CN117843789A - 治疗性抗cd40配体抗体 - Google Patents

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Abstract

抗CD40L抗体及其抗原结合片段、包含所述抗体或抗原结合片段的组合物、具有降低的效应子功能的抗CD40L抗体，以及使用它们治疗CD40L相关疾病或病症的方法。

Description

治疗性抗CD40配体抗体
本申请是申请日为2018年5月23日和发明名称为“治疗性抗CD40配体抗体”的201880034264.5号发明专利申请的分案申请。
相关申请的交叉引用
本PCT申请要求2017年5月24日提交的美国临时申请号62/510,471的权益，所述美国临时申请的公开内容据此以引用的方式整体并入本文。
序列表
本申请以引用的方式整体并入了2018年5月23日下午2:40创建的命名为“224823-431206_ST25.txt”的序列表，该序列表为100KB，并随本文一起电子提交。
技术领域
抗CD40L抗体、包含所述抗体的组合物以及使用它们治疗CD40L相关疾病或病症的方法。
背景技术
CD40与它的配体CD40L的相互作用在调控免疫应答方面起关键作用。CD40L与CD40的结合会触发CD40路径的活化，CD40路径的活化使共刺激性分子诸如CD80和CD86上调。单克隆抗体对CD40与CD40L之间的相互作用的阻断已被证明能在各种临床前模型中产生免遭自体免疫性和移植物排斥的保护作用。近来，在小鼠肌萎缩性侧索硬化模型中，针对CD40L的抗体被证明能使疾病发作延迟，并且使从疾病发作算起的存活期延长。(美国专利号8,435,514，据此以引用的方式并入本文)。在早期临床研究中，人源化抗CD40L抗体hu5c8在患有狼疮的患者中以及在患有免疫血小板减少性紫癜的患者中显示出功效。然而，用hu5c8治疗的患者发生血栓栓塞事件使进一步的试验停止。进一步体外和临床前动物研究证实Fc与Fc受体FcγRIIa的相互作用引起血小板活化和聚集，从而导致血栓栓塞性事件。此外，已报道Fc与补体的结合可降低或阻止对免疫耐受性的诱导。已采用各种途径来降低或消除免疫球蛋白Fc区与FcγRIIa的相互作用，和/或降低或消除与补体的相互作用，包括在Fc区中引入一个或多个点突变以制备缺乏Fc效应子功能的抗CD40L抗体。其他途径使用缺乏Fc区的抗体片段或在Fc区中含有多个氨基酸取代的抗体。尽管抗CD40L抗体hu5c8在人患者中显示出功效，但无抗CD40L抗体在售。因此，需要有效且不会引起血小板活化或聚集或不会与补体结合但仍稳定并与CD40L结合的供人施用的改进的抗CD40L抗体。
发明内容
本发明的新型抗体多肽及其抗原结合片段提供了此类改进的抗CD40L抗体。以下章节仅概述本公开的某些方面，并且在性质上不意图具有限制性。下面更充分描述这些方面和其他方面以及实施方案。本说明书中引用的所有参考文献都据此以引用的方式整体并入本文。在本说明书的明确公开内容与以引用的方式并入的参考文献之间存在分歧的情况下，以本说明书的明确公开内容为准。
本发明提供了结合人CD40L，并且阻断CD40与CD40L的结合的经分离的、经工程改造的、非天然存在的抗体及其抗原结合片段。抗体及其抗原结合片段被工程改造来具有所需活性和结合。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段被工程改造来相较于一些先前抗CD40L抗体，具有降低的Fc效应子功能。如本申请中所公开的抗体及其抗原结合片段可用于治疗涉及CD40L活化的疾病，包括神经变性或神经肌肉疾病或病症、炎症性或免疫疾病或病症以及自体免疫疾病。
在一个方面，本公开提供特异性结合CD40L的经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：i)包含如SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；ii)包含如SEQ ID NO:10、11、12、13或14所示的序列的CDRH2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：i)包含如SEQ ID NO:16或17所示的序列的CDRL1结构域；ii)包含如SEQ ID NO:18或19所示的序列的CDRL2结构域；和iii)包含如SEQ ID NO:20所示的序列的CDRL3结构域。
在以上方面的一些实施方案中，本公开提供特异性结合CD40L的经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：i)由如SEQ ID NO:9所示的序列组成的CDRH1结构域；ii)由如SEQ ID NO:10、11、12、13或14所示的序列组成的CDRH2结构域；iii)由如SEQ ID NO:15所示的序列组成的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：i)由如SEQ ID NO:16或17所示的序列组成的CDRL1结构域；ii)由如SEQ ID NO:18或19所示的序列组成的CDRL2结构域；和iii)由如SEQ ID NO:20所示的序列组成的CDRL3结构域。
本公开也提供特异性结合CD40L的经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)具有如SEQ ID NO:1、2、3或4所示的氨基酸序列的重链可变区(VH)；和(b)具有如SEQ ID NO:5、6、7或8所示的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
在一些实施方案中，根据本公开的经分离抗体或其抗原结合片段包含Fc区，并且所述Fc区已被工程改造来降低或消除一种或多种Fc效应子功能。在一些实施方案中，经分离抗体具有IgG1同种型，并且重链恒定区包含如SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列。在另一些其他实施方案中，抗体包含重链恒定区，其中所述重链恒定区包含如SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列。在又一些其他实施方案中，抗体包含重链恒定区，其中所述重链恒定区包含如SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列。在另一实施方案中，抗体包含重链恒定区，其中所述重链恒定区包含如SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列。
本公开的另一方面提供用于治疗患有CD40L相关疾病或病症的受试者的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的根据本公开的抗体或抗体片段。在另一方面，本公开提供用于抑制受试者中的免疫应答的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的根据本公开的抗体或抗体片段。
特别地，本申请涉及以下各项：
1.特异性结合CD40L的经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：
(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:10、11、12、13或14所示的序列的CDRH2结构域；
iii)包含如SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和
(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:16或17所示的序列的CDRL1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:18或19所示的序列的CDRL2结构域；
iii)包含如SEQ ID NO:20所示的序列的CDRL3结构域。
2.如第1项所述的经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：
(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:10所示的序列的CDRH2结构域；
iii)包含如SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和
(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:16所示的序列的CDRL1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:18所示的序列的CDRL2结构域；
iii)包含如SEQ ID NO:20所示的序列的CDRL3结构域；或(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:10所示的序列的CDRH2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:17所示的序列的CDRL1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:18所示的序列的CDRL2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:20所示的序列的CDRL3结构域；或(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:10所示的序列的CDRH2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:16所示的序列的CDRL1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:19所示的序列的CDRL2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:20所示的序列的CDRL3结构域；或(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:10所示的序列的CDRH2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:17所示的序列的CDRL1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:19所示的序列的CDRL2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:20所示的序列的CDRL3结构域；或(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:11所示的序列的CDRH2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:16所示的序列的CDRL1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:18所示的序列的CDRL2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:20所示的序列的CDRL3结构域；或(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:11所示的序列的CDRH2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:17所示的序列的CDRL1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:18所示的序列的CDRL2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:20所示的序列的CDRL3结构域；或(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:11所示的序列的CDRH2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:16所示的序列的CDRL1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:19所示的序列的CDRL2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:20所示的序列的CDRL3结构域；或(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:11所示的序列的CDRH2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:17所示的序列的CDRL1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:19所示的序列的CDRL2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:20所示的序列的CDRL3结构域；或(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:12所示的序列的CDRH2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:16所示的序列的CDRL1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:18所示的序列的CDRL2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:20所示的序列的CDRL3结构域；或(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:12所示的序列的CDRH2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:17所示的序列的CDRL1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:18所示的序列的CDRL2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:20所示的序列的CDRL3结构域；或(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:12所示的序列的CDRH2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:16所示的序列的CDRL1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:19所示的序列的CDRL2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:20所示的序列的CDRL3结构域；或(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:12所示的序列的CDRH2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:17所示的序列的CDRL1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:19所示的序列的CDRL2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:20所示的序列的CDRL3结构域；或(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:13所示的序列的CDRH2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:16所示的序列的CDRL1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:18所示的序列的CDRL2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:20所示的序列的CDRL3结构域；或(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:13所示的序列的CDRH2结构域；
