JPH11501634A

JPH11501634A - 免疫系異常治療用の胆汁からの免疫調節組成物

Info

Publication number: JPH11501634A
Application number: JP8527137A
Authority: JP
Inventors: ロメオラング; ペルチェソン、ポール、ビー
Original assignee: イムテックファーマインコーポレイテッド
Priority date: 1995-03-16
Filing date: 1996-03-13
Publication date: 1999-02-09
Also published as: NO974257D0; US20010009680A1; US6596319B2; KR19980703088A; NO974257L; BR9607967A; AU4873996A; AU711294B2; CA2215339A1; WO1996028175A1; CN1182368A; CA2215339C; NZ302638A; EP0814821A1

Abstract

(57)【要約】本発明は、３０００ダルトンより小さい小分子量成分からなり、次の性質：ａ）動物の胆汁から抽出できる、ｂ）生体外と生体内で単球及び大食細胞を刺激できる、ｃ）腫瘍壊死因子産生を調節できる、ｄ）ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＴＮＦ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−４、ＧＭ−ＣＳＦ又はＩＦＮ−γを測定できるレベルで含まない、ｅ）悪性マウスハイブリドーマ細胞系で抗増殖作用を示し、ｆ）ヒト末梢血液単核細胞又はリンパ球に細胞毒性を示さない、かつｇ）内毒素ではないを有する組成物の免疫調節剤としての使用に関する。また、本発明は、その組成物の調製、免疫調節剤としての使用及び癌又は子宮内膜症のような免疫成分を有する疾患及び症状の治療におけるその使用に関する。

Description

【発明の詳細な説明】免疫系異常治療用の胆汁からの免疫調節組成物発明の分野この発明は、免疫調節組成物、これからなる医薬組成物及びこのような組成物の哺乳動物の治療への使用に関する。特にこの組成物は、免疫系異常と関連した疾患の治療に関する。発明の背景免疫系応答が不十分な直接の結果でありうる癌と自己免疫感染症と炎症性疾患の予防と治療用の療法が常に開発されている。これらの療法のいくつかは免疫系を治療上用いようとするものである。１つのアプローチは、免疫系の抗原特異要素、すなわち抗体とＴ−細胞に基づいている。例えば、研究は、ある種の抗体反応を制御もしくは誘因するため、異質剤、またはインターロイキンのようなある種の内因性化学メセンジャーに対するワクチンを開発することに向けられていた。第２のアプローチは、免疫系の非抗原特異部分からのペプチドとタンパク質の単離、クローニング、発現と産生に基づいている。例えば、白血球で産生されるインターロイキンからなるサイトカインや、外来抗原を消化するリンパ球やスカベンジャー細胞を刺激するインターフェロンのようなタンパク質は治療の可能性を提供している。例えば、癌の治療は、腫瘍が臨界的なサイズに達しないように腫瘍に対する早期の免疫応答が増大できれば大いに強化できるであろう。腫瘍への免疫応答を増大することを示唆した戦略には、腫瘍関連抗原に特異なワクチン；ＩＬ−２レセプターに対するような腫瘍細胞の表面における抗原に対するモノクローナル抗体の使用；抗腫瘍抗体と超抗原を含む二種特異性分子の使用が含まれる。比較的最近では、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）として知られた生理学的に活性なポリペプチドの役割が研究されている。特に、ＴＮＦは、腫瘍の壊死を誘因し、生体の正常組織への影響がないことが示されている。ＴＮＦをコードするＤＮＡの塩基配列ならびにＴＮＦのアミノ酸配列が、米国特許第４，８７９，２２６号に開示されている。ＴＮＦが腫瘍壊死の誘因する役割を有することが知られていることから、生体内てのＴＮＦの産生または生体利用性を刺激しうる剤は、各種の腫瘍症状の治療に潜在的な利用性を有する。加えて、生体外で、ＴＮＦを産生するため単核細胞と大食細胞(macrophage)を刺激しうる剤は、分析および診断目的ならびに治療投与用のＴＮＦ源を提供する手段として有用である。また、他の疾患は、免疫系応答障害を有するか、又はそれに関与している。例えば、自己免疫疾患は、免疫系が生体に異質でない物質に対する抗体を産生し、炎症と結果として組織損傷を結果づける異常である。例えば関節リウマチ（ＲＡ）は、滑膜と称せられる関節の内膜の正常細胞を、生体免疫系が誤って異物として認識する自己免疫疾患である。自己免疫攻撃は内膜を完全に破壊しうる。最も重篤なケースでは、関節は機能が停止し、人工関節と外科的に置き換えられる。ＴＮＦは、ＲＡの損傷の媒介物質である。中等の症状から重篤状態への進行は非常に急速である。今なお、ＲＡ患者の治療はできない。他の本質的に治療できない自己免疫疾患には、紅斑性狼瘡、多発硬化症と筋萎縮性側索硬化症がある。細菌、ウイルスや他の日和見性病原によるもののような感染症は、身体免疫系をさけるか防御することによってのみ防げることができる。免疫系は、このような病原と戦うため非特異的免疫応答と特異的応答の一方または両方を備えるか引出す。非特異的免疫応答は、主に大食細胞によるサイトカイン産生に集中し、特異的抗体応答への前置として役立つ。炎症性サイトカインはＴＮＦ−αを含み、血液提供の増加によって現れる損傷または感染部位に対する急性応答を仲介する。病原性細菌またはウイルスは、小さな組織スペースへの感染を含めることを企図して好中球と大食細胞でのみ込まれる。そのため、大食細胞は、感染疾患に対する防御で次のようなキーの役割を有する。（１）抗体媒介と細胞媒介免疫応答が生じうるような白血球への抗原のプロセッシングと提供、（２）免疫応答中心へのサイトカインの分泌、及び（３）抗体コートの細菌、腫瘍細胞または宿主細胞の分解。大食細胞は、細菌、真菌や原虫（寄生虫）のような広い多様な病原を消化し殺生できる。その能力は、大食細胞が“活性化 ”されたとき現れる。活性化大食細胞の分泌産物は、他の免疫細胞からのものより多様である。これらは、予備ならびに抗炎症作用の両方を調節し、他のタイプの細胞を調節する。これらの産物には、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、加水分解酵素と酸化代謝産物を含む。主にこの細胞媒介免疫過程で除去される細菌は、結核菌、ＡＩＤＳ患者の５０％までにみられる非定型抗酸菌感染のような他の関連抗酸菌感染、および炭疽、潜在性細菌学的交戦剤を含む。真菌感染は、ＡＩＤＳに苦しむ患者又は臓器移植患者のような免疫抑制患者に共通の問題である。原虫はマラリヤのような生物を含む。炎症疾患には、子宮内膜症や、免疫過程でも媒介される炎症性腸疾患がある。子宮内膜症は、原因不明で、生理中の女性に影響する組織形成の不明な疾患である。この疾患は、子宮内細胞の不適当な着床、生長と機能で特徴付けられる。通常生理サイクル中に排出される子宮内細胞とその断片は、ファロピウス管を経て腹腔内に移送され、そこで、ある女性では着床し、増殖し、子宮内の膜病変となる。しかし、子宮内膜細胞は、全ての生理中の女性の腹腔内に存在するとみられることから、全ての女性ではなくある女性で子宮内膜症が生ずるその原因は、現在不明である。子宮内膜症は、痛みのある炎症性組織、異常出血、広範囲な傷跡、痛みのある排尿または排便、不妊症を併うことさえある婦人の生殖器の損傷を生ずる。一時的に軽減する妊娠か、子宮内膜細胞源を除去する手術は別として、不妊症をも引き起こす子宮内膜症に対する治療は、知られていない。最近、多くの報告が、子宮内膜症が免疫系での変化と関連していることを示唆している。初期の報告は、アカゲサルにおいて免疫抑制治療が子宮内膜症の増加と関連していることを示している。その頃から子宮内膜症の人において細胞の媒介する免疫と体液性免疫にともに変化が見られている。過去数年の間、研究は子宮内膜症における大食細胞の役割に焦点を合わせてきた。これらの研究の根底にある仮説は、単球(monocytes)／大食細胞系が子宮内膜細胞の生長を調節し、正常で健康的な女性に置き違えられた子宮内膜細胞の増殖を妨げるというものであった。子宮内膜症の女性では、置き違えられた子宮内膜細胞が移植され、子宮内膜症の原因となる。次いで、子宮内膜症の発達が、子宮内膜細胞及び細胞由来の抗原に対する自己抗体の産生への刺激物となる。これらの自己抗体生成は、活性化された大食細胞からの生成物と共に、影響を受けた女性の生殖能力及び生殖活動を阻害する。これらの研究の累積した結果は、以下の直接関係のある事実を明らかにしている： (1)腹膜腔内の正規の場所以外の子宮内膜細胞の破壊の原因であると考えられている腹膜処理系（主として大食細胞を含む）は、拡張性子宮内膜症の女性では不完全である； (2)拡張性子宮内膜症の女性での不完全な腹膜大食細胞の活性は、少なくとも部分的にプロスタグランジンの媒介の結果に関連する。それ故、γインターフェロンと内毒素のような大食細胞活性化剤に応答する、拡張性の子宮内膜症の女性由来の腹膜大食細胞の著しい刺激は、プロスタグランジン合成阻害剤が活性化培地に含まれている時にのみ活性化できる； (3)子宮内膜症患者の循環している単球の生成物は、直接子宮内膜細胞の生長調節に関わる。独特の共同培養系で、自己由来の子宮内膜細胞の増殖向上が、大部分の子宮内膜症患者由来の単球で認められるが、増殖の抑制は、大部分の生殖力のある対照の患者由来の単球にみられた；及び (4)子宮内膜症患者由来の子宮内膜細胞の増殖は、大食細胞から誘導されるサイトカインにより調節することができる。データから得られた結果は、限られた疾患を有する患者由来の子宮内膜の増殖性反応は、インターロイキン−１−β（ＩＬ−１β）及びＴＮＦ−αにより高められることを示唆している。逆に、拡張性の疾患を有する患者由来の子宮内膜の増殖性反応は、ＩＬ−１β及びＴＮＦ−α により抑制される。それ故、これらの研究の結果として、子宮内膜症の患者由来の単球及び大食細胞の機能は、疾患の異常生理学において重要な役割を果たしていることが示唆される。さらに、これらの大食細胞機能の幾つかは、病気の深刻さにより異なる影響をうけているようである。限られた疾患を有する女性では、大食細胞は腹膜腔内、おそらく循環内で極度に活動的であるらしく、その子宮内膜細胞は異なる大食細胞由来の生長因子に反応することができるようである。逆に、拡張性子宮内膜症は、部分的には免疫調節性のプロスタグランジンの分泌過多により、腹膜腔内での大食細胞の活性化を抑制することで特徴づけられる。また、大食細胞の生成物も、拡張性子宮内膜症の女性での子宮内膜の増殖を調節しているようである；しかし、異なるサイトカインに対する子宮内膜の反応における性質的な相違は、これらの女性において不完全な大食細胞の活性化の結果が、おそらく疾患を制御するのに役立っていることを示唆している。炎症性の腸疾患（ＩＢＤ）は、胃腸系を含む、原因不明の一群の慢性の炎症性異常に対する一般的な用語である。これらの異常は不特定の潰瘍性大腸炎及びクローン疾患を含む。これらの異常（例えば、関節炎、胆管周囲炎）を伴うこともある腸管外発現は自己免疫現象を示し、ＩＢＤの治療に用いられる治療剤（例えば、コルチコステロイド及びアザチオプリン）は、免疫抑制機構を経てその効果を奏し得る。炎症性の腸疾患の患者は、結腸細胞、細菌性抗原（例えば、大腸菌、リポ多糖）及び外来性タンパク質（例えば、牛乳タンパク質）に対して体液性抗体を有している。一般的に、これらの抗原の存在及び力価は、疾患の活性とは関連していない；しかし、これらの抗原は、上皮損傷に従属する免疫適格の細胞にアクセスできるようである。加えて、ＩＢＤはＩｇＡ欠乏と同様に無ガンマグロブリン血症と関連していることが記述されている。細胞の媒介する免疫に関連した異常性は、皮膚のアネルギー、様々な分裂促進性刺激に対する限定応答を含み、多数の末梢Ｔ−細胞を減少させる。肝臓により分泌され、胆嚢に保存される胆汁は、正常な肝臓の機能により速やかに代謝される医薬の生体利用性を高めるため（ＷＯ９０／１２５８３号参照）及び哺乳動物の白血球溶解の促進を阻害するため（Shinoda ら、Chem.Pharm．Bull.,30,4429-4434(1982)参照）の胆汁抽出物の使用を含む様々な目的のために研究されている。しかし、胆汁が、新形成症、炎症又は感染症性疾患に対する治療上有用な組成物源であると考えられたことはなかった。興味深いことに、英国特許第３３７，７９７号によれば、抗癌剤の可能性のある源として胆嚢自体の使用が示唆されているが、胆汁が胆嚢から除去され、胆嚢は完全に洗浄した後のものにすぎなかった。発明の要旨ここに、胆汁が、大食細胞や単球のような免疫系細胞を活性化できる組成物の重要な源であり、かつ各種の癌、ことに膵臓癌と悪性黒色腫の治療に有効であることを発見した。特に、この発明の組成物は、例えば大食細胞から生体外と生体内の両方でＴＮＦ産生を刺激できることを発明した。この性質は、感染性疾患の治療に有用でありうる。また、この発明の免疫調節作用（特にＴＮＦ−α産生を低く調節または抑制する能力）が、自己免疫疾患や炎症性疾患と異常のような他の免疫系関連異常の治療に有用でありうることも見出した。この発明の胆汁組成物は、また、小児疾患に関したワクチンのアジュバント添加剤として、例えば異種移植法に関連した拒絶現象の防御として有用であるとみられる。この発明の胆汁組成物は、胆汁を水溶性または水混和性溶剤で抽出することによって得られる。得られる抽出物は、不要もしくは望ましくない成分を除去するためにさらに処理できる。以下にさらに詳細に開示される胆汁を抽出する方法で得られる生成物は、ＴＮＦ−刺激活性（または種源によって、ＴＮＦ−阻害活性）を有することが見出されており、癌、感染症、自己免疫異常および炎症性異常に活性であるとみられる。特に、この発明の胆汁抽出物は、膵臓および他の癌に特に活性である。このように得られる全体の組成物が、このような活性を示すことを必ずしも必要としないことは明らかであろう。従って、得られる生成物は、さらに分離、分画または処理することができ、ＴＮＦ産生を刺激する、例えば各種の疾患にある免疫系異常に作用する所望の能力を保持することができる。その上、ＴＮＦ産生を刺激しかつ免疫系異常に作用する同一又は類似の能力を有する生成物を合成的に得ることができることも考えられる。かくして、生成物の成分は、他の生物学的作用の中で、ＴＮＦの刺激及び免疫系異常に作用する能力についての所望の特性に対するそれぞれの貢献を同定し、分析しうることも考えられる。その上、このような同定と分析が、生成物の合成体をつくるのに使用されることも考えられる。１つの観点で、この発明は、３０００ダルトンより小さい小分子量成分からなり、次の性質：ａ）動物の胆汁から抽出できる、ｂ）生体外と生体内で単球及び大食細胞を刺激できる、ｃ）腫瘍壊死因子産生を調節できる、ｄ）ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＴＮＦ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−４、ＧＭ−ＣＳＦ又はＩＦＮ−γを測定できるレベルで含まない、ｅ）悪性細胞系で抗増殖作用を有する、ｆ）ヒト末梢血液単核細胞又はリンパ球に細胞毒性を示さない、及びｇ）内毒素ではないを１以上有する免疫調節剤として使用するための組成物に関する。好ましい具体例によれば、組成物は、ウシの胆汁から抽出され、ＴＮＦの放出を刺激できる。この発明の組成物は、（ａ）動物、好ましくはウシ由来の胆汁を、水溶性又は水混和性溶剤、好ましくはアルコール、好ましくは同容量のアルコールと混合し、胆汁／アルコール溶液をつくり、（ｂ）溶液、好ましくはアルコール溶解画分を分離し、例えば熱の使用で、アルコールの大部分を除去するようにして、実質的にアルコールのない溶液を単離し、（ｃ）溶液から胆汁色素を除去して、澄明な黄色がかった液体を得、（ｄ）任意に、澄明な黄色がかった液体を処理して、実質的に残留アルコールを除去し、（ｅ）澄明な黄色がかった液体をエーテルで抽出するようにして有機脂肪分を除去し、水相を単離し、かつ（ｆ）任意に水相から残留エーテルを除去することによって調製することができる。組成物は、単にバイアルに入れ、滅菌することによりさらに修飾することなく使用できる。また組成物は、濃縮形態でも使用できる。好ましい濃縮形態は、次のように作られる。工程（ｅ）の前に、澄明な黄色がかった液体を、任意に胆汁／アルコール溶液の容量の約１／８に濃縮し、工程（ｆ）の後で、胆汁／アルコール溶液の容量の１／１０になるように水相を濃縮する。また、この発明は、発明の免疫調節組成物を含有する医薬組成物に関する。さらに、この発明は、この発明の組成物の有効量を患者に投与することからなる患者の治療法に関する。その上、この発明は、免疫応答の調節を必要とする疾患と症状、好ましくは感染症、炎症疾患、自己免疫疾患、予防接種、異物移植に関する拒絶現象と新形成症の予防と治療における発明の組成物の使用に関する。この発明のこれら及び他の観点は、次の詳細な記述と添付図面を参照して明らかになるであろう。かくして、各種の刊行物をここに参照とする。その全体を参照としてここに導入する。図面の簡単な説明この発明のさらなる詳細は、添付図面を示した実施例の助けをかりて、以下に記述する。図１は、この発明の濃縮組成物の逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）のプロフィルである。図２は、この発明の濃縮組成物のＲＰ−ＨＰＬＣプロフィルである。図３は、この発明の濃縮組成物のＲＰ−ＨＰＬＣプロフィルである。図４は、末梢血液単核細胞（ＰＢＭＮｓ）によるＬＰＳの誘因するＴＮＦ放出についての組成物の作用を示すグラフである。図５は、ＰＢＭＮｓによるＬＰＳの誘因するＴＮＦ放出について組成物の作用を示す棒グラフである。図６は、発明の組成物で処置した膵臓癌患者の診断で得た生存を示すグラフである。図７は、発明の組成物で処置した膵臓癌患者の治療で得た生存を示すグラフである。図８は、発明の組成物で処置した全ての黒色腫患者の生存を示すグラフである。図９は、発明の組成物で処置した３以上の腫瘍部位を有する黒色腫患者の生存を示すグラフである。図１０は、発明の組成物で処置した３又は４以上の腫瘍部位を有する黒色腫患者の生存を示すグラフである。図１１は、発明の組成物についてのＳＤＳゲルである。図１２は、親水性ＨＰＬＣでの発明の組成物の溶出の条件と時間（ａ）及び発明の組成物の上清の溶出プロフィル（ｂ）である。図１３は、親水性ＨＰＬＣでの発明の組成物の沈殿物の溶出を示す。図１４は、末梢血液単核細胞機能の刺激での発明の組成物の用量反応を示すグラフである。発明の詳細な説明これらの研究の指針となる主要な仮説は、強力な生物刺激剤の治療効力が、大食細胞及び／又は単球を活性化してある種のサイトカインを生じる又は求める活性を促進し、外来細胞もしくは置き違え細胞のような疾患原因もしくは誘因細胞を除去又は分解するようにして、免疫系の適切な調節を引き出す能力によることができるというものである。例えば、悪性疾患を含む環境での腫瘍破壊機能は、癌と戦う有用な治療となるであろう。このような機能は、腫瘍の微細な環境にある免疫細胞の直接的な刺激で生ずることができる。代わりに、この機能は、免疫細胞が悪性疾患の部位に宿り、その環境で機能できたとすれば、循環する免疫細胞を刺激することにより生ずることができる。免疫系態様の根底をなす他の疾患と症状も、適当な免疫調節剤での治療で打破又は改善されるであろう。このような疾患又は症状には、以下でより詳しくは説明されるように子宮内膜症（正常な子宮内膜細胞が不適当な部位で増殖している疾患症状）、各種の感染性疾患などを含む。上記したように、この発明は、３０００ダルトンより小さい小分子量成分からなり、次の性質：ａ）動物の胆汁から抽出できる、ｂ）生体外と生体内で単球及び大食細胞を刺激又は活性化できる、ｃ）腫瘍壊死因子産生を調節できる、ｄ）ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＴＮＦ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−４、ＧＭ −ＣＳＦ又はＩＦＮ−γを測定できるレベルで含まない、ｅ）悪性細胞系で抗増殖作用を有する、ｆ）ヒト末梢血液単核細胞又はリンパ球に細胞毒性を示さない、及びｇ）内毒素ではないを少なくとも１つ有する免疫調節剤として使用するための組成物に関する。より詳しくは、この発明の細胞物の少なくともあるものが、チャン（Chang）ヘパトーマ細胞に対する細胞毒性をもたらす正常単球を刺激するという研究がなされており、そのテストは単球と大食細胞の活性化を測定するのに用いられている。また、癌患者（頸部、卵巣、耳／鼻／喉、肺及び子宮内膜癌、カポジ肉種、及び慢性骨髄性肉腫を含む）由来の単球及び／又は大食細胞が、その組成物で刺激され、これら自体の特有の癌細胞を攻撃、破壊することも分かった。その上、子宮内膜症の患者由来の大食細胞が、同様にこの組成物で活性化されることが分かった（実施例２６参照）。この発明の組成物は、腫瘍懐死因子（ＴＮＦ）の産生を調節できる。ウシの胆汁から単離されるこの発明の好ましい組成物は、ヒト末梢血液単核細胞と前単球細胞系Ｕ−９３７からのＴＮＦの放出を恐らく生理的量で促進する。