CN118360327A - 一种植物超表达载体及制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种植物超表达载体及制备方法和应用，属于基因工程技术领域。所述植物超表达载体包括磷酸乙醇胺甲基转移酶基因SdNMT，胆碱加氧酶基因SdCMO和甜菜醛碱脱氢酶基因SdBADH 3个基因；所述基因SdNMT、SdCMO和SdBADH的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1，SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。本发明可以明显提高植物的耐盐性，尤其是导入植物超表达载体的加工番茄植株，显著增强了其耐盐能力。
Description
技术领域
本发明涉及一种植物超表达载体及制备方法和应用，属于基因工程技术领域。
背景技术
土壤盐渍化是威胁农作物生长、产量和品质、阻碍现代农业可持续发展的世界性问题。由于地下水位上升、不合理的灌溉及常年过量使用农药和化肥，导致盐渍化土地仍在扩大和加重。当土壤中NaCl浓度超过200 mmol/L时，大部分的农作物都无法完成其生命周期。因此，提高作物的盐胁迫耐受性对于全球粮食安全至关重要。植物对高盐度的耐受能力在物种之间和物种内差异较大，因此，植物耐盐胁迫关键基因位点和自然变异的鉴定是提高作物耐盐能力的关键。盐生植物是一类能够在至少200mmol/L NaCl的生境中生长并完成生活史的植物，抗逆境胁迫能力强。木碱蓬（Suaeda dendroides）是新疆特有分布的一种盐生植物，对高盐度、干旱等极端环境具有较强的抵抗力，是挖掘耐盐基因的优异材料，从中克隆的耐盐基因在植物耐盐育种中更具有重要价值。
磷酸乙醇胺甲基转移酶基因SdNMT来自于盐生植物木碱蓬，是一种是细胞质中的亲水性单体酶。磷酸乙醇胺甲基转移酶的主要作用是将是磷酸乙醇胺通过三次甲基化生成磷酸胆碱。磷酸胆碱在磷酸胆碱磷酸酶的水解作用下生成胆碱和磷脂酸。在一些植物叶绿体基质中，胆碱经胆碱单加氧酶（choline monooxy genase, CMO）和甜菜醛碱脱氢酶（bataine - aldehyde dehydrogenase BADH）的作用，可以合成甘氨酸甜菜碱甘氨酸甜菜碱是植物中一种重要的小分子有机渗透调节物质有助于植物在高盐条件下保持细胞的渗透平衡、保护膜结构和完整性，有效稳定酶结构，抵抗渗透胁迫。磷酸脂不仅是植物细胞膜的组成部分，而且还是参与许多生理过程的脂质第二信使，包括脂质代谢以及对生物和非生物胁迫的响应。在植物生长发育期间及逆境胁迫条件下快速积累，通过结合靶蛋白并调节其活性和亚细胞定位，在各种信号传导途径中发挥重要作用。因此，本发明从盐生植物木碱蓬中克隆到耐盐基因SdNMT、SdCMO和SdBADH，构建三基因植物超表达载体，同时导入加工番茄植株中，达到增强转基因植株耐盐能力的效果。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了一种植物超表达载体及制备方法和应用，具体涉及植物超表达载体包括磷酸乙醇胺甲基转移酶基因SdNMT，胆碱加氧酶基因SdCMO和甜菜醛碱脱氢酶基因SdBADH 3个基因，以及超表达载体在提高植物耐盐性中的应用。本发明中SdNMT、SdCMO和SdBADH的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1，SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。
本发明以木碱蓬叶片为材料，克隆到耐盐基因SdNMT、SdCMO和SdBADH，构建三基因植物超表达载体，优选的，在植物超表达载体中，三个基因的顺序依次为三个基因的顺序依次为启动子-SdNMT基因-SdCMO基因-SdBADH基因-终止子。同时将植物超表达载体导入加工番茄植株中，达到增强转基因植株耐盐能力的效果。