iii)包含如SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:17所示的序列的CDRL1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:18所示的序列的CDRL2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:20所示的序列的CDRL3结构域；或(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:13所示的序列的CDRH2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:16所示的序列的CDRL1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:19所示的序列的CDRL2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:20所示的序列的CDRL3结构域；或(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:13所示的序列的CDRH2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:17所示的序列的CDRL1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:19所示的序列的CDRL2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:20所示的序列的CDRL3结构域；或(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:13所示的序列的CDRH2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:17所示的序列的CDRL1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:19所示的序列的CDRL2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:20所示的序列的CDRL3结构域；或(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:14所示的序列的CDRH2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:16所示的序列的CDRL1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:18所示的序列的CDRL2结构域；
iii)包含如SEQ ID NO:20所示的序列的CDRL3结构域；或
(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:14所示的序列的CDRH2结构域；
iii)包含如SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和
(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:17所示的序列的CDRL1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:18所示的序列的CDRL2结构域；
iii)包含如SEQ ID NO:20所示的序列的CDRL3结构域；或
(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:14所示的序列的CDRH2结构域；
iii)包含如SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和
(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:16所示的序列的CDRL1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:19所示的序列的CDRL2结构域；
iii)包含如SEQ ID NO:20所示的序列的CDRL3结构域；或
(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:14所示的序列的CDRH2结构域；
iii)包含如SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和
(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：
i)包含如SEQ ID NO:17所示的序列的CDRL1结构域；
ii)包含如SEQ ID NO:19所示的序列的CDRL2结构域；
iii)包含如SEQ ID NO:20所示的序列的CDRL3结构域。
3.一种特异性结合CD40L的经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：
(a)具有如SEQ ID NO:1、2、3或4所示的氨基酸序列的重链可变区(VH)；和
(b)具有如SEQ ID NO:5、6、7或8所示的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
4.如第3项所述的经分离抗体或其抗原结合片段，其包含
(a)具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有如SEQ IDNO:5所示的氨基酸序列的轻链可变区(VL)；或
(b)具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有如SEQ IDNO:6所示的氨基酸序列的轻链可变区(VL)；或
(c)具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有如SEQ IDNO:7所示的氨基酸序列的轻链可变区(VL)；或
(d)具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有如SEQ IDNO:8所示的氨基酸序列的轻链可变区(VL)；或
(e)具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有如SEQ IDNO:5所示的氨基酸序列的轻链可变区(VL)；或
(f)具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有如SEQ IDNO:6所示的氨基酸序列的轻链可变区(VL)；或
(g)具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有如SEQ IDNO:7所示的氨基酸序列的轻链可变区(VL)；或
(h)具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有如SEQ IDNO:8所示的氨基酸序列的轻链可变区(VL)；或
(i)具有如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有如SEQ IDNO:5所示的氨基酸序列的轻链可变区(VL)；或
(j)具有如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有如SEQ IDNO:6所示的氨基酸序列的轻链可变区(VL)；或
(k)具有如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有如SEQ IDNO:7所示的氨基酸序列的轻链可变区(VL)；或
(l)具有如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有如SEQ IDNO:8所示的氨基酸序列的轻链可变区(VL)；或
(m)具有如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有如SEQ IDNO:5所示的氨基酸序列的轻链可变区(VL)；或
(n)具有如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有如SEQ IDNO:6所示的氨基酸序列的轻链可变区(VL)；或
(o)具有如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有如SEQ IDNO:7所示的氨基酸序列的轻链可变区(VL)；或
(p)具有如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有如SEQ IDNO:8所示的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
5.根据第1-4项中任一项所述的经分离抗体，其中所述抗体或抗原结合片段包含Fc区，并且所述Fc区已被工程改造来降低或消除一种或多种Fc效应子功能。
6.如第5项所述的经分离抗体，其中所述一种或多种Fc效应子功能是FcR结合或补体结合。
7.根据第1-6项中任一项所述的经分离抗体，其中所述抗体具有IgG1同种型，并且其中重链恒定区包含如SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列。
8.根据第1-6项中任一项所述的经分离抗体，其进一步包含重链恒定区，其中所述重链恒定区包含如SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列。
9.根据第1-6项中任一项所述的经分离抗体，链恒定区包含如SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列。
10.根据第1-6项中任一项所述的经分离抗体，其进一步包含重链恒定区，其中所述重链恒定区包含如SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列。
11.根据第1-10项中任一项所述的经分离抗体，其中所述抗体进一步包含轻链恒定区，其中所述轻链恒定区包含如SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列。
12.经分离抗体，其中所述抗体包含
(a)具有如SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列的轻链；或
(b)具有如SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列的轻链；或
(c)具有如SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列的轻链；或
(d)具有如SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列的轻链；或
(e)具有如SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列的轻链；或
(f)具有如SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列的轻链；或
(g)具有如SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列的轻链；或
(h)具有如SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列的轻链；或
(i)具有如SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列的轻链；或
(j)具有如SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列的轻链；或
(k)具有如SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列的轻链；或
(l)具有如SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列的轻链；或
(m)具有如SEQ ID NO:45所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列的轻链；或
(n)具有如SEQ ID NO:45所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列的轻链；或
(o)具有如SEQ ID NO:45所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列的轻链；或
(p)具有如SEQ ID NO:45所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列的轻链。
13.经分离抗体，其中所述抗体包含
(a)具有如SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列的轻链；或
(b)具有如SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列的轻链；或
(c)具有如SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列的轻链；或
(d)具有如SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列的轻链；或
(e)具有如SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列的轻链；或
(f)具有如SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列的轻链；或
(g)具有如SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列的轻链；或
(h)具有如SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列的轻链；或
(i)具有如SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列的轻链；或
(j)具有如SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列的轻链；或
(k)具有如SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列的轻链；或
(l)具有如SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列的轻链；或
(m)具有如SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列的轻链；或
(n)具有如SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列的轻链；或
(o)具有如SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列的轻链；或
(p)具有如SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列的轻链。
14.经分离抗体，其中所述抗体包含
(a)具有如SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列的轻链；或
(b)具有如SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列的轻链；或
(c)具有如SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列的轻链；或
(d)具有如SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列的轻链；或
