CN117959755A - 一种黄酮类化合物的定向富集方法及其定向富集物 - Google Patents

一种黄酮类化合物的定向富集方法及其定向富集物 Download PDF

Info

Publication number
CN117959755A
CN117959755A CN202310806931.XA CN202310806931A CN117959755A CN 117959755 A CN117959755 A CN 117959755A CN 202310806931 A CN202310806931 A CN 202310806931A CN 117959755 A CN117959755 A CN 117959755A
Authority
CN
China
Prior art keywords
carrying
parts
directional
turbidity
enrichment
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202310806931.XA
Other languages
English (en)
Inventor
杜一杰
赵斯琪
李晓凯
郑晓阳
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Nutri Woods Bio Tech Beijing Co ltd
Taihe Kangmei Beijing Research Institute of Traditional Chinese Medicine Co Ltd
Original Assignee
Nutri Woods Bio Tech Beijing Co ltd
Taihe Kangmei Beijing Research Institute of Traditional Chinese Medicine Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nutri Woods Bio Tech Beijing Co ltd, Taihe Kangmei Beijing Research Institute of Traditional Chinese Medicine Co Ltd filed Critical Nutri Woods Bio Tech Beijing Co ltd
Priority to CN202310806931.XA priority Critical patent/CN117959755A/zh
Publication of CN117959755A publication Critical patent/CN117959755A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Landscapes

  • Extraction Or Liquid Replacement (AREA)

Abstract

本发明涉及黄酮类化合物的制备技术领域，具体而言，涉及一种黄酮类化合物的定向富集方法及其定向富集物。本发明黄酮类化合物的定向富集方法，包括以下步骤：将豆科植物、溶剂及活性炭的第一混合体系进行热回流提取，再进行第一固液分离并收集第一液相体系；采用碱性物质调节所述第一液相体系的pH，得到第二混合体系；将所述第二混合体系与甘草酸、甘草次酸和甘草酸盐中的至少一种混合后进行热处理，再进行第二固液分离，收集第二液相体系。本发明的方法通过各个步骤相互配合，能够使豆科植物中的黄酮类化合物定向富集并有效去除杂质，定向富集物中的黄酮类化合物的相对含量高。

