CN118641658A - 鼻用医疗器械中两种化学药物识别及含量测定检验方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了鼻用医疗器械中两种化学药物识别及含量测定检验方法，采用高效液相色谱法(HPLC)进行初筛，高分辨液质联用法(HRMS/MS)或等效的液质联用法进行验证，验证后的阳性样品采用高效液相色谱法(HPLC)进行含量测定，能够简单高效得到较高含量的检测指标，保证专属性、检测限、耐用性等指标。

Description

鼻用医疗器械中两种化学药物识别及含量测定检验方法
技术领域
本发明属于医疗检测技术领域，涉及鼻用医疗器械中两种化学药物识别及含量测定检验方法。
背景技术
健康产品非法添加药物由来已久，有些企业为了使产品快速达到效果，在产品中非法添加激素类、抗生素类或中药提取物等药物，近年来在医疗器械产品中检出化学药物成分的情况屡见不鲜。
萘甲唑啉又称萘唑啉、鼻眼净，滴鼻净，是一种作用于循环系统的血管活性药物，属拟肾上腺素类药，有收缩血管的药理活性，局部应用可解除鼻粘膜肿胀和充血。长期使用可出现反弹性充血，也可出现萎缩性鼻炎且可有局部刺激感、恶心、头痛等症状。滴药过多及吞咽过多可致中毒，另外萘甲唑啉对于萎缩性鼻炎和鼻腔干燥者鼻部疾病禁止使用，不仅无治疗作用，容易造成药物性鼻炎，反而加重患者病情。
氯苯那敏，又叫扑尔敏，氯苯吡胺、氯屈米通，为第一代抗组胺药物，对抗过敏反应所致的毛细血管扩张，降低毛细血管的通透性，减轻鼻涕、鼻塞、打喷嚏等作用，缓解支气管平滑肌收缩所致的喘息，该药品抗组胺作用较持久，也具有明显的中枢抑制作用，能增加麻醉药、镇痛药、催眠药和局麻药的作用。临床常用于过敏性疾病(过敏性鼻炎、荨麻疹等)及普通感冒的治疗。价格低廉，不良反应有口干、眩晕、恶心、嗜睡，心悸或皮肤淤斑，出血倾向，但较少见，该药可诱发癫痫，故有癫痫病史的患者禁用。
鼻用医疗器械包括鼻用液体敷料、冷敷凝胶和冷敷凝露等，临床应用较广。从国家药品监督管理局官网上查询中心收集的21批鼻用医疗器械产品的备案信息，其备案内容均没有表明产品中含有萘甲唑啉、氯苯那敏药物成分，另外大多明确产品中不含有发挥药理学的成分，治疗方式仅仅是物理疗法。从国家监管的角度来看，医疗器械中含有化学成分、中药材或其提取物，如果主要依靠药物来发挥治疗作用，是按照药品管理的，而不能按照医疗器械审批。建立鼻用医疗器械中萘甲唑啉和氯苯那敏的检验方法非常迫切。
发明内容
本发明旨在提供鼻用医疗器械中两种化学药物识别及含量测定检验方法，能够简单高效得到较高含量的检测指标，保证专属性、检测限、耐用性等指标。
本发明为实现技术目的采用的方案为：
鼻用医疗器械中两种化学药物识别及含量测定检验方法，包括：
取供试品溶液及盐酸萘甲唑啉和马来酸氯苯那敏混合的对照品溶液，采用高效液相色谱法(HPLC)进样分析，将二者结果进行对比，以保留时间(tR)及190nm～400nm的紫外光谱图一致性作为初筛依据；
取供试品溶液及盐酸萘甲唑啉和马来酸氯苯那敏混合的对照品溶液，采用高分辨液质联用法(HRMS/MS)进样分析，将供试品溶液与对照品溶液的母离子及碎片离子信息进行对比，二者一致则确认该样品中含有相应的药物成分；
取对照品储备溶液，配制成系列浓度的标准溶液，采用高效液相色谱法(HPLC)进样分析，绘制浓度-峰面积标准曲线，根据阳性样品的峰面积计算样品中药物的量。
优选地，供试品溶液按照以下方法制备：取供试品加水至溶液质量体积浓度为0.04g/mL，涡旋3分钟，超声处理20分钟，放冷，滤过，取续滤液。
优选地，盐酸萘甲唑啉和马来酸氯苯那敏混合的对照品溶液中盐酸萘甲唑啉和马来酸氯苯那敏的浓度为10μg/mL。
优选地，高效液相色谱法的条件包括：
柱温：30℃；样品室温度：10℃；
流速：1.0mL/min；