(e)具有如SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列的轻链；或
(f)具有如SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列的轻链；或
(g)具有如SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列的轻链；或
(h)具有如SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列的轻链；或
(i)具有如SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列的轻链；或
(j)具有如SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列的轻链；或
(k)具有如SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列的轻链；或
(l)具有如SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列的轻链；或
(m)具有如SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列的轻链；或
(n)具有如SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列的轻链；或
(o)具有如SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列的轻链；或
(p)具有如SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列的轻链。
15.经分离抗体，其中所述抗体包含
(a)具有如SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列的轻链；或
(b)具有如SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列的轻链；或
(c)具有如SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列的轻链；或
(d)具有如SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列的轻链；或
(e)具有如SEQ ID NO:55所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列的轻链；或
(f)具有如SEQ ID NO:55所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列的轻链；或
(g)具有如SEQ ID NO:55所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列的轻链；或
(h)具有如SEQ ID NO:55所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列的轻链；或
(i)具有如SEQ ID NO:56所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列的轻链；或
(j)具有如SEQ ID NO:56所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列的轻链；或
(k)具有如SEQ ID NO:56所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列的轻链；或
(l)具有如SEQ ID NO:56所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列的轻链；或
(m)具有如SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列的轻链；或
(n)具有如SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列的轻链；或
(o)具有如SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列的轻链；或
(p)具有如SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列的轻链。
16.一种用于治疗患有CD40L相关疾病或病症的受试者的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的根据第1-15项中任一项的抗体或抗体片段。
17.一种用于治疗患有神经变性或神经肌肉疾病或病症；炎症性或免疫疾病或病症；或自体免疫疾病的受试者的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的根据第1-15项中任一项的抗体或抗体片段。
18.根据第17项所述的方法，其中所述疾病或病症是选自由以下组成的组的自体免疫疾病：全身性红斑狼疮、1型糖尿病、重症肌无力、牛皮癣、阿狄森氏病、克罗恩氏病、葡萄膜炎、多发性硬化症、溶血性贫血、炎症性肠病、免疫血小板减少性紫癜、格雷福斯病和类风湿性关节炎。
19.根据第17项所述的方法，其中所述疾病或病症是选自由以下组成的组的神经变性病症或神经肌肉病症：阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、肌萎缩性侧索硬化、多灶性运动神经病变、原发性侧索硬化、脊髓性肌肉萎缩、肯尼迪氏病或脊髓小脑共济失调。
20.根据第17项所述的方法，其中所述疾病或病症是肌萎缩性侧索硬化。
21.一种抑制受试者中的免疫应答的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的根据第1-15项中任一项的抗体或抗体片段。
22.如第17项所述的方法，其中所述免疫应答是移植物抗宿主疾病或器官移植排斥。
23.根据第16-22项中任一项所述的方法，其中所述抗体或抗体片段与另一治疗剂组合施用。
24.根据第23项所述的方法，其中所述抗体与阻断CD28与CD86之间或CD28与CD80之间的相互作用的化合物组合施用。
25.根据第24项所述的方法，其中所述阻断CD28与CD86之间或CD28与CD80之间的相互作用的化合物是CTLA4-Ig融合蛋白，或者所述阻断CD28与CD86之间或CD28与CD80之间的相互作用的化合物是阿巴西普或贝拉西普或加利昔单抗。
附图说明
图1A是示出16个抗体克隆相对于抗CD40L抗体5c8的效能的排名条形图。排名的效能是IC50克隆/5c8的IC50 x 100。
图1B是示出16个抗体克隆相对于抗CD40L抗体AT-1501的效能的排名条形图。排名的效能是IC50克隆/AT-1501的IC50 x 100。
图2A-图2G以及图2I-图2Q示出来自各克隆的抗体的结合曲线与5c8的结合曲线。图2H示出AT-1501和5c8的结合曲线。
图3A-图3G以及图3I-图3Q示出来自每个克隆的抗体的结合曲线与AT-1501的结合曲线。图3H示出AT-1501和5c8的结合曲线。
图4A和图4B是各自示出八个抗体克隆、5c8、AT-1501和阿巴西普与FcγRI的结合的曲线图。唯一具有显著结合的抗体是5c8抗体。
图5A和图5B是各自示出八个抗体克隆、5c8、AT-1501和阿巴西普与FcγRIIa的结合的图。唯一具有显著结合的抗体是5c8抗体。
图6A和图6B是各自示出八个抗体克隆、5c8、AT-1501和阿巴西普与FcγRIIIa的结合的曲线图。这些抗体都没有表现出与FcγRIIIa的显著结合。图6C和图6D是各自示出八个抗体克隆、5c8、AT-1501和阿巴西普与FcγRIIIb的结合的曲线图。这些抗体都没有表现出与FcγRIIIb的显著结合。
图7A和图7B是各自示出八个抗体克隆、5c8、AT-1501和阿巴西普与C1q的结合的曲线图。唯一具有与C1q的显著结合的抗体是5c8抗体。
具体实施方式
定义
为方便起见，下面提供说明书、实施例和随附权利要求书中使用的某些术语和短语的含义。
诸如“包含(comprises/comprised/comprising)”、“含有(contains/containing)”等的术语具有美国专利法中赋予的含义；这些术语是包含性或开放性的，并且不排除额外未列举的要素或方法步骤。诸如“基本上由……组成(consistingessentially of/consists essentially of)”的术语具有美国专利法中赋予它们的含义；这些术语允许包括不实质上影响要求保护的发明的基本和新型特征的额外成分或步骤。术语“由……组成(consists of/consisting of)”具有美国专利法中赋予它们的含义；这些术语是封闭式的。
TMB是3,3′,5,5′-四甲基联苯胺的缩写。
如本文所用的“CDR结构域”意指具有或不具有侧接序列的抗体互补决定区。
可在不存在本文未明确公开的任何一种或多种要素、一种或多种限制下适当地实施本文说明性地描述的本发明。
“效应子功能”是指可归因于抗体的Fc区的那些生物活性，其随抗体同种型而变化。抗体效应子功能的实例包括：C1q结合和补体依赖性细胞毒性(CDC)；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)；吞噬；下调细胞表面受体(例如B细胞受体)；以及B细胞活化。一种效应子功能是抗体的Fc或恒定区结合包括但不限于以下的蛋白质的能力：Fc受体(FcR)(例如高亲和力IgG Fc区受体Ia(FCγRIa)(CD64)(SEQ ID NO:34)、低亲和力免疫球蛋白γFc区接受体IIa(FCγRIIa)(CD32)(SEQ ID NO:35)、低亲和力免疫球蛋白γFc区受体IIIa(FCγRIIIA)(CD16a)(SEQ ID NO:36)、低亲和力免疫球蛋白γFc区受体IIIb(FCγRIIIb)(CD16b)(SEQ ID NO:37))。在其中抗体及其抗原结合片段具有Fc结构域的本发明的实施方案中，所述Fc结构域已被工程改造来降低或消除一种或多种Fc效应子功能。在优选实施方案中，Fc结构域已被工程改造来降低或消除血小板活化和/或血小板聚集以及伴随的血栓栓塞风险。
除非上下文另外明确规定，否则如本文所用，单数形式“一个(种)”和“该”包括复数指代。除非另外陈述，否则对“或”或“和”的使用意指“和/或”。此外，术语“包括(including)”以及其他形式诸如“包括(include/includes/included)”的使用不具有限制性。
对连词“或”的使用可与“……中的至少一者”互换使用。举例来说：如果组合物包含A或B，则方法必须包括A和B中的至少一者，但也可包括A与B两者。同样，包含“A、B、C或D”的组合物必须包含A、B、C和D群组中的至少一者，但也可包含A、B、C和D中的全部或任何组合。
术语“约”指示所陈述数值允许有一些微小的不精确性(在某种程度上接近于所述值的准确性；近似地或合理地接近于所述值；近乎是所述值)。如果由“约”提供的不精确性另外在本领域中不以这个普通含义加以理解，那么如本文所用的“约”涵盖从指定值变化多达±10％。除非另外指示，否则本文所用的表述成分数量、诸如分子量的性质、反应条件等的所有数字都应被理解为由术语“约”修饰。
CD40L也被称为CD154、gp39、T-BAM、5c8抗原或TNF相关活化蛋白(TRAP)。
术语“治疗(treat/treatment)”等包括治疗性治疗和防治性治疗。治疗性治疗是对具有待治疗的疾病、疾患或病症的征象或症状的受试者进行治疗。防治性治疗是指对易患疾病、疾患或病症，但没有显示出所述疾病、疾患或病症的明显征象的受试者进行治疗。因此，治疗可导致疾病的征象或症状的停滞、部分或总体缓和，或减轻，并且明确包括不限于延长存活期以及治愈。
药剂例如药物制剂的“有效量”是指在所需的剂量和时间段内有效实现所需治疗或防治结果的量。
“亲和力”是指分子(例如抗体)的单一结合位点与它的结合配偶体(例如抗原)之间的非共价相互作用的总和的强度。除非另外指示，否则如本文所用，“结合亲和力”是指固有结合亲和力，其反映结合对的成员(例如抗体和抗原)之间的1:1相互作用。分子X对它的配偶体Y的亲和力一般可由抗体与它的抗原之间的平衡解离常数(KD)即koff/kon的比率表示。KD和亲和力逆向相关。KD值与抗体的浓度(特定实验所需的抗体量)相关，因此，KD值越小(浓度较低)，因而抗体的亲和力越高。亲和力可通过本领域中已知的常用方法来测量，包括本文所述的那些方法。用于测量结合亲和力的特定说明性和示例性实施方案可通过如下方式来测量：放射免疫测定(RIA)；在人CD40配体多肽用作分析物的情况下，通过在经蛋白A偶联CM5研究级传感器芯片(GE Healthcare Europe GmbH,Glattbrugg,Switzerland；BR-1000-14)上捕集抗体，在仪器(GE Healthcare Europe GmbH,Glattbrugg，瑞士)上进行表面等离子体共振(SPR)。其他方法可包括放射免疫测定和动力学排斥测定。动力学排斥测定是一种通用的免疫测定平台，其能够测量抗原/抗体相互作用的平衡解离常数以及缔合和解离速率常数。
说明书中提及多肽或氨基酸序列之间的同一性百分比。两个序列之间的同一性百分比是在考虑需要被引入以达成两个序列的最优比对的空位的数目和每个空位的长度的情况下，由序列共有的同一位置的数目的函数。同一性可被测量为“局部同一性”或“整体同一性”。局部同一性是指多肽之间的如通过所述序列的串段之间的匹配所确定的序列相关程度。整体同一性是指多肽相较于参照多肽的全长的序列相关程度。除非另外指定，否则如本文所用，同一性意指整体同一性。出于本公开和权利要求书的目的，整体同一性百分比使用Needleman和Wunsch((1970)J.Mol.Biol.48:444-453)算法，利用Blossum 62评分矩阵，采用空位罚分12、空位延伸罚分4和框移空位罚分5来计算。有许多可公开获得的软件程序合并了Needleman和Wunsch算法，例如GCG软件包中的GAP程序。
本领域普通技术人员将了解，除明确例示的那些以外的起始原材料、生物和化学原材料、生物和化学试剂、合成方法、纯化方法、分析方法、测定方法和生物学方法可在不借助于过度实验的情况下用于实施本发明。任何此类材料和方法的所有本领域已知的功能性等效物都意图包括在本公开中。
氨基酸取代按对原始氨基酸、所述氨基酸在指定序列中的位置和置换氨基酸加以标识的惯例表示，例如C11S将指示在多肽序列的位置11处的半胱氨酸被丝氨酸置换。
人源化抗体是由非人物种产生的抗体，该抗体的蛋白质序列已被修饰成使它们与在人中天然产生的抗体变体的类似性增加。“人源化”的过程通常应用于被开发用于向人施用的单克隆抗体(例如作为抗癌药物加以开发的抗体)。
当前，常见的是通过将来自在非人动物中制取的抗体的相关CDR插入到人抗体“骨架”中来使非人抗体人源化。人源化抗体的“直接”制取可通过将适当CDR编码区段(负责所需结合性质)插入到人抗体“骨架”中来实现。这可通过重组DNA方法，使用适当载体以及在哺乳动物细胞中表达来实现。也就是说，在小鼠(或其他非人动物)中产生具有所需性质的抗体之后，可将编码该抗体的DNA分离出来，克隆至载体中，并且测序。可接着测定对应于抗体CDR的DNA序列。一旦知道所需CDR的精确序列，即可设计用于将这些序列适当地插入到含有人抗体变体的DNA的构建体中的策略。也可在将CDR插入到骨架中之前改变CDR，例如以增加特异性。
术语“人”抗体是指具有对应于由人产生的抗体的氨基酸序列的氨基酸序列，和/或已使用用于制备人抗体的任何技术制备的抗体。人抗体的这个定义明确排除了包含非人抗原结合残基的人源化抗体。
“抗原结合抗体片段”是指除完整抗体以外的分子，其包含完整抗体的与所述完整抗体所结合的抗原结合的部分。抗体片段的实例包括但不限于Fv、Fab、Fab'、Fd片段、dAb片段、Fab'-SH、F(ab')2；双价抗体；三价抗体；线性抗体；单链抗体分子(例如scFv)；以及由抗体片段形成的多特异性抗体、由模拟抗体的高变区的氨基酸残基组成的最小识别单元(例如经分离互补决定区(CDR)诸如CDR3肽)。如本申请中所公开的抗原结合片段结合抗原CD40L。
