CN114736277B - 一种调控玉米耐盐的正向调控因子及其InDel分子标记和应用 - Google Patents

一种调控玉米耐盐的正向调控因子及其InDel分子标记和应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于作物遗传育种领域，涉及玉米耐盐的调控因子，特别是指一种调控玉米耐盐的正向调控因子及其InDel分子标记和应用。所述正向调控因子包含CCT家族保守功能结构域。所述正向调控因子为基因ZmPRR37，其碱基序列如SEQ ID NO.1所示。所述基因ZmPRR37的编码区域存在插入/缺失的碱基突变，如图1所示。由688个氨基酸序列如SEQ ID No.6所示，组成包含CCT家族保守功能结构域的转录因子，其分子生物学功能目前在玉米中尚未报道。本发明研究了该基因调控玉米耐盐的分子生物学功能，并为选育耐盐的优良高产玉米新品种提供了一个潜在的新基因资源。

Description

一种调控玉米耐盐的正向调控因子及其InDel分子标记和应用
技术领域
本发明属于作物遗传育种领域，涉及玉米耐盐的调控因子，特别是指一种调控玉米耐盐的正向调控因子及其InDel分子标记和应用。
背景技术
自然界中的植物常受到低温、高温、干旱、水涝、盐碱、大气污染等不良环境因素胁迫，胁迫因子相互关联且常伴随出现，如高温和干旱、高盐和干旱常伴随发生。土壤盐渍化是限制农业发展的一项重要生态因素，始终影响着植物的整个生命周期，其对植物的影响是一个综合复杂的过程。土壤中高浓度的盐分离子不仅造成土壤水势下降,推迟或抑制作物种子萌发,而且还会抑制该环境中的作物幼苗根、茎、叶、花、果实等器官的生长发育和代谢过程，使作物生长受到抑制，从而导致作物产量降低，品质下降，对国家粮食安全和农民收入造成损失。世界上盐碱面积很大，估计占灌溉农田的1/3，而且随着灌溉农业的发展，盐碱面积将继续扩大。我国盐碱土分布于西北、华北、东北和沿海地区，盐碱土面积约2~7×107ha，而且这些地区都属平原，盐地土层深厚，如能改良盐碱危害，发展农业的潜力很大。随着全球气候变暖，我国降雨量持续减少，作为农业用水的淡水资源日益紧缺，同时还存在因长期低标准化灌溉而导致的土地次生盐渍化等问题。专利202010914857.X中公开了一种水稻的调控因子，该调控因子通过负向调控使水稻栓质沉积，提高耐盐性；而在玉米中并没有直接筛选到与玉米耐盐相关的调控因子，而玉米耐盐基因在分子育种上的应用对我国的粮食安全具有重大意义。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提出一种调控玉米耐盐的正向调控因子及其InDel分子标记和应用。
本发明的技术方案是这样实现的：
一种调控玉米耐盐的正向调控因子，所述正向调控因子包含CCT家族保守功能结构域。
进一步，所述正向调控因子为基因ZmPRR37，其碱基序列如SEQ ID NO.1所示。
进一步，所述基因ZmPRR37的编码区域存在插入/缺失的碱基突变，如图1所示。
上述的正向调控因子的InDel分子标记，位于ZmPRR37的下游区域，在耐盐性自交系CML288和非耐盐性自交系黄早4间存在一个1073bp的InDel，所述InDel分子标记位于基因ZmPRR37的下游第1360与1361碱基之间；InDel分子标记序列如SEQ ID NO.7所示。
用于鉴定上述的InDel分子标记的引物对，所述引物对为PRR37-F2和PRR37-R2，其中PRR37-F2序列如SEQ ID NO.4所示，PRR37-R2序列如SEQ ID NO.5所示。
上述的InDel分子标记在玉米耐盐性预测和筛选中的应用。
上述的正向调控因子在调控玉米耐盐性中的应用，步骤为：
（1）构建基因ZmPRR37的过表达载体；
（2）将步骤（1）的过表达载体转化农杆菌感受态细胞，用于转化玉米自交系B104，得到耐盐性强的转基因阳性株。
优选的，所述步骤（1）中过表达载体的获得是以耐盐性自交系CML288的cDNA为模板，以玉米自交系B73的PRR37的cDNA序列设计的引物对为引物构建而得。
优选的，所述引物对为PRR37-F1和PRR37-R1，其中PRR37-F1序列如SEQ ID NO.2所示，PRR37-R1序列如SEQ ID NO.3所示。
本发明具有以下有益效果：
1、本申请的调控因子涉及的基因GRMZM2G033962（ ZmPRR37）是一个由688个氨基酸序列如SEQ ID No.6所示，组成包含CCT家族保守功能结构域的转录因子，其分子生物学功能目前在玉米中尚未报道。本发明研究了该基因调控玉米耐盐的分子生物学功能，并为选育耐盐的优良高产玉米新品种提供了一个潜在的新基因资源。
2、本发明的目的在于提供一种控制玉米耐盐性的基因ZmPRR37，采用比较基因组学方法准确无误的分离候选基因。该基因具有如 SEQ ID NO：1 所示的DNA片段。该基因mRNA积累量增加，导致玉米耐盐性增强，因此该基因的克隆有助于理解玉米耐盐性的分子机制。
3、本发明利用过表达技术，促进玉米内源 ZmPRR37基因的表达。具体的说就是将ZmPRR37基因与其它调控元件，如组成型启动子（如CaMV35S启动子）或器官特异性启动子融合构建基因促进表达载体，通过转基因技术创造耐盐性强的玉米自交系，用于培育耐盐玉米新品种。
4、本发明将根据图1所示序列的INDel设计引物如 SEQ ID NO：4和如 SEQ ID NO：5，将其应用于玉米耐盐性鉴定中，能对不同种质材料耐盐性进行预测，对玉米育种具有重要的实际应用意义。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为CML288和黄早4间 ZmPRR37下游区域存在较多差异比较。
图2为CML288和黄早4下游序列影响报告基因的相对表达量。
图3为 ZmPRR37基因的表达模式，qRT-PCR检测 ZmPRR基因4叶期在盐胁迫下CML288和黄早4叶片中的表达量（mRNA积累量），18S基因作为内对照。
图4为采用过表达技术，Z mPRR37的转基因使自交系B104耐盐性增强的植株表型。图中苗期过表达 ZmPRR37对照植株（左）和阳性植株（右）的表型。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有付出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