进一步的，扩增所述基因SdNMT的引物序列分别为SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5；扩增所述基因SdCMO的引物序列分别为SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7；扩增所述基因SdBADH的引物序列分别为SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.9。
进一步的，本发明植物超表达载体构建中所使用的空载体为pCAMBI2300。
进一步的，所述植物超表达载体的构建方法，步骤如下：
（1）对植物表达载体pCAMBIA2300进行改造，在5'-KpnⅠ/HindⅢ-3'之间插入包括终止子OCS，SmaⅠ，MulⅠ和ApaⅠ三个酶切位点的序列，将改造后植物表达载体pCAMBIA2300-35S-OCS质粒导入大肠杆菌DH5α；
（2）通过Kpn Ⅰ和BamH Ⅰ酶将基因SdNMT构建至改造后的植物表达载体pCABBIA2300-35S-OCS上；然后通过Sal I和Sma I将启动子-基因SdCMO -终止子（即35S-SdCMO-OCS，全长2107bp）构建至pCAMBIA2300:SdNMT表达载体上；
（3）利用Mlu I和Apa I将启动子-基因SdBADH-终止子（即35S-SdBADH-OCS，全长2284bp）构建至pCAMBIA2300:SdNMT:SdCMO表达载体上，即得三价基因植物超表达载体pCAMBIA2300:SdNMT:SdCMO:SdBADH。
优选的，所述步骤（2）中35S-SdCMO-OCS上游引物35S-SdCMO-OCS-F的序列如SEQID NO.10所示，下游引物35S-SdCMO-OCS-R的序列如SEQ ID NO.11所示；所述步骤（3）中35S-SdBADH-OCS上游引物35S-SdSdBADH-OCS-F的序列如SEQ ID NO.12所示，下游引物35S-SdBADH-OCS-R的序列如SEQ ID NO.13所示。
本发明还包括，所述植物超表达载体在植物耐盐中的应用，进一步在创建耐盐新品种中的应用。本发明相较于现有技术的有益效果如下：
本发明构建的含有磷酸乙醇胺甲基转移酶基因SdNMT，胆碱加氧酶基因SdCMO和甜菜醛碱脱氢酶基因SdBADH 3个基因的植物超表达载体可以明显提高植物的耐盐性，尤其是通过对转基因植株的SOD活性、POD活性及CAT活性的测定分析以及对转基因加工番茄植株表型和生物量的检测，结果表明：导入植物超表达载体的加工番茄植株，显著增强了其耐盐能力。
附图说明
图1为基因SdNMT，SdCMO和SdBADH的PCR凝胶图；
图2为构建完成的植物超表达载体图；
图3为转基因植株中目的基因SdNMT、SdCMO和SdBADH的表达情况；
图4为转基因番茄植株中胆碱含量；
图5为转基因植株中甜菜碱含量；
图6为盐胁迫处理后转基因植株的SOD活性测定分析图；
图7为盐胁迫处理后转基因植株的POD活性测定分析图；
图8为盐胁迫处理后转基因植株的CAT活性测定分析图；
图9为盐胁迫下转基因加工番茄植株的生长图；
图10为盐胁迫下转基因加工番茄植株地上部和地下部生物量；其中，图10A为地上部鲜重、图10B为地上部干重、图10C为地下部鲜重、图10D为地下部干重。
具体实施方式
以下通过具体实施方式详细说明本发明的技术方案，应理解以下的具体实施方案仅为示例性，任何改动或变化只要不脱离本发明的技术方案设计，都应在本发明权利的要求保护范围之内。下面结合实施例对本发明进行详细说明。
实施例1：基因SdNMT、SdCMO和SdBADH的获得
1. 生物材料
木碱蓬（Suaeda dendroides）、加工番茄（Solanum lycopersicum）、植物表达载体pCAMBI2300，根癌农杆菌 (Agrobacterium tumefaciens) GV3101。
2. 技术方法
2.1木碱蓬叶片总RNA提取与cDNA 合成
本发明采用天根生物科技公司的高效植物基因组DNA提取试剂盒（DP350）提供的方法，提取木碱蓬叶片总RNA，具体步骤如下：
2.1.1 RNA的提取
（1）取新鲜叶片 0.1g 放入 2 mL EP 管中，加400 μl 提取液LP1，6μl RNase A（10 mg/ml），加钢珠两颗（直径4mm），30 HZ，振荡 2 min 至叶片打成匀浆；旋涡振荡1 min，室温放置10 min。