抗体的抗原结合片段将通常包含至少一个可变结构域。该可变结构域可具有任何大小或氨基酸组成，并且将一般包含至少一个与一个或多个框架序列邻近或同框的CDR。在具有与VL结构域缔合的VH结构域的抗原结合片段中，VH结构域和VL结构域可相对于彼此以任何适合排列来定位。举例来说，可变区可为二聚的，并且含有VH-VH、VH-VL或VL-VL二聚体。或者，抗体的抗原结合片段可含有单体VH结构域或VL结构域。
经分离抗体包括双特异性抗体，其中抗体或抗原结合片段的每个臂结合不同靶标或表位。
术语“全长抗体”、“完整抗体”和“整个抗体”在本文中可互换用于指代具有大致上类似于天然抗体结构的结构，或具有含有Fc区的重链的抗体。
“5c8”是指结合CD40L的小鼠抗人抗体，其由可从ATCC获得的具有登录号HB10916的杂交瘤产生，并描述于美国专利号5,474,771中。“hu5c8”是指5c8的人源化形式，其序列公开于Karpusas等人,Structure第9卷,第321-329页,(2001)中。
术语“受试者”和“个体”和“患者”在本文中可互换使用，并且是指人受试者、个体或患者。
除非另外规定，否则如本文所提及，所有组成百分比都以总组合物的重量计。如本文所用，字词“包括(include)”和它的变化形式意图为非限制性的，因此对清单中条目的列举并没有排除也可用于本技术的物质、组合物、装置和方法中的其他类似条目。类似地，术语“可”和“可包含”和它们的变化形式意图为非限制性的，因此对实施方案可或可包含某些要素或特征的列举并没有排除本技术的不含有那些要素或特征的其他实施方案。
术语“经分离蛋白质”或“经分离多肽”(例如经分离抗体或经分离抗原结合片段)是这样的蛋白质或多肽，所述蛋白质或多肽就它的起源或获得来源而言，不与在它的天然状态下伴随它的天然相伴组分相伴；大致上不含来自同一物种的其他蛋白质；由来自不同物种的细胞表达；或不存在于自然界中。因此，化学合成或在与其天然起源的细胞不同的细胞系统中合成的多肽将与其天然相伴组分“分离”。也可通过使用本领域中熟知的蛋白质纯化技术进行分离来使蛋白质大致上不含天然相伴组分。
如本文所用的术语“变体”定义为野生型序列的经修饰或经改变形式，例如其中一个或多个氨基酸可被不实质上影响功能的其他一个或多个氨基酸或一个或多个非氨基酸置换。在一些实施方案中，变体可含有针对至少一个氨基酸残基的经改变侧链。
如本文所用的术语“抗原”定义为可刺激抗体产生，并且与它们特异性组合的实体，和/或引发免疫系统应答的实体。举例来说，细胞表面蛋白或其特定线性或非线性部分。所述术语在本文中可缩写成“Ag”。
术语“特异性结合”等意指抗体或其抗原结合片段与抗原形成在生理条件下相对稳定的复合物。特异性结合的特征可以是平衡解离常数(KD)为约3000nM或更小(即较小KD表示较紧密的结合)、约2000nM或更小、约1000nM或更小、约500nM或更小、约300nM或更小、约200nM或更小、约100nM或更小、约50nM或更小、约1nM或更小，或约0.5nM。
对特定抗原或表位的特异性结合可由，例如与抗原或表位的KD为至少约1x 10-4M、至少约1x 10-5M、至少约1x 10-6M、至少约1x 10-7M、至少约1x 10-8M、至少约1x 10-9M、或者至少约1x 10-10M、至少约1x10-11M、至少约1x 10-12M或更高的抗体表现出来，其中KD是指特定抗体-抗原相互作用的平衡解离常数。通常，特异性结合抗原的抗体所具有的KD是对照分子与所述抗原或表位的KD的20、50、100、500、1000、5,000、10,000倍或更多倍。此外，对特定抗原或表位的特异性结合可由，例如与抗原或表位的Ka是所述表位与对照的Ka的至少20、50、100、500、1000、5,000、10,000倍或更多倍的抗体表现出来，其中Ka是指特定抗体-抗原相互作用的缔合速率。
术语“中和抗体”包括能够抑制和/或中和CD40L的生物活性的抗体，例如抑制或阻止或减弱CD40L与CD40的结合，因此抑制或降低由CD40L触发的信号传导路径和/或抑制或降低CD40L与CD40的结合的抗CD40L抗体或其抗原片段。
术语“拮抗性抗体”或“拮抗剂抗体”在本文中等效使用，并且包括能够抑制和/或中和CD40L的生物信号传导活性的抗体，如上文对于中和抗体所述。
本文所采用的术语和表述用作描述性的术语而不是限制性的术语，并且不意图使用此类术语和表述来排除所示和所述特征或其各部分的任何等效物，而是应认识到在要求保护的本发明的范围内，各种修改是可能的。因此，应了解尽管本发明的各个方面已通过可包括优选实施方案、示例性实施方案和任选特征的各种实施方案来明确公开，但本领域技术人员可对本文公开的构思作出修改和更改。此类修改和更改被视为在如所描述的并且如可由随附权利要求书限定的本发明的实施方案的范围内。
药物组合物和施用方法
根据本公开的方法使用的药物组合物可使用一种或多种生理上可接受的载体以常规方式配制。药学上可接受的载体部分地由所施用的特定组合物决定，以及由用于施用组合物的特定方法决定。因此，可用于本公开的方法中的化合物有各种各样的适合制剂(参见例如Remington:The Science and Practice of Pharmacy,第20版,Gennaro等人编,Lippincott Williams and Wilkins,2000)。
适于胃肠外施用的制剂包括水性和非水性等张无菌注射溶液，其可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使制剂与预期接受者的血液等张的溶质；以及水性和非水性无菌混悬液，其可包括混悬剂、增溶剂、增稠剂、稳定剂和防腐剂。示例性注射或输注赋形剂可包括甘露糖醇、柠檬酸单水化物、磷酸氢二钠二水合物、磷酸二氢钠二水合物、聚山梨醇酯80、氯化钠、柠檬酸钠和水。
根据本公开，所述化合物可通过任何适合手段来施用，所述适合手段可视所治疗病症的类型以及化合物自身的性质而变化。举例来说，对于本发明的抗体及其抗原结合片段，施用途径优选包括胃肠外施用，例如肌肉内、静脉内、动脉内、腹膜内、脑脊髓内、脊柱内、硬膜外、皮下施用，或通过持续释放系统或植入物施用。优选地，胃肠外给药是通过注射，最优选静脉内注射、肌肉内注射或皮下注射来给予。
在一些实施方案中，配制本公开的抗CD40L抗体或其抗原结合片段，并且可根据本领域已知的冻干和复原技术加以冻干以进行储存，并且在使用之前在适合赋形剂中加以复原。
在一种含有抗CD40L抗体或其抗原结合片段的示例性药物组合物的情况下，所述组合物被配制成抗CD40L抗体或其抗原结合片段的无菌无防腐剂溶液以用于静脉内或皮下施用。所述制剂可以作为一次性使用的预填充笔，作为一次性使用的，例如含有约1mL预填充玻璃注射器，或作为一次性使用的机构使用小瓶提供。优选地，含有抗CD40L抗体或其抗原结合片段的药物组合物是澄清的和无色的，具有约5.0至约6.9的pH，优选具有约5.0至约6.5的pH，并且甚至更优选具有在约5.0至约6.0的范围内的pH。在各种实施方案中，当复原以及向受试者施用时，包含药物组合物的制剂可含有每mL溶液约500mg至约1mg，或约400mg至约10mg，或约300mg至约30mg，或约200mg至约50mg的抗CD40L抗体或其抗原结合片段。
选择治疗剂的施用方案取决于几个因素，包括实体的血清或组织更新速率、症状的水平、实体的免疫原性，以及生物基质中靶细胞的可及性、患者的总体健康状况、患者的先前病史等。优选地，施用方案最大程度地增加递送给患者的符合可接受的副作用水平的治疗剂的量。因此，递送的生物制剂的量部分地取决于特定实体以及所治疗疾患的严重性。应了解，对适当剂型、剂量和施用途径的判定在药物和医学领域普通技术人员的水平范围内。
剂量
本公开的药物制剂可含有约0.001mg/kg至约200mg/kg的抗CD40L抗体或其抗原结合片段，例如约0.001mg/kg至约100mg/kg，或约0.001mg/kg至约50mg/kg，或约0.001mg/kg至约10mg/kg静脉内注射的抗CD40L抗体或其抗原结合片段可以以团注形式给予，并且抗体剂量的其余部分可通过静脉内注射来施用。预定剂量的抗CD40L抗体或其抗原结合片段可例如在1小时至2小时至5小时的时间段内施用。
在进一步的实施方案中，一部分剂量通过皮下注射和/或以团注形式输注来施用，并且其余部分通过输注抗体制剂来施用。在一些示例性剂量的情况下，抗体制剂可以以在约0.001至约200mg/kg的范围内的剂量皮下施用，例如约0.001mg/kg至约100mg/kg，或约0.001mg/kg至约50mg/kg，或约0.001mg/kg至约10mg/kg的抗CD40L抗体或其抗原结合片段在静脉内注射。在一些实施方案中，所述剂量可以团注形式给予，并且抗体剂量的其余部分可通过皮下或静脉内注射来施用。预定剂量的抗CD40L抗体或其抗原结合片段可例如在1小时的时间段，或2小时的时间段，或3小时的时间段，或4小时的时间段，或5小时或更长的时间段内施用。
组合疗法
本文所述的抗体或其抗体片段可单独施用(单药疗法)，或以组合形式施用，即与其他剂组合施用。举例来说，在一个实施方案中，组合疗法可包括一种或多种额外治疗剂。在另一实施方案中，组合疗法包括护理标准治疗，所述护理标准治疗可包括或可不包括额外治疗剂(基本上由抗体或其抗体片段组成)。
辅助或组合施用(共同施用)包括同时施用本文所述的任何抗体或其抗原结合片段和相同剂型或不同剂型的一种或多种剂，或分开施用所述多肽和一种或多种剂(例如依序施用)。所述并行或依序施用优选导致多肽与一种或多种剂两者同时存在于所治疗患者中。
药盒和制品
进一步提供了含有本文所述的抗体或其抗原结合片段以及使用说明书的药盒。药盒通常包括预定量的试剂与指示药盒内含物的预期用途的说明书和标签的包装组合。术语标签或说明书包括在药盒上或与药盒一起提供，或另外在药盒的制造、运输、销售或使用期间的任何时间伴随药盒的任何书面或记录材料。它可呈由管理药物或生物产品的制造、使用或销售的政府机构规定的形式，该通知反映了所述机构批准制造、使用或销售药物或生物产品供人施用或供兽医使用。标签或说明书也可涵盖广告活页和小册、包装材料，以及音频或视频说明书。
实施方案
经分离抗体或其抗原结合片段的所有实施方案都结合CD40L，并且抑制或阻断CD40L与CD40的结合。如本文所用，“阻断CD40L和CD40的结合”和“阻断CD40L与CD40之间的相互作用”可互换使用。抑制或阻断结合可为直接的或间接的。一般而言，抗体或其抗原结合片段将通过与CD40直接特异性竞争CD40L上的同一结合位点，或者通过由抗体或其抗原结合片段在CD40L的CD40结合位点附近的结合所引起的空间位阻来物理干扰CD40L与CD40的结合。在其他情况下，作用是间接的，例如抗体或其抗原结合片段引起CD40L的构象的变构变化，从而抑制或消除它与CD40的结合。
一个实施方案是一种结合CD40L并且包含轻链和重链的经分离抗体，其中所述轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7或SEQID NO:8具有至少90％或至少91％或至少92％或至少93％或至少94％或至少95％或至少96％或至少97％或至少98％或至少99％序列同一性的氨基酸序列，并且所述重链包含可变重链区，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ IDNO:4具有至少90％或至少91％或至少92％或至少93％或至少94％或至少95％或至少96％或至少97％或至少98％或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本公开提供了一种特异性结合CD40L的经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：i)包含如SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；ii)包含如SEQ ID NO:10、11、12、13或14所示的序列的CDRH2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：i)包含如SEQ ID NO:16或17所示的序列的CDRL1结构域；ii)包含如SEQ ID NO:18或19所示的序列的CDRL2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:20所示的序列的CDRL3结构域。
在方面A中，本公开提供了一种特异性结合CD40 L的经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：i)由如SEQ ID NO:9所示的序列组成的CDRH1结构域；ii)由如SEQ ID NO:10、11、12、13或14所示的序列组成的CDRH2结构域；iii)由如SEQ ID NO:15所示的序列组成的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：i)由如SEQ ID NO:16或17所示的序列组成的CDRL1结构域；ii)由如SEQ IDNO:18或19所示的序列组成的CDRL2结构域；iii)由如SEQ ID NO:20所示的序列组成的CDRL3结构域。
方面A的一个实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：i)包含如SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；ii)包含如SEQ ID NO:10所示的序列的CDRH2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：i)包含如SEQ ID NO:16所示的序列的CDRL1结构域；ii)包含如SEQ ID NO:18所示的序列的CDRL2结构域；iii)包含如SEQID NO:20所示的序列的CDRL3结构域。方面A的另一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：i)由如SEQ ID NO:9所示的序列组成的CDRH1结构域；ii)由如SEQ ID NO:10所示的序列组成的CDRH2结构域；iii)由如SEQ ID NO:15所示的序列组成的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：i)由如SEQ ID NO:16所示的序列组成的CDRL1结构域；ii)由如SEQ ID NO:18所示的序列组成的CDRL2结构域；iii)由如SEQ ID NO:20所示的序列组成的CDRL3结构域。
方面A的又一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：i)包含如SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；ii)包含如SEQ ID NO:10所示的序列的CDRH2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：i)包含如SEQ ID NO:17所示的序列的CDRL1结构域；ii)包含如SEQ ID NO:18所示的序列的CDRL2结构域；iii)包含如SEQID NO:20所示的序列的CDRL3结构域。方面A的再一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：i)由如SEQ ID NO:9所示的序列组成的CDRH1结构域；ii)由如SEQ ID NO:10所示的序列组成的CDRH2结构域；iii)由如SEQ ID NO:15所示的序列组成的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：i)由如SEQ ID NO:17所示的序列组成的CDRL1结构域；ii)由如SEQ ID NO:18所示的序列组成的CDRL2结构域；iii)由如SEQ ID NO:20所示的序列组成的CDRL3结构域。
