CN1182368A - 来源于胆汁的治疗免疫系统紊乱的免疫调节组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及作为免疫调节剂的组合物,该组合物包含分子量小于3000道尔顿并且具有下列特性的小分子量组分:(a)可由动物胆汁中提取;(b)能体外或体内刺激单核细胞和巨噬细胞;(c)能调节肿瘤坏死因子的产生;(d)含有不可测的IL-1α、IL-1β、TNF、IL-6、IL-8、IL-4、GM-CSF和IFN-γ;(e)在恶性小鼠杂交瘤细胞系中具有抗增值作用;(f)对人类外周血单核细胞或淋巴细胞不表现出细胞毒性;(g)不是一种内毒素。本发明也涉及制备所说的组合物的方法,其作为免疫调节剂的用途和其在治疗具有免疫学问题(如癌症或子宫内膜异位)的疾病和病症方面的用途。
Description
发明所属技术领域
本发明涉及免疫调节组合物,包含这种组合物的药物组合物和所说的组合物在治疗哺乳动物上的用途。具体地说,这种组合物直接针对治疗与免疫系统紊乱相关的疾病。
发明背景
预防和治疗癌症和自身免疫、感染和炎症疾病的疗法一直在发展,所有这些疾病都是不足的免疫系统应答的直接结果。一些治疗方法试图在治疗上利用免疫系统。
一种方法基于免疫系统的抗原特异性因子,即抗体和T细胞。例如,研究已经集中在针对外来物或针对某些内源化学信使(白细胞介素)的疫苗,以便控制和诱导某些抗体反应。第二种方法基于来源于免疫系统非抗原特异性部分的肽和蛋白质的分离、克隆、表达和产生。例如,包含由白血细胞产生的白细胞介素的蛋白质(如细胞因子)和刺激淋巴细胞和消化外来抗原的清除细胞的干扰素赋予这种治疗的可能性。
例如,如果能够增加对肿瘤的早期免疫应答,以便肿瘤不会达到关键的大小,癌症的治疗则能大大的改进。已经提出的增加肿瘤免疫应答的策略包括:肿瘤相关抗原的特异性疫苗;针对肿瘤细胞表面抗原(如针对IL-2受体)的单克隆抗体的用途;包含抗肿瘤抗体和超级抗原的双特异性分子。
最近,研究了生理活性多肽(被认为是肿瘤坏死因子(TNF))的作用。已表明TNF诱导肿瘤的坏死,对活体的正常组织没有影响。在美国专利4,879,226已经公开了TNF的氨基酸序列和编码TNF的DNA的碱基序列。
由于,已表明TNF具有诱导肿瘤坏死的作用,所以任何在体内能刺激TNF产生和生物可利用的试剂都具有治疗各种癌症病症的潜在的用途。此外,任何在体外能刺激人类单核细胞和巨噬细胞产生TNF的试剂,作为一种用于提供治疗给药目的以及用于分析和诊断目的的TNF源的手段都是有用的。
其它的疾病也具有或和削弱的免疫系统应答有关。例如,自身免疫疾病是这些紊乱,其中免疫系统产生机体的非外来物质的抗体,结果导致炎症,并进一步引起组织损坏。例如,风湿性关节炎(RA)是一种自身免疫疾病,其中机体的免疫系统错误地将关节衬料的正常细胞(称为滑膜)识别为外来物质。自身免疫的发作可以完全破坏衬料。在最一种的情况下,关节停止功能,经外科手术由人造关节代替。在RA中,TNF是破坏的介体。从温和的症状到严重的损形的进程是非常迅速的。并且对RA患者,没有有效的治疗。其它实质上无法治疗的自身免疫疾病包括:狼疮红斑、多发性硬化和肌萎缩性侧索硬化。
只通过避免或者使机体免疫系统无效,传染性疾病(如由细菌、病毒和其它机会致病菌引起的那些疾病)就能继续。免疫系统增加或引起对抗所说的病原体的非特异性免疫应答和特异性免疫应答因子之一或全部。非特异性免疫应答集中在细胞因子的产生上,主要是有巨噬细胞产生的因子,并且作为特异性抗体反应的前奏。炎症性细胞因子包括TNF-α,并且介导直接针对伤害或感染部位的急性反应,增加的血液供应表明伤害或者感染的部位。嗜中性和巨噬细胞吞噬病原菌或者病毒,以试图将感染保持在最小的组织范围内。并且,巨噬细胞在抵御传染病方面具有如下的关键作用:
(1)抗原的加工和呈递到淋巴细胞,以便抗体介导的和细胞介导的免疫应答能发生;
(2)免疫应答中枢的细胞因子的分泌;和
(3)抗体包衣的细菌、肿瘤或宿主细胞的破坏。
巨噬细胞能吞噬和杀死各种各样的病原体,如细菌、真菌和原生动物(寄生虫)。当“激活”巨噬细胞时,这种能力增强。激活的巨噬细胞的分泌产物比其它任何免疫细胞的分泌产物都更多样化。这些免疫产物调节促炎和抗炎作用,并调节其它细胞类型。这些产物包括TNF-α、IL-1β、IL-6、水解酶,而主要通过所说的细胞介导的免疫过程除去的氧化代谢细菌的产物包括肺结核和其它相关的分枝杆菌感染(如非典型的分枝杆菌感染(在一半以上的AID患者中可见这种感染))和炭疽,潜在的细菌竞争剂。真菌感染在免疫抑制患者(如AID感染的患者或器官移植患者)中是常见的问题。原生动物包括有机体(如疟疾)。
炎症疾病包括子宫内膜异位和炎性肠疾病,所说的炎性肠疾病也是由免疫过程介导的。子宫内膜异位是一种不明原因的疑难病症,并产生影响行经妇女的组织发生。这种疾病的特点是子宫内膜细胞不适当的植入、生长和功能。在月经周期通常排出的子宫内膜细胞和片段,由输卵管运输到腹膜腔中,在有些妇女中,这些物质嵌入在腹膜腔中,并增值,发展成子宫内膜损害。然而,由于子宫内膜细胞似乎存在于所有的行经女性的腹膜腔中,但为什么子宫内膜异位只在一些妇女而不是全部妇女中发生尚不清楚。子宫内膜异位抗原导致疼痛的感染增值、不正常的出血、广泛的瘢痕、排尿或排便疼痛,甚至导致不育。目前没有治疗子宫内膜异位的方法,除了怀孕能提供暂时的减轻,或者利用外科手术除去子宫内膜细胞源,这种方法也导致不育。
最近,大量的报道指出子宫内膜异位和免疫系统的变化有关。早期的报道表明在恒河猴中免疫抑制治疗和子宫内膜异位的增加有关。自此以后,已经观察了子宫内膜异位的人在细胞介导和激素免疫两方面的变化。
在过去的几年中,研究集中在巨噬细胞的子宫内膜异位的作用。有关这些研究的下面的假说是单核细胞/巨噬细胞系统调节子宫内膜细胞的生长,并在正常的健康的妇女中阻止放错地方的子宫内膜细胞增值。在子宫内膜异位的妇女中,使放错地方的子宫内膜细胞嵌入,引起子宫内膜异位。子宫内膜异位的发生对子宫内膜细胞和细胞衍生抗原的自身抗体的产生是一种刺激。然后,这些自身抗体,连同激活的巨噬细胞的产物一起干扰受影响的妇女的生育和生殖能力。
这些研究汇总的结果表明下列有关的事实:
(1)被认为负责破坏异位的子宫内膜细胞的腹膜处理系统(主要由巨噬细胞组成)在大面积子宫内膜异位的妇女中是不健全的;
(2)在大面积子宫内膜异位的妇女中不健全的腹膜巨噬细胞的活性和,至少是部分的和前列腺素介导的事件有关。这样,大面积子宫内膜异位的妇女的腹膜巨噬细胞的响应巨噬细胞激活剂(如γ-干扰素和内毒素)的重要刺激作用,只有当激活培养物中含有前列腺素抑制剂时才能完成;
(3)子宫内膜异位患者的循环单核细胞的产物直接和子宫内膜细胞生长的调节作用有关。在单一的共培养体系中,在和大多数子宫内膜异位患者的单核细胞共培养时,观察到自体子宫内膜细胞的增加;而在和可育的对照患者的单核细胞共培养时,观察到增值的抑制。
(4)子宫内膜异位患者的子宫内膜细胞的增值可以由巨噬细胞衍生的细胞因子调节。目前得到的结果指出患有局限的病的患者的子宫内膜的增值反应可以由白细胞介素-1-β(IL-β)和TNF-α增强。相反,患有大面积疾病的患者的子宫内膜的增值反应由IL-1β和TNF-α抑制。
因此,这些研究结果指出子宫内膜异位患者的单核细胞和巨噬细胞的功能是对所说的疾病的病理生理具有作用。并且,一些巨噬细胞的功能受到该疾病的严重程度影响的不同影响。在患有局限的病的妇女中,巨噬细胞似乎是在腹膜腔,和可能在循环系统中表现机能亢进,并且它们的子宫内膜细胞似乎能和巨噬细胞衍生的不同的生长因子反应。相反,大面积的子宫内膜异位的特征在于在腹膜腔中巨噬细胞的激活的抑制(其中所原因部分是由于免疫调节的前列腺素的过度分泌。在大面积子宫内膜异位的妇女中巨噬细胞产物似乎调节子宫内膜的增值;然而,子宫内膜和不同单细胞因子的反应的质的不同指出在这些妇女中不健全的巨噬细胞的激活有助于或者控制这种疾病的发生。
炎性肠疾病(IBD)是一组和胃肠道有关的不明病因的慢性炎性紊乱的通称。这些紊乱包括非特异性的溃疡结肠炎和克罗恩氏病。可能伴随这些紊乱的肠外表现(如风湿性关节炎、胆管周炎)可能代表自身免疫现象,用于治疗IBD的治疗剂(如皮质甾类和咪唑硫嘌呤)可以通过免疫抑制机制发挥作用。具有炎性肠疾病的患者可能具有针对结肠细胞、细菌抗原(如大肠杆菌)、脂多糖类和外源蛋白的激素抗体。通常,这些抗体的存在和效价和疾病活性无关;然而,很可能这些抗原接近辅助上皮损害的免疫活性细胞。此外,已经描述了IBD和血γ-球蛋白缺乏以及IgA缺陷有关。有关的细胞介导的异常包括皮的无变应性、对各种致有丝分裂的刺激降低的反应性和外围t-细胞数量的减少。
为了各种目的,已经研究了通过肝脏分泌的并储存在胆囊中的胆汁,这些目的包括胆汁提取物对提高经正常的肝脏功能容易产生代谢变化的药物的生物利用率的用途(参见WO 90/12583)和抑制哺乳动物白细胞增多的用途(参见Shinoda等,化学药物公告,30,4429-4434(1982))。但是,从来没有认为胆汁是肿瘤、炎性和传染病的治疗上有用的源。有趣的是,按照英国专利337,797,其指出利用胆囊本身作为抗癌剂的有潜力的源,但是,仅在胆汁从胆囊中除去和胆囊彻底洗涤后。
发明概述
已经发现胆汁是激活免疫系统细胞(如巨噬细胞和单核细胞)的组合物的重要来源,并且对治疗各种癌症,特别是胰癌和恶性黑素瘤是有效的。具体地说,已经发现本发明的组合物在体外和体内都能(例如,通过巨噬细胞)刺激TNF的产生。这种特性对治疗传染病是有用的。
另外,已经发现本发明的免疫调节作用(特别是下调或抑制TNF-α的产生的能力)对治疗其它免疫系统相关的紊乱(如自身免疫疾病和炎性疾病和机能障碍)也可以是有用的。
另外本发明的胆汁组合物被认为例如作为直接针对儿科疾病的疫苗的佐剂添加剂和作为与异种移植有关的排斥现象的保护剂是有用的。
本发明的胆汁组合物是通过用水溶性的或与水易混合的溶剂提取胆汁获得的。如此得到的提取物可以进一步加工,以从中除去不必要或者不受欢迎的组分。
已经发现下文将进一步说明的通过提取胆汁的方法获得的产物具有刺激TNF的活性,并且其被认为对癌症、传染、自身免疫紊乱和炎性紊乱具有活性。具体地说,本发明的胆汁提取物被认为对胰和其它癌具有特异的活性。
很明显,如此得到的完整的组合物对获得这种活性不都是必要的。因此,有必要进一步分离、分级分离或另外加工如此得到的产物,并且仍然保留所期望的刺激TNF产生的能力,例如,抵抗构成各种疾病基础的免疫系统紊乱的能力。并且,已经预见可能通过合成的方法获得与此相同或具有相似的刺激TNF产生和抵抗免疫系统紊乱的能力的产物。这样,可以预见,在其它的生物作用中,可以鉴定和分析所说的产物的组分对所需要的TNF的刺激特性和抵抗免疫系统紊乱的能力的各自的贡献。并且,还可以预见这种鉴定和分析将用于制造合成形式的所说产物。
一方面,本发明涉及用作免疫调节剂的组合物,这种组合物包含分子量小于3000道尔顿并且具有一种或多种下列特性的小分子量组分:
(a)可由动物胆汁中提取;
(b)能体外或体内刺激单核细胞和巨噬细胞;
(c)能调节肿瘤坏死因子的产生;
(d)含有不可测水平的IL-1α,IL-1β,TNF,IL-6,IL-8,IL-4,GM-CSF和IFN-γ;
(e)在恶性细胞系中具有抗增殖作用;
(f)对人类外周血单核细胞或淋巴细胞不表现出细胞毒性;和
(g)不是一种内毒素。
按照优选的实施方案,所说的组合物由牛的胆汁中提取,能够刺激TNF的释放。
本发明的组合物可以按照下列方法制备:(a)把动物的胆汁(优选的是牛的胆汁)和溶于水或与水易混溶的溶剂(优选的是醇)混合(优选的是和等体积的醇混合);(b)分离这种溶液(其优选的是可溶于醇的组分),并通过除去大部分醇(例如通过采用加热)将其分离至实质上不含醇;(c)从溶液中除去胆汁色素以获得澄清的淡黄色液体;(d)处理或不处理澄清的淡黄色液体,以实质上除去任何残留的醇;(e)除去脂类有机物质(如用醚抽提澄清的淡黄色液体),并分离水相;和(f)除去或不除去水相中的醚。
可以简单地将所说的组合物装入小瓶中并灭菌来利用该组合物而不需要进一步的修饰。这种组合物也可以以浓缩的形式利用。优选的浓度形式如下制备。在步骤(e)前,可以将澄清的淡黄色液体浓缩至胆汁/醇溶液体积的1/8,和在步骤(f)前,可以浓缩水相,以便其体积达到胆汁/乙醇溶液体积的1/10。
本发明涉及包含本发明的免疫调节组合物的药物组合物。
本发明还包括治疗患者的方法,这种方法包括向所说的患者施用有效量的本发明的组合物。本发明也涉及本发明的组合物在预防和治疗需要调节免疫应答的疾病和病症(优选的是传染病、炎性疾病、自身免疫疾病、接种疫苗、和异种移植有关的排斥现象和瘤形成)上的用途。
参照下列详细的描述和附图,本发明的这些和其它方法将是显而易见的。此外,本文参考了各种出版物,因此参考文献的全部内容本文一并参考。
附图简要描述
下文借助附图描述的例子进一步描述本发明的细节。
图1是本发明的一种浓缩的组合物的反相高效液相色谱(RP-HPLC)的谱图;
图2是本发明的一种浓缩的组合物的RP-HPLC的谱图;
图3是本发明的一种浓缩的组合物的RP-HPLC的谱图;
图4是显示本发明的组合物对LPS诱导的外周血单核细胞(PBMNs)的TNF释放的影响的曲线图;
图5是显示本发明的组合物对LPS诱导的PBMNs的TNF释放的影响的柱形图;
图6是显示诊断为胰腺癌的患者在用本发明的组合物治疗后得到的存活情况的曲线图;
图7是显示在用本发明的组合物治疗胰腺癌患者后得到的存活情况的曲线图;
图8是显示用本发明的组合物治疗所有的黑素瘤患者的存活情况的曲线图;
图9是显示用本发明的组合物治疗具有两个或多个肿瘤位点的黑素瘤患者的存活情况的曲线图;
图10是显示用本发明的组合物治疗具有三个或多个肿瘤位点的黑素瘤患者的存活情况的曲线图;
图11是本发明的组合物的SDS凝胶;
图12显示在亲水HPLC中本发明组合物的洗脱条件和时间(a)和本发明组合物的上清液的洗脱图谱(b);
图13显示在亲水HPLC中本发明的组合物的沉淀的洗脱;和
图14是显示本发明的组合物在刺激外周血单核细胞的功能的剂量反应曲线图。
发明详述
指导研究的中心假说是有力的生物刺激质的治疗功效可能依赖其引起免疫系统合适调节的能力(如通过激活巨噬细胞和/或单核细胞以产生某些细胞因子)和提高寻找和除去或破坏引起或诱导疾病的细胞(如外源或放错位置的细胞)活性的能力。例如,包含恶性疾病的环境中的杀癌功能将是抗癌的有用的疗法。这种功能可以通过直接刺激肿瘤微环境中残留的免疫细胞而产生。另外,通过刺激循环系统的免疫细胞可以产生这种功能,如果循环系统的免疫细胞然后能定位在恶性疾病位点并在该环境中行使功能。其它基于免疫系统方面的疾病和病症通过用合适免疫调节剂治疗也将被战胜或改善。所说的疾病或病症包括子宫内膜异位(这种疾病症状是正常的子宫内膜细胞在不合适的位点增殖)、各种传染病和其它疾病(下文将充分描述)。
如前面所述,本发明涉及用作免疫调节剂的组合物,这种组合物包含分子量小于3000道尔顿并且具有至少一种下列特性的小分子量组分:
(a)可由动物胆汁中抽提;
(b)能体外或体内刺激单核细胞和巨噬细胞;
(c)能调节肿瘤坏死因子的产生;
(d)含有不可测水平的IL-1α、IL-1β、TNF、IL-6、IL-8、IL-4、GM-CSF和IFN-γ;
(e)在恶性细胞系中具有抗增殖作用;
(f)对人类外周血单核细胞或淋巴细胞不表现出细胞毒性;和
(g)不是一种内毒素。
具体地说,研究已表明本发明的组合物至少一部分能刺激正常的单核细胞以使其对Chang肝细胞瘤细胞发挥细胞毒性作用,此试验用于检测单核细胞和巨噬细胞的激活。已表明所说的组合物将激活癌症患者(包括颈部、卵巢,耳/鼻/喉、肺、子宫内膜癌、卡波济氏肉瘤和骨髓性白血病)的单核细胞和/或巨噬细胞,使之袭击和破坏它们本身的特定的肿瘤细胞。并且,已表明子宫内膜异位患者的巨噬细胞也可由所说的组合物激活(参见实施例26)。
本发明的组合物可以调节肿瘤坏死因子(TNF)的产生。从牛胆汁分离的本发明优选的组合物能促进人类外周血单核细胞和前单核细胞系U-937释放TNF,其中似乎是生理定量的。由于已知TNF能引起炎性和抗肿瘤细胞因子作用的级联反应,所以优选的组合物可以通过刺激人类白细胞释放TNF(和可能的其它细胞因子)而发挥其抗肿瘤作用。因此,本发明也能促进淋巴细胞和巨噬细胞的细胞毒性转移到肿瘤细胞中。
也发现本发明的组合物能够抑制小鼠杂交瘤细胞株HYB-6-1的生长。组合物对小鼠杂交瘤细胞的这种抑制作用说明了抗增殖活性。
也检验了这种组合物对人类外周血单核细胞(PBMNs)和淋巴细胞的存活的作用。发现此组合物对人类PBMNs和淋巴细胞无毒性。
下文进一步列举了本发明的组合物,其中本发明的组合物具有下列特性:
1)对PBMNs的TNF释放有作用的一种或几种组分很早地从C18RP-HPLC柱中洗脱下来。
2)此组合物引起白细胞介素-1β(IL-1β)的释放,对IL-1β释放起作用的组分很早从RP-HPLC中洗脱下来,表明此组分可能与释放TNF的物质是相同的。
3)所说的组合物也引起较少数量的白细胞介素-2(IL-2)的释放。
4)所说的组合物引起粒细胞巨噬细胞菌落刺激因子(GM-CSF)的释放。
5)TNF和GM-CSF的释放比例大约是2∶1。
6)可能是组合物中相同的分子(即组分)对TNF,IL-1β和GM-CSF的释放起作用。可能组合物的作用是刺激多种不同的细胞因子的释放,或者组合物引发一种细胞因子的产生和释放,接下来这种细胞因子再刺激其它细胞因子的产生和释放。
7)通过SDS凝胶电泳和分子筛HPLC对组合物(包括其沉淀和上清液)进行物理化学分析表明其主要组分的分子量小于2500道尔顿。
8)通过亲水(多羟已基)的分子筛HPLC进一步物理化学分析确认了组合物中小分子量组分的存在。
9)酸水解前后的氨基酸分析证明肽键的存在,表明肽的存在。
如前所述,本发明的组合物可以通过下列步骤制备:(a)把动物的胆汁(优选的是牛的胆汁)和等体积的醇混合,产生胆汁/醇溶液;(b)分离出可溶于醇的组分,并将溶液分离至实质上不含醇;(c)从溶液中除去胆汁色素,以获得澄清的淡黄色液体;(d)处理澄清的淡黄色液体,以实质上除去任何残留的醇;(e)以醚抽提澄清的淡黄色液体,并分离水相;和(f)从水相中除去残留的醚。
从任何产生胆汁的动物的胆汁中得到所说的组合物。如果这种组合物从一种动物而不是另一种动物的胆汁中获得,则这种组合物可以加工成针对一种特定疾病的不同活性的物质,通常合适的胆汁源来自鲨鱼、牛、羊、公山羊、猪。可以从屠宰的健康的食用动物(如牛、羊、公山羊、猪)中获得胆汁,以便用于制备本发明的组合物。这样收集的胆汁应该是直接来自屠宰动物的胆囊和/或者肝器官(这适合物种的解剖和生理),并且应该是澄清的,因此表明胆汁制剂实质上没有脓汁和血液。
在此方法的优选实施方案中,利用了牛来源的胆汁。牛的胆汁丰富,这部分是因为可以从每一只动物中抽提相对大量的胆汁。在有关健康状况规则指导下,按照常规屠宰和检查牛,这样这种动物提供了制备本发明组合物可靠的来源。并且,人类不可能对牛来源的物质具有过敏反应。
将胆汁和等体积的醇混合,以产生胆汁/醇溶液,所说的醇是50%的醇。这种醇可以是脂肪族醇,优选的是甲醇、乙醇、或丙醇,最优选的是乙醇。
可以通过离心的方法分离实质上除去了不溶于50%的醇的物质的溶液。所述离心优选的是,在15-25℃下3000-5000rpm,最优选的是4200rpm下离心胆汁/醇混合物至少2小时。
然后可以利用醇和水的不同挥发性通过常规的方法,即将所说的组分加热到合适的温度(如80-85℃),保持一段合适的时间(如大约为10小时)除去包含在胆汁/可溶于醇的组分中的醇。
可以利用活性碳、聚酰胺微颗粒体或过滤的方法从溶液中除去胆汁色素,以获得澄清的淡黄色液体,优选的是利用活性碳处理。为了使溶液满足光密度和传导率标准,可以重复进行以上过程。
利用常规的方法处理澄清的淡黄色液体,实质上澄清任何残留的醇。优选的是利用具有1.0-3.5μm保留(retention),最优选的是2.5μm保留的滤器过滤澄清的淡黄色液体。
然后利用醚抽提澄清的淡黄色液体,并分离水相。在此步骤中所使用的醚优选的是二甲基醚、已醚、正丙醚、异丙醚或正丁醚,最优选的是已醚。
可以通过,例如,将溶液加热到高达55℃,优选的是高达40℃,持续大约5-15小时,最优选的是10小时的方法,从水相中除去残留的醚。
可以简单地将所说的组合物装入小瓶中并灭菌来利用该组合物而不需要进一步的修饰。这种组合物也可以以浓缩的形式利用。优选的浓度形式如下制备。在上文描述的步骤(c)前,可选择性地通过,例如,将澄清的淡黄色液体加热到低于大约85℃,优选的是大约60-70℃,而将其浓缩至胆汁/醇溶液体积的1/8。在步骤(f)前,通过,例如加热到大约80-85℃,可以浓缩水相,以便其体积达到胆汁/乙醇溶液体积的1/10。
在制备本发明组合物优选的方法中,将收集到的胆汁和等体积的乙醇混合。然后在大约20±2℃,大约4200rpm下,将胆汁/醇混合物离心至少21/2小时。倒出上清液,并检查其pH和乙醇浓度。然后检测处理过的胆汁/乙醇溶液的光密度(O.D.)和传导率。O.D.水平或传导率水平超出可接受的说明书限定的范围时,需要对胆汁/乙醇溶液进行额外的处理,以除去胆汁色素,例如,再次用活性碳处理,以使读数在说明书限定的范围内。