Description

一种黄酮类化合物的定向富集方法及其定向富集物
技术领域
本发明涉及黄酮类化合物的制备技术领域，具体而言，涉及一种黄酮类化合物的定向富集方法及其定向富集物。
背景技术
豆科植物是人类获得黄酮的有效来源之一。在植物苯丙氨酸代谢过程中，由肉桂酰辅酶A侧链延长后环化形成以苯色酮环为基础的酚类化合物，其3-苯基衍生物即为黄酮，属植物次生代谢产物，化学式为C15H10O2。精制的黄酮呈片状或针状结晶。一般无色，但随着羟基的增加，可呈黄至深黄色。
豆科植物含有的黄酮具有和雌二醇相似的结构，常常用作植物雌激素，当体内雌性激素不足时，豆科植物的黄酮类化合物可以代替雌激素与受体结合，比如妇女绝经时期雌激素水平降低，能起到替代作用，避免潮热等停经期症状发生；当体内雌激素水平过高时，又可以与雌激素以“竞争”的方式与受体结合，降低体内雌激素水平过高带来的影响。这种抗雌激素作用，降低受雌激素激活的癌症如乳腺癌的风险。此外，黄酮类物质可以通过调节ER影响JAK-STAT信号通路，进而抑制肝细胞癌及肝纤维化的发展；降血脂、抗脂质过氧化以及心肌保护方面都有应用；并且介导细胞内NF-κB级联和丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路来对免疫组织细胞进行调节，从而达到调节机体免疫功能的作用。
黄酮类物质在食品、保健领域也有着广泛的应用。豆科植物是常见的食品原料，其中许多可作为蔬菜炒食或做汤，市面上常常加工成很多特色的食品或辅料，如鱼面、面条、粉丝、饼干、酸奶、酒、茶、饮料、冰淇淋、软糖、果冻、面鱼、馒头、果糕、蛋糕和面包等。
黄酮类化合物由于其结构特性，在醇、水等常用溶剂中溶解效果均不理想，因此豆科植物提取物中黄酮相对含量并不高，需要进行复杂的步骤进行除杂纯化，才能提高黄酮的相对含量。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的一个目的在于提供一种黄酮类化合物的定向富集方法，该方法可提高豆科植物提取物中黄酮的相对含量。
本发明的另一个目的在于提供一种所述的黄酮类化合物的定向富集物，黄酮含量高。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
一种黄酮类化合物的定向富集方法，包括以下步骤：
将豆科植物、丁二醇溶液及活性炭的第一混合体系进行热回流提取，再进行第一固液分离并收集第一液相体系；采用碱性物质调节所述第一液相体系的pH，得到第二混合体系；将所述第二混合体系与第一物料混合后进行热处理，所述第一物料选自甘草酸、甘草次酸和甘草酸盐中的至少一种，再进行第二固液分离，收集第二液相体系。
在一种实施方式中，所述豆科植物包括葛根、黑豆、大豆、红车轴草、鹰嘴豆、金雀花、红三叶草、黄芪、补骨脂和射干中的至少一种。
在一种实施方式中，所述豆科植物预先进行粉碎处理及筛分处理。
在一种实施方式中，所述粉碎处理采用粒径为0.1～0.3cm的粗粉。
在一种实施方式中，所述豆科植物、溶剂、活性炭和第一物料的质量比为100:(1000～2000):(3.2～9.6):(8～64)。
在一种实施方式中，所述甘草酸盐包括甘草酸铵、甘草酸钠、甘草酸一钾和甘草酸二钾中的至少一种。
在一种实施方式中，所述溶剂包括水、一元醇和多元醇中的至少一种。
在一种实施方式中，所述一元醇包括甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、正丁醇、异丁醇、1-戊醇、2-戊醇、3-戊醇、1-己醇、2-己醇、3-己醇、1-庚醇、2-庚醇、3-庚醇、4-庚醇、1-辛醇、2-辛醇、3-辛醇、4-辛醇、1-壬醇、2-壬醇、3-壬醇、4-壬醇、5-壬醇、1-癸醇、2-癸醇、3-癸醇、4-癸醇和5-癸醇中的至少一种。
在一种实施方式中，所述多元醇包括乙二醇、1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、丙三醇、1,2-丁二醇、1,3-丁二醇、1,4-丁二醇、1,2,3-丁三醇、1,2,4-丁三醇、1,2-戊二醇、1,3-戊二醇、1,4-戊二醇、1,5-戊二醇、2,3-戊二醇、2,4-戊二醇、1,2,5-戊三醇和1,2-己二醇中的至少一种。
在一种实施方式中，所述溶剂为一元醇和多元醇中的至少一种和水，所述一元醇和/或多元醇的质量分数为M，0.1％≤M<100％。。
在一种实施方式中，所述热回流提取的温度为75～85℃；所述热回流提取的时间为110～130min。
在一种实施方式中，所述第一固液分离包括依次进行的粗滤和精滤。
在一种实施方式中，所述粗滤采用200目纱布、YB06和F100过滤板。
在一种实施方式中，所述精滤采用H70纸板。
在一种实施方式中，采用碱性物质调节所述第一液相体系的pH至6.5～8。
在一种实施方式中，所述热处理的温度为85～90℃。
在一种实施方式中，所述第二固液分离采用H70滤纸板。
在一种实施方式中，所述第二液相体系的浊度低于2FNU。
在一种实施方式中，所述所述的黄酮类化合物的定向富集方法，还包括：对所述第二液相体系进行加热灭菌。
在一种实施方式中，所述加热灭菌的温度为80～85℃，所述加热灭菌的时间为30～45min。
一种黄酮类化合物的定向富集物，由所述的黄酮类化合物的定向富集方法制备得到。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
(1)本发明的方法，通过各个步骤相互配合，有助于豆科植物中黄酮类化合物的溶出，使其定向富集，提高定向富集物中的黄酮的相对含量并除去部分杂质；本发明的方法高效，对环境友好。
(2)本发明的黄酮类化合物的定向富集物中，黄酮类化合物的含量高，杂质含量低，对ABTS自由基具有优异的清除能力。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明不同浓度的葛根提取液对ABTS自由基的清除率；
图2为本发明不同浓度的射干提取液对ABTS自由基的清除率；
图3为本发明不同浓度的红车轴草提取液对ABTS自由基的清除率；
图4为本发明不同浓度的黑豆提取液对ABTS自由基的清除率。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
根据本发明的一个方面，本发明涉及一种黄酮类化合物的定向富集方法，包括以下步骤：
将豆科植物、溶剂及活性炭的第一混合体系进行热回流提取，再进行第一固液分离并收集第一液相体系；采用碱性物质调节所述第一液相体系的pH，得到第二混合体系；将所述第二混合体系与第一物料混合后进行热处理，所述第一物料选自甘草酸、甘草次酸和甘草酸盐中的至少一种，再进行第二固液分离，收集第二液相体系。