方面A的再一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：i)包含如SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；ii)包含如SEQ ID NO:10所示的序列的CDRH2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：i)包含如SEQ ID NO:16所示的序列的CDRL1结构域；ii)包含如SEQ ID NO:19所示的序列的CDRL2结构域；iii)包含如SEQID NO:20所示的序列的CDRL3结构域。方面A的又一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：i)由如SEQ ID NO:9所示的序列组成的CDRH1结构域；ii)由如SEQ ID NO:10所示的序列组成的CDRH2结构域；iii)由如SEQ ID NO:15所示的序列组成的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：i)由如SEQ ID NO:16所示的序列组成的CDRL1结构域；ii)由如SEQ ID NO:19所示的序列组成的CDRL2结构域；iii)由如SEQ ID NO:20所示的序列组成的CDRL3结构域。
方面A的另一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：i)包含如SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；ii)包含如SEQ ID NO:10所示的序列的CDRH2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：i)包含如SEQ ID NO:17所示的序列的CDRL1结构域；ii)包含如SEQ ID NO:19所示的序列的CDRL2结构域；iii)包含如SEQID NO:20所示的序列的CDRL3结构域。方面A的又一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：i)由如SEQ ID NO:9所示的序列组成的CDRH1结构域；ii)由如SEQ ID NO:10所示的序列组成的CDRH2结构域；iii)由如SEQ ID NO:15所示的序列组成的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：i)由如SEQ ID NO:17所示的序列组成的CDRL1结构域；ii)由如SEQ ID NO:19所示的序列组成的CDRL2结构域；iii)由如SEQ ID NO:20所示的序列组成的CDRL3结构域。
方面A的再一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：i)包含如SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；ii)包含如SEQ ID NO:11所示的序列的CDRH2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：i)包含如SEQ ID NO:16所示的序列的CDRL1结构域；ii)包含如SEQ ID NO:18所示的序列的CDRL2结构域；iii)包含如SEQID NO:20所示的序列的CDRL3结构域。方面A的又一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：i)由如SEQ ID NO:9所示的序列组成的CDRH1结构域；ii)由如SEQ ID NO:11所示的序列组成的CDRH2结构域；iii)由如SEQ ID NO:15所示的序列组成的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：i)由如SEQ ID NO:16所示的序列组成的CDRL1结构域；ii)由如SEQ ID NO:18所示的序列组成的CDRL2结构域；iii)由如SEQ ID NO:20所示的序列组成的CDRL3结构域。
方面A的另一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：i)包含如SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；ii)包含如SEQ ID NO:11所示的序列的CDRH2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：i)包含如SEQ ID NO:17所示的序列的CDRL1结构域；ii)包含如SEQ ID NO:18所示的序列的CDRL2结构域；iii)包含如SEQID NO:20所示的序列的CDRL3结构域。方面A的再一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：i)由如SEQ ID NO:9所示的序列组成的CDRH1结构域；ii)由如SEQ ID NO:11所示的序列组成的CDRH2结构域；iii)由如SEQ ID NO:15所示的序列组成的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：i)由如SEQ ID NO:17所示的序列组成的CDRL1结构域；ii)由如SEQ ID NO:18所示的序列组成的CDRL2结构域；iii)由如SEQ ID NO:20所示的序列组成的CDRL3结构域。
方面A的另一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：i)包含如SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；ii)包含如SEQ ID NO:11所示的序列的CDRH2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：i)包含如SEQ ID NO:16所示的序列的CDRL1结构域；ii)包含如SEQ ID NO:19所示的序列的CDRL2结构域；iii)包含如SEQID NO:20所示的序列的CDRL3结构域。方面A的再一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：i)由如SEQ ID NO:9所示的序列组成的CDRH1结构域；ii)由如SEQ ID NO:11所示的序列组成的CDRH2结构域；iii)由如SEQ ID NO:15所示的序列组成的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：i)由如SEQ ID NO:16所示的序列组成的CDRL1结构域；ii)由如SEQ ID NO:19所示的序列组成的CDRL2结构域；iii)由如SEQ ID NO:20所示的序列组成的CDRL3结构域。
方面A的再一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：i)包含如SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；ii)包含如SEQ ID NO:11所示的序列的CDRH2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：i)包含如SEQ ID NO:17所示的序列的CDRL1结构域；ii)包含如SEQ ID NO:19所示的序列的CDRL2结构域；iii)包含如SEQID NO:20所示的序列的CDRL3结构域。方面A的另一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：i)由如SEQ ID NO:9所示的序列组成的CDRH1结构域；ii)由如SEQ ID NO:11所示的序列组成的CDRH2结构域；iii)由如SEQ ID NO:15所示的序列组成的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：i)由如SEQ ID NO:17所示的序列组成的CDRL1结构域；ii)由如SEQ ID NO:19所示的序列组成的CDRL2结构域；iii)由如SEQ ID NO:20所示的序列组成的CDRL3结构域。
方面A的再一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：i)包含如SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；ii)包含如SEQ ID NO:12所示的序列的CDRH2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：i)包含如SEQ ID NO:16所示的序列的CDRL1结构域；ii)包含如SEQ ID NO:18所示的序列的CDRL2结构域；iii)包含如SEQID NO:20所示的序列的CDRL3结构域。方面A的又一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：i)由如SEQ ID NO:9所示的序列组成的CDRH1结构域；ii)由如SEQ ID NO:12所示的序列组成的CDRH2结构域；iii)由如SEQ ID NO:15所示的序列组成的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：i)由如SEQ ID NO:16所示的序列组成的CDRL1结构域；ii)由如SEQ ID NO:18所示的序列组成的CDRL2结构域；iii)由如SEQ ID NO:20所示的序列组成的CDRL3结构域。
方面A的另一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：i)包含如SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；ii)包含如SEQ ID NO:12所示的序列的CDRH2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：i)包含如SEQ ID NO:17所示的序列的CDRL1结构域；ii)包含如SEQ ID NO:18所示的序列的CDRL2结构域；iii)包含如SEQID NO:20所示的序列的CDRL3结构域。方面A的再一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：i)由如SEQ ID NO:9所示的序列组成的CDRH1结构域；ii)由如SEQ ID NO:12所示的序列组成的CDRH2结构域；iii)由如SEQ ID NO:15所示的序列组成的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：i)由如SEQ ID NO:17所示的序列组成的CDRL1结构域；ii)由如SEQ ID NO:18所示的序列组成的CDRL2结构域；iii)由如SEQ ID NO:20所示的序列组成的CDRL3结构域。
方面A的再一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：i)包含如SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；ii)包含如SEQ ID NO:12所示的序列的CDRH2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：i)包含如SEQ ID NO:16所示的序列的CDRL1结构域；ii)包含如SEQ ID NO:19所示的序列的CDRL2结构域；iii)包含如SEQID NO:20所示的序列的CDRL3结构域。方面A的另一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：i)由如SEQ ID NO:9所示的序列组成的CDRH1结构域；ii)由如SEQ ID NO:12所示的序列组成的CDRH2结构域；iii)由如SEQ ID NO:15所示的序列组成的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：i)由如SEQ ID NO:16所示的序列组成的CDRL1结构域；ii)由如SEQ ID NO:19所示的序列组成的CDRL2结构域；iii)由如SEQ ID NO:20所示的序列组成的CDRL3结构域。
方面A的又一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：i)包含如SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；ii)包含如SEQ ID NO:12所示的序列的CDRH2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：i)包含如SEQ ID NO:17所示的序列的CDRL1结构域；ii)包含如SEQ ID NO:19所示的序列的CDRL2结构域；iii)包含如SEQID NO:20所示的序列的CDRL3结构域。方面A的再一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：i)由如SEQ ID NO:9所示的序列组成的CDRH1结构域；ii)由如SEQ ID NO:12所示的序列组成的CDRH2结构域；iii)由如SEQ ID NO:15所示的序列组成的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：i)由如SEQ ID NO:17所示的序列组成的CDRL1结构域；ii)由如SEQ ID NO:19所示的序列组成的CDRL2结构域；iii)由如SEQ ID NO:20所示的序列组成的CDRL3结构域。
方面A的另一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：i)包含如SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；ii)包含如SEQ ID NO:13所示的序列的CDRH2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：i)包含如SEQ ID NO:16所示的序列的CDRL1结构域；ii)包含如SEQ ID NO:18所示的序列的CDRL2结构域；iii)包含如SEQID NO:20所示的序列的CDRL3结构域。方面A的另一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：i)由如SEQ ID NO:9所示的序列组成的CDRH1结构域；ii)由如SEQ ID NO:13所示的序列组成的CDRH2结构域；iii)由如SEQ ID NO:15所示的序列组成的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：i)由如SEQ ID NO:16所示的序列组成的CDRL1结构域；ii)由如SEQ ID NO:18所示的序列组成的CDRL2结构域；iii)由如SEQ ID NO:20所示的序列组成的CDRL3结构域。
方面A的另一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：i)包含如SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；ii)包含如SEQ ID NO:13所示的序列的CDRH2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：i)包含如SEQ ID NO:17所示的序列的CDRL1结构域；ii)包含如SEQ ID NO:18所示的序列的CDRL2结构域；iii)包含如SEQID NO:20所示的序列的CDRL3结构域。方面A的又一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：i)由如SEQ ID NO:9所示的序列组成的CDRH1结构域；ii)由如SEQ ID NO:13所示的序列组成的CDRH2结构域；iii)由如SEQ ID NO:15所示的序列组成的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：i)由如SEQ ID NO:17所示的序列组成的CDRL1结构域；ii)由如SEQ ID NO:18所示的序列组成的CDRL2结构域；iii)由如SEQ ID NO:20所示的序列组成的CDRL3结构域。