ＴＮＦは、炎症及び抗腫瘍性サイトカインの作用のカスケードを開始することが知られていることから、好ましい組成物は、ヒト白血球を刺激してＴＮＦ（及びおそらく他のサイトカイン）を放出する抗腫瘍作用をもたらす。従って、この発明は、癌細胞に対するリンパ球と大食細胞の細胞毒性をも強化しうる。また、この発明の組成物は、マウスハイブリドーマ細胞系ＨＹＢ−６−１の細胞の生長を阻害することが見出されている。マウスハイブリドーマ細胞での組成物の阻害作用は、抗増殖活性を示唆している。この組成物のヒト末梢血液単核細胞（ＰＢＭＮｓ）とリンパ球の生存効果も調べた。この組成物は、ヒトＰＢＭＮｓとリンパ球に非細胞毒性であることが分かった。以下でさらに例示するように、この発明の組成物は、中でも次の特徴を有する。１）ＰＢＭＮｓからのＴＮＦ放出に応答しうる成分又は成分類は、Ｃ₁₈ＲＰ−ＨＰＬＣカラムから早期に溶出した。２）この組成物は、インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）の放出を生じ、かつＩＬ−１β放出に応答しうる成分はＰＲ−ＨＰＬＣから早期に溶出し、このことはＴＮＦを放出する同じ物質（群）とみられる。３）この組成物は、低い量のインターロイキン−２（ＩＬ−２）の放出をも生ずる。４）この組成物は、顆粒球マクロファージ・コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）の放出を生ずる。５）ＴＮＦのＧＭ−ＣＳＦ放出に対する比は約２：１である。６）組成物中で同じ分子（類）、すなわち成分（類）が、ＴＮＦ、ＩＬ−１β及びＧＭ−ＣＳＦの放出に応答しうる。この組成物は、複数の異なるサイトカインの放出を刺激するか、又は１つのサイトカインの産生と放出を誘因し、順次他のサイトカインの産生と放出を刺激する。７）沈澱物及びその上清を含むこの組成物を、ＳＤＳゲル電気泳動及び分子ふるいＨＰＬＣで物理化学分析すると、主成分は２５００ダルトンより小さいことが示される。８）さらに、親水性（ポリヒドロキシエチル）分子ふるいＨＰＬＣでの物理化学的分析で、組成物中の小分子量の成分を確認する。９）酸加水分解の前後でのアミノ酸分析で、ペプチドの存在を示すペプチド結合の存在を示唆する。上記したように、この発明の組成物は、（ａ）動物、好ましくはウシからの胆汁を、同容量のアルコールと混合し、胆汁／アルコール溶液をつくり、（ｂ）アルコール溶解性画分を分離し、実質的にアルコールのない溶液を単離し、（ｃ）溶液から胆汁色素を除去して、澄明な黄色がかった液体を得、（ｄ）澄明な黄色がかった液体を処理して、実質的に残留アルコールを除去し、（ｅ）澄明な黄色がかった液体をエーテルで抽出し、水相を単離し、かつ（ｆ）水相から残留エーテルを除去することによって調製することかできる。この組成物は、胆汁を生じる何れの動物の胆汁からも得られる。この組成物は、他の種に対して１つの種の胆汁から得られると特異的な疾患に異なる活性を有することがありうるが、一般に適する胆汁源は、サメ、ウシ、ヒツジ、ヤギ及びブタ由来のものである。ほとんどの場合で、発明の組成物の調製への使用に、ウシ、ヒツジ、ヤギやブタのような屠殺した健康な食品用動物の胆汁を実際に得ることができる。このようにして採取される胆汁は、屠殺した動物の胆嚢及び／又は肝器官（種の解剖と生理学に適当なように）から直接採取され、実質的に清浄であるべきであり、それによって胆汁の調製物は、膿又は血液が実質的にないことを示す。方法の好ましい具体例では、ウシ源の胆汁が利用される。ウシの胆汁は、一部分で、各動物から比較的大量に抽出できるため豊富である。その上、ウシは、健康関連規則の下で日常的に屠殺され、検査されるので、このような動物は、発明の組成物を調製するための信頼できる源となる。その上、ヒトは、ウシ起源の物質にほとんどアレルギー反応を有しない。胆汁は等量のアルコールと混合し、胆汁／アルコール溶液（５０％アルコール）をつくる。アルコールは、脂肪族アルコール、好ましくはメタノール、エタノール又はプロパノール、最も好ましくはエタノールである。５０％アルコール不溶物質が実質的にない溶液は、遠心分離で単離する。胆汁／アルコール混合物は、３０００〜５０００ｒｐｍ、最も好ましくは４２００ｒｐｍで、約１５〜２５℃で少なくとも２時間遠心分離するのが好ましい。次いで、胆汁／アルコール可溶性画分を含むアルコールは、従来法、すなわち画分を適当な温度（例えば８０〜８５℃）で、適当な時間（例えば約１０時間まで）加熱し、アルコールと水の揮発性の違いを利用して除去される。胆汁色素は、活性炭、ポリアミド微顆粒又はろ過を用いて溶液から除去され、澄明な黄色がかった液体とすることができる。活性炭処理を利用するのが好ましい。溶液は、吸光度と伝導性標準を満たすように、その操作を繰り返してもよい。澄明な黄色がかった液体は、従来法を用いて処理し、残留アルコールを実質的に除去する。好ましくは、澄明な黄色がかった液体を、約１．０〜３．５μｍの保持、もっとも好ましくは２．５μｍの保持を有するフィルターを用いてろ過する。澄明な黄色がかった液体を次いでエーテルで抽出し、水相を単離する。この工程で使用されるエーテルは、好ましくはジメチルエーテル、エチルエーテル、ｎ −プロピルエーテル、イソプロピルエーテル、又はｎ−ブチルエーテルであり、もっとも好ましくはエチルエーテルである。残留エーテルは、例えば溶液を５５℃まで、好ましくは約４０℃まで、約５〜１５時間、もっとも好ましくは約１０時間加熱することにより、水相から除去してもよい。この組成物は、ただ単にバイアルに入れ、滅菌することにより、さらに処理することなく使用してもよい。この組成物は濃縮形態で使用してもよい。好ましい濃縮形態は次のようにして調製する。上記の工程（ｅ）の前に、澄明な黄色がかった液体を、任意に例えば約８５℃より低い温度、好ましくは約６０〜７０℃まで加熱することにより、胆汁／アルコール溶液の容量の約１／８まで濃縮してもよい。工程（ｆ）の後に、水相を、例えば約８０〜８５℃まで加熱することにより、胆汁／エタノール溶液の容量の１／１０になるように濃縮してもよい。この発明の組成物を調製する好ましい方法では、採取した胆汁を同量のエチルアルコールと混合する。この胆汁／アルコール混合物を次いで約４２００ｒｐｍで、少なくとも２時間半、約２０±２℃で遠心分離する。上清を捨て、ｐＨとエタノール含量をチェックする。胆汁色素を次いで活性炭を用いて除去する。次いで、処理した胆汁／エタノール溶液の吸光度（Ｏ．Ｄ．）と導電率をモニターする。Ｏ．Ｄ．レベル又は導電率レベルが許容できる特定の範囲外にあるときは、胆汁／エタノール溶液をさらに処理して、例えば特定の制限内に達するように再度活性炭で処理して胆汁色素を除くことが必要である。活性炭処理に続いて、この溶液を２．５μｍの保持を有するフィルターでろ過し、８５℃より低い温度で加熱することによりアルコールを留去し、その溶液を最初の胆汁／エタノール溶液の容量の約１／８まで濃縮する。この濃縮溶液を約２０〜２５℃に冷却する。この溶液を次いでエチルエーテルと混合し、エーテル相を除去する。０．１〜１容量、好ましくは０．２〜０．５容量のような比較的少量のエーテルを用いて、強く撹拌するのが好ましい。この工程は一度繰り返してもよい。水相を５５℃まで約１０時間加熱することにより、残留エーテルを除去し、さらに約８０〜８５℃まで加熱することにより最初の胆汁／エタノールの容量の１／１０まで量を減少させる。次いで、この溶液を外観、生物学的活性ならびにエタノール及びエーテル含量について試験する。塩酸（１％）溶液及び水酸化ナトリウム（１％溶液）ならびに二塩基性及び一塩基性のリン酸ナトリウム塩を緩衝として用いて得られる緩衝液を用いて、常法により、組成物のｐＨを生理学的ｐＨ、すなわち７．４〜７．５に調整してもよい。この組成物は、ただ単にバイアルに入れ、滅菌することによりさらに処理することなく、使用してもよい。好ましい滅菌法は、この組成物を加圧蒸気滅菌、次いで保温を伴った三つの滅菌サイクルに付すことである。この組成物は濃縮形態で使用してもよい。濃縮形態の調製は上述している。この組成物は凍結乾燥することもできる。この組成物及び濃縮組成物は、本質的に異質物質を含まず、１０ｐｐｍを越えないエタノールと５ｐｐｍを越えないエーテルを含む澄明な黄色がかった溶液である。この組成物は、実施例２に記載しているような単球／大食細胞活性分析（ＴＮＦ放出）により測定したところ、ＰＢＭＮ’ｓを活性化して生体外でＴＮＦを放出する。さらに、この組成物は例えば癌患者由来のＰＢＭＮ’ｓを活性化し、同じ患者に由来する癌細胞に対する細胞破壊活性を媒介する。事実、動物及び人を含む臨床試験では、この発明の組成物を使うことにより抗腫瘍治療において効果を示している。同様に、この組成物で活性化したＰＢＭＮ’ｓは子宮内膜細胞に作用することが示され、かくして子宮内膜症及びその他の炎症性疾患を治療用組成物の使用が、この発明によって提供されている。この発明の組成物は、一般的に上述した方法を使用することにより、実証された同一性、有効性及び純度がバッチ間でむらなく再現できる形で製造することができる。同一性と純度は、逆相高圧液体クロマトグラフィーを用いて測定した（実施例１参照）。この発明の組成物は、逆相ＨＰＬＣ上で常に再現性のあるパターンを有する。この発明の濃縮組成物の３つのロットについてのＨＰＬＣの読取りを図１〜３に示す。この組成物は、上記のような性質、例えば生体外及び生体内で単球や大食細胞を刺激する能力などによっても特徴づけられる。この組成物中に存在していると思われる化合物は、その源から考えて、スルホン化された胆汁酸、酸化された胆汁酸、その他の天然に存在する胆汁酸、及びそれらのアミノ酸（特にグリシン及びタウリン）の包接体(conjugates)ならびにステロール類を含む。したがって、この組成物は次式を有する化合物を少なくとも一つ含むものとみられる。〔式中、分子は完全に飽和していても、していなくてもよく、例えばＡとＢ、ＢとＣ又はＣとＤ間の結合は、単結合又は二重結合であってよく、ＸはＨ、ＯＨ、＝Ｏ、又はＯＳＯ₃Ｈであり；Ｙは（Ｒは例えばグリシル、グルタミル、又はタウリルのようなアミノ酸残基であり、それによりグリシン、グルタミル、又はタウリン包接体を形成する）〕。特に、この発明の組成物は、有機及び無機成分を含むその成分化合物について分析した。そのような情報は、マススペクトルスコピー（ＭＳ）を含む分析化学の標準的な方法によって得た。そのような研究の結果は、例えば、コール酸、グリココール酸、デオキシグリココール酸、ウルソデオキシコール酸、コレステロールサルフェート、デオキシコール酸、ケノデオキシコール酸及びタウロコール酸を含む、存在していると思われる特定の胆汁酸化合物の同定を含む。ＭＳからは、ある化合物のＯＨやＨ₂の喪失がＭＳ中に生じているのかどうか、あるいはそのような化合物のデオキシ、ジデオキシ及び不飽和類似体が最初から存在していたかどうかを識別することはできない。これらの化合物はいずれも、アンモニウム、アルキルアンモニウム及び無機カチオンの塩として存在し得る。ＭＳ分析は、この組成物中のリン脂質、スフィンゴ脂質及びミセルを形成し得る関連物質の組成物の存在下における同定も支持している。存在していると思われる特定の化合物は次のものを含む：ステアリン酸ＣＨ₃（ＣＨ₂）₁₆ＣＯＯＨパルミチン酸ＣＨ₃（ＣＨ₂）₁₄ＣＯＯＨオレイン酸Ｚ−９オクタデカン酸ＣＨ₃（ＣＨ₂）₂ＣＨ₂ＣＨ＝ＣＨＣＨ₂（ＣＨ₂）₆ＣＯＯＨ酸化又は水酸化された／不飽和の短鎖脂肪酸：Ｃ₆Ｈ₈Ｏ₃（例えば、ＣＨ₃ＣＨ＝ＣＨＣＯＣＨ₂ＣＯＯＨ又は二重結合２個とヒドロキシドを有するＣ₆酸）酢酸ステアリン酸ジグリセライドパルミチン酸ジグリセライドステアリン酸、パルミチン酸ジグリセライドステアリン酸−モノグリセライド−フォスフォコリン（リゾレシチン）ステアリン酸モノグリセライドステアリン酸トリグリセライドパルミチン酸モノグリセライドフォスフォコリンフォスフォセリンフォスフォスフィンゴシンスフィンゴミエリンフォスフォグリセロールグリセロールステアリン酸−スフィンゴシンスフィンゴシンステアリン酸アミドステアリン酸メチルアミドコリングリセロフォスフォコリンステアリン酸、オレイン酸ジグリセライドステアリン酸、オレイン酸フォスフォグリセロールパルミチン酸アミドレシチンシアル酸−グリセロールダイマーさらに、予備的ＨＰＬＣ及び滴定の証拠が得られ、それらは１〜約３０の炭素原子を有するようなより短鎖の脂肪酸も存在していることを示している。その源ならびにＭＳ及びＨＰＬＣ分析から得られる情報から考えて、存在していると思われるリン脂質、スフィンゴ脂質、及び関連する加水分解生成化合物は、次の式を有する化合物を少なくとも一つ含む。〔Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³は異なっているか同じであってＨ、ＣＯＲ⁴、ＣＨ＝ＣＨ−Ｒ⁵ 、Ｘ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｏ−又は−Ｓ（Ｏ）₂Ｏ−であり；Ｘはコリン、エタノールアミン、Ｎ−アルキル化エタノールアミン、セリン、イノシトール、遊離のヒドロキシルを有する糖、アミノ糖、スルホン化糖及びシアル酸からなる群から選択され；Ｒ⁴は飽和もしくは不飽和、酸化もしくはヒドロキシル化されたＣ₁ 〜Ｃ₃₀のアルキルであり；かつＲ⁵はアルキル基又は酸化及び／又はヒドロキシル化されたそれらの類縁基である〕。脂肪酸及びそれらの包接体は、前記の水性抽出物中に塩として存在していてもよい。そのような化合物の溶解性は、混合物中の他の成分によっても高められる。含有されるカルボン酸のアミド、ＲＣＯＮＲ’Ｒ²〔Ｒ’及びＲ²は同一もしくは異なってＨ又はアルキルである〕も存在しているとみられる。化合物の第三の群、すなわちムチン及びプロテオグリカン加水分解生成物も、組成物の源や前記のＭＳ分析から考えて、存在しているようである。そのような化合物は、胆汁及び胆嚢壁からのムコタンパク質の加水分解生成物：すなわちコンドロイチン４−及び６−サルフェート、デルマタンサルフェート、ヘパリン、ヘパリンサルフェート、ヒアルロン酸ならびにこれらのムチン類の加水分解生成物（モノマー、ダイマー、オリゴマー及びポリマー）のようなものを含む。キチン及び他のムチンも同様に加水分解され、その加水分解生成物は次の化合物を含むだろう：Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン、Ｎ−アセチル−Ｄ−ガラクトサミン−４−サルフェート、ガラクトース−６−サルフェート、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミンー６ーサルフェート、グルコサミンー６ーサルフェート、Ｄ−グルコサミン２−サルフェート、Ｄ−グルコサミン２，３−ジサルフェート、Ｄ−ガラクトース−６−サルフェート、グルクロン酸２−サルフェート、Ｎ−アセチルノイラミン酸、シアル酸、Ｎ−アセチルコンドロシン、コンドロイチン４−サルフェート、コンドロイチン６−サルフェート、Ｄ−グルコサミン、Ｄ−ガラクトサミン、グルクロン酸、グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、イズロン酸、ヘキソース、ヘキソサミン、エステルサルフェート、グルクロン酸、コンドロサミン、２−アミノ−２−デオキシ−Ｄ−ガラクトース、セリン、プロリン、スレオニン、アラニングリシンタウリン、グルタミン酸、アスパルチン酸、ヒスチジン、及び小さなペプタイド類。同じような生成物がケラチンサルフェート、デルマタンサルフェートのようなムチン類の加水分解によって得られるだろう。ダイマー、オリゴマー及びポリマー中の天然の糖−糖結合は、糖モノマー間又は隣接する糖鎖間で、−Ｏ−Ｓｉ（ＯＨ）₂−Ｏ−橋によって置換されていてもよい。特に、存在していると思われる特定のムチン及びプロテオグリカン加水分解生成化合物は、次のものを含む：シアル酸類ならびにそれらのモノ及びジアセチル化及びグリコール化モノマー類；Ｎ−アセチルノイラミン酸；グルコサミンのようなヘキソサミン類；Ｌ−フコース；ヘキソサミン−ヘキスロン酸（ダイマー）ジサルフェート；グルクロン酸；グルクロン酸もしくはイズロン酸ジサルフェート、モノアセチル化物；シアル酸−グリセロール（ダイマー）；ならびにアセチル化及びサルフェート化形態の上記のモノマー類のダイマー、トリマー、オリゴマー及びポリマー類。化合物の第四の群、すなわち源や前記のＭＳ分析から考えて存在しているように思われる脂溶性のビタミン類は、例えばビタミンＡ、Ｄ及びＫ（例えば、Ａ２、Ｄ１、Ｄ３、Ｄ４、Ｋ１、Ｋ２、Ｋ５、Ｋ６、Ｋ７、Ｋ−Ｓ（ＩＩ）ならびにビタミンＥアセテートを含む。特に、存在していると思われる特定の脂溶性のビタミン化合物は、ビタミンＡ２、ビタミンＤ１、ルミステロール（そのビタミンＤ１錯体から存在）、ビタミンＥ、ビタミンＫ１酸化物、及びビタミンＫ５からなる化合物群の少なくとも一つを含む。その源や前記のＭＳ分析から考えて、種々雑多な有機化合物が存在しているように思われる。そのような化合物は次のものを含む：尿素；メチルアミン、ジメチルアミン、エチルアミン、メチルエチルアミン、ジエチルアミン、ジプロピルアミン、及び／又はブチルエチルアミンを含むアルキルアミン類；タウリン、グルタミン酸、グリシン、アラニン、ｎ−ロイシン、フォスフォセリン、フォスフォエタノールアミン、アスパルチン酸、スレオニン、セリン、ザルコシン、α−アミノアジピン酸、シトルリン、バリン、イソロイシン、β−アラニン、γ−アミノ酪酸、ヒドロキシリジン、オルニチン、及びリジンを含むアミノ酸類；ビリルビン、及びそのグルコヌリド包接体；ビリベルジン、及びそのグルコヌリド包接体；ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）；ポリエチレングリコール：ステロイド類の痕跡；糖類、プリン類及びピリミジン類のようなその他の血漿溶質；種々の食物脂質；ならびに種々の食物脂質；ならびにグルタチオン及びその加水分解生成物。特に、組成物中に存在しているとみられる特定の種々の有機化合物は、尿素、メチルアミン、ジメチルアミン、エチルアミン、メチルエチルアミン、ジエチルアミン、ジプロピルアミン、ブチルエチルアミン、アンモニア、コリン、タウリン、グルタミン酸、グリシン、アラニン、ｐ−ｓｅｒ、ｐ−ｅｕ、ｐ−ｅａ、ａｓｐ、ｔｈr、ｓｅr、ｓａｒ、ａ−ａｂａ、ｃｉｔ、ｖａｌ、ｉｌｅ、ｌｅｕ、Ｂ−ａｌａ、Ｇ−ａｂａ、ＯＨ−ｌｙｓ、ｏｒｎ、ｌｙｓ、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、及びポリエチレングリコールからなる群の少なくとも一つを含む。この組成物中に存在するアミン類、殊に２級アミン類は、空気からの窒素酸化物を含み、したがってニトロソ化合物を形成していてもよい。Ｎ−オキサイド及びＮ−カルバメート副生成物も含まれていてもよい。上記一連のアミン類は、すべての１級、２級及び３級アルキルアミンを含むように拡張されるべきである。ある種の無機成分は、次のように同定し、定量（ｍｇ／ｌ）した：この発明の組成物は、有用な薬理学的性質を有する。特に、この発明の組成物は、新形成の生長に作用し、腫瘍壊死因子の放出に作用し、大食細胞及び単球を活性化する。この組成物は、重大な毒性を引き起こさず、一時的に不利な副作用（例えば、微熱、口渇及び注射部位の痛み）を引き起こすに過ぎないことが示された。それらはまた、有害な免疫反応の原因となり得る高分子量物質（すなわち、約５０００ダルトン以上）の成分を検出できるほど含有していないことがわかった。この組成物は、免疫応答の変異を要する症状、特に感染症（細菌、真菌、原虫、及びその他の易感染症を含む）、炎症（子宮内膜症及び炎症性腸疾患を含む）、予防接種（ＨＩＶのためのアジュバントとしての使用；ジフテリア、百日咳、破傷風、小児麻痺、はしか、流行性耳下腺炎、風疹、ウイルス性インフルエンザ、及びヘモフィールスのような通常の小児もしくは成人の免疫化；ならびに腸チフス、コレラ、ペスト、細菌性髄膜炎、及びマラリアのような旅行者のワクチンを含む）、新形成症、及び自己免疫疾患の予防及び治療用薬剤として使用され得る。このような疾患は、不十分な免疫システム応答を伴い、またその直接の結果でもあり得る。前記の技術背景の部分で述べたように、液性及び細胞性欠損症の両方が含まれる。この発明は、例証された単球及び大食細胞を活性化する能力の観点から、免疫応答のこれらのどちらをも高めることができる。さらに、この発明の組成物は、種内又は種間の臓器移植に伴う拒絶現象を改善又は阻止するために使用することができる。この発明の組成物は放射線宿酔の治療にも使用することができる。したがって、この発明の化合物群は、白血病、リンパ腫、黒色腫、腺腫、肉腫、および癌腫のような種々の型の新形成症の治療に特に有用である。殊に、この組成物は、悪性の黒色腫、膵臓癌、子宮頚管−子宮癌、腎臓、胃(stomach)、肺、直腸、卵巣、乳房、腸、胃(gastric)、肝臓、甲状腺、頚部、頚、唾液腺、脚、舌、唇、胆管、骨盤、縦隔、尿道、気管支、膀胱、食道および結腸の癌、ならびに後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）のＨＩＶ感染患者に伴う一種の癌であるカポジ肉腫の治療に有用である。この組成物は、関節硬化症のような免疫応答の欠陥によって引き起こされるか高められるその他の症状、ならびにウイルス性感染症、特にＡＩＤＳのような日和見もしくはその他の感染症にも使用することができる。