在活性碳处理之后,将溶液通过具有2.5μm保留的滤器过滤,加热到低于85℃蒸发掉乙醇,并将溶液浓缩到大约原来胆汁/乙醇溶液体积的1/8。浓缩的溶液冷却到20-25℃之间。然后将溶液和乙醚混合,并弃掉醚相。优选的是使用相对小体积的醚和强烈的搅动,如0.1到1倍体积,优选的是0.2到0.5倍体积。此步骤可以再重复一次。通过将水相加热到55℃大约10小时,以除去残留的醚,并通过加热到80-85℃,进一步减少水相的体积至原来胆汁/乙醇体积的1/10。然后检测溶液的外观、生物学活性、乙醇和醚的浓度。
可以利用盐酸(1%)溶液和氢氧化钠(1%溶液)将组合物的浓度调到生理pH,即7.4-7.5,并且可以利用磷酸氢二钠和磷酸二氢钠作为缓冲物通过常规的方法制备缓冲液。
可以将组合物简单地装入小瓶中并灭菌来利用组合物而不需要进一步的修饰。优选的灭菌方法是将组合物经高压灭菌,接着温育,进行三次灭菌循环。
可以以浓缩的形式利用组合物。浓缩形式的制备方法如上所述。组合物也可以是冷冻干燥的。
组合物和浓缩组合物是澄清的淡黄色溶液,实质上不含有外来物质,包含不到10ppm的乙醇和不到5ppm的乙醚。所说的组合物激活PBMNs以使之在体外释放TNF,这一点是通过实施例2所描述的单核细胞/巨噬细胞激活分析方法(TNF-释放)测量的。并且,组合物激活,例如癌症患者的PBMNs形式,然后这种PBMNs形式介导针对来源于同一患者的癌细胞的杀细胞的活性。确实,有关动物和人的临床研究已表明本发明的组合物在抗肿瘤治疗方法的效用。同样,已表明所说的组合物激活的PBMN s作用于子宫内膜细胞,这样本发明提供了所说的组合物用于治疗子宫内膜异位和其它炎性疾病的用途。
可以利用上文通常描述的方法以一致的可再生形式产生本发明的组合物,已证明各批组合物都具有一致性、有效性和纯净性。利用反相高压液相色谱确定一致性和纯净性。(参见实施例1)。本发明的组合物在反相HPLC上具有一致的可再生模式。三份本发明浓缩的组合物的HPLC读数如图1-3所示。这种组合物也具有下文提到的特性,例如,体内和体外刺激单核细胞和巨噬细胞的能力,等等。
其中R是氨基酸残基,例如,如甘氨酰基、谷氨酰基(Glutamyl)或牛磺酰基,因此形成了甘氨酸、谷氨酰基或牛磺酸缀合物。
具体地说,已经分析了本发明组合物的组成化合物,包括有机和无机的组分。利用分析化学标准的方法(包括质谱法(MS))获得这些信息。这些研究的结果包括,例如,鉴定认为存在特定的胆汁酸,包括胆酸、甘氨胆酸、去氧甘氨胆酸、熊去氧胆酸、硫酸胆甾醇、去氧胆酸、鹅去氧胆酸和牛磺胆酸。
由MS无法辨别是否一些化合物的OH和H2的失去发生在MS上或是否这些化合物的脱氧、双脱氧或不饱和的类似物也与之同时存在。这些化合物都可以以铵盐、烷基铵和无机阳离子的形式存在。
MS分析也支持有关存在磷脂、鞘脂类和能形成混杂(miscell)的相关试剂的组合物的鉴定结果。被认为存在的特定化合物包括:
硬脂酸CH3(CH2)16COOH
棕榈酸CH3(CH2)14COOH
油酸Z-9硬脂酸CH3(CH2)2CH2CH=CHCH2(CH2)6COOH
氧化的或氢氧化的/不饱和的短链脂肪酸:
C6H8O3(如CH3CH=CHCOCH2COOH或带有2个双键的C6酸和氢氧化物)
乙酸
硬脂酸甘油二酸酯
棕榈酸甘油二酸酯
硬脂酸,棕榈酸甘油二酸酯
硬脂酸-单酸甘油酯-磷酸胆硷
(溶血卵磷脂)
硬脂酸单酸甘油酯
硬脂酸甘油三酸酯
棕榈酸单酸甘油酯
磷酸胆硷
磷酸丝氨酸
磷酸鞘氨醇
鞘髓磷脂
磷酸甘油
甘油
硬脂酸-鞘氨醇
鞘氨醇
硬脂酸酰胺
硬脂酸甲酰胺
胆碱
甘油磷酸胆硷
硬脂酸,油酸甘油二酸酯
棕榈酸酰胺
卵磷脂
唾液酸-甘油二聚物
此外,已获得的初步HPLC和滴定结果表明也存在较短的脂肪酸,如具有1至大约10个碳原子的那些脂肪酸。
其中,R1,R2,R3可以不同或相同,为H、COR4、CH=CH-R5、X、-P(O)(OH)O-、或-S(O)2O-;X选自由胆碱、乙醇胺、N-烷基化的乙醇胺、丝氨酸、肌醇、带有游离羟基的糖、氨基-糖、磺化的糖、和唾液酸组成的组;R4是饱和或不饱和的,氧化的或羟基化的C1-C30的烷基;R5是烷基基团或氧化的和/或其羟基化的类似物。
脂肪酸和它们的缀合物可以以盐的形式存在于前述的水抽提物中。混合物中的其它化合物也提高了这些化合物的溶解性。认为也存在包含在羧酸中的酰胺,RCONR1R2(其中的R1和R2相司或不同,为H或烷基)。考虑到所说的化合物的来源和其前述的MS分析,也可能存在第三种化合物,即粘蛋白和蛋白聚糖水解产物。这些化合物包括胆汁和胆囊壁的粘蛋白的水解产物,如软骨素4-和6-硫酸酯、硫酸软骨素B、肝素、硫酸肝素、透明质酸和这些粘蛋白的水解产物(如单体、双体、寡聚体、多聚体)。壳多糖和其它粘蛋白可以被相似地水解,其水解产物包括:N-乙酰-D-氨基葡萄糖、N-乙酰-D-半乳糖胺-4-硫酸酯、半乳糖-6-硫酸酯、N-乙酰-D-氨基葡萄糖-6-硫酸酯、氨基葡萄糖-6-硫酸酯、D-氨基葡萄糖-2-硫酸酯、D-氨基葡萄糖-2,3-二硫酸酯、D-半乳糖-6-硫酸酯、葡萄糖醛酸2-硫酸酯、N-乙酰神经氨酸、唾液酸、N-乙酰软骨胶素、软骨素4-硫酸酯、软骨素6-硫酸酯、D-氨基葡萄糖、D-半乳糖胺、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、岩藻糖、艾杜糖醛酸、己糖、己糖胺、硫酸酯、葡萄糖醛酸、软骨糖胺、 2-氨基-2-脱氧D-半乳糖、丝氨酸、脯氨酸、苏氨酸、丙氨酸甘氨酸牛磺酸、谷氨酸、天门冬氨酸、组氨酸和小肽。
可以通过粘蛋白的水解获得相似的产物,如角蛋白硫酸酯、硫酸软骨素B,二聚体、寡聚体和多聚体形式的天然糖-糖连接键可以由糖单体或邻近的糖链间的-O-Si(OH)2-O-桥代替。
特别是,被认为存在的特定粘蛋白和蛋白聚糖的水解产物包括:唾液酸和它们的单和二乙酰化的和乙内酰化的(glycolylated)单体;N-乙酰神经氨酸;己糖胺,如氨基葡萄糖;L-岩藻糖;己糖胺-己糖醛酸(双体)重硫酸盐,单乙酰化的;葡萄糖醛酸;葡萄糖醛酸或艾杜糖醛酸的重硫酸盐,单乙酰化的;唾液酸-甘油(双体);和上述乙酰化和硫酸酯形式的单体的双体、三体、寡聚体和多聚体
考虑到来源和前述的MS分析,可能存在的第四类化合物,即脂溶性维生素,包括:维生素A、D和K(例如,A2、D1、D3、D4、K1、K2、K5、K6、K7、K-S(II)和乙酸维生素E)。
具体地说,认为存在的特定脂溶性维生素化合物包括由维生素A2、维生素D1、发甾醇(存在于其维生素D1复合物中)、维生素E、氧化型维K1和维生素K5组成的组的至少一种。
考虑利来源和前述的MS分析,可能存在各种混杂的有机化合物,这些化合物包括:
尿素;
烷基胺,包括甲基胺,二甲胺,乙胺,甲乙胺,二乙胺,二丙胺,和/或丁乙胺;
氨基酸,包括牛磺酸,谷氨酸,甘氨酸,丙氨酸,N-亮氨酸,磷酸丝氨酸,磷酸乙醇胺,天冬氨酸,苏氨酸,丝氨酸,肌氨酸,α-氨基脂肪酸,瓜氨酸,缬氨酸,异亮氨酸,β-丙氨酸,γ-氨基丁酸,羟基赖氨酸,鸟氨酸,和赖氨酸;
胆红素和其gluconuride缀合物(conjugate);
胆绿素和其gluconuride缀合物;
2,6-二叔丁基对甲酚(BHT);
聚乙烯二醇;
混杂的食用脂类;和
谷胱甘肽和它的水解产物。
具体地说,认为存在于此组合物中的特定的混杂的有机组合物包含至少一种由尿素、甲基胺、二甲胺、乙胺、甲乙胺、二乙胺、二丙胺、丁乙胺、氨、胆碱、牛磺酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、p-ser、p-eu、p-ea、asp thr ser sar、a-aba、cit、val、ile、leu、B-ala、G-aba、OH-lys、orn、lys、2,6-二叔丁基对甲酚(BHT)和聚乙烯乙二醇组成的组中的成员。
存在于本发明组合物中的胺,特别是次生胺,可以包括空气中的氮氧化物,然后这些氮氧化物形成亚硝基化合物。组合物中也可以包含N-氧化物和N-碳化物。上面的这一系列胺应该扩展到包括所有的伯、仲、叔酰氨。
已经鉴定了某些无机元素,其定量结果(mg/l)如下:
钨 | 0.07 |
锌 | 0.666 |
磷 | 378 |
镉 | 0.01 |
钴 | 0.008 |
镍 | 0.022 |
钡 | 0.032 |
铁 | 0.022 |
锰 | 0.039 |
铬 | 0.060 |
镁 | 7.46 |
铝 | 0.136 |
钙 | 5.97 |
铜 | 0.087 |
钛 | 0.01 |
锶 | 0.060 |
钠 | 9600 |
钾 | 483 |
氯化物 | 15400 |
氨 | 218 |
钒 | 1ppm |
本发明的组合物具有有价值的药物特性。具体地说,本发明的化合物影响致瘤性生长、影响仲瘤坏死因子、激活巨噬细胞和单核细胞。已表明此化合物不会引起明显的毒性,只有短暂的不利的副作用(例如,轻度发烧、烦渴、注射位点的疼痛)。也发现组合物中不含有能检测到的高分子量物质组分(即大于5,000道尔顿),这种物质能引起不利的免疫反应。此组合物可以用作预防和治疗需要改善免疫反应的病症的试剂,具体地说是传染病(包括细菌、真菌、原生动物和其它机会感染)、炎症(包括子宫内膜异位和炎性肠疾病)、接种(包括作为HIV的佐剂;常规的儿童和成年人免疫法(如白喉、百日咳、破伤风、脊髓灰质炎、流行性腮腺炎、风疹、病毒性感冒和嗜血杆菌属)、旅行者疫苗(如伤寒、霍乱、鼠疫、细菌性脑膜炎和疟疾)、瘤形成和自身免疫疾病。这些疫病和不足的免疫系统反应有关,并且可能是不足的免疫系统反应的直接结果。如在上面的背景部分所示,可以包括激素和细胞的缺陷。考虑到所列举的组合物激活单核细胞和巨噬细胞的能力,本发明能提高免疫反应的这两个方面。此外,可以利用本发明的组合物改善或阻止和无论种内或种间的器官移植有关的排斥现象。也可以利用本发明的组合物治疗放射疾病。
因此,本发明的组合物的治疗各种形式的肿瘤(白血病、淋巴组织瘤、黑素瘤、腺瘤、肉瘤、癌)方面,特别有用。具体地说,本发明可用作治疗恶性黑素瘤、胰癌、子宫颈-子宫癌、肾癌、胃癌、肺癌、直肠癌、卵巢癌、乳房癌、肠癌、胃癌、肝癌、甲状腺癌、颈癌、子宫颈癌、唾液腺癌、腿癌、舌癌、唇癌、胆管癌、骨盆癌、纵隔癌、尿道癌、支气管原癌、膀胱食管癌、结肠癌和卡波济氏肉瘤(这种肉瘤是和HIV感染所获得性免疫缺损综合征(AIDS)有关的一种癌症)。此组合物也可用作治疗由缺陷的免疫反应引起或促进的其它症状,如关节硬化和机会或其它感染,特别是AIDS。此组合物也可以用于治疗自身免疫疾病,包括多种硬化、风湿关节炎、全身狼疮红斑、I型糖尿病、重症肌无力、阿狄森氏病、自免疫溶血性贫血、克罗恩氏病和其它炎性肠疾病、古德帕斯彻氏疾病、格雷夫斯氏病、桥本氏病、自发的血小板减少紫癜、恶性的贫血、链球菌引起的肾小球性肾炎、牛皮癣、硬皮马勃属、斯耶格伦氏综合征、自发的不育症、寻常天疱疮。此组合物还可以用于治疗症性病病,如子宫内膜异位和炎性肠疾病。
可以利用常规的方法将本发明的组合物转成药物组合物,所说的药物组合物含有本发明的组合物,其或者单独存在,或者和其它的活性物质共同存在。这种组合物可以经口、局部(topical)、直肠、非肠道、局部(local)、吸入、或大脑皮层内施用。因此,它们以固体或半固体的形成存在,如丸、片、乳油、明胶胶囊、胶囊、栓剂、软明胶胶囊、凝胶、薄膜和小管(tubelet)。对于非肠道和大脑皮层内使用,可以使用用于肌肉内或皮下给药的那些形式,或者使用用于浸渍或静脉内或大脑皮层内注射的那些形式,因此,可以将其制备成所说的组合物的溶液或活性组合物的粉沫,并将这些溶液或粉沫和一种或几种药学上可接受的,适合前述用途的赋形剂或稀释剂及与生理液相溶的渗透液混合。对于局部使用,可以考虑那些用于局部使用的以乳油或软膏形式存在的制剂或以喷雾形式存在的制剂;对于吸入使用,可以考虑以喷雾(例如鼻喷雾)形式存在的制剂。优选的是,此组合物通过肌肉内施用。
可以通过已知用于制备药学上可接受的组合物的方法本身制备药物组合物,可以将这种药学上可接受的组合物施用给患者,这样,在混合物中,有效量的活性物质和药学上可接受的载体组合在一起。例如在Remington的药物科学(Kack出版公司,Easton,Pa,美国1985)上描述了合适的载体。
在此基础上,所说的药物组合物包括(尽管不是唯一的)和一种或几种药学上可接受的载体或稀释剂组合的本发明的组合物,并且包含在具有合适的pH及与生理液体等渗的缓冲溶液中。
此组合物或单独作为治疗剂,或和其它治疗剂或是它治疗形式联合作用。例如,对于恶性肿瘤,这种治疗方法使以前不能施行外科治疗的肿瘤能适于外科切除。另外,这种治疗方法可以和化学疗法和/或放射疗法有价值地结合。本发明的组合物或试剂目的是施用给人类或动物。
通常,预期的此组合物用于人类的剂量范围为每日使用大约0.01至20mg/kg,优选的是0.1至10mg/kg,最优选的是0.1至1mg/kg体重的药物。在静脉内施用的时,剂量为每日大约0.1至5mg/kg体重;在经口施用的时,剂量为每日大约1至5mg/kg体重。如果使用浓缩的组合物,可以使用大约上述剂量的一半。例如,对肌肉给药,可以每日使用大约0.2至1.0mg/kg体重,优选的是每日使用0.215至0.75mg/kg体重。
医生会理解有必要不遵守上述的剂量标准,这是因为体重功能、接受治疗的动物的病症、治疗的特定疾病、给药路线和所需要的疗法的特性的不同。此外,动物的类型、其对药物或药物制剂特性的个体行为和给药的时间和间隔也可能要求使用不同于于前述的剂量。这样,在某些情况下,应该使用小于上述最小量的剂量;而在其它情况下,需要超过上述的最高限量。当大量给药时,将这些药分几次在一天中施用的方法是可取的。
这样,本发明包括制备免疫调节组合物的方法,这种方法包括(a)将动物的胆汁和水溶性溶剂混合,以产生胆汁/溶剂溶液;(b)分离水溶液,实质上是从胆汁/溶剂溶液中除去溶剂;和(c)从实质上不含溶剂的溶液中除去胆汁色素,获得澄清的淡黄色液体,优选的水溶性溶剂是醇,并且将动物的胆汁和等体积的醇混合。前述方法的理想方面也包括进一步浓缩澄清的淡黄色液体至原来胆汁/溶剂溶液体积的1/8或1/10。很明显,通过上述方法产生组合物构成了本发明的优选方面。
本发明也包括用作免疫调节剂的组合物,这种组合物包含至少一种分子量小于3000道尔顿的组分,其对人类外周血单核细胞无细胞毒性,并且具有下列特性:
(a)能体内或体外刺激单核细胞和巨噬细胞、以产生一种或几种细胞因子;或
(b)能刺激单核细胞或巨噬细胞,以使体内或体外产生细胞因子;或
(c)在恶性细胞系中,具有抗增值作用。
其中所说的组分不是内毒素、IL-1α、IL-1β、TNF、IL-4、IL-6、IL-8、GM-CSF或IFN-γ。可以从动物的胆汁(优选的是牛)或从上文提到的其它来源获得这些组合物。在所说的组合物的一个优选的实施方案中,这种组合物在没有外源1α、IL-1β、TNF、IL-4、IL-6、IL-8、GM-CSF和IFN-γ存在的情况下,体外或体内刺激肿瘤坏死因子的产生,优选的是人类的。
本发明的组合物也具有可由柱层析定性的组分,因此,将所说的组分干燥,以获得固体残渣,将2克这样的残渣溶解在20ml 10%浓缩的氢氧化铵的甲醇溶液中,除去不溶的物质之后,将其在甲醇柱上进行柱层析,这种柱的大小为5cm×12.5cm,并含102克的60A闪烁硅凝胶,在每平方英寸10镑的压力下和10%浓缩的氢氧化铵的甲醇溶液的流速为11毫升/分钟的情况下操作,当整个洗脱体积在大约180和大约220ml之间,在大约220ml和大约260ml之间,或在大约260ml和大约300ml之间收集到的组分中含有从柱中洗脱下来的所说的组分。
也可以通过离子交换层析进行组分特征的分析,这样在含有Bio-RadAG-1氢氧化物的树脂(其量足以结合存在于以上所说的10ml组分中实际所有的离子)利用重碳酸氢铵缓冲液阶梯梯度柱洗脱所说的组分,缓冲液的浓度从大约0.1M至大约1.5M,优选的缓冲液的浓度从大约0.2M至大约0.4M,最优选的缓冲液的浓度大约为0.2M。
也可以利用反相(C18)HPLC进行组分特征的分析。也可以使用其它合适的柱、洗脱液、梯度、流速、操作温度和检测系统。
也可以通过TLC来分析组合物的特性。这样所说的组合物在一种合适的溶解系统的硅胶平板上进行薄层色谱。例如,浓缩的10%氢氧化铵的甲醇溶液。用合适的喷雾观察,如茚三酮。利用茚三酮在大约0.80至0大约0.90Rf值发生阳性反应。
本发明也包括产生刺激人类肿瘤坏死因子的方法,其包括施用有效量的组合物,此组合物至少包括以下化合物中的一种:
其中的A-B、B-C、C-D之间的键可以是单键或双键,其中的X=H、OH或OSO3H;Y=其中的R是一种氨基酸残基。
X是胆碱、乙醇胺、N-烷基化乙醇胺、氨基乙醇、丝氨酸、肌醇、带有自由羟基的糖、氨基糖、磺酸糖、唾液酸;和
R4是一种具有从大约C1-C10碳链的饱和或不饱和烷基或者它的羟基化的类似物;和
R5是一种烷基或它的氧化或羟基化类似物。
(c)粘蛋白水解产物或蛋白多糖水解产物;或
(d)一种脂溶性维生素
优选地,本发明方法的组合物至少包括一种从由以下物质组成的组中选择出来的化合物,这些物质是牛磺胆酸和它的芳香硫酸盐衍生物、羟基乙酸和它的芳香硫酸衍生物、鞘氨醇、二酰甘油、卵磷脂、磷酸胆碱、磷酸甘油、磷酸甘油胆碱、磷酸胆碱氯化物、少于10个糖单元的低聚糖(其中的低聚糖包含唾液酸)、岩藻糖、氨基己糖、硫酸氨基己糖、维生素A、视黄醇酸的衍生物、视黄醇衍生物、牛磺酸、谷氨酸和它的轭合物。另外,所述组合物至少包括一种从由以下物质组成的组中选择出来的化合物,这些物质是氨、烷基伯胺、烷基仲胺、烷基叔胺、羧基、R6CO2H(其中的R6是饱和或不饱和的C1-C30烷基和它的氧化的或羟基化的衍生物)。更优选地,这样一种组合物至少包括一种由以下物质组成的组的化合物,这些物质是:磷酸胆碱、磷酸甘油胆碱、3-硫酸葡糖胺、磷酸胆碱氯化物。更优选地,所述组合物至少包括以下化合物中的一种:磷酸胆碱、磷酸甘油胆碱、3-硫酸葡糖胺。
本发明的方法也包括通过施用一种组合物刺激TNF的产生,此组合物至少包括一种由以下物质组成的组的化合物中选出的化合物,这些物质是:牛磺胆酸和它的芳香硫酸盐衍生物、羟基乙酸和它的芳香硫酸衍生物、鞘氨醇、二酰甘油、卵磷脂、少于10个糖单元的低聚糖(其中的低聚糖包含唾液酸)、岩藻糖、氨基己糖、硫酸氨基己糖、维生素A、视黄醇酸的衍生物、视黄醇衍生物、牛磺酸、谷氨酸和它的轭合物。
本发明也提供了治疗以下癌症的方法,这些癌症包括:胰腺癌、耳/鼻/喉癌、卵巢癌、肺癌、子宫内膜癌、慢性骨髓性白血病和卡波西肉瘤。其中所说的方法包括给癌症患者施用治疗有效量的本发明的组合物。本发明也提供了治疗紊乱的方法,这些紊乱是损害免疫应答反应的疾病,包括炎症性疾病、子宫内膜异位、炎症性肠疾病;自身免疫性疾病(包括风湿性关节炎、狼疮、多发性硬化和ALS);感染性疾病(包括细菌、真菌、支原体、原虫和其它机会感染),其中所说的方法包括为患有以上所提及的疾病的患者施用有效量的本发明组合物。此外,本发明也提供了预防HIV、多种儿童性疾病和其它疾病的疫苗,并把本发明所说的组合物加入到这种疫苗中作为佐剂。
包含下列成分的组合物也是本发明的组成部分:(1)鞘氨醇的分子团或与盐结合的鞘氨醇或(2)视黄酸或其衍生物的分子团,这些组合物至少具有以下性质之一:
(a)能够刺激单核细胞和巨噬细胞体外产生一种或多种细胞因子。
(b)能够刺激单核细胞和巨噬细胞体外或体内产生肿瘤坏死因子。
(c)在恶性细胞系中具有抗增殖效果。
分子团可以包含二酰基甘油酯或卵磷脂,也还可以包含胆汁酸盐、氨或烷基铵离子。
最后,本发明也涉及包含(1)鞘氨醇、胆汁酸盐、氨或烷基铵离子;(2)鞘氨醇、胆汁酸盐、二酰基甘油、氨或烷基铵离子、视黄醇衍生物;(3)二酰基甘油酯、卵磷脂、胆汁酸盐;或(4)(a)二酰基甘油酯和(b)卵磷脂和(c)粘蛋白水解产物或蛋白聚糖水解产物的组合物。这些组合物至少具有以下性质之一:
(a)能够刺激单核细胞和巨噬细胞体外产生一种或多种细胞因子。
(b)能够刺激单核细胞和巨噬细胞体外或体内产生肿瘤坏死因子。
(c)在恶性细胞系中具有抗增殖效果。
下面以非限制性的实施例说明本发明。
实施例1
此实施例描述和说明了本发明组合物的制备方法。
从至少1至1年半健康牛(雄性和雌性)的胆囊中收集得到胆汁。这些牛在许可和检查过的屠宰场屠宰以作为食物。这些屠宰的动物在屠宰之前已经检查并评价其是否健康,把胆囊和肝脏分离并且由兽医检查确认胆囊没有寄生物和受到感染。因此适合作为本发明的胆汁源。
将通过检查的胆囊经历下面的过程:
用70%的乙醇溶液清洗胆囊,以给胆囊的外部消毒,并用注射器从胆囊中除去胆汁。由兽医肉眼检查注射器中移出的胆汁,以确保其不含血或脓,另外也是满意的。健康牛虫获得的胆汁是淡绿色的液体,实质上不含有血和脓,令人满意。从收集了胆汁的动物中也收集肝脏、脾和淋巴结的组分,并检验所说的组分中是否存在寄生虫和其它疫病指征。
对于没有特定胆囊的物种(如鲨鱼),直接从肝器官中获得胆汁。
将发现令人满意的胆汁转移到含有乙醇的刻度琥珀瓶中,得到50%胆汁/50%乙醇溶液(用体积汁量)。这种胆汁/乙醇溶液是淡绿色的液体,实质上不含外源物质,按照美国药典XXII,B部分(1994)应用的方法检测乙醇的阳性。这些瓶用标签号标记。将最少从50只动物中收集到的胆汁收集在每一个标记的瓶中。
然后将胆汁/乙醇溶液在202℃下,以4200rpm离心至少2-1/2小时。倾析上清液,经具有,例如2.5μm保留的滤器过滤,并检测pH和乙醇浓度。然后对倾析液进行活性碳处理。然后在280nm下检测处理过的溶液的光密度(OD)和传导率。超出特定范围的OD水平和/或传导率,有必要对液体进行另外的活性碳处理,以获得特定范围内的OD和传导率。
在活性碳处理及处理过的液体经具有,例如2.5nm保留的滤器过滤后,将乙醇蒸发掉(例如,通过加热到大约85℃),并将处理过的液体浓缩到胆汁/乙醇液原来体积的大约1/8。然后将浓缩的液体冷却到20-25℃,经具有,例如2.5μm保留的滤器过滤,并和乙醚混合,并去醚相。此步骤可以再重复一次。加热水相以除去残留的醚(例如,加热到大约55℃10小时),并通过加热到大约80-85℃进一步减少体积,以达到胆汁/乙醇原来体积的1/10。然后检验得到的组合物的外观、生物学活性、乙醇及乙醚浓度。所说的组合物是澄清的淡黄色溶液,实质上不含外源物质,含有不到10ppm的乙醇和不到5ppm的乙醚。
利用反相高压液相色谱(反相HPLC)确定组合物的一致性和纯净性。利用这里称为外周血单核细胞肿瘤坏死因子测定(PBMN-TNF测定或,只是TNF测定,如实施例2的描述)的单核细胞巨噬细胞激活实验分析效价。
将最初一批的本发明组合物制成非缓冲的液体,接下来的一批制成缓冲液。利用盐酸(1%)溶液和氢氧化钠(1%溶液),也可利用磷酸氢二钠和磷酸二钠作为缓冲液,通过将组合物的pH调至大约7.4±0.2来制备。在蒸气高压灭菌器(温度为1042℃,60分钟)中完成生物负载(bioburden)的降低。将大量溶液将入5ml或10ml灭菌瓶中并封好。将装好并封好的小瓶经104±2℃高压灭菌60分钟,进行三次3次循环,之后在35℃下培养23±1小时。在每次灭菌循环之间,取出样品并检验其生物负载。在最后一次灭菌循环之后,在黑色白色背景下肉眼检查小瓶,以发现颗粒的存在。
检查完之后,对每个标记的瓶取样并检验其是否符合说明书的要求。检验包括一致性、无菌情况、致热性、内毒素、生物测定、HPLC和通常的安全性。表I概括了对本发明的担汁抽提物进行的各种实验得到的数据,在合适的地方,包括数据的正常范围。表I
按照实施例1的方法获得的各批组合物的特性
最终产物实验 | 批BC0248 | 批BC0249 | 批BC0250 |
效价(pg/ml)* | 210 | 183 | 304 |
符合参考文献的一致性/纯净性 | 合格 | 合格 | 合格 |
安全性(按照81 CFR 610.11通过实验) | 合格 | 合格 | 合格 |
致热性(温度的增加不超过0.4℃) | 合格 | 合格 | 合格 |
内毒素≤0.4EU/ml | ≤0.25 | ≤0.25 | ≤0.25 |
无菌性(没有生长) | 合格 | 合格 | 合格 |
pH(7.40±0.2) | 7.20 | 7.27 | 7.22 |
表观-观察(澄清的,淡黄色液体很少或无沉淀) | 合格 | 合格 | 合格 |
表观-OD(通过实验) | 1.34 | 1.38 | 1.85 |
渗透性(<1000) | 877 | 854 | 832 |
固体(23+/-7mg/ml) | 18 | 15 | 20 |
乙醇(不超过10ppm) | 合格 | 合格 | 合格 |
传导性(35+/-5mMho) | 33 | 35 | 38 |
*如实施例2的描述测量了有关单核/巨噬细胞激活的效价;正常的TNF-α的释放至少为100pg/ml。
因此,利用标准的实验室方法可以由容易得到的胆汁源制备本发明的组合物,结果产生出符合标准的最终产物。
实施例2
此实施例描述了实施例1的组合物的生物学活性。
进行此研究是为了评价实施例1的组合物对外周血单核细胞(PBMN)和/或前单核细胞的稳定系的U937细胞(美国典型培养物保藏中心(ATCC),Rockville,马里兰)的细胞因子释放的影响。进行了TNF-α、IL-1α、IL-2、IL-4、ZL-6、IL-8、GM-CSF和IFN的ELISA分析。这些研究提供了定量评价按照实施例1制备的一批给定的胆汁抽提物的效价的标准化的实验的基础,此实验评价所说的胆汁抽提物或其一种或几种组分在PBMN或U937细胞中刺激TNF-α产生的能力。
从5个健康的接受检验的人中抽提全血,注入到肝素化的真空管中(Beckton Dickson,加拿大)。在Ficoll-Hypaque(Pharmacia)上经梯度离心分离PBMNs。用磷酸缓冲盐水(PBS)洗涤PBMNs两次,计数并以106个细胞/0.5ml的浓度悬浮在RPMI 1640培养基中(Gibco实验室)。将这些细胞培养在24孔,平底的组织培养平板上(Falcon,Becton,Dickinson)。将0.5ml PBMN的等份悬浮液加入到每个孔中,每份悬浮液中含有50ng脂多糖(LPS)(来源于大肠肝菌)10μl胎牛血清和10-300μl的实施例1的组合物(如下表所示)。通过向培养孔中加入体积为所用的。组合物体积的10%的蒸馏水,而中和了此组合物的高渗透作用。然后用RPMI将总体积补充到1毫升/孔。以PBS作为对照。将所说的细胞在潮湿的5%CO2保温箱中37℃下培养2,6,24,48和72小时。在每一个周期末,收获细胞,并通过在9000rpm下离心10分钟获得无细胞的培养液。然后将样品在-70℃下贮存2周,而进行免疫测定(如ELISA),以定量存在的细胞因子。
在用每孔100和200μl体积的实施例1的组合物刺激人类PBMN后,测量上清液中的细胞因子的合成。此组合物的最初制剂显示对细胞因子的产生无直接(即LPS)刺激作用(参见表II)。如果有任何作用,当PBMN在培养基中单独培养时,细胞因子的产生量低于基本水平。
表II
24小时后实施例1的组合物对细胞因子产生的直接作用释放的细胞因子量(pg/ml)1 | ||||
测定的细胞因子 培养基 | 组合物 LPS | |||
100μl 200μl 1μg | ||||
IL-1αIL-1βTNF2IL-6IL-8GM-CSFIFN-rIL-4 | 61.6±12199±184203±149928±776126±70313±411±18<3.0 | 59.6±7.8218±165151±117853±67394±5039±14<3.0 | 54.3±6.0188±174107±120829±54377±41315±115±6<3.0 | 315±117965±991501±2842016±41361±165354±2054±94<3.0 |
18个受检验者双份样品的平均值
27个受检验者双份样品的平均值
3ng/ml
在用实施例1的组合物和LPS(或者LPS单独使用作为阳性对照,所使用的实施例1组合物的体积为每孔100μl)刺激PBMNs后24小时,在37℃下检测上清液中细胞因子的合成。由TNF-αELISA试剂盒(Endogeo,公司)检测TNF,这种试剂盒能栓测到的最低水平是5pg/ml的细胞因子。所用的其它ELISA免疫测定试剂盒包括:IL-1α(Endogen公司);GM-CSF(Endogen公司);RFN-α(Endogen公司);IL-2(Advanced Magenetics,公司);IL-6(Advanced Magenetics,公司);IL-1(Advanced Magenetics,公司);IL-4(R&D系统);和IL-8(R&D系统)。结果表明TNF是上清液中存在的主要细胞因子,同时还有较少量的IL-1β和GM-CSF。例如,40μl剂量的实施例1的组合物(B0222批)刺激产生并释放178pg/ml的TNF-α,136pg/ml的GM-CSF和142pg/ml的IL-1β。
检验了不同批的实施例1的组合物对LPS诱导的TNF释放的影响。总之,以相同的方式与从同一动物中产生的各批组合物诱导相同的作用。然而,由不同动物物种制备的组合物的制备方法和用途的改变则具有不同的作用。例如,B29/3006,B0213,BC0241,BC0241-01,BC0242(B=牛)和C0203(山羊)各批诱导强烈的,高于由LPS单独诱导的TNF释放(如表III所示),而013/2109(绵羊)批则在所有试验的剂量都最小限度地刺激TNF释放。相反,R0201(鲨鱼)批在大多数试验剂量都抑制工作的释放。表III中所示的TNF值计算成为TNF-α释放的差值,即由LPS和实施例1的组合物组合在一起产生的刺激减去由LPS单独产生的刺激。
表III实施例1的组合物对LPS诱导的PBMNs的TNF释放的影响
批号 组合物体积(μl) TNF(pg/ml) | ||
B0213 | 10100200 | 193±161858±8192131±1742 |
B29/3006 | 1050100200 | 121±102422±78834±8112252±676 |
C0203 | 1050100200 | 101±47643±2312650±13721851±980 |
BC0241 | 102550100200 | 199201162339552 |
BC0241-01 | 102550100200 | 170180219223589 |
BC0242 | 102550100200 | 294401409603574 |
013/2109 | 50200300 | -9±73179±162178±373 |
R0201 | 50200300 | 145±256-370±385-400±185 |
已知实施例1的组合物影响LPS诱导的人类PBMNs的TNF释放,因此进行一系列的实验以检验此组合物在随时间对LPS诱导的PBMNs的TNF释放的影响。
表IV
实施例1的组合物(B0213批)随时间对LPS诱导的
PBMNs的TNF释放(pg/ml)的影响
时间(小时) | 只有LPS(50ng/ml) | LPS+组合物(100μl) |
26244872 | 697±942006±736800±222170±149132±147 | 693±3391949±4422301±6581419±447945±367 |
表IV显示到2小时时,LPS诱导的PBMNs的TNF释放水平已升为697pg/ml;到6小时,达到最高峰,约为2006pg/ml。在24、48和72小时时,TNF的释放渐次降低。事实上,到48和72小时时,LPS诱导的PBMNs的TNF释放刚刚高于其基本产生水平。相反,LPS和B0213批的组合物(其是TNF释放的强烈的刺激物)组合在一起使用,在24小时时诱导出TNF释放的峰值,此时LPS的刺激作用已开始下降。和LPS单独使用不同,LPS和B0213批的组合物组合在一起使用,在48小和72小时时能继续刺激TNF的释放,其水平恰好高于基本产生水平。这些数据表明实施例1的B0213批组合物在全部时间内对刺激TNF的产生都是有效的。
来源于鲨鱼的且为TNF释放的抑制物的R0201批组合物在2、6和24小时时,显著地抑TNF制释放。在48和72小时时,R0201批组合物具有最小限度的正或负作用。
简言之,上述结果表明一些批的组合物(如来源于鲨鱼的)抑制LPS诱导的PBMNs的TNF释放,而另外一些批的组合物(如来源于牛、山羊、锦羊)则刺激LPS诱导的TNF释放。总之,本发明的组合物能以正和负两种方式调节TNF的产生。图5和表V显示了这些数据的总结结果。
表V实施例1的组合物的刺激和抑制作用的总结
批号 | 来源 | 正常或浓缩的 | 缓冲液 | TNF释放 |
B0213 | 牛 | 正常 | 是 | 刺激 |
C0203 | 羊 | 正常 | 是 | 刺激 |
013/2109 | 羊 | 浓缩的 | 是 | 刺激 |
R0201 | 鲨鱼 | 正常 | 是 | 抑制 |
B29/3006 | 牛 | 正常 | 是 | 刺激 |
B27/2806 | 牛 | 正常 | 是 | 刺激 |
B15/1606 | 牛 | 浓缩的 | 是 | 刺激 |
利用100μl实施例1的组合物和50ng的LPS使上文描述的PBMN-TNF测定标准化。如以上所述从3个不同的受检验的人中获得PBMNs并在当天使用。将各个3次测定(利用个体接受检验的细胞)的结果平均,以补偿不同受检验人之间产生的变异。此分析涉及确定在只有RPMI培养器和在50ngLPS存在的情况下释放的TNF-α量。也确定了在100μl实施例1的组合物连同50mg LPS在的情况下释放的TNF-α。从LPS值中减去培养基中释放的TNF-α,以得到在LPS单独存在时释放的TNF-α。从组合的组合物和LPS值中减去培养基和LPS的值,以得到在所说的组合物单独存在的情况下释放的TNF-α(以pg/ml报道)。因此,TNF释放测定有助于定量胆汁抽提物的效价。
也发现这种组合物刺激U937细胞的TNF-α释放,这种细胞本来来源于一个具有组织细胞淋巴组织瘤的患者,并表现出许多单核细胞的特性。U937细胞可以从ATCC获得。通常,在37℃,5%CO2中,将它们保存在添加了10%热天活的胎牛血清(FCS、GIBCO),2mM L-谷酰胺(ICN生物医学公司,Costa Mesa,CA)和10μg/ml庆大霉素硫酸酯(SIGMA,Mississauga,Ontario,加拿大)的RPMI-1640培养基(GIBCO,GrandIsland,NY)中。每3-4天进行U937细胞的传代,以最初5×105个细胞/毫升的浓度接种。通过将U937细胞暴露在佛波醇12-肉豆蔻酸盐13-乙酸盐(PMA;Sigma Chemical公司,St.Louis,MO)中,可以刺激其分化成单核细胞。得到的单核细胞在刺激物(如实施例1的组合物单独使用或和LPS组合在一起使用)的作用下,具有释放TNF的能力。
首先将PMA以10mM的浓度溶解在二甲基亚砜(DMSO,SIGMA)中,然后用PBS稀释1000倍,到10uM的贮存物溶液浓度,并在-20℃下保存。将U937细胞悬浮液在室温下以350×g离心10分钟,并在新鲜的完全RPMI-1640培养基中以2×106个细胞/毫升的浓度重新组成U937细胞。经台盼蓝排斥法确定细胞的生存能力,通常高于95%。再用完全培养基将PMA释释500倍,以获得20nM浓度。
在0.5ml PMA(20nM)存在或不存在下,在24孔,平底组织培养平板(Becton DickinSon,Lincoln Park,NJ)上培养0.5ml,U937细胞(106个细胞/毫升)的等量样品,在37℃下,5%CO2中培养72小时。每孔的最终浓度是5×105个细胞和10nM PMA。
在培养72小时后,除去120μl的培养基,代替以100μl的实施例1的组合物和10μl的无菌的去离子蒸馏水,其中含有或不含有10μl的LPS(5ng/μl)。培养24小时后,通过以350×g离心10分钟沉淀所有的细胞和颗粒,将得到的上清液在分析TNF-α之前贮存在-20℃下。所有这些Virulizin样品均在两个分开的地点实验。
利用从Endogen公司买到的TNF-α ELISA试验盒(Cedarlane实验室,Hornby,Ontario)进行两个位点的夹层ELISAs,以定量U937细胞培养物的上清液中TNF-α。利用生产者推荐的主案。简言之,将100μl的TNF-α标准物和试验样品加入到抗人TNF-α预包被的96孔平板上,并在37℃下,5%CO2培养3小时。在用洗涤缓冲液广泛洗涤后,将和碱性磷酸酶缀合的100μl抗人TNF-α加入到平板中,并在37℃下,5%CO2中培养2小时。培养后,按如上所述洗涤平板,并将100μl预混合的TMB底物加入到每个孔中,使酶的颜色反应在室温下黑暗中进行30分钟。然后将100μl终止溶液加入到每一个孔中以终止反应,利用SLT实验仪器ELISA读出器在450nm下测定平板。此测定的检测限是5pg/ml。
按照描述的用于PBMN细胞的方法确定U937细胞的TNF值。和50ngLPS一起试验的组合物的结果列于表III。
表VI
组合物对U937细胞TNF释放的影响 | |
组合物批号 TNF(pg/ml)(100μl) | |
BC0241BC0241-01BC0242BC0247BC0248BC0249BC0250 | 4900402867465534605355405794 |
实施例3
此实施例描述了实施例1组合物的物理、化学和生物化学特性。
确定了按照实施例1制备的三批人工组合物的物理化学特性,如传导率、渗透性和全固体。列于表I中的结果表明此制造的产物的无菌性、效价和再观性,进而提供了产品说明。乙醇和乙醚实验只是正在进行的实验。如实施例2所述确定效价(即TNF释放)。用于确定这些特性的方法列于下表。
表VII
作为人工产品的实施例1的组合物的特性
实验 | 说明 | 方法 |
效价 | >100pg/mlTNF-α | 单核细胞/巨噬细胞激活:TNF-α释放 |
一致性/纯净性 | 和参考文献一致 | HPLC |
安全性 | 通过实验 | 一般的安全性实验(小鼠和天竺鼠)(21C.F.R.S610.11) |
致热性 | 温度增加不超过0.4℃ | 热原实验(兔)USP |
内毒素 | <2EU/ml | 鲎属变形细胞溶解产物实验USP |
无菌性 | 没有生长 | 无菌性实验UPS |
pH | 7.40±0.2 | pH实验UPS |
外观 | 澄清的淡黄色液体,很少或者没有沉淀 | 肉眼检查 |
固体 | 23±7mg/ml | 低压冻干法 |
渗透性 | <1000mOsm | 凝固点降低法USP |
乙基醇 | 不超过10ppm | 直接注射气相色谱法 |
乙基醚 | 不超过5ppm | 直接注射气相色谱法 |
传导率 | 35±5mMHO | 哥本哈根辐射计模型 |
上文描述的物理和化学特性(如传导率、渗透性和全固体)和一种多于99%盐的组合物一致。组合物中不到1%的固体是有机物质,大约一半的固体是碳水化合物,剩余部分是氨基酸、脂类脂类和磷脂。也存在蛋白质和肽。SDS凝胶电泳确认存在多于组合物中蛋白质的肽。没有发现高分子量的分子。
在本发明的组合物中使用了HPLC和生物测定实验方法,以描述作为缓冲液体和浓缩形式的产物的性质。下文描述的HPLC结果表明在其所有的描述中所说的产物都是相同的。
利用串联柱反相HPLC方法描述实施例1的组合物的性质。为了使用这种方法,将样品冻干,然后在缓冲液A(0.1%三氟乙酸(TFA))中重新组成,并通过和Prime-Sphere HC-C18柱(250×4.6mm;Phenomenex)串联的WP60009-C18柱(W-Pore C18,250×4.6mm;加利福尼亚的phnomenex)。利用缓冲液A和缓冲液B(0.1%TFA的10%乙晴溶液),以0.9毫升/分钟的流速过柱。在第一个柱中加入150μl样品,并使缓冲液A通过此系统20分钟。接下来,使第一个线性梯度,0-80%缓冲液B通过30分钟,随后,第二个系统梯度,80-0%缓冲液B通过5分钟。通过190至284nm的光吸吸收检测洗脱下来的化合物,大部分洗脱物在210和235处检测。
实施例1的组合物在能见到峰的反相HPLC中具有一贯可再现的模式。三份本发明组合物的反相HPLC读数如图1-3所示。
在以生理方式操作的LKB451Alphaplus氨基酸分析仪上分析实施例1制备的并标记为A-F的六批胆汁抽提物的氨基酸分布图,同时用水合茚三酮进行后柱栓测。以纳摩尔/100μl表示的结果列于表VIII中。
表VIII
实施例1组合物的氨基酸和尿素分布图
氨基酸和尿素 A B C D E F | ||||||
P-SerTauUreaAspThrSerGluGlyAlaValIleLeuB-AlaOrn | 0.3423.43823.3180.6060.6491.1042.1125.4652.6340.942------0.387--- | 0.4298.32535.2241.0600.4830.8338.2571.58674.4490.645------0.503--- | 0.4732.515146.8061.163---0.4528.0296.3413.5720.550---0.1860.450--- | 3.23911.297608.984---0.3450.82113.33312.6256.0931.311---1.0791.0600.102 | 1.45423.00598.48912.646---36.16938.84232.66215.5213.0897.3001.4610.412 | 1.04847.019115.261.548---43.63282.41823.2024.362---1.1972.6400.336 |
也评定了样品A-F中是否存在牛DNA。利用由牛基因组DNA中产生的32P标记的牛DNA探针检测样品。此测定包括所说的样品,掺加示踪剂(峰形)的样品、阴性和阳性对照及标准物。按照GLP规则进行了此研究。此测定检测到了3.9pg的参照标准DNA。计算每一个样品,都含有不到4pg/ml的DNA。
也检验了样品A-F中是否存在各种电解质。Toronto大学临床生物化学系的生物技术服务中心提供了此分析。以毫摩尔/升表示的结果列于表IX中。
表IX
实施例1组合物中电解质的含量
电解质 A B C D E F | ||||||
NAKCaMgClPO4SO4 | 550.90.060.25500.062.17 | 680.90.100.15590.031.89 | 1272.50.0060.091180.052.05 | 35910.20.20.353860.271.15 | 2503.60.130.142070.187.13 | 3094.20.270.172630.2411.36 |
将样品A-F在标准条件下经感应偶联质谱(inductively coupled massspectrometry)(ICP-MS)进行半定量多元素分析。表X描述了以每百万个单位中的含量(ppm)表示的结果。
表X
实施例1组合物的元素分析
注:术语“<det”意思是低于检出水平
A B C D E F | ||||||
钪钛钒铬铁锰镍钴铜锌镓硒砷锶铷钌钯镉银碲锑钡铯 | 0.6200.2100.0300.0300.3000.020<det<det0.70015.6000.0081.0200.0300.0100.090<det0.002<det<det0.003<det0.0170.001 | 0.8200.3100.0400.0400.3800.020<det<det0.94018.3000.0081.5900.0700.0100.1100.001<det<det<det0.0030.0020.0190.002 | 1.0300.2600.0800 0600.5100.0300.0300 0010.8408.8000.0042.0600.1000.0200.190<det0.003<det0.0020.0500.0030.0350.004 | 1.0300.7200.1800.0804.3100.5300.2500.0131.5200.8300.0037.7100.2000 0600.3200.0010.0050.0020.0020.0900.0020.0400.008 | 2.0200.9200.1400.1700.6900.0500.1300.0032.14029.8000.0133.8100.2500.0400.410<det0.0030.0050.0010.0800.0070.0570.005 | 1.9001.1800.1600.1900.7600.0600.1600.0052.47032.9000.0157.8600.3500.0500.4900.0010.0030.003<det0.0700.0060.0800.006 |
在样品A-F中也进行了阴离子和阳离子分析。为了进行此项分析,按照“水和废水检测的APHA方法”第16版,1985或“环境样品分析方法的MOE手册,1983”推荐的方法制备所说的样品。用于阴离子/阳离子分析的测试设备有:(1)用于金属测定的,Jarrell灰61EICAP释放,Perkin Elmer3030 Zeeman石墨炉,和Perkin Elmer 2380冷蒸汽AA;(2)用于阴离子测定的,Dionex 2000i离子色谱;和用于常规测量的,Skslsr SA5区段流分析仪。以mg/l表示的结果,列于表XI中。
表XI
实施例1组合物的阴离子和阳离子分析 | ||||||
A B C D E F | ||||||
银铍镉铋钴铜锰钼镍铅锶钒锌钨磷钛钡铬钠钾铁铝钙镁氟化物氯化物硫酸盐磷酸盐-P硝酸盐(N)亚硝酸盐(N)溴化物氨(N) | <0.007<0.003<0.003<0.04<0.0050.0130.0070.014<0.01<0.0250.010.0096.040.58710.6<0.0030.0620.025125030.20.0180.2401.220.757<10021201.441.8<10<100<3598.0 | <0.007<0.003<0.003<0.040.0050.0360.0060.0120.012<0.0250.0190.0085.930.43611.4<0.0030.0560.036157032.80.0230.2385.340.756<10018601541.3<10<100<35125 | <0.007<0.003<0.003<0.04<0.0050.0430.0070.012<0.01<0.0250.0150.0041.950.3153.340.0060.0550.028277065.40.0240.0522.000.891<10031101521.5<10<100<35130 | <0.007<0.0030.004<0.040.0060.1380.2860.0150.058<0.0250.1160.0110.3830.4356760.0050.1050.107139006860.008<0.02510.215.8<10030400332<det<10<100<35492 | <0.007<0 003<0.003<0.04<0.0050.1120.018<0.0060.020<0.0250.040<0.00314.50.49822.8<0.0030.0790.10253501250.0360.7905.042.27<100109001150<det<10<100<35425 | <.007<.003<.003<0.04<.0050.2100.029<.0060.020<.0250.063<.00315.20.48114.10.0040.1170.12465701540.0370.36110.43.70<10091101590<det<10<100<35592 |
由于几种硫酸酯参与很多细胞过程(如细胞增值和分化)的调节,因此在酸水解之前和之后分析了样品D的硫酸根离子。利用完全的样品D(即没有分级分离的),非水解的样品产生了1000μm硫酸盐而水解的样品产生了1200μm硫酸盐。既然硫酸根离子的浓度在酸水解后增加,这些结果表明存在全部硫酸根离子的20%是硫酸酯。
已经鉴定了实施例1组合物的物理化学标准,其和实施例4描述的早期研究实质上是一致的。这些标准表明可以重复获得相同的产物。
实施例4
此实施例描述了较早的几批实施例1组合物的物理、化学、和生物学特性。
按照实施例1描述的方法制备了几批胆汁抽提物。另外,利用实施例1公开的方法确定了这几批组合物的化学组成,并对其进行了氨基酸分析。所得的结果例于下表中。
表XII
注:ND意思是不可检测,即含有不到0.5μg/ml的脂类和/或含有不到1.0μg/ml的高分子量多肽。NA意思是没有测定。
较早几批实施例1组合物的化学组成 | |||||
组合物批号 | 固体(mg/ml) | 氨基酸(μg/ml) | 糖(μg/ml) | 脂类(μg/ml) | 高分子量>3kD多肽(μg/ml) |
B0201B0202B0203B0208B0209B0211B0106B0706B1306B2006B2306B0213R0201/-pHR0201/+pHC02030-13/2109B27/2806B29/3006B15/1606 | 15.315.715.07.88.55.632.232.722.321.728.531.652.555.836.112.117.528.726.8 | 4.5913.1672.674.532.271. 471.161.428.019.7316.352115531530113149282641 | 40.8554.9525.5302419.232.626.24838.442612162804236376045 | NDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDND75 | NANANANDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDND |
表XIII
注释:1.向B0106和B0706两批中加入了完全等渗的PBS固体。2.将B1306、B2006和B2306三批浓缩了两倍,同时没有调pH值。
较早几批实施例1组合物的物理、化学和生物学特性 | |||||||
传导率 渗透性 吸收率 UV.VIS 活性 效价批号 pH (mMho) (mOsM) (O.D280nm) 峰 (单位/ml) pg/ml | |||||||
80201B0202B0203B0208B0209B0211B0106B0706B1306B2006B2306B0213R0201-pHR0201/+pHC02030-13/2109B27/2806B29/3006815/1606 | 7.377.357.37.007.317.357.577.578.028.568.017.757.957.607.907.737.717.677.84 | 16.917.317.716.111.234.934.311.635.633.935.129.544.550.034.817.022.028.835.0 | 3612983602502591756276277906516236288771162657316453605753 | 0.980.7770.670.4530.5940.2870.3410.3871.1471.0241.0540.481.592.290.960.830.490.551.04 | 404nmNone365nm无无无无无无无无无无271nm0.65O.D.266nm16.OD无无无无无 | 10.56.521.08.16.77.517.223.017.021.019.0 | 858NANANANANANANA |
表 XIV
较早几批实施例1组合物的氨基酸组成 | ||||||||
批号 | ||||||||
B-0208 B-0209 B-0211 O1/06 07/06 1306 2006 2306 | ||||||||
天冬酰胺丝氨酸甘氨酸组氨酸精氨酸苏氨酸丙氨酸脯氨酸酪氨酸缬氨酸蛋氨酸半胱氨酸异亮氨酸亮氨酸苯丙氨酸赖氨酸合计AA μg/ml | 3652210921512127211914.53 | 69449192191735563970103845657362.27 | 1227413112573146190952001231.47 | 72799016124431046241171661.16 | 1131741768306474391513129181.42 | 1443731938 | 11953141335 | 2893081037121142501423107545224701068842316.35 |
533 | ||||||||
14894981720536710786232221458.01 | 14210026391353351214921624280159.73 |
实施例5
此实施例描述了实施例1组合物的各组分的生物学活性。
研究了实施例1组合物各组分的生物学活性。分析结果和具有小分子量(即小于3000道尔顿)的组合物的生物学活性一致。此项结论通过一项实验(在此实验中,组合物通过产施例3描述的反相HPLC)和洗脱下来的组分(分离了此组分,并经实施例2描述的PBMN-TNF测定方法分析了其效价)而确定。明显的活性只在早期洗脱下来的峰(F1)(即5.6至6.2分钟)处检测到,这种活性和分子量小于3000道尔顿的小分子量物质一致(参见表XV)。
表XV反相HPLC洗脱下来的实施例1组合物的各组分对LPS诱导的PBMns的TNF释放的影响
注:1.检测的患者的数目:32.全部释放的TNF-α修正为RPMI培养基的释放(13±4pg/ml,306mOsm)3.HPLC1-2组分在水中重新组成;3-15组分在PBS缓冲液中重新组成。4.串联的柱是:W-Porex C18和PrimeSphere。两个都来源于Phenomenex,250×4.6mm。5.每孔中的LPS体积:10μl6.每孔的总体积:1000μl7.样品体积是相等的。
释放的TNF-α(pg/ml) | |||||
HPLC 渗透性实验的样品 (min) 每孔的数量 总量 -LPS (mOsm) | |||||
LPS | --- | 50ng | 305±79 | 0 | 304 |
实施例1的组合物 | |||||
整体F1F2F3F4F5F6F7F8F9F10F11F12F13F14F15 | 05.60-6.206.20-6.556.55-7.107.10-7.907.90-8.408.40-8.908.90-9.409.40-10.0010.00-10.4010.40-12.0012.00-13.6013.60-14.2014.20-15.3515.35-15.7516.75-18.20 | 100μl100μl100μl100μl100μl100μl100μl100μl100μl100μl100μl100μl100μl100μl100μl100μl | 519±195508±82149±44306±80316±123390±95282±103296±108341±11233±139316±101354±74344±107296±117344±108300±104 | 213203-15711184-24-103624114939-939-5 | 415344281309309309311309309308311311315311314313 |
以下进行了另外的实验以表明活性(释放TNF)组分具有小于3500道尔顿和小于1000道尔顿的分子量。按照Tamari等,农业生物化学,40(10),2057-2062(1977),进行Folch抽提,而使BC0241批组合物分级分离。水层在rotovap上干燥,以获得淡褐色的,颗粒状固体。以5mg/ml的浓度制备此固体的贮存物溶液。将一部分贮存物溶液装入到具有3500或1000道尔顿分子量截断膜的Centri/por离心浓缩器(Spectrum产品,Houston,TX)中。以大约1500×g离心浓缩器,直到此物质的一部分通过膜。以PBMN-TNF测定法评价通过膜的溶液的效价。结果列于表XVI。
表XVI
实施例1组合物各活性组分的分子量
样品 | 释放的TNF(pg/ml) |
BC0241 Folch水层 | 1709 |
通过3500道尔顿膜的Folch水层 | 2318 |
通过1000道尔顿膜的Folch水层 | 2423 |
因此,不同分子量组分的生物学活性分析表明,释放TNF的组分分子量小于1000道尔顿。
实施例6
此实施例具体描述了在培养中实施例1的组合物对T和B淋巴细胞的作用。
在严格控制的条件下,分别在实施例1组合物存在和不存在的情况下,检验了人类淋巴细胞的生长。将标准浓度的淋巴细胞在含有所说的各种浓度的组合物的孔中培养。当正常的T和B人类淋巴细胞和临床使用的相似浓度的此组合物一起培养,通过台胎蓝染色排斥法判定无不利的影响。因此,本发明的组合物在培养中对正常的T和B淋巴细胞无毒性。
也检测了此组合物对人类PBMN存活的影响。用各种体积的此组合物和组织培养基在塑料微孔平板上培养PBMNs24和48小时。在培养末期,通过台胎蓝染色排斥法估算存活细胞的数目。
表XVII和实施例1的组合物一起培养后生存的PBMNs的浓度
1在三次重复中,平板接种的细胞大约为1×106个/孔。2计算的实际细胞数目/孔(×106)。
由台盼蓝测定的活PBMN的数目(×105)1 | |||
24小时后数目 48小时后数目浓度(μl/孔) 0期 (%存活) (%存活) | |||
患者02550100200LPS(μg/孔.1)110 | 0.702 | 0.23(33)0.43(62)0.10(14)0.15(22)0.48(69)0.30(43)0.25(36) | 0.10(14)0.15(21)0.23(33)0.18(26)0.23(33)0.28(40)0.13(18) |
患者02550100200LPS(μg/孔)110 | 1.302 | 0.70(54)0.65(50)0.68(52)0.75(58)0.65(50)0.60 (46)0.15(12) | 0.33(25)0.15(12)0.38(29)0.23(18)0.20(15)0.53(41)0.15(12) |
上述的数据表明存活细胞的数目在24小时时下降,在48小时时再次下降;然而,所说的组合物存在或不存在时存活细胞的数目没有不同。并且,不断增加此组合物的体积对存活无影响。因此,所说的组合物对人类PBMN无细胞毒性。
以下列3个指示系统评价此组合物刺激淋巴细胞的能力:1)对淋巴细胞DNA合成的刺激作用;2)对淋巴细胞介导的细胞毒性功能的诱导作用;和3)对单核细胞巨噬细胞介导的细胞毒性的功能的诱导作用。因为这些实验能测量免疫功能,已表明这些免疫功能和恶性疾病患者的不同临床参数有关,所以选择这些实验。也可以在用不同的生物反应改良剂(如IFN或IL-Z)治疗的癌症患者身上调节免疫功能的这些指示剂。初筛选程序的结果如下:
1.对淋巴细胞DNA合成的刺激作用;和植物凝集素(PHA)的最佳刺激浓度比较;
刺激物 | 每分钟的数目 |
培养基 | 374 |
PHA | 125,817 |
组合物(#222) | 1,116 |
组合物(1∶10) | 1,021 |
组合物(1∶50) | 649 |
和原型促细胞分裂原PHA不同,已知实施例1的组合物不能刺激淋巴细胞的芽生和细胞分裂,此结果和组合物很少刺激或不刺激DNA合成的结果是一致的。
2.对淋巴细胞介导的细胞毒性功能的刺激作用,并和IL-2的最佳刺激浓度比较;
刺激物 | 裂解单位 |
培养基 | 30.8 |
IL-2 | 472.5 |
组合物(纯净的) | 48.1 |
组合物(1∶10) | 33.3 |
组合物(1∶50) | 44.8 |
和淋巴细胞的细胞毒性功能的原型刺激物IL-2不同,此组合物不引起淋巴细胞的细胞毒性。由此组合物刺激的裂解单位的数目实际上和阴性对照(即培养基)引起的数目相同。
3.此组合物对单核细胞介导的细胞毒性功能的刺激作用;与IFN-γ和LPS(IFN+LPS)比较。
刺激物(E/T=20/1) | %细胞毒性 |
培养基 | 4.3 |
IFN+LPS | 24.4 |
组合物(纯净的) | 19.7 |
组合物(1∶10) | 20.0 |
组合物(1∶50) | 11.5 |
实施例1的组合物能够以剂量依赖性方式刺激外周血单核细胞表达杀癌细胞(tumoricidal)功能。此刺激量和原型巨噬细胞激活物、组合在一起的IFN-γ和LPS所引起的刺激量相当。在体外测定中,此组合物的活动不需要加入内毒素,而任何其巨噬细胞激活物也是如此,认识到这一点是很重要的。
实施例7
此实施例具体说明了为研究实施例1的组合物中存在何种细胞因子(如果有的话)而进行的测定的结果。
试验了按照实施例1制备的胆汁抽提物样品(每个试验为50μl和100μl的等份样品),看其中是否含有下列细胞因子(所用的ELISA免疫测定试剂盒的来源和检测限在括号中注明):TNF-α(Endogen,公司(5pg/ml));IL-1α(Endogen,公司(50pg/ml));IL-1β(4.3pg/ml);GM-CSF(Endogen,公司);RFN-α(Endogen,公司);IL-2(Advanced Magnetics,公司);IL-6(Advanced Magnetics,公司)(7pg/ml);IFN-γ(5pg/ml)(原);IL-1(Advanced Magnetics,公司)(需要限制);IL-4(R&D系统(3pg/ml));和IL-8(R&D系统(4.7ng/ml))。所用的方法按照各个试剂盒的说明,一般技术人员员可以很容易地操作。
已确定,本发明的组合物不含有能够测量到的任何所试验的细胞因子,这些细胞因子是表XVIII所描述的TNF-α、IL-1α、IL-1β、IL-4、IL-6、IL-8、GM-CSF和IFN-γ。表XVIII
组合物中细胞因子的Elisa确定
细胞因子(pg/ml) 50μl 100μl | ||
TNFIL-1βGM-CSFIL-6 | <5---<5<7 | <56.5------ |
IFNγIL-1αIL-4IL-8(ng/ml) | <5<50------ | ------<3<4.7 |
实施例8
此实施例描述了实施例1的组合物在小鼠上的药效研究,包括VirulizinTM的内外直接作用和体内施用在小鼠腹膜巨噬细胞中的VirulizinTM的作用。
在腹膜内注射1.5ml 4%的蛋白酶胨72小时后,从C57BL/6小鼠中收获腹膜巨噬细胞。然后在体外单独使用培养基、50ng LPS或VIRULIZINTMTM刺激巨噬细胞。然后在重复实验中进行有关TNF(通过ELISA)和NO(利用Greiss试剂由分光光度计测定)水平的刺激作用的测量。重复实验平均值的标准误差小于10%。如表XIX所示,VTM相对于背景(培养基)水平(120gp/ml)诱导TNF的产生轻微地增加(60-232pg/ml),而和LPS(2225pg/ml)相比,VIRULIZINTM不是巨噬细胞TNF-α释放的强有力的刺激物。氧化氮产生量为零。
表XIX
对蛋白酶胨巨细胞的体外刺激
也给出了VIRULIZINTM和LPS对TNF-α释放的协同作用。在前述同样的处理后,从C57BL/6小鼠中收获腹膜巨噬细胞。然后单独用50ng LPS或LPS和不同稀释液的VIRULIZINTM一起刺激巨噬细胞。如上文所述,通过ELISA方法确定TNF。如表XX所示,LPS在体外单独诱导小鼠腹膜巨噬细胞产生2900pg/ml的TNF-α释放,而培养基则诱导262pg/ml的释放。当LPS和VIRULIZINTM组合在一起时,在1∶5和1∶6的VIRULIZINTM稀释液中TNF-α释放量有800pg/ml的增加量,直到至少1∶40的稀释液时,释放量仍有增加。
刺激巨噬细胞的物质 TNF(pg)平均值 NO(μM)平均值 | ||
培养量LPS (1μg/ml)virulizin:1∶21∶51∶101∶201∶401∶801∶200 | 120222562181206202232142122 | 0110000000 |
表XX
VIRULIZINTM和IFN-α或LPS的协同组合作用
刺激巨噬细胞的物质 TNF(pg/ml) NO(μM) | ||
培养量LPS(5ng/ml)LPS(5 ng/ml+实施例1的组合物1∶51∶101∶201∶401∶801∶2001∶1000IFN-γ(100U)+LPS(5ng/ml)IFN-γ(100U)+Virulizin:1∶51∶10 | 262290037503750350036003000340032006800512625 | 1.6±1.18.6±1.313.2±0.516.9±2.713.5±2.527.1±11.610.1±1.99.7±1.39.4±1.274.1±0.646.9±0.657.3 |
以上述同样的方法给出了VIRULIZINTM和LPS对氧化氮(NO)的协同作用,只是NO的确定是在处理的巨噬细胞的上清液中进行。如上所述,NO的测定是在处理的巨噬细胞的上清液中进行了。如上所述,NO的测定是通过分光光度计进行的,并使用了Greiss试剂。如上表所示,LPS引起一些NO的释放(9μm)。VIRULIZINTM和LPS协同作用诱导NO的产生显著增加(13-27μm),直到1∶40的稀释液仍起作用。VIRULIZINTM本身不诱导巨噬细胞的NO释放。
也体外研究了VIRULIZINTM和IFN-γ对TNF-α释放的协同作用,利用了如上处理的C57BL/6小鼠同样的腹膜小鼠巨噬细胞。有关“协同组合作用”的数据包括在上表中。如表所示,腹膜小鼠巨噬细胞在体外培养24小时后,显示出TNF-α的基线释放。用LPS或IFN-γ刺激的同样巨噬细胞释放大约3000pg/ml的TNF-α。当VIRULIZINTM和IFN-γ一起加入时,TNF-α的释放减少。通过比较。LPS和IFN-γ组合物对TNF-α释放具有加性作用。
利用了如上处理的C57BL/6小鼠的同样的腹膜小鼠巨噬细胞,也体外研究了VIRULIZINTM和IFN-γ对NO释放的协同作用。有关“协同组合作用”的数据包括在上表中。如上所示,单独使用LPS和IFN-γ,每一个都促进NO的产生(分别为9和7μM)。加入到IFN-γ中的VIRULIZINTM诱导NO的产生显著增加(47-57μm),其结果几乎和LPS和IFN-γ组合作用的结果相等(74μM)此结论和VIRULIZINTM和IFN-γ组分促进NO的产生但抑TNF-α的释放的结论是一致的。
研究了由C57BL/6小鼠收获的巨噬细胞在72小时过程中TNF-α的体内释放,这种巨噬细胞在收获前没做任何处理,或者在收获前72小时腹膜内注射1.5和4%的蛋白酶胨,或者在收获前72、48或24小时前注射在PBS中以1∶10稀释的VIRULIZINTM10ml。单独使用IFN-γ(50u/ml)LPS(5ng/ml)或它们组合在一起体外处理单层的巨噬细胞24小时。如上文所述确定TNF和NO。所得数据列于表XX。
表XXI
从处理的小鼠收获的巨噬细胞的TNF和NO的释放
由下列物质注射的小鼠 TNF NO收获巨噬细胞 体外刺激物 (pg/ml) (μM) | |||
没有 | 培养基IFN-γLPSIFN-γ+LPS | 3154023,7506,300 | 025.8±1.61.9±0.240.9±3.8 |
蛋白酶胨(72小时前)hrs prior) | 培养基IFN-γLPSIFN-γ+LPS | 3358385,97510,875 | 0.9±0.548.6±1.723.2±3.455.8±1.9 |
Virulizin(72小时前) | 培养基IFN-γLPSIFN-γ+LPS | 2584253,3004,650 | 1.2±0.637.5±2.64.0±0.954.0±0.9 |
Virulizin(48小时前) | 培养基IFN-γLPSIFN-γ+LPS | 3505605,30012,475 | 8.5±1.862.0±2.536.5±1.258.5±1.6 |
Virulizin (24小时前) | 培养基IFN-γLPSIFN-γ+LPS | 2484759,02512,375 | 2.9±2.144.1±0.712.5±2.452.8±0.6 |
如下表所描述的,在没有刺激物存在的情况下或和IFN-γ、LSP或LPS/IFN-γ一起体外培养24小时后,检测巨噬细胞的TNF-α的释放。表明VIRULIZINTMTM体内刺激后,小鼠腹膜巨噬细胞释放很少的TNF-α。当把收获的巨噬细胞在试验前24小时和48小时暴露在IFN-γ中,这些细胞在TNF-α的产生上显示出很少的增加。相反,试验前24和48小时,而不是72小时用LPS刺激的收获的巨噬细胞显示出的TNF-α释放的增加。同样,在试验前,24和48小时而不是72小时,刺激的收获的巨噬细胞则表现出LPS和IFN-γ的协同作用效果。
研究了在72小时的时间里,巨噬细胞NO的体内产生情况,试验在上文描述的有关TNF-α产生的同样的条件下进行。在腹膜内注射VIRULIZINTM(即下文的IPVIRULIZINTM)24和48小时后,测量的NO有减少的自发释放。当收获的细胞和IFN-γ一起培养时,NO有明显的释放,而试验前24小时和48小时时具有IPVIRULIZINTM的收获的巨噬细胞显示出NO释放的指数增加,NO的释放在72小时下降到单独使用IFN-γ的基线值。当收获的巨噬细胞用LPS刺激后,NO的释放显示出明显的增加,这种增加在VIRULIZINTM处理巨噬细胞24和48小时时再次出现(和没有接受到IPVIRULIZINTM的巨噬细胞相比)。72小时前接受IPVIRULIZINTM的收获的巨噬细胞和没有进行VIRULIZINTM预处理的巨噬细胞反应相同。最后,当将IPVIRULIZINTM预处理的巨噬细胞和LPS/IFN-γ一起培养时,相对于没有这样处理的巨噬细胞,显示出增加的NO产生量。最大值反应发生在收获和试验前48小时用VIRULIZINTM预处理的巨噬细胞上。
实施例9
此实施例阐述了实施例1的组合物对单核细胞和巨噬细胞的激活作用及进行这些实验的方法。
研究表明实施例1的组合物能激活正常的单核细胞,使之对用于检测单核细胞毒性的Chang肝癌细胞系表现出细胞毒性,还表明此组合物刺激癌症患者(如患有子宫颈、卵巢、耳/鼻/喉、子宫内膜异位/子宫和慢性骨髓性的白血病的患者)的单核细胞和巨噬细胞,使之攻击和破坏来源于同一患者的肿瘤细胞。
更特别的是,在本发明组合物存在的情况下检验了单核细胞的杀癌细胞功能,下文简要描述了这些实验的基本方法。此方法已命名为“细胞系和自肿瘤细胞的单核细胞巨噬细胞毒性的测定方法”或简称为“细胞毒性测定法”。
所述方法需要分离单核细胞/巨噬细胞,这一分离步骤按以下进行:收集静脉血。加入无菌的没有防腐剂的肝素,使其最后浓度为20单位/毫升。将所说的血在Hanks平衡盐溶液(HBSS)中以3∶1稀释,在淋巴细胞分离培养基上铺层,并离心获得一层外围血单核细胞(PBMNs)。离心后,从界面上回收单核细胞层,培养基中洗涤两次(培养基是Rosewell Park Memorial研究所(RPMI))的1640培养基,另外添加了10%热天活的胎牛血清,50单位/毫升的青霉素和50μg/ml的链霉素),通过乳胶摄取计数单核细胞。通过在96孔塑料平板上的吸附来分离单核细胞(37℃下2小时,之后用培养基洗涤两次循环)。估计吸附的细胞超过90%的单核细胞。含有吸附细胞的孔在VIRULIZINTM(1∶10-1∶200的最终稀释液)中过夜培养。然后,洗涤吸附细胞以除去VIRULIZINTM,并和肿细胞过夜培养。所说的肿瘤细胞保存在培养基中,其中的内毒素浓度由生产者提供,其含量较低,在测定中刺激作用。
在使用标准细胞系的研究中,利用了51Cr(铬)标记的Chang肝癌细胞,因为此细胞系对天然杀手细胞的细胞毒性不敏感。将这些肝癌靶肿瘤细胞以效应物:靶(E∶T)为20∶1至15∶1的比例加入到吸附细胞的单层上。使用此比率是因为在以5∶1至30∶1变化的E∶T比率所制备的曲线中,其正好落在曲线的平稳范围内。24小时后,收集上清液,并定量51Cr的释放量。按照下列公式计算特异细胞毒性的百分率:
%特异释放=E-S/T-S×%在上面的等式中,E=在效应物细胞存在的情况下,靶细胞释放的CPM;S=在没有效应物细胞的情况下,靶细胞释放的CPM;T=在2%十二烷量硫酸钠处理后,靶细胞cpm的释放。
在使用自体肿瘤细胞的研究中,从外科活检中获得这些细胞,用51Cr标记,并以同样的方式用作如上文描述的肝癌细胞。
以Braun等(癌研究,53,3362-3365(1993))描述的方法制备腹膜和肺泡巨噬细胞。
利用此方案,发现此组合物能引起健康供者的单核细胞对Chang肝癌细胞系产生细胞毒性作用。接下来,研究了此组合物是否能刺激癌症患者的单核细胞和巨噬细胞,使之攻击和破坏它们自身特定的肿瘤细胞。利用已描述的用于标准细胞系(Chang肝癌细胞)的类似的方案,分离了癌症患者的单核细胞和/或腹膜巨噬细胞。从腹腔镜检查时收集到的腹膜液体中分离腹膜巨噬细胞。发现此组合物能激活子宫颈癌患者的腹膜单核细胞和腹膜巨噬细胞,使之产生针对患者自身肿瘤细胞的细胞毒性。此效果相当于或好于由IFN和LPS组合而产生的效果。也发现此组合物刺激卵巢癌患者的腹膜巨噬细胞,使之攻击和破坏培养中的卵巢肿瘤细胞。利用此组合物研究单核细胞/巨噬细胞
由于筛选方法表明组合物不能刺激淋巴细胞的功能,但能刺激单核细胞的功能,接下来的研究的目的是此组合物对单核细胞/巨噬细胞的刺激活性的特质描述上。已经进行了目的在确定组合物在刺激单核细胞/巨噬细胞杀癌细胞功能的剂量反应特性的大量对此研究,并试验了不同批的化合物。此研究主要目的是试验此组合物对癌症不同解剖位点的单核细胞和巨噬细胞的刺激杀癌细胞功能的能力。在这些研究中,使用下列物质:(1)癌症患者和对照者的外围血单核细胞;(2)肺癌患者和没有恶性肺疾病的对照患者的肺泡巨噬细胞;和(3)具有妇科恶性肿瘤患者的腹膜巨噬细胞。
完成了全部按实施例1的方法制备的不同批组合物的剂量反应研究。这些研究依靠外周血单核细胞来试验不同剂量和不同批组合物(批号为216,219和222)的刺激活性。以没有稀释(纯净的)的组合物、1∶10稀释液和1∶50稀释液为物质,试验了每批组合物。图14描述了此结果。
结果表明,批222和216能刺激单核细胞杀癌细胞功能,而批219则不能。在这些初步研究中,似乎222优于216。批222在没有稀释(纯的)和1∶10稀释液两种情况下表现出刺激杀癌细胞功能到相等的水平,在1∶50稀释液的情况下活性减少,但仍能检测出。批216在没有稀释(纯的)和1∶10稀释液两种情况下对刺激杀癌细胞功能表现出相等的功能;在1∶50稀释液的情况下活性减少,但仍能检测到。批216在没有稀释(纯的)的浓度下表现出最大杀癌细胞功能的刺激作用;在1∶10稀释液时活性减少;而在1∶50稀试液时没有检测到活性。如上所述,批219在任何试验的浓度都不引起能检测到的单核细胞杀癌细胞功能。
也评价了外周血简胞的杀癌细胞功能。试实验在对照者的4种外周血单核细胞样品中进行。这些实验利用了此些组合物的最佳刺激浓度(批222的1∶10稀释液)和IFN-γ加LPS的最佳刺激浓度。这些研究中的靶细胞是培养的,对NK不敏感的细胞系,即chang肝癌。结果列于下表中。
刺激物(E/T-20/1) | 细胞毒性% |
培养基IFN-γ+LPS组合物 | 5.4±118.6±422.3±6 |
也进行了子宫颈癌患者单核细胞样品1的实验。由于这种患者自体肿瘤细胞可以用作此测定中的靶细胞,所以此实验是非常重要的。如上所述,此实验利用了此组合物的最佳刺激浓度和IFN-γ加LPS的最佳刺激浓度。另外,为了保护肿瘤小步,效应物/靶细胞比率降低到15/1。此实验的结果列于下表。
刺激物(E/T-20/1) %细胞毒性 | |
培养基IFN-γ+LPS组合物 | 5.514.420.9 |
在对照者的外周血单核细胞中,此组合物刺激单核细胞针对chang肝癌细胞的tumi功能,其水平等于或高于由IFN-γ+LPS的最佳刺激浓度所引起的水平。在子宫颈癌患者的外围血单核细胞中,此组合物以超过由IFN-γ+LPS所引起的水平30%多的水平刺激针对患者自身肿瘤细胞的杀癌细胞功能。
检验的妇科恶性肿瘤患者腹膜巨噬细胞的杀癌细胞功能。这些实验在子宫颈癌患者1和卵巢癌患者1的Lavage液体中分离到的腹膜巨噬细胞中进行。在此测定中,以患者自身的肿瘤细胞作为靶细胞进行此实验。如上所述,比较了组合物的最佳刺激浓度(批222的1∶10稀释液)和IFN-γ+LPS的最佳刺激浓度。另外,为了保护患者的肿瘤细胞,把效应物/靶细胞的比率降到15/1。所得到的数据为:
刺激物 子宫颈癌 卵巢癌 | ||
培养基IFN-γ+LPS组合物 | 8.229.813.2 | 6.64.18.9 |
所有这些结果都突出这样一个事实,即局部的肿瘤环境可能是免疫细胞对免疫激活物发生反应的决定因素。对于子宫颈癌,在腹腔中没有恶性疾病的病理症状,并且在针对自体肿瘤的杀癌细胞功能的发育(development)上,IFN-γ和LPS组合作用好于所说的组合物。对于卵巢癌患者,在腹腔中有明显的肿瘤。针对患者自身肿瘤,对IFN-γ和LPS组合在一起的反应充其量是最小的,而对所说的组合物的反应则较大。
检验了肺癌患者和对照者的肺泡巨噬细胞的T功能。这些实验是在从一个具有非小细胞肺癌患者和3个具有肺部非恶性疾病患者的支气管小泡的灌洗液中分离出来的肺泡巨噬细胞样品上进行的。这些实验利用了此组合物的最佳刺激浓度(批#2221∶10的稀释液)和IFN-γ和LPS组合在一起的最佳刺激浓度。这些研究中的靶细胞是Chang肝癌细胞,并且效应物/靶细胞比率是20/1。所得的数据如下:
刺激物 癌症患者 对照
培养基 2.6±2 19.5±4
IFN-γ+LPS 10.9±13 1.2±5
组合物 5.2±2 18.6±8
此结果和在肺癌患者的肺泡巨噬细胞中观察到的事实一致,即肺癌患者的肺泡巨噬细胞响应常规的巨噬细胞激活物(如IFN-γ+LPS)而在其T功能的发育上受到破坏。此结果表明肺癌患者的肺泡巨噬细胞的T功能相对于对照者的大大降低。更早发表的数据表明VIRULIZIN是巨噬细胞的弱刺激物。实施例23提供了非小细胞肺癌患者的肺泡巨噬细胞进一步研究的结果。肺泡巨噬细胞的活性似乎随不同的VIRULIZIN制剂而变化。这样,实验的最初几批组合物(222,219,216)只在2/7肺泡巨噬细胞制剂中引起肺泡巨噬细胞的细胞毒性。相反,后来的组合物制剂(233,238)则刺激了3/4的肺泡制剂。此种差异可能和组合物制剂的存放时间和效价或患者的变异性有关。因此,此组合物能激活肺泡巨噬细胞的T活性。
此组合物的初步体外实验表明其是一种巨噬细胞激活物。在标准的细胞毒性测定中,提供的物质能引起针对NK不敏感的细胞系和新分裂的人类肿瘤细胞的T活性。在这些实验中,也发现引起的活性是依赖浓度的。此组合物体外激活巨噬细胞T功能的能力相对于目前能得到的最好的巨噬细胞激活组合剂,即组合在一起的IFN-γ和内毒素(即LPS)的能力。如上所述,在不含内毒素的情况下,组合物一起此水平的T功能的能力在生物学上被认为是重要的,如果物质中没有内毒素污染。当美国药典(USP)的兔热原实验将此组合物用于热原实验时,其不含有内毒素。
和其它细胞激活物一样,此组合物刺激巨噬细胞T功能的活性随巨噬细胞的来源的不同而变化。已表明此组合物是外周血单核细胞的最佳激活物,相对于正常供者的IFN-γ+LPS,并优于癌症患者供者的IFN-γ+LPS。恶性疾病明显地影响依赖于所用的激活物的单核细胞T功能的发育(Braun等(1991))。癌症患者单核细胞上不同巨噬细胞激活物的生物学活性的一个决定因素是激活物对花生烯酸代谢和前列腺素细胞分泌作用的敏感性。此组合物的这些最初的研究表明由该化合物引起的活性对前列腺素抑制作用不敏感。如果能够明确的证明由此组合物刺激的癌症患者单核细胞对前列腺素的不敏感性,应该认为这一点在治疗上是重要的,因为许多其它生物激活物的效能由前列腺素限制。2个样品的初步研究表明此组合物在腹膜巨噬细胞中可以有良好的活性,特别是当恶性疾病出现在腹腔时。
这些初步的结果也说明当比较不同的激活物在具有不同妇科恶性肿瘤患者的腹膜巨噬细胞中刺激杀癌细胞功能的能力时所得到的发现。在这些研究中,已发现腹腔中恶性疾病的存在影响腹膜对特异的激活物的响应。在子宫颈癌的患者中,恶性疾病通常不存在腹腔中,这样定居的哦对IFN-γ+LPS的响应是正常的。然而,当疾病存在于腹腔中,如在卵巢癌的情况下,对IFN-γ+LPS的响应则受到抑制。这部分和恶性疾病存在时腹膜哦的花生烯酸代谢的变化有关(Braun等,1993)。组合物激活卵巢癌患者的腹膜巨噬细胞针对病人自身的肿瘤细胞的杀癌细胞功能的事实和独立于花生烯酸代谢途径的激活机制一致。
因此,如前面叙述的体外试验所示,部分的组合物能够激活单核细胞和巨噬细胞以增加他们的免疫系统功能。
实施例10
此实施例阐述了在具有妇科疾病的患者的外围血单核细胞和腹膜中响应本发明的组合物的杀癌细胞功能。
患者群体由7个患者组成,其中3个患有良性疾病,4个患有恶性疾病(2个卵巢癌,1个子宫内膜癌,和1个子宫颈癌)。以外科方法除去样品。利用Braun等在癌症免疫学和免疫治疗学,32,55-61(1990)中公布的方法,从血液样品中分离含有外围血单核细胞的制剂,并利用如Braun等在癌症研究,53,3361(1993)中所公布的方法分离含有腹膜的制剂。利用Braun等描述的单核细胞的细胞毒性测定方法,评价了肿瘤细胞响应本发明的组合物(贮存物批#222的1∶10稀释液)和群体的激活物,即IFN-γ(100U/ml)、IL-12(500U/ml)、和单核细胞-CSF(500U/ml)的细胞毒性。
下表所示的结果表明本发明的组合物刺激患有恶性的和非恶性的妇科疾病的患者的外周血单核细胞和腹膜巨噬细胞的杀癌细胞功能。在单核细胞/肿瘤细胞比为15∶1时,将结果描述为肿瘤细胞毒性(±S.E.)的百分比。
对外周血单核细胞和腹膜巨噬细胞的刺激作用激活物 外围血单核细胞 腹膜巨噬细胞培养基 8.6±3 3.1±1γ-干扰素 18.3±2 9.5±1白细胞介素-12 26.0±4 8.5±2单核细胞-CSF 16.0±2 7.0±2本发明组合物(VIRULIZIN) 23.0±6 12.5±2因此,由本发明组合物所引起的肿瘤细胞毒性相等于或高于由其它所实验的生物刺激物所引起的毒性。
实施例11
此实施例阐述了吲哚美辛(indomethacin)(一种前列腺素合成抑制剂)对响应本发明的组合物的杀癌细胞功能的发育的影响;也研究了其它巨噬细胞激活物对癌症患者的外围血单核细胞的影响。
利用如实施例10描述的测定系统检测了实施例中患有恶性疾病患者电荷样品,只是在加入本发明的组合物、IL-12(500U/ml)及单核细胞-CSF(500U/ml)的同时,加入了吲哚美辛。
如下表显示的结果表明吲哚美辛加强响应IFN-α、GM-CSF和M-CSF的细胞毒性。
吲哚美辛引起的细胞毒性的增加激活物情况 供者号 %细胞毒性IFN-γ 23 11.9±9IFN-γ+吲哚美辛 23 25.2±17GM-CSF 10 7.8±6GM-CSF+吲哚美辛 10 17.8±8PMA 6 27.3±14PMA+吲哚美辛 6 22.0±17IL-12 3 24.7±5IL-12+吲哚美辛 3 25.6±6M-CSF 3 14.31±3M-CSF+吲哚美辛 3 19.0±3组合物(Virulizin) 4 18.7±6组合物(Virulizin)+吲哚美辛 16.4±6
这样,响应IFN-γ、GM-CSF和M-CSF的杀癌细胞功能的发育由吲哚美辛敏感功能调节。相反,响应Phorbol Ester(PMA)IL-12和本发明组合物的杀癌细胞功能的发育不由吲哚美辛不敏感的功能调节,即吲哚美辛不加强响应本发明的组合物、IL-12和PMA的细胞毒性。
实施例12
此实施例阐述了前列腺素E2在吲哚美辛存在的情况下,对响应本发明组合物的杀癌细胞功能的发育的影响。
患者群体由一个正常的和九个患者(一个健康的,一个胰肿瘤患者,两个头和颈项肿瘤患者,一个子宫内膜异位,和四个HIV患者)组成。利用Braun等(1990)公布的方法,从患者的血液样品中分离含有外周血单核细胞的制剂。利用Braun等(同上)描述的单核细胞细胞毒性测定方法,在有或没有PGE2(108M)的情况下,测量肿瘤细胞响应本发明的组合物(贮存物批#222的1∶10稀释液)和吲哚美辛(多至5ng/ml)的细胞毒性。
所得的结果列于下表,在单核细胞/肿瘤细胞比为15∶1时,结果以肿瘤细胞毒性的百分比表示。
PGE2对响应实施例1的组合物而发育的杀癌细胞功能的影响诊断 组合物 组合物 组合物(VIRULIZIN)+吲
(VIRULIZIN) (VIRULIZIN)+ 哚美辛+PGE
吲哚美辛健康的 19 20 27胰的 15 14 22BNSCC 9 8 12HNSCC 11 3 12子宫内膜异位 37 37 n.d.HIV 6 7 8HIV 15 12 19HIV 21 16 20HIV 23 22 n.d.
下表中的数据显示PGE2(10-8M)的病生理水平不能抑制响应本发明的组合物而发育的杀癌细胞功能的水平。此结论和PGE2抑制由IFN-γ刺激的单核细胞的杀癌细胞功能的能力相反(Braun等,(1993))。
实施例13
此实施例阐述了在本发明的组合物刺激的单核细胞中,针对自体肿瘤的杀癌细胞功能的发育。利用Braun等(1990)公布的方法,从7个患者(三个卵巢癌,一个子宫内膜癌,一个子宫颈癌和两个ENT癌)的血液样品中分离含有外周血单核细胞的制剂。利用Braun等描述的单核细胞细胞毒性测定方法,在有或没有PGE2(10-8M)的情况下,测量肿瘤细胞响应本发明的组合物(贮存物批#222的1∶10稀释液)和吲哚美辛(多至5ng/ml)的细胞毒性,只是使用了患者的肿瘤细胞代替Chang肝癌细胞。利用胶原酶和DNase处理患者的肿瘤细胞,制备单细胞制剂,并如Braun等(1990)描述的方法标记此细胞。
下表中所显示的结果显示本发明的组合物有能力激活患者自身的单核细胞以杀死患者的肿瘤。
实施例1的组合物诱导的单核细胞的杀癌细胞功能诊断 培养条件 %肿瘤细胞毒性
(E/T=15/1)卵巢癌 培养基 2
组合物(Virulizin) 11卵巢癌 培养基 1
γ-干扰素+LPS 4
组合物(Virulizin) 9卵巢癌 培养基 0
γ-干扰素+LPS 14
组合物(Virulizin) 11子宫内膜癌 培养基 6
γ-干扰素+LPS 14
组合物(Virulizin) 21子宫颈癌 培养基 8
γ-干扰素+LPS 30
组合物(Virulizin) 13ENT癌 培养基 11
γ-干扰素+LPS 12
组合物(Virulizin) 25ENT癌 培养基 18
γ-干扰素+LPS 11
IL-12 11
M-CSF 3
组合物(Virulizin) 35
实施例10至13的实验结果表明实施例1的组合物能够激活单核细胞以表达杀癌细胞功能;这种组合物在血液中对腹膜巨噬细胞起作用;并且,此结果和组合物不从属于前列腺素的抑制作用一致,前列腺素是患者免疫抑制的重要形式。实验数据也支持此组合物在治疗腹膜、肺泡和妇科恶性疾病中的利用。
实施例14
此实施例阐述了为评价组合物之内的蛋白质所进行的测定的结果。
利用Pierce Micro BCA蛋白质测定技术完成了组合物中的蛋白质评价(smith等,生物化学年报150,76-85(1995))。用蒸馏水将一批10μl组合物的样品补充到1ml。配制5中浓度的牛血清清蛋白(0.150μg/ml),用作标准。0.1N的NaOH用作空白。向所用这些样品中加入BCA混合物(2%双辛可酸钠盐;Pierce)、4%硫酸铜和微型试剂(溶解在0.2N NaOH中的NaCO3、NaHCO3、酒石酸钠)。样品混合物在60℃下培养1小时,冷却,利用分光光度计在562nm测定吸收读数。然后把实验中的蛋白质的量和绘制的标准曲线比较,并进行适当的计数。发现组合物中的蛋白质浓度较低,估计为32μg/ml。
实施例15
总之,此实施例证明了下列几点:(1)组合物具有TNF-α释放活性,并且TNF-α的释放活性不与任何内毒素的污染有关;(2)巨噬细胞的引发提高组合物刺激TNF-α释放的能力;和(3)组合物的高克分子渗透压浓度对TNF-α的释放的活性没有作用。
为了试验内毒素的作用是否和上面所述的实施例1组合物的生物学活性有关,利用加入到反应物中的多粘菌素进行了进一步的实验。在白细胞中,多粘菌素抑制内毒素活动。下表和随后的注释说明了所进行的组合物实验。
内毒素的缺乏对TNF-2释放的影响和巨噬细胞引发的释放增加
释放的TNF(pg/ml)实验的样品 添加剂 总量 -LPSLPS 多粘菌素 11±7 0
没有 517±118 0组合物(#B0213) 多粘菌素 1591±413 1581
没有 5256±2585 4738
注释:
1.所释放的TNF都符合1640培养基的TNF释放。
2.多粘菌素浓度:50,000单位/毫升。
3.组合物体积:200μl。
4.使用多粘菌素,试验8个患者。没有添加剂,试验3个患者。
5.LPS浓度:50ng/10μl。
结果显示多粘菌素能完全抑制LPS-诱导的TNF-α的释放。在缺少多粘菌素的情况下,LPS诱导的517pg/ml的TNF-α,而在多粘菌素存在的情况下,释放11pg/ml的TNF-α。另一方面,在多粘菌素存在的情况下,组合物释放1591pg/ml的TNF-α。在没有多粘菌素的情况下,LPS和所说的组合物表现出不仅仅是刺激物的加性效应,而是当引发巨噬细胞时,组合物以更大的强度发生作用。
高克分子渗透压浓度对TNF-2释放无影响
批号 pH 克分子渗透压浓度
(mOsm)
浓缩的:
B0222 原pH 411
B0222 调节的pH 581
B0216 调节的pH 872
80219 调节的pH 886
非浓缩的:
B0221 原pH 652
B0221 调节的pH 533
B0213 调节的pH 675
B0225 调节的pH 590
B0226 调节的pH 540
BC11-06 调节的pH 44 5
BC11-09 调节的pH 603
利用标准的方法确定了不同批的克分子渗透压浓度。结果列于前表中。B0213以675mOsm为中等偏高。B0222(显示出比B0213具有更好有TNF释放活性)的高克分子渗透压浓度较低,为581mOsm。B0226、BC11-06和BC11-09部分的范围为540至603mOsm。也研究了组合物的高克分子渗透压浓度对TNF-α释放活性的影响。发现当调节组合物的克分子渗透压浓度,甚至调至高克分子渗透压浓度时,其继续释放TNF-α。
实施例16
此实施例阐述本发明组合物的毒性研究。对下表所列的各种动物品种进行了初步的毒性研究。
在每日临床观察的基础上,在接受本发明组合物注射的14、21和30天后,对下表中所列的所有动物进行了测量。在开始的30天内每3天收集血液学数据,以后每月一次。在整个施用注射的时期或随后的跟踪期(所有的品种为1个月,只有狗跟踪了4个月)没有在任何包含在此项研究中的358多种动物中观察到不利的影响。动物 数量 剂量白鼠 100 0.2ml i.m.3天间隔,共4次雄性Wistar兔 100 2.0ml i.m.3天间隔,共4次金色仓鼠 60 1.5ml i.m.4天间隔,共4次天竺鼠 60 3.0ml 3天间隔,其4次兔 15 5.0ml i.m.3天间隔,共4次猫 10 3.0ml i.m.3天间隔,共6次狗 12 2ml/kg i.m.一次给药,观察4个月
进行了第二种毒性研究以确定单一大剂量肌肉内施用所说的组合物的作用。十三只Sprague Dawley大鼠接收了组合物大剂量肌肉内施用(5ml/kg)。三只大鼠观察了7天。十只大鼠观察了14天。其后使它们安乐死并进行了尸体剖检。在任何组中都没有观察到毒性症状,在尸体剖检的动物中没有观察到重大的病理症状。基于这些观察,确定所说的组合物在大鼠中肌肉内施用的LD50高于5ml/kg。
另一个毒性实验是由安大略湖的兽医学院实施的,将其中所说的组合物施用给杂交品种的狗。下表概括了此品种实验方案:动物 年龄及重量 剂量1 剂量2 施用间隔雄性混合品种 成年5kg 5.5ml i.m. 0.6ml i.m. 7天雌性混合品种 6个月13kg 12.5ml i.m. 1.3ml i.m. 7天
在每种情况下,一次剂量在右后腿中施用,7天后第二次剂量在左后腿施用。在第一次注射之后,两种狗都观察14天。在整个研究期间,每天监测两次食欲、活性、温度、脉搏率和呼吸率。在下列时间点进行常规尿分析、血液学和血清化学描述:预处理和第一次注射后的24小时,72小时,7天和14天。两种动物都没有表现出和任何注射有关的疼痛。不存在和第二次注射有关的过敏反应证据。没有观察到可以归因于药物的物理或者实验参数的变态或者变化。健康的狗似乎充分忍耐了这种药物。在安大略湖癌研究所用VIRULIZINTM进行了17-天重复剂量的毒性研究连同动物模型研究。模型利用了雌性C57B1小鼠。有如下的4组(IM=肌肉内,IP=腹膜内):组号 处理 剂量体积 数目/组1 盐水,IM 0.05ml 102 VirulizinTM,IM 0.05ml 103 VirulizinTM,IM 0.05mlX2 104 VirulizinTM,IP 0.5ml 10
在第0天用5×103B16F1黑素瘤细胞附加中心体注射每组小鼠。在开始的17天,每组小鼠每天接收如上表描述的VirulizinTM或盐水注射。在第18天,处死小鼠。
在处死前,其食物摄入、重量的增加和行为都是正常的。在所检查的任何器官中没有引起光学显微镜能观察到的变化的毒性之证据,所检查的器官有:大肠、脾、胃、胰、膀胱、肝脏、人脑、肾、小肠和心脏。食品摄入和行为是正常的。重量的获得是正常的。
通过每周施用3次VirulizinTM,共施用13周,在Fischer-344大鼠(总共40个雄性和40个雌性)中进行了13周重复剂量的毒性研究。最大的剂量是1.1mg/kg,大约是人类剂量的20X。13周后,将动物进行充分的组织病理学检查。和对照比较,只有一个所观察的相关发现处理在20X剂量的组中其获得的平均体重稍微下降。没有证明存在毒性。
实施例17
此实施例阐述了本发明的组合物在治疗伴侣动物的各种恶性肿瘤方面的临床用途。
用此组合物以周剂量进行肌肉内施用的方式治疗患有高级致瘤性疾病的十一猫和十只狗(其中每一种对常规的疗法都物反应)。下表概括了此研究中的各临床情况:
患有恶性瘤的动物的概况
编号 | 名字和年龄 | 品种/性别 | 诊断 | 起止 | 注射 | 外科 | 结果 |
1 | Bandit-13 | 犬-M/n | 口鼻纤维肉瘤 | 01/31/8705/19/87 | 16 | 3 | 次要的局部反应进行性疾病安乐死 |
2 | Bob-5 | 猫-M/n | 病灶骨,带有骨肉瘤发育的组织转化,梭细胞肉瘤,猫纤维肉瘤,鳞状的复发的梭细胞肉瘤-侵略性的(尸体剖检诊断) | 04/02/87-08/10/8711/08/88-02/21/90 | 1869 | 11 | 第一次复发16个月全部完全反应 |
3 | J.D.-7 | 犬-M/n | 口部无黑色素的黑素瘤,良性黑素瘤,复发的圆形细胞肉瘤 | 03/02/87-08/24/8712/14/87-04/05/8804/04/8908/01/8912/24/9025029189 | 2620141715494 | 3 | 完全反应当前无症状(4个月) |
4 | Mimi- | 犬-F/s | 复发的侵略性的纤维肉瘤 | 02/27/87-08/10/87 | 22 | 5 | 稳定的(没有变化);肢切断。没有复发 |
5 | Goliath-17 | 猫-M/n | 恶性黑素瘤纤维肉瘤 | 04/02/87-09/14/8711/30/8707/25/88 | 22,31 | 3 | 初始的主要局部反应。接下来的次要局部反应。进行性疾病。安乐死。 |
6 | Diablo-15 | 猫-M/n | 恶性鳞状细胞癌 | 05/28/89-06/29/87 | 5 | 1 | 初始次要反应,然后进行性疾病。安乐死。 |
7 | Oliver-10 | 犬-M/n | 恶性圆形细胞肉瘤 | 02/24/89-05/30/89 | 12 | 1 | 完全反应。无症状1年。 |
8 | Karu- | 犬-M/n | 粘蛋白肠癌-转移的 | 06/02/87-09/14/87 | 14 | 1 | 次要部分反应。然后进行性疾病。安死术 |
9 | Puppy-12 | 猫-M/n | 盯聍腺腺癌 | 07/22/88-10/04/88 | 10 | 1 | 次要局部反应。然后进行性疾病。死于87年10月10日。 |
10 | Grandpa-16 | 猫-M/n | 整形的肿瘤高级恶性 | 01/17/89-03/20/89 | 9 | 2 | 次要局部反应。然后进行性疾病。安乐死于87年3月26日。 |
11 | Sam-7 | 猫-F/s | 纵隔淋巴组织瘤 | 11/02/87-12/21/87 | 7 | 0 | 次要局部反应。然后进行性疾病。死于87年12月21日。 |
12 | Pete- | 猫-M/n | 急性猫 | 04/13/87- | 5 | 0 | 暂时次要局部白血病反应。然后进行 |
05/11/87 | 性疾病。死于87年5月5日。 | ||||||
13 | Midnight-8 | 猫-M/n | 猫白血病 | 11/24/87-01/01/88 | 2 | 0 | 进行性疾病。安乐死于87年7月1日。 |
14 | Stormy-10 | 犬-M/n | 无黑色素的黑素瘤 | 03/02/87-07/08/87 | 完全反应,9个月后复发,进行性疾病。 | ||
15 | Penny-10 | 犬-F | 恶性黑素瘤 | 03/02/87-07/08/87 | 局部反应(?)进行性疾病。 | ||
16 | Muky- | 猫-F | 整形癌 | 02/09/87-06/08/87 | 6 | 3 | 完全反应,3个月稳定后复发。 |
17 | George-10 | 猫-M | 恶性黑素瘤 | 03/02/87-08/04/87 | 15 | 1 | 次要局部反应,26个月稳定后无变化。 |
18 | Simon-13 | 犬-M | 良性前列腺增生 | 04/02/87-08/31/87 | 10 | 1 | 次要局部反应。 |
19 | Tequila-14 | 犬-F/s | 恶性肠腺癌 | 11/24/89-08/09/90 | 35 | 1 | 次要局部反应。安乐死于90年9月8日。 |
20 | Sheba-12 | 犬-F/s | 侵略性骨肉瘤头颅 | 12/06/89-06/28/90 | 25 | 1 | 初始次要局部反应。然后进行性疾病。安死术。 |
21 | Mesha-14 | 猫-F/s | 骨肉瘤 | 02/07/89-05/06/89 | 13 | 2 | 肢切断。完全反应。没有复发或者mestases 1年。 |
注M/n指阉割的雄性;F/s指切除卵巢的雌性
注射的数目从2至69,所用的体积多至7.5毫升,在单一的肌肉注射位点给药。周注射方案使得能够利用分别确定每一种情况的诊断实验检查和认真地监控个体的情况。临床医师注意到没有局部的刺激作用和严重的变应性反应,包括过敏反应。临床医师和动物的主人没有观察到任何全身的不良反应。研究人员注意到一些临床改进,这些临床改进包括在几只动物中的较小的复位(reduction)、胃口和活性水平的改善、明显的重量获得、以及疼痛和/或者不安的减少。
前表中记录的临床结果包括了某些描述由Virulizin治疗的动物的反应的术语。下表定义了这些术语:反 应 定 义完全反应 活性肿瘤的所有临床症状都消失。在不少于4周的分离
后,由两个观察确定的所有已知疾病都从患者身上消失。主要局部反应 所有可测量的肿瘤的垂直尺寸的结果总量有超过50%的减
弱,另外没有可见的新损伤。次要 所有可测量的肿瘤的垂直直径的结果总量有25-50%的收
缩;或者主观反应(如表现状态的改进,良好的胃口和感
情);或者如超声波,X-放射线所观察到的肿瘤坏死或者
裂解;或者稠度和肿瘤特性的变化;所有这些表明粘连的
下降和肿瘤移动性的增加。稳定的疾病 一种或多种没有肿瘤裂解的可测量的损伤的大小有不到
25%的增加或者减少;或者有新的损伤出现。进行性的疾病 一种或多种没有肿瘤裂解的可测量的损伤的大小有25%的
增加;或者有新的损伤出现。
6只动物(10只犬中的3只和11只猫中的3只)经验了完全反应。1只动物(11只猫中的1个)具有初始的主要局部反应。11只动物(10只犬中的5个和11猫中的6只)经验了次要局部反应。1只动物(10犬中的1只)保持不变,1只动物(11只猫中的1只)没有作出反应。动物的临床经验清楚地证实了所说的组合物治疗恶性瘤的效能的程度。
实施例18
此实施例阐述了在癌患者身上所进行的开放II期临床研究的结果。
1988年,开放II期临床研究由Thirlwell博士在蒙特利尔总医院开始,并在1989年扩展到Saskatoon癌中心,由Maksymiuk博士领导。试验仍然针对具有各种晚期固体肿瘤的患者,这些患者的这些疾病进行或没有进行过前治疗(不包括放射治疗)。用7.5ml的VIRULIZINTM肌肉注射对患者进行或继续进行治疗3次,并进行或继续进行安全性、东方合作肿瘤学组表现状态(“ECOG”)、生命和生存的质量跟踪。
到1994年3月31日,已经治疗了99个患者。不利的情况一般是温和的,控制在中等程度。由于不利的情况,5个患者中止治疗。虽然18个患者的疾病达到稳定,但没有观察到完全或局部反应。关于临床终点,在8周的VIRULIZINTM治疗后,在生命质量、疼痛和ECOG表现状态方面没有变化或改进,对于能够得到数据的患者,它们分别是51%,78%和56%。用VIRULIZINTM治疗晚期的胰癌的患者亚组,从VIRULIZINTM治疗日起,显示出29%的一年生存率,存活中值为160天。从诊断日起,和历史对照比较(13.8%)此组显示出38%的生存率。
因此,开放II期临床研究结果和体外及动物实验一致:Virulizin可用于癌疗法的有价值的扩展上。
实施例19
此实施例阐述了胰癌临床研究的方法和结果,具体地说是本发明的组合物用于能测量的,活组织检查证明的胰癌患者的II期试验(方案C02-104)。
治疗由如实施例制备的组合物0.11ml/kg(最小剂量7.5ml)组成,以单一深肌肉注射的方式施用到臀大肌上,每次给药在臀部上轮流。在开始的一周中,患者接受3次注射,之后每周2次,直到肿瘤进行(progression)。完成反应(CR)定义为在治疗至少4周时,疾病的所有症状完全消失。局部反应(PR)定义为在治疗至少4周时,最大的可测量的损伤的两个最大的直径结果有至少50%的减弱,没有新的损伤和任何损伤进展。进行性疾病定义为一种或多种可测量的损伤的大小有25%或更多的增加,或者有新的损伤的出现。不适合反应准则的疾病或进行性疾病称为稳定性疾病。
此项研究中共有22个患者,但5个患者被认为没有评价效能的价值。没有完全或局部反应。在一个月之内3个患者的疾病发展了。6个患者的疾病稳定3个多月(即3.5,3.5,5,8,12+,14个月)。整组的生存时间中值,从诊断之日算起是8个月,从治疗之日算起是5个月。一个活组织检查证明患有肝脏转移,并且CEA水平为37ng/ml的患者(正常的不到3ng/ml),患有绝对稳定性的肝脏转移和CEA水平8个月。一个患者患有稳定的疾病5个月。一个患者在Whipple方法之后4个月,其胰床上疾病复发,并且使用所说的组合物后,稳定至少一年,只是CEA缓慢地增加。对第3个患者插入了经皮斯滕特氏印模,并且持续使用了总共至少14个月,没有肿瘤进展的迹象。
评价了所有22个患者的毒性,这22个患者总共接受了500次注射。没有一个患者出现和药物有关的毒性的临床或者实验的证据。对生命质量没有有害的影响,一般地生命质量和疾病活性平行。在血清免疫球蛋白上没有见到白血细胞总数或者绝对的淋巴细胞数目有明显的变化。
图6和7分别显示代表自诊断和治疗开始的存活曲线。作为比较,图6迭合了Gudjonsson(1987)的历史存活曲线。另一个可以比较的历史存活曲线的例子可以在Bakkevold,Petterson,Arnesjo和Espenhaug(1990)中找到。存活分析的结果总结如下:
存活 | 患者群体 | 平均存活(天) | 标准差 | 存活中值(天) |
从诊断开始 | 方案C02-104患者方案C02-104评价的患者 | 281304 | 203157 | 182219 |
从治疗开始 | 方案C02-104患者方案C02-104评价的患者 | 166220 | 135132 | 133146 |
用于诊断的平均存活时间是281天,如图6所示。存活中值是182天(大约5个月)。作为比较,Gudjonsson(1987)报道了他的188个外科患者的平均生存时间是208天,存活中值是120天。从治疗算起的评价存活时间是166天(参见图7)。存活中值是133天(是大约4个月又1周)。
存活时间也可以在一部分可评价的患者中估计,这些患者每一个接收至少13次注射。22个患者中有14个可评价。如前表所表明的,这些患者从诊断算起的存活中值是219天(大约7个月又1周)。从治疗算起的存活中值是146天(大约5个月)。
可评价的患者(n=17)从VIRULIZINTM治疗起始的一年生存率是18%,存活中值为5个月。从诊断开始的一年生存率为35%,存活中值为7.3个月。过去具有类似疾病的一群患者,从诊断开始的一年生存率为13.8%,存活中值为120天。生存的质量、疼痛和ECOG表现状态仍然不变或者经过8周的VIRULIZINTM治疗,对于其数据已报道的患者来说,此三项指标分别在57%,71%和66%的患者上有提高。稳定和下降的CEA水平支持稳定疾病的临床发现。
实施例20
此实施例阐述了有关Virulizin治疗恶性黑素瘤的临床试验。
将晚期恶性黑素瘤定义为所有III和IV阶段的患者和所有在最初的治疗后发生洛苛草区或远距离的复发的患者。标准治疗(即所有的其它治疗都经此判断)是DTIC(达卡巴嗪),其报道的响应率为15%。中值反应是3-6个月,并伴随严重的恶心和呕吐,和通过肝静脉的血栓形成而发生的急性肝脏坏死(潜在的致死副作用)。此治疗不能显示任何确定的生存优点。
实施此项研究,以便确定本发明的组合物的安全性和效能,及确定其用于患有晚期恶性黑素瘤的患者时,对存活和生命质量的影响。此项研究是一种非对比的,多中心试验。
初始利用的剂量进度表是每周肌肉内注射3此本发明的组合物,每次7.5ml。在没有观察到器官和骨髓的毒性后,加样进度表增加至每日注射,共15天,然后又保持每周3次注射。接下来,加样给药增加至30天。治疗持续的时间为36周,然后在患者可以选择进入继续方案时,减少到16周。
33个晚期黑素瘤患者包括在此研究的群体中(17女性和16个男性),年龄范围从17到85岁。在此研究群体中,64%的人原先已经治疗过,36%未经过治疗;33个患者中有25个可以评价。Karnofsky表现状态(基线)是40-100%,中值是80%。研究结束时,有11个患者活着,其中5个在治疗中。
在16/33(48%)个患者中观察到了次要局部反应。一个患者肺减少了33%,6个患者疼痛减弱,8个患者在1个多月的时间里获得了1000多克的体重(范围为1000-2600克)。在19/33患者(58%)中观察到了稳定的状态(从60至170天,中值为77天)。
图8,9和10显示出和历史对照比较,用本发明的组合物治疗的患者的存活情况,以天计量为自转移/复发的诊断算起的存活率。连续线代表本发明组合物治疗的患者的存活曲线,断线代表历史存活曲线(Balch等,皮黑素瘤,第2版,1992,14章和39,pp.65-187&499-508,Lippincott公司,Philadelphia,Penn.)。图8显示了所有用本发明的组合物治疗的患者的存活率,包括具有一至三个以上肿瘤位点的患者。图9和10分别显示了具有两个肿瘤位点和具有三个或者更多肿瘤位点的患者的存活率。
所有用本发明的组合物治疗的患者在一年时具有39%的存活率(Kaplan-Meier评价)。在历史对照中,所有晚期恶性黑素瘤(AMM)患者的一年存活率为大约11%(和肿瘤位点的数量匹配)。此组的中值存活率为315天,而历史对照为89天。
具有两个肿瘤位点的患者,在所有用本发明的组合物治疗的患者中,一年的存活率为49%,而历史对照为13%。此组的存活中值为360天,而历史对照的中值为120天。对于三个或更多肿瘤位点的患者,在所有用本发明的组合物治疗的患者中,一年的存活率为31%,而历史对照为0%。具有三个或更多肿瘤位点的组的存活中值为205天,而历史对照的中值为60天。
通过体重的获得、表现状态(Karnofsky)、生命质量系数(Spitzer)和疼痛尺度(线性模拟)评价生命质量。下表显示了在整个时间过程中的质量获得。
患者数量/可评价的 | 第1个月 | 第2个月 | 第3个月 | 第4个月 | 第5个月 | 第6个月 |
百分比范围(gr)平均重:(gr) | 11/2544%100-2400900 | 12/2548%200-60001480 | 4/2516%100-1000525 | 4/2516%100-2000775 | 1/254%---100 | 1/254%---2000 |
Karnofsky和Spitzer尺度两个都是主观的,发现两者在每一个体上都大约相同。报道15个患者在这些参数上没有变化。4个患者显示为波动,即后来又回到以前的水平。1个患者发生减少(范围为40-20%)。
6个患者的疼痛评价结果显示至4周时疼痛从5(最坏的可能)降至2(适中)或0(没有疼痛)。1个患者疼痛从3降至0。1个肝转移患者疼痛降至0比稳定了11个月。9个列入此研究的疼痛为0患者在整个研究过程中一直保持此水平。5个患者疼痛上有中度(2个单位)的增加。3个患者在第二个或者第三个月期间患有瞬时的疼痛增加(1至2个单位)。
将1734次注射施用给33个患者,21患者没有不利的药物反应。在12个患者中报道了14个不利的药物反应。不利的药物反应通常发生在第4或者第8周,并且瞬时发生时是温和的,最经常的是低度发热。
历史组和本发明的组合物治疗的方案组之间的存活情况的差别表明本发明的组合物治疗的患者的存活情况有所改善。癌症似乎在19个患者中稳定。所有治疗AMM的患者都包括在存活数据中(许多临床试验需要未治疗的患者,因为以前无效的治疗存在不好的预后)。在这个群中肿瘤的负担较高(82%的患者具有1个以上的转移性位点)。
存活状况和生命质量的数据表明大部分患者能从此治疗中获得一些益处。在研究结束时,11个患者仍然活着,这11个患者中5个继续接受治疗。
对33个患者的初步分析表明,一年的存活率(从复发的诊断算起)为39%。根据此研究的结论可以得到45个患者的最后数据。这些患者中,41个具有远距离的转移。从远距离转移的诊断算起,这些患者的一年存活率为61%,存活中值为529天(17.6个月)。此结果可以和历史数据的13%(中值92天)的生存率比较。从VIRULIZINTM治疗开始,所有患者的一年存活率为22%,存活中值为200天(6.7个月)。