本发明采用溶剂及活性炭联合对豆科植物进行处理；其中，活性炭是一种疏松多孔的炭粒，具有许多毛细管结构，这种结构使活性炭具有较大的比表面积，能够与物质充分接触，形成分子间作用力吸附液体、气体中的杂质；由于豆科植物的成分复杂，其提取物颜色通常较深，本发明采用溶剂及活性炭的混合体系对豆科植物同时进行提取和脱色，两者可协同发挥作用，确保能够最大限度的改善提取物颜色，并且吸附豆科植物中的杂质，使豆科植物中的黄酮类化合物有效溶出。
在一种实施方式中，所述甘草酸盐包括甘草酸铵、甘草酸钠、甘草酸一钾和甘草酸二钾中的至少一种。
本发明的第一物料对黄酮类成分具有很好地增溶作用，并且会使黄酮类提取物中某些成分在加热状态下析出。
甘草酸铵具有两亲性结构和表面活性剂样作用，对中药单体成分溶解度的普遍增加作用很大程度上与其在水溶液中形成的疏水性内腔有关。甘草酸铵对黄酮类成分的增溶作用较强，黄酮类成分多含有酚羟基结构，因此甘草酸铵对黄酮类成分的增溶促稳作用可能还与氢键等分子间弱相互作用力有关。甘草酸铵在水溶液中能够自组装形成二聚体，在一定条件下聚集形成具有一定空间结构的胶束或凝胶，甘草酸铵在水溶液中自组装形成的疏水性内腔可以包裹黄酮类化合物，从而有效地增加其溶解度，避免其沉淀析出。另外，甘草酸铵的加入会使黄酮类提取物中某些成分在加热状态下析出，通过固液分离，除去提取液中析出的杂质。
由于黄酮类物质和甘草酸铵都显弱酸性，直接在提取物中添加甘草酸铵会使提取液pH下降，使得弱酸性的黄酮析出，这样影响了提取液中有效成分的含量，因此，本发明在添加甘草酸铵前采用碱性物质调节所述第一液相体系的pH至弱酸性、中性或弱碱性，避免黄酮类成分析出，有利于甘草酸铵更好地和黄酮类成分形成自组装体系。在一种实施方式中，采用碱性物质调节所述第一液相体系的pH至6.5～8，例如7、7.2、7.3、7.5、7.7、7.8、7.9或8等，而pH过高会影响黄酮类成分的颜色，对脱色效果造成影响。在一种实施方式中，所述碱性物质包括氢氧化钠溶液。
本发明的方法可提高豆科植物提取物中黄酮类化合物提取效率，促进其定向富集，提高定向富集物中的黄酮类物质的相对含量并保证效果。
在一种实施方式中，所述豆科植物包括葛根、黑豆、大豆、红车轴草、鹰嘴豆、金雀花、红三叶草、黄芪、补骨脂和射干中的至少一种。
在一种实施方式中，所述豆科植物预先进行粉碎处理及筛分处理。
在一种实施方式中，所述粉碎处理采用粒径为0.1～0.3cm的粗粉。
在一种实施方式中，所述筛分处理采用10目筛。
本发明通过对豆科植物预先进行粉碎处理及筛分处理，以获得适宜粒度的豆科植物，这样更有利于后续的提取。
在一种实施方式中，所述豆科植物、溶剂、活性炭和第一物料的质量比为100:(1000～2000):(3.2～9.6):(8～64)。在一种实施方式中，所述溶剂包括水、一元醇和多元醇中的至少一种。在一种实施方式中，所述一元醇包括甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、正丁醇、异丁醇、1-戊醇、2-戊醇、3-戊醇、1-己醇、2-己醇、3-己醇、1-庚醇、2-庚醇、3-庚醇、4-庚醇、1-辛醇、2-辛醇、3-辛醇、4-辛醇、1-壬醇、2-壬醇、3-壬醇、4-壬醇、5-壬醇、1-癸醇、2-癸醇、3-癸醇、4-癸醇和5-癸醇中的至少一种。在一种实施方式中，所述多元醇包括乙二醇、1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、丙三醇、1,2-丁二醇、1,3-丁二醇、1,4-丁二醇、1,2,3-丁三醇、1,2,4-丁三醇、1,2-戊二醇、1,3-戊二醇、1,4-戊二醇、1,5-戊二醇、2,3-戊二醇、2,4-戊二醇、1,2,5-戊三醇和1,2-己二醇中的至少一种。在一种实施方式中，所述溶剂为一元醇和多元醇中的至少一种和水，所述一元醇和/或多元醇的质量分数为M，0.1％≤M<100％，例如5％、10％、15％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％等。在一种实施方式中，所述豆科植物、溶剂、活性炭和第一物料的质量比为100:1000:3.2:8、100:1000:4:10、100:1500:5:15、100:2000:9.6:30等。在一种实施方式中，以质量份数计，所述豆科植物为100份，活性炭为3.2～9.6份，第一物料为8～64份，所述豆科植物和溶剂的质量比为1：(10～20)。本发明豆科植物、溶剂和活性炭采用适宜的质量比，这样更有利于保证黄酮类化合物的提取、脱色、去除杂质，提高提取效率，提高定向富集物的。本发明采用适宜用量的第一物料，更有利于提高最终得到的定向富集物中的黄酮类化合物的相对含量，并降低杂质含量。
在一种实施方式中，所述热回流提取的温度为75～85℃，例如75℃、76℃、77℃、78℃、79℃、80℃、81℃、82℃、85℃等；所述热回流提取的时间为110～130min，例如110min、115min、120min、125min、130min等。
在一种实施方式中，所述第一固液分离包括依次进行的粗滤和精滤。在一种实施方式中，所述粗滤采用200目纱布、YB06和F100过滤板。在一种实施方式中，所述粗滤依次采用200目纱布、YB06和F100过滤板，即提取液先使用200目纱布过滤，滤液再使用YB06滤纸板进行真空抽滤，得到滤液再次使用F100滤纸板进行真空抽滤。
在一种实施方式中，所述精滤采用H70纸板。本发明通过粗滤及精滤，以有效分离去除杂质。
在一种实施方式中，所述热处理的温度为85～90℃，例如85℃、86℃、87℃、88℃、89℃或90℃等。通过适宜的热处理温度，可有效促进杂质的析出，提高定向富集物中黄酮类化合物的纯度，保证其性能。
在一种实施方式中，所述第二固液分离采用H70滤纸板。通过第二固液分离，进一步去除杂质，提高产品的纯度。
在一种实施方式中，所述第二液相体系的浊度低于2FNU。
在一种实施方式中，所述的黄酮类化合物的定向富集方法，还包括：对所述第二液相体系进行加热灭菌，以去除杂菌。在一种实施方式中，所述加热灭菌的温度为80～85℃，例如81℃、82℃、83℃、84℃等，所述加热灭菌的时间为30～45min，例如35min、40min、42min等。
根据本发明的一个方面，本发明还涉及一种黄酮类化合物的定向富集物，由所述的黄酮类化合物的定向富集方法制备得到。
本发明的黄酮类化合物的定向富集物中，黄酮的含量高，杂质含量低，具有优异的自由基清除能力。
下面结合具体实施例及对比例进一步解释说明。
实施例1
一种定向富集葛根中黄酮的方法，包括以下步骤：
称取100份葛根，按照质量比为1:15加入50％1,3-丁二醇和6.4份活性炭，共同在80℃回流120min，回流结束后使用200目纱布、YB06、F100过滤板依次进行粗滤，H70纸板进行精滤，精滤液使用10％NaOH溶液调节pH值至7.2，加入16份甘草酸铵，待完全溶解后，加热至88℃，使用H70滤纸板进行精滤，控制浊度在2FNU以下，再次加热灭菌，加热灭菌的温度为83℃，加热灭菌的时间为38min，得到样品1，测得浊度为0.35FNU。
实施例2
