶于50％丙酮/甲苯，并在大气温度保持过夜。
此溶液经过滤并用于装有18千克硅胶的填充柱。将下列溶剂泵至并通过柱：180升50％丙酮/甲苯，和120升8％乙醇/丙酮。
第六步
乙醇/丙酮部分经蒸发并再溶解于70％丙酮/甲苯中，同时再经过柱层离操作。
第七步
富含二半乳糖基二甘油酯的所需部分经蒸发至干得浅棕色固体。用丙酮沉淀得二半乳糖基二甘油酯。
二半乳糖基二甘油酯和脑苷酯提取物在化妆品和护肤应用中显示活性。
本发明不受以上叙述的特定实施方案所局限，细节可能有所变动。

Claims (45)

1、银杏叶提取物的制备方法，其中包含的步骤为：
用有机溶剂提取其叶子；
分离提取物与叶子；
冷却提取物以沉出脂类部分；
从提取物回收脂类部分；
混合脂类部分与醇；
除去不溶性物质；
用有机溶剂提取醇溶液以除去中性脂类；
用几种提取介质处理浓缩的醇溶液；
纯化含有所需部分的提取介质；以及
从所需的部分中实质地除去伴随的提取介质以提供浓缩的提取物。
2、如权利要求1所述的方法，其中，用于处理醇溶液以除去中性脂类的有机溶剂为非极性溶剂。
3、如权利要求2所述的方法，其中，该非极性溶剂为庚烷。
4、如前述任何一项权利要求所述的方法，其中，浓缩的醇溶液被溶于有机溶剂并将此溶液用于层离柱，同时将提取介质用于该层离柱。
5、如权利要求4所述的方法，其中，溶解浓缩醇性溶液的有机溶剂与用于柱的第一种提取介质相同。
6、如前述任何一项权利要求所述的方法，其中，已经除去中性脂类的醇性溶液至少用两种不同的提取介质处理。
7、如权利要求6所述的方法，其中，至少有一种提取介质为有机溶剂。
8、如权利要求7所述的方法，其中，有机溶剂为丙酮与甲苯的混合物。
9、如权利要求8所述的方法，其中，有机溶剂为5％至80％丙酮/甲苯。
10、如权利要求9所述的方法中，其中，有机溶剂为20％至80％丙酮/甲苯。
11、如权利要求10所述的方法，其中，溶剂为40％丙酮/甲苯。
12、如权利要求10所述的方法，其中，溶剂为50％丙酮/甲苯。
13、如权利要求9所述的方法，其中，溶剂为5至30％丙酮/甲苯。
14、如权利要求13所述的方法，其中，溶剂为20％丙酮/甲苯。
15、如前述任何一项权利要求所述的方法，其中，用于处理已经除去中性脂类的浓缩醇性溶液的提取介质中的一种为有机溶剂和醇的混合物。
16、如权利要求15所述的方法，其中，醇为C1至C3醇。
17、如权利要求16所述的方法，其中，醇为乙醇。
18、如权利要求15至17任何一项所述的方法，其中，溶剂为丙酮。
19、如权利要求15所述的方法，其中，提取介质为5％至85％乙醇/丙酮。
20、如权利要求19所述的方法，其中，提取介质中的一种为8％乙醇/丙酮。
21、如权利要求19所述的方法，其中，提取介质的一种为80％乙醇/丙酮。
22、如权利要求4至21中任何一项所述的方法，其中，提取介质中的一种为丙酮。
23、如前述任何一项权利要求所述的方法，包括用有机溶剂沉淀所需部分的步骤。
24、如前述任何一项权利要求所述的方法，其中，在用提取介质处理之前浓缩醇溶液。
25、如权利要求24所述的方法，其中，醇溶液用蒸发法浓缩。
26、如权利要求4至25中任何一项所述的方法，其中，由提取所得到的需要部分经浓缩、再溶解和再通过柱层离操作以产生更浓缩的需要部分。
27、如权利要求26所述的方法，其中，含有所需部分的介质以活性炭处理并过滤所需的提取物以除去活性炭进行精制。
28、如权利要求4至27中任何一项所述的方法，其中，浓缩的醇溶液溶解于40％丙酮/甲苯中，并用于柱层离，同时20％丙酮/甲苯、40％丙酮/甲苯、丙酮和8％乙醇/丙酮相继应用于该层离柱。
29、如权利要求28所述的方法，其中，用丙酮提取的部分被浓缩、再溶于40％酮/甲苯并再通过柱层离操作。
30、如权利要求28或29所述的方法，其中，一种提取物具有二半乳糖基二甘油酯的特性。
31、如权利要求28或29所述的方法，其中，一种提取物具有脑苷脂的特性。
32、如权利要求4至27中任何一项所述的方法，其中，浓缩的醇溶液溶于80％丙酮/甲苯，用于柱层离并将80％丙酮/甲苯、丙酮和80％乙醇丙酮相继用于该层离柱。
33、如权利要求32所述的方法，其中，用丙酮提取的部分被浓缩、洗涤和干燥。
34、如权利要求32或33所述的方法，其中，用丙酮提取的部分具有二半乳糖基二甘油酯的特性。
35、如权利要求1至27中任何一项所述的方法，其中，用有机溶剂处理后以除去中性脂类的醇性溶液被浓缩和过滤。
36、如权利要求35所述的方法，其中，沉淀溶于50％丙酮/甲基，用于柱层离，同时将50％丙酮/甲苯和8％乙醇/丙酮相继应用于层离柱。
37、如权利要求36所述的方法，其中，乙醇/丙酮部分被浓缩、再溶解于70％丙酮/甲苯并再通过柱层离操作。
38、如权利要求36或37所述的方法，其中，所需部分具有二半乳糖基二甘油酯的特性。
39、如前文实质说明的参考实施例1，2和/或3的方法。
40、经前述任何一项权利要求所述的方法制备的银杏叶提取物。
41、如权利要求40所述的具有二半乳糖基二甘油酯的特性的提取物。
42、如权利要求41所述的提取物，其中，该提取物的纯度高于80％。
43、如权利要求41或42所述的方法，其中，该提取物的纯度高于95％。
44、如权利要求40所述的提取物，具有脑苷酯的特性。
45、包含如权利要求40至44中任何一项所述的提取物的局部应用组合物。
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