それはまた、多発硬化症、慢性関節リューマチ、全身性エリテマトーデス、タイプＩ糖尿病、重症筋無力症、アジソン病、自己免疫性溶血性貧血、クローン疾患及びその他の炎症性腸疾患、グッドパスチャー症候群、甲状腺機能亢進症、橋本甲状腺炎、特発性血小板減少性紫斑病、悪性貧血、溶血性連鎖球菌感染後糸球体腎炎、乾癬、硬皮症、シェーグレン症候群、自発性不妊症、及び尋常性天疱瘡を含む自己免疫疾患の治療にも使用することができる。この組成物は、さらに子宮内膜症および炎症性腸疾患のような炎症性疾患の治療にも使うことができる。この発明の組成物は、常法を用いて医薬組成物に変換することができる。医薬組成物は、この発明の組成物を単独で又は他の活性物質と一緒に含む。そのような医薬組成物は、経口、局所、経腸、非経口、局所、吸入、または大脳内の使用のためのものであってもよい。したがって、それらは固体又は半固体の形、例えば丸剤、錠剤、クリーム、ゼラチンカプセル、カプセル、坐剤、ソフトゼラチンカプセル、ゲル、メンブラン及びチューブレット（tubelets）である。非経口及び大脳内の使用のためには、筋肉内または皮下投与用の剤形が使用でき、あるいは吸入又は静脈内もしくは大脳内注射用の剤形が使用でき、したがって組成物の溶液として、又は前記の使用に適し、生理学的な液体と混和する浸透圧重量モル濃度の、１以上の薬学的に許容される賦形剤もしくは希釈剤と混合される活性組成物の粉末として、製造され得る。局所の使用には、局所投与用のクリーム又は軟膏の形、あるいはスプレーの形の製剤が考えられる；吸入使用のためには、スプレー、例えば鼻用スプレーの形の製剤が考えられる。好ましくは、この組成物は筋肉内投与される。医薬組成物は、患者に投与し得る薬学的に許容される組成物の製造法としてそれ自体公知の方法で製造することができ、有効量の活性物質が薬学的に許容される賦形剤と混合して組み合わされる。適当な賦形剤は、例えばレミントン(Remin gton)のファーマシューティカル・サイエンスズ(Nack Publishing Company，Easton，Pa .,USA 1985)に記載されている。これに基づいて、医薬組成物は、限定的ではないが、１以上の薬学的に許容される賦形剤もしくは希釈剤と組み合わさったこの発明の組成物を含み、生理的液体に適したｐＨと浸透圧の緩衝溶液中に含まれる。組成物は、単独で、又は他の治療剤あるいは治療の他の形と組み合わさって治療剤として示される。例えば、悪性腫瘍の場合、この治療は、以前には手術できなかったものを外科的除去に適した腫瘍にすることができる。あるいはまた、この治療は化学療法及び／又は放射線療法と有効的に組み合わせることもできる。この組成物および薬剤は、人及び動物への投与を意図したものである。一般に、組成物の投与量の範囲は、人の医薬としての投与を想定した場合、１日当たり約０．０１〜２０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ、もっとも好ましくは０．１〜１ｍｇ／ｋｇ体重が適用し得る。静脈内投与の場合、投与量は１日当たり約０．１〜５ｍｇ／ｋｇ体重であり、経口投与の場合には、投与量は１日当たり１〜５ｍｇ／ｋｇ体重である。濃縮組成物が用いられるときには、上記の投与量のおよそ半分が使用される。例えば、筋肉内投与のためには、１日当たり約０．２〜１．０ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは１日当たり０．２７５〜０．７５ｍｇ／ｋｇ体重が用いられる。特に治療される動物の体重や症状、治療される特定の疾患、投与経路の性質及び望まれる治療に応じて、上記の量から外れることが必要であるということは、医療実施者によって認識されるだろう。さらに、動物のタイプ及び医薬に対する個々の反応、あるいは製剤の性質及び投与する時期や間隔が、上記の量とは異なった量の使用を示すかもしれない。かくして、ある場合には上記の最低量より少ない量で処理して十分であり、他の場合には上記の上限を越えなければならないこともあるだろう。相当の量が投与される場合には、１日に何回かに分けて投与することが勧められる。かくして、この発明は、（ａ）動物由来の胆汁を水溶性の溶剤と混合して、胆汁／溶剤溶液を製造し；（ｂ）その胆汁／溶剤溶液から溶剤を実質的に含まない水溶液を単離し；そして（ｃ）実質的に溶剤を含まない溶液から胆汁色素を除去して、澄明な黄色がかった液体を得ることからなる免疫調節組成物を製造する方法からなり、ここで好ましくは、水溶性の溶剤はアルコールであり、動物由来の胆汁は等量のアルコールと混合される。上記の方法は、好ましくは、澄明な黄色がかった液体を最初の胆汁／溶剤溶液の容量の約１／８あるいは１／１０までさらに濃縮することからなる。明らかに上記の方法により製造した組成物は、この発明の好ましい態様を成す。この発明は、免疫調節剤として使用するための組成物をも含む。この組成物は、少なくとも１つの約３０００ダルトンより小さい分子量を有する成分を含み、その成分は人の抹消血単核細胞に対して細胞毒性を示さず、かつ次の性質：（ａ）生体外又は生体内で、単球及び大食細胞を刺激して１以上のサイトカインを産生することができる；又は（ｂ）単球又は大食細胞を刺激して生体外又は生体内で腫瘍壊死因子を産生することができる；又は（ｃ）悪性の細胞系における抗増殖作用を有する；の少なくとも一つを有し、内毒素、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＴＮＦ、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＧＭ−ＣＳＦ又はＩＦＮ−γではない。かかる組成物は、動物、好ましくはウシの胆汁から、あるいは前記のその他の源から得られる。この組成物の好ましい実施態様において、この組成物は、生体外又は生体内で、もっとも好ましくは人で、外因性のＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＴＮＦ、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＧＭ−ＣＳＦ及びＩＦＮ−γなしで、腫瘍壊死因子の産生を刺激する。この発明の組成物は、カラムクロマトグラフィーによって特徴づけられる成分を有する。すなわち、該組成物を乾燥して固体の残渣を得、該残渣の２ｇをメタノール中１０％濃縮水酸化アンモニウム溶液の２０ｍｌに溶解し、不溶物を除去したのち、５ｃｍｘ１２．５ｃｍの寸法を有し、６０Åのフラッシュシリカゲル１０２ｇを充填したメタノール中のカラムクロマトグラフィーに付し、平方インチあたり１０ポンドの圧力で、メタノール溶媒溶液中の濃縮水酸化アンモニウム溶液で、１１ｍｌ／分の流速で操作し、カラムの総溶出液が約１８０〜約２２０ｍｌ、約２２０ｍｌ〜約２６０ｍｌ、又は約２６０ｍｌ〜約３００ｍｌであるときに採取した画分において該成分がカラムから溶出される。成分の特徴づけは、該組成物の１０ｍｌを、この組成物の１０ｍｌ中に存在するすべての陰イオンを実質的に結合させるのに十分な量のＢｉｏ−ＲａｄＡＧ −１ヒドロキシド型樹脂を充填したカラムで陰イオン交換クロマトグラフィーに付し、炭酸水素アンモニウム緩衝液のステップグラジエントを用いて、緩衝液濃度約０．１Ｍ〜約１．５Ｍ、好ましくは緩衝液濃度約０．２Ｍ〜約０．４Ｍ、そしてもっとも好ましくは緩衝液濃度約０．２Ｍで該成分を溶出するような時に、イオン交換クロマトグラフィーによっても成される。逆相（Ｃ１８）ＨＰＬＣも成分の特徴づけに使用され得る。その他の適切なカラム、溶離液、グラジエント、流速、操作温度及び検出システムを使うこともできる。この発明の組成物は、該組成物をメタノール中１０％濃縮水酸化アンモニウム溶液のような適切な溶媒系でシリカゲル板の薄層クロマトグラフィーに付し、ニンヒドリンのような適切なスプレーで可視化し、ニンヒドリンとの陽性反応が例えば約０．８０〜約０．９０のＲ_f値で生じるような時に、ＴＬＣによっても特徴づけることができる。この発明は、次の化合物：（ａ）式の化合物〔式中、Ａ−Ｂ、Ｂ−Ｃ及びＣ−Ｄ間の結合は、単結合又は二重結合であり、Ｘ＝Ｈ、ＯＨ、＝Ｏ又はＯＳＯ₃Ｈであり；かつＹ＝（Ｒはアミノ酸残基である）（ｂ）式の化合物〔式中、Ｒ¹、Ｒ²及びＲ³はＨ、ＣＯＲ⁴、ＣＨ＝ＣＨ−Ｒ⁵、Ｘ、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｏ−又は−Ｓ（Ｏ）₂Ｏ−であり；Ｘはコリン、エタノールアミン、Ｎ−アルキル化エタノールアミン、セリン、イノシトール、遊離のヒドロキシルを有する糖、アミノ糖、スルホン化された糖又はシアル酸であり；かつＲ⁴は約Ｃ₁〜Ｃ₃₀の炭素鎖を有する飽和もしくは不飽和のアルキル基、又はそれらの酸化及び水酸化した類似体であり；かつＲ⁵はアルキル基又はそれらの酸化及び水酸化した類似体である〕（ｃ）ムチンの加水分解生成物又はプロテオグリカンの加水分解生成物；又は（ｄ）脂溶性ビタミンの少なくとも１つを含む組成物の有効量を投与することからなる、人における腫瘍壊死因子の産生を刺激する方法をも含む。好ましくは、この発明の方法の組成物は、次の化合物群から選択される化合物を少なくとも１つ含む：タウロコール酸及びそのサルフェート誘導体；グリココール酸及びそのサルフェート誘導体；スフィンゴシン、ジアシルグリセロール；レシチン；フォスフォコリン；フォスフォグリセロール；グリセロ−フォスフォコリン；フォスフォリルコリンクロライド；長さにおいて１０サッカライドユニットより少なく、シアル酸、フコース、ヘキソサミンもしくはサルフェート化ヘキソサミンを含むオリゴサッカライド；ビタミンＡ；レチノイン酸誘導体；レチノール誘導体；タウリン；ならびにグルタミン酸及びその包接体。この組成物は、さらにアンモニア；１級アルキルアミン；２級アルキルアミン；３級アルキルアミン；ならびにカルボン酸Ｒ⁶ＣＯ₂Ｈ（Ｒ⁶はＣ₁−Ｃ₃₀の飽和もしくは不飽和アルキル及びそれらの酸化及び／又はそれらの誘導体）からなる群から選ばれる化合物を少なくとも一つ含んでいてもよい。さらに好ましくは、そのような組成物は、フォスフォコリン、グリセロ−フォスフォコリン、グルコサミン−３−サルフェート及びフォスフォリルコリンクロライドからなる群を少なくとも１つ含む。もっとも好ましくは、この組成物は、フォスフォコリン、グリセロ−フォスフォコリン又はグルコサミン−３−サルフェートを少なくとも１つ含む。この発明の方法は、タウロコール酸及びそのサルフェート誘導体；グリココール酸及びそのサルフェート誘導体；スフィンゴシン；ジアシルグリセロール；レシチン；長さにおいて１０サッカライドユニットより少なく、シアル酸、フコース、ヘキソサミンもしくはサルフェート化ヘキソサミンを含むオリゴサッカライド；ビタミンＡ；レチノイン酸誘導体；レチノール誘導体；タウリン；ならびにグルタミン酸及びその包接体からなる群から選ばれる化合物を少なくとも一つ含む組成物を投与することによる、ＴＮＦ産生の刺激を包含する。この発明は、この発明の組成物の治療有効量を癌にかかっている患者に投与することからなる、膵臓、耳／鼻／喉、卵巣、肺又は子宮内膜の癌腫を含む癌、ならびに慢性骨髄性白血病及びカポジ肉腫を含む癌の治療法も提供する。この発明は、また、炎症性疾患を含み、子宮内膜症及び炎症性腸疾患、自己免疫疾患を含み、慢性関節リューマチ、狼瘡、多発硬化症及びＡＬＳを含む免疫系応答機能障害によって引き起こされるか又はその結果としてのその他の異常、細菌、真菌、マイコプラズマ、原虫を含む感染症及び他の日和見感染症の治療方法をも提供する。その方法は、この発明の組成物の治療有効量を上記の疾患の一つに苦しめられている患者に投与することからなる。さらに、この発明は、この発明の組成物がアジュバントとしてそのようなワクチンに加えられる、ＨＩＶ、種々の小児疾患及びその他の疾患に対する予防接種の方法も提供する。また、この発明を成す一部は、（１）スフィンゴシンもしくは塩とのスフィンゴシン錯体のミセル、又は（２）次の性質：（ａ）生体外で単球と大食細胞を刺激して１以上のサイトカインを産生することができる；（ｂ）単球又は大食細胞を刺激して生体外又は生体内で腫瘍壊死因子を産生することができる；又は（ｃ）悪性の細胞系における抗増殖作用を有するの少なくとも１つを有するレチノイン酸もしくはその誘導体のミセルからなる組成物である。このミセルは、ジアシルグリセライド又はレシチンを含んでいてもよく、さらに胆汁酸塩及びアンモニウムもしくはアルキルアンモニウムイオン源を含んでいてもよい。最後に、この発明は、（１）スフィンゴシン、胆汁酸塩及びアンモニウムもしくはアルキルアンモニウムイオンの源、（２）胆汁酸塩、スフィンゴシン、ジアシルグリセロール、アンモニウムもしくはアルキルアンモニウムイオンの源及びレチノール誘導体、（３）ジアシルグリセライド、レシチン及び胆汁酸塩、又は（４）（ａ）ジアシルグリセライド、（ｂ）レシチン、及び（ｃ）次の性質：（ａ）生体外で単球と大食細胞を刺激して１以上のサイトカインを産生することができる；（ｂ）単球または大食細胞を刺激して生体外又は生体内で腫瘍壊死因子を産生することができる；（ｃ）悪性の細胞系における抗増殖作用を有するの少なくとも１つを有するムチンの加水分解生成物又はプロテオグリカンの加水分解生成物を含む組成物も意図している。以下の実施例は、この発明を説明するものであるが、制限するものではない。実施例１この実施例は、本発明の組成物の製造を記載し、例証している。ウシ胆汁を、少なくとも１歳半の健康な牛（雄ならびに雌の両方）から除去した胆嚢から採取した。これらの牛は、食品用に認可され、検査された屠殺場で屠殺された。屠殺した動物を検査して屠殺前の健康を評価し、胆嚢を肝臓から分離して獣医師により調べ、胆嚢に寄生体と感染の形跡がなく、このために本発明の胆汁源としての使用に好適であったことを確認した。この検査をパスした胆嚢を以下の方法に付した：胆嚢を７０％エタノール溶液で拭き、嚢の外側を清浄にし、シリンジで嚢から胆汁を除去した。除去した胆汁をシリンジで獣医師により視覚的に検査し、胆汁が血液も膿も含まず、他の点では十分であることを確認した。健康なウシ由来の胆汁は、実質的に血液と膿のない緑がかった流体である。肝臓、脾臓及びリンパ節の断片を、その胆汁を採取した動物から採取し、寄生体と疾病の他の兆候の存在についてその断片を調べた。定義した胆嚢を有しない種（例えば、鮫）については、胆汁を肝臓器官から直接得る。申し分のないことが分かった胆汁を、エタノールを含有する目盛り付の琥珀色 (amber)のボトルに移し、５０容量％胆汁／５０容量％エタノール溶液を得る。胆汁／エタノール溶液は、実質的に異質物質のない緑がかった流体であり、合衆国薬局方ＸＸＩＩ、Ｂ部（１９９４）に記載される方法にしたがってエタノールの陽性を試験した。これらのボトルをロット番号でラベルした。５０頭の最小限の動物から採取した胆汁を各ロットに回収した。次いで、胆汁／エタノール溶液を２０±２℃で少なくとも２時間半４２００ｒｐｍで遠心分離した。上清液を移し、例えば２．５μｍの保持を有するフィルターでろ過し、ｐＨとエタノール含量を調べた。次いで、移した液を活性炭処理に付した。次に、２８０ｎｍでの吸光度（ＯＤ）と導電率について処理液を調べた。特定の範囲外のＯＤレベル及び／又は導電率レベルは、特定の範囲内のＯＤと導電率に達するように活性炭での液のさらなる処理を必要とした。活性炭の処理後、エタノールを蒸発（例えば、約８５℃への加熱により）させ、例えば２．５μｍの保持を有するフィルターでろ過した処理液を、最初の胆汁／エタノール溶液量の約１／８に濃縮した。次いで、濃縮液を２０〜２５℃に冷却し、例えば２．５μｍの保持を有するフィルターでろ過し、エチルエーテルと混合し、エーテル相を捨てた。この工程は一度繰り返すことができる。水相を加熱して（例えば、約１０時間約５５℃に加熱して）残留エーテルを除去し、さらに約８０〜８５℃に加熱して最初の胆汁／エタノール容量の１／１０量に減少させた。次いで、外観、生物活性及びエタノールならびにエーテル含量について得られた組成物を試験した。組成物は、透明な黄色がかった溶液で、本質的に異質物質がなく、１０ｐｐｍ未満のエタノールと５ｐｐｍ未満のエーテルを含んだ。同一性と純度は、逆相高圧液クロマトグラフィー（逆相ＨＰＬＣ）を用いて測定した。力価は、実施例２で記載するように、末梢血液単核細胞−腫瘍壊死因子アッセイ（ＰＢＭＮ−ＴＮＦアッセイ、又は単にＴＮＦアッセイ）としてここで言及する単球／大食細胞活性試験を用いてアッセイした。本発明の組成物の最初のバッチは、非緩衝液として製造した。その後のバッチを緩衝液として製造し、塩酸（１％）溶液及び水酸化ナトリウム（１％溶液）ならびに緩衝として二塩基及び一塩基リン酸ナトリウム塩を用いて組成物のｐＨを約７．４±０．２に調整して製造した。バイオバーデン(bioburden)還元を、６０分間１０４±２℃で蒸気オートクレーブで行った。バルク溶液を５ｍｌ又は１０ｍｌの殺菌ボトルに充填し、密閉した。充填し、密閉したボトルを６０分間１０４±２℃でオートクレーブし、次いで２３±１時間３５℃でインキュベートする殺菌サイクルに３回付した。各殺菌サイクル（オートクレーブとインキュベーション）のあいだに、サンプルを採取し、バイオバーデンの試験をした。最後の殺菌サイクルの後、微粒子の存在を検出するために黒及び白色のバックグランドでサンプルを視覚的に検査した。検査後、特定化にしたがってロットを標本にし、試験した。試験は、同一性、無菌性、発熱性、内毒素、バイオアッセイ、ＨＰＬＣ及び一般的な安全性を含む。表１は、適当な場合にはデータの通常の範囲を含む、本発明の胆汁抽出物について行った様々な試験について得られたデータを要約している。したがって、本発明の組成物は、標準的な研究室の方法を用いて容易に入手可能な胆汁源から調製でき、標準化した最終生成物を得ることができる。実施例２この実施例は、実施例１の組成物の生物活性を記載する。研究は、末梢血液単核細胞（ＰＢＭＮ）及び／又は前単球細胞の好適な系であるＵ９３７細胞（アメリカンタイプカルチャーコレクション(ATCC，Rockville， Maryland)からのサイトカイン放出について実施例１の組成物の作用を評価するために行った。ＴＮＦ−α、ＩＬ−１ａ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ −６、ＩＬ−８、ＧＭ−ＣＳＦ及びＩＦＮのＥＬＩＳＡアッセイを行った。これらの研究は、実施例１により調製した胆汁抽出物を得られたバッチの力価を評価する標準的な定量試験について試験を標準化するための基本を提供し、その試験により、ＰＢＭＮ又はＵ９３７細胞でＴＮＦ−αの生産を刺激する胆汁抽出物又はそれらの一成分もしくは成分類の能力を評価する。全血液を、５人の健康な人の被験体からヘパリン化バキュテーナーチューブ(B eckton Dickinson，カナダ）に出した。ＰＢＭＮｓをフィコールハイパック(Fic oll-Hypaque)(Pharmacia)の勾配遠心分離で単離した。ＰＢＭＮｓをリン酸緩衝塩水（ＰＢＳ）で２回洗浄し、計測し、１０⁶細胞／０．５ｍｌ濃度でＲＰＭ１６４０培養培地(Gibco Labs)に懸濁した。これらの細胞を２４ウェルの平底組織培養プレートで培養した(Falcon，Becton，Dickinson)。ＰＢＭＮ懸濁液の０．５ｍｌの分割量を、以下の表に示すように５０ｎｇのリポポリ多糖（ＬＰＳ）（大腸菌由来）、１０μｌの胎ウシ血清及び１０〜３００μｌの実施例１の組成物を含む各ウェルに加えた。組成物の高浸透圧性作用を、培養ウェルに用いた組成物の１０容量％に等価の量で蒸留水を加えて中和した。次いで、全容量をＲＰＭＩで１ｍｌ／ウェルまでにした。ＰＢＳを対照として用いた。細胞を加湿した５％ＣＯ₂インキュベーターで３７℃で２、６、２４、４８ならびに７２時間培養した。各インキュベーション期間の終わりに、細胞を収集し、無細胞流体を１０分間９０００ｒｐｍで遠心分離して得た。次いで、サンプルをＥＬＩＳＡのような免疫アッセイまで−７０℃で２週間まで保管し、存在するサイトカインを定量した。上清におけるサイトカインの合成は、ヒトＰＢＭＮをウェル当たり１００及び２００μｌ容量の実施例１の組成物で刺激後に測定した。組成物の最初の調製物は、サイトカイン産生に直接的な刺激作用を示さなかった（すなわち、ＬＰＳは示さなかった）。たとえ作用があるとしても、サイトカインの産生は、ＰＢＭＮｓを培地のみでインキュベートした時の以下の構成(constitutive)レベルであった。上清におけるサイトカインの合成は、ウェル当たり１００μｌ容量の実施例１の組成物を用いて、実施例１とＬＰＳ（ＬＰＳ又は正の対照としてのＬＰＳのみ）でＰＢＭＮｓを刺激後に３７℃で２４時間測定した。最小限レベルのサイトカイン５ｐｇ／ｍｌを検出するＴＮＦ−αＥＬＩＳＡ(Endogen,Inc.)でＴＮＦを測定した。用いた他のＥＬＩＳＡ免疫アッセイキットは、ＩＬ−１α(End ogen,Inc.)、ＧＭ−ＣＳＦ(Endogen,Inc.)、ＲＦＮ−α(Endogen,Inc.)、ＩＬ− ２（Advanced Magnetics，Inc.）、ＩＬ−６(Advanced Magnetics，Inc.)、ＩＬ −１(Advanced Magnetics，Inc.)、ＩＬ−４(R&D Systems)及びＩＬ−８（R&D S ystems）を含む。結果は、少量のＩＬ−１βならびにＧＭ−ＣＳＦに加えて、ＴＮＦが上清に存在する主要なサイトカインであることを示した。例えば、実施例１（バッチＢ０２２２）の組成物の４０μｌ用量は、１７８ｐｇ／ｍｌのＴＮＦ −α、１３６ｐｇ／ｍｌのＧＭ−ＣＳＦ及び１４２ｐｇ／ｍｌのＩＬ−１βの産生と放出を刺激した。ＬＰＳの誘因するＴＮＦ放出について、実施例１の組成物の異なるバッチの作用を調べた。要するに、同様の様式で、同じ動物から生じた組成物のバッチは、同一の作用を誘導することが見出された。しかしながら、組成物の調製方法又は異なる動物種から調製した組成物の使用における変化は、異なる作用を有する。例えば、バッチＢ２９／３００６、Ｂ０２１３、Ｂ０２４１、ＢＣ０２４１−０１、ＢＣＯ０２４２（Ｂ＝ウシ）及びＣＯ２０３（ヤギ）は、表３に示すようにＬＰＳのみの誘因する上記ＴＮＦの強力な放出を誘導した。しかし、バッチ０１３／２１０９（ヒツジ）は、試験した全用量でＴＮＦの放出を最小限に刺激した。逆に、バッチＲ０２０１（サメ）は、試験したほとんどの用量でＴＮＦの放出を阻害した。表３に示すＴＮＦ値は、ＬＰＳとＬＰＳのみで生じる刺激と組み合わさるか、それがない(less)実施例１の組成物で生じる刺激のＴＮＦ−α放出における違いとして算出した。実施例１の組成物が、ＬＰＳの誘因するヒトＰＢＭＮｓからのＴＮＦ放出に作用するので、一連の実験は、ＬＰＳの誘因するヒトＰＢＭＮｓからのＴＮＦ放出における組成物の作用を時間中調べるために行った。表４は、２時間で、ＬＰＳの誘因するヒトＰＢＭＮｓからのＴＮＦ放出のレベルが６９７ｐｇ／ｍｌに上昇し、６時間で約２００６ｐｇ／ｍｌのピークに達したことを示している。２４、４８ならびに７２時間で、ＴＮＦの放出は累進的に減少した。実際に、４８ならびに７２時間で、ＬＰＳの誘因するヒトＰＢＭＮｓからのＴＮＦ放出は、ちょうど上記の構成産生レベルであった。逆に、バッチＢ０２１３の組成物と組合わさったＬＰＳ（ＴＮＦの強力な刺激剤である）は、ＬＰＳの刺激作用が減少し始めた２４時間目にＴＮＦの放出のピークを誘導した。ＬＰＳのみと異なり、バッチＢ０２１３の組成物と組合わさったＬＰＳは、上記の構成産生レベルで４８ならびに７２時間目にＴＮＦ放出の刺激を持続した。これらのデータは、実施例１のバッチＢ０２１３の組成物が、ＴＮＦの産生の刺激において時間中有効であることを示している。サメから誘導され、ＴＮＦの放出阻害剤であるバッチＲ０２０１の組成物は、２、６及び２４時間目にＴＮＦ放出を顕著に阻害した。バッチＲ０２０１は、４８、７２時間で最小限の正又は負の作用を有した。要するに、上記の結果は、組成物（例えば、サメ由来）の幾つかのバッチは、ＬＰＳの誘因するＰＢＭＮｓからのＴＮＦ放出を阻害するが、ウシ、ヤギ及びヒツジから誘導されるような他のバッチは、ＬＰＳの誘因するＴＮＦ放出を刺激することを示している。結論として、本発明の組成物は、正ならびに負の様式の両方でＴＮＦの産生を調節できる。データの要約を、図５及び表５に示す。上述のＰＢＭＮｓ−ＴＮＦアッセイは、実施例１の組成物１００μｌとＬＰＳ５０ｎｇを用いて標準化した。異なるヒトの被験体由来のＰＢＭＮｓは、上述のとおりに得て、同日に用いた。３つのアッセイ（個々に被験細胞を用いた）のそれぞれの結果は、異なる被験体間の反応における変化を補正するために平均をとった。解析は、ＲＰＭＩ培地のみならびにＬＰＳ５０ｎｇの存在下で放出されるＴＮＦ−α量の決定を含む。また、５０ｎｇのＬＰＳと組合わさった実施例１の組成物の１００μｌの存在下で放出されるＴＮＦ−αも決定した。培地で放出されるＴＮＦ−αは、ＬＰＳ値から減じてＬＰＳのみの存在下で放出されるＴＮＦ−αを得た。培地とＬＰＳ値は、組合わせた組成物とＬＰＳから減じ、組成物のみの存在下で放出されるＴＮＦ−αを得た（ｐｇ／ｍｌで示す）。したがって、ＴＮＦの放出アッセイは、胆汁抽出物の力価を定量するのに役立った。また、この組成物は、本来組織リンパ腫の患者から誘導され、単球の多くの特徴を示すＵ９３７細胞からＴＮＦ−αの放出を刺激することが見出された。Ｕ９３７細胞は、ＡＴＣＣから得ることができる。それらは、１０％熱不活化胎ウシ血清(FCS,GIBCO)、２ｍＭＬ−グルタミン(ICN Biomedical Inc，Costa Mesa， CA)及び１０μｇ／ｍｌ硫酸ゲンタマイシン(SIGMA，Mississauga,オンタリオ、カナダ）を捕捉したＲＰＭＩ−１６４０培地(GIBCO，Grand Island，NY)で３７ ℃で、ＣＯ₂５％で日常的に保存した。Ｕ９３７細胞の継代は３〜４日ごとに行い、接種は初期濃度５ｘ１０⁵細胞／ｍｌであった。Ｕ９３７細胞は、ホルボール１２−ミリステート１３−アセテート(PMA，Sigma Chemical Co.St.Louis,MO) に暴露されることにより、単球に分化を刺激することができる。得られた単球は、実施例１の組成物のみ、又はＬＰＳとの組合わせのような刺激でＴＮＦを放出する能力を有する。ＰＭＡは、１０ｍＭ濃度でジメチルスルホキシド(DMSO，SIGMA)に溶解し、１０μＭ濃度のストック溶液濃度にＰＢＳで１０００倍に希釈し、−２０℃で保存した。Ｕ９３７細胞の懸濁液は、室温で１０分間３５０ｘｇで遠心分離し、新鮮で完全なＲＰＭＩ−１６４０培地に２ｘ１０⁶細胞／ｍｌ濃度で再構成した。細胞の生存は、トリパンブルー色素の排泄で決定し、日常的に９５％以上があった。ＰＭＡをさらに完全な培養培地で５００倍に希釈し、２０ｎＭ濃度にした。Ｕ９３７細胞（１０⁶細胞／ｍｌ）の０．５ｍｌの分割量を、２４ウェルの平底組織培養プレート(Becton Dickinson，Lincoln Park,NJ)で０．５ｍｌのＰＭＡ（２０ｎＭ）の存在下又はそれなしで培養し、３７℃でＣＯ₂５％で７２時間インキュベートした。１ウェル当たりの最終濃度は、５ｘ１０⁵細胞とＰＭＡ１０ｎＭであった。インキュベーションから７２時間後に、培地１２０μｌを除去し、ＬＰＳ（５ｎｇ／μｌ）１０μｌの存在下又はそれなしで、実施例１の組成物１００μｌと殺菌した脱イオン蒸留水１０μｌで置換した。インキュベーションから２４時間後に、あらゆる細胞と微粒子物質を１０分間３５０ｘｇで遠心分離によりペレットにし、得られた上清をＴＮＦ−αについてアッセイするまで−２０℃で保存した。全てのビルリジン（virulizin）サンプルを２つの別の場合について試験した。Ｕ９３７細胞の培養上清中のＴＮＦ−αを定量するために、Endogen,Inc.(Ced arlane Laboratories，Hornby, オンタリオ）から購入したＴＮＦ−α ＥＬＩＳＡキットを用いて２部位(two-site)サンドイッチＥＬＩＳＡを行った。製品により推薦される方法を用いた。簡単に言えば、１００μｌのＴＮＦ−α標準と試験サンプルを抗ヒトＴＮＦ−αの前コートした９６ウェルのプレートに加え、３７℃でＣＯ₂５％で３時間インキュベートした。洗浄緩衝液で十分に洗浄後、アルカリホスファターゼに結合した抗ヒトＴＮＦ−α１００μｌをプレートに加え、３７℃でＣＯ₂５％で２時間インキュベートした。インキュベート後、プレートを上述のとおり洗浄し、前混合したＴＭＢの基質１００μｌを各ウェルに加え、酵素の色反応を３０分間暗所で室温で展開させた。次いで、停止溶液１００μｌを各ウェルに加えて反応を止め、ＳＬＴＬａｂ装置ＥＬＩＳＡリーダーを用いて４５０ｎｍでプレートを読取る。アッセイの検出限界は、５ｐｇ／ｍｌであった。Ｕ９３７細胞のＴＮＦ値を、ＰＢＭＮ細胞について記載したように決定した。５０ｎｇのＬＰＳを用いて試験した組成物の結果を表３に示す。実施例３この実施例は、実施例１の組成物の物理、化学ならびに生化学的特徴を記載する。実施例１により製造した組成物の３つの製造バッチについて、導電率、浸透圧重量モル濃度のような物理学的特性及び全固体を決定した。表１にした結果は、製造した生成物の無菌性、力価ならびに再現性を決定し、それにより生成物を特定している。エタノール及びエチルエーテル試験は、方法中(in-process)の試験のみである。力価、すなわちＴＮＦ放出は、実施例２に記載するように決定した。特徴を決定するために用いた方法を、以下に作表する。導電率、浸透圧重量モル濃度のような上述の物理及び化学的特性と全固体は、９９％以上が塩の組成物で構成した。組成物中の固体の１％未満は有機物質で、固体の約半分は炭水化物であり、残りはアミノ酸、脂質及びリン脂質であった。タンパク質とペプチドも存在した。ＳＤＳゲル電気泳動により、組成物中でタンパク質よりペプチドの多いことを確認した。高分子量分子は、検出されなかった。本発明の組成物についてのＨＰＬＣとバイオアッセイ試験は、緩衝液及び濃縮配合物（fourmula）として生成物を特徴づけるのに用いた。以下に記載するＨＰＬＣの結果により、生成物はそこに示す全てに同一であったことが示されている。連結カラムの逆相ＨＰＬＣ方法は、実施例１の組成物を特徴づけるのに用いた。この方法のために、サンプルを凍結乾燥させ、次いで緩衝液Ａ（０．１％トルフルオロ酢酸（ＴＦＡ））で再構成し、プリムスフェア(prime-sphere)のＨＣ− Ｃ１８カラム（２５０ｘ４．６ｍｍ：Phenomenex）を連結したＷＰ６０００９− Ｃ１８カラム（Ｗ−ＰＯＲＥ、Ｃ１８、２５０ｘ４．６ｍｍ：カルフォルニアの Phenomenex）で流した。カラムを緩衝液Ａと緩衝液Ｂ（１００％アセトニトリル中０．１％ＴＦＡ）を用いて環境温度で、流速０．９ｍｌ／分で操作した。１５０μｌのサンプルを最初のカラムに用い、緩衝液Ａを２０分間システムを通して動かした。次に、緩衝液Ｂの０−８０％の最初の直線グラジエントを３５分間行い、次いで緩衝液Ｂの８０−０％の第二の直線グラジエントを５分間行った。溶出した組成物は、１９０〜２８４ｎｍの光学吸光度で検出し、ほとんどの作動は２１０及び２３５で検出した。実施例１の組成物は、ピークが認められた逆相ＨＰＬＣにおいて一貫して再現性あるパターンを示した。本発明の組成物の３つのロットに関する逆相ＨＰＬＣを図１〜３に示す。実施例１として製造し、Ａ−Ｆをラベルした胆汁抽出物の６つのバッチは、生理学的様式で操作するＬＫＢ４１５１Ａｌｐｈａｐｌｕｓアミノ酸解析でそれらのアミノ酸を解析し、カラム後にニンヒドリンで検出した。ｎｍｏｌ／１００μｌでのその結果を表８に示す。また、ウシＤＮＡの存在について、サンプルＡ−Ｆを評価した。サンプルを、ウシゲノムから得た³²Ｐ標識ウシＤＮＡプローブを利用して調べた。アッセイは、サンプル、反応性（spiked）サンプル、負ならびに正の対照、及び標準を含む。研究は、ＧＬＰ調節剤にしたがって行った。このアッセイは、３．９ｐｇの参照の標準ＤＮＡを検出した。各サンプルは、９ｐ／ｍｌ未満のＤＮＡを含むことを算出した。また、様々な電解質の存在について、サンプルＡ−Ｆを試験した。この解析は、トロント大学の臨床生化学部、バイオテクノロジーサービスセンターにより提供された。ｎｍｏｌ／μｌでのその結果を表９に示す。サンプルＡ−Ｆを、標準条件下で誘発的結合マススペクトルメトリー（ＩＣＰ −ＭＳ）による半定量的の多元素解析に付した。１００万当たりの部（ｐｐｍ）における結果を表１０に示す。アニオンとカチオン分析をサンプルＡ−Ｆで行った。この分析のために、サンプルを‘APHA Standard Methods For The Examination Of Water and Wastewate r’１６版(1985)又は‘MOE Handbook Of Analytical Methods For Environmenta l samples’(1983)に推薦されるように製造した。アニオン／カチオン分析装置は、（１）金属用のＪａｒｒｅｌｌＡｓｈ６１ＥＩＣＡＰ放射(emissio n)(Perkin Elmer 3030 Zeeman Graphite Furnace及びPerkin Elmer 2380 Cold V apour AA)、（２）アニオン用のＤｉｏｎｅｘ２０００ｉイオンクロマトグラフ、及び従来のＳｋａｌａｒＳＡ５セグメントフロー解析であった。ｍｇ／ｌでのその結果を表１１に示す。幾つかの硫酸エステルが、細胞増殖及び分化のような多くの細胞反応の調節に関与するので、酸加水分解前後の硫酸鉄イオンについてサンプルＤを分析した。全サンプルＤ（すなわち未画分）を用いて、非加水分解サンプルは１００μＭの硫酸塩を生じたが、加水分解サンプルは、１２００μＭの硫酸塩を生じた。硫酸塩イオンの濃度が酸加水分解後に増加したので、これらの結果は、存在する全硫酸塩イオンの２０％は硫酸エステルであることを示唆している。物理化学的な標準は、実施例１の組成物について同定し、実施例４で記載した初期研究と本質的に一致した。これらの標準は、一貫性のある生成物が繰り返し得られることを示している。実施例４この実施例は、実施例１の組成物のかなり初期のバッチの物理的、化学的及び生物学的特性を述べる。胆汁抽出物のバッチは実施例１で述べた方法に従って調製した。さらに、そのバッチの化学的組成を測定し、実施例３で述べた方法を用いて、バッチのアミノ酸分析を行った。その結果を以下の表に示す。実施例５この実施例は、実施例１の組成物の画分の生物学的活性について述べる。実施例１の組成物の画分の生物学的活性を詳細に調べた。分析結果は、小分子量の成分（つまり、３０００ダルトン未満）に属する組成物の生物学的活性に一致した。これは、組成物を実施例３に述べた逆相ＨＰＬＣに通し、画分を溶出して単離し、実施例２で述べたＰＢＭＮ−ＴＮＦアッセイにより力価を分析した。顕著な活性が、３０００ダルトン未満の分子量と一致する初期の溶出ピーク（Ｆ１）、つまり５．６〜６．２分においてのみ検出された（表１５参照）。追加実験を、活性（ＴＮＦ−放出）成分が３５００ダルトン未満及び１０００ダルトン未満の分子量を有することを示すために以下のように行った。バッチＢＣ０２４１をタマリら(Tamari et al.)のAgr．Biol．Chem.，40(10)，2057-2062 (1977)に従ってホルチ(Folch)抽出を行うことによって分画した。水相をロトバップ（回転式エバポレータ）で乾燥し、淡褐色、粒状固体を得た。この固体のストック溶液を５ｍｇ／ｍｌの濃度に調製した。ストック溶液の一部を、３５００又は１０００ダルトン分子量カットオフ膜を有するセントリ／ポア（Centri/por ）遠心濃縮器（スペクトラムプロダクト、ヒューストン、テキサス）にかけた。濃縮器は約１５００×ｇで、材料の一部が膜を通過するまで遠心した。膜を通過した溶液はＰＢＭＮ−ＴＮＦアッセイにおいて力価を評価した。その結果を表１６に示す。従って、分子量画分の生物学的活性の分析は、ＴＮＦ−放出成分が１０００ダルトン未満の分子量であることを示す。実施例６この実施例は、実施例１の組成物の培養におけるＴ及びＢリンパ球における効果を示す。ヒトリンパ球の生育を、実施例１の組成物の存在、非存在下の注意深く制御した条件下で試験した。標準濃度のリンパ球を、種々の濃度の組成物を含むウェル中でインキュベートした。正常Ｔ及びＢヒトリンパ球を、臨床上での使用と同様の濃度で組成物とインキュベートしたとき、トリパンブルー色素の排泄によって評価される副作用はなかった。従って、本発明の組成物は、培養における正常Ｔ及びＢリンパ球に対して非毒性であった。生存ヒトＰＢＭＮにおける組成物の作用も試験した。ＰＢＭＮは２４及び４８時間、種々の組成物容量及び組織培養培地で、プラスティックのマイクロウェルプレート中でインキュベートした。この時間の終了時、生存細胞の数は、トリパンブルー色素の排泄によって算定した。上記のデータは、生存細胞の数が２４時間及びさらに４８時間で減少したが、組成物の存在、非存在下の生存細胞の数は差異がなかったことを示す。さらに、組成物の容量の増加は生存には影響を与えなかった。よって、組成物はヒトＰＢＭＮに対して細胞毒性を示さなかった。リンパ球を刺激する組成物の能力を、以下の３つの指標系で評価した。１）リンパ球ＤＮＡ合成の刺激、２）リンパ球−媒介細胞毒性機能の誘発、３）単球／大食細胞−媒介細胞毒性機能の誘発。これら試験はスクリーンのため選択した。なぜなら、それらは悪性疾患の患者において異なる臨床的なパラメータが伴なわれていることを示している免疫学的作用を測定するからである。これら免疫作用の指標は、またＩＦＮ又はＩＬ−２のような異なる生物学的応答制御剤で治療した癌患者において調節されるかもしれない。初期スクリーニング法の結果を以下に示す。１．リンパ球ＤＮＡ合成の刺激：植物性赤血球偽凝結素（ＰＨＡ）の最適刺激濃度と比較プロトタイプの分裂促進因子、ＰＨＡとは異なって、実施例１の組成物は、リンパ球が幼若化及び細胞分割を行うことを刺激しないことを示し、組成物によってＤＮＡ合成の刺激が起こらないか、殆ど起こらないことを示す結果と一致する。２．リンパ球−媒介細胞毒性機能の誘発及びＩＬ−２の最適最適刺激濃度との比較リンパ球の細胞毒性作用のプロトタイプの刺激剤、ＩＬ−２とは異なって、組成物は、リンパ球の細胞毒性を引き出さない。組成物によって刺激された溶解単位の数は、負の対照（つまり、培地）のそれとほぼ同等であった。３．組成物による単球／大食細胞−媒介細胞毒性機能の誘発：ＩＦＮ−γ及びＬＰＳ（ＩＦＮ＋ＬＰＳ）との比較実施例１の組成物は、容量依存的に抗腫瘍機能を表すための末梢血単球を刺激することができた。この刺激の大きさはＩＦＮ−γ及びＬＰＳのプロトタイプの大食細胞活性化剤の組み合わせによって引き出されたものに匹敵する。生体外アッセイでのこれらの組成物の作用は、他のいずれもの大食細胞活性化剤の場合におけるように、内毒素の添加を必要としないことを認識するために重要である。実施例７この実施例は、実施例１の組成物に、サイトカインが存在するかどうかを調査するために行ったアッセイの結果を示す。実施例１に従って調製した胆汁抽出物のサンプル（５０μｌ及び１００μｌ試験ごとの分割量）を、以下のサイトカインの存在のために試験した（使用したＥＬＩＳＡイムノアッセイキットの源及び検出限界はカッコ書きで示す）。ＴＮＦ −α(Endogen，Inc．（５ｐｇ／ｍｌ）)、ＩＬ−１α(Endogen，Inc．（５０ｐｇ／ｍｌ）)、ＩＬ−１β（４．３ｐｇ／ｍｌ）、ＧＭ−ＣＳＦ(Endogen，Inc.) 、ＲＦＮ−α(Endogen， Inc.)、ＩＬ−２(Advanced Magnetics，Inc.)、ＩＬ −６（Advanced Magnetics，Inc.）（７ｐｇ／ｍｌ））、ＩＦＮ−γ（５ｐｇ／ｍｌ）〔源〕、ＩＬ−１(Advanced Magnetics，Inc.)〔必要限界〕、ＩＬ−４（ R&D Syetems（３ｐｇ／ｍｌ））、及びＩＬ−８（R&D Syetems（４．７ｎｇ／ｍｌ））。使用した方法は、個々のキットの指示に従い、通常の技術者によって容易になし得る。本発明の組成物は、表１８に示したように、試験したいずれのサイトカイン、つまり、ＴＮＦ−α，ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＧＭ−ＣＳＦ及びＩＦＮ−γも測定できるレベルを含んでいなかった。実施例８この実施例は、実施例１の組成物でのマウスにおける薬力学的試験を、直接の生体外におけるビルリジン^TMの作用並びにマウス腹膜大食細胞におけるビルリジン生体内投与の作用を含めて記載する。腹膜大食細胞は、Ｃ５７ＢＬ／６マウスから、４％プロテアーゼペプトン１．５ｍｌの腹膜内注射の７２時間後に採取した。大食細胞は、次いで、培地単独、５０ｎｇＬＰＳ又はビルリジンで、生体外で刺激した。刺激の測定は、ＴＮＦ（ＥＬＩＳＡによる）及びＮＯ（グレイス試薬を用いたスペクトロフォトメータアッセイによる）レベルについて、二重実験で行った。二重実験の間の平均の標準エラーは１０％未満であった。表１９に示したように、ビルリジンは、バックグラウンド（培地）レベル(120 pg/ml)に比較してＴＮＦ−α産生（６０−２３２ｐｇ／ｍｌ）のわずかな増加を示したが、ＬＰＳ（２２２５ｐｇ／ｍｌ）との比較におけるビルリジンは、大食細胞のＴＮＦ−α放出を強力に刺激しなかった。一酸化窒素産生はゼロであった。ＴＮＦ−α放出に対する生体外におけるビルリジンとＬＰＳとの相乗作用をも示す。腹膜大食細胞は、Ｃ５７ＢＬ／６マウスから、上記と同様の処理の後、採取した。大食細胞は、次いで、５０ｎｇＬＰＳ単独又はビルリジンの異なった希釈度を有するＬＰＳで刺激した。上記したように、ＴＮＦはＥＬＩＳＡにより測定した。表２０に示したように、ＬＰＳ単独では、培地２６２ｐｇ／ｍｌに比較して、生体外において、マウス腹膜大食細胞からの約２９００ｐｇ／ｍｌのＴＮＦ−α放出を示す。ＬＰＳをビルリジンと組み合わせたとき、ビルリジン１：５及び１：１０の希釈度で、ＴＮＦ−α放出を約８００ｐｇ／ｍｌ増加し、少なくとも１：４０まで放出を高めた。一酸化窒素（ＮＯ）に対する生体外におけるＬＰＳのビルリジンの相乗作用は、処理した大食細胞の上清液においてＮＯを測定した以外、上記と同様の方法において示される。上記したように、ＮＯのアッセイはスペクロトフォトメータにより、グレイス試薬を用いて行った。上記の表に示したように、ＬＰＳはＮＯ（９μＭ）のいくらかの放出を引き起こす。ビルリジンのＬＰＳでの相乗作用は、１：４０の希釈度に対してＮＯ産生（１３−２７μＭ）において目立った増加を刺激する。それ自体によってビリルジンは、大食細胞によるＮＯの放出を刺激しなかった。ＴＮＦ−α放出に対する生体外におけるＩＦＮ−αのビルリジンの相乗作用を、上記のように処理したＣ５７ＢＬ／６マウス由来の同様の腹膜のマウス大食細胞を用いて試験した。データは、上記の“相乗作用の組み合わせ”について表中に示す。示したように、腹膜のマウス大食細胞は、生体外培養の２４時間後にＴＮＦ−αのベースライン放出を示す。ＬＰＳ又はＩＦＮ−αのいずれかで刺激された同様の大食細胞はＴＮＦ−αを約３０００ｐｇ／ｍｌ放出する。ビルリジン及びＩＦＮ−αを共に添加したとき、ＴＮＦ−αの放出が減少した。一方、ＬＰＳとＩＦＮ−αの組み合わせは、ＴＮＦ−α放出で付加的な作用を有する。ＮＯ放出に対する生体外におけるＩＦＮ−γのビルリジンの相乗作用を、上記のように処理したＣ５７ＢＬ／６マウス由来の同様の腹膜のマウス大食細胞を用いて試験した。データは、上記の“相乗作用の組み合わせ”について表中に示す。示したように、ＬＰＳ及びＩＦＮ−γ単独はそれぞれＮＯ産生を高めた（それぞれ９及び７μＭ）。ＩＦＮ−γへのビルリジンの添加は、ＮＯ産生において、ＬＰＳとＩＦＮ−γとの組み合わせに（７４μＭ）ほとんど匹敵する目立った増加（４７〜５７μｌＭ）を刺激した。その結果は、ＩＦＮ−γとの組み合わせでビルリジンがＮＯ産生を高めるが、ＴＮＦ−α放出を阻害するという結果に一致する。生体内における７２時間にわたるＴＮＦ−αの産生を、収集する前に何ら処理しない、７２時間前に１．５及び４％プロテアーゼペプトンを腹膜内に注射した、あるいはＰＢＳで１：１０に希釈したビルリジン１．０ｍｌで７２、４８、２４時間前に腹膜内に注射したＣ５７ＢＬ／６マウスから収集した大食細胞で試験した。大食細胞の単層はＩＦＭ−γ（５０μｌ／ｍｌ）、ＬＰＳ（５ｎｇ／ｍｌ）単独又はそれらの組み合わせで、２４時間生体外で処理した。ＴＮＦ及びＮＯは上記したように測定した。そのデータを表２０に示す。示したように、大食細胞からのＴＮＦ−αの放出を、生体外培養２４時間後に、刺激剤の非存在下、あるいはＩＦＮ−γ、ＬＰＳ又はＬＰＳ／ＩＦＮ−γで試験した。マウス腹膜大食細胞は、生体内でのビルリジンでの刺激後、ほとんどＴＮＦ−α放出を示さなかった。収集した大食細胞を、試験の２４及び４８時間前にＩＦＮ−γに暴露したとき、それらはわずかにＴＮＦ−α産生の増加を示した。一方、試験の２４及び４８時間前（７２時間前ではない）にＬＰＳで刺激した収集大食細胞は、高められたＴＮＦ−αの放出を示した。さらに、試験の２４及び４８時間前（７２時間前ではない）に刺激された収集大食細胞に対して、ＬＰＳとＩＦＮ−γとの相乗効果があった。生体内における７２時間にわたるＮＯの産生を、大食細胞で、ＴＮＦ−α産生に対して上記で述べたのと同様の条件下で試験した。ビルリジンの腹膜内注射（以下、ＩＰビルリジンと記す）の２４及び４８時間後に、わずかなＮＯの自発的な放出が測定された。採取細胞をＩＦＮ−γでインキュベートしたとき、ＮＯの目立った放出があり、試験の２４及び４８時間前にＩＰビルリジンが行われた収集大食細胞は、ＮＯの放出において指数関数的な増加を示し、７２時間でＩＦＮ −γ単独のベースライン値にまで降下した。採取細胞はＬＰＳを刺激し、それらはＮＯの顕著に高められた放出を示し、ＩＰビルリジンを受けていない大食細胞と比較して、ビルリジン処理大食細胞で２４時間及び４８時間観察された。７２時間前にＩＰビルリジンを受けた採取大食細胞は、ビルリジン前処理を受けていない大食細胞とは異ならない応答であった。最後に、ＩＰビルリジンで前処理した採取大食細胞を、ＬＰＳ／ＩＦＮ−γとインキュベートした。それらは、そのような前処理をしない大食細胞と比較してＮＯ産生の助長を示した。最大の応答は、試験及び収集の４８時間前にビルリジンで前処理を行った大食細胞であった。実施例９この実施例は、実施例１の組成物での、かつ同様の試験方法での単球及び大食細胞の活性化を示す。研究は、単球の毒性を測定するために使用される、チャンヘパトーマ細胞系（ Chang hepatoma cell line）に対する細胞毒性を証明するために、実施例１の組成物が正常単球を活性化することを示し、それは、単球毒性を測定するために使用され、さらに、癌患者（例えば、頸、卵巣、耳／鼻／喉及び子宮内膜／子宮、及び慢性骨髄生白血病の癌にさいなまれているもの）からの単球及び大食細胞は、組成物によって刺激され、同じ患者由来の腫瘍細胞を攻撃及び破壊することを示す。さらに詳細には、単球の抗腫瘍作用を本発明の組成物の存在下で試験し、これらの実験のための基本的な方法を以下に概説する。この方法を、略して“細胞系及び自己腫瘍細胞に対する単球／大食細胞の細胞毒性アッセイ”又は“細胞毒性アッセイ”と命名する。その方法は、単球／大食細胞の単離を必要とし、以下のように行われる。静脈血を、ヘパリン処理したバキュテーナ管中に無菌的に採取する。無菌の保存剤の入っていないヘパリンを最終濃度２０ユニット／ｍｌとなるまで添加する。血液を、ハンク平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）で３：１に希釈し、リンパ球分離培地に層状化し、末梢血単核細胞（ＰＢＭＮ）のバンドを得るために遠心分離した。遠心分離後、単核球細胞層を界面から回収し、培地（培地、１０％熱不活化胎ウシ血清、５０ユニット／ｍｌペニシリン及び５０μｇ／ｍｌストレプトマイシンを添加したロズウェルパークメモリアルインスティテュート〔ＲＰＭＩ〕１６４０培地）で２回洗浄し、単球をラテックス消化によって数える。単球を９６ウェルのプラスィックプレート中に接着（３７度にて２時間、その後２回培地で洗浄）することによって単離する。接着細胞は９０％より多い単球であると見積もることができる。接着細胞を含むウェルをビルリジン（最終希釈度が１：１０〜１：２００）の存在下で一夜インキュベートする。次いで、接着細胞をビルリジンを除去するために洗浄し、腫瘍細胞とともに一夜インキュベートする。腫瘍細胞を、内毒素の濃度が製造者によって低いことが保証され、アッセイにおいて非刺激性である培地中で保持する。標準細胞系を使用した試験において、⁵¹Ｃｒ（クロム）標識チャンヘパトーマ細胞を使用した。なぜならばこの細胞系は、天然キラー細胞の細胞毒性に対して感受性が鈍いからである。これらのヘパトーマターゲット腫瘍細胞を、エフェクター：ターゲット（Ｅ：Ｔ）２０：１〜１５：１の細胞比で接着細胞単層に添加した。このＥ：Ｔ比は、５：１〜３０：１にＥ：Ｔ比を変化させることによって調製した曲線におけるプラトーな範囲に十分に収めるために用いた。２４時間後、上澄み液を収集し、⁵¹Ｃｒ放出を定量する。比細胞毒性の％を以下のように算出する。上記の式において、Ｅはエフェクター細胞の存在下におけるターゲット細胞から放出されたＣＰＭ、Ｓはエフェクター細胞の非存在下におけるターゲット細胞から放出されたＣＰＭ、Ｔはドデシル硫酸ナトリウム２％で処理した後のターゲット細胞から放出されたＣＰＭである。自己腫瘍細胞を用いた試験について、これら細胞は、外科的生検から得、⁵¹Ｃｒで標識し、上記したヘパトーマ細胞と同様に用いた。腹膜及び肺胞の大食細胞の調製を、ブラウンらのCancer Research，53，3362- 3365（1993）に記載された方法で行う。このプロトコールを使用することにより、組成物は、健康なドナー由来の単球にチャンヘパトーマ細胞系に対する細胞毒性を発揮させることが見いだされた。続いて、癌患者からの単球及び大食細胞が、組成物によって刺激され、彼ら自身の特別な腫瘍を攻撃し得るか否を調査した。標準細胞系（チャンヘパトーマ細胞）について述べたような同様のプロトコールを使用することにより、癌患者からの単球及び／又は腹膜の大食細胞を単離した。腹膜の大食細胞は、腹腔鏡検査時に採取した腹膜液から単離した。組成物は、患者自身の腫瘍細胞に対する細胞毒性を引き起こすために頸部癌の患者からの末梢の単球及び腹膜の大食細胞を活性化することが見いだされた。この作用は、ＩＦＮ及びＬＰＳの組み合わせによって引き起こされる作用に匹敵するか、あるいはそれ以上であった。卵巣癌の患者からの腹膜の大食細胞は、また、組成物によって刺激され、培養において卵巣腫瘍細胞を攻撃し、破壊することが見いだされた。組成物での単球／大食細胞研究スクリーニング法は、組成物がリンパ球機能を刺激しないが、単球機能を刺激することを示したので、次の研究は組成物の単球／大食細胞刺激性活性の更なる特徴づけを目指した。単球／大食細胞腫瘍破壊性機能刺激における組成物の用量反応特徴を決定することを目指した多数の比較研究を、異なる化合物バッチを試験するのと同様に行なった。研究の主な強調点は、癌患者の異なる解剖的位置からの単球及び大食細胞における組成物の腫瘍破壊性機能を刺激する能力を試験することにあった。これらの研究については、次のことに依存した：（１）癌患者と対照の患者からの末梢血単球；（２）肺癌患者及び非悪性肺病の対照の患者からの肺胞大食細胞；及び（３）婦人科学の悪性腫瘍を有する患者からの腹膜大食細胞。組成物の異なるバッチの用量反応研究は、すべて実施例１により調製し、完了した。これらの研究は、末梢血単球に基づいて、異なる用量及び異なるバッチ（バッチ番号２１６、２１９及び２２２）の組成物の刺激活性を試験した。組成物の各バッチは、希釈なし（ニート）、物質の１：１０希釈及び１：５０希釈で試験した。結果を図１４に図示する。バッチ＃２２２及び＃２１６は、単球腫瘍破壊性機能を刺激することを示したが、バッチ＃２１９は示さなかった。これらの予備的な調査では、＃２２２が＃２１６よりも優れていると思われた。バッチ＃２２２は薄めていない（ニート）場合及び１：１０希釈の場合で弱いが、同等レベルの腫瘍破壊性機能を刺激するようであり、１：５０希釈の場合でも活性は依然検出可能であった。バッチ＃２１６は、薄めていない（ニート）濃度の場合に顕著な腫瘍破壊性機能を示し、１：１０希釈の場合には弱い活性を、そして１：５０希釈の場合には活性は検出されなかった。上述のように、バッチ＃２１９は、いずれの試験濃度の場合にも検出可能な単球腫瘍破壊性機能を示さなかった。末梢血単球中の腫瘍破壊性機能も同様に測定した。試験は対照患者からの４つの末梢血単球について行なった。これらの試験は、組成物の最適刺激濃度（バッチ＃２２２の１：１０希釈）及びＩＦＮ−γ＋ＬＰＳ最適刺激濃度を利用した。これらの研究のターゲット細胞は培養された、ＮＫ−非感受性の細胞系、すなわちチャンヘパトーマであった。結果を次の表に示す。試験は子宮癌の患者由来の１つの単球サンプルについても行なった。患者自身の腫瘍細胞が分析中にターゲット細胞として使用されうるので、この試験は重要である。前述のように、この試験は組成物の最適刺激濃度（バッチ＃２２２の１：１０希釈）及びＩＦＮ- γ＋ＬＰＳ最適刺激濃度を利用した。また、エフェクター／ターゲット細胞比は患者の腫瘍細胞を維持するために１５／１に減じた。この試験の結果を次の表に示す。対照患者からの末梢血単球中で、組成物はチャンヘパトーマ細胞に対し、ＩＦＮ- γ＋ＬＰＳの最適刺激濃度でみられるレベルと同等以上のレベルで単球腫瘍破壊性機能を刺激した。子宮癌患者からの末梢血単球中では、組成物は患者自身の腫瘍細胞に対し、ＩＦＮ- γ＋ＬＰＳでみられるレベルより３０％増しのレベルで腫瘍破壊活性機能を刺激した。婦人科学の悪性腫瘍患者由来の腹膜大食細胞における腫瘍破壊性機能を試験した。これら試験は子宮癌患者１人及び卵巣癌患者１人の洗浄体液から単離した腹膜大食細胞サンプルについて行なった。これら試験は、患者自身の腫瘍細胞を分析中のターゲット細胞として行なった。前述のように、組成物の最適刺激濃度（バッチ＃２２２の１：１０希釈）及びＩＦＮ- γ＋ＬＰＳ最適刺激濃度を対照とした。また、エフェクター／ターゲット細胞比は、患者の腫瘍細胞を維持するために１５／１に減じた。その結果データは：これらの試験は、局所腫瘍の環境が免疫学的活性剤に対する免疫細胞の反応の決定子でありうるという事実を強調した結果となった。子宮癌のこの場合、腹膜腔に悪性の病気の病理学的形跡はなく、自己由来腫瘍に対する腫瘍破壊性機能の向上は、ＩＦＮ- γ及びＬＰＳを合わせた方が組成物での機能よりも良好だった。卵巣癌患者には、腹膜腔に著しい腫瘍が存在した。患者自身の腫瘍細胞に対するＩＦＮ−γ及びＬＰＳを合わせた物への反応は、せいぜい最小値で、一方組成物への反応はより大きかった。肺癌患者及び対照患者由来の肺胞大食細胞における腫瘍破壊抑制機能を試験した。これら試験は、１人の非小細胞肺癌患者及び３人の非悪性肺病患者の気管支肺胞洗浄体液から単離した、肺胞大食細胞サンプルについて行なった。これら試験は、組成物の最適刺激濃度（バッチ＃２２２の１：１０希釈）及びＩＦＮ- γ とＬＰＳの組み合わせの最適刺激濃度を利用した。これらの研究のターゲット細胞は、チャンヘパトーマ細胞であり、エフェクター／ターゲット細胞比は２０／１であった。結果データは：結果は、ＩＦＮ- γ＋ＬＰＳのような従来の大食細胞活性剤に応じて腫瘍破壊性機能が向上し、肺癌患者からの肺胞大食細胞が減じていくという観察と一致している。結果は、肺癌患者からの肺胞大食細胞の腫瘍破壊性機能が対照患者に比べて著しく減じていると示していた。先に示したデータは、ビルリジンが肺胞大食細胞の弱い刺激剤であると示していた。さらに非小細胞肺癌患者由来の肺胞大食細胞の研究は、実施例２３に示してある。肺胞大食細胞における活性は、ビルリジン調製物により異なっているようである。それゆえ、肺胞大食細胞毒性は、試験したバッチ（２２２、２１９、２１６）から調製した肺胞大食細胞のわずか２／７にみられた。一方、３／４の肺胞調製物はあとの調製物（２３３、２３８）で刺激された。この相違は、調製品の年齢及び効力又は患者の多様性に関連する。つまり、組成物は肺胞大食細胞において腫瘍破壊性活性を活性化することができる。組成物の予備的な生体外試験は、それが大食細胞活性剤であることを証明している。供給された物質は、ＮＫ非感受性細胞系及び新鮮な分離したヒト腫瘍細胞に対する標準細胞毒性分析において腫瘍破壊性活性を示すことができた。示された活性は、これらの試験で濃度依存性であることも判明した。生体外で組成物の大食細胞腫瘍破壊性機能を活性化する能力は、現在知られている最適な大食細胞活性化の組み合わせ、すなわちＩＦＮ- γ及び内毒素（すなわちＬＰＳ）の組み合わせのそれと匹敵する。上述のように、もし物質が内毒素の汚染を受けていなければ、内毒素なしでのこのレベルの腫瘍破壊性機能を示す組成物は、生物学的に重要とみなされる。組成物は米国薬局方(USP)社のウサギ発熱物質試験により発熱物質を試験した時、内毒素により汚染されていなかった。他の大食細胞活性剤でも見られたように、組成物の大食細胞腫瘍破壊性機能での活性は大食細胞の源毎に異なっている。組成物は、正常なドナーに対しＩＦＮ - γ＋ＬＰＳと同等で、癌患者のドナーに対しＩＦＮ- γ＋ＬＰＳより多分優れている、末梢血単球の優れた活性剤のようである。悪性の病気は使用した刺激剤により単球の腫瘍破壊性機能の向上に著しい影響を与える（Braunら、(1991)）。癌患者の単球における異なる大食細胞活性剤の生物学的活性の一決定子は、アラキドン酸代謝及び細胞のプロスタグランジンによる分泌に対する活性剤の感受性である。組成物についてのこれら初期の研究から、化合物により示された活性はプロスタグランジンの阻害活性に対し感受性ではないようである。プロスタグランジン非感受性が組成物で刺激された癌患者の単球に確かに証明できるならば、このことは多くの他の生物的活性剤の効果はプロスタグランジンにより制限されるため治療的に重要とみなされる。２つのサンプルでの予備的な研究は、特に悪性の病気が腹膜腔に存在する場合、組成物が腹膜大食細胞において良好な活性を有することを示している。これらの予備的な結果はまた、異なる婦人科の悪性腫瘍患者の腹膜大食細胞において腫瘍破壊性機能を刺激する異なる活性剤の能力を比較するとき、何が発見されるかを示している。これらの研究では、腹膜腔での悪性の病気の存在が、特定な活性剤への腹膜大食細胞の反応性に影響を与えることが知られていた。子宮癌の患者では、悪性の病気は一般に腹膜腔には存在せず、それ故ＩＦＮ- γ＋ＬＰＳに対する内在する大食細胞の反応は正常である。病気が腹膜腔に存在すると、しかし、卵巣癌の場合のようにＩＦＮ- γ＋ＬＰＳに対する反応は抑制される。これは、部分的に、悪性の病気が存在すると腹膜大食細胞のアラキドン酸代謝における変化に関係している(Braunら、1993)。組成物が卵巣癌患者からの腹膜大食細胞において、患者自身の腫瘍細胞に対し腫瘍破壊性を活性化するという事実は、アラキドン酸代謝経路と独立であるという活性化の機構と一致する。従って、先に生体外研究で示したように、本発明の組成物は単球及び大食細胞を活性化し、その免疫系機能を増加させることができる。実施例１０本実施例は、婦人科の病気の患者からの末梢血単球及び腹膜大食細胞において本発明の組成物や他の大食細胞活性剤に応答した腫瘍破壊性機能を示す。患者の母集団は、７患者からなり、３人は良性腫瘍、４人は悪性腫瘍（２人は卵巣癌、１人は子宮内膜癌そして１人子宮癌）であった。サンプルは外科的な処置の時患者から取り除く。末梢血単球を含む調製物は、Braunらにより設定された手順(Cancer Immunol.Immunother.,32,55-61(1990))を使用して血液サンプルから単離し、腹膜大食細胞を含む調製品をBraun らにより設定された(Cancer Re search，53,3362(1993))ように単離した。本発明の組成物（貯蔵バッチ＃２２２の１：１０希釈）及び他の活性剤、すなわちＩＦＮ- γ(100U/ml)、ＩＬ−１２（５００Ｕ／ｍｌ）及び単球−ＣＳＦ（５００Ｕ／ｍｌ）に対応した腫瘍細胞細胞毒性は、Braun らの中に記載されている単球細胞毒性分析を使用して評価した。以下の表に示す結果は、本発明の組成物が悪性及び非悪性婦科病の病気の患者からの末梢血単球及び腹膜大食細胞中の両方において、腫瘍破壊性機能を刺激することを示している。結果は単球／腫瘍細胞比１５：１での腫瘍細胞毒性（±Ｓ．Ｅ）のパーセンテージとして示した。末梢血単球及び腹膜大食細胞の刺激従って、本発明の組成物により示された腫瘍細胞毒性は、試験した他の生物学的刺激剤によるそれと同等以上である。実施例１１本実施例は、プロスタグランジン合成阻害剤であるインドメタシンの、本発明の組成物に応答した腫瘍破壊性機能の向上に対する効果を示す；癌患者からの末梢血単球に対する他の大食細胞活性剤の影響も同様に調べた。インドメタシン（５ｎｇ／ｍｌまで）を本発明の組成物、ＩＬ−１２（５００Ｕ／ｍｌ）及び単球−ＣＡＦ（５００Ｕ／ｍｌ）に同様に加えた以外は、実施例１０の悪性の病気の患者由来のサンプルを、実施例１０で述べた分析方法を使用して試験した。以下の表に示すように結果は、インドメタシンはＩＦＮ- α、ＧＭ−ＣＳＦ及びＭ−ＣＳＦに応答した細胞毒性が増加することを示す。インドメタシンの細胞毒性増加それ故、ＩＦＮ- γ、ＧＭ−ＣＳＦ及びＭ−ＣＳＦに応答した腫瘍破壊性機能の向上は、インドメタシン感受性機能により調節された。一方、ホルボルエステル(Phorbol-Ester)(ＰＭＡ)、ＩＬ−１２及び本発明の組成物に応答した腫瘍破壊性機能の向上はインドメタシン非感受性機能により調節されず、すなわちインドメタシンは本発明の組成物、ＩＬ−１２及びＰＭＡに応答した細胞毒性を増加させなかった。実施例１２この実施例は、インドメタシン存在下での、本発明の組成物に応答した腫瘍破壊性機能向上に対するプロスタグランジンＥ₂の効果を示している。患者の母集団は、１人の正常な及び９人の患者（１人の健常者、２人の膵臓癌、２人の頭部及び頚部腫瘍、１人の子宮内膜症及び４人のＨＩＶ）からなる。末梢血単球を含む調製品はBraun(1990)らにより設定された手順により単離した。ＰＧＥ₂（１０⁸Ｍ）存在下又は非存在下での本発明の組成物（貯蔵バッチ＃２２２の１：１０希釈）及びインドメタシン（５ｎｇ／ｍｌまで）へ応答した腫瘍細胞毒性は、Braun らに記載のように単球細胞毒性分析を使用して評価した。結果は、単球／腫瘍細胞比１５：１の場合、腫瘍細胞毒性パーセンテージで以下の表に示す。実施例１の組成物に応答して向上する腫瘍破壊性機能へのＰＧＥ₂の効果病態生理学レベルのＰＧＥ₂（１０^-8Ｍ）は、発明の組成物に応答し発生した腫瘍破壊性機能レベルを抑制できなかったことを以下のデータは示している。この結論はＩＦＮ- γにより刺激された単球(Braunら(1993))における腫瘍破壊性機能を抑制するＰＧＥ₂の能力と、対照的である。実施例１３この実施例は、本発明の組成物により刺激された単球における自己由来の腫瘍細胞に対する、腫瘍破壊性機能向上を示している。末梢血単球を含む調製品は、７人の患者（３人の卵巣癌、１人の子宮内膜癌、１人の子宮癌及び２人のＥＮＴ癌）由来の血液サンプルからBraun ら(1990)に設定された手順で単離した。ＰＧＥ₂（１０^-8Ｍ）存在下又は非存在下での本発明の組成物（貯蔵バッチ＃２２２の１：１０希釈）及びインドメタシン（５ｎｇ／ｍｌ）へ応答した腫瘍細胞毒性は、患者の腫瘍細胞をチャンヘパトーマ細胞の代わりに使用した以外は、Braun ら(1990)に記載の単球細胞毒性分析を使用して評価した。患者の腫瘍細胞はコラゲナーゼ及びＤＮａｓｅで処理し、単一の細胞調製品を調製し、細胞は、Braun ら(1990)に記載のように標識した。以下の表に示す結果は、本発明の組成物が、患者自身の腫瘍を殺すために患者自身の単球を活性化できることを立証している。実施例１の組成物により誘導される単球腫瘍破壊性機能実施例１０から１３の実験結果は、実施例１の組成物が、腫瘍破壊性機能を示す単球を活性化することができる；腹膜大食細胞と共に血液中で働く；そして、その結果は患者の免疫抑制の原理のひとつであるプロスタグランジンの阻害効果に影響を受けないことと一致していることを示している。実験データは腹膜、子宮及び婦人科の悪性腫瘍の治療に組成物が使用できることも支持している。実施例１４本実施例は、組成物中のタンパク質を推定するために行なった分析結果を示している。組成物のタンパク質推定は、ピアスミクロＢＣＡ（Pierce Micro BCA）タンパク決定技術(Smithら、Anal.Biochem.,150,76-85(1985))を使用して行なった。