（2）加 130μl 缓冲液 LP2，旋涡振荡1 min，充分混匀。③ 13,000 g 离心 5min，将上清液液转入新的 EP 管中。
（3）13,000 g 离心 5min，将上清液液转入新的 EP 管中。
（4）加 1.5 倍体积缓冲液 LP3（使用前加入无水乙醇），立即充分振荡混匀 15s，加入另一个吸附柱 CB3 中，12,000 g 离心 30s，弃废液，将吸附柱 CB3 放入收集管中。
（5）向吸附柱 CB3 中加入 600μl 漂洗液PW（使用前加入无水乙醇），12,000 g 离心 30s，弃废液，将吸附柱 CB3 放入收集管中。步骤5重复一遍。
（6）将吸附柱 CB3 放入收集管中，12,000 g 离心 2 min，弃废液，将吸附柱 CB3放入收集管中，彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
（7）将吸附柱 CB3 转入新的 EP 管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加 50-200μl无 RNAase dd H2O，室温放置 2-5min，12,000 g 离心 2min，将溶液收集到离心管中，-20℃保存备用。
2.1.2 cDNA的合成
cDNA的合成采用反转录试剂盒PrimeScriptTM RT reagent kit with gDNAEraser (TaKaRa公司，Code No. RR047A)。操作方法如下：
步骤1：去除基因组DNA反应
在0 .2ml的PCR离心管中配制表1基因组DNA去除反应液
表1-基因组DNA去除反应液
混匀后，42℃2min(或者室温5min)，4℃保存。
在上述PCR管中继续配制表2反转录反应液。
表2-反转录录反应液
37℃，15min；85℃，5sec；4℃保存。
2.2 基因SdNMT、SdCMO、SdBADH的cDNA序列克隆
取0 .2mL PCR专用管，依次加入以下成分
表3-PCR扩增体系
基因SdNMT上游引物SdNMT-F的序列如SEQ ID NO.4所示；
基因SdNMT下游引物SdNMT-R的序列如SEQ ID NO.5所示；
基因SdCMO上游引物SdCMO-F的序列如SEQ ID NO.6所示；
基因SdCMO下游引物SdCMO-R的序列如SEQ ID NO.7所示；
基因SdBADH上游引物SdBAD-F的序列如SEQ ID NO.8所示；
基因SdBADH下游引物SdBAD-R的序列如SEQ ID NO.9所示。
PCR反应程序94℃变性10秒、60℃退火15秒、72℃延伸90秒，进行35个循环；72℃充分延伸10分钟。PCR反应结束后，进行1 .0％琼脂糖凝胶电泳以检测，结果如图1 所示，并将含有目的条带大小的胶回收(根据天根公司“Agarose Gel DNA Purification Kit”操作)、通过KpnⅠ和BamHⅠ连接至T-Vector pMD™19（Takara）上、转化大肠杆菌感受态细胞DH5α，在LB平板培养基上，37℃倒置过夜培养、挑取单菌落，在北京瑞博兴科生物技术有限公司进行序列测定后，通过拼接比对得到基因SdNMT，SdCMO和SdBADH的序列，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。基因SdNMT、SdCMO和SdBADH的PCR凝胶图如图1所示。
2.3植物超表达载体构建
磷酸乙醇胺甲基转移酶基因SdNMT，胆碱加氧酶基因SdCMO和甜菜醛碱脱氢酶基因SdBADH特异表达载体构建流程如图2所示，所有的限制性内切酶均购自Takara公司，按照说明书操作。首先对植物表达载体pCAMBIA2300进行改造，在5'-KpnⅠ/HindⅢ-3'之间插入一段250 bp的序列，包含195 bp的终止子OCS序列和SmaⅠ，MulⅠ和ApaⅠ三个酶切位点，测序正确的改造后植物表达载体pCAMBIA2300-35S-OCS质粒导入大肠杆菌DH5α。通过Kpn Ⅰ和BamHⅠ酶将基因SdNMT构建至改造后的植物表达载体pCABBIA2300-35S-OCS上；通过PCR方法将35S启动子序列、基因SdCMO序列和OCS终止子序列连接获得2107bp的35S-SdCMO-OCS片段，然后通过Sal I和Sma I将35S-SdCMO-OCS构建至pCAMBIA2300:SdNMT表达载体上；同样，通过PCR方法将35S启动子序列、基因SdBADH序列和OCS终止子序列连接获得2284bp的35S-SdBADH-OCS片段，最后利用Mlu I和Apa I将35S-SdBADH-OCS构建至pCAMBIA2300:SdNMT:SdCMO表达载体上，获得三价基因植物超表达载体pCAMBIA2300:SdNMT:SdCMO:SDBADH，如图2所示；将酶切、测序等方法鉴定正确的阳性克隆的质粒导入大肠杆菌DH5α保存备用。
35S-SdCMO-OCS上游引物35S-SdCMO-OCS-F的序列如SEQ ID NO.10所示；
35S-SdCMO-OCS下游引物35S-SdCMO-OCS-R的序列如SEQ ID NO.11所示；
35S-SdBADH-OCS上游引物35S-SdSdBADH-OCS-F的序列如SEQ ID NO.12所示；
35S-SdBADH-OCS下游引物35S-SdBADH-OCS-R的序列如SEQ ID NO.13所示。
2.4转基因植物制备
用电激法将构建好的植物超表达载体质粒导入农杆菌菌株GV3101。
将木碱蓬磷酸乙醇胺甲基转移酶基因SdNMT，胆碱加氧酶基因SdCMO和甜菜醛碱脱氢酶基因SdBADH的表达载体通过根癌农杆菌介导法整合到加工番茄亚心-5（购买于新疆惠远公司）基因组中。农杆菌介导的加工番茄遗传转化用培养基见表4。
表4-农杆菌介导的加工番茄遗传转化用培养基
MS: Murashige&Skoog购买自
Ti: Timentia，特美汀
IAA: 吲哚乙酸
6-BA: 6-苄氨基嘌呤
Kan: 卡那霉素
上述表达载体通过农杆菌介导加工番茄下胚轴为受体，将目的基因整合至加工番茄亚心87-5中。
在植物培养室获得的转基因植株在试验田进行常规管理，待成熟后收获得T1代种子后，在植物培养室进行耐盐性比较实验。
试验例1：转基因阳性植株中的鉴定与目的基因表达量检测
将转基因加工番茄种子播种于育苗穴盘，每穴1粒种子，待幼苗长至4片真叶时，提取叶片基因组DNA进行PCR检测，筛选阳性植株。利用天根生物科技公司的高效植物基因组DNA提取试剂盒（DP350）提供的方法提取阳性转基因加工番茄植物叶片总RNA，采用Takara公司的反转录试剂盒（PrimeScriptTM RT reagent kit with gDNA Eraser (RR047A)）合成cDNA。以番茄Actin 基因作为内参，检测基因SdNMT，SdCMO和SdBADH在转基因植株中的表达，每个样品重复3次进行扩增。反应体系20μL：包含10 μL的SYBR Green Master Mix，上游引物和下游引物各0.4 μL和2 μL的cDNA。PCR反应程序：第一步，95℃预变性30 s；第二步，95℃变性5 s，60℃退火34 s，40次循环；，最后进行溶解曲线检测，每个样本进行三次重复。利用excel软件进行数据处理分析，结果如图3所示，三个基因在12个株系中均检到了明显的表达，其中，7号和13号2个株系中三个基因的表达量显著高于其他株系，分别命名为OE1和OE2 进行耐盐性研究。
基因SdNMT QPCR上游引物SdNMTQ-F的序列如SEQ ID NO.14所示；
基因SdNMT QPCR下游引物SdNMTQ-R的序列如SEQ ID NO.15所示；
基因SdCMO QPCR上游引物SdCMOQ-F的序列如SEQ ID NO.16所示；
基因SdCMO QPCR下游引物SdCMOQ-R的序列如SEQ ID NO.17所示；
基因SdBADH QPCR上游引物SdBADHQ-F的序列如SEQ ID NO.18所示；
基因SdBADH QPCR下游引物SdBADHQ-R的序列如SEQ ID NO.19所示；
基因Actin QPCR上游引物ActinQ-F的序列如SEQ ID NO.20所示；
基因Actin QPCR 下游引物ActinQ-R的序列如SEQ ID NO.21所示。
试验例2：转基因加工番茄的盐胁迫处理
将转基因加工番茄种子播种于育苗穴盘，每穴1粒种子，待幼苗长至4片真叶时，提取基因组DNA进行PCR检测，筛选阳性植株。将阳性植株移栽至营养钵中（12×10×8 cm），每钵1株。待转基因番茄植株长到6～8片真叶时，每钵浇灌150 mL 350 mmol/L的NaCl溶液，第7天进行第二次浇灌，同样，每钵浇灌150 mL 350 mmol/L的NaCl溶液，对照植株浇灌相同体积的自来水，每个处理3次重复。观察植株的表型变化，并进行生理生化指标测定。
生理生化指标测定情况如下：
（1）盐胁迫处理后转基因植株中胆碱和甜菜碱含量测定
按照GB 5413.20-2022 中的酶比色法对转基因加工番茄植株叶片中的胆碱含量进行测定。取2g(精确至0.001g)新鲜叶片于100mL锥形瓶，加入1mol/L的盐酸溶液30mL酸解；然后置于70℃水浴中水解3h（每隔30 min 振摇一次），冷却至室温。用氢氧化钠溶液(500 g/L)调pH 至3.5～4.0，转入50 mL 容量瓶中，用水定容至刻度；用滤纸过滤水解液，收集滤液待测。标准曲线制作和样品中胆碱含量测定按照标准说明进行，根据标准曲线计算胆碱含量结果如图4所示，盐处理后，转基因加工番茄植株中胆碱含量显著高于野生型加工番茄。
利用苏州科铭生物技术有限公司的甜菜碱含量测定试剂盒(TCJ-1-G)对转基因植株中的甜菜碱含量进行。新鲜叶片烘干后过40目筛，取0.02g样品，加0.8 mL 水，60℃提取30 min，期间不断震荡。再加入200 μL 提取液，混匀后10000 g，25℃，离心10 min，取上清液待测。按照说明书配制测定液，利用酶标仪Infinite 200 Pro M Nano（TECAN）测定525nm处的吸光值。根据标准曲线计算胆碱含量结果如图5所示，盐处理后，转基因加工番茄植株中胆碱含量显著高于野生型加工番茄。
（2）盐胁迫处理后转基因植株中抗氧化酶活性测定
利用南京建成公司的超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒（A001-3）测定转基因植株叶片中SOD活性，取植物组织，用蒸馏水洗净表面污垢后，用吸水纸擦干，取0.1g剪碎，加入适量液氮，快速研磨成粉，加入0.9ml倍体积的磷酸盐缓冲液（磷酸盐缓冲液：0.1mol /L pH7～7.4），漩涡混匀3分钟，3500转/分以上，离心10分钟取上清即10%匀浆上清液，按照试剂盒说明测定450nm处的吸光值，利用Excel处理分析数据，结果如图6所示。正常条件下，转基因植株的SOD活性与野生型之间差异不明显；盐胁迫处理后，转基因植株的SOD活性显著升高。
利用南京建成过氧化物酶（POD）试剂盒（A084-1-1）测定转基因植株叶片中POD活性。取植物组织，用蒸馏水洗净表面污垢后，用吸水纸擦干，取0.1g剪碎，加入适量液氮，快速研磨成粉，加入0.9ml倍体积的磷酸盐缓冲液（磷酸盐缓冲液：0.1mol /L pH7～7.4），漩涡混匀3分钟，3500转/分以上，离心10分钟取上清即10%匀浆上清液，按照试剂盒说明测定420nm处的吸光值，利用Excel处理分析数据，结果如图7所示。正常条件下，转基因植株的POD活性与野生型之间差异不明显；盐胁迫处理后，转基因植株的POD活性显著升高。
利用利用南京建成公司过氧化氢酶试剂盒（A007-1-1）测定转基因植株叶片中CAT活性，取植物组织，用蒸馏水洗净表面污垢后，用吸水纸擦干，取0.1g剪碎，加入适量液氮，快速研磨成粉，加入0.9ml倍体积的磷酸盐缓冲液（磷酸盐缓冲液︰0.1mol /L pH7～7.4），漩涡混匀3分钟，3500转/分以上，离心10分钟取上清即10%匀浆上清液，按照试剂盒说明测定405nm处的吸光值，利用Excel处理分析数据，结果如图8所示。正常条件下，转基因植株的CAT活性与野生型之间差异不明显；盐胁迫处理后，转基因植株的CAT活性显著升高。
（3）盐胁迫处理后转基因植株的表型变化
转基因加工番茄植株的盐胁迫处理20天表型如图9所示，正长生长条件下（对照），转基因加工番茄植株的长势明显优于野生型植株。350 mmol/L NaCl处理下，野生型植株首先老叶叶尖叶缘逐渐失绿黄化，直至焦枯，随着处理时间延长，新叶逐渐黄化，植株生长缓慢；而过表达株系新叶叶色变深，个别老叶出现黄花现象，转基因加工番茄植株的长势优于野生型植株。
（4）盐胁迫处理20天转基因植株的生物量变化
对盐处理20d的转基因植株的地上部和地下部的生物量进行了测定，如图10所示，转基因加工番茄株株地上部鲜重（图10A）、地上部干重（图10B）、地下部鲜重（图10C）、地下部干重（图10D）均显著高于野生型植株。
Claims (10)
1.一种植物超表达载体，其特征在于，所述植物超表达载体包括磷酸乙醇胺甲基转移酶基因SdNMT，胆碱加氧酶基因SdCMO和甜菜醛碱脱氢酶基因SdBADH 3个基因；所述基因SdNMT、SdCMO和SdBADH的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1，SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。
2.根据权利要求1所述的植物超表达载体，其特征在于，在植物超表达载体中，三个基因的顺序依次为启动子-SdNMT基因-SdCMO基因-SdBADH基因-终止子。
3.根据权利要求1所述的植物超表达载体，其特征在于，扩增所述基因SdNMT的引物序列分别为SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5；扩增所述基因SdCMO的引物序列分别为SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7；扩增所述基因SdBADH的引物序列分别为SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.9。
4.根据权利要求1所述的植物超表达载体，其特征在于，所述植物超表达载体构建中所使用的空载体为pCAMBI2300。
5.构建如权利要求1-4任一项所述植物超表达载体的方法，其特征在于，所述方法的步骤如下：
（1）对植物表达载体pCAMBIA2300进行改造，在5'-KpnⅠ/HindⅢ-3'之间插入包括终止子OCS，SmaⅠ，MulⅠ和ApaⅠ三个酶切位点的序列，将改造后植物表达载体pCAMBIA2300-35S-OCS质粒导入大肠杆菌DH5α；
（2）通过Kpn Ⅰ和BamH Ⅰ酶将基因SdNMT构建至改造后的植物表达载体pCABBIA2300-35S-OCS上；然后通过Sal I和Sma I将启动子-基因SdCMO -终止子（即35S-SdCMO-OCS，全长2107bp）构建至pCAMBIA2300:SdNMT表达载体上；
（3）利用Mlu I和Apa I将启动子-基因SdBADH-终止子（即35S-SdBADH-OCS，全长2284bp）构建至pCAMBIA2300:SdNMT:SdCMO表达载体上，即得三价基因植物超表达载体pCAMBIA2300:SdNMT:SdCMO:SdBADH。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中35S-SdCMO-OCS上游引物35S-SdCMO-OCS-F的序列如SEQ ID NO.10所示，下游引物35S-SdCMO-OCS-R的序列如SEQ IDNO.11所示；所述步骤（3）中35S-SdBADH-OCS上游引物35S-SdSdBADH-OCS-F的序列如SEQ IDNO.12所示，下游引物35S-SdBADH-OCS-R的序列如SEQ ID NO.13所示。
7.如权利要求1-4任选一项所述植物超表达载体在植物耐盐中的应用；优选的，所述植物为加工番茄。
8.如权利要求5或6所述方法构建的植物超表达载体在植物耐盐中的应用；优选的，所述植物为加工番茄。
9.如权利要求1-4任选一项所述植物超表达载体在创建耐盐新品种中的应用。
10.如权利要求5或6所述植物超表达载体在创建耐盐加工番茄新品种中。
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