一种定向富集葛根中黄酮的方法，包括以下步骤：
称取100份葛根，按照质量比为1：10加入50％1,3-丙二醇水溶液和4.4份活性炭，共同在80℃回流120min，回流结束后使用200目纱布、YB06、F100过滤板依次进行粗滤，H70纸板进行精滤，精滤液使用10％NaOH溶液调节pH值至7.2，加入16份甘草酸，待完全溶解后，加热至88℃，使用H70滤纸板进行精滤，控制浊度在2FNU以下，再次加热灭菌，加热灭菌的温度为83℃，加热灭菌的时间为38min，得到样品2，测得浊度为0.42FNU。
实施例3
一种定向富集葛根中黄酮的方法，包括以下步骤：
称取100份葛根，按照质量比为1：20加入50％丙三醇水溶液和8.4份活性炭，共同在80℃回流120min，回流结束后使用200目纱布、YB06、F100过滤板依次进行粗滤，H70纸板进行精滤，精滤液使用10％NaOH溶液调节pH值至7.2，加入16份甘草酸铵，待完全溶解后，加热至88℃，使用H70滤纸板进行精滤，控制浊度在2FNU以下，再次加热灭菌，加热灭菌的温度为83℃，加热灭菌的时间为38min，得到样品3，测得浊度为0.57FNU。
实施例4
一种定向富集葛根中黄酮的方法，包括以下步骤：
称取100份葛根，按照质量比为1：15加入50％1,3-丁二醇水溶液和3.2份活性炭，共同在80℃回流120min，回流结束后使用200目纱布、YB06、F100过滤板依次进行粗滤，H70纸板进行精滤，精滤液使用10％NaOH溶液调节pH值至7.2，加入16份甘草酸铵，待完全溶解后，加热至88℃，使用H70滤纸板进行精滤，控制浊度在2FNU以下，再次加热灭菌，加热灭菌的温度为83℃，加热灭菌的时间为38min，得到样品5，测得浊度为1.44FNU。
实施例5
一种定向富集葛根中黄酮的方法，包括以下步骤：
称取100份葛根，按照质量比为1：15加入50％乙醇水溶液和9.6份活性炭，共同在80℃回流120min，回流结束后使用200目纱布、YB06、F100过滤板依次进行粗滤，H70纸板进行精滤，精滤液使用10％NaOH溶液调节pH值至7.2，加入16份甘草酸铵，待完全溶解后，加热至88℃，使用H70滤纸板进行精滤，控制浊度在2FNU以下，再次加热灭菌，加热灭菌的温度为83℃，加热灭菌的时间为38min，得到样品6，测得浊度为0.84FNU。
实施例6
一种定向富集葛根中黄酮的方法，包括以下步骤：
称取100份葛根，按照质量比为1：15加入纯水和6.4份活性炭，共同在80℃回流120min，回流结束后使用200目纱布、YB06、F100过滤板依次进行粗滤，H70纸板进行精滤，精滤液使用10％NaOH溶液调节pH值至7.2，加入16份甘草酸铵，待完全溶解后，加热至88℃，使用H70滤纸板进行精滤，控制浊度在2FNU以下，再次加热灭菌，加热灭菌的温度为83℃，加热灭菌的时间为38min，得到样品9，测得浊度为5.86FNU。
实施例7
一种定向富集葛根中黄酮的方法，包括以下步骤：
称取100份葛根，按照质量比为1：15加入1,3-丁二醇和6.4份活性炭，共同在80℃回流120min，回流结束后使用200目纱布、YB06、F100过滤板依次进行粗滤，H70纸板进行精滤，精滤液使用10％NaOH溶液调节pH值至7.2，加入16份甘草酸铵，待完全溶解后，加热至88℃，使用H70滤纸板进行精滤，控制浊度在2FNU以下，再次加热灭菌，加热灭菌的温度为83℃，加热灭菌的时间为38min，得到样品10，测得浊度为0.68FNU。
实施例8
一种定向富集葛根中黄酮的方法，包括以下步骤：
称取100份葛根，按照质量比为1：15加入0.1％1,3-丁二醇水溶液和6.4份活性炭，共同在80℃回流120min，回流结束后使用200目纱布、YB06、F100过滤板依次进行粗滤，H70纸板进行精滤，精滤液使用10％NaOH溶液调节pH值至7.2，加入16份甘草次酸，待完全溶解后，加热至88℃，使用H70滤纸板进行精滤，控制浊度在2FNU以下，再次加热灭菌，加热灭菌的温度为83℃，加热灭菌的时间为38min，得到样品11，测得浊度为0.52FNU。
实施例9
一种定向富集葛根中黄酮的方法，包括以下步骤：
称取100份葛根，按照质量比为1：15加入50％1,3-丁二醇水溶液和6.4份活性炭，共同在80℃回流120min，回流结束后使用200目纱布、YB06、F100过滤板依次进行粗滤，H70纸板进行精滤，精滤液使用10％NaOH溶液调节pH值至6.8，加入16份甘草酸铵，待完全溶解后，加热至88℃，使用H70滤纸板进行精滤，控制浊度在2FNU以下，再次加热灭菌，加热灭菌的温度为83℃，加热灭菌的时间为38min，得到样品12，测得浊度为1.68FNU。
实施例10
一种定向富集葛根中黄酮的方法，包括以下步骤：
称取100份葛根，按照质量比为1：15加入50％1,3-丁二醇水溶液和6.4份活性炭，共同在80℃回流120min，回流结束后使用200目纱布、YB06、F100过滤板依次进行粗滤，H70纸板进行精滤，精滤液使用10％NaOH溶液调节pH值至7.8，加入16份甘草酸钠，待完全溶解后，加热至88℃，使用H70滤纸板进行精滤，控制浊度在2FNU以下，再次加热灭菌，加热灭菌的温度为83℃，加热灭菌的时间为38min，得到样品13，测得浊度为0.85FNU。
实施例11
一种定向富集葛根中黄酮的方法，包括以下步骤：
称取100份葛根，按照质量比为1：15加入50％1,2-丙二醇水溶液和6.4份活性炭，共同在80℃回流120min，回流结束后使用200目纱布、YB06、F100过滤板依次进行粗滤，H70纸板进行精滤，精滤液使用10％NaOH溶液调节pH值至7.2，加入8份甘草酸铵，待完全溶解后，加热至88℃，使用H70滤纸板进行精滤，控制浊度在2FNU以下，再次加热灭菌，加热灭菌的温度为83℃，加热灭菌的时间为38min，得到样品16，测得浊度为0.57FNU。
实施例12
一种定向富集葛根中黄酮的方法，包括以下步骤：
称取100份葛根，按照质量比为1：15加入50％丙三醇水溶液和6.4份活性炭，共同在80℃回流120min，回流结束后使用200目纱布、YB06、F100过滤板依次进行粗滤，H70纸板进行精滤，精滤液使用10％NaOH溶液调节pH值至7.2，加入64份甘草酸铵，待完全溶解后，加热至88℃，使用H70滤纸板进行精滤，控制浊度在2FNU以下，再次加热灭菌，加热灭菌的温度为83℃，加热灭菌的时间为38min，得到样品17，测得浊度为10.53FNU。
实施例13
一种定向富集射干中黄酮的方法，包括以下步骤：
称取100份射干，按照质量比为1：15加入50％1,3-丁二醇水溶液和6.4份活性炭，共同在80℃回流120min，回流结束后使用200目纱布、YB06、F100过滤板依次进行粗滤，H70纸板进行精滤，精滤液使用10％NaOH溶液调节pH值至7.5，加入16份甘草酸铵，待完全溶解后，加热至90℃，使用H70滤纸板进行精滤，控制浊度在2FNU以下，再次加热灭菌，加热灭菌的温度为83℃，加热灭菌的时间为38min，得到样品22，测得浊度为0.62FNU。