方面A的又一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：i)包含如SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；ii)包含如SEQ ID NO:13所示的序列的CDRH2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：i)包含如SEQ ID NO:17所示的序列的CDRL1结构域；ii)包含如SEQ ID NO:19所示的序列的CDRL2结构域；iii)包含如SEQID NO:20所示的序列的CDRL3结构域。方面A的再一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：i)由如SEQ ID NO:9所示的序列组成的CDRH1结构域；ii)由如SEQ ID NO:13所示的序列组成的CDRH2结构域；iii)由如SEQ ID NO:15所示的序列组成的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：i)由如SEQ ID NO:17所示的序列组成的CDRL1结构域；ii)由如SEQ ID NO:19所示的序列组成的CDRL2结构域；iii)由如SEQ ID NO:20所示的序列组成的CDRL3结构域。
方面A的再一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：i)包含如SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；ii)包含如SEQ ID NO:14所示的序列的CDRH2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：i)包含如SEQ ID NO:16所示的序列的CDRL1结构域；ii)包含如SEQ ID NO:18所示的序列的CDRL2结构域；iii)包含如SEQID NO:20所示的序列的CDRL3结构域。方面A的再一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：i)由如SEQ ID NO:9所示的序列组成的CDRH1结构域；ii)由如SEQ ID NO:14所示的序列组成的CDRH2结构域；iii)由如SEQ ID NO:15所示的序列组成的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：i)由如SEQ ID NO:16所示的序列组成的CDRL1结构域；ii)由如SEQ ID NO:18所示的序列组成的CDRL2结构域；iii)由如SEQ ID NO:20所示的序列组成的CDRL3结构域。
方面A的另一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：i)包含如SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；ii)包含如SEQ ID NO:14所示的序列的CDRH2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：i)包含如SEQ ID NO:17所示的序列的CDRL1结构域；ii)包含如SEQ ID NO:18所示的序列的CDRL2结构域；iii)包含如SEQID NO:20所示的序列的CDRL3结构域。方面A的另一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：i)由如SEQ ID NO:9所示的序列组成的CDRH1结构域；ii)由如SEQ ID NO:14所示的序列组成的CDRH2结构域；iii)由如SEQ ID NO:15所示的序列组成的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：i)由如SEQ ID NO:17所示的序列组成的CDRL1结构域；ii)由如SEQ ID NO:18所示的序列组成的CDRL2结构域；iii)由如SEQ ID NO:20所示的序列组成的CDRL3结构域。
方面A的再一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：i)包含如SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；ii)包含如SEQ ID NO:14所示的序列的CDRH2结构域；iii)包含如SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：i)包含如SEQ ID NO:17所示的序列的CDRL1结构域；ii)包含如SEQ ID NO:19所示的序列的CDRL2结构域；iii)包含如SEQID NO:20所示的序列的CDRL3结构域。方面A的再一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含：i)由如SEQ ID NO:9所示的序列组成的CDRH1结构域；ii)由如SEQ ID NO:14所示的序列组成的CDRH2结构域；iii)由如SEQ ID NO:15所示的序列组成的CDRH3结构域；和(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含：i)由如SEQ ID NO:17所示的序列组成的CDRL1结构域；ii)由如SEQ ID NO:19所示的序列组成的CDRL2结构域；iii)由如SEQ ID NO:20所示的序列组成的CDRL3结构域。
在方面B中，本公开提供了特异性结合CD40 L的经分离抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)具有如SEQ ID NO:1、2、3或4所示的氨基酸序列的重链可变区(VH)：和(b)具有如SEQ ID NO:5、6、7或8所示的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
方面B的一个实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含具有如SEQID NO:1所示的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
方面B的另一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含具有如SEQID NO:1所示的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
方面B的再一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含具有如SEQID NO:1所示的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
方面B的另一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含具有如SEQID NO:1所示的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
方面B的再一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含具有如SEQID NO:1所示的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
方面B的又一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含具有如SEQID NO:1所示的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
方面B的另一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含具有如SEQID NO:1所示的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
方面B的再一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含具有如SEQID NO:1所示的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
方面B的另一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含具有如SEQID NO:3所示的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
方面B的再一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含具有如SEQID NO:3所示的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
方面B的另一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含具有如SEQID NO:3所示的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
方面B的又一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含具有如SEQID NO:3所示的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
方面B的再一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含具有如SEQID NO:4所示的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
方面B的又一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含具有如SEQID NO:4所示的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
方面B的另一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含具有如SEQID NO:4所示的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
方面B的再一实施方案是一种经分离抗体或其抗原结合片段，其包含具有如SEQID NO:4所示的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
方面C提供了本申请中所述的任何实施方案的经分离抗体，其中所述抗体包含Fc区，并且所述Fc区已被工程改造来降低或消除一种或多种Fc效应子功能。
方面C的一个实施方案是其中Fc区被工程改造成使得Fc区与Fc受体(FcR)的结合减少或消除或者Fc区与C1q的结合减少或消除。在方面C的一个特定实施方案中，FcR是FCγRIa(CD64)、FCγRIIa(CD32)、FCγRIIIa(CD16a)或FCγRIIIb(CD16b)。在方面C的另一实施方案中，FcR是FcγRIIa。
方面C的一个实施方案是一种根据本发明的任一实施方案的经分离抗体，其中所述抗体具有IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型或其任何组合或杂合形式。方面C的另一实施方案是一种根据本发明的任一实施方案的经分离抗体，其中所述抗体具有IgG1同种型，并且其中重链恒定区包含如SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列。(P238S和N297G)如实验3中所示，本公开中所提供的用具有SEQ ID NO:21的Fc工程改造的抗体克隆都不结合于FCγRIa、FCγRIIa、FCγRIIIa或FCγRIIIb。如实验4中所示，本公开中所提供的用具有SEQ ID NO:21的Fc工程改造的抗体克隆都不结合于C1q。
位置297处IgG骨架Fc的突变(N297A)已被证明会消除IgG糖基化和Fcγ受体结合。位置265处IgG骨架Fc的突变(D265A)已被证明会消除Fcγ受体结合。因此，制备在Fc区中包含这些突变的本发明的实施方案。方面C的一个实施方案是一种根据本公开的任一实施方案的经分离抗体，其包含重链恒定区，其中所述重链恒定区包含如SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列。(D265A和N297A)
美国专利申请公布号2014/0294834公开了重链恒定区的突变。因此，另一实施方案是一种根据本申请中公开的具有Fc区的实施方案中的任一个实施方案的经分离抗体，其包含重链恒定区，其中所述重链恒定区包含如SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列。(T299K–MM131)
另一实施方案是一种根据本申请中公开的具有Fc区的实施方案中的任一个实施方案的经分离抗体，其包含重链恒定区，其中所述重链恒定区包含如SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列。(N299K)
在特定实施方案中，经分离抗体是连接于重链恒定区的重链可变区。在一个实施方案中，重链可变区VH1直接连接于具有P238S和N297G的重链恒定区，并且经分离抗体重链由如SEQ ID NO:42所提供的氨基酸序列组成。在另一实施方案中，重链可变区VH2直接连接于具有P238S和N297G的重链恒定区，并且经分离抗体重链由如SEQ ID NO:43所提供的氨基酸序列组成。在再一实施方案中，重链可变区VH3直接连接于具有P238S和N297G的重链恒定区，并且经分离抗体重链由如SEQ ID NO:44所提供的氨基酸序列组成。在又一实施方案中，重链可变区VH4直接连接于具有P238S和N297G的重链恒定区，并且经分离抗体重链由如SEQID NO:45所提供的氨基酸序列组成。
在一个实施方案中，重链可变区VH1直接连接于具有D265A/N297A的重链恒定区，并且经分离抗体重链由如SEQ ID NO:46所提供的氨基酸序列组成。在再一实施方案中，重链可变区VH2直接连接于具有D265A/N297A的重链恒定区，并且经分离抗体重链由如SEQ IDNO:47所提供的氨基酸序列组成。在又一实施方案中，重链可变区VH3直接连接于具有265A/N297A的重链恒定区，并且经分离抗体重链由如SEQ ID NO:48所提供的氨基酸序列组成。在再一实施方案中，重链可变区V4直接连接于具有265A/N297A的重链恒定区，并且经分离抗体重链由如SEQ ID NO:49所提供的氨基酸序列组成。
在又一实施方案中，重链可变区VH1直接连接于具有IgG1/IgG4杂合体的重链恒定区，并且经分离抗体重链由如SEQ ID NO:50所提供的氨基酸序列组成。在再一实施方案中，重链可变区VH2直接连接于具有IgG1/IgG4杂合体的重链恒定区，并且经分离抗体重链由如SEQ ID NO:51所提供的氨基酸序列组成。在再一实施方案中，重链可变区VH3直接连接于具有IgG1/IgG4杂合体的重链恒定区，并且经分离抗体重链由如SEQ ID NO:51所提供的氨基酸序列组成。在另一实施方案中，重链可变区VH4直接连接于具有IgG1/IgG4杂合体的重链恒定区，并且经分离抗体重链由如SEQ ID NO:53所提供的氨基酸序列组成。
在另一实施方案中，重链可变区VH1直接连接于具有IgG4的重链恒定区，并且经分离抗体重链由如SEQ ID NO:54所提供的氨基酸序列组成。在又一实施方案中，重链可变区VH2直接连接于具有IgG4的重链恒定区，并且经分离抗体重链由如SEQ ID NO:55所提供的氨基酸序列组成。在再一实施方案中，重链可变区VH3直接连接于具有IgG4的重链恒定区，并且经分离抗体重链由如SEQ ID NO:56所提供的氨基酸序列组成。在另一实施方案中，重链可变区VH4直接连接于具有IgG4的重链恒定区，并且经分离抗体重链由如SEQ ID NO:57所提供的氨基酸序列组成。
再一实施方案是一种根据具有可变轻链和轻链恒定区的实施方案中的任一实施方案的经分离抗体，其中所述轻链恒定区包含如SEQ ID NO:25所示的序列。另一实施方案是具有所述恒定轻链区的可变轻链1，其中氨基酸序列提供在SEQ ID NO:38中。再一实施方案是具有所述恒定轻链区的可变轻链2，其中氨基酸序列提供在SEQ ID NO:39中。在又一实施方案中，可变轻链3具有所述恒定轻链区，其中氨基酸序列提供在SEQ ID NO:40中。在再一实施方案中，可变轻链4具有所述恒定轻链区，其中氨基酸序列提供在SEQ ID NO:41中。