检测波长：280nm，扫描范围：190nm～400nm；
进样量：10μL；
流动相：A(0.1％甲酸水溶液)，B(乙腈)，梯度条件如下：
更优选地，高效液相色谱法采用Phenomenex Gemini C18柱。
优选地，高分辨液质联用法的色谱条件包括：
柱温：35℃，样品室温度：10℃；
流速：0.3mL/min；
进样量：1μL；
流动相：A(0.1％甲酸水溶液)，B(乙腈)，梯度条件如下：
质谱条件包括：
离子源：ESI正离子模式
干燥器温度：325℃；干燥器流速：8L/min；
雾化器压力：35Psi；
毛细管电压：3500V；
毛细管出口电压：140V；
两种药物测定参数如下：
注：*为基峰。
更优选地，高分辨液质联用法采用Agilent Poroshell 120EC-C18色谱柱以及Agilent6530Q-TOF型高分辨液质联用仪。
优选地，对照品储备溶液按照以下方法配制：分别取盐酸萘甲唑啉和马来酸氯苯那敏对照品，精密称定，置棕色容量瓶中，加入水溶解后定容，摇匀，配制成浓度各为1mg/mL的对照品储备溶液。
优选地，两种对照品的色谱峰与相邻色谱峰之间的分离度大于1.5；两种对照品的色谱峰信噪比(S/N)均大于3:1。
本发明的有益效果在于：
本方法采用高效液相色谱法(HPLC)进行初筛，高分辨液质联用法(HRMS/MS)或等效的液质联用法进行验证，验证后的阳性样品采用高效液相色谱法(HPLC)进行含量测定，目前开发的方法专属性、检测限、耐用性、精密度均满足要求。实验中采用本方法，从市售多批次鼻用医疗器械中检出治疗鼻炎的西药成分萘甲唑啉和氯苯那敏。
附图说明
图1两种药物的典型色谱图。
图2阳性样品溶液色谱图(液体敷料，山东海宝药业有限公司，批号20210601)。
图3阴性样品溶液色谱图(医用敷料鼻腔修复液，长春市奥朗特生化药械科研基地有限公司，批号20220101)。
图4盐酸萘甲唑啉及马来酸氯苯那敏对照品光谱图。
图5阳性样品溶液光谱图(液体敷料，山东海宝药业有限公司，批号20210601)。
图6盐酸萘甲唑啉对照品检测限色谱图。
图7盐酸萘甲唑啉色谱图及标准曲线。
图8马来酸氯苯那敏对照品检测限色谱图。
图9马来酸氯苯那敏色谱图及标准曲线。
图10色谱柱Superiorex ods(液体敷料，山东海宝药业有限公司，批号20210601)。
图11色谱柱Phenomenex Gemini C18(液体敷料，山东海宝药业有限公司，批号20210601)。
图12色谱柱Agela technologies venusil XBP C18(液体敷料，山东海宝药业有限公司，批号20210601)。
图13柱温25℃(液体敷料，山东海宝药业有限公司，批号20210601)。
图14柱温30℃(液体敷料，山东海宝药业有限公司，批号20210601)。
图15柱温35℃(液体敷料，山东海宝药业有限公司，批号20210601)。
图16流速0.9mL·min-1(液体敷料，山东海宝药业有限公司，批号20210601)。
图17流速1.0mL·min-1(液体敷料，山东海宝药业有限公司，批号20210601)。
图18流速1.1mL·min-1(液体敷料，山东海宝药业有限公司，批号20210601)。
图19盐酸萘甲唑啉对照品二级质谱图。
图20阳性样品二级质谱图-盐酸萘甲唑啉成分(液体敷料(鼻舒通)，山东海宝药业有限公司，批号20210601)。
图21马来酸氯苯那敏对照品二级质谱图。
图22阳性样品二级质谱图-马来酸氯苯那敏成分(液体敷料(鼻舒通)，山东海宝药业有限公司，批号20210601)。
具体实施方式
为了更清楚地说明本发明，下面结合实施例并对照附图对本发明作进一步详细说明。本领域技术人员应当理解，下面所具体描述的内容是说明性的而非限制性的，不应以此限制本发明的保护范围。
