CN107474123A - 一种含CCT结构域的转录因子ZmCOL3及其编码基因、载体、宿主菌和应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种含CCT结构域的转录因子ZmCOL3及其编码基因、载体、宿主菌和应用，属于植物基因工程技术领域。本发明提供的含CCT结构域的转录因子ZmCOL3具有较好的调控作物农艺性状的作用；编码CCT结构域ZmCOL3的基因ZmCOL3以及包含该基因的基因座通过载体或者宿主菌等，可以应用于作物遗传改良；具有较好的实际应用价值和推广价值。

Description

一种含CCT结构域的转录因子ZmCOL3及其编码基因、载体、宿 主菌和应用

技术领域

本发明涉及植物基因工程技术领域，具体而言，涉及一种含CCT 结构域的转录因子ZmCOL3及其编码基因、载体、宿主菌和应用。

背景技术

玉米(Zea mays L.)是世界粮食作物中产量最高的谷类作物，增产潜力巨大，在农业中有极其重要的地位。玉米开花期、株高和叶片数三种农艺性状是玉米理想株型设计的重要组成部分，在提高玉米产量方面发挥至关重要的作用。

玉米起源于中北美的热带地区，属于典型短日照植物。玉米进入温带地区广泛种植是人工驯化的结果。玉米开花受光周期调控明显，热带、亚热带玉米种质引种到温带种植后，大多会出现开花期延迟，雌雄不协调，晚熟等问题，严重限制了上述种质资源在温带玉米遗传育种中的研究应用。受光周期敏感性的影响，不同玉米品种间存在不同生态区适应性，很多玉米品种无法跨地区推广种植。玉米与水稻开花期调控机制最为相似，主要通过光周期途径调控玉米开花。玉米光周期调控研究中光受体和生物钟节律基因相关研究较为详细，光受体和生物钟节律基因与水稻、拟南芥同源性高，功能也较为保守。HYA1/2、PHYB1/2、PHYC1/2和ZmHY2等玉米光敏色素基因[48,49]， ZmCCA1、ZmLHY、ZmTOC1a、ZmTOC1b、ZmPRR73、ZmPRR37、 ZmPRR59、GIGZ1a、GIGZ1b、ZmFKF1a和ZmFKF1b等玉米生物钟节律基因陆续被克隆。光受体phyB基因长日照条件下推迟玉米成花素传导，该基因突变导致玉米明显的早花。光受体ZmHY2基因可以阻止光敏色素发色团合成，引起玉米对光不敏感，进而早花。生物钟节律调控方面，ZmCCA1和ZmTOC1被证实是最为关键的功能基因。

目前，玉米光周期调控开花信号转导途径研究还相对滞后。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种含CCT结构域的转录因子 ZmCOL3，含CCT结构域的ZmCOL3能够应用于作物分子遗传育种等方面。

本发明的第二目的在于提供编码上述的含CCT结构域的转录因子ZmCOL3的ZmCOL3基因。

本发明的第三目的在于提供含有上述的基因的基因组序列 GRMZM2G021777。

本发明的第四目的在于提含有上述的基因的载体。

本发明的第五目的在于提供含有上述的基因的宿主菌。

本发明的第六目的在于提供上述的基因在作物遗传育种中的应用。

本发明的第七目的在于提供上述的基因在调控作物开花期中的应用。

为了实现本发明的上述目的，采用以下技术方案：

一种含CCT结构域的转录因子ZmCOL3，含CCT结构域的转录因子ZmCOL3的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

编码上述的含CCT结构域的转录因子ZmCOL3的基因。

含有上述的基因的基因组序列GRMZM2G021777，基因组序列 GRMZM2G021777的碱基序列如SEQ ID No.3所示。

含有上述的基因的载体。

含有上述的基因的宿主菌。

如上述的基因在作物遗传育种中的应用。

如上述的基因在调控作物开花期中的应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明提供的含CCT 结构域的转录因子ZmCOL3具有较好的调控作物农艺性状的作用；编码CCT结构域ZmCOL3的基因以及包含该基因的基因座通过载体或者宿主菌等，可以应用于作物遗传改良；具有较好的实际应用价值和推广价值。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为本发明实验例2提供的ZmCOL3亚细胞定位载体结构图；