另一实施方案是一种用于治疗患有CD40L相关疾病或病症的受试者的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的本申请中公开的抗体或其抗原结合片段。
另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:42所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:38所提供的轻链序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:43所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:38所提供的轻链序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:44所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:38所提供的轻链序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQID NO:45所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:38所提供的轻链序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:42所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ IDNO:39所提供的轻链序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:43所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:39所提供的轻链序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:44所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:39所提供的轻链序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:45所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:39所提供的轻链序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:42所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:40所提供的轻链序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:43所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:40所提供的轻链序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:44所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:40所提供的轻链序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:45所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:40所提供的轻链序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ IDNO:42所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:41所提供的轻链序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:43所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:41所提供的轻链序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:44所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:41所提供的轻链序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:45所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:41所提供的轻链序列。
另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:46所提供的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:38所提供的氨基酸序列的轻链。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:47所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:38所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:48所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:38所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:49所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:38所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:46所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:39所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:47所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:39所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:48所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:39所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:49所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:39所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:46所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:40所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:47所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:40所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:48所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:40所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:49所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:40所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:46所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:41所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:47所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ IDNO:41所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ IDNO:48所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:41所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:49所提供的氨基酸序列的重链和如SEQID NO:41所提供的轻链氨基酸序列。
另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:50所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:38所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:51所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:38所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:52所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:38所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:53所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:38所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:50所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:39所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:51所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:39所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:52所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:39所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:53所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:39所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:50所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:40所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:51所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:40所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:52所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:40所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:53所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:40所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:50所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:41所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:51所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:41所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:52所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:41所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:53所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:41所提供的轻链氨基酸序列。
另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:54所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:38所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:55所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:38所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:56所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:38所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:57所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:38所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:54所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:39所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:55所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:39所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:56所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:39所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:57所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:39所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:54所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:40所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:55所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:40所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:56所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:40所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:57所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:40所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:54所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:41所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:55所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:41所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:56所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:41所提供的轻链氨基酸序列。另一实施方案是一种经分离抗体，其具有含有如SEQ ID NO:57所提供的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO:41所提供的轻链氨基酸序列。