本申请耐盐正向调控子ZmPRR37在耐盐玉米自交系CML288和不耐盐的自交系黄早4间存在多态性表现出耐盐性强弱，为进一步验证进行了以下实验：
以耐盐玉米自交系CML288和不耐盐玉米自交系黄早4为材料，在幼苗长至三片叶时进行盐胁迫处理，往土中浇灌200 mM的NaCl溶液5天时取叶片进行RNA-Seq分析，鉴定出盐响应的关键基因ZmPRR37。以CML288和黄早4的mRNA反转录成cDNA为模板，克隆该基因，同时以上述2个材料的DNA为模板，分离该基因的上游和下游序列。通过序列差异性分析结果显示，该基因下游序列在CML288和黄早4中存在一个1073bp的InDel（图1），InDel序列如SEQID NO.7所示，该正向调控因子的InDel分子标记，位于基因ZmPRR37的下游第1360与1361碱基之间。为了明确下游区域差异（图1）是否引起该基因表达量的改变，利用SEQ ID NO：4和如 SEQ ID NO：5扩增CML288和黄早4的下游差异序列是否影响萤火虫荧光素酶报告基因（LUC）（图2A）；
PRR37-F2（SEQ ID NO.4）：5’-CCTGAAGATCTGGACTGCTTG-3’；
PRR37-R2（SEQ ID NO.5）：5’-GTCACAACTCTGGTTAAAGTT-3’；
由35S启动子启动的海肾荧光素酶为内参，检测报告基因的相对表达量，来表示启动子的启动强弱。通过农杆菌侵染烟草叶片，提取烟草蛋白，并由多功能酶标仪检测萤火虫荧光素酶的相对表达量，结果表明CML288的下游序列降低萤火虫荧光素酶报告基因的表达量显著小于黄早4（图2B），说明CML288的下游序列影响基因表达的能力显著低于黄早4。说明CML288和黄早4的耐盐性存在差异是由于PRR37在下游区域序列的差异引起的。
实施例2
ZmPRR37正向调控玉米耐盐性：
ZmPRR37在CML288中使玉米耐盐性增强，在黄早4中使玉米耐盐性降低，因此我们检测了ZmPRR37基因的表达情况。采用qRT-PCR技术（参照张君，玉米叶夹角有关的ZmCLA4基因图位克隆与功能分析，河南农业大学博士学位论文，2014）进行ZmPRR37表达量分析，结果表明，盐胁迫下玉米生长发育的4叶期的叶片， ZmPRR37在CML288表达量明显高于黄早4（图3），表明 ZmPRR37的表达量高玉米的耐盐性增强，由此提出 ZmPRR37作为正向调控因子调控玉米耐盐性。
实施例3
ZmPRR371过表达转基因验证其基因功能
1、过表达载体的构建
根据 ZmPRR37基因的编码区序列设计一对引物PRR37-F1与PRR37-R1，引物5’端分别加上 XbaI和 PacI酶切位点。用该引物扩增CML288材料中 ZmPRR37的cDNA序列，PCR产物琼脂糖凝胶电泳检测，将回收目的PCR产物连接pMD18-T载体，转化、挑选单克隆、PCR检测、测序、并将测序正确的菌液提取质粒，将该质粒与pFGC5941载体质粒分别用 XbaI和 PacI酶切位点进行双酶切。分别回收酶切后的目的片段，利用T4连接酶连接载体片段和目的片段，连接产物转化大肠杆菌，鉴定阳性克隆，提取重组质粒，命名为pFGC5941- ZmPRR37。将重组质粒转化农杆菌感受态细胞，用于转化玉米自交系B104。
引物PRR37-F1（SEQ ID NO.2）：5'-TCTAGAATGCCTGCGAATGACCACCA -3', 横线部分为酶切位点 XbaI
引物PRR37-R1（SEQ ID NO.3）：5'-TTAATTAATCTCTCTCTAGCTCCGTCCT-3', 横线部分为酶切位点 PacI
2、遗传转化
采用农杆菌介导的玉米遗传转化方法（参照王平安，基于RNA干扰的抗粗缩病转基因玉米材料创制，河南农业大学硕士学位论文，2011）。以1.2-1.8mm的幼胚为受体材料,在OD600值为0.5,侵染时间为10分钟条件下,用农杆菌LBA4404侵染玉米幼胚,经共培养、静息培养、愈伤组织诱导、愈伤组织低压筛选(PPT浓度3mg/L)、高压筛选(PPT浓度6mg/L),获得再生植株；再生植株200 mg/L除草剂(PPT)浓度表型筛选，剔除对除草剂敏感的幼苗，对除草剂钝感的幼苗提取叶片总DNA，进行株标记基因(Bar)、目的基因PCR检测，对检测出的阳性株移栽大田，自交获得T0代种子，完成对转基因T0代的鉴定过程。
本实施例共获得5株独立的转基因阳性株，在盐胁迫下其耐盐性较野生型单株增强（图4 ）。
由此可见，通过过表达技术促使玉米中内源 ZmPRR37基因的表达增强，导致玉米耐盐性增强，证明控制 ZmPRR37基因的表达可应用培育耐盐的自交系作为育种的基础材料，用于培育耐盐的育种杂交种在生产上推广应用。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
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<212>  DNA
<213>  玉米(Zea mays L)
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accaatgatg tcaacaagcg ggagagtggg atgttattgg gccttgtctt gacactttgt      3480
cagagaaaag ccaatagagg ttgattttga cctatcccat cttttaaatt ttctgtattt      3540
tacagtaaaa aatattacat atatatataa gtaatcttaa aatttgaggg gggccatgcc      3600
cactttgccc cctgtgggtc cgcccctggt tgcaggagtt ccatcttgtt tttgctagca      3660
aatagccagg gtgtaatggg gctgttactc ttacatacaa tgtccctagt ccaacttagt      3720
ggcagctgag ggggtggggg gaggaagaag cctagctaag ataccatgtt gagaagagtt      3780
taaatataac tttaaccaga gttgtgactg atattaataa tagagttaga tgtgtcaagg      3840
cccaatacaa caggggcaac acacacagta catttcaacg gtatcaaata atttaccctg      3900
tttattt                                                          3907
<210>  2
<211>  26
<212>  DNA/RNA
<213>  未知(Unknown)
<400>  2
tctagaatgc ctgcgaatga ccacca                                       26
<210>  3
<211>  28
<212>  DNA/RNA
<213>  未知(Unknown)
<400>  3
ttaattaatc tctctctagc tccgtcct                                     28
<210>  4
<211>  21
<212>  DNA/RNA
<213>  未知(Unknown)
<400>  4
cctgaagatc tggactgctt g                                            21
<210>  5
<211>  21
<212>  DNA/RNA
<213>  未知(Unknown)
<400>  5
gtcacaactc tggttaaagt t                                            21
<210>  6
<211>  3
<212>  PRT
<213>  玉米(Zea mays L)
<400>  6
<210>  7
<211>  688
<212>  PRT
<213>  玉米(Zea mays L)
<400>  7
Met Pro Ala Asn Asp His His Pro Asn Gly Leu Leu Gln Glu Ser Ala
1               5                   10                  15
Pro Gly Leu Gln His Asp Asp Met Glu Asn Gln Gln Gln Gln Val Cys
            20                  25                  30
Trp Glu Arg Phe Leu Leu Lys Asp Thr Leu Asn Val Leu Leu Val Glu
        35                  40                  45
Ser Asp Ala Ser Thr Arg Gln Val Val Ser Ala Leu Leu Arg Cys Cys
    50                  55                  60
Met Tyr Gln Val Ile Ser Ala Lys Asn Gly Gln Gln Ala Trp Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Glu Asp Lys Gly Asn Asn Ile Asp Leu Val Leu Thr Glu Val Phe
                85                  90                  95
Met Pro Gly Val Ser Gly Ile Ser Leu Leu Ser Arg Ile Met Arg His
            100                 105                 110
Asn Ile Phe Lys Asn Ile Pro Val Ile Met Met Ser Ser Ser Asp Asp
        115                 120                 125
Met Ser Thr Val Phe Glu Cys Leu Ser Lys Gly Ala Val Asp Phe Leu
    130                 135                 140
Val Lys Pro Ile Arg Lys Asn Glu Leu Lys Asn Leu Trp Gln His Val
145                 150                 155                 160
Trp Arg Gln Arg Cys His Ser Ser Ser Gly Ser Gly Ser Gly Asn Gly
                165                 170                 175
Ile Gln Thr Gln Lys Cys Ala Lys Ser Lys Gly Val Asn Glu Ser Gly
            180                 185                 190
Asn Asn Ser Gly Ser Asn Asp Asp Glu Ala Gly Met Gly Leu Asn Ala
        195                 200                 205
Arg Asp Asp Ser Asp Asn Gly Ser Gly Thr Gln Ala Gln Asn Ser Trp
    210                 215                 220
Thr Lys Leu Ala Val Glu Ile Asp Ser Pro Gln Ala Thr Ser Gln Asp
225                 230                 235                 240
Gln Leu Ala Asp Pro Pro Asn Ser Thr Cys Ala Gln Val Ile His Ser
                245                 250                 255
Lys Ser Glu Val Cys Ser Asn Arg Trp Leu Pro Asp Lys Ser Asn Arg
            260                 265                 270
Asn Cys Lys Lys Pro Lys Asn Thr Asn Asp Asp Phe Lys Gly Lys Asp
        275                 280                 285
Leu Glu Ile Gly Gly Pro Gly Asn Leu Tyr Met Gly His Gln Ser Ser
    290                 295                 300
Pro Asn Gly Arg Ser Ile Lys Ala Ala Asp His Glu Asn Asn Ser Lys
305                 310                 315                 320
Glu Ser Met Met Glu Asn Leu Glu Glu Pro Thr Val Arg Ala Ala Asp
                325                 330                 335
Leu Ile Gly Ser Met Ala Lys Asn Met Asp Thr Pro Gln Ala Ala Arg
            340                 345                 350
Ala Ala Glu Asp Thr Pro Asn Phe Ser Ser Lys Val Pro Glu Gly Lys
        355                 360                 365
Gly Glu Asn Asn Gln Asn Asp Lys Tyr Val Leu Pro Ser Leu Glu Leu
    370                 375                 380
Ser Leu Lys Arg Ser Arg Ser Cys Gly Asp Gly Ala Asn Asn Lys Asn
385                 390                 395                 400
Thr Val Lys Asp Asp Glu Gln Arg Asn Cys Val Leu Arg Arg Ser Asn
                405                 410                 415
Leu Ser Ala Phe Thr Arg Tyr His Thr Ser Ala Ala Ser Asn Gln Gly
            420                 425                 430
Gly Thr Gly Leu Val Gly Ser Cys Ser Pro His Asp Asn Ser Ser Glu
        435                 440                 445
Ala Val Lys Thr Asp Ser Thr Tyr Asn Met Lys Ser Asn Ser Asp Ala
    450                 455                 460
Ala Pro Ile Lys Gln Gly Ser Asn Gly Ser Ser Asn Asp Asn Asp Met
465                 470                 475                 480
Gly Ser Thr Thr Lys Asp Val Val Thr Lys Pro Met Leu Pro Ser Ala
                485                 490                 495
Ile Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Ser Ala Phe His Pro Val Gln Gln Trp
            500                 505                 510
Met Val Pro Ala Asn Ala Thr Ala Gly Lys Thr Lys Ala Asp Glu Asn
        515                 520                 525
Thr Ala Arg Asn His Cys Val His Phe Glu Asn Gly Gly Ser Gly Ala
    530                 535                 540
Leu Gln Cys Gly Ser Ser Asn Val Phe Asp Pro Pro Leu Glu Gly Gln
545                 550                 555                 560
Ala Thr Asn Asn Tyr Gly Gly Val Lys Ala Gly Ser Asn Ser Gly Ser
                565                 570                 575
Asn Lys Gly Gln Asn Asn Gly Ser Thr Ala Ala Ala Asn Ala Gly Leu
            580                 585                 590
Ala Glu Thr Glu Ile Gln Ala Met Asp Lys Ser Gly Val Gly Gly Gly
        595                 600                 605
Asn Gly Asn Gly Asn Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Asn Asp Thr Tyr