图2为本发明实验例2提供的ZmCOL3亚细胞定位结果图；

图3为本发明实验例3提供的ZmCOL3基因过表达载体结构图；

图4为本发明实验例3提供的ZmCOL3基因RNAi载体结构图；

图5为本发明实验例5提供的ZmCOL3过表达玉米转化事件PCR 检测结果图；

图6为本发明实验例5提供的ZmCOL3过表达玉米转化事件的表达量结果图；

图7为本发明实验例5提供的长日照下植株开花期展示航拍图；

图8为本发明实验例6提供的ZmCOL3过表达玉米转化事件的差异转录组测序分析和代谢网络分析图。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

下面对本发明实施例的一种含CCT结构域的转录因子ZmCOL3 及其编码基因、载体、宿主菌和应用进行具体说明。

研究表明，在拟南芥中存在4条调控开花时间的途径即光调控途径、自主开花途径、春化途径以及赤霉素信号途径。对于单子叶模式植物水稻，主要存在光周期调控的开花途径。CO(CONSTANS)是第 1个被克隆的参与拟南芥光调控开花的基因，在长日照条件下促进拟南芥开花。CO编码的蛋白质的C端有一段编码43-45个氨基酸的核定位序列，随后该段氨基酸在CONSTANS类基因和TOC1编码氨基酸的C端中也被发现保守的存在，因此被命名为CCT结构域。

一种含的CCT结构域的转录因子ZmCOL3，转录因子ZmCOL3 的氨基酸序列如SEQ IDNo.1所示。

编码上述的含CCT结构域的转录因子ZmCOL3的基因。

进一步地，上述基因的碱基序列如SEQ ID No.2所示。

含有上述的基因的基因座GRMZM2G021777，基因座 GRMZM2G021777的碱基序列如SEQ ID No.3所示。

含有上述的基因的载体。

含有上述的基因的宿主菌。

如上述的基因在作物遗传育种中的应用。

如上述的基因在调控作物开花期中的应用。

进一步地，通过调控作物编码含有CCT结构域的转录因子 ZmCOL3的基因的表达，实现调控所述作物开花期。

进一步地，作物为单子叶植物，优选地，单子叶植物为玉米。

以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。

实施例1

本实施例提供一种含有CCT结构域的转录因子ZmCOL3，转录因子ZmCOL3的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

实施例2

本实施例提供一种编码转录因子ZmCOL3的基因(命名为 ZmCOL3基因)，ZmCOL3基因的碱基序列如SEQ ID No.2所示。

实施例3

本实施例提供一种含有编码ZmCOL3的ZmCOL3基因的基因座 GRMZM2G021777，基因座GRMZM2G021777的碱基序列如SEQ ID No.3所示。

实验例1

本实验例提供一种基因座GRMZM2G021777与玉米开花期的关联分析及基因座GRMZM2G021777基因、编码含CCT结构域的转录因子ZmCOL3的ZmCOL3基因克隆。

将具有遗传多样性的、田间实验中表现出良好适应性的368份自交系分别种植于海南、云南、四川、广西、重庆、河南、湖北、北京和吉林省等多个不同纬度，不同日照时间的地点；采集不同种植地的自交系样本三到六叶期幼嫩叶片，并提取基因组DNA，进行全基因组关联分析GWAS(Genome-wide association study)。发现基因座 GRMZM2G021777的基因与玉米的开花期相关。