組成物のバッチの10μｌのサンプルを蒸留水で１ｍｌにした。５種類の濃度のウシ血清アルブミン(0.150μg/ｍｌ)も調製し、標準として使用した。ブランクとして、０．１ＮのＮａＯＨを使用した。これらすべてのサンプルにＢＣＡ(２％ビシンコニン酸ナトリウム塩；Pierce)、４％硫酸銅及びマイクロ試薬Ａ（０．２ＮのＮａＯＨ中に炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム及び酒石酸ナトリウム）の混合物を添加した。サンプル混合物は、１時間６０℃でインキュベートし、冷却しスペクトロメーターで５６２ｎｍでの吸光度を読んだ。試験サンプルのタンパク質の量は、プロットした標準カーブ及び適当にされた計算結果と比べた。組成物のタンパク質濃度は、低く３２μｇ／ｍｌと推定された。実施例１５本実施例は、まとめると、以下の通りである：（１）組成物はＴＮＦ−α放出活性があり、ＴＮＦ−α放出活性は内毒素のどのような汚染にも関係ない；（２）大食細胞のプライミングはＴＮＦ−α放出活性を刺激する組成物の能力を高める；（３）組成物の高浸透圧性はＴＮＦ−α放出活性に感応しない。内毒素が実施例１の組成物に対する上述の生物学的活性と関連があるかどうか試験するために、組成物実験はさらに反応剤としてポリミキシンを加えて行なった。ポリミキシンは白血球に対する内毒素の作用を阻害する。以下の表及び続く情報は組成物実験及びその結果を示している。ＴＮＦ−２遊離効果及び大食細胞準備での遊離の増大に関するエンドトキシンの不在その結果は、ポリミキシンがＬＰＳ誘導性のＴＮＦ−αの放出を完全に阻害することを示している。ポリミキシンなしで、ＬＰＳは５１７ｐｇ／ｍｌのＴＮＦ −αを誘導し、しかしポリミキシン存在下には、１１ｐｇ／ｍｌのＴＮＦ−αを誘導する。一方、組成物は、ポリミキシン存在下に１５９１ｐｇ／ｍｌのＴＮＦ −αを誘導する。ポリミキシン不在下にはＬＰＳと組成物は、大食細胞が活性化された(prime)時に組成物がより強力に作用することを示唆するような、刺激剤の添加効果以上のものを示す。ＴＮＦ−２放出に対する高浸透圧性の影響の欠如異なるバッチの浸透圧は、標準法で決定した。結果は先の表に示す。Ｂ０２１３はやや高い６７５ｍＯｓｍである。Ｂ０２１３より良いＴＮＦ放出活性を有すると示されているＢ０２２２は、やや低いが高浸透圧性、５８１ｍＯｓｍである。Ｂ０２２６、ＢＣ１１−０６、ＢＣ１１−０９の画分は、５４０〜６０３ｍＯｓｍの範囲である。組成物の高浸透圧性がＴＮＦ−α放出活性へ与える影響も、研究した。浸透圧を、高浸透に調整すると、組成物はＴＮＦ−αを放出し続けることが示された。実施例１６本実施例は、本発明の組成物に関する毒性研究を示している。予備的毒性試験は、以下の表に示すように様々な動物種について行なわれた。すべての動物（以下の表に掲載）は、組成物の注射を１４、２１及び３０日目に行い、日々の臨床的観察に基づいて評価した。血液学的データを最初の３０日間は３日毎に、その後は毎月集めた。注射を行なった期間及びその後の期間の間中（４ヶ月さらに続いた犬以外はすべての種について１ヶ月）、本研究に関わった３５８以上の動物のいずれにも逆効果は見られなかった。組成物の大量の１回の筋肉内注射の効果を決定するために、二次的な細胞毒性研究を行なった。１３匹のＳＤラットに５ｍｌ／ｋｇの組成物を１回筋肉内注射した。３匹のラットは７日間観察した。１０匹のラットは１４日間観察し、安楽死させ死体解剖をした。どの集団にも毒性の兆候は見られず、死体解剖した動物には著しい病理学的知見は見られなかった。これらの観察をもとに、ラットにおける組成物の筋肉内投与におけるＬＤ₅₀は５ｍｌ／ｋｇより大であると決定した。別の毒性試験、組成物を２頭の混種の犬に投与する試験をオンタリオ獣医大学により行なった。実験計画案を以下の表に示す：各ケースにおいて、投与量１は右後ろ足に、投与量２は７日後に左後ろ足の投与した。両方の犬を最初の注射から１４日間観察した。食欲、活動、体温、脈速度そして呼吸速度を研究のあいだ日に２回観察した。型通りの尿検査、血液学的及び血清学的化学的プロフィールは、以下の時間の時：処理前及び処理後の２４時間、７２時間、７日及び１４日に行なった。どちらの動物もいずれの注射に関連した痛みは示さなかった。２度めの注射に関連したアナフィラキシーは全くなかった。薬によると思われる身体の又は研究室での数値に、なんの異常性又は変化は見られなかった。薬は健康な犬によく耐えられたようであった。ビルリジンについての１７日連続服用細胞毒性研究を、オンタリオ癌センターにて動物モデル実験に関して行なった。モデルはメスＣ５７Ｂ１マウスを使用した。以下のような４集団である（ＩＭ＝筋肉内注射、ＩＰ＝腹膜組織内注射）：各集団のマウスは、０日めに５ｘ１０³のＢ１６Ｆ１黒色腫及び中心体を注射した。最初の１７日間は、各集団を毎日ビルリジン^TM又は塩水(saline)の注射した。１８日目に、その動物を屠殺した。屠殺前に、食物の摂取、体重及び行動は、正常であった。さらに、調べた器官（大腸、脾臓、胃、膵臓、膀胱、肝臓、脳、腎臓、小腸ならびに心臓）のいずれにも光学顕微鏡で観察可能な変化を生じる毒性の証拠はなかった。食物摂取と行動は、正常であった。体重は、正常だった。フッシャー−３４４ラット（全数でオス４０頭及びメス４０頭）における１３週目の反復服用毒性の研究は、１３週間１週当たり３回ビルリジン^TMを投与して行った。最大服用量は、１．１ｍｌ／ｋｇ、約２０ｘヒト服用量であった。動物は、１３週後に組織病理に付した。唯一処理に関連して認められた知見は、対照と比較して２０ｘ服用の群におけるわずかな体重減少であった。細胞毒性は、決定されなかった。実施例１７この実施例は、ペットにおける様々な悪性腫瘍の治療に対する本発明の組成物の臨床使用を示す。進行した新形成症を有する１１匹のネコ及び１０匹のイヌを週ごとの服用に組成物の筋肉内注射で処理し、新形成症を有しない動物を、従来の治療で処理した。以下の表は、この研究における個々の臨床ケースを要約している。注射の数は、１回の筋肉内注射部位当たり７．５ｍｌ以下の量で、２〜６９の範囲であった。週毎の実験計画は、各ケースについて個々に診断試験をし、試験及び注意深い観察を可能とした。臨床医は局所的な炎症又はアナフィラキシーを含む激しいアレルギー反応は全く見られなかったと記していた。臨床医及び動物の所有者は、系的な逆反応は全く認めなかった。実験者は、わずかな減少、食欲及び活動レベルの上昇、２、３の動物に見られた著しい体重増加及び痛み及び／又は不快の減少を含む臨床的改善を確認した。先の表に記した臨床結果は、ビルリジン処置に対する動物の反応を記述するある用語が含まれている。これらの用語を以下の表に定義する：６匹の動物が（３／１０がイヌ科、３／１１がネコ科）完全な反応を示した。１匹の動物（１／１１ネコ科）が初期の強い完全な反応を示した。１１匹の動物（５／１０がイヌ科、６／１１がネコ科）が弱い部分的反応を示した。１匹の動物（１／１０イヌ科）が安定で、１匹の動物（１／１０ネコ科）が反応しなかった。動物の臨床実験は、悪性腫瘍の治療に組成物が非常に効果があることをはっきりと支持している。実施例１８この実施例は、癌患者に対して行われたオープンフェイズＩＩ臨床試験の結果を示すものである。１９８８年に、オープンフェイズＩＩ臨床試験が、モントリオール一般病院（ Montreal General Hospital）においてサールウェル（Thirlwell）博士により開始され、マクシミウク(Maksymiuk)博士の指導の下サスカトゥーン癌センターに進展された。試験は、疾患に対し（照射を除く）治療を以前に施されたまたは施されていない様々の進行した充実性癌を有する患者に開かれている。患者は、一週間に三度ビルリジン（商標）を７．５ｍｌ筋肉内注射の治療を施されており、継続して治療が続けられ、また安全性、東部協働腫瘍学グループ（Eastern Coop erative Oncology Group）（”ECOG”）のパフォーマンス状態、生命の質（qual ity of life）及び生存をみるべく継続された。１９９４年３月３１日に、９９人の患者に治療を施した。副作用は一般的に穏やか及至中程度であった。５人の患者が副作用のため治療を中止した。１８人の患者が疾患の安定化を達成したが、完全なあるいは部分的な応答は認められなかった。臨床的終端点に関して変化がないか、又はデータが得られた患者に対し、ビルリジン（商標）の８週間の治療の後、生命の質、痛み及びECOGパフォーマンス状態についてそれぞれ５１％、７８％及び５６％の割合で改善が見られた。進行膵臓癌に対しビルリジン（商標）で治療した患者の部分群（n=12）は、ビルリジン（商標）の治療の日から２９％の一年生存率を示し、生存期間の中央値は１６０日であった。診断の日からの一年生存率については、歴史的コントロール群(historical control)については１３．８％であるのに比較して３８％を示した。したがって、オープンフェイズＩＩ臨床試験からの結果は、生体外及び動物試験と整合していた。ビルリジンは癌治療に対しかなりの程度効果的である。実施例１９この例は、測定可能な生検確認後の（biopsy-proven）膵臓癌を有する患者に対し本発明の組成物を用いた、膵臓癌臨床研究、特にフェイズＩＩ試験（プロトコルCO2-104）の方法及び結果を示すものである。治療は、実施例１において調製した組成物０．１１ｍｇ／ｋｇ（最小投与量７．５ｍｌ）を、投与の度に臀部を交互にして、大臀筋に一回で深部に筋肉内注射によって投与することからなる。患者は最初の週は３回の注射を受け、さらに癌進行まで週に二回注射を行った。応答は、ミラー（Miller）他、”Cancer”、47、207-214（1981）に記載されているとおり、標準の基準を用いて定義した。完全応答（CR）は、少なくとも４週間の間疾患の証拠の全ての完全な消失であると定義した。部分応答（PR）は、少なくとも４週間の間、最大の測定可能な病変の２つの最大垂直直径の積の少なくとも５０％の減少及び新規の病変あるいは病変の進行がないことであると定義した。進行的疾患は、１つ以上の測定可能な病変の大きさについて２５％以上の増加あるいは新規の病変の出現であると定義した。応答あるいは進行的疾患に対する基準を満たさない疾患は、安定性疾患であると定義した。全部で２２人の患者が研究の候補となったが、５人の患者は、効能の評価が不可能であると考えられた。完全あるいは部分応答はなかった。３人の患者は、最初の一か月で疾患の進行が見られた。６人の患者は３カ月以上疾患の安定を見た（すなわち３．５、３．５、５、８、１２＋、及び１４＋の月数）。全体の群に対する生存期間の中央値は、診断の日から８カ月であり、治療の開始から５カ月であった。生検確認肝臓転移及び３７ｎｇ／ｍｌのＣＥＡレベル（正常値は３ｎｇ／ｍｌである）を有する１人の患者は、８カ月間にわたって肝臓転移及びＣＥＡレベルの絶対的安定性が見られた。１人は５カ月にわたって疾患が安定していた。１人の患者はホイップル手順（Whipple procedure）の４カ月後、膵臓床に疾患の再発が見られ、ＣＥＡが徐々にではあるが上昇する点を除いてはこの組成物に対して少なくとも１年間安定であった。第三の患者は、皮下にステントを挿入し、少なくとも１４カ月フルタイムで仕事を続けたが、腫瘍の進行の証拠は見られなかった。２２人の全ての患者は、全部で５００回以上の注射を受け、毒性について評価可能であった。薬剤に関係する毒性について臨床上あるいは研究室上の証拠を示した患者はなかった。一般的に、疾患の活性に匹敵する（parallelled）生命の質に対する有害な影響はなかった。白血球の全数あるいは血清免疫グロブリンに対する絶対的リンパ球数の有意の変化は見られなかった。診断時から及び治療の開始時からの生存期間を表す生存曲線を、図６及び７にそれぞれ示す。比較のため、図６においてグジョンソン（Gudjonsson）（1987）の歴史的生存曲線を重ねて記載する。比較し得る歴史的生存曲線の別の例がバッケボルド（Bakkevold）、ペターソン（Petterson）、アルネショー（Arnesjo）、及びエスペンハウグ（Espenhaug）（1990）に記載されているであろう。生存分析の結果を、以下のように要約する。診断における平均生存期間は、図６に示すように２８１日間であった。生存期間の中央値は、１８２日間（約５カ月）であった。比較すると、グジョンソン（ 1987）は、彼の１８８人の外科患者の平均生存期間が２０８日であり、生存期間の中央値が１２０日間であったことを報告している。治療の開始からの平均生存期間は、１６６日であった。（図７を参照）。生存期間の中央値は、１３３日間であった（約４カ月と１週間）。それぞれ少なくとも１３回の注射を受けた評価可能な患者の部分群についてもまた、生存期間を評価した。２２人の患者の内１４人が評価可能であった。これらの患者の内、前記の表で注記したように、診断からの生存期間の中央値は、２１９日間であった（約７カ月と１週間）。治療の開始からの生存期間の中央値は１４６日間であった（約５カ月）。評価可能な患者（n=17）に対するビルリジン（商標）治療の開始からの１年後生存率は、１８％であり、生存期間の中央値は５カ月であった。診断からの１年後生存率は３５％であり、生存期間の中央値は７．３カ月であった。類似の疾病を有する歴史的一群の患者においては、診断からの１年後生存率は１３８％であり、生存期間の中央値は１２０日間であった。生命の質、痛み及びECOGパフォーマンス状態は、データが報告された患者のそれぞれ５７％、７１％、及び６６％について８週間のビルリジン（商標）治療の期間にわたって一定であるかまたは改善を示した。安定し下降するＣＥＡレベルは、安定な疾病の臨床的結果を支持した。実施例２０この実施例は、ビルリジンを用いた悪性黒色腫の治療に関する臨床試験を示すものである。進行性悪性黒色腫は、全ての段階のＩＩＩあるいはＩＶの患者及び全ての局所的（loco-regional）あるいは遠隔の転移が初期治療の後に生起したものを含むものとして定義される。全ての他の治療が判断される標準の治療は、ＤＴＩＣ（ダカルバジン）であり、それは約１５％の応答率を有すると報告されている。応答期間の中央値は３から６カ月であり、激しい吐き気と嘔吐とを伴っており、肝静脈の血栓症による急性肝壊死という致死可能性のある副作用を伴っている。この治療は、確固とした生存についての利点を示していない。この研究は、本発明の組成物について、進行した悪性黒色腫を有する患者に用いたときの安全性と効能を測定し、生存と生命の質に対するその効果を測定するために行なった。この研究は、比較的でない（non-comparative）、多中心の（multicenter）試験であった。１週間に３回、筋肉内に本発明の組成物を７．５ｍｌ注射する初期投与スケジュールを用いた。器官あるいは骨髄に対する毒性がないことを観察した後、１５日間負荷スケジュールを増やして毎日の注射とし、その後の維持期間として週３回の注射を行った。その後、負荷投与量を３０日間に増加した。治療の継続期間は３６週間とし、その後１６週間に減らした。その後患者は継続手順（continua tion protocol）に入るという選択肢を与えられた。進行した黒色腫を有する３３人の患者が、研究対象の人員の中に含まれ（１７人は女性で１６人は男性）、年齢は１７才から８５才にわたっていた。研究対象の人員のうち、６４％が以前に治療を受けており、３６％は治療を受けていなかった。３３人の患者のうち２５人が評価可能であった。カルノフスキパフォーマンス状態（Karnofsky Performance Status）（ベースライン）は、４０から１００％の範囲にあり、中央値は８０％で、１１人の患者が、研究期間の終了後生存しており、これらのうち５人は治療中であった。３３人のうち１６人に小規模の部分応答を観察した（４８％）。１人の患者は肺に３３％の減少が見られ、６人の患者に痛みの減少がみられ、８人の患者が１カ月以上にわたり１０００グラム以上の体重の増加が見られた（１０００〜２６００ｇの範囲）。３３人の内１９人に安定な状態が観察された（５８％）（６０日から１７０日の範囲、中央値７７日）。図８、９及び１０は、転移／再発の診断からの生存日数として測定し、歴史的コントロール群と比較した、本発明の組成物で治療した患者の生存期間を示すものである。実線は本発明の組成物で治療した患者の生存曲線を表し、破線は歴史的生存曲線を表す（Balch et al.、Cutaneous Melanoma、２版、1992、第１４章及び３９章、１６５〜１８７頁及び４９９〜５０８頁、Lippincott Co.、Philad elphia、ペンシルバニア）。１〜４１０以上の腫瘍部位を有する患者を含む本発明の組成物によって治療したすべての患者の生存期間を、図８に示す。２つの腫瘍部位及び３つ以上の腫瘍部位を有する患者の生存期間を、それぞれ図９及び図１０に示す。本発明の組成物で治療したすべての患者の群は、１年後において、３９％の生存を示した（Kaplan-Meier評価）。すべての進行悪性黒色腫（AMM）の患者に対する１年後の生存率は、歴史的コントロール群においては約１１％である（腫瘍の数でマッチングした）。歴史的コントロール群の生存期間の中央値が８９日であるのに比較して、この群の生存期間の中央値は３１５日であった。２つの腫瘍部位を有する患者に関しては、１年後生存率は本発明の組成物を用いて治療した患者については４９％であるのに対し、歴史的コントロール群については１３％であった。この群の生存期間の中央値は３６０日であるのに対し、歴史的コントロール群の中央値は１２０日であった。３つ以上の腫瘍部位を有する患者に関しては、１年後生存率は本発明の組成物を用いて治療された患者については３１％であるのに対して、歴史的コントロール群については０％であった。３つ以上の腫瘍を有する群は、生存期間の中央値が２０５日であるのに対し、歴史的コントロール群の中央値は６０日であった。生命の質は、体重の増加、パフォーマンス状態(Karnofsky)、生命の質指数（S pitzer）及びペインスケール（線形アナログ）によって評価した。時間的な体重増加を次の表に示す。カルノフスキ及びスピッツァ（Spitzer）スケールはともに主観的なものであり、各々の個人においておおよそ一致していることが認められた。これらのパラメータに関して１５人の患者は変化が報告されなかった。４人の患者は変動を示し、後になって以前のレベルに戻った。１人の患者は減少が見られた（４０〜２０％）。６人の患者に対する痛みの評価の結果によれば、４週目には痛みは５（最も悪い）から２（中程度）あるいは０（痛みなし）まで下がった。１人の患者は痛みが３から０に下がった。肝臓の転移を有する１人の患者は痛みが０に減少し、１１カ月間安定が見られた。痛みが０のまま研究に入った９人の患者は研究中ずっとそのレベルを維持した。５人の患者は痛みが緩やかに（２単位）増加した。３人の患者は、２カ月目あるいは３カ月目に過渡的な痛みの増加（１から２単位）が見られた。３３人に投与された１７３４本の注射の内、２１人の患者は悪性の薬剤反応が見られなかった。１２人の患者に１４個の悪性の薬剤反応が報告された。悪性の薬剤反応は通常４週目あるいは８週目に起こり、穏やか及至過渡的なものであり、低い程度の発熱である場合がしばしばであった。歴史的コントロール群と、本発明の組成物によって治療したプロトコル群の生存率の相違は、本発明の組成物で治療した患者に対する生存上の利点を示唆するものである。１９人の患者で癌が安定化するように思われた。進行性黒色腫（AM M）に対して治療の行われたすべての患者が生存データに含まれた。さらに２１人の以前に治療された患者が含まれた（以前の治療が失敗したときの予後が悪いため多くの臨床試験は治療を施していない患者を要する）。この患者群における腫瘍の負荷は高かった（８２％は２以上の転移部位を有していた）。生存及び生命の質についてのデータは、ほとんどの患者がこの治療から何らかの利益を得たということを示している。研究期間の終了時に１１人の患者は依然として生存しており、これらの１１人の内５人が治療を継続した。３３人の患者に対する予備分析は、３９％の１年後生存率（再発の診断から）を示した。研究の終結に際し、４５人に対して最終データが得られた。これらの患者の内４１人は遠隔転移を有していた。これらの患者に対する遠隔転移の診断時からの１年後生存率は、６１％であり、生存期間の中央値は５２９日であった（１７．６カ月）。このことは歴史的コントロール群のデータからの生存率が１３％である（中央値９２日）ことに比較し得るものである。すべての患者に対するビルリジン（商標）の開始からの１年後生存率は２２％であり、生存期間の中央値は２００日であった（６．７カ月）。生命の質、痛み及びECOGパフォーマンス状態は、データが得られた患者のそれぞれ６３％、９３％、及び７０％について、最初の８週間の治療期間にわたって変化あるいは改善が見られなかった。さらにビルリジン（商標）の使用前及び使用後の腫瘍病理学的考察によれば、ＴＮＦ−αに仲介された効果と合致する、通常でないパターンの腫瘍細胞壊死、繊維形成、及び血管血栓症を示した。実施例２１この実施例は、悪性黒色腫に対する病理学的プロトコルを示すものである。次のものは硬口蓋及び歯齦の進行性悪性黒色腫を有する７３才の女性についての報告である。顕微鏡下で２つの悪性黒色腫が観察された。上方から下方に見ていくと、ケラチンを伴った上皮層が観察され、その下で悪性の細胞が顕在し始める。これらの黒色腫細胞は丸形あるいは卵型で好酸球の細胞質が豊富であり、多態性高色素性核を有していることが見て取れる。これらの細胞が、正常な粘膜下組織に置き変わっている。観察される血管は正常であるように思われ、白血球（多形態核細胞及び単核細胞）の存在によって代表されるような炎症／免疫応答はいずれの種類のものでの少なかった。これは、繁殖中の腫瘍組織の例（すなわち腫瘍構造が損なわれていない）である。この組成物で２カ月間治療した同一の患者からの腫瘍組織の標本を観察した。上方から下方にかけて、上皮の連続性が、壊死過程により破壊されていることが見て取れる。この壊死は決定的な塊にまで至ったいずれの腫瘍の中心にも共通するものであるが、周辺部とくに悪性黒色腫にはめったに見られず、ホスト免疫応答が腫瘍に対し攻撃を仕掛けているというしるしである。写真中いたるところ、もとの腫瘍細胞と異なる巨大な数の細胞が存在する。これらが、好中球、リンパ球、大食細胞を含む免疫細胞であり、これらは共同して典型的腫瘍構造の破壊を導いたものである。血管壁は多数のホスト免疫細胞によって密に浸潤されている。この細胞浸潤は次に血管の破壊をもたらし、そのことによって腫瘍がその栄養分及び酸素の供給を受けることを妨げる結果となる（虚血性壊死）。この患者の組織スライドに見られた腫瘍の破壊に貢献したこの免疫応答は、ＴＮＦ（腫瘍壊死因子）によってもたらされることが報告されて知られている変化及び前記した実施例に記載した仕事の結果と合致している。組成物スライドによる事後治療において示された免疫応答は、組成物による生体外のＴＮＦ免疫調節と、既知の生体内の抗腫瘍ＴＮＦ効果とを強く結びつけるものである。実施例２２この実施例は癌患者の末梢血単球の腫瘍破壊機能に対するビルリジン（商標）の効果を示すものである。癌患者からの静脈血からの末梢血単球を採取し処理し、実施例９の手順に従ってチャンヘパトーマ細胞に対してその腫瘍破壊活性を測定した。結果は次の表に記載し、その中で次の略語を用いている： "ENT CA"は耳、鼻、及び喉の癌であり、 "KS/HIV"はヒト免疫不全ウイルスに感染した患者のカポジ肉腫であり、 "Ovarian CA"は卵巣癌であり、 "Lung CA"は肺癌であり、 "ENDO CA"は子宮の子宮内膜癌であり、 "CML"は慢性骨髄性白血病である。表中用いる用語には、患者が持っていた癌のタイプを示す"Diagnosis"という語が含まれる。試験のため単球を提供した患者の全数は「＃試験」と注記する。試験された患者の全数に対する、単球がビルリジン（商標）によって刺激される能力を示した患者の数は、「＃刺激／全ビルリジン（商標）」と記載する。試験した患者の全数に対する、単球が１００ユニット／ｍｌのインターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）及び２ｎｇ／ｍｌの大腸菌由来のリポポリ多糖（ＬＰＳ）の組み合わせによって刺激される能力を示した患者の数は、「＃刺激／全（ＩＦＮ／ＬＰＳ）」と記載される。「＃刺激／全（ＩＦＮ／ＬＰＳ）あるいはビルリジン（商標）」に関しては、刺激は媒地だけの培養で得られた腫瘍破壊価を５０％以上上回る増加として定義する。「バッチ／刺激」は用いたビルリジンのバッチあるいはロット番号と、括弧に入れたそのバッチ／ロットについての試験の全数に対する刺激を示した試験の数とを示すものである。これらの結果は、癌患者の単球においてビルリジンによって誘導された腫瘍破壊活性が従来の大食細胞賦活物質（ＩＦＮ−α及びＬＰＳ）の組み合わせに対する応答として生成される活性と等しいか大きいということを示している。ビルリジン（商標）、カポジ肉腫を有するＨＩＶ患者から得られた大食細胞における腫瘍破壊機能を、その疾患の非常に後期の段階においても腫瘍破壊機能を刺激することができる。このようにビルリジン（商標）の作用は、ヘルパーＴリンパ球を含むその他の免疫細胞のタイプとの共働と独立であるように思われる。実施例２３この実施例は、癌患者からの腫瘍付随の大食細胞に対するビルリジン（商標）の効果を示すものである。非小細胞肺癌を有する１１人の患者からの肺胞大食細胞を、気管支肺胞の洗浄により採取し、実施例９に記載した手順にしたがってチャンヘパトーマ細胞に対する腫瘍破壊活性を測定した。婦人科の癌（２人は子宮内膜、３人は卵巣、２人は子宮頸部）を有する７人の患者から得られた腹膜の大食細胞を採取し、上記の手順に従ってチャンヘパトーマ細胞に対する腫瘍破壊活性を測定した。結果は次の表に示しており、用いる略語と用語は実施例２２に記載しているように定義する。これらの結果は、癌患者からの末梢血単球及び局所的癌付随の大食細胞の両方を刺激し、有意な腫瘍致死効果を表すことを示している。この結果は、婦人科の悪性腫瘍を有する婦人由来の腹膜の大食細胞と肺癌を有する患者からの肺胞大食細胞において観察された。これらの結果から、ビルリジン（商標）は、γインターフェロンと内毒素との組み合わせの従来の賦活物質による刺激に応答しない癌患者の大食細胞をも刺激し得るものと思われる。実施例２４この実施例は、癌患者からの単球における、自己由来の腫瘍細胞に対する腫瘍破壊機能の増大に対するビルリジン（商標）の効果を示すものである。末梢血単球を採取し、実施例９に記載した方法を用いて自己由来の腫瘍細胞に対する腫瘍破壊活性を測定した。このように、例えば耳／鼻／喉の癌を有する患者からの単球について、その患者自身の腫瘍細胞に対する腫瘍破壊活性を測定した。卵巣及び子宮内膜癌及び慢性骨髄性白血病の細胞を用いた類似の試験も行った。その結果は、次の表に記載し、用いる略語と用語は実施例２２に記載している通りである。用いる培地は、１０％の熱不活化胎ウシ血清と５０ユニット／ｍｌのペニシリンと５０ｕｇ／ｍｌのストレプトマイシンを捕捉した、ロズウェルメモリアルパークインスティテュート〔ＲＰＭＩ〕１６４０培地である。これらの結果は、ビルリジン（商標）が、癌患者からの外科的生検によって調製された自己由来の腫瘍細胞に対して、癌患者の大食細胞における腫瘍破壊活性を刺激することができることを示している。これらの結果から、ビルリジン（商標）は、γインターフェロンと内毒素との組み合わせの従来の賦活物質による刺激に応答しない癌患者の大食細胞をも刺激し得るものと思われる。実施例２４この実施例は、ビルリジン刺激単球における腫瘍破壊機能の増大に対する、サイトカイン特異性抗体の効果を示すものである。肺癌を有する患者と、慢性骨髄性白血病（CML）を有する患者からの末梢血単球を採取し、実施例９の方法に従ってチャンヘパトーマ細胞に対する腫瘍破壊活性を測定した。ビルリジン（商標）と抗ＩＬ１αあるいは抗ＩＬ１βあるいは抗ＴＮＦαあるいはイソタイプの対照抗体との組み合わせとともに、ビルリジン（商標）単独をも、単球の刺激を試験するために用いた。用いた抗体の量は、標準の方法に従った滴定実験によって定められるこれらの試験条件に対して飽和量であった。結果は次の表に示しており、用いる略語は実施例２３に記載の通りである。さらに、「抗ＩＬ１α」はインターロイキン１アルファに対する抗体であり、「抗ＩＬ１β」はインターロイキン１ベータに対する抗体であり、「抗ＴＮＦα」は腫瘍壊死因子アルファに対する抗体であり、「イソタイプ対照」は上記のサイトカインに無関係のエピトープに対する抗体である。この結果は、腫瘍壊死因子αに対する抗体がビルリジン（商標）によって誘導される腫瘍破壊機能を阻害することを示している。インターロイキン１αあるいはインターロイキン１βに対する抗体は、ビルリジン（商標）刺激単球の腫瘍破壊機能を減少させることができなかった。この結果は、ビルリジン（商標）に応答して増大する大食細胞腫瘍破壊機能が単球による腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）の生成に付随するという結論と合致している。実施例２５この実施例は、ビリリジン刺激末梢血単球における腫瘍破壊機能の増大に対する細胞毒性療法の効果を示すものである。緩解誘導化学療法（remission induction chemotherapy）の第一の過程の終期における癌患者から、末梢血単球を採取し、実施例９の方法を用いてチャンヘパトーマ細胞に対する腫瘍破壊活性を測定した。結果は次の表に開示し、用いる略語は実施例２４に開示している通りである。さらに「Ｐｔ」はシスプラチナであり、「５−ＦＵ」は、５フルオロウラシルであり、「ＲＴ」は放射線療法であり、「ＡｒａＣ」はシトシンアラビノシドである。「診断」という用語は、患者が持っていた癌のタイプである。「再発」という語句がここに挙げられている場合、癌が再発したか、さもなくば癌が新しく診断されたものである。「療法」という語は、患者が受けていた癌化学／放射線療法の養生法である。この結果は、ビルリジン（商標）が、細胞毒性療法を受けている癌患者から得た大食細胞における腫瘍破壊機能を刺激することを示している。従って、ビルリジン（商標）がその他の治療様相とうまく相互作用するものと思われる。注目すべきことは、ビルリジン（商標）が、γインターフェロンと内毒素の組み合わせのような従来の賦活物質に比べて、腫瘍破壊機能を刺激することにおいてより効果的であったという事実である。実施例２６この実施例は、子宮内膜症を有する患者における大食細胞の細胞毒性に対するビルリジンの効果を示すものである。子宮内膜症の患者からの末梢血単球と腹膜の大食細胞を実施例９のようにして採取し、チャンヘパトーマ細胞に対する腫瘍破壊活性及び子宮生検から得られた自己子宮内膜細胞に対する細胞毒性を測定した。この結果は、次の表に記載し、用いる略語と用語は、実施例２５と同様である。さらに「段階」はＲＡＦＳ（改訂アメリカ生殖学会）分類システムに基づく子宮内膜症段階を表すものである。この結果は、ビルリジン（商標）が、子宮内膜症患者からの末梢血単球及び腹膜の大食細胞を刺激して、子宮生検から得られた子宮内膜細胞を殺すことを示している。従って、本発明の組成物は、子宮内膜症に対する治療を提供することができる。実施例２７この実施例は、ビルリジン（商標）バッチの予備試験の結果を示すものである。静脈血液からの末梢血単球を採取し、処理し、実施例９に記載の手順によってチャンヘパトーマ細胞に対する腫瘍破壊活性を測定した。ビルリジンは実施例１にしたがって、調製した。結果は次の表に示し、用いる略語と用語は実施例２６と同様である。さらに「ドナー」は、末梢血単球を採取した患者の疾患の状態である。「正常」は患者が疾患を有しなかったことを意味する。「ENT CA」は患者が頭及び首（耳／鼻／喉）の癌を有していたことを意味する。この結果は、正常及び癌患者の単球におけるビルリジン（商標）によって誘導された腫瘍破壊活性は、従来の大食細胞賦活物質（ＩＦＮ−γ及びＬＰＳ）の組み合わせに応答して製造される活性に等しいかあるいはそれより大きいことを示している。実施例２８この実施例は活性画分の単離を示すものである。組成物の３００ｍｌのサンプルを、湯浴の温度が４０℃を越えないようなロトバップ上で蒸発させて乾燥させた。蒸発中溶液が塩基性を保つことを保証するため、濃縮水酸化アンモニウムの溶液５滴を、蒸発が終了するまで組成物に半時間毎に加えた。得られた残留物は１１．６ｇの重量であった。次にメタノールに溶かした１０％の濃縮水酸化アンモニウムの溶液２０ｍｌを、上記の残留物２ｇに加えた。不溶性の成分はろ過し、ろ液を、５ｃｍ×１２．５ｃｍの寸法を有するカラムで６０Åのフラッシュシリカゲル１０１．９３ｇを通してクロマトグラフィーにかけた。用いた溶媒系は、メタノールの中に溶かした１０％の濃度の水酸化アンモニウム溶液であった。カラムは、１０p.s.i.の圧力で１１ｍｌ／分の流量で流した。カラム中を１００ｍｌの溶媒が通過した後、１２個の２０ｍｌの画分を採取した。これらの画分の集まりは、カラム中をすばやく下方に移動するオフホワイトの帯の出現と相関していた。これらの画分の薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を、メタノールに溶かした１０％の濃度の水酸化アンモニウム溶液中でシリカゲル板上で行い、ニンヒドリン噴霧により可視化した。同様のＴＬＣプロフィールを有する画分が結合されて次の画分組み合わせを得、ロトバップ上で乾燥させた。画分５−６、７−８及び９−１０は、０．８１のＲ_f値においてニンヒドリンと正の反応を示した。画分５−６及び９−１０は、（実施例９に従い）生体外でＴＮＦ刺激を試験した。結果は以下に示す通りである。このように、画分９−１０は非常に活性なＴＮＦ刺激物質であった。画分５−６のサンプルを電子衝撃質量スペクトル分析計（ＥＩＭＳ）及び電子スプレー質量スペクトル分析計を用いて解析し、画分中に存在すると予想される特定の化合物を同定した。電子スプレーＭＳは、５％の酢酸水溶液を溶質として、パーキンエルマーサイエックス（Perkin-Elmer Sciex）ＡＰＩ−ＩＩＩスペクトル分析計を用いて行われた。いくつかの場合、溶解を助けるためメタノールが加えられた。直接の挿入探子を用いるＥＩＭＳが、グリセロールをマトリックスとして用い、クラトス解析プロフィール質量分析計上のＤＣＩ探子を用いて、ＶＧ解析モデルΣＡＢ−ＳＥスペクトル分析計上で行われた。得られたスペクトルの検討から次の化合物、すなわちフォスフォコリン、タウロコール酸、コリンステアリン酸ジグリセリド、ステアリン酸、ステアリン酸ジグリセリド、パルミチン酸ステアリン酸ジグリセリド、及びスフィンゴシンオレイン酸抱合体が画分５−６に存在していると予想されることが示された。実施例２９この実施例は、活性画分を単離する拡張手順を例示する。実施例２８を下記のようにより大きなスケールで繰り返した。濃縮水酸化アンモニウム溶液１０ｍｌを組成物９００ｍｌに加え、得られた溶液を浴の温度が４０℃以下のロトバップで蒸発乾燥させた。蒸発中溶液の塩基性を保つために濃縮水酸化アンモニウム溶液５滴を蒸発が完了するまで半時間毎に組成物に加え、残留物を残した。次に１０％濃縮水酸化アンモニウムのメタノール溶液１５０ｍｌを全残留物に加えた。この溶液を１５分間超音波処理し、不溶性の物質を濾過した。濾液を寸法３０ｃｍｘ１２ｃｍのカラムで６０Ａのフラッシュシリカゲル１６９５ｇを通してクロマトグラフに付した。使用した溶媒系は１０％濃縮水酸化アンモニウムのメタノール溶液であった。カラムは圧力６ｐ．ｓ．ｉ．、流量３０ｍｌ／分で行った。カラムの結果を下記の表にまとめる。ＴＬＣを濃度１０％水酸化アンモニウム溶液中、シリカゲル板で行い、ニンヒドリンスプレーで視覚化した。類似のＴＬＣプロフィールを有する画分を組み合わせたところ、下記の画分組み合わせが得られた。これらはロトバップで乾燥させた：１５−１６から３１−３４までの画分組み合わせはすべて、実施例２８の活性画分のＲ_f値に非常に近いＲ_f値０．８７でニンヒドリンに陽性反応を有した。画分２４−３０及び３１−３４は、さらにＲ_f値０．８５でもニンヒドリンに陽性反応を有した。画分４−５、１５−１６及び１７−１８は、生体外でＴＮＦ刺激について（実施例９に準じて）試験したが、ＴＮＦ刺激活性を示さなかった。上記の画分を基礎分析したところ、上記の画分はＴＮＦ生成を阻害することが知られているＮＨ４Ｃｌが高いことが分かった。画分１５−１６及び２４−３０のサンプルを透析し、実施例２８に記載の方法を用いてマススペクトロスコピーによって分析した。画分１７−１８及び２４− ３０の未透析のサンプルも分析した。得られたスペクトルを調べたところ、次の化合物がおそらく存在することを示した：グリココール酸、トリヘキソサミン三量体及びタウロコール酸（画分１５−１６）；ステアリン酸及びヘキソサミン二量体；及びグリココール酸（画分２４−３０）。実施例３０この実施例は、発明の組成物の活性成分を分画、分析するさらなる方法の適用を例示する。ＴＮＦ、ＩＬ−１β及びＧＭ−ＣＳＦ放出活性が８０％アセトニトリルによって部分的に沈澱でき、放出活性の多くがＣｌ８ＲＰ−ＨＰＬＣから初期に溶出することを確認したので、沈澱画分の物理化学的特性を調べ、組成物全体及び組成物の上清画分と比較した。図１１は、組成物全体及び組成物の沈澱物と上清のＳＤＳゲル電気泳動を示す。３つの例全てで、組成物はＳＤＳ前方付近に泳動され、分子量が低いことを示した。使用した最小の標準は１４，４００ダルトンであった。組成物の分子の大きさもまた、分子ふるいＨＰＬＣカラムからの溶出時間を測定することによって調べた。組成物全体、沈澱物及び上清の溶出時間を標準と比較した。３例とも２４．５分で溶出するインシュリンより遅かった。物理化学分析は、再び分子量が２，４００ダルトンより小さいことを示す。ＴＮＦ−放出成分は、初期に溶出する。従って、反対の効果を有するカラム、有機溶媒の存在する親水性カラムが選択された。ポリヒドロキシエチルカラムの理想的溶出条件は、８０％アセトニトリルである。しかしながら、前実施例で述べたように、調整物質の中にはこの濃度では沈澱するものがあった。それ故、組成物の分析は、カラムがほぼ分子ふるいカラムとして機能するアセトニトリルの低濃度で行った。図１２、１３は上清及び沈澱物全体のプロフィールを示す。いちばん前の紙は、異なるピークについての溶出時間をまとめたものである。溶出時間は組成物の活性成分が低い分子量を有することを示す。組成物とその沈澱物と上清をイオン交換ＨＰＬＣによって分離した。ＡＸ３００クロマトグラフィー（陰イオン交換）とＣＭＸ３００クロマトグラフィー（陽イオン交換）の双方によって、成分を有意に分離した。疎水性逆相クロマトグラフィーではピークは分離しなかった。別の一連の実験では、ビルリジン^TMを陰イオン交換クロマトグラフィーカラム（Ｂｉｏ−ＲａｄＡＧー１、水酸化物型、全樹脂湿潤体積１０ｍｌ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ脱イオン水で平衡）に装填した。樹脂の体積は、抽出物中に存在する全ての陰イオンの結合に充分であるよう計算した。未結合の画分は収集し、樹脂への結合を最大にするためにカラムに再装填した。この２回目の経過の未結合画分は収集し、取りのけた。カラムの空隙に残った未結合物質はいずれも脱イオン水（２ｘ２０ｍｌ）で洗浄して除去した。結合分子は炭酸水素アンモニウムのステップグラジエント、２０ｍｌ／ステップで溶出させた。遊離炭酸水素アンモニウムは、凍結乾燥によって除去した。すべての画分からのサンプルを単球／大食細胞活性化試験でＴＮＦ放出活性について試験した。ＴＮＦ放出活性は、未結合画分（放出液）には見られなかったが、大部分は０．２Ｍの炭酸水素アンモニウムで溶出させた溶出液中に見られた。これらの結果から、活性成分が極性を持ち、陰イオン性で、酸性であることが分かった。画分全てのサンプルを実施例２の手順に準じてＴＮＦ刺激活性について分析した。結果を下記にしめす：活性アッセイの結果からＴＮＦ生成刺激が０．２Ｍ及び０．４Ｍ画分で見られたことが分かる。組成物を下記のように、透析に付し、透析物を乾燥した：１００の分子量遮断を持つＳｐｅｃｔｒａ／ＰｏｒＣＥ膜管内に組成物１００ｍｌを入れた。管の両端をクリップで封止し、管を蒸留水１０Ｌの撹拌浴中に入れた。透析管から溶液を１ｍｌを除去し、１／１０Ｎ硝酸銀溶液を３〜４滴加えることによって透析を毎日モニターした。塩素が存在すれば透析が完了していないことが分かる。透析が完了していない場合、浴は新しい蒸留水と交換した。３〜４日後、透析は完了した。透析完了後、透析した物質をロトバップにかけて乾燥し、原体積の１ｍｌにつき、平均０．３ｍｇの固体分を得た。固体物質のサンプルを次にＨＰＬＣグレード水に溶解し、ＴＬＣを１０％濃縮水酸化アンモニウムのメタノール溶液中、シリカゲル板で実施し、ニンヒドリンスプレーで視覚化した。Ｒ_f値０．８３でニンヒドリンに対する陽性反応が得られた。固体物質のサンプルもまた、実施例２８に記載の方法を用いてマススペクトロスコピーによって分析した。得られたスペクトルを調べたところ、次の化合物がおそらく存在することを示した：スフィンゴシン−オレイン酸抱合体、ジアセチルシアル酸、フコース−ヘキソサミン二量体、デオキシグリココール酸、タウロコール酸、シアル酸−フコース二量体及びジ（フコース）ヘキソサミン三量体。実施例３１この実施例は、発明の組成物を分析するための逆相−ＨＰＬＣ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）の使用を例示する。サンプルを凍結乾燥した後、０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液（緩衝液Ａ）中で再構成し、次に下記のカラムに下記条件で流した：カラム：ＷＰ６０００９−Ｃ１８カラム（Ｗ−ＰＯＲＥＣ１８、２５０ｘ４．６ｍｍ、フェノメネックス、カリフォルニア）とプライム−スフィアＨＣ−Ｃ１８カラム（２５０ｘ４．６ｍｍ、フェノメネックス、カリフォルニア）を一列に配置。溶離液：緩衝液Ａ：０．１％ＴＦＡ水溶液緩衝液Ｂ：０．１％ＴＦＡアセトニトリル溶液グラジエント：カラムにサンプル１５０μｌを装填緩衝液Ａを２０分間注入、直線グラジエントを開始、０−８０％緩衝液Ｂ、３５分間で注入、８０−０％緩衝液Ｂを５分間で注入流量：０．９ｍｌ／分温度：室温検出：吸光度２９０〜２８４ｎｍ、ほとんどの溶出が２１０〜２３５で検出。下記の表に記したおおよその注入後経過時間で１５の溶離液画分を収集した。また、実施例２記載のＴＮＦ放出試験を各画分について行ったところ次の結果を得た：従って、ビルリジンの活性成分の大部分が画分１に溶出した。活性は画分４− ５、８−９、１１−１２及び１４にも見られた。全てのＲＰ−ＨＰＬＣ画分からのサンプルを実施例２８に準じマススペクトロスコピーによって分析した。各画分について得られたスペクトルを調べたところ、次の化合物がおそらく存在することを示した：タウロコール酸、シアル酸−グリセロール二量体、ＮａＣｌ、トリメチルアミン、メチルエチルアミン、及びプロピレンアミン。実施例３２この実施例は、発明の組成物中同定された化合物を示す。発明の組成物を実施例１に準じて調製し、標準分画方法に付した。この方法には、（１）１００ＭＷＣＯ透析膜での透析；（２）フォルチ抽出(タマリら、Agr .Biol.Chem.,40(10),2057-2067(1976))を含む公知の有機抽出；（３）シリカカラムクロマトグラフィー；（４）イオン交換クロマトグラフィー；及び（５）薄膜及びペーパークロマトグラフィーのための染色試薬(Dting Reagents fit Thin LAter and Paper Chromatography)(E.Merck，Darmstadt，ドイツ(1997))に開示の標準的方法を用いて、溶離液としてブタノール：酢酸：水、６：２：２を、視覚化試薬としてニンヒドリンを用いる、分取シリカＴＬＣ分画を含む。化合物の同定は、独立して又は組み合わせて用いられる下記の器具類及び手法に基づいた。ＶＧ７０−２５０ＳスペクトロメータをＥＩ−ＭＳ、ＣＩ−ＭＳ（ＯＨ−）及びＦＡＢ−ＭＳ（グリセロール又はチオグリセロールマトリックスで）を得るのに用いた。ＶＧ分析モデルＺＡＢ−ＳＥ器具をＥＩ−ＭＳ、ＦＡＢ−ＭＳ（グリセロール又はチオグリセロールマトリックスで）及びＧＣ−ＭＳを得るのに用いた。その器具と組み合わせて用いたガスクロマトグラフ（ＧＣ）は、ヒューレットパッカードのモデル５８９０であった。クラトス（Ｋｒａｔｏｓ）プロフィールスペクトロメータをＥＩ−ＭＳ、ＬＳＩＭ−ＭＳ（グリセロール及びＮＰＯＥマトリックスて）及びＧＣ−ＭＳマススペクトルを得るのに用いた。器具と組み合わせて用いたＧＣもまた、ヒューレットパッカードのモデル５８９０であった。ＭＳ−ＭＳ、溶質として水又は水アルコール（メタノール又はイソプロピルアルコール）混合物、ＥＩ−ＭＳ、グリセロール又はチオグリセロールマトリックスでのＦＡＢ−ＭＳは、パーキン−エルマーサイエックス（ｐｅｒｋｉｎ−ＥｌｍｅｒＳｃｉｅｘ）ＡＰＩ−ＩＩＩスペクトロメータで実行した。画分は、ＭＳ分析のため必要とされるように、無水酢酸／ピリジンによるアセチル化又はジアゾメタンによるメチル化によって誘導体化した。分子のナトリウム化した種への変換は、酢酸ナトリウムをエレクトロスプレー溶質に追加することによって達成した。エレクトロスプレーＭＳのための分子のプロトン化は、酢酸又はトリフルオロ酢酸を用いて実行した。抽出物及び標準のＴＬＣは、移動相としてブタノール：酢酸：水を６：２：２で、又は引用する溶質及び視覚化のための数種の試薬スプレーを用いてシリカＴＬＣ板で行った。前述の器具に組み合わせて、次の参考文献にさらに記載された標準的方法を用いた：リーガーら、J.Chromatography，277, 321-327(1983); サンダラムら、Cl inica Chimica Acta，34 425-429(1971)；バンダルスキら、J.Biol.Chem.,193 4 05-410(1951)；及びラルソンら、J.Chromatography，226，481-487(1981)。シリカ板上での典型的ＴＬＣプロフィール（溶質としてブタノール：酢酸：水を６：２：２で用いる）は、ビルリジンの活性ロットのために表に作成している：前述の器具類と方法を用いる、発明の組成物の分析によって、組成物中に次の化合物が含まれていることが明らかになった：１）胆汁酸：コール酸；グリココール酸；デオキシグリココール酸；硫酸コレステロール；デオキシコール酸；ケノ（ｃｈｅｎｏ）デオキシコール酸；及びタウロコール酸。注：−ＯＨ及び−Ｈ₂がＭＳに起こっているか、デオキシ、ジデオキシ及び不飽和類似体もまた始めに存在するかは、ＭＳからは判別できない。これらの化合物はすべて、アンモニウム、アルキルアンモニウム及び無機陽イオン塩として存在することもある。２）リン脂質、スフィンゴ脂質、及び関連（加水分解）生成物：ステアリン酸、ＣＨ₃（ＣＨ₂）₁₆ＣＯＯＨ；パルミチン酸、ＣＨ₃（ＣＨ₂）₁₄Ｃ００Ｈ；オレイン酸Ｚ−９オクタデカン酸：ＣＨ₃（ＣＨ₂）₂ＣＨ₂ＣＨ＝ＣＨＣＨ₂（ＣＨ₂）₆ＣＯＯＨ酸化又はヒドロキシル化／不飽和短鎖脂肪酸Ｃ₆Ｈ₈Ｏ₃（ＣＨ₃ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯＣＨ₂ＣＯＯＨ又は２つの２重結合と水酸化物をもつＣ₆の酸）等；酢酸；ステアリン酸ジグリセリド；パルミチン酸ジグリセリド；ステアリン酸パルミチン酸ジグリセリドステアリン酸モノグリセリド−ホスホコリン（リソレシチン）；ステアリン酸モノグリセリド；ステアリン酸トリグリセリド；ホスホコリン；ホスホセリン；ホスホスフィンゴシン；スフィンゴミエリン；レシチン；ステアリン酸−スフィンゴシン；スフィンゴシン；ホスホグリセロール；グリセロール；コリン；グリセロ−ホスホコリン；ステアリン酸、オレイン酸ジグリセリド；ステアリン酸、オレイン酸ホスホグリセロール；ステアリン酸アミド；ステアリン酸メチルアミン；及びパルミチン酸アミド。また、短鎖の脂肪酸（Ｃ１からＣ３０の範囲の酸）も存在していることを示す予備ＨＰＬＣ及び滴定による証拠が得られている。３）ムチン加水分解生成物：シアル酸類及びそのモノ及びジアセチル化単量体；Ｎ−アセチルノイラミン酸；グルコサミン等のヘキソサミン類；Ｌ−フコース；ヘキソサミン−ヘキスロン酸（単量体）二硫酸塩；グルクロン酸；グルクロン酸又はイズロン酸二硫酸塩、モノアセチル化物；シアル酸−グリセロール（二量体）；及び上記モノマーのアセチル化及び硫酸化物の形態の二量体、三量体、オリゴマー及びポリマー。（４）脂溶性ビタミン：ビタミンＡ２；ビタミンＤ１；ルミステロール（そのビタミンＤ１複合体から存在）；ビタミンＥ；ビタミンＫ１酸化物；及びビタミンＫ５。（５）その他の有機物：尿素；メチルアミン、ジメチルアミン、エチルアミン、メチルエチルアミン、ジエチルアミン、ジプロピルアミン、ブチルエチルアミンを含むアルキルアミン類；タウリン、グルタミン酸、グリシン、アラニン、ｎ−ロイシン、ホスホセリン、ホスホエタノールアミン、アスパラギン酸、トレオニン、セリン、サルコシン、 α−アミノアジピン酸、シトルリン、バリン、イソロイシン、β−アラニン、γ −アミノブチル酸、ヒドロキシリシン、オルニチン及びリジンを含むアミノ酸類；ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）；及びポリエチレングリコール。実施例３３本実施例は、本発明のサッカリド化合物を示す。サンプルのモノサッカリド組成物を加水分解の前後で測定した。モノサッカリドの分析のため用いた試薬はすべて、分析用グレードであった。アルドリッチ（Ａｌｄｒｉｃｈ）から得たＴＨＦ（トリフルオロ酢酸）を脱イオン化水で希釈した後、サンプルの加水分解に用いた。５０％の（Ｗ／Ｗ）ＮａＯＨ溶液（炭酸塩が低い）をフィッシャーサイエンティフィック（ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）より購入した。酢酸ナトリウムは、ニューヨークのフルカゲランティ（Ｆｌｕｋａ−Ｇｅｒａｎｔｉｅ）より購入した。モノサッカリドを放出させるために、サンプルを４Ｍのトリフルオロ酢酸で１００℃で４時間処理した。サンプルは凍結乾燥し、ＣａｒｂｏｐａｃｋＰａｌ分離カラム（２５０ｘ４ｍｍｉ．ｄ．）と２５ｕｌサンプルループを装着したＨＰＬＣ−ＡＧ６ガードカラム（５０ｘ４ｍｍｉ．ｄ．）とを有する炭水化物のためのＤｉｏｎｅｘＢｉｏ−ＬＣシステムを用いて高性能液体クロマトグラフィ−陰イオン交換によって分析した。溶出するモノサッカリドの検出は、ＰＡＤ、即ちパルスアンペロメトリック（電流計）検出器を用いて行った。条件は下記の通り：加水分解前イノシトール、シアル酸及びグルクロン酸の検出のため、無勾配の溶出溶離液（１００ｍＭＮａＯＨ＋１５０ｍＭＮａＯＡｃ混合物）を用いた。溶離液は、ヘリウムモジュール脱ガス剤で雰囲気から保護した。流量は、カラムを通じて１ｍｌ／分であった。フコース、ガラクトサミン、ガラクトース、グルコース及びマンノースを含むモノサッカライドの検出もまた、無勾配溶出、ポストカラム３００ｍＭＮａＯＨを有する溶離液（１５ｍＭＮａＯＨ）、流量１ｍｌ／分で行った。検出器の設定は、Ｅ１＝０．０５Ｖ、Ｅ２＝０．６０Ｖ、Ｅ３＝０，６０Ｖ，ｔ１＝１２０ｍｓ，ｔ２＝１２０ｍｓ，ｔ３＝３００ｍｓ；金加工電極；銀＝塩化銀基準電極；出力範囲１ー３ＫｎＡｍｐ最大；チャートスピード０．５ｃｍ／分。ウロン酸とモノサッカリドについて検出器で測定を行った。標準混合物の漸進的希釈によって０．５〜２．５ｕｇで変化する濃度について直線的応答が得られた。加水分解後サンプルの加水分解後、グラジエント溶出、溶離液Ａ（５０ｍＭＮａＯＨ）及び溶離液Ｂ（５０ｍＭＮａＯＨ／１５０ｍＭＮａＯＡｃ混合物）、を適用した後、モノサッカリドを検出した。溶離液は、ヘリウムモジュール脱ガス剤によって雰囲気から保護した。スペクトラ−フィジックス（ＳＰ４２７０）インテグレータを用いて流出物を分析した。標準グラジエントは１００％溶離液Ａ、次の１０分間で８０％のＡ：２０％のＢへと直線的に進む注入であった。この状態を２０分間維持し、次に５分間で溶離液を１００％のＡに戻し、続いて次のサンプルを注入する前に少なくとも１０分間平衡させた。記載のモノサッカリドの分析結果を下記の表に示す：表から分かるように、緑色の胆汁（バッチＭＵ１００ＧＢ）の酢酸エチル抽出物のみが加水分解に以前にモノサッカライド、即ちシアル酸とグルクロン酸をミリリットルにつきマイクログラムの濃度で含むことが示された。加水分解後、シアル酸は検出されず、グルクロン酸は約２０％の濃度で存在した。加水分解後、発明の組成物のその他の調製物は、シアル酸、グルクロン酸、グルコサミン及びイノシトールを含むことが示された。発明の特定の実施態様を説明のためここに記載してきたが、本発明の精神と範囲から離れることなく様々に変化させることができると前記より理解されるであろう。従って、この発明は添付の請求項のみによって限定されるものではない。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】１９９７年６月１７日【補正内容】ＩＬ−４、ＧＭ−ＣＳＦ又はＩＦＮ−γを測定できるレベルで含まない、ｅ）ヒト末梢血液単核細胞又はリンパ球に細胞毒性を示さない、及びｆ）内毒素ではないを有する免疫調節剤として使用するための組成物に関する。好ましい具体例によれば、組成物は、ウシの胆汁から抽出され、ＴＮＦの放出を刺激できる。この発明の組成物は、（ａ）動物、好ましくはウシ由来の胆汁を、水溶性又は水混和性溶剤、好ましくはアルコール、好ましくは同容量のアルコールと混合し、胆汁／アルコール溶液をつくり、（ｂ）溶液、好ましくはアルコール溶解画分を分離し、例えば熱の使用で、アルコールの大部分を除去するようにして、実質的にアルコールのない溶液を単離し、（ｃ）溶液から胆汁色素を除去して、澄明な黄色がかった液体を得、（ｄ）任意に、澄明な黄色がかった液体を処理して、実質的に残留アルコールを除去し、（ｅ）澄明な黄色がかった液体をエーテルで抽出するようにして有機脂肪分を除去し、水相を単離し、かつ（ｆ）任意に水相から残留エーテルを除去するｃ）腫瘍壊死因子産生を調節できる、ｄ）ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＴＮＦ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−４、ＧＭ −ＣＳＦ又はＩＦＮ−γを測定できるレベルで含まない、ｅ）ヒト末梢血液単核細胞又はリンパ球に細胞毒性を示さない、及びｆ）内毒素ではないを少なくとも１つ有する免疫調節剤として使用するための組成物に関する。より詳しくは、この発明の細胞物の少なくともあるものが、チャン（Chang）ヘパトーマ細胞に対する細胞毒性をもたらす正常単球を刺激するという研究がなされており、そのテストは単球と大食細胞の活性化を測定するのに用いられている。また、癌患者（頸部、卵巣、耳／鼻／喉、肺及び子宮内膜癌、カポジ肉種、及び慢性骨髄性肉腫を含む）由来の単球及び／又は大食細胞が、その組成物で刺激され、これら自体の特有の癌細胞を攻撃、破壊することも分かった。その上、子宮内膜症の患者由来の大食細胞が、同様にこの組成物で活性化されることが分かった（実施例２６参照）。この発明の組成物は、腫瘍懐死因子（ＴＮＦ）の産生を調節できる。ウシの胆汁から単離されるこの発明の好ましい組成物は、ヒト末梢血液単核細胞と前単球細胞系Ｕ−９３７からのＴＮＦの放出を恐らく生理的量で促進する。ＴＮＦは、炎症及び抗腫瘍性サイトカインの作用のカスケードを開始することが知られていることから、好ましい組成物は、ヒト白血球を刺激してＴＮＦ（及びおそらく他のサイトカイン）を放出する抗腫瘍作用をもたらす。従って、この発明は、癌細胞に対するリンパ球と大食細胞の細胞毒性をも強化しうる。この組成物のヒト末梢血液単核細胞（ＰＢＭＮｓ）とリンパ球の生存効果も調べた。この組成物は、ヒトＰＢＭＮｓとリンパ球に非細胞毒性であることが分かった。以下でさらに例示するように、この発明の組成物は、中でも次の特徴を有する。１）ＰＢＭＮｓからのＴＮＦ放出に応答しうる成分又は成分数は、Ｃ₁₈ＲＰ−ＨＰＬＣカラムから早期に溶出した。２）この組成物は、インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）の放出を生じ、かつＩＬ−１β放出に応答しうる成分はＰＲ−ＨＰＬＣから早期に溶出し、このことはＴＮＦを放出する同じ物質（群）とみられる。３）この組成物は、低い量のインターロイキン−２（ＩＬ−２）の放出をも生ずる。４）この組成物は、顆粒球マクロファージ・コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）の放出を生ずる。（ａ）生体外又は生体内で、単球及び大食細胞を刺激して１以上のサイトカインを産生することができる；又は（ｂ）単球又は大食細胞を刺激して生体外又は生体内で腫瘍壊死因子を産生することができる；かつの少なくとも一つを有し、内毒素、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＴＮＦ、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＧＭ−ＣＳＦ又はＩＦＮ−γではない。かかる組成物は、動物、好ましくはウシの胆汁から、あるいは前記のその他の源から得られる。この組成物の好ましい実施態様において、この組成物は、生体外又は生体内で、もっとも好ましくは人で、外因性のＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＴＮＦ、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＧＭ−ＣＳＦ及びＩＦＮ−γなしで、腫瘍壊死因子の産生を刺激する。この発明の組成物は、カラムクロマトグラフィーによって特徴づけられる成分を有する。すなわち、該組成物を乾燥して固体の残渣を得、該残渣の２ｇをメタノール中１０％濃縮水酸化アンモニウム溶液の２０ｍｌに溶解し、不溶物を除去したのち、５ｃｍｘ１２．５ｃｍの寸法を有し、６０Åのフラッシュシリカゲル１０２ｇを充填したメタノール中のカラムクロマトグラフィーに付し、平方インチあたり１０ポンドの圧力で、メタノール溶媒溶液中の濃縮水酸化アンモニウム溶液で、１１ｍｌ／分の流速で操作し、カラムの総溶出液が約１８０〜約２２０ｍｌ、約２２０ｍｌ〜約２６０ｍｌ、又は約２６０ｍｌ〜約３００ｍｌであるときに採取した画分において該成分がカラムから患を含み、慢性関節リューマチ、狼瘡、多発硬化症及びＡＬＳを含む免疫系応答機能障害によって引き起こされるか又はその結果としてのその他の異常、細菌、真菌、マイコプラズマ、原虫を含む感染症及び他の日和見感染症の治療方法をも提供する。その方法は、この発明の組成物の治療有効量を上記の疾患の一つに苦しめられている患者に投与することからなる。さらに、この発明は、この発明の組成物がアジュバントとしてそのようなワクチンに加えられる、ＨＩＶ、種々の小児疾患及びその他の疾患に対する予防接種の方法も提供する。また、この発明を成す一部は、（１）スフィンゴシンもしくは塩とのスフィンゴシン錯体のミセル、又は（２）次の性質：（ａ）生体外で単球と大食細胞を刺激して１以上のサイトカインを産生することができる；又は（ｂ）単球又は大食細胞を刺激して生体外又は生体内で腫瘍壊死因子を産生することができる；の少なくとも１つを有するレチノイン酸もしくはその誘導体のミセルからなる組成物である。このミセルは、ジアシルグリセライド又はレシチンを含んでいてもよく、さらに胆汁酸塩及びアンモニウムもしくはアルキルアンモニウムイオン源を含んでいてもよい。最後に、この発明は、（１）スフィンゴシン、胆汁酸塩及びアンモニウムもしくはアルキルアンモニウムイオンの源、（２）胆汁酸塩、スフィンゴシン、ジアシルグリセロール、アンモニウムもしくはアルキルアンモニウムイオンの源及びレチノール誘導体、（３）ジアシルグリセライド、レシチン及び胆汁酸塩、又は（４）（ａ）ジアシルグリセライド、（ｂ）レシチン、及び（ｃ）次の性質：（ａ）生体外で単球と大食細胞を剌激して１以上のサイトカインを産生することができる；又は（ｂ）単球または大食細胞を刺激して生体外又は生体内で腫瘍壊死因子を産生することができる；の少なくとも１つを有するムチンの加水分解生成物又はプロテオグリカンの加水分解生成物を含む組成物も意図している。以下の実施例は、この発明を説明するものであるが、制限するものではない。実施例１この実施例は、本発明の組成物の製造を記載し、例証している。ウシ胆汁を、少なくとも１歳半の健康な牛（雄ならびに雌の両方）から除去した胆嚢から採取した。これらの牛は、食品用に認可され、検査された屠殺場で屠殺された。屠殺した動物を検査して屠殺前の健康を評価し、胆嚢を肝臓から分離して獣医師により調べ、胆嚢に寄生体と感染の形跡がなく、このために本発明の胆汁源としての使用に好適であったことを確認した。この検査をパスした胆嚢を以下の方法に付した：胆嚢を７０％エタノール溶液で拭き、嚢の外側を清浄にし、

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者ペルチェソン、ポール、ビーカナダ、オンタリオエル９ピーアイアール４、アクスブリッジ、アールアール＃４、コンセッション 74300

Claims

【特許請求の範囲】１．３０００ダルトンより小さい小分子量成分からなり、次の性質：ａ）動物の胆汁から抽出できる、ｂ）生体外と生体内で単球及び大食細胞を刺激できる、ｃ）腫瘍壊死因子の産生を調節できる、ｄ）ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＴＮＦ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−４、ＧＭ −ＣＳＦ又はＩＦＮ−γを測定できるレベルで含まない、ｅ）ヒト末梢血液単核細胞に細胞毒性を示さない、かつｆ）内毒素ではないを有する、膵臓癌、悪性黒色腫、卵巣癌、ＥＮＴ癌、子宮内膜癌、肺癌及びカポジ肉腫からなる群から選択される癌の治療用組成物の使用。２．３０００ダルトンより小さい小分子量成分からなり、次の性質：ａ）動物の胆汁から抽出できる、ｂ）生体外と生体内で単球及び大食細胞を刺激できる、ｃ）腫瘍壊死因子の産生を調節できる、ｄ）ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＴＮＦ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−４、ＧＭ −ＣＳＦ又はＩＦＮ−γを測定できるレベルで含まない、ｅ）ヒト末梢血液単核細胞に細胞毒性を示さない、かつｆ）内毒素ではないを有する、子宮内膜症の治療用組成物の使用。３．３０００ダルトンより小さい小分子量成分からなり、次の性質：ａ）動物の胆汁から抽出できる、ｂ）生体外と生体内で単球及び大食細胞を刺激できる、ｃ）腫瘍壊死因子の産生を調節できる、ｄ）ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＴＮＦ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−４、ＧＭ−ＣＳＦ又はＩＦＮ−γを測定できるレベルで含まない、ｅ）ヒト末梢血液単核細胞に細胞毒性を示さない、かつｆ）内毒素ではないを有する、膵臓癌、悪性黒色腫、卵巣癌、ＥＮＴ癌、子宮内膜癌、肺癌及びカポジ肉腫からなる群から選択される癌の治療用薬剤の製造用組成物の使用。４．３０００ダルトンより小さい小分子量成分からなり、次の性質：ａ）動物の胆汁から抽出できる、ｂ）生体外と生体内で単球及び大食細胞を刺激できる、ｃ）腫瘍壊死因子の産生を調節できる、ｄ）ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＴＮＦ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−４、ＧＭ −ＣＳＦ又はＩＦＮ−γを測定できるレベルで含まない、ｅ）ヒト末梢血液単核細胞に細胞毒性を示さない、かつｆ）内毒素ではないを有する、子宮内膜症の治療用薬剤の製造用組成物の使用。５．組成物が筋肉内注射される、請求項１に記載の使用。６．組成物が筋肉内注射される、請求項２に記載の使用。