    610                 615                 620
Val Arg Arg Leu Ala Ala Asn Met Thr Pro Arg Gln Ala Gln Leu Lys
625                 630                 635                 640
Lys Tyr Arg Glu Lys Lys Lys Asp Arg Asn Phe Gly Lys Lys Val Arg
                645                 650                 655
Tyr Gln Ser Arg Lys Arg Leu Ala Asp Gln Arg Pro Arg Val Arg Gly
            660                 665                 670
Gln Phe Val Lys Gln Ala Val Gln Asn Gln Asp Gly Ala Arg Glu Arg
        675                 680                 685

Claims (3)

1.一种提高玉米耐盐性的方法，其特征在于，步骤为：
（1）构建基因ZmPRR37的过表达载体；所述基因ZmPRR37的碱基序列如SEQ ID NO.1所示；
（2）将步骤（1）的过表达载体转化农杆菌感受态细胞，用于转化玉米自交系B104，得到耐盐性强的转基因阳性株。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述步骤（1）中过表达载体的获得是以耐盐性自交系CML288的cDNA为模板，以玉米自交系B73的PRR37的cDNA序列设计的引物对为引物构建而得。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述引物对为PRR37-F1和PRR37-R1，其中PRR37-F1序列如SEQ ID NO.2所示，PRR37-R1序列如SEQ ID NO.3所示。
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Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107474123A (zh) * 2017-08-07 2017-12-15 吉林省农业科学院 一种含CCT结构域的转录因子ZmCOL3及其编码基因、载体、宿主菌和应用
CN107574171A (zh) * 2017-10-20 2018-01-12 中国农业大学 一种玉米抗盐主效qtl及其相关基因、分子标记和应用
CN108148845A (zh) * 2018-02-08 2018-06-12 黄淮学院 一种增强植物耐盐性的玉米ZmKNOLLE基因、蛋白及用途
CN110511272A (zh) * 2019-08-30 2019-11-29 南通大学 一种玉米ZmbHLH55转录因子及其应用
CN110818785A (zh) * 2019-11-26 2020-02-21 吉林省农业科学院 一种玉米蔗糖转运蛋白ZmSUT3J及其编码基因和应用
CN112048512A (zh) * 2020-09-21 2020-12-08 河南农业大学 一种调控玉米叶夹角的正向调控因子及其应用
CN112941084A (zh) * 2021-03-01 2021-06-11 中国农业大学 一种玉米耐受盐胁迫导致的渗透胁迫的基因、分子标记和应用
WO2021207472A2 (en) * 2020-04-08 2021-10-14 Donald Danforth Plant Science Center Methods and compositions for improving cold-tolerance of plants

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107474123A (zh) * 2017-08-07 2017-12-15 吉林省农业科学院 一种含CCT结构域的转录因子ZmCOL3及其编码基因、载体、宿主菌和应用
CN107574171A (zh) * 2017-10-20 2018-01-12 中国农业大学 一种玉米抗盐主效qtl及其相关基因、分子标记和应用
CN108148845A (zh) * 2018-02-08 2018-06-12 黄淮学院 一种增强植物耐盐性的玉米ZmKNOLLE基因、蛋白及用途
CN110511272A (zh) * 2019-08-30 2019-11-29 南通大学 一种玉米ZmbHLH55转录因子及其应用
CN110818785A (zh) * 2019-11-26 2020-02-21 吉林省农业科学院 一种玉米蔗糖转运蛋白ZmSUT3J及其编码基因和应用
WO2021207472A2 (en) * 2020-04-08 2021-10-14 Donald Danforth Plant Science Center Methods and compositions for improving cold-tolerance of plants
CN112048512A (zh) * 2020-09-21 2020-12-08 河南农业大学 一种调控玉米叶夹角的正向调控因子及其应用
CN112941084A (zh) * 2021-03-01 2021-06-11 中国农业大学 一种玉米耐受盐胁迫导致的渗透胁迫的基因、分子标记和应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
EST–SNP Study of Olea europaea L. Uncovers Functional Polymorphisms between Cultivated and Wild Olives;Roberto Mariotti et al;《Genes》;第第11卷卷;第1-19页 *

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