玉米总RNA的提取

使用Trizol提取植物总RNA(实验所用试剂和耗材均为 RNase-free),方法如下：

1.1取100mg玉米新鲜的叶片，液氮研磨成粉转移至离心管中；

1.2加入1mL Trizol立即涡旋混匀，室温放置5-10min；

1.3在4℃，13000g的条件离心15min，取900μL上清至新的离心管中，加入500μL氯仿涡旋混匀；

1.4在4℃，13000g的条件离心15min，取500μL上清至新的离心管中，加入500μL异丙醇震荡混匀，室温放置10min；

1.5在4℃，13000g的条件离心15min，弃上清，用75％乙醇洗涤沉淀2-3次，弃乙醇，室温晾干5min；

1.6加入适量的RNase-free水溶解沉淀；

1.7取2μL RNA样品稀释10倍，用NanoVue超微量分光光度计测定RNA的浓度及纯度，同时进行琼脂糖凝胶电泳检测RNA的质量及完整性；

1.8如检测发现RNA样品中有DNA污染，需要使用DNaseI (Rnase-free)处理样品并重复之前的抽提检测步骤。RNA样品无问题后，-80℃保存备用或直接进行下一步的反转录实验。

反转录

使用RevertAid First Strand cDNASynthesis Kit(Thermo Scientif ic)进行反转录实验,体系如下：

混匀，65℃，5min，冰上放置2min

混匀，42℃，60min，70℃，5min。获得玉米叶片的cDNA，-80℃保存备用。

以获得的玉米叶片的cDNA为模板，通过引物对col-F1/col-R1 扩增，扩增获得编码含有CCT结构域的转录因子ZmCOL3的ZmCOL3基因的编码区序列ZmCOL3CDS，编码区序列如SEQ ID No.2所示。

上游引物col-F1：5’-ATGGACACCG CGGCGGAGCT

下游引物col-R1：5’-TCAACAGAAG GACGGGACGA

编码区序列编码含有CCT结构域的转录因子ZmCOL3，含有 CCT结构域的转录因子ZmCOL3的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

根据含有CCT结构域的转录因子ZmCOL3的编码区序列 ZmCOL3CDS得到其基因组序列GRMZM2G021777，基因组序列 GRMZM2G021777的碱基序列如SEQ ID No.3所示。

实验例2

本实验提供ZmCOL3亚细胞定位植物表达载体构建和亚细胞定位。

亚细胞定位载体的构建

1.1在ZmCOL3CDS引入酶切位点SacI和SpeI，并将带有酶切位点的ZmCOL3CDS克隆到pUC57载体，得到pUC57：：ZmCOL3 CDS载体；

1.2用SacI和SpeI分别双酶切pUC57：：ZmCOL3CDS载体和 pCAMBIA1302-35S::GFP载体；得到酶切片段；

1.3用连接酶连接已经双酶切的酶切片段，得到 pCAMBIA1302-35S::ZmCOL3-GFP载体。

玉米原生质体提取方法参照Jen Sheen实验室的分离指南。玉米原生质体酶解时间为7～8h，PEG浓度为30％，转化时间为20min，质粒量/原生质体量为105/10μg，转化率为20～30％。荧光蛋白报告基因GFP、和RFP的检测分别采用激发光405nm和488nm，发射光为405～480nm和488～540nm，40×的物镜，多荧光定位时采用分通道扫描模式，ZEN2009light edition软件处理图像。空对照载体转化原生质体，亚细胞定位载体和核定位对照载体共转化到玉米原生质体中，激发光条件下分别观察三种报告基因的表达。

获得的重组pCAMBIA1302-35S::ZmCOL3-GFP载体的结构见图 1；参见图2，发现空对照载体转化原生质体，亚细胞定位载体和核定位对照载体在玉米原生质体瞬时表达系统中表达。对照载体主要定位在原生质体的细胞质中，而ZmCOL3荧光定位于细胞核中。