又一实施方案是一种用于治疗患有神经变性或神经肌肉疾病或病症；炎症性或免疫疾病或病症；或自体免疫疾病的受试者的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的本申请中公开的抗体或其抗原结合片段。
另一实施方案是一种用于治疗患有选自由全身性红斑狼疮、1型糖尿病、重症肌无力、牛皮癣、阿狄森氏病(Addison’s disease)、克罗恩氏病(Crohn’s disease)、葡萄膜炎、多发性硬化症、溶血性贫血、炎症性肠病、免疫血小板减少性紫癜、格雷福斯病(Graves’disease)和类风湿性关节炎组成的组的自体免疫疾病的受试者的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的本申请中公开的抗体或其抗原结合片段。
又一实施方案是一种用于治疗患有选自由阿尔茨海默氏病(Alzheimer’sDisease)、帕金森氏病(Parkinson’s Disease)、肌萎缩性侧索硬化、多灶性运动神经病变、原发性侧索硬化、脊髓性肌肉萎缩、肯尼迪氏病(Kennedy’s Disease)和脊髓小脑共济失调组成的组的神经变性病症或神经肌肉病症的受试者的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的本申请中公开的抗体或其抗原结合片段。
再一实施方案是一种用于治疗患有肌萎缩性侧索硬化的受试者的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的本申请中公开的抗体或其抗原结合片段。
另一实施方案是一种用于抑制受试者中的免疫应答的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的本申请中公开的抗体或其抗原结合片段。
另一实施方案是一种抑制受试者中的免疫应答的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的抗体或其抗原结合片段，其中所述免疫应答是移植物抗宿主疾病或器官移植排斥。
再一实施方案是一种根据本公开的任何方法的方法，其中抗体或抗体片段与另一治疗剂组合施用。一个实施方案是一种根据本公开的任何方法的方法，其中抗体或抗体片段与阻断CD28与CD86之间或CD28与CD80之间的相互作用的化合物组合施用。
又一实施方案是一种根据本公开的任何方法的方法，其中抗体或抗体片段与阻断CD28与CD86之间或CD28与CD80之间的相互作用的化合物组合施用，所述化合物是CTLA4-Ig融合蛋白。
再一实施方案是一种根据本公开的任何方法的方法，其中抗体或抗体片段与阻断CD28与CD86之间或CD28与CD80之间的相互作用的化合物组合施用，所述化合物是阿巴西普(abatacept)或贝拉西普(belatacept)或加利昔单抗(galiximab)。
表1.序列
实施例
实施例1CD40L结合测定
为将来自全部16个克隆的抗体相对于5c8或AT-1501进行CD40L结合比较，使用2个克隆操作结合测定，其中5c8和AT-1501在同一96孔测定板上进行操作。三部分夹心式ELISA测定用于测定相较于参照抗体5c8-19和AT1501，本公开的抗体的结合水平。使用2ug/ml，用处于PBS中的重组人CD40L(BioLegend目录号591706)包被96孔聚苯乙烯板，并且将50ul/孔添加至Costar 96孔半区高结合测定板(Corning 3690)中并在4℃下孵育过夜。在室温下，将板用(1X)PBS/1.0％ BSA(140ul/孔)阻断1小时以防止本底结合。添加用于制作结合曲线的5C8或AT1501(从2ug/ml开始，连续2倍稀释液)(50ul/孔)，并且在室温下孵育1小时。将板洗涤，并且与1:10,000稀释的HRP-(Fab2)驴抗人IgG抗体(Fc特异性)(JacksonImmuno.709-036-098)(50ul/孔)一起在室温下孵育1小时。将板洗涤，并且添加TMB底物(Surmodics BioFX TMBW-1000-01)(50ul/孔)。在室温下5分钟之后，用25ul 2N H2SO4终止显色。使用SoftMax Pro 6.2.2程序在Molecular Devices SpectraMax M5板读取器上读取板，以测定在450nm下的吸光度。
如下计算相对CD40L结合效能：[IC50(克隆)/IC50(5c8或AT-1501)X100％]。16个克隆相对于5c8的效能排名示于图1A中，而相对于AT-1501的效能排名示于图1B中。所得结合曲线示于图2A-图2Q(16个克隆与5c8的比较，图2H示出AT-1501与5c8之间的比较)以及图3A-图3Q(16个克隆与AT-1501的比较，图3H示出AT-1501与5c8之间的比较)中。每个克隆的IC50、LCL、UCL和相对效能示于表2(与5c8的比较)和表3(与AT-1501的比较)中。
表2
表3
实施例2与人FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIIa和FcγRIIIb的结合活性
利用具有两个突变P238S和N297G的IgG1 Fc(SEQ ID NO:21)构建16个VH/VL抗体克隆。测定这些抗体克隆的针对与人FcγRI、FcγRIIa和FcγRIIIa的结合的Fc效应子功能。
将抗CD40L抗体(阿巴西普作为阴性对照被包括)在(1X)PBS中稀释至2ug/ml，并且将50ul/孔添加至Costar 96孔半区高结合测定板(Corning 3690)中以在4℃下孵育过夜。在室温下，将板用(1X)PBS/1.0％ BSA(140ul/孔)阻断1小时以防止本底结合。添加用于制作结合曲线的重组人FcγRI、FcγIIa、FcγIIIa和FcγIIIb(从5ug/ml开始，连续2倍稀释液)(50ul/孔)，并且在室温下孵育1小时。将板洗涤，并且与2ug/ml的小鼠抗人CD16(抗FcRIII)、CD32(抗FcRIIa)或CD64(抗FcRI)抗体(eBioSciences/Invitrogen 14-0168-82、16-0329-81、14-0649-82)(50ul/孔)一起在室温下孵育1小时。将板洗涤，并且与1:10,000稀释的HRP-(Fab2)山羊抗小鼠IgG抗体(Fc特异性)(Jackson Immuno.116-036-071)(50ul/孔)一起在室温下孵育1小时。将板洗涤，并且添加TMB底物(Surmodics BioFX TMBW-1000-01)(50ul/孔)。在室温下5分钟之后，用(25ul/孔)2N H2SO4终止显色。使用SoftMax Pro6.2.2程序在Molecular Devices SpectraMax M5板读取器上读取板，以测定在450nm下的吸光度。
如可在图中所见，本申请中公开的克隆对于与这三种Fc受体的结合呈阴性，而5c8结合于FcγRI、FcγRIIa，但不结合于FcγRIIIa或FcγRIIIb。图4A和图4B各自示出相较于5c8、AT-1501和阿巴西普的结合曲线，八个抗体克隆与FcγRIa的结合。图5A和图5B各自示出相较于5c8、AT-1501和阿巴西普的结合曲线，八个抗体克隆与FcγRIIa的结合。图6A和图6B各自示出相较于5c8、AT-1501和阿巴西普的结合曲线，八个抗体克隆与FcγRIIIa的结合。图6C和图6D各自示出相较于5c8、AT-1501和阿巴西普的结合曲线，八个抗体克隆与FcγRIIIb的结合。(图4A、图5A、图6A和图6A示出来自抗体克隆4-4、5-3、6-6、7-5、8-3、8-4、10-1和10-4的结果，图4B、图5B、图6C和图6D示出来自抗体克隆11-5、12-4、13-2、15-1、15-4、16-3、17-1和18-2的结果)。
实施例4与C1q的结合活性
将抗CD40L抗体(阿巴西普作为阴性对照被包括)在(1X)PBS中稀释至2ug/ml，并且将50ul/孔添加至Costar 96孔半区高结合测定板(Corning 3690)中以在4℃下孵育过夜。在室温下，将板用(1X)PBS/1.0％ BSA(140ul/孔)阻断1小时以防止本底结合。添加用于制作结合曲线的从10ug/ml开始进行连续2倍稀释的天然人C1q蛋白(Abcam ab96363)(50ul/孔)，在室温下保持1小时。将板洗涤，并且添加1:400稀释的HRP-绵羊抗人C1q抗体(Abcamab46191)(50ul/孔)并在室温下孵育1小时。将板洗涤，并且添加TMB底物(Surmodics BioFXTMBW-1000-01)(50ul/孔)。在室温下5分钟之后，用(25ul/孔)2N H2SO4终止显色。使用SoftMax Pro 6.2.2程序在Molecular Devices SpectraMax M5板读取器上读取板，以测定在450nm下的吸光度。
如可在图中所见，来自本申请中公开的全部十六个抗体克隆的抗体就与C1q的结合来说都呈阴性，而5c8表现出显著结合。图7A和图7B各自示出相较于5c8、AT-1501和阿巴西普的结合曲线，八个抗体克隆与C1q的结合。图7A示出来自抗体克隆4-4、5-3、6-6、7-5、8-3、8-4、10-1和10-4的结果，并且图7B示出来自抗体克隆11-5、12-4、13-2、15-1、15-4、16-3、17-1和18-2的结果。

Claims (23)

1.一种特异性结合CD40L的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段包含：
如包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列或与SEQ ID NO:2具有至少80％同一性的氨基酸序列的可变重(VH)链中所示的重链互补决定区(HCDR)1(HCDR1)、重链互补决定区(HCDR)2(HCDR2)和重链互补决定区(HCDR)3(HCDR3)。
2.根据权利要求1所述的抗体或其片段，其包含：
具有与SEQ ID NO:2所示的序列至少80％相同的氨基酸序列的VH；和
具有与SEQ ID NO:5所示的序列至少80％相同的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
3.根据权利要求1所述的抗体或其片段，其包含：
VH，包含：
含有SEQ ID NO:9所示的序列的CDRH1结构域；
含有SEQ ID NO:14所示的序列的CDRH2结构域；
含有SEQ ID NO:15所示的序列的CDRH3结构域；和
VL，包含：
含有SEQ ID NO:16所示的序列的CDRL1结构域；
含有SEQ ID NO:18所示的序列的CDRL2结构域；
含有SEQ ID NO:20所示的序列的CDRL3结构域。
4.根据权利要求1所述的抗体或其片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含Fc区，并且所述Fc区被工程改造来降低或消除一种或多种Fc效应子功能。
5.根据权利要求4所述的抗体或其片段，其中所述一种或多种Fc效应子功能是FcR结合或补体结合。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的抗体或其片段，其中所述抗体为IgG1同种型，并且其中重链恒定区包含与SEQ ID NO:21所示的序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
7.根据权利要求1-5中任一项所述的抗体或其片段，其进一步包含重链恒定区，其中所述重链恒定区包含与SEQ ID NO:22所示的序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
8.根据权利要求1-5中任一项所述的抗体或其片段，其进一步包含重链恒定区，其中所述重链恒定区包含与SEQ ID NO:23所示的序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
9.根据权利要求1-5中任一项所述的抗体或其片段，其进一步包含重链恒定区，其中所述重链恒定区包含与SEQ ID NO:24所示的序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
10.根据权利要求1-5中任一项所述的抗体或其片段，其中所述抗体进一步包含轻链恒定区，其中所述轻链恒定区包含与SEQ ID NO:25所示的序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
11.根据权利要求1-5中任一项所述的抗体或其片段，其中所述抗体包含具有与SEQ IDNO:43所示的序列至少90％相同的氨基酸序列的重链和具有与SEQ ID NO:38所示的序列至少90％相同的氨基酸序列的轻链。
12.根据权利要求1-5中任一项所述的抗体或其片段，其中所述抗体包含具有与SEQ IDNO:47所示的序列至少90％相同的氨基酸序列的重链和具有与SEQ ID NO:38所示的序列至少90％相同的氨基酸序列的轻链。
13.根据权利要求1-5中任一项所述的抗体或其片段，其中所述抗体包含具有与SEQ IDNO:51所示的序列至少90％相同的氨基酸序列的重链和具有与SEQ ID NO:38所示的序列至少90％相同的氨基酸序列的轻链。
14.根据权利要求1-5中任一项所述的抗体或其片段，其中所述抗体包含具有与SEQ IDNO:55所示的序列至少90％相同的氨基酸序列的重链和具有与SEQ ID NO:38所示的序列至少90％相同的氨基酸序列的轻链。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的抗体或其片段在制备用于治疗神经变性或神经肌肉疾病或病症；炎症性或免疫疾病或病症；自体免疫疾病，或免疫应答的药物中的用途。
16.根据权利要求15所述的用途，其中所述疾病或病症是选自以下的自体免疫疾病：全身性红斑狼疮、1型糖尿病、重症肌无力、牛皮癣、阿狄森氏病、克罗恩氏病、葡萄膜炎、多发性硬化症、溶血性贫血、炎症性肠病、免疫血小板减少性紫癜、格雷福斯病和类风湿性关节炎。
17.根据权利要求14所述的用途，其中所述疾病或病症是选自以下的神经变性病症或神经肌肉病症：阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、肌萎缩性侧索硬化、多灶性运动神经病变、原发性侧索硬化、脊髓性肌肉萎缩、肯尼迪氏病或脊髓小脑共济失调。
18.根据权利要求16所述的用途，其中所述疾病或病症是肌萎缩性侧索硬化。
19.根据权利要求1-14中任一项所述的抗体或其片段在制备用于抑制受试者中的免疫应答的药物中的用途。
20.如权利要求19所述的用途，其中所述免疫应答是移植物抗宿主疾病或器官移植排斥。
21.根据权利要求15-20中任一项所述的用途，其中所述药物进一步包含另一治疗剂。
22.根据权利要求21所述的用途，其中所述药物进一步包含阻断CD28与CD86之间或CD28与CD80之间的相互作用的化合物。
23.根据权利要求22所述的用途，其中所述阻断CD28与CD86之间或CD28与CD80之间的相互作用的化合物是CTLA4-Ig融合蛋白，或者所述阻断CD28与CD86之间或CD28与CD80之间的相互作用的化合物是阿巴西普或贝拉西普或加利昔单抗。
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