实施例14
一种定向富集红车轴草中黄酮的方法，包括以下步骤：
称取100份红车轴草，按照质量比为1：15加入50％1,2-丁二醇水溶液和6.4份活性炭，共同在80℃回流120min，回流结束后使用200目纱布、YB06、F100过滤板进行粗滤，H70纸板进行精滤，精滤液使用10％NaOH溶液调节pH值至7.2，加入16份甘草酸二钾，待完全溶解后，加热至88℃，使用H70滤纸板进行精滤，控制浊度在2FNU以下，再次加热灭菌，加热灭菌的温度为83℃，加热灭菌的时间为38min，得到样品25，测得浊度为0.75FNU。
实施例15
一种定向富集黑豆中黄酮的方法，包括以下步骤：
称取100份黑豆，按照质量比为1：15加入50％乙醇水溶液和6.4份活性炭，共同在80℃回流120min，回流结束后使用200目纱布、YB06、F100过滤板依次进行粗滤，H70纸板进行精滤，精滤液使用10％NaOH溶液调节pH值至7.3，加入16份甘草酸铵，待完全溶解后，加热至85℃，使用H70滤纸板进行精滤，控制浊度在2FNU以下，再次加热灭菌，加热灭菌的温度为83℃，加热灭菌的时间为38min，得到样品28，测得浊度为0.59FNU。
对比例1
一种定向富集葛根中黄酮的方法，包括以下步骤：
称取100份葛根，按照质量比为1：25加入50％1,3-丁二醇水溶液和10.4份活性炭，共同在80℃回流120min，回流结束后使用200目纱布、YB06、F100过滤板依次进行粗滤，H70纸板进行精滤，精滤液使用10％NaOH溶液调节pH值至7.2，加入16份甘草酸铵，待完全溶解后，加热至88℃，使用H70滤纸板进行精滤，控制浊度在2FNU以下，再次加热灭菌，加热灭菌的温度为83℃，加热灭菌的时间为38min，得到样品4，测得浊度为0.64FNU。
对比例2
一种定向富集葛根中黄酮的方法，包括以下步骤：
称取100份葛根，按照质量比为1：15加入50％1,3-丁二醇水溶液，共同在80℃回流120min，回流结束后使用200目纱布、YB06、F100过滤板依次进行粗滤，H70纸板进行精滤，精滤液使用10％NaOH溶液调节pH值至7.2，加入16份甘草酸二钾，待完全溶解后，加热至88℃，使用H70滤纸板进行精滤，控制浊度在2FNU以下，再次加热灭菌，加热灭菌的温度为83℃，加热灭菌的时间为38min，得到样品7，测得浊度为0.79FNU。
对比例3
一种定向富集葛根中黄酮的方法，包括以下步骤：
称取100份葛根，按照质量比为1：15加入50％1,3-丁二醇水溶液，共同在80℃回流120min，回流结束后使用200目纱布、YB06、F100过滤板依次进行粗滤，H70纸板进行精滤，精滤液使用10％NaOH溶液调节pH值至7.2，加入16份甘草酸铵，待完全溶解后，加热至88℃，按照液体总重加入6.4份活性炭脱色，使用H70滤纸板进行精滤，控制浊度在2FNU以下，再次加热灭菌，加热灭菌的温度为83℃，加热灭菌的时间为38min，得到样品8，测得浊度为0.26FNU。
对比例4
一种定向富集葛根中黄酮的方法，包括以下步骤：
称取100份葛根，按照质量比为1：15加入50％1,3-丁二醇水溶液和6.4份活性炭，共同在80℃回流120min，回流结束后使用200目纱布、YB06、F100过滤板依次进行粗滤，H70纸板进行精滤，加入16份甘草酸铵，待完全溶解后，加热至88℃，使用H70滤纸板进行精滤，控制浊度在2FNU以下，再次加热灭菌，加热灭菌的温度为83℃，加热灭菌的时间为38min，得到样品14，测得浊度为9.53FNU。
对比例5
一种定向富集葛根中黄酮的方法，包括以下步骤：
称取100份葛根，按照质量比为1：15加入50％1,3-丁二醇水溶液和6.4份活性炭，共同在80℃回流120min，回流结束后使用200目纱布、YB06、F100过滤板依次进行粗滤，H70纸板进行精滤，精滤液使用10％NaOH溶液调节pH值至8.3，加入16份甘草酸二钾，待完全溶解后，加热至88℃，使用H70滤纸板进行精滤，控制浊度在2FNU以下，再次加热灭菌，加热灭菌的温度为83℃，加热灭菌的时间为38min，得到样品15，测得浊度为1.49FNU。
对比例6
一种定向富集葛根中黄酮的方法，包括以下步骤：
称取100份葛根，按照质量比为1：15加入50％1,3-丁二醇水溶液和6.4份活性炭和16份甘草酸铵，共同在80℃回流120min，回流结束后使用200目纱布、YB06、F100过滤板依次进行粗滤，H70纸板进行精滤，精滤液使用10％NaOH溶液调节pH值至7.2，加热至88℃，使用H70滤纸板进行精滤，控制浊度在2FNU以下，再次加热灭菌，加热灭菌的温度为83℃，加热灭菌的时间为38min，得到样品18，测得浊度为0.42FNU。
对比例7
一种定向富集葛根中黄酮的方法，包括以下步骤：
称取100份葛根，按照质量比为1：15加入氯仿和6.4份活性炭，共同在80℃回流120min，回流结束后使用200目纱布、YB06、F100过滤板依次进行粗滤，H70纸板进行精滤，精滤液使用10％NaOH溶液调节pH值至7.2，加热至88℃，使用H70滤纸板进行精滤，控制浊度在2FNU以下，再次加热灭菌，加热灭菌的温度为83℃，加热灭菌的时间为38min，得到样品19，测得浊度为0.76FNU。
对比例8
一种定向富集葛根中黄酮的方法，包括以下步骤：
称取100份葛根，按照质量比为1：15加入50％1,3-丁二醇水溶液和6.4份活性炭，共同在80℃回流120min，回流结束后使用200目纱布、YB06、F100过滤板依次进行粗滤，H70纸板进行精滤，精滤液使用10％NaOH溶液调节pH值至7.2，加入90份甘草酸铵，待完全溶解后，加热至88℃，使用H70滤纸板进行精滤，控制浊度在2FNU以下，再次加热灭菌，加热灭菌的温度为83℃，加热灭菌的时间为38min，得到样品20，测得浊度为15.58FNU。
对比例9
一种定向富集葛根中黄酮的方法，包括以下步骤：
称取100份葛根，按照质量比为1：15加入50％1,3-丁二醇水溶液和6.4份活性炭，共同在80℃回流120min，回流结束后使用200目纱布、YB06、F100过滤板依次进行粗滤，H70纸板进行精滤，精滤液使用10％NaOH溶液调节pH值至7.2，加入16份甘草酸铵，待完全溶解后，加热至88℃，得到样品21，测得浊度为28.69FNU。
对比例10
一种定向富集射干中黄酮的方法，包括以下步骤：
称取100份射干，按照质量比为1：15加入50％1,3-丁二醇水溶液，共同在80℃回流120min，回流结束后使用200目纱布、YB06、F100过滤板依次进行粗滤，H70纸板进行精滤，精滤液使用10％NaOH溶液调节pH值至7.5，加入16份甘草酸铵，待完全溶解后，加热至90℃，使用H70滤纸板进行精滤，控制浊度在2FNU以下，再次加热灭菌，加热灭菌的温度为83℃，加热灭菌的时间为38min，得到样品23，测得浊度为0.74FNU。