生存的质量、疼痛和ECOG表现状态不变或者在VIRULIZINTM治疗的最初的8周内,对于能够得到数据的患者来说,此三项指标分别在63%,93%和70%的患者上有提高。在VIRULIZINTM使用前和使用后的肿瘤病理学证明了一种不寻常的细胞坏死、纤维变性、脉管血栓形成的模式,这种模式和TNF-α介导的作用一致。
实施例21
此实施例阐述了直接针对恶性黑素瘤的病理学方案。
下文是有关一位在硬腭和牙床上患有进行性恶性黑素瘤的73岁妇女的报道。在显微镜下见到两个恶性黑素瘤的视像。从上到下观察,可以见到上皮层及与之伴随的角蛋白,在它们下面恶性细胞开始变得更明显。可以看见这些黑素瘤细胞是园形或椭圆形,这些细胞含有丰富的嗜曙红细胞质和多形染深色的核。这些细胞已经代替了正常的粘膜下层的组织。见到的血管似乎是正常的,并且存在少量的任何炎症/免疫反应,这种反应由白细胞(多形核和单核细胞)的呈递而代表。这是一个肿瘤组织兴旺的例子,即肿瘤组织的结构是完整的。
观察了同一个患者(其已经由所说的组合物治疗了2个月)的肿瘤组织样品。从上到下,可以见到上皮的连续性被坏死过程破坏。很少能够在外周见到这些坏死部分(通常在任何已经达到了关键质量的肿瘤的中心),特别是在恶性肿瘤上,这种坏死是宿主的免疫应答正在提高对肿瘤的攻击的征兆。遍布整个照片的是大量的不同于原来的肿瘤细胞的细胞。这些是免疫细胞,包括嗜中性、淋巴细胞、巨噬细胞,它们对典型的肿瘤结构的破坏共同起作用(orchestrated)。其血管壁由大量的宿主细胞浓密地浸润。接下来这种细胞浸润导致血管的破坏,这种破坏又反过来阻止肿瘤接受营养和氧(局部缺血坏死)的供给。这种在患者组织幻灯片中看见的对肿瘤破坏有作用的免疫应答和已知报道的由TNF(肿瘤坏死因子)引起的变化及前面实施例描述的工作的结果是一致的。
显示在用所说的组合物治疗后的幻灯片上的免疫应答将这种组合物的体外TNF免疫调节和已知的体内抗肿瘤的TNF作用紧密地联系起来。
实施例22
此实施例阐述VirulizinTM对癌症患者的外周血单核细胞的杀癌细胞功能的影响。
从癌症患者获得静脉血液的外周血单核细胞,将其加工并按照实施例9的方法分析其针对Chang肝癌细胞的杀癌细胞活性。所得的结果显示在下表中,其中利用了下列缩写:
″ENT CA″是耳鼻喉癌;
″KS HIV″是由人类免疫缺陷病毒传染的卡波济氏肉瘤;
″Ovarian CA″是卵巢癌;
″Lung CA″是肺癌;
″Endo CA″是子宫的子宫内膜癌;
″CML″是慢性骨髓性的白血病;
表中所用的术语包括:“诊断”指患者所具有的癌症类型。提供用于实验的单细胞的患者的总数目称为“实验的数量”。其单核细胞显示可被VIRULIZINTM刺激的能力的患者占全部实验的患者的比例称为“被刺激的数量/总数(VirulizinTM)”。其单核细胞显示出可被组合在一起的100个单位/毫升的内毒素-γ(IFN-γ)和2ng/ml的大肠杆菌起源的脂多糖(LPS)刺激的能力的患者占全部实验的患者的比例称为“被刺激的数量/总数(IFN/LPS)”。关于“被刺激的数量/总数(IFN/LPS或VirulizinTM)”,刺激作用定义为比通过用培养基单独培养获得的杀癌细胞值增加50%以上。“批号/刺激作用”表明所用Virulizin的批号或者份号,之后是括号中的实验数目,此数目表明在所有用该批/份进行的实验的总数中,有刺激作用的数目。
VIRULIZIN对癌症患者外周血单核细胞的杀癌细胞功能的影响
诊断 | 实验数量 | 被刺激的数量/总数(Virulizin) | 被刺激的数量/总数(IFN/LPS) | 批号/刺激作用 |
ENT CA | 10 | 8/10 | 5/10 | 222 (3/4)219 (2/3)216 (1/2)233 (3/3)238 (1/2) |
KS/HIV | 9 | 6/9 | 2/9 | 222 (4/7)238 (2/2) |
卵巢癌CA | 3 | 2/3 | 2/3 | 222 (2/2)216 (0/1) |
肺癌CA | 2 | 2/2 | 1/2 | 222(2/2) |
子宫内膜癌 | 1 | 1/1 | 1/1 | 222(1/1) |
CML | 1 | 1/1 | 0/1 | 233(1/1)238(1/1) |
合计: | 26 | 20/26(77%) | 11/26(42%) |
这些结果表明VIRULIZINTM在癌症患者单核细胞引起的杀癌细胞活性相等于或高于响应组合形式的常规巨噬细胞激活物(IFN-α和LPS)而产生的活性。VIRULIZINTM也刺激患有卡波济氏肉瘤的患者的巨噬细胞的杀癌细胞功能,甚至在该疾病的晚期。这样,VIRULIZINTM的作用似乎是不依赖于和其它免疫细胞类型(包括辅助性T淋巴细胞)的合作。
实施例23
此实施例说明了VirulizinTM对癌症患者的和肿瘤有关的巨噬细胞的作用。
通过支气管小泡的灌洗从11个患有非小细胞肺癌的患者获得肺泡巨噬细胞,并通过实施例9中所描述的方法测定针对Chang肝癌细胞的杀癌细胞活性。从7个患有妇科癌(2个子宫内膜癌,3个卵巢癌,2个子宫颈癌)的患者获得腹膜巨噬细胞,并以上面提到的方法测定针对Chang肝癌细胞的杀癌细胞活性。
结果在下表中显示,所用的缩写和术语定义为如实施例22所描述的。
VirulizinTM对癌症患者的与肿瘤有关的巨噬细胞的作用
实验的数量 | 被刺激的数量/总数(Virulizin) | 被刺激的数量/总数(IFN/LPS) | 批号/刺激作用 |
非小细胞肺癌患者的肺泡巨噬细胞 | |||
11 | 5/11 | 5/11 | 222(2/7)219(1/4)216(1/4)233(2/3)238(3/4) |
妇科病例中的腹膜巨噬细胞 | |||
7 | 7/7 | 6/7 | 222(6/6)219(2/2)216(0/1) |
这些结果表明VIRULIZINTM既能刺激患者的外周血单核细胞,也能刺激患者的和肿瘤有关的巨噬细胞以表达杀死肿瘤的活性。此结果在患有妇科恶性疾病的妇女的腹膜巨噬细胞中和患有肺癌的患者的肺泡巨噬细胞中观察到。从这些结果可以看出,VIRULIZINTM也能刺激对常规激活物(如γ-干扰素+内毒素)的刺激作用不反应的癌症患者的巨噬细胞。
实施例24
此实施例说明了在癌症患者的单核细胞中,VirulizinTM对针对自体肿瘤细胞的杀癌细胞功能的发育的作用。
利用实施例9中所描述的方法,获得外周血单核细胞,并测定其针对自体肿瘤细胞的杀癌细胞活性。这样,例如,测定了耳/鼻/喉癌患者的单核细胞的针对此患者自己的肿瘤细胞的杀癌细胞活性。利用卵巢和子宫内膜癌和慢性骨髓性的白血病细胞也完成了类似的检验。结果显示在下表中,所用的缩写和术语如在实施例22中所描述的。所用的培养基是RoswellPark Memorial研究所[RPMI]的1640培养基,补充了10%的热灭活的胎牛血清,50单位/毫升的青霉素和50μg/ml的链霉素。
在癌症患者的单核细胞中,Virulizin对针对自体肿瘤细胞的
杀癌细胞功能的发育的影响
这些结果表明VIRULIZINTM在癌患者的巨噬细胞中能刺激针对由癌患者的活组织检查制备的自体肿瘤细胞的杀癌细胞活性。从这些结果可以看出,VIRULIZINTM也能刺激对常规激活物(如γ-干扰素+内毒素)的刺激作用不反应的癌症患者的巨噬细胞。
细胞毒性% | ||||
诊断osis 批号 培养基 IFN/LPS Virulizin | ||||
ENT CAENT CAENT CAENT CAENT CA卵巢癌卵巢癌卵巢癌卵巢癌卵巢癌子宫内膜癌子宫内膜癌CMLCML | 222222222222240222233238239240222222233238 | 14.911.613.717.73.20.02.92.92.92.926.71.210.710.7 | 11.512.010.511.415.617.216.116.116.116.144.54.515.215.2 | 10.924.925.735.215.714.012.315.013.09.235.59.222.617.0 |
被刺激的数量/总量 | 5/10(50%) | 9/10(90%) |
实施例24
此实施例描述了在Virulizin刺激的单核细胞中,细胞因子特异性抗体对杀癌细胞功能发育的影响。
按照实施例9的方法,获得肺癌患者和慢性骨髓性白血病(CML)患者的外周血单核细胞并分析其针对Chang肝癌细胞的杀癌细胞活性。单独使用VIRULIZINTM以及使用VIRULIZINTM加抗IL1α,或者抗IL1β,或者抗TNFα或同种型抗体测定单核细胞的刺激作用。所用的抗体的数量为根据标准方法通过滴定实验所确定的测定条件下的饱和量。
结果显示在下表中,所用的缩写和术语如在实施例22中所描述的。此外,″抗IL1α″是白细胞介素1α的抗体;″抗Il1β″是白细胞介素1β的抗体;″抗TNFα″是肿瘤坏死因子α的抗体;和″同种型对照″是和上面的细胞因子无关的表位抗原的抗体。
在Virulizin刺激的单核细胞中,细胞因子特异性抗体
对杀癌细胞功能发育的影响
培养物 %特异性细胞毒性oxicity | |
实验1r肺癌患者,Chang肝癌 | |
λ-IFN/LPSVirulizin(219)Virulizin+抗-IL1αVirulizin+抗-IL1βVirulizin+抗-TNFαVirulizin+:同种型对照1 | 8.110.613.910.15.99.3 |
实验2CML患者,Chang肝癌 | |
培养基Virulizin(216)Virulizin+抗-IL1αVirulizin+抗-IL1βVirulizin+抗-TNFα | 5.711.09.29.12.8 |
这些结果表明肿瘤坏死因子α的抗体抑制由VIRULIZINTM引起的杀癌细胞功能。白细胞介素1α或者白细胞介素1β的抗体不能降低VIRULIZINTM刺激的单核细胞的杀癌细胞功能。这些结果和这样的结论一致,即巨噬细胞响应VIRULIZINTM而发育的杀癌细胞功能和单核细胞产生肿瘤坏死因子α(TNFα)有关。
实施例25
此实施例说明了在Virulizin刺激的外周血单核细胞中,细胞毒素疗法对杀癌细胞功能发育的影响。
在最初的缓解诱导化疗末期,利用实施例9的方法获得癌患者的外周血单核细胞,并分析其针对Chang肝癌细胞的杀癌细胞活性。
结果显示在下表中,所用的缩写和术语如在实施例22中所描述的。此外,″pt″是顺铂;″5-FU″是5氟尿嘧啶;″RT″是放射疗法;″Ara C″是胞嘧啶阿糖胞苷。术语″诊断″是患者患有的癌症类型。当术语″复发″在表中出现时,所说的癌症再次发生,此外,所说的癌症是新诊断的。术语″疗法″是患者所经历的癌症化疗/放射疗法的制度。
在Virulizin刺激的外周血单核细胞中,细胞毒素疗法
对杀癌细胞功能发育的影响
细胞毒性 | ||||
诊断 疗法 培养基 IFN/LPS Virulizin | ||||
ENT CAEnT CA复发ENT CAENT CA复发ENT CA复发ENT CA复发CML被刺激的数量/总量 | Pt/5-FURT/Pt/5-FURTRT/Pt/5-FURT/Pt/5-FURTAra C/Idarubicin | 6.85.828.811.646.011.613.5 | 11.710.131.212.056.822.810.73/7(43%) | 10.224.244.324.980.127.635.66/7(86%) |
结果表明在从经历了细胞毒性疗法的患者获得的巨噬细胞中VIRULIZINTM刺激杀癌细胞功能。因此,可以相信VIRULIZINTM可以和其它的疗法良好的地相互作用。事实表明VIRULIZINTM刺激杀癌细胞功能较常规的激活物(如γ-干扰素家内毒素)更有效。
实施例26
此实施例说明了Virulizin对子宫内膜异位患者的巨噬细胞细胞毒性的影响。
以实施例9的方法获得子宫内膜异位患者的外周血单核细胞和腹膜巨噬细胞,并测定其针对Chang肝细胞的杀癌细胞活性和针对由子宫的活组织检查所制备的自体固有的子宫内膜细胞细胞毒性。
结果列于下表,其中所说的缩写和术语如在25实施例所用的。此外,″阶段″指基于RAFS(修订美国人生育力学会)分类系统的分出的子宫内膜的阶段。
Virulizin对子宫内膜异位患者的巨噬细胞细胞毒性的影响
阶段 批号 培养基 IFN/LPS Virulizin 作用 | |||||
IIIIIIVIVIIIIII | 219219233238233238 | 9.51.211.511.57.47.4 | ND4.515.315.311.111.1 | 21.39.226.937.314.016.4 | 刺激作用刺激作用刺激作用刺激作用刺激作用刺激作用 |
这些结果表明VIRULIZINTM刺激子宫内膜异位患者的外周血单核细胞和腹膜巨噬细胞以杀死由子宫的活组织检查制备的子宫内膜细胞。本发明的组合物可以为子宫内膜异位提供治疗。
实施例27
此实施例说明了VirulizinTM各批初步实验的结果。
通过实施例9描述的方法获得静脉血液的外周血单核细胞,将其加工,并分析其针对Chang肝癌细胞瘤的杀癌细胞活性。
结果列于下表,其中所说的缩写和术语如在实施例26所描述的。此外,″供者″是从中获得外周血单核细胞的疾病状态的患者。″正常的″指患者没有疾病。″ENT CA″指患者患有头和颈(耳/鼻喉)癌。
VirulizinTM批247,248,249的初步实验
供者 批号 培养基 IFN/LPS Virulizin | ||||
正常的正常的正常的ENT CAENT CAENT CAENT CAENT CAENT CA | 247248249247248243247248249 | 11.711.711.711.611.69.39.39.39.3 | 21.021.021.022.822.8l5.315.315.315.3 | 31.119.629.127.626.729.617.9l1.426.2 |
这些结果表明VlRIJLIZINTM在正常的和癌症患者的单核细胞中引起的杀癌细胞活性相等于或高于响应组合形式的常规巨噬细胞激活物(IFN-α和LPS)而产生的活性。
实施例28
此实施例具体描述了活性组分的分离。
将300ml的所说的组合物的样品在rotovap上蒸发干燥,其中的浴温不超过40℃。为了保证蒸发期间溶液仍然是碱性,每半小时向组合物中加入5滴浓缩的氢氧化铵溶液直到蒸发完成。所得的残留物的重量为11.6克。
然后将20ml溶解在甲醇溶液中的10%氢氧化铵加入到2克上述的残留物中。将不溶的物质滤出,并将滤液通过101.93克的
急聚(flash)硅凝胶的柱(大小为5cm×12.5cm)进行层析。所用的溶剂系统是溶解在甲醇溶液中的10%的氢氧化铵。在10p.s.i的压力下过柱,流速为11毫升/分钟。在100ml的溶剂通过柱后,收集12份20ml的组分。这些组分的收集物和白色带的出现有关,将白色带很快地从柱中移出。
将这些组分在硅凝胶平板上以甲醇的10%浓缩的氢氧化铵溶液进行薄层色谱(TLC),并以茚三酮喷雾显色。将具有相似TLC图谱的组分组合在一起,结果形成了下列的合并物(这些组合物在rotovap上干燥):组分 通过柱获得所 产量
组分的体积1-4 100-180 05-6 180-220 0.11757-8 220-260 0.19699-10 260-300 0.015111-12 300-340 0.0053
组分5-6,7-8和9-10在Rr值为0.81处和茚三酮发生的阳性反应。体外测验了组分5-6和9-10的TNF刺激作用(按照实施例9)。结果如下:组分 活性5-6 50pg/mg9-10 1814pg/mg
这样,组分9-10是显著的活性TNF刺激物。
通过电子冲击质谱(EIMS)和电喷雾质谱分析组分5-6的样品,以鉴定可能存在于此组分中的特定化合物。利用5%的醋酸水溶液作为溶质,在Perkin-Elmer SciexAPI-III分光计上进行电喷雾质谱。有时,加入甲醇以增加溶解。在VG分析型ZAB-SE分光仪上利用甘油作为基质进行使用直接的插入探针的EIMS,在Kratos分析型质谱上进行使用DCI探针的EIMS。
总结产生的光谱表明下列化合物很可能存在于组分5-6中:
磷酸胆硷sphocholine,牛磺胆酸,胆碱硬脂酸甘油二酸酯,硬脂酸,硬脂酸甘油二酸酯。棕榈酸-硬脂酸甘油二酸酯和鞘氨醇-油酸缀合物。
实施例29
此实施例说明了分离活性组分扩大的方法。
按如下方式,大觌膜重复实施例28。
将10毫升浓缩的氢氧化铵加入到900毫升所说的组合物中,所得的溶液在rotovap上蒸发干燥,其中的浴温不超过40℃。为了保证蒸发期间溶液仍然是碱性,每半小时向组合物中加入5滴浓缩的氢氧化铵溶液直到蒸发完成,留下残留物。
然后将20ml 10%氢氧化铵的甲醇溶液加入到全部的残留物中。将溶液用声波处理(sonicate)15分钟,将不溶的物质滤出。将滤液通过1695克的
急聚(flash)硅凝胶的柱(大小为5cm×12.5cm)进行层析。所用的溶剂系统是10%的氢氧化铵的甲醇溶液。在6p.s.i的压力下过柱,流速为30毫升/分钟。下表总结了过柱的结果。组分号 每种组分的体积 观察结果1 550 清晰,淡黄色的2 450 澄清的,淡黄色的3 400 澄清的,淡黄色的4 150 澄清的,淡黄色的5 100 澄清的,淡黄色6-7 75 澄清的,淡黄色的8-13 50 澄清的,淡黄色的14 50 黄褐色溶液开始洗脱15-35 50 黄褐色溶液36-40 50 澄清的,淡黄色的
将这些组分在硅凝胶平板上以甲醇的10%浓缩的氢氧化铵溶液进行薄层色谱,并以茚三酮喷雾显色。将具有相似TLC图谱的组分组合在一起,结果形成了下列的组合物(这些组合物在rotovap上干燥):组分号 通过柱获得的 产量(克) 备 注
组分体积3 1000-1400 0.0504 白色粉沫固体4-5 1400-1650 0.0855 白色粉沫固体6-8 1650-1850 0.1555 白色粉沫固体9-12 1850-2050 0.3014 白色粉沫固体13-14 2050-2150 0.3595 白色粉沫固体15-16 2150-2250 0.6914 淡褐色固体,发粘17-18 2250-2350 1.0284 黄褐色固体,成块的19 2350-2400 0.3432 黄褐色固体,成块的20-23 2400-2600 1.1531 褐色固体,成块的24-30 2600-2950 0.8517 褐色固体,成块的31-34 2950-3150 0.0813 褐色油所有组分合并物从15-16到组分31-34在Rf值为0.87处和茚三酮发生的阳性反应,此值和实施例28的活性组分的Rf值十分相似。组分31-34在Rf值为0.85处和茚三酮有加性的阳性反应。
体外测定组分4-5,15-16和17-18的TNF活性(按照实施例9的方法),结果发现没有TNF刺激活性。上述组分的元件分析表明其中含有较高的NH4Cl,已知NH4Cl抑制TNF的产生。
将组分15-16和17-18的样品进行透析,然后利用实施例28描述的方法进行质谱分析。也分析组分17-18和24-30的样品。总结得到的光谱表明可能存在下列化合物:
甘氨胆酸,己三糖胺三聚物,牛磺胆酸(组分15-16);硬脂酸和己糖胺二聚物;和甘氨胆酸(组分24-30)。
实施例30
此实施例具体说明应用另外的方法分级分离和分析本发明组合物的活性组分。
已经鉴定TNF,IL-1βH GM-CSF的释放活性组分可以由80%的乙腈部分沉淀,并且大量的释放活性组分可以从C18 RP-HPLC的早期洗脱液中得到,所以已经研究了沉淀组分的物理化学性质,并和整个组合物及组合物的上清液比较。
图11显示整个组合物和组合物的沉淀及上清液的SDS凝胶电泳。在所有这三种情况下,组合物都跑到了SDS的近前缘,表明它们是低分子量的物质。所用的最小标准是14,400道尔顿。
也通过确定组合物从分子筛HPLC柱中洗脱下来的时间,测定了其分子的大小。将整个组合物、沉淀和上清液的洗脱时间和标准物比较。三个都在胰岛素(其在24.5分钟时洗脱下来)后洗脱下来。再次的物理化学分析表明分子量小于2,400道尔顿。
TNF-释放组分洗脱较早。这样,选择了具有相反影响的柱(含有有机溶剂的亲水柱)。多羟乙基的理想洗脱条件是80%的乙腈。但是,如前面的例子所表明,制剂中的一些物质在此浓度下沉淀。因此,在较低的乙腈浓度下分析所说的组合物,此时,柱的功能主要是分子筛柱。图12和13显示整个上清液和沉淀的图谱。前面的表总结了不同峰的洗脱时间。洗脱时间表明组合物的活性组分具有低分子量。
利用离子交换HPLC分离组合物和其沉淀及上清液。通过AX300(阴离子交换)层析和CMX300(阳离子交换)层析,各组分没有得到明显的分离。疏水反相层析没有分离到峰。
在另外的系列实验中,将10毫升的VIRULIZLNTM装入阴离子交换层析柱上(Bio-Rad AG-1,氢氧化物形式,所有树脂的湿体积是10毫升,用Millipore去离子水平衡)。计算树脂的体积,使之足以结合存在于抽提物中的阴离子。收集未结合的组分,并重新上柱,以使之最大限度地结合在树脂上。收集第二次过柱未结合的组分并贮存起来。通过用去离子水洗涤(2×20ml)除去留在柱中无效体积上的未结合物质。利用分步的梯度重碳酸铵洗脱结合的分子,20ml/步骤。通过低压冻干法除去自由的重碳酸铵。以单核细胞/巨噬细胞激活测定方法检验所有组分样品的TNF释放活性。在未结合的组分(流出物)中,没有发现TNF活性,但在0.2M重碳酸铵洗脱下来的洗脱液中发现大量的活性。这些结果表明活性组分本质上是极性的,阴离子,酸性的。
按照实施例2的方法,分析所有组分样品的TNF刺激活性。结果如下:
TNFα释放诱导活性-LPS样品 (pg/ml)0 M -4960.1 M -1560.2 M 16380.3 M -360.4 M 2560.5 M -270.6 M -1751.0 M -2461.5 M -346VIRULIZINTM 对照 1961
活性测定的结果表明在0.2M和0.4M的组分中发现TNF产生的刺激作用。安如下过程将组合物透析,并干燥透析液:将100ml的组合物放置在Spectra/PorCE管中,此管的分子量截断为100。管的末端用小夹密封,并放置在10ml蒸馏水的振荡浴液中。每天通过从透析管中取出1ml溶液,并向其中加入3-4滴1/10N的硝酸银溶液来检测透析液。氯化物的存在表明透析不完全。如果透析不完全,将浴液用新鲜的蒸馏水代替。3-4天之后透析完全。完全透析后,将透析物质在rotoVap上干燥,以便每毫升原体积溶液平均生产0.3毫克的固体。
然后将固体物质的样品溶解在HPLC分级水中,并在硅凝胶平板上以甲醇的10%浓缩的氢氧化铵溶液进行薄层色谱,并以茚三酮喷雾显色。在Rf值为0.83处具有和茚三酮的阳性反应。
也通过质谱法利用实施例28描述的方法分析固体物质的样品。总结所得到的光谱表明可能存在下列组分:鞘氨醇-油酸缀合物、二乙酰唾液酸、岩藻糖-己糖胺二聚物、脱氧甘氨胆酸、牛磺胆酸、唾液酸-岩藻糖二聚物、二(岩藻糖)-己糖胺二聚物。
实施例31
此实施例具体说明了利用反相-HPLC分析本发明的组合物。
将样品冻干并在0.1%的三氟乙酸(TFA)水溶液(缓冲液A)中重建,接下来在下列柱中和条件下过柱:柱:WP60009-C18柱(W-Pore C18,250×4.6mm,Phenomenex,California)
和prime-sphere HC-C18柱(250×4.6mm,Phenomenex,California)
串联。洗脱液:缓冲液A:溶解在水中的0.1%TFA
缓冲液B:溶解在乙腈中的0.1%TFA梯度过程:将150样品上柱
过缓冲液A20分钟
开始线性梯度,0-80%的缓冲液B,过35分钟
过80-0%的缓冲液B5分钟流速:0.9毫升/分钟温度:环境温度检测:290至284nm的吸收率,大部分在210-235处检测
在下表所列的从注射算起的大约时间内,收集了15种组分。此外,如实施例2所描述的,对每一种组分进行了TNF释放分析,结果如下:
因此,VIRULIZINTM的大部分活性成分在组分1中洗脱下来。在组分4-5,8-9,11-12和14也发现了活性。
组分号 时间(分钟) TNF(pg/ml) |
1 5.6-6.25 2032 6.25-6.6 -1573 6.6-7.1 14 7.1-7.9 115 7.9-8.4 846 8.4-8.9 -247 8.9-9.4 -108 9.4-10.0 369 10.0-10.4 2410 10.4-12.0 1111 12.0-13.6 4912 13.6-14.2 3913 14.2-15.35 -914 15.3 5-16.75 3915 16.75-18.20 -5整体 VIRULIZINTM 213 |
按照实施例28的方法经质谱分析了所有RP-HPLC的样品。总结所得到的各组分光谱表明很可能存在下列化合物:牛磺胆酸、唾液酸-甘油二聚物、NaCl、三甲胺、甲乙胺。
实施例32
此实施例描述了在本发明组合物中已经鉴定的化合物。
按照实施例1的制备本发明的组合物,并将其进行标准方法的分级分离,此方法包括:(1)在100MWCO透析膜中透析;(2)标准的有机抽提(包括Folch抽提),(Tamari等,农业生物化学,40(10),2057-2062(1976));(3)硅石柱层析;(4)离子交换色谱;和(5)利用在“薄层和纸层析的干燥剂”(E.Merck,Darmstadt,Germany,1971)中公开的标准方法进行制备性的硅石TLC分级分离,利用丁醇∶乙酸水(6∶2∶2)作为洗脱液,茚三酮作为显色剂。
化合物的鉴定以下列仪器和技术为基础,这些仪器和技术单独使用或结合使用:
利用70-2505分光计获得EI-MS,CI-MS(OH-)和FAB-MS(在甘油或硫代甘油作为基质)。使用VG分析型ZAB-SE仪器获得EI-MS,FAB-MS(在甘油或硫代甘油作为基质)和GC-MS(OH-)。结合此仪器所使用的气相色谱是Hewlett Packard型5890。利用Kratos光谱分光计获得EI-MS,LSIM-MS(在甘油和NPOE基质中)和GC-MS质谱中。和此仪器结合使用的GC也是Hewlett Packard型5890。在perkin-Elmer Sciex API-III分光计上进行了MS-MS,利用水或水醇(甲醇或异丙醇)混合物作为溶质的电喷雾,EI-MS,及在甘油和硫代甘油中的FAB-MS。按要求,通过利用乙酐/吡啶的乙酰和利用重氮甲烷的甲基化制备各组分的衍生物,以用于MS分析。通过项电喷雾溶质中加入醋酸钠而完成分子向sodiated类型的转换。利用乙酸或三氟乙酸完成电喷雾MS所分子的质子化。在硅石TLC板上进行抽提物和标准物的TLC,利用丁醇∶乙酸∶水(6∶2∶2)或前述的洗脱液作为流动相和几种试剂喷雾显色。
结合前述前述的仪器使用标准方法,这些仪器还在下列参考文献中引用:Rigler等,色谱学杂志,277,321-327(1983);Sundaram,等,Clinica Chimica Acta,34 425-429(1971);Bandurski等,生物化学杂志,193 405-410(1951);and Larsen等,色谱学杂志,226 484-487(1981)。
VIRULIZINTM的化学成分的典型的硅石板TLC图谱(利用丁醇∶乙酸∶水(6∶2∶2)作为洗脱液)列于下表:显色剂 TLC图谱*硫酸 Rf=0-0.25,白色斑点高铈硫酸铵 Rf=0.05-0.42,黄色斑点钼酸盐 Rf=0-0.3,淡蓝绿至带有蓝绿
边缘的白色斑点茴香醛 Rf=0.03-0.25,白色斑点8-苯胺1-naptalene 磺Rf=0-0.25,黄色斑点(肉眼所见)酸茚三酮 Rf=0-0.13,淡粉色斑点
Rf=0.12-0.3,紫色矛头形斑点
Rf=0.15-0.3,红色(burgundy)斑点
Rf=0.3-0.45,淡黄色斑点
Rf=0.35-0.5,深黄色斑点
Rf=0.4-0.5,红色斑点
Rf=0.5-0.6,红色斑点
*Rf值依据硅胶包覆的板的活性程度和洗脱液溶解的精确的组合物而发生轻微的变化。
利用前述的仪器和方法分析本发明的组合物,揭示出其中含有下列化合物:
1)胆汁酸:
胆酸;
甘氨胆酸;
脱氧甘氨胆酸;
胆甾醇硫酸盐;脱氧胆酸;
鹅胆酸;和
牛磺胆酸。
注:是否-OH和-H2在MS上发生,或者是否开始时也存在脱氧、双脱氧和不饱和的类似物,这些从MS上无法辨别。这些化合物可能都以铵盐、烷基铵和无机阳离子的形式存在。
2)磷脂,鞘脂类,和相关的(水解)产物:
硬脂酸CH3(CH2)16COOH
棕榈酸CH3(CH2)14COOH
油酸Z-9硬脂酸CH3(CH2)2CH2CH=CHCH2(CH2)6COOH
氧化的或氢氧化的/不饱和的短链脂肪酸:C6H8O3(如CH3CH=CHCOCH2COOH或带有2个双键的C6酸和氢氧化物)
乙酸;
硬脂酸甘油二酸酯;
棕榈酸甘油二酸酯;
硬脂酸,棕榈酸甘油二酸酯;
硬脂酸-单酸甘油酯-磷酸胆硷(溶血卵磷脂);
硬脂酸单酸甘油酯;
硬脂酸甘油三酸酯;
磷酸胆硷;
磷酸丝氨酸;
磷酸鞘氨醇;
鞘髓磷脂;
卵磷脂;
硬脂酸-鞘氨醇;
鞘氨醇;
磷酸甘油;
甘油;
甘油磷酸胆硷;
硬脂酸,油酸甘油二酸酯;
硬脂酸,油酸磷酸甘油;
硬脂酸酰胺;
硬脂酸甲酰胺;和
棕榈酸酰胺
此外,获得的初步的HPLC和滴定证据表明也存在短链脂肪酸(范围为C1-C30的酸)。
3)粘蛋白水解产物:
唾液酸和它们的二乙酰单体;
乙酰神经氨酸;
己糖胺,如葡糖胺;
岩藻糖;
己糖胺-己糖醛酸(二体)重硫酸盐;
葡萄糖醛酸;
单乙酰代葡萄糖醛酸或者艾杜糖醛酸重硫酸盐;
唾液酸-甘油(二体);和
二聚体,三体,低聚物和乙酰化和硫酸盐形式的上述单体的聚合物
4)脂溶性维生素:
维生素A2;
维生素D1;
发甾醇(存在与其维生素D1的复合物中);
维生素E;
维生素K1氧化物;和
维生素K5。
5)各种有机物:
尿素;
烷基胺,包括甲基胺,二甲胺,乙胺,甲乙胺,二乙胺,二丙胺,丁乙胺;
氨基酸,包括牛磺酸,谷氨酸,甘氨酸,丙氨酸,N-亮氨酸,磷酸丝氨酸,磷酸乙醇胺,天冬氨酸,苏氨酸,丝氨酸,肌氨酸,α-氨基脂肪酸,瓜氨酸,缬氨酸,异亮氨酸,β-丙氨酸,γ-氨基丁酸,羟基赖氨酸,鸟氨酸,和赖氨酸;
丁基化羟基甲苯(BHT);和
聚乙烯二醇。
实施例33
此实施例描述了本发明的糖类成分。
在水解之前和之后,测定了样品中的单糖组分。所用的所用分析单糖的试剂都是分析等级的。在去离子水稀释后,使用THF(三氟乙酸)水解样品。购买自Fisher Scientific的50%的(W/W)NaOH溶液(碳酸盐含量低)。购买自Fluka-Gerantie,纽约的醋酸钠。
利用4M的三氟乙酸在100℃下处理样品4小时以便释放单糖。将样品低压冻干,并利用用于碳水化物的带有Carbopack Pal分离柱(250×4mm i.d.)的Dionex Bio-LC系统和装有25μl样品环的HPLC-AG6防护柱(50×4mm i.d.)经高效液相色谱-阴离子交换方法分析样品。利用PAD(即脉冲电流检测器)完成洗脱的单糖的检测。所用的条件如下:
水解前
为了检测肌醇,利用唾液酸和葡萄糖醛酸、等度洗脱洗脱液(100mMNaOH+150mM NaOAc混合物)。利用氦组件脱气装置除去洗脱液中的空气。通过柱的流速为1毫升/分钟。
通过等度洗脱、洗脱液(15mM NaOH)和及后柱300mM NaOH,以1毫升/分钟的流速完成单糖(包括岩藻糖、半乳糖胺、乳糖、葡萄糖和甘露糖)的检测。
检测器设置为E1=0.05V,E2=0.60V,E3=0.60 t1=120ms,t2=120ms,t3=300ms;黄金工作电极;银-氯化银参考电极;输出范围为充足规模的1-3K nAmp;表速0.5cm/分钟。
糖醛酸和单糖的测量是通过此检测器进行的。通过标准混合物的进行性稀释获得在0.5-2.5μg/ml范围内变化的浓度的线性响应。
水解后
在梯度洗脱(洗脱液A(50mM NaOH)和洗脱液B(50mM NaOH/150mMNaOAc混合物))的样品水解后,检测单糖。利用氦组件脱气装置除去洗脱液中的空气。利用Spectra-Physics(SP-4270)整合器分析结果。标准梯度是100%洗脱液A的注射,之后是80%A:20%B的线性进行性洗脱液,20分钟,然后再回到100%A,5分钟,之后是平衡至少10分钟,再注射下一个样品。
如所描述的单糖分析结果列于下表:
MU100 MU115A MU100GBFolch提取物的水层 MU 148A 透析的premix A份 绿色胆的乙酸乙酯(透析的MU100B) BC0241) 提取物 | ||||||||
样品糖 | 水解前 | 水解后 | 水解前 | 水解后 | 水解前 | 水解后 | 水解前 | 水解后 |
肌醇 | same rt ofgiycerol | same rt ofglycerol | same rt ofglycerol | |||||
唾液酸 | <279.3ng/mg | 0 | 0 | 3.67μg/mg | 0 | |||
葡萄糖醛酸 | 0 | 284.4ng/mg | 0 | 0 | 0 | 3.02μg/mg | 4.04μg/mg | 828.58ng/mg |
半乳糖醛酸d | ||||||||
岩藻糖 | 0 | 0 | 0 | 0 | ||||
半乳糖胺 | 0 | 0 | 0 | 0 | ||||
葡糖胺 | <139.6ng/mg | 543.02ng/mg | 234.5ng/mg | |||||
半乳糖 | 0 | 0 | 0 | 0 | ||||
葡萄糖 | 0 | 0 | 0 | 0 | ||||
甘露糖 | 0 | 0 | 0 | 0 | ||||
未知物(很可能是磷酸甘油脂) | yes | 未知化合物的强峰 |
如表中所示,只有绿色胆汁(批MU100CB)的乙酸乙酯抽提物在水解前,显示出包含任何单糖,它们是唾液酸和葡萄糖醛酸,以每毫升微克级的水平存在。水解后,没有检测到唾液酸,而葡萄糖醛酸以原来大约20%的浓度存在。水解后,本发明组合物的其它制剂显示出含有唾液酸、葡萄糖醛酸、氨基葡萄糖和肌醇。
从上文的描述应该理解,尽管本文已经描述了本发明的特定的具体实施方案以便具体说明本发明,但在不脱离本发明宗旨和范围的情况下,可以进行各种改良。因此,除了如附加的权利要求所限定的外,本发明不受限制。
Claims (6)
1.用于治疗癌症的组合物的用途,所说的癌症选自由胰腺癌、恶性黑素瘤、卵巢癌、ENT癌、子宫内膜癌、肺癌、和卡波济氏肉瘤组成的组,其中所说的组合物包含分子量小于3000道尔顿并且具有下列特性的小分子量组分:
(a)可由动物胆汁中提取;
(b)能体外或体内刺激单核细胞和巨噬细胞;
(c)能调节肿瘤坏死因子的产生;
(d)含有不可测水平的IL-1α、IL-1β、TNF、IL-6、IL-8、IL-4、GM-CSF和IFN-γ;
(e)对人类外周血单核细胞不表现出细胞毒性;和
(f)不是一种内毒素。
2.用于治疗子宫内膜异位的组合物的用途,其中所说的组合物包含分子量小于3000道尔顿并且具有下列特性的小分子量组分:
(a)可由动物胆汁中提取;
(b)能体外或体内刺激单核细胞和巨噬细胞;
(c)能调节肿瘤坏死因子的产生;
(d)含有不可测水平的IL-1α、IL-1β、TNF、IL-6、IL-8、IL-4、GM-CSF和IFN-γ;
(e)对人类外周血单核细胞不表现出细胞毒性;和
(f)不是一种内毒素。
3.用于制造治疗癌症之药物的组合物的用途,所说的癌症选自由胰腺癌、恶性黑素瘤、卵巢癌、ENT癌、子宫内膜癌、肺癌、和Kaposi肉瘤组成的组,其中所说的组合物包含分子量小于3000道尔顿并且具有下列特性的小分子量组分:
(a)可由动物胆汁中提取;
(b)能体外或体内刺激单核细胞和巨噬细胞;
(c)能调节肿瘤坏死因子的产生;
(d)含有不可测水平的IL-1α、IL-1β、TNF、IL-6、IL-8、IL-4、GM-CSF和IFN-γ;
(e)对人类外周血单核细胞不表现出细胞毒性;和
(f)不是一种内毒素。
4.用于制造治疗子宫内膜异位之药物的组合物的用途,其中所说的组合物包含分子量小于3000道尔顿并且具有下列特性的小分子量组分:
(a)可由动物胆汁中提取;
(b)能体外或体内刺激单核细胞和巨噬细胞;
(c)能调节肿瘤坏死因子的产生;
(d)含有不可测水平的IL-1α、IL-1β、TNF、IL-6、IL-8、IL-4、GM-CSF和IFN-γ;
(e)对人类外周血单核细胞不表现出细胞毒性;和
(f)不是一种内毒素。
5.权利要求1的用途,其中所说的组合物是通过肌肉内注射的。
6.权利要求2的用途,其中所说的组合物是通过肌肉内注射的。
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Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104203269A (zh) * | 2012-02-17 | 2014-12-10 | 小丹尼尔·泰里·格里戈里 | 免疫调节剂用于治疗癌症的用途 |
Families Citing this family (17)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20040101569A1 (en) * | 1996-05-16 | 2004-05-27 | Lorus Therapeutics Inc. | Immunomodulating compositions from bile |
CA2206047A1 (en) * | 1997-05-23 | 1998-11-23 | Romeo Rang (Deceased) | Immunomodulating compositions for the treatment of viral disorders |
US7799766B2 (en) * | 1998-04-08 | 2010-09-21 | Theta Biomedical Consulting & Development Co., Inc. | Composition for treating hormonally-dependent cancers |
AU5152799A (en) * | 1998-06-03 | 1999-12-20 | Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung Des Offentlichen Rechts | Glycosyl-inosite-phospho-ceramide (gipc), method for the production and use thereof |
WO2002038164A1 (en) | 2000-11-08 | 2002-05-16 | Lorus Therapeutics Inc. | Combination preparation of a biological response modifier and an anticancer agent and uses thereof |
WO2002102363A1 (en) * | 2001-06-20 | 2002-12-27 | Lorus Therapeutics Inc. | Biological response modifier composition and uses thereof |
WO2005016954A2 (en) * | 2003-08-14 | 2005-02-24 | Boston Medical Center Corporation | Immunologic activity measure(s) for t “helper” on-associated conditions |
US7136936B2 (en) * | 2003-10-03 | 2006-11-14 | Asoka Usa Corporation | Method and system for virtual powerline local area networks |
US7457885B2 (en) * | 2005-02-10 | 2008-11-25 | Asoka Usa Corporation | Powerline communication system and method using coupler design for additional users |
US20050220912A1 (en) * | 2004-03-30 | 2005-10-06 | Theoharides Theoharis C | Anti-inflammatory composition for treating pelvic endometriosis |
WO2006094384A1 (en) | 2005-03-08 | 2006-09-14 | Genesense Technologies Inc. | Use of interleukin 17e for the treatment of cancer |
US20100178652A1 (en) * | 2007-01-05 | 2010-07-15 | Litherland Sally A | Materials and Methods for the Detection, Prevention and Treatment of Autoimmune Disease |
US8042027B1 (en) | 2007-01-16 | 2011-10-18 | Marvell International Ltd. | BM/LLR computation for multi-dimensional TCM/BCM |
US8338383B1 (en) | 2012-02-17 | 2012-12-25 | Gregory Jr Daniel Tyree | Use of immunomodulators for the treatment of cancer |
CL2014003632A1 (es) * | 2014-12-31 | 2015-06-26 | Pontificia Universidad Católica De Chile | Método que comprende el cultivo y expansión de células presentes en líquido ascítico de origen peritoneal, pleural, lavado peritoneal o lavados sistémicos que permite determinar el mejor tratamiento para pacientes con cáncer. |
CN113143936B (zh) * | 2021-02-10 | 2022-03-25 | 北京蕴汇医药科技有限公司 | 鹅去氧胆酸或其衍生物在制备egfr和/或stat3的抑制剂中的用途 |
CN114657125B (zh) * | 2022-04-29 | 2023-08-08 | 中国科学院海洋研究所 | 鲨鱼单个核细胞的分离方法、鲨鱼稀释液及其用途 |
Family Cites Families (22)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB337797A (en) | 1929-07-08 | 1930-11-10 | Henry Leitner | A specific for cancer |
GB2046092B (en) | 1979-03-05 | 1983-11-02 | Toyama Chemical Co Ltd | Pharmaceutical composition containing a lysophospholid and a phospholipid |
US4562179A (en) | 1982-04-19 | 1985-12-31 | Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. | Phospholipid derivatives, and pharmaceutical composition of the same |
US4585762A (en) | 1982-07-30 | 1986-04-29 | Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. | Phospholipid derivatives, processes for use thereof and pharmaceutical composition of the same |
JPS5984824A (ja) | 1982-11-08 | 1984-05-16 | Takeda Chem Ind Ltd | 抗腫瘍剤 |
US4879226A (en) | 1984-04-06 | 1989-11-07 | Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha | Novel human physiologically active polypeptide |
US4767610A (en) | 1984-10-19 | 1988-08-30 | The Regents Of The University Of California | Method for detecting abnormal cell masses in animals |
US4916249A (en) | 1985-07-03 | 1990-04-10 | Hans Brachwitz | Glycero-3(2)-phospho-L-serine derivatives and salts thereof |
IE59777B1 (en) | 1985-12-04 | 1994-04-06 | Max Planck Gesellschaft | Medicaments |
GB8706313D0 (en) | 1987-03-17 | 1987-04-23 | Health Lab Service Board | Treatment & prevention of viral infections |
US5087721A (en) | 1987-10-23 | 1992-02-11 | The University Of Michigan | Radioiodinated phosphate esters |
US4965391A (en) | 1987-10-23 | 1990-10-23 | The University Of Michigan | Radioiodinated phospholipid ether analogues |
US5138067A (en) | 1987-12-17 | 1992-08-11 | Shionogi & Co. Ltd. | Lipid derivatives |
EP0356765A3 (en) | 1988-08-19 | 1991-08-07 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Carboxylic acid derivatives, their production and use |
EP0378763A1 (en) | 1988-10-27 | 1990-07-25 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Lipids, their production and use |
GB8909022D0 (en) | 1989-04-20 | 1989-06-07 | Cortecs Ltd | Pharmaceutical compositions |
US5109118A (en) | 1989-07-06 | 1992-04-28 | Yutaka Mizushima | Modified biologically active proteins |
GB8928580D0 (en) | 1989-12-19 | 1990-02-21 | Scras | 3-(n-methyl-n-alkylamino)-methoxymethyl-propanol phosphocholine derivatives |
US5369097A (en) | 1991-04-25 | 1994-11-29 | The University Of British Columbia | Phosphonates as anti-cancer agents |
US5352682A (en) * | 1993-03-08 | 1994-10-04 | Digestive Care Inc. | Compositions containing salts of bile acid-aminosalicylate conjugates |
EP0717631B1 (en) * | 1993-09-09 | 2003-07-09 | Lorus Therapeutics Inc. | Immunomodulating compositions from bile |
TW342436B (en) | 1996-08-14 | 1998-10-11 | Nippon Oxygen Co Ltd | Combustion type harm removal apparatus (1) |
-
1996
- 1996-03-13 CA CA002215339A patent/CA2215339C/en not_active Expired - Fee Related
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- 1997-09-15 NO NO974257A patent/NO974257L/no not_active Application Discontinuation
-
2001
- 2001-01-17 US US09/764,010 patent/US6596319B2/en not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104203269A (zh) * | 2012-02-17 | 2014-12-10 | 小丹尼尔·泰里·格里戈里 | 免疫调节剂用于治疗癌症的用途 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
NO974257D0 (no) | 1997-09-15 |
US20010009680A1 (en) | 2001-07-26 |
NO974257L (no) | 1997-11-17 |
WO1996028175A1 (en) | 1996-09-19 |
NZ302638A (en) | 2001-04-27 |
BR9607967A (pt) | 1998-01-13 |
AU4873996A (en) | 1996-10-02 |
KR19980703088A (ko) | 1998-09-05 |
CA2215339A1 (en) | 1996-09-19 |
EP0814821A1 (en) | 1998-01-07 |
JPH11501634A (ja) | 1999-02-09 |
CA2215339C (en) | 1999-01-19 |
AU711294B2 (en) | 1999-10-07 |
US6596319B2 (en) | 2003-07-22 |
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Legal Events
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C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
REG | Reference to a national code |
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