实验例3

本实验提供含有CCT结构域的转录因子ZmCOL3编码区序列 ZmCOL3CDS的过表达载体、RNAi载体及其构建方法。

ZmCOL3CDS的过表达载体的构建

1.1通过引物在基因组序列GRMZM2G021777引入酶切位点SacI 和SpeI，将带有酶切位点的基因组序列GRMZM2G021777克隆到 pUC57载体，得到pUC57：：GRMZM2G021777载体，通过测序验证序列没有突变位点；

1.2分别酶切pUC57：：GRMZM2G021777载体和过表达 pCAMBIA3300-ZmUbi，分别回收酶切片段；

1.3用T4连接酶连接经酶切片段，得到ZmCOL3的过表达载体 pCAMBIA3300-ZmUbi::GRMZM2G021777。

ZmCOL3的RNAi载体的构建

2.1人工合成转录因子ZmCOL3编码核苷酸的RNAi片段 (ZmCOL3-RNAi)，RNAi片段的碱基序列如SEQ ID No.4所示；

2.2在RNAi片段引入酶切位点SacI和SpeI，并将带有酶切位点的RNAi片段克隆到pUC57载体上；得到pUC57：：ZmCOL3-RNAi 载体；

2.3分别酶切pUC57：：ZmCOL3-RNAi载体和载体 pCAMBIA3300-ZmUbi；并分别回收酶切片段；

2.4通过T4连接酶连接经过酶切的片段；得到 pCAMBIA3300-ZmUbi::ZmCOL3-RNAi载体。

ZmCOL3的过表达载体pCAMBIA3300-ZmUbi:: GRMZM2G021777和RNAi载体结构如图3和图4所示。

实验例4

本实验例提供ZmCOL3过表达玉米植株和ZmCOL3-RNAi植株的获得。

1.1将实验例2获得过表达载体pCAMBIA3300-ZmUbi:: GRMZM2G021777和pCAMBIA3300-ZmUbi::ZmCOL3-RNAi载体分别转化农杆菌EHA105的感受态细胞，获得过表达载体 pCAMBIA3300-ZmUbi::GRMZM2G021777和pCAMBIA3300-ZmUbi::ZmCOL3-RNAi载体的转化农杆菌EHA105阳性株；

1.2采用农杆菌介导法，将过表达载体pCAMBIA3300-ZmUbi:: GRMZM2G021777和pCAMBIA3300-ZmUbi::ZmCOL3-RNAi载体的转化农杆菌EHA105阳性株分别在YEP培养基中28℃震荡培养，使细菌处于对数生长期；收集菌体在3000r/min下离心10min；

1.3弃上清液；菌体用N6液体培养基洗涤，离心收集；再将菌体用添加有100mmol/L乙酰丁香酮和400mg/L改良的N6液体培养基悬浮，获得OD₅₅₀＝0.3菌体悬浮液，用于转化；

1.4收获授粉后9-12天的玉米植株(HiII)幼穗，除掉苞叶，灭菌后用无菌水洗涤，剥取直径1.5-2.0mm的幼胚，经愈伤组织诱导获得胚性愈伤组织细胞，浸于菌体悬浮液5min，取出沥干菌液，转接至共培养基，28℃暗培养3天；

1.5将共培养结束后的胚性愈伤组织细胞转移到添加有Kan抗生素的静息培养基恢复培养1周，再转入带有一定浓度的除草剂双丙氨膦的筛选培养基中进行筛选培养，每2周更换一次培养基，直到筛选出抗性愈伤组织；

1.6将抗性愈伤组织转移到分化培养基，再生植株；将再生植株进行炼苗移栽，待植株生长到7-8叶时，取叶片提取DNA，采用PCR 技术检测外源基因；获得ZmCOL3过表达玉米植株(获得4个转化事件1-39、26-12、29-5和1-4)和ZmCOL3-RNAi植株(获得转化事件4-10)。