对比例11
一种定向富集射干中黄酮的方法，包括以下步骤：
称取100份射干，按照质量比为1：15加入50％1,2-丁二醇水溶液，共同在80℃回流120min，回流结束后使用200目纱布、YB06、F100过滤板依次进行粗滤，H70纸板进行精滤，精滤液使用10％NaOH溶液调节pH值至7.5，加入16份甘草酸铵，待完全溶解后，加热至90℃，按照液体总重加入6.4份活性炭脱色，使用H70滤纸板进行精滤，控制浊度在2FNU以下，再次加热灭菌，加热灭菌的温度为83℃，加热灭菌的时间为38min，得到样品24，测得浊度为0.37FNU。
对比例12
一种定向富集红车轴草中黄酮的方法，包括以下步骤：
称取100份红车轴草，按照质量比为1：15加入50％1,2-丁二醇水溶液和6.4份活性炭，共同在80℃回流120min，回流结束后使用200目纱布、YB06、F100过滤板依次进行粗滤，H70纸板进行精滤，精滤液加入16份甘草酸铵，待完全溶解后，加热至88℃，使用H70滤纸板进行精滤，控制浊度在2FNU以下，再次加热灭菌，加热灭菌的温度为83℃，加热灭菌的时间为38min，得到样品26，测得浊度为8.79FNU。
对比例13
一种定向富集红车轴草中黄酮的方法，包括以下步骤：
称取100份红车轴草，按照质量比为1：15加入50％1,3-丁二醇水溶液和6.4份活性炭，共同在80℃回流120min，回流结束后使用200目纱布、YB06、F100过滤板依次进行粗滤，H70纸板进行精滤，精滤液使用10％NaOH溶液调节pH值至8.5，加入16份甘草次酸，待完全溶解后，加热至88℃，使用H70滤纸板进行精滤，控制浊度在2FNU以下，再次加热灭菌，加热灭菌的温度为83℃，加热灭菌的时间为38min，得到样品27，测得浊度为3.17FNU。
对比例14
一种定向富集黑豆中黄酮的方法，包括以下步骤：
称取100份黑豆，按照质量比为1：15加入50％1,3-丁二醇水溶液和6.4份活性炭和1份甘草酸铵，共同在80℃回流120min，回流结束后使用200目纱布、YB06、F100过滤板依次进行粗滤，H70纸板进行精滤，精滤液使用10％NaOH溶液调节pH值至7.3，加热至85℃，使用H70滤纸板进行精滤，控制浊度在2FNU以下，再次加热灭菌，加热灭菌的温度为83℃，加热灭菌的时间为38min，得到样品29，测得浊度为0.34FNU。
对比例15
一种定向富集黑豆中黄酮的方法，包括以下步骤：
称取100份黑豆，按照质量比为1：15加入50％1,3-丁二醇水溶液和6.4份活性炭，共同在80℃回流120min，回流结束后使用200目纱布、YB06、F100过滤板依次进行粗滤，H70纸板进行精滤，精滤液使用10％NaOH溶液调节pH值至7.3，加热至85℃，使用H70滤纸板进行精滤，控制浊度在2FNU以下，再次加热灭菌，加热灭菌的温度为83℃，加热灭菌的时间为38min，得到样品30，测得浊度为0.57FNU。
对比例16
一种定向富集黑豆中黄酮的方法，包括以下步骤：
称取100份黑豆，按照1：15加入50％1,3-丁二醇水溶液和6.4份活性炭，共同在80℃回流120min，回流结束后使用200目纱布、YB06、F100过滤板依次进行粗滤，H70纸板进行精滤，精滤液使用10％NaOH溶液调节pH值至7.2，加入32份甘草酸铵，待完全溶解后，加热至85-90℃，使用H70滤纸板进行精滤，控制浊度在2FNU以下，再次加热灭菌，加热灭菌的温度为83℃，加热灭菌的时间为38min，得到样品31，测得浊度为17.61FNU。
对比例17
一种定向富集黑豆中黄酮的方法，包括以下步骤：
称取100份黑豆，按照1：15加入氯仿和6.4份活性炭，共同在80℃回流120min，回流结束后使用200目纱布、YB06、F100过滤板依次进行粗滤，H70纸板进行精滤，精滤液使用10％NaOH溶液调节pH值至7.2，加入32份甘草酸铵，待完全溶解后，加热至85-90℃，使用H70滤纸板进行精滤，控制浊度在2FNU以下，再次加热灭菌，加热灭菌的温度为83℃，加热灭菌的时间为38min，得到样品32，测得浊度为1.65FNU。
实验例1
使用紫外分光光度法检测各实施例及对比例的样品中黄酮含量，方法如下：
标准品溶液的制备：精确称取葛根素标准品1.31mg，置于10mL容量瓶中，以95％乙醇溶解，并定容至刻度，摇匀，浓度为131mg*L-1。
供试品的制备：精密称定1g样品，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇至50mL，超声处理1h，放冷，用甲醇补足失重，滤过，精密量取续滤液0.1mL,置10mL量瓶中，加70％乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。测试结果如表1所示。
表1不同制备方法下样品中黄酮含量
/>
/>
由表1可知，本发明的定向富集方法中，各个操作步骤相互配合且需按照特定的顺序进行，各个步骤不可或缺且不能调换顺序，否则会影响提取物中的黄酮的含量。
实验例2
ABTS自由基清除试验
将7mmol/L的ABTS溶液与2.45mmol/L的过硫酸钾溶液等体积混匀后，室温下避光静置20h，以制备ABTS+溶液。测定前用无水乙醇将ABTS+溶液进行稀释，调整到在734nm处吸光值为0.7±0.02即可，现配现用。分别取各浓度样品溶液0.2mL，加入稀释后的ABTS+溶液2mL，涡旋混匀后于室温下避光静置6min，于734nm处测定样品吸光值A1，以提取剂作空白对照测定吸光值A0。VC作阳性对照。按以下公式进行清除率的计算：
测试结果如表2所示。
本发明不同浓度的葛根提取液对ABTS自由基的清除率如图1所示。本发明不同浓度的射干提取液对ABTS自由基的清除率如图2所示。本发明不同浓度的红车轴草提取液对ABTS自由基的清除率如图3所示。本发明不同浓度的黑豆提取液对ABTS自由基的清除率如图4所示。
表2不同制备方法下样品的自由基清除能力
/>
由以上可知，本发明的方法得到的含有黄酮类化合物的定向富集物具有更加优异的自由基清除能力。
根据上述几种豆科植物提取物的黄酮检测结果和ABTS自由基清除实验IC50可以看出，黄酮含量与抗氧化能力正相关，因此，在葛根提取物中，样品1抗氧化效果最好；射干提取物的样品22、红车轴草提取物的样品25、黑豆提取物的样品30的抗氧化效果最好。可知，本发明的方法能够使豆科植物中的黄酮类化合物定向富集，提高其提取物中黄酮类化合物的含量，且可有效去除杂质，进而提升定向富集物的功效。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，但本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (10)