实验设计主要从两方面进行考虑：一是样品处理方法，旨在简单高效得到较高含量的检测指标；二是分析方法，保证专属性、检测限、耐用性等指标。
本方法适用于以在创面表面形成保护层、物理退热、物理屏障等原理的鼻用医疗器械。品名举例：液体敷料、冷敷凝胶、冷敷凝露、单体银鼻炎抗菌喷剂等。
本方法中的室温，如无特殊规定，应为10℃～30℃。
本方法中试验用水应符合GB/T 6682的要求。
本方法中所用容器如无特殊规定，应为硅硼酸盐玻璃容器。
本方法中所涉及的量取，应使用符合相应国家标准规定的准确度要求的移液管量取。
实施例
本方法采用高效液相色谱法(HPLC)进行初筛，高分辨液质联用法(HRMS/MS)或等效的液质联用法进行验证，验证后的阳性样品采用高效液相色谱法(HPLC)进行含量测定。主要包括以下几个步骤：
一、供试品溶液的制备
取供试品1g，加水稀释至25mL，涡旋3分钟，超声处理20分钟，放冷，滤过，取续滤液，必要时可进行适当倍数的稀释。
二、高效液相色谱法
2.1仪器与试剂
2.1.1仪器
高效液相色谱仪，配有二极管阵列检测器。
2.1.2试剂
a)乙腈：色谱纯，CAS#75-05-8；
b)甲酸：色谱纯，CAS#64-18-6；
c)两种对照品信息见表1。
表1.两种对照品信息
2.2对照品储备溶液及混合对照品溶液的配制
分别取盐酸萘甲唑啉和马来酸氯苯那敏对照品各约10mg，精密称定，置10mL棕色容量瓶中，加入水溶解后定容，摇匀，配制成浓度各为1mg/mL的对照品储备溶液。精密量取以上两种对照品储备液各1mL，置同一100mL棕色量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液。
2.3高效液相色谱条件
色谱柱：Phenomenex Gemini C18柱(250×4.6mm，5μm)或其他等效色谱柱。
柱温：30℃，样品室温度：10℃；
流速：1.0mL/min；
检测波长：280nm，扫描范围：190nm～400nm；
进样量：10μL。
流动相：A(0.1％甲酸水溶液)，B(乙腈)，梯度条件见表2。
表2.HPLC法流动相梯度条件
2.4系统适应性试验
2.4.1分离度
取盐酸萘甲唑啉储备液1mL和马来酸氯苯那敏对照品储备液2.5mL置50mL棕色容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，制成含盐酸萘甲唑啉浓度20mg/L，马来酸氯苯那敏50mg/L混合对照溶液，取10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，两种对照品的色谱峰与相邻色谱峰之间的分离度应大于1.5。
2.4.2灵敏度
取2.2中两种对照品储备溶液适量，分别用水稀释至表3中“检出限(LOD)”的浓度，取10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，两种对照品的色谱峰信噪比(S/N)均应大于3:1。
表3.两种药物灵敏度要求
三、高分辨液质联用法
3.1仪器与试剂
3.1.1仪器
高分辨液质联用仪
3.1.2试剂
a)乙腈：色谱纯，CAS#75-05-8；
b)甲酸：色谱纯，CAS#64-18-6；
c)两种对照品同2.1.2。
3.2对照品溶液配制
精密量取2.2项下的对照品储备液各1mL，置同一100mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。精密量取1mL，置100mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即制成100ng/mL的对照品溶液。
3.3色谱条件
色谱柱：Agilent Poroshell 120EC-C18 50×2.1mm 2.7μm
柱温：35℃，样品室温度：10℃；
流速：0.3mL/min；
进样量：1μL；
流动相：A(0.1％甲酸水溶液)，B(乙腈)，梯度条件见表4。
表4.HPLC-HRMS/MS法流动相梯度条件
3.4质谱条件
仪器型号：Agilent6530Q-TOF型高分辨液质联用仪。
离子源：ESI正离子模式
干燥器温度：325℃；
干燥器流速：8L/min；
雾化器压力：35Psi；
毛细管电压：3500V；
毛细管出口电压：140V；
两种药物测定参数见表5。
表5.两种药物检测模式、二级能量及碎片离子
注：*为基峰
四、药物识别及其含量测定
取步骤一制备的供试品溶液及2.2制备的混合对照品溶液，按照2.3的方法进样分析。将二者结果进行对比，以保留时间(tR)及190nm～400nm的紫外光谱图一致性作为初筛依据。
取可能含有药物的供试品溶液及相应3.2制备的混合对照品溶液，按照3.3、3.4的方法进样分析。将供试品溶液与对照品溶液的母离子及碎片离子信息进行对比，二者一致则确认该样品中含有相应的药物成分。
取2.2中对照品储备溶液，配制成系列浓度的标准溶液，按照2.3的方法进样分析。绘制浓度-峰面积标准曲线，根据阳性样品峰面积计算样品中药物的量。图1给出了两种药物的典型色谱图。
本方法中给出了萘甲唑啉和氯苯那敏两种药物的识别和含量测定方法，如关注其他可能添加的药物，也可采用经方法学验证的方法进行分析。
应用例
一、HPLC-DAD方法学验证
1、仪器与试药
Waters e2695型高效液相色谱仪，二极管阵列检测器(美国沃特世公司)；Sartorius BP211D型电子分析天平(德国赛多利斯公司)；KH-700DE数控超声仪(昆山禾创超声仪器有限公司)。
盐酸萘甲唑啉对照品(来源：中国食品药品检定研究院，批号：100111-202105，含量：99.9％)；马来酸氯苯那敏对照品(来源：中国食品药品检定研究院，批号：100047-202008，含量：99.7％)乙腈(色谱级)；甲酸(色谱级)；水为超纯水。鼻用医疗器械样品具体信息见下表：
表6.鼻用医疗器械样品信息
2、色谱条件
色谱柱：Phenomenex Gemini C18柱(250×4.6mm，5μm)，以0.1％甲酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，按下表中规定进行梯度洗脱；检测波长为280nm；柱温为30℃；进样体积10μL。理论板数按萘甲唑啉峰计算不低于2000。
表7.梯度洗脱程序
3、溶液的制备
3.1对照品溶液的制备：取盐酸萘甲唑啉及马来酸氯苯那敏对照品各约10mg，精密称定，置10mL棕色量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1mL约各含1mg的溶液，作为两种对照品储备液。精密量取以上两种对照品储备液各1mL，置同一100mL棕色量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液。即得。
3.2供试品溶液的制备：取供试品1g，加水稀释至25mL，涡旋3分钟，超声处理20分钟，放冷，滤过，取续滤液，即得。
4、专属性试验
取混合对照品溶液及供试品溶液各10μL，按照2项下的色谱条件进行测定，结果鼻用医疗器械阳性样品中呈现与盐酸萘甲唑啉及马来酸氯苯那敏对照品保留时间相同的色谱峰，且相应色谱峰的紫外-可见吸收光谱与盐酸萘甲唑啉及马来酸氯苯那敏对照品相同，而阴性样品则无相对应的色谱峰。见图1～图5。
5、检出限及定量限
参照《中国药典》2020年版四部通则9101分析方法验证指导原则信噪比法。分别将盐酸萘甲唑啉对照品溶液和马来酸氯苯那敏溶液逐步稀释，分别在其最大吸收波长280nm，262nm波长处，以信噪比S/N约为3时的溶液浓度，得出最小检出浓度盐酸萘甲唑啉(LOD)0.05μg/mL，马来酸氯苯那敏(LOD)0.2μg/mL，仪器检测限(IDL)0.5ng，对应的方法检测限(MDL)为1.25μg/g，见图6、图8。
6、线性关系
精密称取盐酸萘甲唑啉对照品适量，用水配制成盐酸萘甲唑啉质量浓度分别为1.03、5.13、10.27、20.53、51.34、102.67μg/mL的系列线性对照品溶液，依次进样分析，记录峰面积，以对照品质量浓度(μg/mL)为横坐标，以峰面积为纵坐标进行线性回归，盐酸萘甲唑啉的回归方程为：y＝20965x–11426，r＝0.9999。结果表明：盐酸萘甲唑啉在
1.03～102.67μg/mL范围内，线性关系良好，结果见图7。
精密称取马来酸氯苯那敏对照品适量，用水配制成马来酸氯苯那敏质量浓度分别为5.09、10.18、20.36、50.90、101.80、203.60μg/mL的系列线性对照品溶液，依次进样分析，记录峰面积，以对照品质量浓度(μg/mL)为横坐标，以峰面积为纵坐标进行线性回归，盐酸萘甲唑啉的回归方程为：y＝3313X+1041，r＝0.9999。结果表明：马来酸氯苯那敏在5.09～203.60μg/mL范围内，线性关系良好，结果见图9。
7、重复性试验
取阳性样品溶液(液体敷料，山东海宝药业有限公司，批号20210601)在上述色谱条件下进样10μL，按照“供试品溶液制备项”下方法平行制备6份，按拟定的测定方法测定萘甲唑林，方法重复性良好，结果见表8。
表8.重复性试验
8、回收率试验
精密量取已知含量(液体敷料，山东海宝药业有限公司，批号20210601含盐酸萘甲唑啉0.3536mg/mL，马来酸氯苯那敏1.5648mg/mL)的阳性样品4mL，共6份，分别置100mL量瓶中，分别加盐酸萘甲唑啉对照品储备液溶液1.8mL和马来酸氯苯那敏对照品储备溶液5mL，按照“供试品溶液制备项”下方法制备，按拟定的测定方法测定并计算，结果见表9。结果表明，萘甲唑啉平均回收率为94.5％，RSD为0.8％，氯苯那敏平均回收率为99.8％，RSD为0.3％。本方法加样回收率良好。
表9.回收率试验
9、耐用性考察
选取三根不同型号的色谱柱，Superiorex ods(250×4.6mm，5μm)；PhenomenexGemini C18(250×4.6mm，5μm)；Agela technologies venusil XBP C18(250×4.6mm，5μm)，按2项色谱条件进样，记录色谱图，见表10和图10～图12，结果鼻用医疗器械阳性样品溶液中，萘甲唑啉在3根色谱柱上均能与其他组分有效分离，保留行为稳定可靠，对色谱柱耐用性高。另外考察了不同柱温及流速色谱保留行为，见表11～表12和图13～图18，柱效均都能满足要求，耐用性良好。
表10.色谱柱耐用性(液体敷料，山东海宝药业有限公司，批号20210601)
表11.柱温耐用性(液体敷料，山东海宝药业有限公司，批号20210601)
表12.流速耐用性(液体敷料，山东海宝药业有限公司，批号20210601)
综上所述，目前开发的方法专属性、检测限、耐用性、精密度均满足要求。
二、HPLC-MS/MS方法确认
1、仪器与试药
Agilent 6530B Accurate-Mass Q-TOF，Sartorius BP211D型电子分析天平(德国赛多利斯公司)；KH-700DE数控超声仪(昆山禾创超声仪器有限公司)。
盐酸萘甲唑啉对照品(来源：中国食品药品检定研究院，批号：100111-202105，含量：99.9％)；马来酸氯苯那敏对照品(来源：中国食品药品检定研究院，批号：100047-202008，含量：99.7％)；乙腈(色谱级)；甲酸(色谱级)；乙醇(色谱级)；水为超纯水。鼻用医疗器械样品具体信息同表6。
2、色谱质谱条件
色谱柱：Agilent Poroshell 120EC-C18(3.0×50mm，2.7μm)，流动相：0.1％甲酸-乙腈(70:30)；进样量：1μL；流速：0.3mL/min。ESI+扫描，毛细管电压3500V，毛细管出口电压140V，干燥气温度：325℃，干燥气流速：8L/min，雾化器压力：35psi，碰撞能量10V；扫描范围50～2000m/z。
3、溶液的制备
同HPLC-DAD方法学验证3项下的溶液制备。
4、确认实验
取混合对照品溶液、供试品溶液按HPLC-MS/MS方法确认2项下的色谱质谱条件进样。结果鼻用医疗器械中阳性样品呈现与2种对照品保留时间相同的离子峰，且二级质谱均与盐酸萘甲唑啉及马来酸氯苯那敏对照品一致，阴性样品没有相同的质谱峰，见图19～图22和表13～表14。
表13.盐酸萘甲唑啉对照品和鼻用医疗器械阳性样品的数据表
表14.马来酸氯苯那敏对照品和鼻用医疗器械阳性样品的数据表
三、样品检测结果
阳性结果的判定原则：供试品色谱图中，应不得出现与盐酸萘甲唑啉对照品色谱保留时间相同的色谱峰。若出现保留时间相同的色谱峰，采用二极管阵列检测器比较相应色谱峰的紫外-可见吸收光谱，吸收光谱在210～400nm波长范围应不相同，若吸收光谱相同，则视为阳性检出。
测定结果:按照本申请的检验方法对中心收集的21批鼻用医疗器械进行检验，结果12批样品中检出萘甲唑啉成分，3批样品中同时检出萘甲唑啉及氯苯那敏成分；对检出的阳性样品进行质谱方法确认，结果15批阳性样品的母离子峰、二级质谱的主要碎片离子峰均与盐酸萘甲唑啉对照品一致，结果3批阳性样品的母离子峰、二级质谱的主要碎片离子峰均与氯苯那敏对照品一致，见表15～表18。
表15.鼻用医疗器械中萘甲唑啉的测定结果
表16.鼻用医疗器械中萘甲唑啉的质谱确认结果
表17.鼻用医疗器械中氯苯那敏的测定结果
表18.鼻用医疗器械中氯苯那敏的质谱确认结果
萘甲唑啉市售的国药准字鼻用制剂为盐酸萘甲唑啉滴鼻液，是《中国药典》2020年版收载品种，流动相体系采用的是甲醇-水-三乙胺-磷酸(50：50：0.25：0.75)。盐酸萘甲唑啉滴鼻液的流动相系统也可用于鼻用医疗器械中萘甲唑啉的检测，缺点是难满足通量检测，原因在于鼻用类医疗器械(敷料、凝胶、凝露等)的处方、生产工艺各不相同，含有的基质和化学成分相对药品盐酸萘甲唑啉滴鼻液更为复杂，一旦连续进样，样品中难以洗脱的成分会淤塞色谱柱，并和色谱柱中残留成分交叉污染。本中心采用乙腈-0.1％甲酸水溶液梯度洗脱，优点是流动相仅为两相，简单易制稳定性好，萘甲唑啉和氯苯那敏可以有效分离，在萘甲唑啉和氯苯那敏出峰后，其他化学成分可被后续高比例乙腈洗脱出来，适用于大通量检测。实验证明，连续进样十余家企业生产的21批次样品，数据稳定，未发生色谱峰交叉污染，耐用性稳定性好。
鼻用制剂盐酸萘甲唑啉滴鼻液浓度为0.1％或者0.05％，实践中发现鼻用医疗器械中非法添加的萘甲唑啉浓度以盐酸萘甲唑啉计约在0.1％～0.4％，添加量普遍达到或者高于治疗剂量，均是强阳性样品，考虑到现在基层实验室液相普及程度越来越高，开发的检验方法主要基于液相色谱法(HPLC-DAD)，必要时液质确认。萘甲唑啉由于具有1-萘甲基结构，紫外吸收很强，液相方法具有较高灵敏度。HPLC-DAD法仪器检测限(IDL)达0.5ng，中心开发的方法使样品在稀释25倍的情况下，进样10μL，柱效高，峰型好，该方法节省试剂，亦能保证较高的灵敏度。方法耐用性强，不仅适用常压液相，亦能适用超高效液相，另外现有液相方法可直接串联主流的单杆质谱如Waters QDA等，该方法流动相体系同样适用三重四级杆质谱、高分辨质谱等，方法适用性高。
显然，本发明的上述实施例仅仅是为更清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定，对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其他不同形式的变化或变动，这里无法对所有的实施方法予以穷举，凡是属于本发明的技术方案所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。

Claims (9)

1.鼻用医疗器械中两种化学药物识别及含量测定检验方法，包括：
取供试品溶液及盐酸萘甲唑啉和马来酸氯苯那敏混合的对照品溶液，采用高效液相色谱法进样分析，将二者结果进行对比，以保留时间及190nm～400nm的紫外光谱图一致性作为初筛依据；
取供试品溶液及盐酸萘甲唑啉和马来酸氯苯那敏混合的对照品溶液，采用高分辨液质联用法进样分析，将供试品溶液与对照品溶液的母离子及碎片离子信息进行对比，二者一致则确认该样品中含有相应的药物成分；
取对照品储备溶液，配制成系列浓度的标准溶液，采用高效液相色谱法进样分析，绘制浓度-峰面积标准曲线，根据阳性样品的峰面积计算样品中药物的量。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，供试品溶液按照以下方法制备：取供试品加水至溶液质量体积浓度为0.04g/mL，涡旋3分钟，超声处理20分钟，放冷，滤过，取续滤液。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，盐酸萘甲唑啉和马来酸氯苯那敏混合的对照品溶液中盐酸萘甲唑啉和马来酸氯苯那敏的浓度均为10μg/mL。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，高效液相色谱法的条件包括：
柱温：30℃；样品室温度：10℃；
流速：1.0mL/min；
检测波长：280nm，扫描范围：190nm～400nm；
进样量：10μL；
流动相：A(0.1％甲酸水溶液)，B(乙腈)，梯度条件如下：
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，高效液相色谱法采用Phenomenex GeminiC18柱。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，高分辨液质联用法的色谱条件包括：
柱温：35℃，样品室温度：10℃；
流速：0.3mL/min；
进样量：1μL；
流动相：A(0.1％甲酸水溶液)，B(乙腈)，梯度条件如下：
质谱条件包括：
离子源：ESI正离子模式
干燥器温度：325℃；干燥器流速：8L/min；
雾化器压力：35Psi；
毛细管电压：3500V；
毛细管出口电压：140V；
碰撞电压：20V；
两种药物测定参数如下：
注：*为基峰。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，高分辨液质联用法采用AgilentPoroshell 120EC-C18色谱柱以及Agilent6530Q-TOF型高分辨液质联用仪。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，对照品储备溶液按照以下方法配制：分别取盐酸萘甲唑啉和马来酸氯苯那敏对照品，精密称定，置棕色容量瓶中，加入水溶解后定容，摇匀，配制成浓度各为1mg/mL的对照品储备溶液。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，两种对照品的色谱峰与相邻色谱峰之间的分离度大于1.5；两种对照品的色谱峰信噪比大于3:1。
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