实验例5

本实验例对实验例4获得ZmCOL3过表达玉米植株和 ZmCOL3-RNAi玉米植株进行农艺性状的调查。

ZmCOL3过表达玉米植株和ZmCOL3-RNAi玉米植株在短日照条件下的农艺性状调查

2016年冬季和2017年春季，分别将实验材料在海南省南繁实验基地进行播种。所有试验遵循正常田间生产方式统一管理。开花期调查分抽雄、散粉和吐丝三个性状进行调查。在抽雄开始时，每天调查一次。以单株顶端可见雄穗作为抽雄判定指标，从播种到见雄穗经历的天数，即为该单株的抽雄期；以单株顶端雄穗主穗1/3散粉作为散粉判定指标，从播种到见散粉经历的天数，即为该单株的散粉期；以单株雌穗的花丝从苞叶中伸出2cm作为吐丝判定指标，从播种到吐丝的天数，即为该单株的吐丝期。实验结果如表1所示。

表1短日照条件下ZmCOL3过表达转基因玉米与非转基因对照开花期田间调查。

2016年冬季海南省短日照条件下开花期相关农艺性状调查结果表明：短日照条件下：ZmCOL3过量表达1-4转化事件相比对照，开花、吐丝和散粉时期推迟约1-2天；ZmCOL3过量表达16-12转化事件相比对照，开花、吐丝和散粉时期推迟约1-2天。2017年春季海南省短日照条件下开花期农艺性状调查结果表明：短日照条件下： ZmCOL3过量表达1-39转化事件相比对照，开花、吐丝和散粉时期推迟约3天；ZmCOL3过量表达29-5转化事件相比对照，开花、吐丝和散粉时期推迟约5天。

ZmCOL3过表达玉米植株和ZmCOL3-RNAi玉米植株在长日照条件下的农艺性状调查

2016年所有实验材料在吉林省公主岭市播种。播种时间为5月初；所有试验遵循正常田间生产方式统一管理。开花期调查，分抽雄、散粉和吐丝三个性状进行调查。在抽雄开始时，每天调查一次。以单株顶端可见雄穗作为抽雄判定指标，从播种到见雄穗经历的天数，即为该单株的抽雄期；以单株顶端雄穗主穗1/3散粉作为散粉判定指标，从播种到见散粉经历的天数，即为该单株的散粉期；以单株雌穗的花丝从苞叶中伸出2cm作为吐丝判定指标，从播种到吐丝的天数，即为该单株的吐丝期。

吉林省公主岭市长日照条件下不同转化事件分子检测结果如图 5，过表达植株的阳性事件1-39、26-12、29-5和1-4均分子检测具有目标条带；如图6所示，ZmCOL3过表达玉米植株中转录本ZmCOL3 表达量显著增加。

表2吉林长日照条件下ZmCOL3过表达转基因玉米与非转基因对照开花期田间调查

“+”代表ZmCOL3阳性转化事件，“-”代表非转基因对照；BC1F1表示回交1代再自交1代；BC2F1 表示回交2代再自交1代；BC3F1表示回交3代再自交1代。

表3长日照条件下ZmCOL3抑制表达转基因玉米与非转基因对照开花期田间调查

“+”代表ZmCOL3阳性转化事件，“-”代表非转基因对照；BC1F1表示回交1代再自交1代。

如图7所示，ZmCOL3过表达的植株与非转基因植株比较；开花期明显延迟；如表2和表3所示，开花期农艺性状调查结果表明： ZmCOL3过量表达后显著推迟了玉米开花期。ZmCOL3过量表达1-39 转化事件开花、吐丝和散粉时期相比对照，推迟约3-5天；ZmCOL3 过量表达1-4转化事件开花、吐丝和散粉时期相比对照，推迟约3天； ZmCOL3过量表达26-12转化事件开花、吐丝和散粉时期相比对照，推迟约4-5天；ZmCOL3过量表达29-5转化事件开花、吐丝和散粉时期相比对照，推迟约5天。ZmCOL3抑制表达转化事件早开花约1 天。