1.一种黄酮类化合物的定向富集方法，其特征在于，包括以下步骤：
将豆科植物、溶剂及活性炭的第一混合体系进行热回流提取，再进行第一固液分离并收集第一液相体系；采用碱性物质调节所述第一液相体系的pH，得到第二混合体系；将所述第二混合体系与第一物料混合后进行热处理，所述第一物料选自甘草酸、甘草次酸和甘草酸盐中的至少一种，再进行第二固液分离，收集第二液相体系。
2.根据权利要求1所述的黄酮类化合物的定向富集方法，其特征在于，所述豆科植物包括葛根、黑豆、大豆、红车轴草、鹰嘴豆、金雀花、红三叶草、黄芪、补骨脂和射干中的至少一种；
优选地，所述豆科植物预先进行粉碎处理；
优选地，所述粉碎处理采用粒径为0.1～0.3cm的粗粉。
3.根据权利要求1所述的黄酮类化合物的定向富集方法，其特征在于，所述豆科植物、溶剂、活性炭和第一物料的质量比为100:(1000～2000):(3.2～9.6):(8～64)；
优选地，所述甘草酸盐包括甘草酸铵、甘草酸钠、甘草酸一钾和甘草酸二钾中的至少一种；
优选地，所述溶剂包括水、一元醇和多元醇中的至少一种；
优选地，所述一元醇包括甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、正丁醇、异丁醇、1-戊醇、2-戊醇、3-戊醇、1-己醇、2-己醇、3-己醇、1-庚醇、2-庚醇、3-庚醇、4-庚醇、1-辛醇、2-辛醇、3-辛醇、4-辛醇、1-壬醇、2-壬醇、3-壬醇、4-壬醇、5-壬醇、1-癸醇、2-癸醇、3-癸醇、4-癸醇和5-癸醇中的至少一种；
优选地，所述多元醇包括乙二醇、1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、丙三醇、1,2-丁二醇、1,3-丁二醇、1,4-丁二醇、1,2,3-丁三醇、1,2,4-丁三醇、1,2-戊二醇、1,3-戊二醇、1,4-戊二醇、1,5-戊二醇、2,3-戊二醇、2,4-戊二醇、1,2,5-戊三醇和1,2-己二醇中的至少一种；
优选地，所述溶剂为一元醇和多元醇中的至少一种和水，所述一元醇和/或多元醇的质量分数为M，0.1％≤M<100％。
4.根据权利要求1所述的黄酮类化合物的定向富集方法，其特征在于，所述热回流提取的温度为75～85℃；所述热回流提取的时间为110～130min。
5.根据权利要求1所述的黄酮类化合物的定向富集方法，其特征在于，所述第一固液分离包括依次进行的粗滤和精滤；
优选地，所述粗滤采用200目纱布、YB06和F100过滤板；
优选地，所述精滤采用H70纸板。
6.根据权利要求1所述的黄酮类化合物的定向富集方法，其特征在于，采用碱性物质调节所述第一液相体系的pH至6.5～8。
7.根据权利要求1所述的黄酮类化合物的定向富集方法，其特征在于，所述热处理的温度为85～90℃。
8.根据权利要求1所述的黄酮类化合物的定向富集方法，其特征在于，所述第二固液分离采用H70滤纸板。
9.根据权利要求1所述的黄酮类化合物的定向富集方法，其特征在于，所述第二液相体系的浊度低于2FNU；
优选地，所述的黄酮类化合物的定向富集方法，还包括：对所述第二液相体系进行加热灭菌；
优选地，所述加热灭菌的温度为80～85℃，所述加热灭菌的时间为30～45min。
10.一种黄酮类化合物的定向富集物，其特征在于，由权利要求1～9中任一项所述的黄酮类化合物的定向富集方法制备得到。
CN202310806931.XA 2023-07-03 2023-07-03 一种黄酮类化合物的定向富集方法及其定向富集物 Pending CN117959755A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310806931.XA CN117959755A (zh) 2023-07-03 2023-07-03 一种黄酮类化合物的定向富集方法及其定向富集物