实验例6

本实验例对实验例3获得ZmCOL3过表达玉米植株和 ZmCOL3-RNAi玉米植株进行差异转录组分析。

种植ZmCOL3过表达玉米植株和ZmCOL3-RNAi玉米植株以及非转基因植株作为对照。

取样时间点：玉米开花期前，6叶期，即第6片叶完全展来；

取样方法：每种材料各取10株，取样位置为玉米第6片叶尾边缘叶；

样品确认：每份样本先进行反转录和Real-time PCR验证，确定转基因阳性玉米叶片中ZmCOL3表达量，同时保留cDNA用于测序质量验证。

转录组测序策略：每种植株类型取5片叶片混合成池测序，即2 个生物学重复测序所用。

测序完成后，随机筛选10个上调和10个下调基因进行qRT-PCR 实验，分析目的基因表达水平，验证测序质量；基因表达量统计使用 FPKM法计算；差异表达分析采用Cuffdiff软件完成；差异表达模式聚类分析采用cluster软件进行，用java Treeview显示聚类结果；基因功能注释从Gramene网站获得，使用AgriGO进行Gene Ontology (GO)功能显著性富集分析；基因Pathway显著性富集分析采用 KEGG数据库完成。

参见图8差异分析实验结果表明ZmCOL3过量表达而产生的上调表达和下调表达靶基因2000余个(图8b)，主要集中在和光响应等有关的代谢通路(图8c)。成功克隆3个目前已知光周期调控基因 ZCN8，CONZ1和ZmCCT启动子序列，并分别构建了驱动GUS报告基因的植物表达载体；成功构建ZmCOL3过表达的激活载体； ZmCOL3和ZmCCT共转化玉米原生质体转录激活结果证实： ZmCOL3可以直接结合ZmCCT启动子序列，位于ZmCCT基因上游调控表达。

进一步证实ZmCOL3通过共调控ZmPPR37a、ZmPPR37b和 ZmCCT基因表达上调促进晚花，通过共调控ZmPPR37a、ZmPPR37b 和ZmCCT基因表达下调促进早花(图8d和图8e)。

当然ZmCOL3基因也可以应用于其他作物。

综上所述，本发明实施例提供的含CCT结构域的转录因子 ZmCOL3及其编码基因和基因组序列能调控玉米的早花或者晚花，即ZmCOL3基因可以调控玉米的开花期，并且可以应用于玉米的遗传育种中，具有较高的实用性和较高的推广应用价值。

以上所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

SEQUENCE LISTING

<110> 吉林省农业科学院

<120> 一种含有CCT结构域的转录因子及其编码基因、载体、宿主菌和应用

<130> PA17025225SC

<160> 4

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 335

<212> PRT

<213> Zea mays

<400> 1

Met Asp Thr Ala Ala Glu Leu Glu Leu Gly Leu Glu Leu Glu Gln Lys

1 5 10 15

Pro Ala Ala Gly Tyr Trp Ser Val Val Gly Ala Arg Pro Cys Asp Ala

20 25 30

Cys Ala Ala Glu Pro Ala Arg Leu His Cys Arg Ala Asp Gly Ala Phe

35 40 45

Leu Cys Pro Gly Cys Asp Ala Arg Ala His Gly Ala Gly Ser Arg His

50 55 60

Ala Arg Val Trp Leu Cys Glu Val Cys Glu His Ala Pro Ala Ala Val

65 70 75 80

Thr Cys Arg Ala Asp Ala Ala Ala Leu Cys Ala Ala Cys Asp Ala Asp

85 90 95

Ile His Ser Ala Asn Pro Leu Ala Arg Arg His Glu Arg Leu Pro Val

100 105 110

Ala Pro Leu Phe Gly Ala Leu Ala Asp Ala Pro Gln Pro Phe Pro Ser

115 120 125

Pro Ala Phe Ala Ala Ala Ala Gly Ala Glu Ala Pro Ala Gln Gly Glu

130 135 140

Ala Val Ala Glu Asp Tyr Gly Ser Ser Glu Ala Glu Ala Ala Ser Trp

145 150 155 160

Leu Leu Pro Glu Pro Asp Asn Ser His Glu Asp Ser Ala Ala Asp Thr

165 170 175

Phe Phe Ala Glu Ser Asp Ala Tyr Leu Gly Ala Asp Leu Asp Phe Ala

180 185 190

Arg Cys Met Asp Gly Val Lys Ala Ile Gly Val Pro Val Ala Pro Pro

195 200 205

Glu Leu Asp Ile Gly Ala Gly Ser Phe Cys Tyr Pro Glu His Ser Met

210 215 220

Asn His Ile Leu Ser Ser Ser Ser Glu Val Ala Val Val Pro Asp Ala

225 230 235 240

Gln Ala Ala Gly Leu Pro Val Val Val Val Val Ser Arg Gly Glu Glu

245 250 255

Arg Glu Ala Arg Leu Met Arg Tyr Arg Glu Lys Arg Lys Asn Arg Arg

260 265 270

Phe Asp Lys Thr Ile Arg Tyr Ala Ser Arg Lys Ala Tyr Ala Glu Thr

275 280 285

Arg Pro Arg Ile Lys Gly Arg Phe Ala Lys Arg Arg Ser Ala Glu Gly

290 295 300

Glu Asp Glu Ala Leu Glu His Glu Glu Gly Ala Cys Phe Ser Pro Thr

305 310 315 320

Gly Ser Ala Pro Ala Ala Ser Asp Gly Val Val Pro Ser Phe Cys

325 330 335

<210> 2

<211> 1008

<212> DNA

<213> Zea mays

<400> 2

atggacaccg cggcggagct ggagctgggg ctggagttgg agcagaagcc ggcggcgggg 60

tactggagcg tggtgggcgc gcgcccttgc gacgcgtgcg ccgcggagcc ggcgcggctg 120

cactgccgcg cggacggcgc gttcctgtgc cccggctgcg acgcccgggc gcacggcgcc 180

gggtcgcgcc acgcgcgcgt ctggctgtgc gaggtctgcg agcatgcccc cgccgccgtc 240

acctgccgcg ccgacgccgc cgcgctgtgc gccgcctgcg acgccgacat ccactcggcc 300

aacccgctcg cgcgccgcca cgagcgcctc cccgtcgccc ctctcttcgg cgcgctcgcg 360

gacgcgccgc agcccttccc gtccccggcc ttcgctgccg ccgcgggggc cgaggcccca 420

gctcaggggg aagcggtggc ggaagactac gggagcagcg aggccgaggc ggcgtcgtgg 480

ctgctccccg agcccgacaa cagccacgag gacagcgccg ccgacacgtt cttcgcggag 540

tcggacgcgt acctcggcgc cgacctcgac ttcgcccggt gcatggacgg cgtcaaggcc 600

atcggcgtgc cggtcgcgcc gcccgagctg gacatcggtg ccggcagctt ttgctacccc 660

gaacactcca tgaaccacat tttgtcgtca tcctcggagg tggcggtggt accggacgcg 720

caggcggccg gcctgccggt ggtggtggtg gtgagcagag gggaggagcg ggaggcgcgg 780

ctgatgcggt accgtgagaa gcgcaagaac cgccggttcg acaagaccat ccgctacgcg 840

tcccgcaagg cgtacgccga gacgcggccg cgcatcaagg gccgcttcgc caagcgccgc 900

tccgcggagg gcgaggacga ggcgctggag cacgaggaag gggcgtgctt ctcgcccacg 960

gggtcggcgc ccgccgcgtc ggacggcgtc gtcccgtcct tctgttga 1008

<210> 3

<211> 903

<212> DNA

<213> Zea mays

<400> 3

atggacaccg cggcggagct ggagctgggg ctggagttgg agcagaagcc ggcggcgggg 60

tactggagcg tggtgggcgc gcgcccttgc gacgcgtgcg ccgcggagcc ggcgcggctg 120

cactgccgcg cggacggcgc gttcctgtgc cccggctgcg acgcccgggc gcacggcgcc 180

gggtcgcgcc acgcgcgcgt ctggctgtgc gaggtctgcg agcatgcccc cgccgccgtc 240

acctgccgcg ccgacgccgc cgcgctgtgc gccgcctgcg acgccgacat ccactcggcc 300

aacccgctcg cgcgccgcca cgagcgcctc cccgtcgccc ctctcttcgg cgcgctcgcg 360

gacgcgccgc agcccttccc gtccccggcc ttcgctgccg ccgcgggggc cgaggcccca 420

gctcaggggg aagcggtggc ggaagactac gggagcagcg aggccgaggc ggcgtcgtgg 480

ctgctccccg agcccgacaa cagccacgag gacagcgccg ccgacacgtt cttcgcggag 540

tcggacgcgt acctcggcgc cgacctcgac ttcgcccggt gcatggacgg cgtcaaggcc 600

atcggcgtgc cggtcgcgcc gcccgagctg gacatcggtg ccggcagctt ttgctacccc 660

gaacactcca tgaaccacat tgtaagccgt acttttaata gtatatccgg gatcctcctc 720

acggacagat cacagaggtt ggatgatggt gataacgtag acgcctttca atccctcctt 780

attgcagttg tcgtcatcct cggaggtggc ggtggtaccg gacgcgcagg cggccggcct 840

gccggtggtg gtggtggtga gcagagggga ggagcgggag gcgcggctga tgcggtaccg 900

tga 903

<210> 4

<211> 613

<212> DNA

<213> Zea mays

<400> 4

ggactagtat cggcgtgccg gtcgcgccgc ccgagctgga catcggtgcc ggcagctttt 60

gctaccccga acactccatg aaccacattg taagccgtac ttttaatagt atatccggga 120

tcctcctcac ggacagatca cagaggttgg atgatggtga taacgtagac gcctttcaat 180

ccctccttat tgcagttgtc gtcatcctgt acgtatatac cgcagtactg atactactag 240

ctagctagcg ctacgtgtac atgtgtatga tctggcagca tgcatatata tatatatgta 300

tgcgtccagt ccagctgatg atgcctaatt ttttttctct tgccacacat gtacgtatgc 360

atgtacgttt ctccttgcgt caattcgcgg cggcgtacgt gtgcagagga tgacgacaac 420

tgcaataagg agggattgaa aggcgtctac gttatcacca tcatccaacc tctgtgatct 480

gtccgtgagg aggatcccgg atatactatt aaaagtacgg cttacaatgt ggttcatgga 540

gtgttcgggg tagcaaaagc tgccggcacc gatgtccagc tcgggcggcg cgaccggcac 600

gccgatgagc tcg 613

Claims (10)

1.一种含CCT结构域的转录因子ZmCOL3，其特征在于，所述含CCT结构域的转录因子ZmCOL3的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

2.编码如权利要求1所述的含CCT结构域的转录因子ZmCOL3的基因。

3.根据权利要求2所述的基因，其特征在于，所述基因的碱基序列如SEQ ID No.2所示。

4.含有权利要求2或3所述的基因的基因组序列GRMZM2G021777，所述基因组序列GRMZM2G021777的碱基序列如SEQ ID No.3所示。

5.含有权利要求2或3所述的基因的载体。

6.含有权利要求2或3所述的基因的宿主菌。

7.如权利要求2或3所述的基因在作物遗传育种中的应用。

8.如权利要求2或3所述的基因在调控作物开花期中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，通过调控作物编码含有CCT结构域的转录因子ZmCOL3的基因的表达，实现调控所述作物开花期。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述作物为单子叶植物，优选地，所述单子叶植物为玉米。