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310806931.XA CN117959755A (zh) 2023-07-03 2023-07-03 一种黄酮类化合物的定向富集方法及其定向富集物

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN117959755A true CN117959755A (zh) 2024-05-03

Family

ID=90848346

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202310806931.XA Pending CN117959755A (zh) 2023-07-03 2023-07-03 一种黄酮类化合物的定向富集方法及其定向富集物

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN117959755A (zh)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110574927B (zh) 一种抗糖化组合物及其制备方法
CN105030878A (zh) 一种提取蓝莓果实多种活性成分的方法
CN103342687B (zh) 一类具有酪氨酸酶抑制活性的化合物及其制备与应用
CN102675398B (zh) 一种从罗汉果中提取罗汉果苷v和法尼醇的方法
WO2007133054A1 (en) A novel process for preparing black ginseng and the composition comprising the same
KR20150069841A (ko) 감귤류에서 노빌레틴 및 탄제레틴 함량이 높은 추출물을 추출하는 방법과 추출물의 용도
CN105639016B (zh) 一种茶褐素巧克力及其制备方法
CN109601795A (zh) 以赶黄草为主要原料的组合物解酒饮料及其制备方法
KR101404286B1 (ko) 신선초 녹즙 부산물로부터 칼콘 고함유 추출물 제조방법
CN101704849A (zh) 一种竹叶黄酮提取物的制备方法
CN102578452B (zh) 一种养颜营养食品
CN113142352A (zh) 一种刺梨青钱柳速溶茶的制备方法
CN115487225B (zh) 一种槐米提取物的制备方法
CN117959755A (zh) 一种黄酮类化合物的定向富集方法及其定向富集物
CN108185239B (zh) 黑莓沙棘复合保健原液及其制备方法
CN102920850B (zh) 银杏叶茶及其制备方法
CN101316603A (zh) 获得木酚素提取物的方法和含有木酚素提取物的组合物
KR20190101063A (ko) 천연물질 추출물을 함유하는 기관지 질환 예방 및 개선을 위한 조성물 및 그 제조방법
CN113925081A (zh) 一种天然植物防腐组合物、制备方法及其应用
CN114010676A (zh) 一种降血脂改善记忆的组合物及其制备方法
KR101242002B1 (ko) 카카오콩을 이용한 폴리페놀 농축액의 제조방법
KR101898187B1 (ko) 목단피, 구기자, 오미자를 원료로 한 항산화 및 항암 활성을 가진 복합추출물 제조방법
CN111642597A (zh) 一种枸杞橄榄茶珍及其制备方法
CN108208076A (zh) 一种巧克力舒芙蕾及其制备方法
CN112794812B (zh) 从香蕉花中提取的生物碱类化合物及其提取方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination