BR112014009069A2 - polipeptídeos de anticorpo que antagonizam cd40l - Google Patents
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Abstract
polipeptídeos de anticorpo que antagonizam cd40l, seu uso, ácido nucleico, vetor, célula hospedeira e composição farmacêutica. a presente invenção refere-se a polipeptídeos de anticorpo que se ligam especificamente ao cd40l humano. os polipeptídeos de anticorpo não ativam as plaquetas. os polipeptídeos de anticorpo são úteis no tratamento de doenças que envolvem a ativação de cd40l, tais como doenças relacionadas a enxerto e doenças autoimunes. os polipeptídeos de anticorpo podem ser anticorpos de domínio (dabs) que compreendem um único domínio vh ou vk. a meia-vida dos polipeptídeos de anticorpo pode ser aumentada através da modificação dos polipeptídeos de anticorpo para serem reagentes específicos duais que também podem se ligar à albumina do soro humano (hsa) ou outro antígeno. a presente invenção também se refere a um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo de anticorpo, a um vetor compreendendo o referido ácido nucleico, a uma célula hospedeira compreendendo o referido vetor, a uma composição farmacêutica compreendendo um polipeptídeo de anticorpo e ao uso de um polipeptídeo de anticorpo para a preparação de um medicamento para o tratamento de um paciente que tem ou está em risco de ter uma doença imune.
Description
da superfície celular, uma característica comum da família de TNFR. À expressão mais alta de CD40 foi observada em células apresentado- ras de antígeno (APCs), tais como células B, macrófagos e células dendríticas, enquanto uma expressão menor deste receptor é obser- vadaem uma variedade de outros tipos de células, incluindo células estromais e epitélio tímico. A interação CD40-CD40L é essencial para as interações de células T-B normais, incluindo maior coestimulação, promoção de células T, produção de citocinas, alteração de classe dos anticorpos e maturação da afinidade e produção de anticorpos e auto- anticorpos.
[005] A função crucial das interações CD40-CD40L nas respostas imunológicas e inflamatórias as tornou um alvo promissor para o tra- tamento de processos imuno-inflamatórios patológicos. O bloqueio das interações CD40-CD40L através de anticorpos monoclonais (mAbs) para CD40L específicos previne de forma bem sucedida a rejeição a aloenxertos em primatas e trata doenças autoimunes e aterosclerose em modelos com animais. Montgomery e outros, Transplantation 74: 1365-1369 (2002).
[006] Em seres humanos, dois clones de mAb anti-CD40L dife- rentes foram utilizados em testes clínicos para o tratamento de doen- ças autoimunes diferentes. Maribel e outros, Mol. Immunol. 45: 937-44 (2008). Anticorpos monoclionais, entretanto, podem exibir incidência surpreendentemente alta de complicações tromboembólicas (TE), tais como eventos do sistema nervoso central aterotrombóticos, enfarte do miocárdio, embolia pulmonar e trombose de veia profunda. Por exem- plo, a utilidade do clone de mAb anti-CD40L hu5c8 (anti-CD40L mAb, Biogen) é limitada por uma incidência surpreendentemente alta de complicações TE. Acredita-se que as TE por estes anticorpos resultem da formação de complexos imunológicos (IC) de ordem superior dos —mAbs com CD40L ligado à membrana nas plaquetas ou derramamen-
to de sSCD40L partindo das plaquetas, que podem se ligar e dessa ma- neira agregar plaquetas vizinhas através de seus receptores de FcgRI- la, resultando na formação de coágulos sanguíneos. O risco de trom- boembolia levou a uma suspensão em todos os testes clínicos em an- damento. Boumpas e outros, Arthritis & Rheumatism 48: 719-727 (2003).
[007] Os antagonistas de anticorpos anti-CD40L que são menos prováveis que causem agregação de plaquetas e assim causem trom- boembolia ainda são necessários em um cenário clínico. Novos poli- peptídeos de anticorpo que se ligam especificamente ao CD40L hu- mano são fornecidos. Os polipeptídeos de anticorpo vantajosamente não causam agregação de plaquetas. Os polipeptídeos de anticorpo são úteis no tratamento de doenças que envolvem a ativação de CDA40L, incluindo doenças autoimunes, rejeição a transplante e res- postas alérgicas. Os polipeptídeos de anticorpo compreendem um domínio variável. Os exemplos de polipeptídeos de anticorpo estão na forma de um anticorpo de domínio (dAb) que contém um único domí- nio variável. Alternativamente, os dAbs podem ser reagentes biespecí- ficos que compreendem um segundo domínio variável que pode se ligar com outro antígeno, tal como a albumina do soro humano (HSA), por exemplo.
[008] É fornecido um polipeptídeo de anticorpo que compreende um primeiro domínio variável que se liga especificamente ao CD40L humano, em que o primeiro domínio variável compreende a sequência de aminoácidos de um dos domínios variáveis selecionados da linha- gem BMS2h. É adicionalmente fornecido um polipeptídeo de anticorpo isolado que compreende um primeiro domínio variável que se liga es- pecificamente ao CD40L humano, em que CD40L compreende a se- quênciade aminoácidos da SEQ ID NO: 1, em que a sequência de a-
minoácidos do primeiro domínio variável compreende: (a) uma região de CDR1 que difere da região de CDR1 de BMS2h-572-633 em até três aminoácidos, (b) uma região de CDR2 que difere da região de CDR?2 de BMS2h-572-633 em até três aminoácidos, (c) uma região de CDR3 que difere da região de CDR3 de BMS2h-572-633 em até três aminoácidos, (d) uma região de FR1 que difere da região de FR1 de BMS2h-572-633 em até três aminoácidos, (e) uma região de FR2 que difere da região de FR2 de BMS2h-572-633 em até três aminoácidos, (f) uma região de FR3 que difere da região de FR3 de BMS2h-572-633 em até três aminoácidos e (g) uma região de FR4 que difere da região de FR4 de BMS2h-572-633 em até três aminoácidos; e em que o poli- peptídeo de anticorpo inibe a ligação de CD40L ao CD40 com uma EC50 de 100 pM até 100 nM. Também é fornecido um polipeptídeo de anticorpo, em que a sequência de aminoácidos do primeiro domínio variável compreende: (a) uma região de CDR1 que difere da região de CDR1 de BMS2h-572-633 em até três aminoácidos, (b) uma região de CDR?2 que difere da região de CDR2 de BMS2h-572-633 em até três aminoácidos e (c) uma região de CDR3 que difere da região de CDR3 de BMS2h-572-633 em até três aminoácidos. Alternativamente, a se- quência de aminoácidos do primeiro domínio variável pode diferir da sequência de aminoácidos de BMS2h-572-633 em até e incluindo 10 aminoácidos. Além disso, a sequência de aminoácidos do primeiro domínio variável pode diferir da sequência de aminoácidos de BMS2h- 572-633 em até e incluindo 5 aminoácidos. A sequência de aminoáci- dosdo primeiro domínio variável também pode diferir da sequência de aminoácidos de BMS2h-572-633 em até e incluindo 2 aminoácidos. Alternativamente, o primeiro domínio variável difere da sequência de aminoácidos de BMS2h-572-633 em 1 aminoácido.
[009] Também é fornecido um polipeptídeo de anticorpo selecio- nado do grupo de linhagem de BMS2h-572, em que a sequência de aminoácidos do primeiro domínio variável compreende ainda: (a) uma região de CDR1 que possui uma sequência Trp-X,-Leu-Met-Gly (SEQ ID NO: 2), em que X, é Glu ou Gln; (b) uma região de CDR2 que pos- sui uma sequência Gly-lle-Glu-Gly-Pro-Gly-Asp-Val-Thr-Tyr-Tyr-Ala- —Asp-Ser-Val-Lys-Gly (SEQ ID NO: 3); e (c) uma região de CDR3 que possui uma sequência Lys-X,-Y,- Z>-Ser-Asp-Tyr (SEQ ID NO: 4), em que X, é Asp ou Glu, Y, é Ala ou Ser e Z>? é Lys, Asn ou Arg. Também é fornecido o polipeptídeo de anticorpo, em que a sequência de ami- noácidos do primeiro domínio variável compreende ainda: (a) uma re- giãode FR1 que possui uma sequência Glu-Val-Gln-Leu-Leu-Glu-Ser- Gly-Gly-Gly-Leu-Val-GlIn-Pro-Gly-Gly-Ser-Leu-Arg-Leu-Ser-Cys-Ala- Ala-Ser-Gly-Phe-Thr-Phe-Asn (SEQ ID NO: 5); (b) uma região de FR2 que possui uma sequência Trp-X,-Arg-Gln-Ala-Pro-Gly-Lys-Gly-Leu- Glu-Trp-Val-Ser (SEQ ID NO: 6), em que X; é Ala ou Val; (c) uma regi- ão de FR3 que possui uma sequência Arg-Thr-Phe-lle-Ser-Arg-Asp- Asn-Ser-Lys-Asn-Thr-Leu-Tyr-Leu-GlIn-Met-Asn-Ser-Leu-Arg-Ala-Glu- Asp-Thr-Ala-Val-Tyr-Tyr-Cys-Val-Lys-Val-Gly (SEQ ID NO: 7); e (d) uma região de FR4 que possui uma sequência Arg-Gly-Gln-Gly-Thr- Leu-Val-Thr-Val-Ser-Ser (SEQ ID NO: 8). Alternativamente, o primeiro domínio variável do polipeptídeo de anticorpo pode compreender a se- quência de aminoácidos de BMS2h-572-633;
[0010] Também é fornecido um polipeptídeo de anticorpo selecio- nado do grupo de linhagem de BMS2h-719, que compreende um pri- meiro domínio variável com a sequência consenso a seguir: Glu-Val- Gln-Leu-Leu-Glu-Ser-Gly-Gly-Gly-Leu-Val-Gln-Pro-Gly-Gly-Ser-Leu- Arg-Leu-Ser-Cys-Ala-Ala-Ser-Gly-Phe-Thr-Phe-X,-Y,-Tyr-Glu-Met-Z,- Trp-Val-Arg-Gln-Ala-Pro-Gly-Lys-Gly-Leu-Glu-Trp-Val-Ser-Ser-lle-Ser- Ser-Asp-Gly-Ser-Phe-Thr-Tyr-Tyr-Ala-A,-Ser-Val-Lys-Gly-Arg-Phe-Thr- Ile-Ser-Arg-Asp-Asn-Ser-Lys-Asn-Thr-Leu-Tyr-Leu-Gln-Met-Asn-Ser- Leu-Arg-Ala-Glu-Asp-Thr-Ala-Val-Tyr-Tyr-Cys-Ala-B,-Pro-Phe-Thr-Glu-
C,-Asp-Tyr-Trp-Gly-His-Gly-Thr-Leu-Val-Thr-Val-Ser-Ser (SEQ ID NO: 9), em que X, é Lys ou Asn; Y, é Arg, Lys, Ser ou Thr; Z, é Met ou Gln; A, é Asp ou Glu; B, é Asp ou Glu; e C, é Phe, Met ou Leu.
[0011] Também é fornecido um polipeptídeo de anticorpo selecio- nado do grupo de linhagem de BMS2h-503, que compreende um pri- meiro domínio variável com a sequência consenso a seguir: Asp-lle- Gln-Met-Thr-Gln-Ser-Pro-Ser-Ser-Leu-Ser-Ala-Ser-Val-Gly-Asp-Arg- Val-Thr-Ile-Thr-Cys-Arg-Ala-Ser-His-X,-lle-GIn-Arg-Tyr-Leu-Ser-Trp- Tyr-Gln-Gln-Lys-Pro-Gly-Lys-Ala-Pro-Lys-Leu-Leu-lle-Leu-Trp-Gly-Ser- Gln-Leu-Gln-Ser-Gly-Val-Pro-Ser-Arg-Phe-Ser-Gly-Ser-Gly-Ser-Gly- Thr-Asp-Phe-Thr-Leu-Thr-lle-Ser-Ser-Leu-Gln-Pro-Glu-Asp-Phe-Ala- Thr-Tyr-Tyr-Cys-Gly-Gln-Trp-Trp-Ala-Pro-Pro-Gln-Thr-Phe-Gly-Gln- Gly-Thr-Lys-Val-Glu-lle-Lys-Arg (SEQ ID NO: 10), em que X, é His ou Asp.
[0012] Também é fornecido um polipeptídeo de anticorpo selecio- nado do grupo de linhagem de BMS2h-116, que compreende um pri- meiro domínio variável com a sequência consenso a seguir: Asp-lle- Gln-Met-Thr-Gln-Ser-Pro-Ser-Ser-Leu-Ser-Ala-X,-Val-Gly-Asp-Arg-Val- Thr-lle-Thr-Cys-Arg-Ala-Ser-Gln-Pro-lle-Gly-Pro-Asp-Leu-Leu-Trp-Tyr- GIn-Gln-Lys-Pro-Gly-Lys-Ala-Pro-Lys-Leu-Leu-lle-Tyr-GlIn-Thr-Ser-lle- Leu-Arg-Ser-Gly-Val-Pro-Ser-Arg-Phe-Ser-Gly-Ser-Gly-Ser-Glu-Thr- Asp-Phe-Thr-Leu-Thr-lle-Ser-Asn-Leu-Gln-Pro-Glu-Asp-Y-Ala-Z,-Tyr- Tyr-Cys-GlIn-Gln-Tyr-Trp-Ala-Phe-Pro-Val-Thr-Phe-Gly-A,-Gly-Thr-Lys- Val-Val-lle-Lys-Arg (SEQ ID NO: 11), em que X, é Ser ou Tyr; Y; é Leu ouPhe;Z,éThrouLys;eA, é Lys, Arg ou Gln.
[0013] Também é fornecido um polipeptídeo de anticorpo que compreende um primeiro domínio variável que se liga especificamente ao CD40L humano, em que o polipeptídeo de anticorpo é um anticorpo de domínio (dAb). O polipeptídeo de anticorpo pode ser um polipeptí- deo de fusão que compreende o primeiro domínio variável e um domí-
nio Fc. Alternativamente, o polipeptídeo de fusão pode compreender um domínio Fc de IgG4. O polipeptídeo de fusão também pode com- preender um domínio Fc de IgG1. O polipeptídeo de fusão também pode compreender um domínio Fc de IgG1. Alternativamente, o poli- peptídeo de fusão pode compreender um domínio CT-Long. O polipep- tídeo de fusão também pode compreender um domínio CT-short. Al- ternativamente, o polipeptídeo de fusão pode compreender um domí- nio Fc de N297Q Long. O polipeptídeo de fusão pode alternativamente compreender um domínio Fc de N297Q Short.
[0014] Também é fornecido um polipeptídeo de anticorpo que compreende um primeiro domínio variável que se liga especificamente ao CD40L humano, em que o polipeptídeo de anticorpo compreende ainda um segundo domínio variável que se liga especificamente a um segundo antígeno, em que o segundo antígeno é um antígeno sem ser CD40L humano. O segundo antígeno pode ser uma molécula de clus- ter de diferenciação (CD) ou uma molécula de Complexo de Histo- compatibilidade Principal (MHC) de Classe Il. Alternativamente, o se- gundo antígeno pode ser albumina do soro (SA).
[0015] Também é fornecido um ácido nucleico que codifica qual- quer um dos polipeptídeos de anticorpo fornecidos aqui. É também considerado um vetor que compreende o ácido nucleico. Uma célula hospedeira isolada pode compreender tal vetor.
[0016] É fornecida uma composição farmacêutica que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz do polipeptídeo de anticorpo fornecido aqui e um veículo farmaceuticamente aceitável. A composi- ção farmacêutica pode compreender ainda um agente imunossupres- sorlimunomodulador e/ou anti-inflamatório.
[0017] É fornecido um método de tratamento de uma doença imu- ne em um paciente que necessita de tal tratamento que compreende a administração ao paciente de uma quantidade terapeuticamente eficaz da composição farmacêutica descrita aqui. Um exemplo de método administra a composição farmacêutica em combinação com agente imunossupressor/imunomodulador e/ou anti-inflamatório. A doença imune pode ser uma doença autoimune ou uma doença relacionada a enxerto. Alternativamente, a doença imune é uma doença relacionada a enxerto. Além disso, a doença relacionada a enxerto pode compre- ender rejeição a transplante de órgão sólido, tecido e/ou célula. Alter- nativamente, a doença relacionada a enxerto é a doença de enxerto versus hospedeiro (GVHD). A doença relacionada a enxerto pode ser ainda uma rejeição a transplante aguda. Alternativamente, a doença relacionada a enxerto pode ser uma rejeição a transplante crônica.
[0018] Também é fornecido o método de tratamento de uma doen- ça relacionada a enxerto, em que a composição farmacêutica é coad- ministrada com uma molécula de CTLA4 mutante. A molécula de CTLA4 mutante pode ser L104EA29Y-lg (belatacept).
[0019] É também fornecido um método de tratamento de uma do- ença imune em um paciente que necessita de tal tratamento que com- preende a administração ao paciente de uma quantidade terapeutica- mente eficaz da composição farmacêutica fornecida aqui, em que a doença imune é selecionada do grupo que consiste em doença de Ad- dison, alergias, espondilite anquilosante, asma, aterosclerose, doen- ças autoimunes do ouvido, doenças autoimunes do olho, hepatite au- toimune, parotidite autoimune, colite, doença cardíaca coronariana, doença de Crohn, diabetes, incluindo diabetes do Tipo 1 e/ou do Tipo 2, epididimite, glomerulonefrite, doença de Graves, síndrome de Guil- lain-Barre, doença de Hashimoto, anemia hemolítica, púrpura trombo- citopênica idiopática, doença inflamatória do intestino, resposta imuno- lógica a produtos de fármacos recombinantes, lúpus eritematoso sis- têmico, infertilidade do sexo masculino, esclerose múltipla, miastenia grave, pênfigo, psoríase, febre reumática, artrite reumatoide, sarcoido-
se, escleroderma, síndrome de Sjogren, espondiloartropatias, tireoidi- te, rejeição a transplante, vasculite, AIDS, alergia atópica, asma bron- quial, eczema, lepra, esquizofrenia, depressão herdada, transplante de tecidos e órgãos, síndrome de fadiga crônica, doença de Alzheimer, doença de Parkinson, enfarte do miocárdio, derrame, autismo, epilep- sia, fenômeno de Arthus, anafilaxia, alcoolismo e dependência de dro- gas. Alternativamente, a doença imune pode ser miastenia grave, púr- pura trombocitopênica idiopática ou esclerose sistêmica.
[0020] Também é fornecido um uso de um polipeptídeo de anti- corpo isolado divulgado aqui para a preparação de um medicamento para o tratamento de um paciente, em que o paciente tem ou está em risco de ter uma doença imune. É adicionalmente fornecido um uso de um polipeptídeo de anticorpo isolado divulgado aqui para a preparação de um medicamento para o alívio de pelo menos um sintoma de uma doença imune em um paciente que necessita do mesmo.
[0021] É adicionalmente fornecido aqui um polipeptídeo de anti- corpo isolado que compreende um primeiro domínio variável, em que o dito polipeptídeo de anticorpo se liga especificamente ao CD40L hu- mano, em que o CD40L compreende a sequência de aminoácidos da SEQIDNO:1,em que o polipeptídeo de anticorpo compete com a li- gação de BMS2h-572-633 e em que o polipeptídeo de anticorpo inibe a ligação de CD40L ao CD40 com uma EC50 de 100pM até 100nM. Em um aspecto, o primeiro domínio variável compreende a sequência de aminoácidos de um dos polipeptídeos de anticorpo selecionado do grupo de linhagem que consiste em BMS2h-572, BMS2h-719, BMS2h- 503 e BMS2h-116. Em outro aspecto, o primeiro domínio variável compreende uma sequência de aminoácidos pelo menos 95% idêntica a BMS2h-572-6, BMS2h-572-608, BMS2h-572-614, BMS2h-572-619, BMS2h-572-633, BMS2h-572-634, BMS2h-572-635, BMS2h-719-2, BMS2h-719-202, BMS2h-719-203, BMS2h-719-213, BMS2h-719-214,
BMS2h-719-215, BMS2h-719-218, BMS2h-719-225, BMS2h-503-1, BMS2h-503-2, BMS2h-116-1312, BMS2h-116-1313 ou BMS2h-116-
1320. Ainda em outro aspecto, o primeiro domínio variável compreen- de a sequência de aminoácidos de BMS2h-572-6, BMS2h-572-608, BMS2h-572-614, BMS2h-572-619, BMS2h-572-633, BMS2h-572-634, BMS2h-572-635, BMS2h-719-2, BMS2h-719-202, BMS2h-719-203, BMS2h-719-213, BMS2h-719-214, BMS2h-719-215, BMS2h-719-218, BMS2h-719-225, BMS2h-503-1, BMS2h-503-2, BMS2h-116-1312, BMS2h-116-1313 ou BMS2h-116-1320.
[0022] A FIG. 1A descreve o anticorpo de domínio que compreen- de um domínio variável de V, BMS2h-572-633 fundido com uma cau- da Fc modificada do IgG1 Abatacept.
[0023] A FIG. 1B mostra a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 1355) do domínio variável BMS2h-572-633. A proteína de fusão de Fc é um dímero de peso molecular de 77.984 Dáltons, com cada cadeia polipeptídica consistindo de 354 aminoácidos. O domínio variá- vel é fundido por um ligante com a construção de Fc mutada de I9G1 humana, em que três resíduos de cisteína são substituídos por serina euma prolina é substituída por um resíduo de serina.
[0024] A FIG. 2 descreve um modelo de trabalho para a via de CD40-40L. O painel superior demonstra estágios iniciais de um encon- tro entre uma célula T e uma APC. O encontro inicial controlado pelo compromisso do receptor de célula T (TCR) do complexo de pMHC (sinal 1) acoplado com uma interação inicial CD28-CD80 (sinal 2) é suficiente para a expressão na superfície celular de CD40L trimérico (painel inferior). O compromisso de CD40 por CD40L resulta em várias respostas biológicas esquematizadas na caixa cinzenta.
[0025] A FIG. 3 fornece sequências (SEQ ID NOS 1356-1361, res- pectivamente, na ordem de aparecimento) de vários domínios Fc. As regiões ligantes são mostradas nas caixas.
[0026] A FIG. 4 mostra exemplos de vários anticorpos com domí- nio formatado com Fc (SEQ ID NOS 1362-1365, respectivamente, na ordem de aparecimento). As regiões ligantes são indicadas pelas cai- xas.
[0027] A FIG. 5 descreve dados de sensorgrama de SPR para a ligação de 12,5-0,39nM de BMS-986004 (série de diluição de 2:1) com biot-IZ-hCD40L capturado sobre um chip sensor de SPR de estrepta- vidina a 25ºC. As linhas coloridas mostram os dados do sensorgrama com referência dupla e as linhas em preto mostram o ajuste de Lang- muir de 1:1 Langmuir aos dados, com um valor de Kd aparente influ- enciado pela avidez de 0,11 nM.
[0028] A FIG. 6 mostra dados de ITC para titulações de 19 uM de IZ-hCD40L dentro de 2 uM de BMS-986004 (em preto) ou 18 uM de BMS-986004 dentro de 2 UM de IZ-hCD40L (em azul). A proporção molar (estequiometria aparente) é definida por mol de trímero de |Z- hCD40L e por mol de dímero de BMS-986004 Fc bivalente. Os valores de proporção molar obtidos na forma de pontos de equivalência sobre a abscissa sugerem que mais de um mol de BMS-986004 pode se |i- gar por mol de trímero de IZ-hCD40L; entretanto, um modelo estrutural exato para o complexo não pode ser determinado partindo apenas dos dados de ITC. Os quadrados representam o calor integrado dos dados de ligação e as linhas sólidas representam o melhor ajuste a um "mo- delo de 2 conjuntos de sítios".
[0029] A FIG. 7 mostra a eficácia in vivo do representante de CDA40L de camundongo dAb-Fc (resposta de anticorpo induzida por KLH).
[0030] A FIG. 8 demonstra que o dAb BMS-2m-126-24-Fc de ca- mundongo e o anticorpo MR-1 inibem a colite induzida por TNBS em camundongos.
[0031] A FIG. 9 mostra que BMS-2m-126-24-Fc e CTLA4-Ig fun- cionam de forma sinérgica para prolongar a sobrevivência de aloenxer- tos cardíacos.
[0032] A FIG. 10 fornece um modelo hipotético para a agregação de plaquetasmediada por anticorpo monoclonal anti-CD40.
[0033] A FIG. 11A mostra a concentração no plasma vs. o perfil de tempo de BMS-986004 após a dosagem IV de 11 mg/kg em macacos.
[0034] A FIG. 11B demonstra a concentração no plasma vs. os perfis de tempo de BMS-986003 após a dosagem |V de 2 mg/kg em macacos.
[0035] A FIG. 12 apresenta as concentrações no plasma vs. os perfis de tempo de BMS-986003 (após a dosagem SC a 0,2, 2 e 20 mg/kg em macacos) e de 5c8 IgG1 (após a dosagem IV a 20 mg/kg em macacos).
[0036] A FIG. 13 mostra as concentrações no plasma vs. os perfis de tempo de BMS-2m-126-24-CT após 1 mg/kg de dosagem IVe SC e 10 mg/kg de dosagem SC a camundongos.
[0037] A FIG. 14 demonstra a modelagem de PK/PD de exposi- ções do plasma a BMS-986003 e 5c8-lgG1 e resposta de anticorpo anti-KLH (Títulos de IgG).
[0038] A FIG. 15 mostra a modelagem de PK/PD de exposições do plasma a BMS-986004 e RO ex vivo sobre células mononucleares do sangue periférico (PBMC).
[0039] A FIG. 16 demonstra que IV.3 bloqueia a ativação mediada por 5c8/sCD40L IC de plaquetas no sangue humano.
[0040] A FIG. 17 mostra o efeito de variantes de Fc sobre a ativa- ção de plaquetas no sangue humano.
[0041] A FIG. 18 demonstra a ativação de plaquetas com 5c8- CT/sCDA40L IC no sangue de doadores humanos genotipados em rela- ção ao polimorfismo FcegRlla.
[0042] A FIG. 19 diagrama a ativação de plaquetas por vários anti- corpos no sangue de doadores humanos.
[0043] A FIG. 20 mostra os níveis de ativação de plaquetas por vários anticorpos, incluindo BMS-986003, em camundongos transgêni- cos que expressam hFcgRlla.
[0044] As Figuras 21, 22, 23 e 24 mostram alinhamentos de Clus- talW2 de polipeptídeos de anticorpo de domínio representativos de li- nhagens BMS2h-572, BMS2h-719, BMS2h-503 e BMS2h-116, respec- tivamente. A FIG. 21 mostra as SEQ ID NOS 243, 251, 257, 262 e 274-276, respectivamente, na ordem de aparecimento, a FIG. 22 mos- tra as SEQ ID NOS 352, 354-355 e 357-361, respectivamente, na or- dem de aparecimento, a FIG. 23 mostra as SEQ ID NOS 1087-1088, respectivamente, na ordem de aparecimento e a FIG. 24 mostra as SEQ ID NOS 970-971 e 974, respectivamente, na ordem de apareci- mento.
[0045] A FIG. 25 mostra dados do sensorgrama de SPR para ex- perimentos de ligação utilizando dAbs BMS2h-503-1, BMS2h-572-6, BMS2h-719-17 monovalentes e fragmento de Fab monovalente de 5c8, em que as moléculas indicadas competem com cada outra pela ligaçãocom CDA40L (IZ-hCD40L biotinilado).
[0046] A FIG. 26 mostra dados do sensorgrama de SPR para ex- perimentos que testam a ligação de moléculas de BMS2h-572-619-CT- long, BMS2h-572-633-CT-long, BMS2h-572-6-CT-long, BMS2h-719- 202-CT-long, = BMS2h-572-608-CT-long, — BMS2h-572-634-CT-long, BMS2h-572-614-CT-long, BMS2h-572-635-CT-long e 5c8-CT-long a um monômero de CDA40L (3 painéis superiores) ou um trímero de CD40L (3 painéis inferiores).
[0047] São fornecidos polipeptídeos de anticorpo que se ligam es- pecificamente ao CD40L humano. Os polipeptídeos de anticorpo não ativam as plaquetas e os polipeptídeos de anticorpo são úteis no tra- tamento de doenças que envolvem a ativação de CD40L, tais como doenças relacionadas a enxerto e doenças autoimunes. Os polipeptí- deos de anticorpo podem ser selecionados utilizando uma seleção primária que utiliza ensaios de ligação celular, seguida por uma ou mais rodadas de maturação da afinidade propensa a erros ou direcio- nada a oligonucleotídeos degenerados. Como um resultado, é forneci- do um gênero de polipeptídeos de anticorpo que se ligam especifica- mente a CD40L.
[0048] Uma "linhagem" é um conjunto de polipeptídeos de anticor- po relacionados que foram preparados partindo de precursor comum através de maturação de afinidade propensa a erros ou direcionada a oligonucleotídeos degenerados, que é divulgada nos exemplos a se- guir e que se espera que se liguem ao CD40L. A nomenclatura dos polipeptídeos de anticorpo é utilizada para designar as várias linha- gens. A nomenclatura "BMS2h-572," por exemplo, refere-se a polipep- tídeos de anticorpo da linhagem 572, que foram produzidos contra o CDA40L humano. Os polipeptídeos de anticorpo da "linhagem BMS2h- 572" incluem BMS2h-572-1 até BMS2h-572-19, BMS2h-572-21 até BMS2h-572-24, BMS2h-572-601 até BMS2h-572-627 e BMS2h-572- 630 até BMS2h-572-635.
[0049] Consequentemente, em um aspecto, um polipeptídeo de anticorpo compreende um domínio variável que se liga especificamen- te ao CD40L humano, em que o polipeptídeo de anticorpo compete coma ligação de qualquer um dos anticorpos de domínio (dAbs) lista- dos na TABELA 1 ou na TABELA 3. Por exemplo, o polipeptídeo de anticorpo pode competir comum dAb selecionado da linhagem 2h. O dAb também pode ser selecionado de uma linhagem selecionada do grupo que consiste em BMS2h-116, BMS2h-503, BMS2h-572 e BMS2h-719, tal como o dAb BMS2h-572-633, BMS2h-572-608 ou
BMS2h-572-614, por exemplo. Em outro aspecto, um polipeptídeo de anticorpo se liga especificamente ao CD40L humano como qualquer um dos dAbs listados na TABELA 1 e na TABELA 3. Por exemplo, o polipeptídeo de anticorpo pode compreender um domínio variável que seliga especificamente ao CD40L humano como o dAb BMS2h-572- 633, BMS2h-572-608 ou BMS2h-572-614, por exemplo.
[0050] Os polipeptídeos de anticorpo podem ser um anticorpo de domínio que contém um único domínio variável. Os polipeptídeos de anticorpo também podem compreender domínios adicionais, tal como um domínio Fc. Por exemplo, o polipeptídeo de anticorpo pode com- preender um segundo domínio variável que se liga especificamente à albumina do soro humano (HSA). Tais polipeptídeos de anticorpo es- pecíficos duais podem ter uma maior meia-vida, por exemplo.
[0051] Como utilizado aqui, "ligação específica" refere-se à ligação de um antígeno por um polipeptídeo de anticorpo com uma constante de dissociação (K4g) de aproximadamente 1 uM ou inferior que é medi- da, por exemplo, pela ressonância de plasmon de superfície (SPR). Os sistemas de ensaio adequados incluem o sistema de ressonância de plasmon de superfície BlAcore"" e o software de avaliação cinética BlAcore"" (por exemplo, versão 2.1). A afinidade ou a Ka para a inte- ração de ligação específica pode ser de aproximadamente 1 uM ou inferior, aproximadamente 500 nM ou inferior ou aproximadamente 300 nM ou inferior.
[0052] O termo "aproximadamente" será entendido por peritos co- muns na arte e variará até alguma extensão sobre o contexto em que é utilizado. Geralmente, abrange aproximadamente uma faixa de valo- res que são mais/menos 10% de um valor referido.
[0053] De acordo com esta descrição detalhada, as abreviações e as definições a seguir se aplicam. Tem que ser observado que como utilizado aqui, as formas no singular "um", "uma", "o" e "a" incluem re-
ferentes no plural a não ser que o contexto determine claramente o contrário. Assim, por exemplo, referência a "um anticorpo" inclui um grande número de tais anticorpos e referência à " dosagem" inclui refe- rência a uma ou mais dosagens e equivalentes das mesmas conheci- das pelos versados na técnica e assim por diante.
1. CD40L e Atividades de CD40L
[0054] São fornecidos polipeptídeos de anticorpo que se ligam ao CD40L humano. O CD40L é também conhecido como CD154, gp39, proteína de ativação relacionada ao TNF (TRAP), antígeno 5c8 ou T- BAM. Informação estrutural relevante para o CD40L humano pode ser encontrada, por exemplo, no Número de Acesso UniProt P29965. "CD40L humano" refere-se ao CD40L que compreende a sequência de aminoácidos a seguir: 10 20 30 40 50 60
DKIEDERNLH 70 80 90 100 110 120
FEMQKGDQNP 130 140 150 160 170 180
IYAQVTFCSN 190 200 210 220 230 240
LOPGASVFVN 250 260
VTDPSQVSHG TGFTSFGLLK L (SEQ ID NO. 1)
[0055] O CD40L também foi sequenciado em Sus scrofa, Mus musculus, Canis familiaris, Bos ffini, Macaca mulatta, Aotus tivirgatus, Callithrix jacchus, Cercocebus torquatus atys, Macaca nemestrina,
Rattus norvegicus, Gallus gallus, Felis catus e Sus scrofa.
[0056] A ligação dos presentes polipeptídeos de anticorpo ao CD40L antagoniza a atividade de CD40L. "Atividades de CD40L" in- cluem, mas não estão limitadas a, coestimulação e ativação de uma APCem associação com estimulação do receptor de células T por mo- léculas de MHC sobre a APC, secreção de todos os isotipos de imu- noglobulina na presença de citocinas, estimulação de proliferação de células B, produção de citocina, troca de classe do anticorpo e matu- ração da afinidade. Por exemplo, pacientes com síndrome de hiper- IgM ligada ao X expressam CD40 funcional sobre suas células B, mas suas células T ativadas possuem uma proteína CD40L defeituosa, re- sultando em sua incapacidade de ativar células B e induzir troca de subtipo da imunoglobulina. Aruffo e outros, Cell 72:291-300 (1993).
[0057] As atividades de CD40L podem ser mediadas através da interação com outras moléculas. "Atividades de CD40L" incluem a inte- ração funcional entre CD40L e as moléculas a seguir: CD40 (receptor de CD40L), integrina a5B1 e allbB3. Por exemplo, CD40L se liga a seu receptor, CD40, que é expresso sobre uma variedade de APCs, tais como células B, macrófagos e células dendríticas, bem como sobre célulasdo estroma, células endoteliais vasculares e plaquetas.
[0058] Como utilizado aqui, os termos "ativam", "ativa" e "ativa- do(a)" referem-se a um aumento em uma atividade de CD40L mensu- rável fornecida em pelo menos 10% em relação a uma referência, por exemplo, pelo menos 10%, 25%, 50%, 75% ou até mesmo 100% ou mais. A atividade de CD40L é "antagonizada" se a atividade for redu- zida em pelo menos 10% e em um exemplo de modalidade, pelo me- nos 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 97% ou até mesmo 100% (isto é, sem atividade detectável), em relação à ausên- cia do antagonista. Por exemplo, um polipeptídeo de anticorpo pode antagonizar parte ou toda a atividade de CD40L. Em uma modalidade,
o polipeptídeo de anticorpo não ativa a proliferação de células B. Em outra modalidade, o polipeptídeo de anticorpo não ativa a secreção de citocinas pelas células T ou pelas células dendríticas (DCs), em que a citocina é pelo menos uma citocina selecionada do grupo que consiste emliL-2,1L-6,1L-10, 1L-12, 11-13, IL-17, 11-23, TNF-a e IFN-y.
2. Polipeptídeos de Anticorpo
[0059] Os polipeptídeos de anticorpo compreendem um domínio variável. Em uma modalidade, os polipeptídeos de anticorpo estão na forma de um dAb que contém um único domínio variável. Os polipeptí- deos de anticorpo podem ser moléculas de imunoglobulina anti-CD40L de comprimento completo que compreendem duas cadeias pesadas (H) e duas cadeias leves (L) interconectadas por ligações dissulfeto. Nesta modalidade, a porção amino terminal de cada cadeia inclui um domínio variável (V, ou Vy4) de aproximadamente 100-120 aminoáci- dos. As regiões de determinação de complementaridade (CDRs) con- tidas ali são primariamente responsáveis pelo reconhecimento de antí- genos, embora os resíduos estruturais possam desempenhar uma função na ligação de epítopos. A "metade" carbóxi-terminal de cada cadeia pesada define uma região constante (Fc) primariamente res- ponsável pela função efetora.
[0060] Os polipeptídeos de anticorpo também podem ser "frag- mentos" que compreendem uma porção da molécula de imunoglobuli- na anti-CD40L de comprimento completo que compreende um domínio variável que se liga especificamente ao CD40L. Assim, o termo "poli- peptídeos de anticorpo" inclui uma cadeia pesada de ligação ao antí- geno, uma cadeia leve, um dímero de cadeia pesada-cadeia leve, um fragmento Fab, um fragmento F(ab'),, um fragmento Fv, um Fv de ca- deia simples (scFv) e um dAb, por exemplo. O termo "polipeptídeos de anticorpo" inclui assim polipeptídeos produzidos através de engenharia recombinante e expressão, bem como anticorpos monoclonais produ-
zidos por recombinação natural e secreção por clones de células de hibridoma.
[0061] As cadeias leves são classificadas como kappa (K) ou lambda (A) e são caracterizadas por uma região constante particular, C, como é conhecido na arte. As cadeias pesadas são classificadas como y, u, q, à ou e e definem o isotipo de um anticorpo como IgG, IgM, IgA, IgD ou IgE, respectivamente. A região constante de cadeia pesada é compreendida de três domínios (CH1, CH2 e CH3) para IgG, IgD e IgA; e quatro domínios (CH1, CH2, CH3 e CH4) para IgM e IgE.
Os anticorpos anti-cCD40L podem possuir uma região constante de ca- deia pesada selecionada de qualquer uma das classes de imunoglobu- lina (IGA, IGD, IgG, IgM e IgE).
[0062] Cada domínio variável de cadeia leve (V,) e cada domínio variável de cadeia pesada (V4) é composto de três CDRs e quatro re- giões estruturais (FRs), dispostas do terminal amino para o terminal carbóxi na ordem a seguir: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 e FR4. As três CDRs da cadeia leve são referidas como "LCDRI1, LCDR?2 e LCDR3" e as três CDRs da cadeia pesada são referidas co- mo "HCDR1, HCDR2 e HCDR3".
[0063] Como utilizado aqui, o termo "domínio Fc" refere-se às se- quências de anticorpo de região constante que compreendem os do- mínios constantes CH2 e CH3 que são delimitados de acordo com Ka- bat e outros, Sequences of Immunological Interest, 5º ed., U.S. Dept. Health & Human Services, Washington, D.C. (1991). O domínio Fc po- de ser derivado de uma região Fc de IgG1 ou de IgG4, por exemplo.
[0064] Um domínio variável pode ser fundido com um domínio Fc. Os exemplos de vários anticorpos com domínio formatado com Fc e sua potência são fornecidos na TABELA 6. A FIG. 3 fornece as se- quências de vários domínios Fc fornecidos aqui. As regiões ligantes são mostradas nas caixas. Como utilizado na TABELA 6, "Fc" indica que o dAb é fundido com um Fc curto de IgG1 humana. "CT Long Fc", também chamado de CT-L2, refere-se ao Fc de CTLA4. O S sublinha- do representa mutações pontuais cisteína-para-serina feitas para eli- minar os dissulfetos na dobradiça de Fc. "CT Short", também chamado deCT-S1,émaiscurto que CT Long em 7 aminoácidos. "N297Q Long Fc", também referido como N297Q-LA4, é o domínio Fc da IgG1 huma- na com uma mutação N297Q feita para eliminar o carboidrato ligado a N no Fc. "N297Q Short Fc", também chamado de N297Q-S3, é mais curto que N297Q Long Fc em 7 aminoácidos e é uma IgG1 humana com uma mutação pontual N297Q feita para eliminar o carboidrato |li- gado a N no domínio Fc. "CT-Fc SP5" é o CT Long Fc, em que SP5 refere-se ao peptídeo sinal da octeonectina utilizado para a secreção partindo do hospedeiro de expressão mamífero. O sítio de clivagem é indicado por """. A FIG. 4 fornece ainda exemplos de vários formados dedomínioFc.
[0065] Quando um domínio variável é fundido com um domínio Fc, o terminal carboxila do domínio variável (um domínio V, ou Vu, incluin- do dAbs) pode ser ligado ou fundido ao terminal amino do domínio CH2 de Fc. Alternativamente, o terminal carboxila do domínio variável pode ser ligado ou fundido ao terminal amino de um domínio CH1, que por si só é fundido com o domínio CH2 de Fc. A proteína pode com- preender a região de dobradiça entre os domínios CH1 e CH2 como um todo ou em parte.
[0066] As CDRs contêm a maioria dos resíduos que forma intera- ções específicas com o antígeno. Em uma modalidade, o domínio va- riável de um polipeptídeo de anticorpo compreende regiões de CDR1, CDR?2 e CDR3 que possuem a mesma sequência de aminoácidos que as regiões de CDR1, CDR2 e CDR3 de um dos dAbs listados na TABELA 1 ou na TABELA 3 ou que cada um difere das regiões de CDRI1,CDR?2eCDR3 em um, dois ou três aminoácidos. Por exemplo,
o polipeptídeo de anticorpo pode compreender regiões de CDR1, CDR?2 e CDR3 que possuem a mesma sequência de aminoácidos que as regiões de CDR1, CDR2 e CDR3 de BMS2h-572-633, BMS2h-572- 608 ou BMS2h-572-614, por exemplo.
[0067] Um "anticorpo de domínio" (dAb) compreende um único domínio variável (V, ou Vu) domínio que é capaz de se ligar especifi- camente e de forma monovalente com um antígeno, tal como CD40L. Por exemplo, um dAb pode ter uma estrutura Vu, característica de um dAb de camelídeo. Entende-se que um "domínio V4" como utilizado aquiinclua uma estrutura Vu. Em outra modalidade, os domínios Vu" (incluindo todas as características e a combinação de características apresentadas como modalidades aqui) são domínios sem ser V4n. Os dAbs podem formar homo- ou heterodímeros em solução. Embora não limitado por qualquer teoria particular, acredita-se que os dAbs divul- gados aqui não causem agregação de plaquetas, porque os anticorpos contendo construções de Fc mutadas não se ligam a FeyRlla (também conhecido como CD32a) sobre a superfície das plaquetas e não ati- vam as plaquetas.
[0068] Como utilizado aqui, o termo "domínio variável" refere-se a domínios variáveis de imunoglobulina definidos por Kabat e outros, Sequences of Immunological Interest, 5º ed., U.S. Dept. Health & Hu- man Services, Washington, D.C. (1991). A numeração e o posiciona- mento dos resíduos de aminoácidos da CDR dentro dos domínios va- riáveis estão de acordo com a convenção de numeração de Kabat bem conhecida.
[0069] O termo "humano", quando aplicado aos polipeptídeos de anticorpo, significa que o polipeptídeo de anticorpo possui uma se- quência, por exemplo, regiões estruturais e/ou domínios de CH, deri- vados de uma imunoglobulina humana. Uma sequência é "derivada de" uma sequência que codifica imunoglobulina humana quando a se-
quência for qualquer uma: (a) isolada de um indivíduo humano ou de uma célula ou de uma linhagem de célula de um indivíduo humano; (b) isolada de uma biblioteca de sequências gênicas de anticorpos huma- nos clonadas ou de sequências de domínio variável de anticorpos hu- manos; ou (c) diversificada por mutação e seleção de um ou mais dos polipeptídeos anteriores. Um composto "isolado" como utilizado aqui significa que o composto é removido de pelo menos um componente com o qual o composto está naturalmente associado na natureza.
[0070] Os polipeptídeos de anticorpo podem ser administrados a pacientes humanos enquanto se evita enormemente a resposta imuno- lógica de anticorpo frequentemente provocada pela administração de anticorpos de outras espécies, por exemplo, camundongo. Por exem- plo, anticorpos murinos podem ser "humanizados" através do enxerto de CDRs murinas em uma FR de domínio variável humano, de acordo com procedimentos bem conhecidos na técnica. Os anticorpos huma- nos que são divulgados aqui, entretanto, podem ser produzidos sem a necessidade de manipulação genética de uma sequência de anticorpo murino.
[0071] Os domínios variáveis podem compreender uma ou mais FR coma mesma sequência de aminoácidos que uma região estrutu- ral correspondente codificada por um segmento gênico de anticorpo de linhagem germinativa humana. Por exemplo, um anticorpo de domínio pode compreender os segmentos gênicos de linhagem germinativa de Vu DP47, DP45 ou DP38, o segmento gênico de linhagem germinativa deWV.DPK9,o segmento de J' JH4b ou o segmento de J. J.1.
[0072] Podem ser feitas alterações nas sequências de polipeptí- deo de anticorpo enquanto se mantém a capacidade de se ligar ao CD40L especificamente. Especificamente, os polipeptídeos de anticor- po (por exemplo, um dAb) podem compreender um domínio variável variante que mantém a função de se ligar especificamente ao CD40L como o dAb BMS2h-572-633. Em uma modalidade, o domínio variável variante pode competir com BMS2h-572-633 pela ligação específica ao CD40L. A maturação da afinidade propensa a erros, que é divulga- da nos exemplos a seguir, fornece um exemplo de método para a pro- duçãoe a identificação de polipeptídeos de anticorpo com sequências variantes que se ligam especificamente ao CD40L.
[0073] Por exemplo, um domínio variável variante pode diferir de um dos domínios variáveis listados na TABELA 1 e na TABELA 3 em até 10 aminoácidos ou qualquer valor integral intermediário, em que o domínio variável variante se liga especificamente ao CD40L. Alternati- vamente, o domínio variável variante pode ter pelo menos 90% de i- dentidade de sequência (por exemplo, pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência) em relação a uma sequência listada na presente Listagem de Sequências. Os resíduos de aminoácidos não idênticos ou os aminoácidos que di- ferem entre duas sequências podem representar substituições, adi- ções ou deleções de aminoácidos. Os resíduos que diferem entre duas sequências aparecem na forma de posições não idênticas, quando as duas sequências são alinhadas por qualquer algoritmo de alinhamento de sequências de aminoácidos apropriado, tal como BLAST.
[0074] Em uma modalidade, as substituições de aminoácidos po- dem ser feitas em regiões FR individuais, de forma que uma FR com- preenda 1, 2, 3, 4 ou 5 diferenças de aminoácidos em relação à se- quência de aminoácidos da FR correspondente codificada por um segmento gênico de anticorpo de linhagem germinativa humana. Em outra modalidade, o domínio variável variante pode conter uma ou du- as substituições de aminoácidos em uma CDR. Em outras modalida- des, as substituições de aminoácidos nas regiões de FR e de CDR podem ser combinadas. Os domínios variáveis representativos que se ligam especificamente ao CD40L são listados na TABELA 1 e na
TABELA 3.
[0075] A informação em relação aos limites dos domínios de V, ou de V", de genes de cadeias pesada e leve pode ser utilizada para pro- jetar iniciadores de PCR para amplificar o domínio variável partindo de uma sequência codificadora de cadeia pesada ou leve clonada que codifica um polipeptídeo de anticorpo conhecido por se ligar ao CD40L. O domínio variável amplificado pode ser inserido dentro de um vetor de expressão adequado, por exemplo, pHEN-1 (Hoogenboom e outros (1991) Nucleic Acids Res. 19:4133-4137) e expresso, isolada- mente ou na forma de uma fusão com outra sequência polipeptídica, utilizando técnicas bem conhecidas na técnica. Com base nas se- quências de aminoácidos e de polinucleotídeos divulgadas, a proteína de fusão pode ser produzida e purificada utilizando apenas perícia comum em qualquer linhagem de célula hospedeira de mamífero ade- quada,tal como CHO, 293, COS, NSO e similares, seguida pela purifi- cação utilizando um ou uma combinação de métodos, incluindo croma- tografia por afinidade com a proteína A, troca iônica, técnicas de fase inversa ou similar.
[0076] Em um aspecto, o polipeptídeo de anticorpo é um polipeptí- deode anticorpo "específico dual" que compreende um primeiro domí- nio variável que se liga especificamente ao CD40L humano. Os poli- peptídeos de anticorpo específicos duais compreendem um segundo domínio variável que se liga especificamente a um segundo antígeno que não é o CD40L humano.
[0077] Em outra modalidade, o segundo antígeno pode ser uma molécula de superfície celular de uma célula efetora imunológica ou uma molécula solúvel tal como uma citocina, por exemplo. A ligação do polipeptídeo de anticorpo de especificidade dual poderia ser utiliza- da para antagonizar o CD40L e antagonizar uma atividade biológica do segundo antígeno. As moléculas de superfície celular de células efeto-
ras imunológicas incluem as moléculas de cluster de diferenciação (CD). Os marcadores de CD representativos estão listados na Internet no protocolo de transferência de hipertexto http://en.wikipedia.org/wiki/List of human clusters of differentiation (modificado por último em 8 de agosto de 2012). As moléculas de su- perfície celular de células efetoras imunológicas também incluem mo- léculas de Complexo de Histocompatibilidade Principal (MHC) de Classe Il. Os anticorpos contra estas moléculas de superfície celular são conhecidos na técnica e podem ser utilizados como uma fonte de um domínio variável para construir um polipeptídeo de anticorpo espe- cífico dual.
[0078] Em uma modalidade, os polipeptídeos de anticorpo de um ligante específico dual podem ser ligados por um "ligante de aminoáci- do" ou um "ligante". Por exemplo, um dAb pode ser fundido ao terminal Nde um ligante de aminoácido e outro dAb pode ser fundido com o terminal C do ligante. Embora os ligantes de aminoácidos possam ter qualquer comprimento e consistir de qualquer combinação de aminoá- cidos, o comprimento do ligante pode ser relativamente curto (por e- xemplo, cinco ou menos aminoácidos) para reduzir as interações entre osdomínios ligados. A composição de aminoácidos do ligante também pode ser ajustada para reduzir o número de aminoácidos com cadeias laterais volumosas ou aminoácidos que provavelmente introduzem es- trutura secundária. Os ligantes de aminoácidos adequados incluem, mas não estão limitados aqueles de até 3, 4, 5, 6, 7, 10, 15, 20 ou 25 aminoácidos de comprimento. As sequências de ligantes de aminoáci- dos representativas incluem (GGGGS), (SEQ ID NO: 12), em que n pode ser qualquer número inteiro entre 1 e 5. Outras sequências de ligantes adequadas podem ser selecionadas do grupo que consiste em AS, AST, TVAAPS (SEQ ID NO: 13), TVA e ASTSGPS (SEQ ID NO: 14).
[0079] A ligação do segundo antígeno pode aumentar a meia-vida in vivo do polipeptídeo de anticorpo. Por exemplo, o segundo domínio variável do polipeptídeo de anticorpo específico dual pode se ligar es- pecificamente à albumina do soro (SA), por exemplo, albumina do soro humano (HSA).O polipeptídeo de anticorpo formatado para se ligar a | pode ter uma meia-vida t-a ("meia-vida alfa") ou t-B ("meia-vida beta") in vivo aumentada em relação ao mesmo polipeptídeo de anticorpo não formatado. As meias-vidas t-a e t-B medem o quão rapidamente uma substância é distribuída dentro e eliminada do corpo. A ligação a | pode ser realizada por fusão do polipeptídeo de anticorpo com um se- gundo domínio variável capaz de se ligar especificamente a |, por e- xemplo. Os anticorpos anti-albumina do soro humano são bem conhe- cidos na técnica. Vide, por exemplo, Abcam&O, Anticorpos para Albu- mina do Soro Humano ab10241, ab2406 e ab8940, disponíveis na In- ternet no protocolo de transferência de hipertexto www.abcam.com/index.html ou GenWay, anticorpo ALB, disponível na Internet no protocolo de transferência de hipertexto www.genwaybio.com. Os domínios variáveis que se ligam especifica- mente a | podem ser obtidos partindo de qualquer um destes anticor- pose então fundidos com um polipeptídeo de anticorpo da divulgação utilizando técnicas recombinantes que são bem conhecidas na técnica.
[0080] Alternativamente, a ligação do polipeptídeo de anticorpo para | pode ser realizada através de fusão de forma direta da sequên- cia de polipeptídeo de anticorpo com uma sequência que codifica | uti- lizando técnicas bem conhecidas pelo versado na técnica. As sequên- cias que codificam | podem ser obtidas através de PCR utilizando ini- ciadores derivados da sequência de cDNA disponível no No. de Aces- so do GenBank NMOO00477, por exemplo.
[0081] Em uma modalidade, a meia-vida ta da composição de an- ticorpo de domínio ligado a | é aumentada em 10% ou mais. Em outra modalidade, a meia-vida tua da composição de anticorpo de domínio ligado a | está na faixa de 0,25 hora até 6 horas. Em outra modalidade, a meia-vida tê da composição de anticorpo de domínio ligado a | é aumentada em 10% ou mais. Em outra modalidade, a meia-vida tê da composição de anticorpo de domínio ligado a | está na faixa de 12 até 48 horas.
[0082] Em outra modalidade, um polipeptídeo de anticorpo pode ser formatado para aumentar sua meia-vida in vivo através de PEGUuUi- lação. Em uma modalidade, o PEG está ligado de forma covalente. Em outramodalidade, o PEG está ligado ao polipeptídeo de anticorpo em um resido de cisteína ou de lisina. Ainda em outra modalidade, o poli- peptídeo de anticorpo ligado a PEG possui um tamanho hidrodinâmico de pelo menos 24 kD. Ainda em outra modalidade, o tamanho total de PEG é de 20 até 60 kD, inclusive. Ainda em outra modalidade, o anti- corpo de domínio ligado a PEG possui um tamanho hidrodinâmico de pelo menos 200 kD.
[0083] A PEGuilação pode ser atingida utilizando vários grupa- mentos de ligação de PEG incluindo, mas não limitados a éster ativo de N-hidroxilsuccinimida, propionato de succinimidila, maleimida, vinil sulfona ou tiol. Um polímero de PEG pode ser ligado a um polipeptídeo de anticorpo em uma posição pré-determinada ou pode ser ligado ale- atoriamente à molécula de anticorpo de domínio. A PEGuilação tam- bém pode ser mediada através de um ligante peptídico ligado a um anticorpo de domínio. Isto é, o grupamento de PEG pode ser ligado a um ligante peptídico fundido a um polipeptídeo de anticorpo, em que o ligante fornece o sítio (por exemplo, uma cisteína ou uma lisina livre) para a ligação do PEG. Os métodos de PEGuilação de anticorpos são bem conhecidos na técnica, como divulgado em Chapman, e outros, "PEGylated antibodies and antibody fragments for improved therapy: a review", Adv. Drug Deliv. Rev. 54(4):531-45 (2002), por exemplo.
[0084] Os polipeptídeos de anticorpo também podem ser planeja- dos para formar um dímero, um trímero, um tetrâmero ou outro multí- mero. Os polipeptídeos de anticorpo, por exemplo, dAbs, podem ser ligados para formar um multímero através de vários métodos conheci- dosna técnica, incluindo, mas não limitados a, expressão de monôme- ros na forma de uma proteína de fusão, ligação de dois ou mais mo- nômeros através de um ligante peptídico entre monômeros ou através da união quimicamente de monômeros após a tradução, com cada ou- tro diretamente ou através de um ligante por ligações dissulfeto ou a- través de ligação a um grupamento de ligação di-, tri- ou multivalente (por exemplo, um PEG de vários braços). Em uma modalidade, o mul- tímero pode se ligar a uma única molécula de CD40.
3. Composições Farmacêuticas e Métodos de Tratamento
[0085] Uma composição farmacêutica compreende uma quantida- de terapeuticamente eficaz de um ou mais polipeptídeos de anticorpo e opcionalmente um veículo farmaceuticamente aceitável. Os veículos farmaceuticamente aceitáveis incluem, por exemplo, água, solução salina, solução salina tamponada com fosfato, dextrose, glicerol, eta- nol e similares, bem como combinações dos mesmos. Os veículos farmaceuticamente aceitáveis podem compreender ainda quantidades menores de substâncias auxiliares, tais como agentes umectantes ou emulsificantes, preservantes ou tampões que aumentam a meia-vida ou a efetividade da proteína de fusão. As composições podem ser formuladas para fornecer liberação rápida, controlada ou retardada do(s) ingrediente(s) ativo(s) após a administração. As composições farmacêuticas adequadas e os processos para a preparação das mesmas são bem conhecidos na técnica. Vide, por exemplo, Reming- ton, THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY, A. Gennaro e outros, eds., 21º ed., Mack Publishing Co. (2005).
[0086] A composição farmacêutica pode compreender ainda agen-
te imunossupressor/imunomodulador e/ou anti-inflamatório. Um méto- do de tratamento de uma doença imune em um paciente que necessita de tal tratamento pode compreender a administração ao paciente de uma quantidade terapeuticamente eficaz da composição farmacêutica. A ativação de células T mediada por CD40L antagonizante poderia inibir respostas de células T indesejadas que ocorrem durante a auto- imunidade, a rejeição a transplante ou as respostas alérgicas, por e- xemplo. A inibição da ativação de células T mediada por CD40L pode- ria moderar a progressão e/ou a gravidade destas doenças.
[0087] Como utilizado aqui, um "paciente" significa um animal, por exemplo, mamífero, incluindo humanos. O paciente pode ser diagnos- ticado com uma doença imune. "Tratamento" ou "tratar" ou "tratando" refere-se ao processo que envolve o alívio da progressão ou da gravi- dade de um sintoma, um distúrbio, um estado de saúde ou uma doen- ça. Uma "doença imune" refere-se a qualquer doença associada com o desenvolvimento de uma reação imunológica em um indivíduo, inclu- indo uma reação imunológica celular e/ou humoral. Os exemplos de doenças imunes incluem, mas não estão limitadas a doença relacio- nada a enxerto, inflamação, alergia e doença autoimune. A doença autoimune pode ser selecionada do grupo que consiste em lúpus eri- tematoso sistêmico, esclerose múltipla, artrite reumatoide, diabetes, psoríase, escleroderma, aterosclerose, doença inflamatória do intesti- no e colite ulcerativa.
[0088] As doenças que podem ser tratadas através da administra- ção da composição farmacêutica podem ser selecionadas do grupo que consiste em doença de Addison, alergias, espondilite anquilosan- te, asma, aterosclerose, doenças autoimunes do ouvido, doenças au- toimunes do olho, hepatite autoimune, parotidite autoimune, colite, do- ença cardíaca coronariana, doença de Crohn, diabetes, incluindo dia- betes do Tipo 1 e/ou do Tipo 2, epididimite, glomerulonefrite, doença de Graves, síndrome de Guillain-Barre, doença de Hashimoto, anemia hemolítica, púrpura trombocitopênica idiopática, doença inflamatória do intestino, resposta imunológica a produtos de fármacos recombi- nantes (por exemplo, Fator VIl em hemofílicos), lúpus eritematoso sis- têmico, infertilidade do sexo masculino, esclerose múltipla, miastenia grave, pênfigo, psoríase, febre reumática, artrite reumatoide, sarcoido- se, escleroderma, síndrome de Sjogren, espondiloartropatias, tireoidi- te, rejeição a transplante e vasculite. Os estados de saúde mediados de forma autoimune incluem, mas não estão limitados a, estados de saúde em que o tecido afetado é o alvo primário e em alguns casos, o alvo secundário. Tais estados de saúde incluem, mas não estão limi- tados a, AIDS, alergia atópica, asma bronquial, eczema, lepra, esqui- zofrenia, depressão herdada, transplante de tecidos e órgãos, síndro- me de fadiga crônica, doença de Alzheimer, doença de Parkinson, en- farte do miocárdio, derrame, autismo, epilepsia, fenômeno de Arthus, anafilaxia, dependência de álcool e dependência de drogas.
[0089] As indicações preferidas para a administração das presen- tes composições farmacêuticas são, por exemplo, púrpura trombocito- pênica imune, esclerose sistêmica, miastenia grave, rejeição a aloen- xertoe doença de enxerto-versus-hospedeiro.
[0090] A composição farmacêutica pode ser administrada isola- damente ou em terapia de combinação, (isto é, simultaneamente ou sequencialmente) com agente imunossupressor/imunomodulador e/ou anti-inflamatório. Doenças imunes diferentes podem requerer o uso de compostos auxiliares específicos úteis para o tratamento de doenças imunes, que podem ser determinados em uma base de paciente-para- paciente. Por exemplo, a composição farmacêutica pode ser adminis- trada em combinação com um ou mais adjuvantes adequados, por e- xemplo, citocinas (IL-10 e I1L-13, por exemplo) ou outros estimuladores imunológicos, por exemplo, quimiocinas, antígenos e peptídeos asso-
ciados a tumor. Os adjuvantes adequados são conhecidos na técnica.
[0091] Por exemplo, a composição farmacêutica divulgada pode ser coadministrada, concomitantemente ou sequencialmente, com uma molécula mutante de antígeno 4 de linfócito T citotóxico (CTLAA4), talcomoL104EA29Y-lg (belatacept). O CTLA4 se liga a CD80 (B7-1) e a CD86 (B7-2) com maior avidez que CD28 e é expresso de forma transitória sobre as células T após sua ativação, quando esta inter- rompe a interação entre CD28 e CD80/86. Oosterwegel e outros, Curr. Opin. Immunol. 11: 294-300 (1999). Isto cria um sinal de feedback ne- gativopara a ativação de células T.
[0092] As moléculas mutantes de CTLAA, incluindo L1I04EA29Y-lg, possuem maior avidez de ligação a CD80/86 comparadas com CTLA4 do tipo selvagem. A intervenção da via de CD28-CD80/86 por L104EA29Y-lg foi adotada de forma bem sucedida, por exemplo, para tratar doenças relacionadas a enxerto em modelos de transplante com primatas não humanos, isoladamente ou em combinação com outros agentes imunossupressores. Larsen e outros, Amer. J. Transplant. 5: 443 (2005). O Pedido de Patente U.S. número 2010/0166774 descreve a estrutura de L1I04EA29Y-lg, os métodos de produção do mesmo e uma formulação que compreende uma molécula de CTLAA4; e o pedido de patente é incorporado aqui como referência. As Patentes U.S. Nos
7.094.874 e 7.482.327 divulgam ainda a administração (incluindo a coadministração com um ou mais outros fármacos) e a progração de dosagem de L104EA29Y-lg e as divulgações destas patentes são in- corporadas aqui como referência.
[0093] Qualquer método ou rota adequada pode ser utilizada para administrar o polipeptídeo de anticorpo ou a composição farmacêutica. As rotas de administração incluem, por exemplo, administração oral, intravenosa, intraperitoneal, subcutânea ou intramuscular. Uma dose terapeuticamente eficaz do(s) polipeptídeo(s) de anticorpo administra-
da depende de vários fatores, incluindo, por exemplo, o tipo e a gravi- dade da doença imune que será tratada, o uso de terapia de combina- ção, a rota de administração do(s) polipeptídeo(s) de anticorpo ou da composição farmacêutica e o peso do paciente. Uma faixa não limitan- te para uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo de domínio é de 0,1-20 mg/kg e em um aspecto, 1-10 mg/kg, em relação ao peso corporal do paciente. A dose do(s) polipeptídeo(s) de anticor- po pode ser adicionalmente guiada pela quantidade de polipeptídeo(s) de anticorpo necessária para o antagonismo de CD40 em modelos in vitro e/ou in vivo de estados de doença. Os exemplos representativos são descritos a seguir e nos exemplos.
4. Modelos In Vitro e In Vivo
[0094] A capacidade dos polipeptídeos de anticorpo da divulgação de antagonizar CD40L pode ser testada em um dos vários sistemas de modelos in vitro ou in vivo disponíveis. Sistemas de modelo de huma- nos, animais e células apropriados são descritos a seguir. Sistemas de ensaio de células adicionais são descritos nos exemplos.
4.1. Modelo de Púrpura Trombocitopênica Imune (ITP) In Vivo:
[0095] A função potencial de CD40-CD40L na patogênese de ITP é relatada por Patel e outros, British J. Haematology 141: 545-548 (2008). Os autoanticorpos antiplaqueta em pacientes com ITP se ligam às plaquetas circulantes e aceleram sua destruição. O mecanismo primário através do qual se acredita que os anticorpos anti-CD40L aumentam a contagem de plaquetas na ITP é através do bloqueio da ativação baseada em células T de células B autorreativas que produ- zem anticorpos antiplaqueta. Os anticorpos anti-CD40L também po- dem bloquear a expressão de CD40L sobre as plaquetas, prevenindo assim a autoapresentação de antígenos de glicoproteína de plaqueta aos macrófagos. Além disso, os mAbs anti-CD40L inibem as intera- ções diretas entre CD40L de plaqueta e outras células, tais como célu-
las dendríticas (DCs) plasmacitoides, que foram recentamente impli- cadas no controle da resposta ao interferon (IFN) do tipo 1 em pacien- tes humanos com lúpus. Duffau e outros, Sci. Transl. Med. 2: 47 (2010).
[0096] Patel e outros demonstraram a eficácia de dois anticorpos anti-CD40L monoclionais humanizados, hu5c8 e IDEC-131, em 46 pa- cientes humanos com ITP crônica refratária a terapias convencionais. Os pacientes tiveram uma taxa de resposta geral de 24%, caracteriza- da por maiores contagens de plaquetas. Isto demonstrou a função po- tencial de CD40-CD40L na patogênese de ITP.
4.2. Modelos de Lúpus In Vivo e In Vitro:
[0097] A expressão de CD40 glomerular e tubular é notavelmente regulada para mais na nefrite proliferativa. Vários estudos relataram a hiperexpressão de CD40L por células T e concentrações de sSCD40L solúvel elevadas no lúpus humano. Kimura e outros, Therapeutic A- pheriss and Dialysis 9: 64-68 (2005); Vakkalanka e outros, Arthritis & Rheumatism 42: 871-881 (1999).
[0098] O lúpus eritematoso sistêmico (SLE) é uma doença autoi- mune crônica caracterizada pela produção de vários autoanticorpos e pela hiperatividade de células B. Grammer e outros, J. Clin. Invest. 112: 1506-1520 (2003) relatam os resultados do tratamento de pacien- tes com SLE com o mAb anti-CD40L humanizado 5c8 (BG9588). Vide também Huang e outros, Arthritis & Reumatism 46: 1554-1562 (2002). Grammer e outros relatam que células B periféricas CD19+ foram e- xaminadas antes e depois do tratamento com o mAb anti-CD40L. An- tes do tratamento, os pacientes com SLE manifestaram células B ati- vadas que expressavam CD40L, CD69, CD38, CD5 e CD27. As célu- las B ativadas desapareceram da periferia durante e pós-tratamento. Antes do tratamento, pacientes com SLE ativa tinham células secreto- rasde CD3g"""a"º |H circulantes que não eram encontradas em indiví-
duos normais. O desaparecimento destas células do plasma durante o tratamento foi associado com decréscimos nos níveis de Ab anti-DNA de filamento duplo (anti-dsDNA), proteinúria e índice de atividade da doença SLE. Coerente com estas descobertas, as células B periféricas cultivadas in vitro se proliferaram e secretaram lg espontaneamente de uma maneira que era inibida pelo mAb anti-CD40L. Os subconjuntos de células B CD38+/++I|gD+, CD38+++ e CD38+IgD- presentes no sangue periférico de pacientes com SLE também desapareceram após o tratamento com o mAb anti-CD40L. Juntos, estes resultados suge- rem que as interações CD40L-CD40 espontâneas nos pacientes ativos com SLE controlam a ativação, a proliferação e a diferenciação das células B em células do plasma que secretam autoanticorpo que me- deiam a proteinúria e a atividade da doença.
[0099] Glomerulonefrite de lúpus proliferativo é uma doença auto- imune prolongada com um curso crescente e decrescente, caracteri- zada pelo nível maior de anticorpos anti-dsDNA, concentrações de C3 no soro diminuídas e hematúria. Boumpas e outros, Arthritis & Rheu- matism 48: 719-727 (2003) relatam resultados de um estudo aberto multicêntrico de fase Il que avalia a toxicidade e a eficácia de BG9688, um anticorpo monoclonal anti-cCD40L humanizado, em pacientes com glomerulonefrite de lúpus proliferativo. Embora o estudo tivesse que ser terminado prematuramente por causa de eventos tromboembólicos que ocorrem nos pacientes em vários protocolos de BG9588, um curso curto do tratamento com o anticorpo anti-CD40L em pacientes com nefrite de lúpus proliferativo reduzia os anticorpos anti-dsDNA, aumen- tava as concentrações de C3 e diminuía a hematúria, sugerindo que o fármaco possui função imunomoduladora.
4.3. Modelos de Doença Inflamatória do Intestino (IBD) /n Vivo:
[00100] A doença de Crohn (CD) e a colite ulcerativa (UC) são IBDs que são caracterizadas por infiltrados leucocíticos na mucosa intestinal inflamada, que consiste primariamente de células CD25+ ativadas, cé- lulas B e macrófagos. Ludwiczek e outros, Int. J. Colorectal Dis. 18: 142-147 (2003) relatam que em pacientes com CD, os níveis no plas- ma de sCD40L eram significativamente mais altos que em indivíduos saudáveis. Além disso, os pacientes com CD com fístulas e/ou abs- cessos tinham níveis significativamente mais altos de SCD40L que os pacientes com CD não complicada. Também foi relatado que a via de CDA40-CD40L contribui para a função pró-inflamatória de células epite- liais intestinais na IBD. Borcherding e outros, Am. J. Pathol. 176: 1816- 1827 (2010). Os pacientes com CD também possuem um nível au- mentado de tromboembolia sistêmica e o estado hiperativo das pla- quetas de tais pacientes resulta provavelmente da liberação aumenta- da de sSCD40L como uma consequência de seu conteúdo endógeno mais alto de CD40L. Menchen e outros, Gut 58: 920-928 (2009); Vide também Danese e outros, Gut 52: 1435-1441 (2003).
[00101] Kasran e outros, Aliment. Pharmacol. Ther. 22: 111-122 (2005) investigaram o uso de um mMAb anti-CD40 humano quimérico ch5D12 para tratar doença de Crohn. O mAb foi administrado a 18 pa- cientes com CD moderada a grave em um estudo de fase |/lia com aumento de dose aberto de uma única dose. Dos 18 pacientes, 13 (ou 72%) sofreram uma resposta favorável para a infusão de anticorpo e 4 pacientes (ou 22%) sofreram uma remissão. O tratamento com o mAb anti-CD40 reduziu a atividade de doença microscópica e a intensidade do infiltrado de células da lâmina própria e o mAb foi bem tolerado.
4.4. Modelos de Artrite Reumatoide (RA), Artrite Idiopática Juvenil (JIA) e Artrite Psoriática (PSA) In Vivo:
[00102] A artrite reumatoide é uma doença autoimune sistêmica com inflamação intra-articular como uma característica dominante que afeta até 1% da população. A doença pode ser subdividida clinicamen- te pela presença ou pela ausência de autoanticorpos (anticorpos para o peptídeo citrulinado cíclico (CCP) ou fator reumatoide (RF), dos quais ambos estão altamente correlacionados com cada outro. Ray- chaudhuri e outros, Nature Genetics 40: 1216-1223 (2008) relataram que eles conduziram uma metaanálise de dois estudos da associação amplado genoma (GWA) publicados totalizando 3.393 casos e 12.462 controles, com a finalidade de identificar os loci de risco de RA em po- pulações Europaias. Eles genotiparam 31 polimorfismos de nucleotí- deos curtos (SNPs) de classificação principal não previamente associ- ados com RA em uma replicação independente de 3.929 casos de RA postivos para autoanticorpo e 5.807 controles combinados provenien- tes de oito coleções separadas. Eles identificaram uma variante co- mum no lócus do gene CDA40, que implicava uma função central para a via de sinalização de CD40 na patogênese de RA. A forte associação do gene CD40 com a suscetibilidade a RA foi repitida de forma robusta em outro estudo em um coorte do UK grande de 3.962 pacientes com RA. Orozso e outros, Ann. Rheum. Dis. 69: 813-816 (2010).
[00103] Uma função importante de CD40L foi também descoberta na patogênese da artrite idiopática juvenil (JIA). Prahalad e outros, Pediatric Rheumatology 6: 1-8 (2008). A JIA é um grupo heterogêneo de artropatias de etiologia desconhecida. Foi descoberto que sSCD40L estava significativamente elevado no soro de crianças com JIA, junto com algumas citocinas. A análise de regressão logística sugeriu que sCD40L, bem como IL-6 e TNFa, estavam positivamente associados com a JIA. sSCD40L estava elevado em todos os subtipos de JIA, com os níveismais altos entre os subtipos mais graves. Estes resultados implicaram sCD40L como um biomarcador potencial para o tratamento e para o monitoramento de pacientes com JIA.
[00104] Foitambém demonstrado que células T ativadas provenien- tes de pacientes com artrite psoriática (PSA) e particularmente daque- les com doença ativa, possuem uma expressão significativamente au-
mentada de CD40L. Daoussis e outros, Rheumatology 46: 227-231 (2007). Estes resultados indicam uma função da via de CD40-CD40L na patogênese de PsA e que uma terapia que se direciona seletiva- mente ao CD40L poderia beneficiar pacientes com PsA.
4.5. Modelos de Esclerose Sistêmica /n Vivo:
[00105] A esclerose sistêmica (SSc) é um distúrbio de tecido con- juntivo autoimune caracterizado por alterações fibrosas e vasculares na pele e nos órgãos viscerais internos. Em um estudo envolvendo 52 pacientes japoneses com SSc, os níveis de SCD40L no soro estavam elevados quando comparados com controles saudáveis. Komura e ou- tros, J. Reumatol. 31: 514-519 (2004). Além disso, os níveis de sSCD40L nos pacientes com SSc eram mais altos nos pacientes com lúpus eritematoso sistêmico (SLE) que tinham níveis de sSCD40L ele- vados comparados com os controles e os níveis de sSCD40L se corre- lacionavam positivamente com os níveis do peptídeo reativo C em pa- cientes com SSc. Foi também relatado que o bloqueio de CD40L com anticorpo anti-CD40L em células T e B cultivadas provenientes de pa- cientes com SSc inibia a produção do anticorpo anti-topoisomerase |. Kuwana e outros, J. Immunol. 155: 2703-2714 (1995). Estes resulta- dos sugerem que a inibição de interações CD40-CD40L pode ser alvos terapêuticos potenciais na terapia de SSc bem como de SLE.
4.6. Modelos de Aterosclerose In Vivo:
[00106] Vários estudos sugeriram uma função da via de sinalização de CD40-CD40L durante a aterogênese. Mach e outros demonstraram que em camundongos, o tratamento com anticorpo monoclonal anti- CD40L limitava a aterosclerose em camundongos que não possuíam receptor para a lipoproteína de baixa densidade que foi alimentada em uma dieta com alto teor de colesterol durante 12 semanas. Nature 394: 200-203 (1998). O anticorpo reduzia o tamanho das lesões ateroscle- róticas da aorta em 59% e seu teor de lipídeos em 79%. Adicionalmen-
te, o ateroma de camundongos tratados com o anticorpo anti-CD40L continha significativamente menos macrófagos e linfócitos T e exibia menor expressão da molécula de adesão à célula vascular-1.
[00107] O tratamento com o anticorpo anti-CD40L de camundongos deficientes em relação ao receptor de lipoproteína de baixa densidade durante a segunda metade de um regime de 26 semanas de uma dieta com alto teor de colesterol não regrediu, mas reduziu significativamen- te a progressão adicional de lesões ateroscleróticas estabelecidas dentro do arco aórtico e particularmente da aorta torácica e abdominal, quando comparado com o tratamento de controle. Schonbeck e outros, Proc. Natl. Acad. Sci. 97: 7458-7463 (2000). Além disso, o tratamento com anti-CD40L alterou a composição de ateroma de maneiras acredi- tadas que favoreçam a estabilidade de placas, por exemplo, conteúdo relativo reduzido de macrófagos e lipídeo, bem como conteúdo relativo aumentado de células de músculo liso e colágeno. Estes estudos for- neceram suporta para a importância da via de sinalização de CD40- CDA40L na aterosclerose e suas complicações, tal como doença da ar- téria coronária.
4.7. Modelos de Rejeição a Aloenxerto In Vivo:
[00108] O direcionamento à via de CD40-CD40L tem sido há muito tempo de muito interesse para a prevenção de rejeição de transplantes de órgãos sólidos (SOT), particularmente em consideração dos dados promissores provenientes de vários estudos de transplantes publica- dos em primatas não humanos. Foi demonstrado que a expressão re- duzidade CD40L sobre linfócitos T CD4+ ativados ex vivo se correla- ciona com excelente função de aloenxerto renal. Lederer e outros, /nt. Arch. Allergy Immunol. 133: 276-284 (2004). Além disso, vários estu- dos demonstraram que os mAbs anti-CD40L podem tanto prevenir quanto reverter a rejeição aguda aloenxerto em primatas. Por exem- plo, Kirke outros, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94: 8789-8794 (1997)
relataram que, em macacos rhesus transplantados com aloenxertos renais, o mAb anti-CD40L 5C8 isoladamente ou em combinação com CTLA4-Ig prolongava significativamente a sobrevivência livre de rejei- ção. O mAb específico para CD40L hu5c8 isoladamente também per- mitiaenxerto de ilhota alogenética e independência à insulina em lon- go prazo em macacos rhesus que foram transplantados com um nú- mero adequado de ilhotas pancreáticas viáveis. Kenyon e outros, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 96: 8132-8137 (1999). Preston e outros, Amer. J. Transplantation 5: 1032-1041 (2005) realizaram transplantes renais em macacos rhesus com MHC não combinados e trataram os receptores com combinações de mAb específico para CD40L IDEC-131 e/ou siro- limus e/ou transfusão específica para o doador pré-transplante. IDEC- 131 era altamente eficiente na prevenção da rejeição a aloenxerto re- nal em primatas. Em macacos cynomolgus que sofreram alotransplan- te renal, o tratamento com mAb anti-CD40L ABI793 prevenia eficien- temente a rejeição ao enxerto. Schuler e outros, Transplantation 77: 717-726 (2004). Em adição à prevenção à rejeição a aloenxerto, mAbs específicos para CD40L induziam tolerância específica para o doador nos modelos de transplantes com primatas. Preston e outros, Amer. J. Transplantation 5: 1032-1041 (2005); Kenyon e outros, Proc. Natl. A- cad. Sci. USA 96: 8132-8137 (1999).
[00109] Em pacientes humanos pediátricos que estavam sofrendo rejeição a enxerto aguda após transplante de fígado ou de intestino delgado, foi observada uma correlação entre a expressão de CD40L sobre células T CD8+ e o risco de rejeição a transplante. Ashokkumar e outros, Amer. J. Transplantation 9: 179-191 (2009) e Ashokkumar e outros, Surgery 146: 166-173 (2009). Similarmente, em pacientes adul- tos que estavam sofrendo rejeição a aloenxerto após transplante de fígado ou renal, a análise histológica demonstrou uma associação en- treaexpressãode CD40L e a rejeição aguda ou crônica. Bartlett e ou-
tros, Amer. J. Transplantation 3: 1363-1368 (2003) e Biancone e ou- tros, Nephrol. Diall. Translpant. 13: 716-722 (1998).
[00110] Vários estudos sustentam o direcionamento ao CD40L mais do que ao CD40 para atingir melhor eficácia no transplante. Por exem- plo, a sobrevivência do enxerto é mais longa e mais durável quando o CD40L é seletivamente bloqueado, comparado com o CD40. Gilson e outros, J. Immunol. 183: 1625-35 (2009). Além disso, dados recentes sugerem que o bloqueio de CD40L pode aumentar a indução de Tregs e/ou de células supressoras para promover a sobrevivência do enxer- to. Garcia e outros, J. Clin. Inv. 120: 2486-96 (2010). Ainda, o bloqueio de CD40L, mas não de CD40, demonstrou a indução de tolerância i- munológica de vida mais longa resultando na sobrevivência do enxerto indefinida, particularmente quando combinado com o bloqueio da via de B7. Kenyon e outros, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 96: 8132-8137 (1999); Kawai e outros, Amer. J. Transplantation 4: 1391-1398 (2004); Preston e outros, Amer. J. Transplantation 5: 1032-1041 (2005); A- dams e outros, J. Immunol. 174: 542-50 (2005). A sinergia do bloqueio das vias de CD40-40L e de B7-CD28 no aprimoramento da sobrevi- vência do enxerto é especialmente importante, porque esta apresenta os anticorpos para domínio divulgados atualmente como uma escolha natural para a combinação com belatacept (CTLA4-Ig) para SOT.
4.8. Modelo de Doença de Enxerto-Versus-Hospedeiro In Vivo:
[00111] A doença de enxerto-versus-hospedeiro crônica e aguda (cCGVHD e aGVHD) são complicações que podem ocorrer após um transplante de células tronco ou de medula óssea em que as células do doador transplantadas atacam o corpo do receptor do transplante. A GVHD aguda em seres humanos ocorre dentro de aproximadamente 60 dias pós-transplante e resulta em danos na pele, no fígado e nos intestinos através da ação de linfócitos citolíticos. A GVHD crônica o- corre posteriormente e é uma doença autoimune sistêmica que afeta primariamente a pele, resultando na ativação policlonal de células B e na hiperprodução de Ig e autoanticorpos.
[00112] As interações CD40L-CD40 parecem ser críticas no desen- volvimento tanto da CGVHD quanto da aGVHD. Durie e outros, J. Clin. Invest 94: 1333-1338 (1994). Em um modelo de camundongos in vivo, os anticorpos anti-CD40L bloquearam os fenômeros associados à cG- VHD a seguir: esplenomegalia, produção de Ig policlonal in vitro, níveis elevados de IgE no soro e autoanticorpos anti-DNA no soro e a gera- ção de células T citotóxicas antihospedeiro. A produção de anticorpos permanecia inibida durante períodos estendidos de tempo após o final da administração do anticorpo anti-CD40L. Em camundongos com aGVHD, que está associada com a indução de uma resposta de célu- las T citotóxicas (CTL) antialogênicas profunda, o tratamento com anti- CDA40L prevenia a geração de CTL derivadas de H-2b. Os resultados do estudo sugerem que as interações CD40L-CD40 são críticas na GVHD e que o CD40L pode ser um ligante valioso para o direciona- mento de agentes imunoterapêuticos para controlar a GVHD.
4.9. Modelo de Miastenia Grave In Vivo:
[00113] A miastenia grave (MG) e seu modelo com animais, MG autoimune experimental (EAMG), são distúrbios autoimunes depen- dentes de células T causados por autoanticorpos contra os receptores de acetilcolina nicotínicos (AChR) na junção neuromuscular do múscu- lo esquelético. A função de CD40-CD40L na EAMG foi mostrada em camundongos nocauteados em relação ao CD40L (CD40L-/-). Shi e outros, Eur. J. Immunol. 28: 3587-3593 (1998). Os camundongos no- cauteados em relação ao CD40L eram completamente resistentes à indução da EAMG e tinham respostas de Th1 e Th2 diminuídas bem como respostas de células B reativas para AChR dependentes de cé- lulas T gravemente prejudicadas.
[00114] Foitambém demonstrado que o bloqueio da sinalização de
CD40L-CD40 pelos anticorpos anti-CD40L é capaz de suprimir a EAMG. Im e outros, J. Immunol. 166: 6893-6898 (2001). Os anticorpos fornecidos aos ratos no estágio crônico de EAMG suprimem a pro- gressão clínica da resposta autoimune e levam a um decréscimo na resposta humoral específica para AChR e hipersensibilidade do tipo retardado. O efeito do tratamento com anti-CD40L durante a fase crô- nica de EAMG é de relevância particular para a MG humana, que é uma doença crônica. Isto sugere que a antagonização de CD40L pode ser utilizada para imunoterapia de MG e outras doenças autoimunes mediadas por anticorpo. Tromboembolia
[00115] As interações CD40-CD40L sobre células T e apresentado- ras de antígenos são importantes para respostas imunológicas adapta- tivas, tais como proliferação de células B, produção de imunoglobulina (lg), regulação para mais de atividade coestimuladora (CD80, CD86), produção de citocinas e troca de classes de lg. O receptor e o ligante também são expressos sobre as plaquetas (população de células "off- target"), em que CD40 é constitutivamente encontrado sobre as pla- quetas, enquanto CD40L é expresso sobre plaquetas ativadas e cliva- doem sCD40L (>90% do sCD40L circulante são derivados das pla- quetas). Feroni e outros, Curr. Med. Chem. 14: 2170-2180 (2007). Pelo menos três anticorpos monoclonais (mAb) anti-CD40L causavam TE nos estudos clínicos e/ou não clínicos conduzidos em primatas não humanos (NHP). husc8 (BG9588) causava TE em vários testes clíni- cos (lúpuse transplante renal). Boumpas e outros, Arthritis & Rheuma- tism 48: 719-727 (2003). IDEC131 causava TE em um paciente em um teste de doença de Crohn, levando ao término dos testes em anda- mento naquele momento. Sidiropoulus & Boumpas, Lupus 13: 391-397 (2004). Tanto hu5c8 quanto ABI 1793 (que se liga ao CD40 em um epí- topo diferente de 5c8) causavam TE/trombose em estudos de trans-
plante renal em macacos cynomolgus ou rhesus. Schuler e outros, Transplantation 77: 717-726 (2004); Kanmaz e outros, Transplantation 77: 914-920 (2004); Koyama e outros, Transplantation 77: 460-461 (2004). Em uma divulgação não publicada, a Biogen relatou uma inci- dênciade trombose de 1/4 e 6/12 em macacos rhesus que receberam 5 e 20 mg/kg por semana, respectivamente, durante 6 meses, mas não em macacos cynomolgus que receberam 50 mg/kg nas mesmas frequência e duração. A base para a diferença entre as espécies não é clara.
[00116] Uma das hipóteses é que a TE associada com a adminis- tração destes anticorpos é mediada pela ligação cruzada de plaquetas mediada pelo complexo imunológico (IC) anti-CD40Lmab-CD40L, faci- litada pela ligação do IC com FcegRlla, um receptor Fc da IgG, causan- do ativação e agregação (FIG. 10). É, portanto, esperado que o blo- queio da interação do grupamento Fc da IgG com FegRlla alivie a liga- ção cruzada de plaquetas e a trombose. Abordagens e métodos de- senvolvidos para avaliar o risco para TE/trombose são descritos nos Exemplos a seguir.
[00117] A TABELA 1 lista sequências de aminoácidos do domínio VH de anti-CD40L representativas úteis para os polipeptídeos de anti- corpo divulgados. A TABELA 2 divulga os ácidos nucleicos representa- tivos que codificam as sequências de domínio VH listadas na TABELA
1. A TABELA 3 lista sequências de aminoácidos do domínio VK de an- ti-cCD40L humano representativas para os polipeptídeos de anticorpo da presente divulgação. A TABELA 4 por sua vez divulga os ácidos nucleicos representativos que codificam as sequências do domínio VK listadas na TABELA 3. Como é bem conhecido na arte, vários códons podem codificar os mesmo aminoácido. Os ácidos nucleicos que codi- ficam uma sequência de proteína incluem assim ácidos nucleicos que possuem degeneração de códons.
Os polipeptídeos de anticorpo di- vulgados na TABELA 1 e na TABELA 3 se ligam especificamente ao CD40L.
Estes foram produzidos utilizando as metodologias de seleção inicial/primária reiterativa e de afinidade descritas nos exemplos a se- qguir
TABELA 1 Sequências de Aminoácidos do Domínio VH do Anti-CD40L Humano BMS2h-10 (SEQ ID NO: 15)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFI AYDMSWVRQA PGKGLEWVSW IDEWGLOTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKKT PEE—-- FDYWGOQGTLV TVSS BMS2h-11 (SEQ ID NO: 16)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFG DYEMSWVROA PGKGLEWVSG IDGEGSDTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKPG RS-—-- FDYWGOQOGTLV TVSS BMS2h-111 (SEQ ID NO: 17)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKGP YTSRHNSLGH FDYWGOQGTLV TVSS BMS2h-112 — (SEQIDNO: 18)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFM DYPMGWVROA PGKGLEWVSS IGPVGMSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKYG GTSGRHNTK- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-113 — (SEQIDNO:19)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFT EYPMSWVRQA PGKGLEWVSV ISPLGFTTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKWT GGSGILNSS- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-114 — (SEQIDNO: 20)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFRVS NYDLTWVRQA PGKGLEWVST ISATNGSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAAVT WWLLRHNDN- LEFWGQGTLV TVSS BMS2h-115 (SEQ ID NO: 21)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFSIS YKNMAWVRQA PGKGLEWVSA IKAANGSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCATGS QKKRTYT--- FDOFWGQGTLV TVSS BMS2h-12 (SEQ ID NO: 22)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFR LYEMAWVROA PGKGLEWVSG IDILGSRTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKDL SWQG------ FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-120 — (SEQID NO: 23)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKHG VGKGTKPHN FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-121 — (SEQIDNO: 24)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKSL HDKTAHHQE FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-123 — (SEQIDNO: 25)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKGD ESST FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-124 — (SEQIDNO: 26)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQOMNSLRAED TAVYYCAERM PGYFPGFARQ FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-125'— (SEQIDNO: 27)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKKR VSSSVNAPYE FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-126 — (SEQIDNO: 28)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKVL ADLIAGHAE FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-127 (SEQ ID NO: 29)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKGV DAHVYYMEPF FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-128 — (SEQIDNO: 30)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKPG TV FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-1298 — (SEQIDNO:31)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQOMNSLRAED TAVYYCAKPD QF FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-13 — (SEQIDNO:32)
ADSVKGRFTI SRDNSKDTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKYG ETSGPISEN FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-130 — (SEQIDNO: 33)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKPG KY FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-131 — (SEQIDNO: 34)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKPG IRFDYWGQGTLV TVSS BMS2h-132 (SEQ ID NO: 35)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKPD VAFDYWGQGTLVTVSN BMS2h-133 — (SEQIDNO: 36)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKLP AGTSSHSVDFDYWGQGTLV TVSS BMS2h-134 — (SEQIDNO:37)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKPS VQ FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-135— (SEQID NO: 38)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKGL TDQHVIE FDYWGOGTLV TVSS BMS2h-136 — (SEQIDNO: 39)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKFW GMQFDYWGQGTLV TVSS BMS2h-137 — (SEQIDNO: 40)
EVOQLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFA SYPMGWVRQA PGKGLEWVSS IGPIGFTTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEMK SPYKPQ---- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-138 — (SEQIDNO:41)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFL AYWMVWVRQA PGKGLEWVSS ISPSGTHTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRVED TAVYYCAKYT EPGLGS-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-139 — (SEQIDNO:42)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFS NYEMGWVROA PGKGLEWVSV ISEVGSLTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKPH DSSIG--- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-14 (SEQ ID NO: 43)
EVOQLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFW SYDMTWVRQA PGKGLEWVSS IMASGDDTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKWD RD-------- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-15 (SEQ ID NO: 44)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFE EYVMSWVRQA PGKGLEWVST ISPIGLTTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEFP LIILPD--- FDOYWGOQGTLV TVSS BMS2h-16 (SEQ ID NO: 45)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFM EYAMIWVRQA PGKGLEWVSI ISPLGLSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKYQ DSSDSQYTN- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-17 (SEQ ID NO: 46)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFE DYGMGWARQA PGKGLEWVSS IGPLGLWTYY ADSAKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKSP LEGLITN-— FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-176 — (SEQIDNO:47)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFD AYEMGWVRQA PGKGLEWVSI IDWDGNSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKPG DNVGI—- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-177 — (SEQIDNO: 48)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFS NYYMVWVRQA PGKGLEWVSA IDEWGFATYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKHW EFTSDTSR—FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-178 — (SEQIDNO:49)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFE DFDMAWVRQA PGKGLEWVSS INDQGSLTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKPD QF----—-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-179 — (SEQIDNO: 50)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFS AYDMMWVROA PGKGLEWVSR ISPQGAORTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKIR GOSRIPMR—FDYWGOQGTLV TVSS BMS2h-18 (SEQ ID NO: 51)
EVOQLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFP EYDMTWVRQA PGKGLEWVSY ISSDGYSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKPH GSPRE-—- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-180 — (SEQIDNO: 52)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFT DYEMGWVROA PGKGLEWVST ITSLGESTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKPG RlI------- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-181 — (SEQIDNO:53)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFA FYPMMWVRQA PGKGLEWVSW IDATGTRTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEGN YGSSYTMGV- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-182 — (SEQIDNO: 54)
EVOQLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFD EYPMYWVRQA PGKGLEWVSS IGPSGPNTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKSP YFDVIPSY—FDYWGOQGTLV TVSS BMS2h-188 — (SEQIDNO: 55)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFA DYGMGWVRQA PGKGLEWVSS IQSSGLRTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKRA NSRRG--- FDYWGOQGTLV TVSS BMS2h-184 — (SEQIDNO: 56)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS DYEMMWVRQA PGKGLEWVSS ITSHGGSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKPD KD------ FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-185º=— (SEQIDNO:57)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFA HYPMSWVROA PGKGLEWVSS IGRLGNRTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKRA TPVPIKGL—FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-188 — (SEQIDNO: 58)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGLTFG RYEMAWVRQA PGKGLEWVSS IDSDGWVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAQPD SL——-—- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-187 /— (SEQIDNO: 59)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFS SYSMVWVRQA PGKGLEWVSG INRGGTRTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKGW RRG—---- FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-188 — (SEQID NO: 60)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFT RYRMSWVRQA PGKGLEWVSG ISRDGYRTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKGM TAS------- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-189 — (SEQIDNO:61)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFQ MYPMGWVRQA PGKGLEWVSM IEPAGDLTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKYQ EQPW--- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-19 (SEQ ID NO: 62)
EVOQLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFPFP QYQMAWVRQA PGKGLEWVSM ITSDGLDTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKPE PL----- FDYWGOQGTLV TVSS BMS2h-190 — (SEQ ID NO: 63)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFS MYDMHWVROA PGKGLEWVST ILSDGTDTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKYG AM-——--- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-191 — (SEQIDNO: 64)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFK LYPMTWVRQA PGKGLEWVSS IDAGGHETYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKDW WDYL--—-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-192 — (SEQ ID NO: 65)
EVOQLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS RYPMSWVRQA PGKGLEWVSS INRSGMRTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEGH QAP-—-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-193 — (SEQIDNO: 66)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFT GYAMSWVRQA PGKGLEWVST INANGIRTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNGLRAED TAVYYCAKGG VWRWGTGHK- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-194 — (SEQIDNO:67)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFK QYDMRWVRQA PGKGLEWVST ISQNGTKTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKSR TGRY-—-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-195 — (SEQIDNO: 68)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFG TYDMGWVRQA PGKGLEWVSR INWOGDRTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKAG FGHYVDGLG- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-196 — (SEQID NO: 69)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFS GYEMAWVRQA PGKGLEWVSS ITDMGDSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKPG TA——- FDYWGPGTLV TVSS BMS2h-197 — (SEQIDNO: 70)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFA KYKMWWVRQA PGKGLEWVSS ITPKGHSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQOMNSLRAED TAVYYCAKRP MTP---—-- FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-198 — (SEQIDNO:71)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFE RYNMSWVRQA PGKGLEWVSS IRPRGGKTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKWR REGYTGSK—FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-199 — (SEQIDNO: 72)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFE RYGMTWVROA PGKGLEWVSS IWPRGOKTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKGN SRYV------ FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-2 (SEQ ID NO: 73)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS DYEMMWVRQA PGKGLEWVST ITSDGISTYY ADSVKGRFTI FRONSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKSG RF-—- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-20 — (SEQIDNO:74)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFS GYQMAWVROQA PGKGLEWVSG ISSEGLTTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKLG RR-------- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-200 — (SEQIDNO: 75)
EVOLLESGGG LVAQPGGSLRL SCAASGFTFT NYSMGWVRQA PGKGLEWVST IRPNGTKTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQOMNSLRAED TAVYYCAKRS SAHLQR--- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-201 — (SEQIDNO:76)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFG NYSMGWVRQA PGKGLEWVSS IGRHGGRTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKKG STYPR---- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-202 — (SEQIDNO: 77)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCTASGFTFS HYEMGWVRQA PGKGLEWVSS IEPFGGGTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKVY PQGS------ FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-203 — (SEQIDNO:78)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEVY SSCAMCTPLL FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-204 (SEQ ID NO: 79)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFK RYSMAWVROA PGKGLEWVSD IGPRGFSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKVG RGQRDTSQP- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-205 — (SEQ ID NO: 80)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFA SYQMAWVRQA PGKGLEWVSG ITSGGLSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKPG RG-—-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-206 — (SEQIDNO:81)
EVOLLESGGG LVOQPGGSLRL SCAASGFTFA SYEMTWVROA PGKGLEWVSG ISSDGLSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQOMNSLRAED TAVYYCAKPG VL-------- FOYWGQGTLV TVSS BMS2h-207 — (SEQIDNO: 82)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFD KYLMSWVRQA PGKGLEWVSG IEPLGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKEA SGD--—-- FDYWGOQOGTLV TVSS BMS2h-208 — (SEQIDNO: 383)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFT EYEMSWVRQA PGKGLEWVSS IDNVGSSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKPG KL-------- FOYWGQOGTLV TVSS BMS2h-209 (SEQ ID NO: 84)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFA DYEMWWVRQA PGKGLEWVSA ISRQGFATYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKDL ERDD---- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-21 (SEQ ID NO: 85)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFA NYEMGWARQA PGKGLEWVSV ISEWGYSTYY ADSAKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKLV GGTQYE--- FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-22 — (SEQIDNO: 86)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFH NYEMSWVRQA PGKGLEWVSS ISSGGSSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQOMNSLRAED TAVYYCAKPG VK-------- FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-23 — (SEQIDNO:87)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFG LYEMTWVRQA PGKGLEWVSS ITGDGISTYY ADSVKGRFTI SRDNSRNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKAG RK-------- FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-24 — (SEQIDNO: 88)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS NYQMAWVRQA PGKGLEWVSS ITSEGGSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKPG KN--——-- FDYWGOGTLV TVSS BMS2h-24-1 — (SEQIDNO: 89)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS DYQMAWVRQA PGKGLEWVSS ITSEGGSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTVY LOMNSLRAED TAVYYCAKPG KN-—-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-25 (SEQ ID NO: 90)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFD NYEMTWVROA PGKGLEWVST ITSQGTSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKPD R$S----—-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-26 — (SEQIDNO:91)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFR SYEMTWVRQA PGKGLEWVSS ITSDGGTTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKPD KT----——-- FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-27 — (SEQIDNO: 92)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFN LYEMTWVROA PGKGLEWVSS ITSDGVSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKPD SP--—--- FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-28 — (SEQIDNO:93)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFG HYDMAWVRQA PGKGLEWVST ISDNGNGTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKPG RD-------- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-29 — (SEQIDNO: 9)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFG RYQMAWVROA PGKGLEWVSS ISSDGGGTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKPG RA--—-- FDYWGQOGTLV TVSS BMS2h-30 (SEQ ID NO: 95)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFA RYQMAWVRQA PGKGLEWVST ISDDGDSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKLD KL———- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-300 — (SEQ ID NO: 96)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFD NDEMTWVROA PGKGLEWVSA IDTTGGQTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKPG KE-------- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-301 — (SEQIDNO: 597)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFG ESEMSWVRQA PGKGLEWVSS ILDEGSGTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQOMNSLRAED TAVYYCAKPD KD-------- FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-302 — (SEQ ID NO: 98)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFG EEEMSWVRQA PGKGLEWVSA ITDDGDDTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKPN AGA-——-- FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-303 — (SEQIDNO: 299)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFE VYDMAWVRQA PGKGLEWVSG IVNDGSSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKPD KD-------- FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-304 — (SEQIDNO: 100)
EVOLLESGGG LVOQPGGSLRL SCAASGFTFG NTEMTWVRQA PGKGLEWVSS IADDGSSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKPG QA------- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-31 (SEQ ID NO: 101)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFE EYOMAWVRQA PGKGLEWVST ISDDGSSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKPD LY——-—- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-32 — (SEQIDNO: 102)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFE VYQMGWVRQA PGKGLEWVSF IVPGGDLTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAETW PE---—-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-4 (SEQ ID NO: 103)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFD NYEMTWVROA PGKGLEWVSS ITSDGTSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKPN PP--—--- FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-40 — (SEQIDNO: 104)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFK AYDMGWVRQA PGKGLEWVSQ IGRDGSFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKPR RYAIF---- TEDRGQGTLV TVSS BMS2h-400 — (SEQIDNO: 105)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFK QYPMVWVRQA PGKGLEWVST ISTNGVRTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKWT DIISSSE--- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-401 (SEQ ID NO: 106)
EVOLLESGGG LVOQPGGSLRL SCAASGFTFF NYDMSWVRQA PGKGLEWVSA ISGSGGSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKVF VWSADIDFD- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-402 — (SEQID NO: 107)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFS WYDMSWVRQA PGKGLEWVSH IASWGGKTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKVT VKDGGYLMD- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-403 — (SEQIDNO: 108)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFA EYAMAWVRQA PGKGLEWVSS IGRDGAVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQOMNSLRAED TAVYYCAKWK AAKERGSW—FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-404 — (SEQIDNO: 109)
EVOLLESGGG LVAQPGGSLRL SCAASGFTFQ AYQMQWVRQA PGKGLEWVST ISPNGLFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKWL SS-—-—--- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-407 — (SEQIDNO: 110)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFA MYSMAWVRQA PGKGLEWVSG ISPRGVETYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKTN WNGVDL---- FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-408 — (SEQIDNO: 111)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFP TYMMSWVRQA PGKGLEWVST INTNGRDTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKGD SNMSF-—- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-409 (SEQ ID NO: 112)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFE GYSMTWVROA PGKGLEWVSS INASGTLTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKDG NRSEVF--- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-41 (SEQ ID NO: 113)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFF EYEMTWVRQA PGKGLEWVSS IANDGSTTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKPD RQ---—-- FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-410 — (SEQIDNO: 114)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFQ DYLMAWVROA PGKGLEWVSE INQDGTVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQOMNSLRAED TAVYYCAESS PY-------- FOYWGQGTLV TVSS BMS2h-411 — (SEQIDNO:115)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFD NYAMSWVRQA PGKGLEWVSS ISRDGHVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKLS SKGGTFASS- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-412 — (SEQIDNO: 116)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFS AVPMTWVROA PGKGLEWVSA ITDDGLRTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKGH IYGDY---- FOYWGQGTLV TVSS BMS2h-413 (SEQ ID NO: 117)
EVOLLESGGG LVOQPGGSLRL SCAASGFTFE LYRMMWVRQA PGKGLEWVSA ISSDGDTTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEHW LGTTLSLRD- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-414 — (SEQIDNO: 118)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFY RYTMAWVROA PGKGLEWVSQ ISPRGNITYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKSG VAGAESPEY- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-415 — (SEQIDNO: 119)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFL GYYMSWIRQA PGKGLEWVST IGPIGGGTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQOMNSLRAED TAVYYCAKSQ NIYGP----- FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-416 — (SEQIDNO: 120)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFE QYDMAWVRQA PGKGLEWVSE ISRDGGRTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEEY PY-------- FOYWGQGTLV TVSS BMS2h-417 — (SEQIDNO: 121)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFP QYSMVWVRQA PGKGLEWVST ISPLGSSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKMS KLLLSRE--- FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-418 — (SEQIDNO: 122)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFA MYSMAWVRQA PGKGLEWVSG ISPRGVETYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKTN WNGVDL---- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-419 (SEQ ID NO: 123)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFT RHGMAWVROA PGKGLEWVST ITPTGNTTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKDA HDEGY---- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-42 — (SEQIDNO: 124)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFG PYEMTWVRQA PGKGLEWVSS IVGDGLDTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKPD RV---—-- FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-420 — (SEQIDNO: 125)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFG STPMMWVRQA PGKGLEWVSE IRDTGLATYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQOMNSLRAED TAVYYCASVS ---------- FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-421 — (SEQIDNO: 126)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFH LGDMHWVRQA PGKGLEWVSS ISGTGHTTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKPM NDQG--- FDYWGQOGTLV TVSS BMS2h-422 — (SEQIDNO: 127)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFM DEDMLWVRQA PGKGLEWVSR INSLGTHTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKSF MM--—-- FDYWGOGTLV TVSS BMS2h-423 (SEQ ID NO: 128)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFR NYQMHWVRQA PGKGLEWVSG IDATGRATYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCARST R$—-—- FDYWGOQGTLV TVSS BMS2h-424 — (SEQIDNO: 129)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFT NADMVWVRQA PGKGLEWVSS ISGSGGSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKGY LTSH----— FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-425 — (SEQIDNO: 130)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFR DYSMAWVRQA PGKGLEWVST ITPSGLTTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEWS QAVTRS--- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-426 — (SEQIDNO: 131)
EVOLLESGGD LVQPGGSLRL SCAASGFTFS DEGMMWVRQA PGKGLEWVSE INQQGSATYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKTI GM-— -- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-427 — (SEQIDNO: 132)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFT DQPMVWVRQA PGKGLEWVSS IGARGGPTYY ADSVKGRFTV SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKWF DIIAWDPFS- FDYWGOGTLV TVSS BMS2h-428 — (SEQIDNO: 133)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFN QYPMMWVRQA PGKGLEWVSS ITPSGFLTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEWN PFITT--— FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-429 (SEQ ID NO: 134)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFG HQOQMAWVROA PGKGLEWVST ITPNGYYTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKFD YSLR—--- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-43 — (SEQIDNO:135)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFA SYEMAWVRQA PGKGLEWVSS IGSDGGPTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED SAVYYCAKPD RA-—— -- FDYWGOGTLV TVSS BMS2h-430 — (SEQIDNO: 136)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKWR TLVDWPTSES FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-44 (SEQ ID NO: 137)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFT SYEMGWVRQA PGKGLEWVSS IEPTGITTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKPH FTELG-—--- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-449 — (SEQIDNO: 138)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFE GEQMAWVRQA PGKGLEWVST ITLPGPYTFY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKGN GTF------- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-45 (SEQ ID NO: 139)
EVOQLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFG NYAMAWVROA PGKGLEWVSK IGAQGLHTYY AGSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKQT TMDYER--- FDYWGQOGTLV TVSS BMS2h-450 — (SEQIDNO: 140)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFD EVDMSWVROA PGKGLEWVSA IGNNGLKTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKSA LSYRPPV--- FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-451 — (SEQIDNO: 141)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFQ DDTMSWVRQA PGKGLEWVST ITLKGPSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKSR DGLY---— FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-452 — (SEQIDNO: 142)
EVOQLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFA SSPMAWVROA PGKGLEWVSS IGRDGSTTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKPS PYRR---— FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-453 — (SEQIDNO: 143)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFT DYSMVWVRQA PGKGLEWVST IVSHGGTTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKGK GYNAQY--- FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-454/ — (SEQIDNO: 144)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFG HQOQMAWVRQA PGKGLEWVST ITPNGYYTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKFD YSLR——-- FDYWGOGTLV TVSS BMS2h-455 — (SEQIDNO: 145)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFN DYDMIWVROA PGKGLEWVST ISSHGDSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKGD VF-------- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-456 — (SEQIDNO: 146)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFG HQQMAWVROA PGKGLEWVST ITPNGYYTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEWS DS-------— FDYRGQOGTLV TVSS BMS2h-457/ — (SEQID NO: 147)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFA DYEMAWVROQA PGKGLEWVSG IQSNGNITYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKAN SQVEY--- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-458 — (SEQIDNO: 148)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFG VEPMSWVRQA PGKGLEWVSN IGRDGSMTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKLG KHGT---— FDYWGQOGTLV TVSS BMS2h-459 — (SEQIDNO: 149)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFP EYRMMWVRQA PGKGLEWVSW IDERGSLTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKRR KGTKQ-—- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-46 (SEQ ID NO: 150)
EVOQLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFE LYAMAWVRQA PGKGLEWVSG IGAVGETTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKEA NNLSDNLV—FDYWGOQGTLV TVSS BMS2h-460 — (SEQIDNO: 151)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFG HQQMAWVROA PGKGLEWVST ITPNGYYTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKWS VEW---—-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-461 — (SEQIDNO: 152)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFN SYTMNWVROA PGKGLEWVSS INPWGSRTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKGL VL------ FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-462 — (SEQIDNO: 153)
EVOQLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFD GDMMSWVRQA PGKGLEWVSS ITQLGSRTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKQN WRTLT----- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-463 — (SEQIDNO: 154)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFN AYGMMWVRQA PGKGLEWVSS ILSDGVITYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKSA RGANF--- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-464 — (SEQIDNO: 155)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFG HYMMVWVRQA PGKGLEWVSS ITPHGTSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEFN AIFSEA---- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-465 — (SEQIDNO: 156)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFR DYSMAWVROA PGKGLEWVST ITPSGLTTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAEWS QAVTRS--- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-4668 — (SEQIDNO: 157)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFD LYAMAWVRQA PGKGLEWVSM IGRDGRFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKLA GSLRGR---- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-467 (SEQ ID NO: 158)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFN KASMGWVRQA PGKGLEWVST ITPHGSSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKQR WGVE------ FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-468 (SEQ ID NO: 159)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFQ GYSMGWVRQA PGKGLEWVSS IAGRGGVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKGL YIYHSL---- FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-469 (SEQ ID NO: 160)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFP GMEMSWVRQA PGKGLEWVSA ITGTGSTTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKGY HP-------- FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-470 (SEQ ID NO: 161)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFP MVAMSWVRQA PGKGLEWVSS IARDGNVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED AAVYYCAKVS PTG------- FOYWGQGTLV TVSS BMS2h-471 (SEQ ID NO: 162)
TVSS BMS2h-472 (SEQ ID NO: 163)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFG EYNMMWVROQA PGKGLEWVSQ ITRDGSRTYY ADSVRGRFTI SRDNSRNTLY LQOMNSLRAED SAVYYCAKLS NIG—-—- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-473 (SEQ ID NO: 164)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS DYSMIWARQA PGKGLEWVSS ITPYGSYTIYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKTD YL-------- FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-474 (SEQ ID NO: 165)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFD TYSMMWVRQA PGKGLEWVST ITPYGSSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKWG LV-———- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-475 (SEQ ID NO: 166)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFT TGPMMWVRQA PGKGLEWVSA IGIGGDTTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKLT PSNQ----— FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-476 (SEQ ID NO: 167)
BMS2h-477 — (SEQIDNO: 168)
FDYWGOQGTLV TVSS BMS2h-478 — (SEQIDNO: 169)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFK EYQMSWVROA PGKGLEWVST ISPSGMNTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEWR SVVRPWPGV- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-4179 — (SEQIDNO: 170)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFD DESMAWVROA PGKGLEWVSS ITPHGTFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKLH LKLYESH-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-480 — (SEQIDNO: 171)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFE GGEMGWVRQA PGKGLEWVSM IPMDGSATYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKAG ST-—-—- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-481 — (SEQIDNO: 172)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFD FMPMAWVRQA PGKGLEWVSS IGRDGAYTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKLA SPAQ---— FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-482 — (SEQIDNO: 173)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFG DEPMLWVRQA PGKGLEWVSS IGGTGTTTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKGN QGDFINR--- FHYWGOQGTLV TVSS BMS2h-483 — (SEQIDNO: 174)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFH AYNMAWVROA PGKGLEWVST ISPRGSYTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKWP PPSSH-—- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-5 (SEQ ID NO: 175)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFD GYEMAWVRQA PGKGLEWVSS ITSDGTSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKPG LR———- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-505 — (SEQIDNO: 176)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFE GYMMYWVHQOA PGKGLEWVSS ISPQGHFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAELR ELPRL--— FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-5086 — (SEQIDNO: 177)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFS SYAMGWVROA PGKGLEWVSS IDASGGPTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKAN GKKFPFTKY- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-507 — (SEQIDNO: 178)
BMS2h-515 — (SEQIDNO: 179)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFK EGEMYWVROA PGKGLEWVST ISTNGLTTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKST RDLG——- FAYWGQGTLV TVSS BMS2h-516 — (SEQIDNO: 180)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFE EYEMAWARQA PGKGLEWVSF ISPRGHFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKPA KT——-—- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-517 — (SEQIDNO: 181)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFD TYEMLWVRQA PGKGLEWVSR ISVDGSITYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKTR MR---—-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-518 — (SEQIDNO: 182)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEAQ SGGLRSGLTT FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-519 — (SEQIDNO: 183)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCADSGFTFS SYAMSWVRQA PGKGLEWVSS IGRDGAYTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKAG PKGIA-—-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-520 — (SEQ ID NO: 184)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFS PHAMAWVRQA PGKGLEWVSG IDGGGSMTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKSD PP-—-—- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-521 — (SEQIDNO: 185)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFH AGEMHWVROA PGKGLEWVSS ITLPGDMTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKPN TGYT—- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-522 — (SEQID NO: 186)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFG NYGMSWVROA PGKGLEWVSS ISWDGSLTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAQNT RL——-—- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-523 — (SEQIDNO: 187)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFH DADMLWVRQA PGKGLEWVSG ILSPGEDTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKFG LP——- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-524 — (SEQIDNO: 188)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFR TDQMNWVROQA PGKGLEWVSS ISPSGAYTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKGL GA----—- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-525""— (SEQIDNO: 189)
BMS2h-526 — (SEQIDNO: 190)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFOQ DEQMAWVROA PGKGLEWVSS IASDGMSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAQPG KN-—-- FDHWGQGTLV TVSS BMS2h-527 (SEQ ID NO: 191)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS DYAMSWVRQA PGKGLEWVSS ITTGGERTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKRW NLYTES--- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-528 — (SEQIDNO: 192)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFG GQPMDWVRQA PGKGLEWVSS IAPDGIHTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKNL GQG-——-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-5298 — (SEQIDNO: 193)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFE RYQMTWVRQA PGKGLEWVSS ISPSGTFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQOMNSLRAED TAVYYCAEWK AL——--- FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-530 — (SEQIDNO: 194)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFP HSTMYWVRQA PGKGLEWVSL ILPSGSRTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKFS DER-——-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-531 — (SEQIDNO: 195)
EVOLSESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFG DGNMDWVROQA PGKGLEWVSG ISSDGVTTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKDR GQG------- FOYWGQGTLV TVSS BMS2h-532 (SEQ ID NO: 196)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFD DYMMWWVRQA PGKGLEWVSS ISPHGVYTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKWL HT—-—-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-533 (SEQ ID NO: 197)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFS NYTMAWGROA PGKGLEWVSF IAGPGNYTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKPG STATYNNGQ- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-534 — (SEQIDNO: 198)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFT EYSMVWVRQA PGKGLEWVSS ISGSGRVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKWL KLVRAPNP—FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-535 — (SEQIDNO: 199)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFS NYOMAWVRQA PGKGLEWVSG ISKTGHSTYY ADSVKGRFTI SRDNSRNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKAS HSLGPL--- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-54º — (SEQIDNO: 200)
BMS2h-55 = (SEQIDNO: 201)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFA RYEMGWVRQA PGKGLEWVSR ITAQGLGTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKYL TDFSSGHQE- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-553 (SEQ ID NO: 202)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFD DYGMSWVRQV PGKGLEWVSG ISHNGMLTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKYW PSTSWETD—FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-554º — (SEQID NO: 203)
EVOLLESGGG SVOPGGSLRL SCAASGFTFG NEPMAWVROQA PGKGLEWVSS IEMQGKNTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKDR GQG------ FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-555 (SEQ ID NO: 204)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFG EEEMSWVRQA PGKGLEWVSC IDNLGSPTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQOMNSLRAED AAVYYCAKTI SHQYDR---- FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-556/ — (SEQIDNO: 205)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFG EEEMSWVRQA PGKGLEWVSS IDEGGRWTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKWT PHKQLS-—- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-557/ — (SEQID NO: 206)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFSFA DEYMVWARQA PGKGLEWVSE IDPLGTGTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKYG TA———- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-558 (SEQ ID NO: 207)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFS THDMMWVRQA PGKGLEWVSS ISDDGISTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKPD MSLIE-—— FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-5598º — (SEQID NO: 208)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFD GTPMVWVROA PGKGLEWVSG ISGDGRNTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAEPY ALTSSKP-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-56/ — (SEQIDNO: 209)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFN DYTMGWVROA PGKGLEWVSW IHGTGGATYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKAL ADRSGGVVE- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-560 — (SEQ ID NO: 210)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFE AETMAWVRQA PGKGLEWVSC ISNDGNTTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKES LISPGL--- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-561 — (SEQIDNO:211)
BMS2h-562 — (SEQID NO: 212)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFR SYDMGWVROA PGKGLEWVST ISPMGVFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKSN QHAHDP--- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-568 — (SEQIDNO:213)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFS DYDMGWVROA PGKGLEWVSS ISPMGTFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKAA LTEPM----- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-564º — (SEQIDNO: 214)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFR DYDMGWVROA PGKGLEWVST ISPLGHFTYY ADSVKGRSTI SRDONSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKAE EA———- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-565º — (SEQIDNO: 215)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFAFP RYGMTWVRQA PGKGLEWVSN IDQFGMKTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEEY AS---—-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-568 — (SEQIDNO: 216)
EVOQLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFD KYDMGWVRQA PGKGLEWVST ISPMGVFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKGR GNTSD--- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-567/ — (SEQIDNO: 217)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFS NYDMAWVRQA PGKGLEWVST ISGAGHFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKSF PRDE—- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-568 — (SEQIDNO: 218)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFP KYEMRWVROA PGKGLEWVSE IGLDGSPTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKLG DPNG---- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-569º— (SEQID NO: 219)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFP TSEMDWVROA PGKGLEWVSG IGPDGLTTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKHA DW—--- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-57 (SEQ ID NO: 220)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFS EYDMYWVRQA PGKGLEWVSW IDTDGGDTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKPG LK----- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-570 — (SEQIDNO: 221)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCTASGFTFE NASMQWVRQA PGKGLEWVSS IEGQOGNATYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKSS SWS-——-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-571 — (SEQIDNO: 222)
BMS2h-572 — (SEQIDNO: 223)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFN WOQOLMGWVRQA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKVG KESN--—- FDYRGQGTLV TVSS BMS2h-572-1 (SEQ ID NO: 224)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFN WOQOLMGWFROA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKVG KESN-—-- FDYRGQGTLV TVSS BMS2h-572-10 — (SEQID NO: 225)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFN WOQOLMGWVROA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTV SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKVG KESN----- SDYRGQGTLV TVSS BMS2h-572-11 (SEQIDNO: 226)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFN WOLMGWVRQA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQOMNSLRAED TAVYYCVKVG KESN-—-- SDYRGQGTQV TVSS BMS2h-572-12 — (SEQID NO: 227)
EVOLLESGGG LVOQPGGSLRL SCAASGFTFN WOQOLMGWARQA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKVG KESN-—-- SDYRGQGTLV TVSS BMS2h-57213 —(SEQIDNO: 228)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFN WOQLMGWARQA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKDRFTI SRDNSKNTLY LLMNSLRAED TAVYYCAKVG KESN---—-- FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-572-14 (SEQ ID NO: 229)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFN WOQLMGWVRQA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNTKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCVKVG KESN---— SDYRGQGTLV TVSS BMS2h-572-15 (SEQ ID NO: 230)
EVRLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFNFN WOLMGWIROA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKVG KESN-—-- SDYRGQGTLV TVSS BMS2h-572-16 (SEQIDNO: 231)
EVOQLLESGGG LVRPGGSLRL SCVASGFTFN WQLMGWVRQA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKVG KESN---- FDYRGQGTLV TVSS BMS2h-572-17 — (SEQID NO: 232)
EVOLLESGGG LVOTGGSLRL SCAASGFTYN WOLMGWVRQA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRADD TAVYYCVKVG KESN------ FOYRGHGTLV TVSS BMS2h-572-18 (SEQID NO: 233)
BMS2h-572-19 — (SEQID NO: 234)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFN WOQLMGWVROA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNTKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKVG KESN---— FDYRGQGTLV TVSS BMS2h-572-2 — (SEQIDNO: 235)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFN WOLMGWVROA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKVG KESK---— FDYLGQGTLV TVSS BMS2h-572-21 — (SEQID NO: 236)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFN WOQOLMGWVROA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY AESVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKVG KESN---— LDYRGQGTLV TVSS BMS2h-572-22 — (SEQID NO: 237)
EVOLFESGGG SVOPGGSLRL SCAASGFTFN WOLMGWVROA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKVG KESN---- SDYRGOGTLV TVSS BMS2h-572-23 — (SEQID NO: 238)
EVQLLESGGG LVOPGGSLRL TCAASGFTFN WQLMGWVRQA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFII SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKVG KESN—- SDYRGQGTLV TVSS BMS2h-572-24 — (SEQID NO: 239)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFN WOQOLMGWVROA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNSTNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKVG KESE-—-- FDYRGOGTLV TVSS BMS2h-572-3 — (SEQID NO: 240)
EVRLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFN WQLMGWVRQA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI TRONSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCVKVG KESN---— LDYRGQGTLV TVSS BMS2h-572-4 — (SEQIDNO: 241)
EVOLLVSGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFN WOLMGWVROA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKVG KESN---- FDYRGQGTLV TVSS BMS2h-572-5º— (SEQIDNO: 242)
EVOLLVSGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFN WOLMGWVRQA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNMLY LQOMNGLRAED TAVYYCAKVG KESN----— FDYRGQGTLV TVSS BMS2h-572-6 — (SEQIDNO: 243)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFN WOLMGWVROA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCVKVG KESN---- SDYRGOGTLV TVSS BMS2h-572-601 (SEQ ID NO: 244)
BMS2h-572-602 (SEQ ID NO: 245)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFK WHLMGWVROQA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCVKVG KESS---— SDYRGQGTLV TVSS BMS2h-572-603 — (SEQ ID NO: 246)
TVSS BMS2h-572-604 (SEQ ID NO: 247)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFK WQLMGWVRQA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCVKVG KESN-——- SDYRGQGTLV TVSS BMS2h-572-605 — (SEQ ID NO: 248)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFK WQLMAWARQA PGKGLEWVSG IEGPGDITYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCVKVG KESN---- SDYRGQGTLV TVSS BMS2h-572-606 (SEQ ID NO: 249)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFN WHLMGWARQA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCVKVG KESN---- SDYRGQGTLV TVSS BMS2h-572-607 (SEQ ID NO: 250)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFK WQLMGWARQA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCVKVG KESN-——- SDYRGQGTLV TVSS BMS2h-572-608 (SEQ ID NO: 251)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFN WELMGWARQA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCVKVG KESN---- SDYRGQGTLV TVSS BMS2h-572-609 — (SEQ ID NO: 252)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFN WQLMGWARQA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCVKVG KESN-——- SDYRGQGTLV TVSS BMS2h-572-610 (SEQ ID NO: 253)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFN WQLMGWVRQA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCVKVG KDSK---- SDYRGQGTLV TVSS BMS2h-572-611 (SEQID NO: 254)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFN WQLMGWVRRA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCVKVG KDSK-—- SDYRGQGTLV TVSS BMS2h-572-612 (SEQ ID NO: 255)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCVKVG KDSN---— SDYRGQGTLV TVSS BMS2h-572-613 (SEQID NO: 256)
EVOLLESGGG LAQPGGSLRL SCAASGFTFN WOQLMGWVRQA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCVKVG KDSK-—-- SDYRGQOGTLV TVSS BMS2h-572-614 (SEQ ID NO: 257)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFN WOLMGWVRQA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCVKVG KDAK---- SDYRGQGTLV TVSS BMS2h-572-615 (SEQ ID NO: 258)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFN WQLMGWVRQA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCVKVG KDKN------ SDYRGQGTLV TVSS BMS2h-572-616 (SEQ ID NO: 259)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFN WQLMGWVRQA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCVKVG KESK---— SDYRGQGTLV TVSS BMS2h-572-617 (SEQ ID NO: 260)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFN WQLMGWVRQA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCVKVG RDSK------ SDYRGQGTLV TVSS BMS2h-572-618 (SEQ ID NO: 261)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFN WOQOLMGWVRQA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCVKVG KYSN---- SDYRGQGTLV TVSS BMS2h-572-619 (SEQ ID NO: 262)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFN WQLMGWVRQA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCVKVG KDSR------ SIDYRGQGTLV TVSS BMS2h-572-620 (SEQ ID NO: 263)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFN WQLMGWVRQA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCVKVG KDDS---— SDYRGQGTLV TVSS BMS2h-572-621 (SEQ ID NO: 264)
EVOLLEFGGG LVOPGGSLRF SCAASGFTFN WOQLMGWFRQA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCVKVG RDSN-—-- SDYRGQGTLV TVSS BMS2h-572-622 (SEQ ID NO: 265)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFN WOLMGWVRQA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCVKVG KDST---— SDYRGQGTLV TVSS BMS2h-572-623 (SEQ ID NO: 266)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCVKVG KESS---— SDYRGQGTLV TVSS BMS2h-572-624 (SEQID NO: 267)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFN WOLMGWVROA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI FRDONSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCVKVG KDSA---— SDYRGQGTLV TVSS BMS2h-572-625 (SEQ ID NO: 268)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFN WOLMGWVRQA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCVKVG NDSY------ SDYRGQGTLV TVSS BMS2h-572-626 (SEQ ID NO: 269)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFN WQLMGWVRQA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQOMNGLRAED TAVYYCVKVG KDSS-—-- SDYRGQGTLV TVSS BMS2h-572-627 — (SEQ ID NO: 270)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFN WQLMGWVRQA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAIYYCVKVG KDSA----— SDYRGQGTLV TVSS BMS2h-572-6380 (SEQ ID NO: 271)
EVOLLESGGG LVAOPGGSLRL SCAASGFTFK WQLMGWVRQA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCVKVG KDAK-——- SDYRGQGTLV TVSS BMS2h-572-631 (SEQID NO: 272)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFK WQLMGWVRQA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCVKVG KDSR------ SDYRGQGTLV TVSS BMS2h-572-632 (SEQ ID NO: 273)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFK WQLMGWVRQA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCVKVG KDSK-——- SDYRGQGTLV TVSS BMS2h-572-633 — (SEQ ID NO: 274)
EVOLLESGGG LVOQPGGSLRL SCAASGFTFN WELMGWARQA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCVKVG KDAK---- SDYRGQGTLV TVSS BMS2h-572-634 (SEQ ID NO: 275)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFN WELMGWARQA PGKGLEWVSG IEGPGDVTIYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCVKVG KDSR------ SDYRGQGTLV TVSS BMS2h-572-635 (SEQ ID NO: 276)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFN WELMGWARQA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCVKVG KDSK---- SDYRGQGTLV TVSS BMS2h-572-7/— (SEQID NO: 277)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED SAVYYCAKVG KESN---— FDYLGQGTLV TVSS BMS2h-5728 — (SEQIDNO: 278)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCVASGFTFN WQLMGWVRQA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKVG KESN-——- SDYRGOGTLV TVSS BMS2h-572-9 — (SEQID NO: 279)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFN WOLMGWVRQA PGKGLEWVSG IEGPGDVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKVG KESN---- SDYRGQGTLV TVSS BMS2h-573 — (SEQIDNO: 280)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFS GWEMGWVRQA PGKGLEWVSS IDESGLNTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEGA PQYQIT---- FDYWGOQGTLV TVSS BMS2h-574 — (SEQIDNO: 281)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFP NYGMYWVRQA PGKGLEWVSY ISRRGLLTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKTS HYMNNG---- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-575 — (SEQIDNO: 282)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFV DYTMAWVRQA PGKGLEWVSS ISPIGTFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKDP YGMEDGLTW- FDYWGOGTLV TVSS BMS2h-576 — (SEQIDNO: 283)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFD AYDMOQWVROA PGKGLEWVST ITSEGLSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKPS DL———- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-577 — (SEQIDNO: 284)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFD GYDMGWVROA PGKGLEWVST ISRGGWFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKGT SOSSTGS--- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-578 — (SEQIDNO: 285)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFR RYDMLWARQA PGKGLEWVSE ISPTGALTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKLG ST——-—- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-579 — (SEQIDNO: 286)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFF PYYMSWVRQA PGKGLEWVSS ISGTGGLTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKTT QNATL---- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-58 (SEQ ID NO: 287)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFE VYTMAWVRQA PGKGLEWVST IDESGRDTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKPG VW-—-—-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-580 — (SEQIDNO: 288)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKVF KGKGWTRPSG FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-581 — (SEQIDNO: 289)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFN EYSMMWVRQA PGKGLEWVSS IGRRGWLTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKAV LLDSTK- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-582 — (SEQID NO: 290)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFD EYPMTWVROA PGKGLEWVST ISARGPFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKGR HWLRNGR-—- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-583 — (SEQIDNO: 291)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFG MQSMQWVRQA PGKGLEWVSS ITDDGTSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKPD RV---—-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-584 — (SEQIDNO: 292)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFG AADMQWVRQA PGKGLEWVSL ITNDGISTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKAG DR---—-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-5868 — (SEQIDNO: 293)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFN KYRMOQWVRQA PGKGLEWVSS IDSSGELTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEEV PMGNQTF-- FDYWGOQGTLV TVSS BMS2h-587 /— (SEQIDNO: 294)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFT DYTMGWVRQA PGKGLEWVSS ITSQGAFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKAT GTDSS--- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-588 — (SEQIDNO: 295)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFE DYEMSWVRQA PGKGLEWVSC IGPGGKPTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKVD GH---—-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-589 — (SEQID NO: 296)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS QYDMGWVRQA PGKGLEWVST ISSRGWLTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKGP GGRRR——-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-59 (SEQ ID NO: 297)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKSS AISFTSDISN FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-5900 — (SEQ ID NO: 298)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS DYPMSWVRQA PGKGLEWVSS ISWSGFOTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKPG VARMPTGIA- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-591 — (SEQIDNO: 299)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAEPF GM---—-- FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-592º — (SEQ ID NO: 300)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKTV RRGLPRPSRY FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-593 — (SEQIDNO: 301)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFS DYDMGWVROA PGKGLEWVSS ISPMGTFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKGL SVYSGLD-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-594 — (SEQIDNO: 302)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFS HYDMGWVRQA PGKGLEWVSD IDYIGKTTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKAS DEVGVNTSK- FDYWGOQGTLV TVSS BMS2h-595" — (SEQID NO: 303)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFA RYDMGWVRQA PGKGLEWVST ISPTGVLTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKGF ED---—-- FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-596 — (SEQIDNO: 304)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFE AYPMSWVRQA PGKGLEWVSL ISHTGHATYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKGH WP-----—- FDYRGQGTLI TVSS BMS2h-567 — (SEQIDNO: 305)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFE DEWMSWVRQA PGKGLEWVSD ISPGGWTTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKGY RPFDE--— FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-598 — (SEQIDNO: 306)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGVTFD AIEMSWVRQA PGKGLEWVSS ISRHGEYTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEDA WSRH---— FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-599 — (SEQ ID NO: 307)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFD STDMSWVRQA PGKGLEWVSG ILDNGSNTYY ADSVKGRFTI SRDONSKNMLY LQMNSLRAED TAVYYCAKGA RD------—- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-600 — (SEQ ID NO: 308)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFG RQOSMQWVRQA PGKGLEWVSS IDDDGFSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKGD PWG------- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-601 — (SEQID NO: 309)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCTASGFTFS DTQMAWVRQA PGKGLEWVSG IDDGGVSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKPD RH-—-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-6802 — (SEQ ID NO: 310)
ADSVKGRFTI SRDNSRNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKVD GYGV---— FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-603 — (SEQIDNO:311)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFR SGDMNWVRQA PGKGLEWVST ITNDGTSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKSD SD------— FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-61 (SEQ ID NO: 312)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFA AYAMTWVROA PGKGLEWVSY ISPNGTATYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEYV GMRWNS--- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-62 (SEQ ID NO: 313)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFS SYEMAWVROA PGKGLEWVSS ITSLGTSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKPG RK-——-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-65 (SEQ ID NO: 314)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFN EYEMTWVROA PGKGLEWVST ITSEGSGTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKPN GK-——-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-66 (SEQ ID NO: 315)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS DYEMLWVRQA PGKGLEWVST ITSEGHSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKPG TS——-—- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-67 (SEQ ID NO: 316)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFS DYEMSWVROA PGKGLEWVST IDSDGSFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKPG VK------- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-68 (SEQ ID NO: 317)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFK DYEMTWVROA PGKGLEWVSS ISSTGOSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKPG NK-——-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-69 (SEQ ID NO: 318)
ADSVKSRFTI SRDNSKNTLY LAMNSLRAED TAVYYCAKEV RVGRGVHPPK FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-7 (SEQ ID NO: 319)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFN LYEMTWVROQA PGKGLEWVSS ITSDGVSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKAG VI-—-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-70 (SEQ ID NO: 320)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFE NYAMSWVROA PGKGLEWVST IAPLGVPTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKKK VGAWLOSRS- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-701 — (SEQIDNO: 321)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKYL DMLLFG---- FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-702 — (SEQID NO: 322)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFA EYEMMWARQA PGKGLEWVSR IAGNGSRTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAIML SH——-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-703 — (SEQIDNO: 323)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFY NYDMSWVROA PGKGLEWVSG IDSMGLVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKGS NASDWVV--- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-704 — (SEQIDNO: 324)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFA SYHMTWVRQA PGKGLEWVSS IADTGDRTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKLR GMARVWG-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-705 — (SEQIDNO: 325)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFS YYDMMWVROA PGKGLEWISS ISDRGLOTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKFT EIPLDWLEV- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-706 — (SEQIDNO: 326)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFG SYKMLWVRQA PGKGLEWVSS ITNSGTETYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKSM YPDLEIVH—FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-707 — (SEQIDNO: 327)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFE TYRMSWVRQA PGKGLEWVSA IDQEGSATYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKNS GTRPGLR--- FOYWGQGTLV TVSS BMS2h-708 — (SEQIDNO: 328)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS SYDMLWVROA PGKGLEWVSR IDASGYFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAQLL KLSLNPN--- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-709 — (SEQIDNO: 329)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS SYAMSWVRQA PGKGLEWVSS IHNTGLSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKGT QHRFVV--- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-71 (SEQ ID NO: 330)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFE GYPMSWVRQA PGKGLEWVST ISPLGPDTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKLL MGEYLNSRT- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-710 — (SEQIDNO: 331)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFN TYSMSWVRQA PGKGLEWVSW IDADGWVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAQTG HT-—--- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-711 — (SEQIDNO: 332)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKAG DQ-—-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-712 — (SEQIDNO: 333)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFP EYEMKWVRQA PGKGLEWVST ITPSGGHTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED AAVYYCAIPL SS---—-- FDYWGRGTLV TVSS BMS2h-713 — (SEQIDNO: 334)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS NYVMIWVROA PGKGLEWVSL INGAGDMTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEGG ARSFGVPPN- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-714 — (SEQIDNO: 335)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFT DGEMGWARQA PGKGLEWVSR IVDPGDSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKAG DQ-——-—- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-715 — (SEQIDNO: 336)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCVASGFTFT LYNMSWVRQA PGKGLEWVSV ISSKGDSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAQTS SV—-—- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-716 (SEQ ID NO: 337)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFE AYYMSWVRQA PGKGLEWVSG IVNNGLLTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNMLY LQMNSLRAED TAVYYCAKSA VHPSYRAEL- FDYWGOQGTLV TVSS BMS2h-717 — (SEQIDNO: 338)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFS SYEMAWVRQA PGKGLEWVSR IEPDGSNTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKGP DNFTM---- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-718 (SEQ ID NO: 339)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFN KYMMGWVRQA PGKGLEWVSS IDSLGHYTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEAE FP———- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-719 — (SEQIDNO: 340)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFK RYEMTWVRQA PGKGLEWVSS ISSDGSFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAEPF TE----—-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-7191 — (SEQIDNO: 341)
EVOLLESGGG MVOPGGSLRL SCAASGFTFK RYEMMWVRQA PGKGLEWVSS ISSDGSFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEPF TE------- FDOYWGQGTQV TVSS BMS2h-719-10 — (SEQID NO: 342)
EVOLLESGGG MVQPGGSLRL SCAASGFTFK RYEMMWVRQA PGKGLEWVSS ISSDGSFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEPF TE---—-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-719-11 — (SEQID NO: 343)
ADSVKGRFTI SRDNSENTLY LQMNSLRAED TAVYYCADPF TE———- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-71912 — (SEQID NO: 344)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFK RYEMMWVRQA PGKGLEWVSS ISSDGSFTYY ADSVKGRFTV SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCADPF TE------ FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-719-13 — (SEQID NO: 345)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFK RYEMMWVROA PGKGLEWVSS ISSDGSFTYY ADSVKGRFTI SRDNTKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCADPF TE-------- LDOYWGHGTLV TVSS BMS2h-719-14 — (SEQID NO: 346)
EVOLLESGGG LVRPGGSLRL SCAASGFTFK RYEMMWVRQA PGKGLEWVSS ISSDGSFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYFCADPF TE-------- FDOYWGQOGTLV TVSS BMS2h-719-15 (SEQID NO: 347)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFAFK RYEMTWVRQA PGKGLEWVSS ISSDGSFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LHMNSLRAED TAVYYCADPF TE------- IDYWGQGTLV TVSS BMS2h-719-16 (SEQ ID NO: 348)
EVOLLESGGG LVAQPGGSLRL SCAASGFPFK RYEMTWVRQA PGKGLEWVSS ISSDGSFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQOMNSLRAED TAVYYCAEPF TE-------- FDOYRAQGTLV TVSS BMS2h-71217 — (SEQID NO: 349)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFK RYEMSWVROA PGKGLEWVSS ISSDGSFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCADPF TE-—-—- IDYWGQGTAV TVSS BMS2h-719-18 (SEQ ID NO: 350)
EVOLLESGGG LVHPGGSLRL SCAASGFTFK RYEMMWVROA PGKGLEWVSS ISSDGSFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRDED TAVYYCAEPF TE——-—-- FDYGGQGTLV TVSS BMS2h-719-19 — (SEQID NO: 351)
EVOLLESGGG WVQPGGSLRL SCAASGFTFK RYEMMWVRQA PGKGLEWVSS ISSDGSFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCADPF TE-——- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-719-2 — (SEQID NO: 352)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFK RYEMMWVRQA PGKGLEWVSS ISSDGSFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEPF TE------- FDYWGHGTLV TVSS BMS2h-719-20 — (SEQ ID NO: 353)
EVOLLESGGG LVQOPGGSLRL SCAASGFTFK RYEMTWVRQA PGKGLEWVSS ISSDGSFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEPF TE------ IDYRGOGTLV TVSS BMS2h-719-202 (SEQ ID NO: 354)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAEPF TE-------- FDYWGHGTLV TVSS BMS2h-719-203 (SEQ ID NO: 355)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFN SYEMMWVROA PGKGLEWVSS ISSDGSFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEPF TE------ FDYWGHGTLV TVSS BMS2h-719-21 — (SEQID NO: 356)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFK RYEMMWVROA PGKGLEWVSS ISSDGSFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQOMNSLRAED TAVYYCADPF TE——-—- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-719-213 (SEQ ID NO: 357)
EVOLLESGGG LVOQPGGSLRL SCAASGFTFK RYEMMWVROQA PGKGLEWVSS ISSDGSFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCADPF TE———- MDYWGHGTLV TVSS BMS2h-719-214 (SEQ ID NO: 358)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFK RYEMMWVRQA PGKGLEWVSS ISSDGSFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQOMNSLRAED TAVYYCADPF TE——- FDYWGHGTLV TVSS BMS2h-719-215 (SEQ ID NO: 359)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFK RYEMMWVROA PGKGLEWVSS ISSDGSFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAEPF TE-------- LOYWGHGTLV TVSS BMS2h-719-218 (SEQID NO: 360)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFK RYEMMWVROA PGKGLEWVSS ISSDGSFTYY AESVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEPF TE——- FDYWGHGTLV TVSS BMS2h-719-225" (SEQ ID NO: 361)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFN TYEMOWVROQA PGKGLEWVSS ISSDGSFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEPF TE-------- FDOYWGHGTLV TVSS BMS2h-719-226 (SEQ ID NO: 362)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFN KYEMMWARQA PGKGLEWVSS ISSDGSFTYY ADSVKGRFTI SRDNSRNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEPF TE———- FDYWGHGTLV TVSS BMS2h-719-3 — (SEQID NO: 363)
EVOLSESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFK RYEMMWVRQA PGKGLEWVSS ISSDGSFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQOMNSLRAED TAVYYCADPF TE——- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-7194 — (SEQID NO: 364)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFK RYEMMWVROQT PGKGLEWVSS ISSDGSFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEPF TE-------- FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-719-5" (SEQID NO: 365)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LEMNSMRAED TAVYYCAEPF TE——— FDONWGQGTLV TVSS BMS2h-7196 — (SEQID NO: 366)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFK RYEMMWVRQA PGKGLEWVSS ISSDGSFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEPF TE------ FDYWGQGTOV TVSS BMS2h-719-7 — (SEQID NO: 367)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFNFK RYEMTWVROA PGKGLEWVSS ISSDGSFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCADPF TE———- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-719:8 — (SEQID NO: 368)
EVOLLESGGD LVOPGGSLRL SCAASGFTFK RYEMMWVRQA PGKGLEWVSS ISSDGSFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEPF TE-----—-- FDOYRGQOGTLV TVSS BMS2h-719-9 — (SEQID NO: 369)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFK RYEMSWVRQA PGKGLEWVSS ISSDGSFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEPF TE------- FDOYWGRGTLV TVSS BMS2h-72 (SEQ ID NO: 370)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQOMNSLRAED TAVYYCAKLS AGAETHVYRL FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-720 — (SEQIDNO: 371)
EVOLLESGGG LVOQPGGSLRL SCAASGFTFG NYEMMWVROA PGKGLEWVSS IGVLGHTTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKLM SLRTFENL—FDYWGOQGTLV TVSS BMS2h-722 (SEQ ID NO: 372)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFT KYPMAWVRQA PGKGLEWVSG IDANGNRTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEGT WRRHFAI-- FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-723 — (SEQIDNO: 373)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFD LYDMMWVRQA PGKGLEWVSS ISDLGTLTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKNG FRVTSNDRR- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-724 — (SEQIDNO: 374)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFT GGDMWWVRQA PGKGLEWVSM IEGGGVTTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQOMNSLRAED TAVYYCAELD LRTGQ----- FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-725"— (SEQIDNO: 375)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS AYTMGWVRQA PGKGLEWVSL IGDRGSWTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEPS DPTK--— FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-725-1 — (SEQIDNO: 376)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYFCADPS DPTK---—— FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-725-10 (SEQID NO: 377)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFS AYTMGWVRQA PGKGLEWVSL IGDRGSWTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCADPS DPTK——- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-725-11 — (SEQID NO: 378)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFS AYTMGWVRQA PGKGLEWVSL IGDRGSWTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQOMSSLRAED TAVYYCADPS DPTK----—- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-725-12 — (SEQID NO: 379)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFP AYTMGWVRQA PGKGLEWVSL IGDRGSWTYY ADSVKGRFTI SRDDSKNTLY LOMNSLRVED TAVYYCAEPS DPTM-—-- FVYYWGQGTLV TVSS BMS2h-725-13 — (SEQID NO: 380)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFS AYTMGWVRQA PGKGLEWVSL IGDRGSWTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEPS DPTM---- FVYYWGQGTLV TVSS BMS2h-725-14 (SEQ ID NO: 381)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS AYTMGWVRQA PGKGLEWVSL IGDRGSWTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQOMNSLRAED TAVYYCADPS DPTM------ FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-725-15 (SEQID NO: 382)
EVOLLESGGG MVOPGGSLRL SCAASGFTFS AYTMGWVRQA PGKGLEWVSL IGDRGSWTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSMRAED TAVYYCADPS DPTK---— FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-725-16 (SEQ ID NO: 383)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFS AYTMGWVRQA PGKGLEWVTL IGDRGSWTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEPS DPTM---- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-725-17 (SEQID NO: 384)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFT AYTMGWVRQA PGKGLEWVSL IGDRGSWTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAEPS DPTK----- LOYWGQGTLV TVSS BMS2h-725-18 — (SEQID NO: 385)
EVOLSESGGG LVQPGGSLRL TCAASGFTFS AYTMGWVRQA PGKGLEWVSL IGDRGSWTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCADPS DPTK——- FVYWGQGTLV TVSS BMS2h-725-19 — (SEQID NO: 386)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS AYTMGWVRQA PGKGLEWVSL IGDRGSWTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCADPS DPTK—- FVYWGQGTLV TVSS BMS2h-725-2 — (SEQ1ID NO: 387)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAEPS DPTK---— FVYWGQGTPV TVSS BMS2h-725-3 — (SEQIDNO: 388)
VOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS AYTMGWVRQA PGKGLEWVSL IGDRGSWTYY ADSVKGRFTI SRDONSRNMLY LQMKSLRAED TAVYYCADPS DPTK-—- FVYWGQGTQV TVSS BMS2h-725-4 — (SEQID NO: 389)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFS AYTMGWVRQA PGKGLEWVSL IGDRGSWTYY ADSVKGRFTI FRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCADPS DPTK----— FVYYWGQGTLV TVSS BMS2h-725-5 — (SEQID NO: 390)
EVOLLESGGG LLOPGGSLRL SCAASGFTFS DYTMGWVRQA PGKGLEWVSL IGDRGSWTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEPS DPTK----- FOYWGRGTLV TVSS BMS2h-725-86 — (SEQIDNO: 391)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFS AYTMGWVRQA PGKGLEWVSL IGDRGSWTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEPS DPTK----— FVYYWGQGTLV TVSS BMS2h-725-7 (SEQ ID NO: 392)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS AYTMGWVRQA PGKGLEWVSL IGDRGTWTYY ADPVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCADPS DPTK——- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-725-8 — (SEQIDNO: 393)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFS AYTMGWVRQA PGKGLEWVSL IGDRGSWTYY ADSVKGRFTV SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEPS DPTK----- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-725-9 (SEQ ID NO: 394)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS AYTMGWVRQA PGMGLEWVSL IGDRGSWTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEPS DPTK----— FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-726 — (SEQIDNO: 395)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFD NYKMYWVRQA PGKGLEWVSS ISEIGNLTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAIAL TR-——-—- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-727 — (SEQIDNO: 396)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFA SYRMYWVRQA PGKGLEWVSY IDPPGSRTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKSL NLSFPYIN—FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-728 — (SEQIDNO: 397)
EVOLLESGGG LVAOPGGSLRL SCAASGFTFE RYEMLWVRQA PGKGLEWVSR ISHSGRTTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAQLD GP-—-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-729 — (SEQIDNO: 398)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKMP QGTSDWYY—FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-73 (SEQ ID NO: 399)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS KYDMSWVROA PGKGLEWVST ILEDGLTTIYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKPG RL———- FDYWGOGTLV TVSS BMS2h-74 (SEQ ID NO: 400)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFS DYPMTWVROA PGKGLEWVST ILSPGTETYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKAE KD——-—- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-741 — (SEQIDNO:401)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFE GGEMGWVRQA PGKGLEWVSM IPMDGSATYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKAG EV-----— FDYWGOGTLV TVSS BMS2h-742 — (SEQIDNO: 402)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFR EYHMKWARQA PGKGLEWVSG ISRDGMNTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAIQL AL———- FDYWGOQGTLV TVSS BMS2h-743 — (SEQIDNO: 403)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFR DYEMLWARQA PGKGLEWVSG ILPSGGATYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKAG SGNGPIL--- FDOYWGOGTLV TVSS BMS2h-744 — (SEQIDNO: 404)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFK EHDMFWVRQA PGKGLEWVSG IGAEGVWTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEPT MSNGSQSR—FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-745 — (SEQIDNO: 405)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFD NTEMAWVROA PGKGLEWVSG IIEDGNRTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKIR NLHWDVGROQ- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-745-1 — (SEQID NO: 406)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFD NTEMAWVRQA PGKGLEWVSG ITEDGNRTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKIR NLHWDVGRQ- FDYWGOQOGTLV TVSS BMS2h-745-10 (SEQID NO: 407)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFD NTEMAWVROA PGKGLEWVSG ITEDGNRTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNNLRAED TAVYYCAKIR NLHWDVGROQ- FDYWGOQGTLV TVSS BMS2h-745-11 — (SEQID NO: 408)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFD NTEMAWIRQA PGKGLEWVSG ITEDGNRTYY ADSVKGRFTI SRDNFKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKIR NLHWDVGROQ- FDYWGOGTLV TVSS BMS2h-745-12º (SEQID NO: 409)
ADSVKGRFTI SRDONSMNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKIR NLHWDVGROQ- FVYYWGQOGTLV TVSS BMS2h-745-13 — (SEQID NO: 410)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFD NTEMAWIROA PGKGLEWVSG IEDGNRTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKIR NLHWDVGROQ- FDYWGOGTLV TVSS BMS2h-745-14 — (SEQID NO: 411)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFD NTEMAWIROA PGKGLEWVSG ITEDGNRTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKIR NLHWDVGRQ- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-745-15— (SEQID NO: 412)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFD NTEMAWIRQA PGKGLEWVSG ITEDGNRTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNALY LOMNSLRAED TAVYYCAKIR NLHWDVGROQ- FDYWGLGTLV TVSS BMS2h-745-16 — (SEQID NO: 413)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFD NTEMAWVROA PGKGLEWVSG ITEDGNRTYY ADSVKGRFTI SRDNTKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKIR NLHWDVGROQ- FVYYWGQGTLV TVSS BMS2h-745-17 — (SEQID NO: 414)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFD NTEMAWIROA PGKGLEWVSG IEDGNRTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNRLY LQMNSLRAED TAVYYCAKIR NLHWDVGROQ- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-745-18 — (SEQID NO: 415)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFD NTEMAWVROA PGKGLEWVSG ITEDGNRTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYHCAKIR NLHWDVGROQ- FDYWGOQOGTLV TVSS BMS2h-745-19 — (SEQID NO: 416)
EVOLLESGGG LVQPEGSLRL SCAASGFTFD NTEMAWVRQA PGKGLEWVSG IIEDGNRTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKIR NLHWDVGROQ- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-745-2º — (SEQ1D NO: 417)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFD NTEMAWVRQA PGKGLEWVSG ISEDGNRTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED SAVYYCAKIR NLHWDVGRO- FVYYWGOQOGTLV TVSS BMS2h-745-3 — (SEQIDNO: 418)
EVOLLESGGG LVEPGGSLRL SCAASGFTFD NTEMAWVROA PGKGLEWVSG ITEDGNRTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMSSLRAED TAVYYCAKIR NLHWDVGROQ- FDYWGOGTLV TVSS BMS2h-745-4 — (SEQIDNO: 419)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFD NTEMAWVRQA PGKGLEWVSG ISEDGNRTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYHCAKIR NLHWDVGROQ- FDYWGOGTLV TVSS BMS2h-745-5"— (SEQIDNO: 420)
ADSVKGRFII SRDONSKNTLN LOMNSLRAED TAVYYCAKIR NLHWDVGROQ- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-745-6 — (SEQIDNO: 421)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFD NTEMAWIRQA PGRGLEWVSG VTEDGNRTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKIR NLHWDVGROQ- FDYWGOGTLV TVSS BMS2h-745-7/— (SEQID NO: 422)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCEASGFTFD NTEMAWIROA PGKGLEWVSG IIEDGNRTYY ADSVKGRFTI SRDNTKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKIR NLHWDVGROQ- FDYWGOQGTLV TVSS BMS2h-745-8 — (SEQID NO: 423)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFD NTEMAWIRQA PGKGLEWVSG ITEDGDRTYY ADSVKGRFTI SRDNSKSSLY LOMNSLRAED TAVYYCAKIR NLHWDVGROQ- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-745-9 — (SEQID NO: 424)
EVOLLESGGG SVOPGGSLRL SCAASGFTFD NTEMAWVRQA PGKGLEWVSG ITEDGNRTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKIR NLHWDVGROQ- FVYYWGOGTLV TVSS BMS2h-746 — (SEQIDNO: 425)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFG SAEMGWVROA PGKGLEWVSG ISRPGQVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKIR NLHWDVGROQ- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-747 — (SEQIDNO: 426)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFD DGTMGWAROA PGKGLEWVSL ILPSGSRTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKHS LTNRP---- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-748 — (SEQIDNO: 427)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFS KYDMRWAROQA PGKGLEWVSD IDAVGTRTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAIPG GT------- FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-749 — (SEQIDNO: 428)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFE MYGMMWARQA PGKGLEWVSS IEGAGHATYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAIVL GM------- FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-75 (SEQ ID NO: 429)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKLF EGSRIQRDVG FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-750 — (SEQID NO: 430)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFE KYQMGWARQA PGKGLEWVSS IRGSGLVTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKVH TTLHTEVIG- FDYWGOGTLV TVSS BMS2h-751 — (SEQIDNO: 431)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAISG LH----—- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-752 — (SEQIDNO: 432)
EVOLLESGGG LVOQPGGSLRL SCAASGFTFS DYAMAWVRQA PGKGLEWVSR IGVEGGDTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKLL RLYRLG-- FDYWGOQGTLV TVSS BMS2h-753 — (SEQIDNO: 433)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFA KYDMTWVRQA PGKGLEWVSK INSDGGLTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKGL HGRGFVI--- FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-754— (SEQIDNO: 434)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKDY SVAPHGYPLG FDYWGOGTLV TVSS BMS2h-755 — (SEQID NO: 435)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFK DYSMMWVRQA PGKGLEWVST ITDNGTSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKHM SLATYLQF—FDYWGOGTLV TVSS BMS2h-758/ — (SEQID NO: 436)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFM EYDMLWVRQA PGKALEWVSR ISSDGLWTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKGV SALAPFDIG- FDYWGOQGTLV TVSS BMS2h-757" — (SEQID NO: 437)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFK EYNMAWVROA PGKGLEWVSS INFAGRTTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKLS LPLDIFS-- FDYWGOQOGTLV TVSS BMS2h-758 — (SEQIDNO: 438)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFG DYGMNWVRQA PGKGLEWVSH ISSNGRFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAETS GY-——— FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-758-1 — (SEQID NO: 439)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFG DYGMNWVRQA PGKGLEWVSH ISSNGRFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNMLY LRMNSLRAED TAVYYCAETS GY----—- YEYWGQGTLV TVSS BMS2h-758-2º — (SEQID NO: 440)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFG DYGMNWVROA PGKGLEWVSH ISSNGRFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAETS GY-—-— FEYWGOQGTLV TVSS BMS2h-758-3 — (SEQIDNO: 441)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFG DYGMNWVRQA PGKGLEWVSH ISSNGRFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAETS SY—-—- FEYWGQGTLV TVSS BMS2h-758-4 — (SEQIDNO: 442)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLF LOMNSLRAED TAVYYCAETS GY---—- YEYWGHGTLV TVSS BMS2h-758-5 — (SEQIDNO: 443)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFAFG DYGMNWVROA PGKGLEWVSH ISSNGRFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAETS GY-—-— FEYWGQOGTLV TVSS BMS2h-758-6 — (SEQIDNO: 444)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFG DYGMNWVRQA PGKGLEWVSH ISSNGRFIYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAETS GY-——- FEYWGQGTLV TVSS BMS2h-759 — (SEQIDNO: 445)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFR EYVMGWVROA PGKGLEWVST INGLGNVTIYY ADSVKGRFTI SRDNTKNTLY LOMNSLRAEE TAVYYCAIQL PN----—- FDYWGOQGTLV TVSS BMS2h-760 — (SEQID NO: 446)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFG NDGMWWVRQA PGKGLEWVSF INVDGRETYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAEWS PGRVQ--— FDYWGOGTLV TVSS BMS2h-761 — (SEQIDNO: 447)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFG GWDMAWVRQA PGKGLEWVSS IAHEGGETYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKYV PGSPL--— FDYWGORTLV TVSS BMS2h-762 — (SEQIDNO: 448)
EVOLLESGGG LVOQPGGSLRL SCAASGFTFD QGWMYWVRQA PGKGLEWVSG IGSNGPRTSY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKSG EY------ FDYWGOGTLV TVSS BMS2h-763 — (SEQIDNO: 449)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFR QSDMWWVROA PGKGLEWVSV IGNNGEFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKDN WLL-—-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-764 — (SEQIDNO: 450)
EVOLLESGGG LVQOPGGSLRL SCAASGFTFD LSTMYWVRQA PGKGLEWVST IGGDGSHTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEGT QY----- FDYWGOGTLV TVSS BMS2h-765 — (SEQIDNO: 451)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFS AYTMEWVROA PGKGLEWVSS IGVTGYDTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKGG QG----- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-766 — (SEQID NO: 452)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEDL SSLQYGVSPN FDYWGOQOGTLV TVSS BMS2h-767/— (SEQIDNO: 453)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKMI QSPLFKD-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-768 — (SEQIDNO: 454)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFE WYDMYWVRQA PGKGLEWVSR IDSGGNQTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEAS LWKWRL--- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-77 (SEQ ID NO: 455)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFE EYGMAWVROA PGKGLEWVST ISPLGISTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKHA TSQESLRS—FDYWGOQGTLV TVSS BMS2h-770 — (SEQIDNO: 456)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFS KYEMMWVROA PGKGLEWVSA ISGSGGSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKGP LPDAFWTRG- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-771 — (SEQIDNO: 457)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFG TYSMAWVROQA PGKGLEWVST IDRHGLATYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKTP GSSWOTV-- FGYWGQGTLV TVSS BMS2h-772 — (SEQIDNO: 458)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFE SYPMGWVROA PGKGLEWVSS IDHHGHSTYY ADSAKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKLL RVSMIFG--- FDYWGOGTLV TVSS BMS2h-773 — (SEQIDNO: 459)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFV QYGMSWVRQA PGKGLEWVSW ISSSGTYTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAETS RM-——-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-774 — (SEQIDNO: 460)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFR EYDMGWVRQA PGKGLEWVSL ISPPGRTTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKVV ILGYTNR--- FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-775 — (SEQIDNO: 461)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKFF RLNDHNSVFG FDYWGOQGTLV TVSS BMS2h-776 — (SEQIDNO: 462)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFK DYKMMWIRQA PGKGLEWVSS IVGSGSMTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKGP GY---—- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-777/— (SEQIDNO: 463)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFH NYAMGWVRRA PGKGLEWVSS IDEHGTITYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKDS LDRVWI---- FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-778 — (SEQIDNO: 464)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKLY HREPILFG—FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-78 (SEQ ID NO: 465)
EVOLLESGGG LVOQPGGSLRL SCAASGFTFE RYQMAWVROA PGKGLEWVST ISSDGGGTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKPG HR-------- FDOYWGQGTLV TVSS BMS2h-780 — (SEQID NO: 466)
EVOLLESGGG LVOQPGGSLRL SCAASGFTFG SYTMMWVRQA PGKGLEWVSE IDRTGERTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAEPG FASLP—--- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-781 — (SEQIDNO: 467)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFT DYTMYWVRQA PGKGLEWVSK ISPSGRSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKDP FG-------- FOYWGQGTLV TVSS BMS2h-782 — (SEQID NO: 468)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFD DAEMFWVRQA PGKGLEWVSS IDARGLTTYY ADPVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAEAT SAMYP--- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-783 — (SEQIDNO: 469)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFR DYDMGWVRQA PGKGLEWVST ISPLGHFTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKSG FHEYTEG-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-784 — (SEQIDNO: 470)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFD RAGMGWVROA PGKGLEWVSL IGRGGDITYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKIR NLHWDVGRQ- FDYWGQOGTLV TVSS BMS2h-80 (SEQ ID NO: 471)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFG RYQMAWVROQA PGKGLEWVSS ISSDGGGTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKPS RR---—-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-81 (SEQ ID NO: 472)
EVOLLESGGG LVOPGGFLRL SCAASGFTFE LYPMAWVRQA PGKGLEWVSS ISPVGFLTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKGH EGSYTPRSA- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-82 (SEQ ID NO: 473)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFV AYPMAWVROA PGKGLEWVST IAPLGGNTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKRP EGLQIDSQN- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-83 (SEQ ID NO: 474)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFA LYQMAWVRQA PGKGLEWVSS IDSSGSDTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKPE RD---—-- FDYWGOGTLV TVSS BMS2h-84 (SEQ ID NO: 475)
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKVG RD---—-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-85 (SEQ ID NO: 476)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFE QYDMRWVRQA PGKGLEWVSW IDEAGHETYY ADSVKGRFTI SRONSRNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKGM DG-—--- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-92 (SEQ ID NO: 477)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFV DYPMGWVRQA PGKGLEWVST ISTGGFSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKAR YYYLSQIKN- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-93 (SEQ ID NO: 478)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFD IYGMTWVROA PGKGLEWVSS ISPLGLVTIYY ADPVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKLK EHGDVP---- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-94 (SEQ ID NO: 479)
EVOLLESGGG LVAQPGGSLRL SCAASGFTFE LYPMSWVRQA PGKGLEWVST ISPTGLLTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKFK RSGKTDDTN- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-95 (SEQ ID NO: 480)
EVOLLESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFTFR EYDMLWVROA PGKGLEWVST IVGDGNGTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKQD RQ---—-- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-97 (SEQ ID NO: 481)
EVOLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFE EYGMSWVRQA PGKGLEWVST ISPIGVTTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKNA YDRKSN--- FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-98 (SEQ ID NO: 482)
ADSVKGRFTI SRDNSKDTLY LOMNSLRAED TAVYYCAKVL GRHFDPLLPS FDYWGQGTLV TVSS BMS2h-99 (SEQ ID NO: 483)
TABELA 2 Sequências de Nucleotídeos Que Codificam o Domínio VH do Anti- CD40L Humano BMS2h-10 (SEQ ID NO: 484)
CCTGAGGAGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-11 (SEQID NO: 485)
AGGAGTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-111 (SEQ ID NO: 486)
ACCGTCTCGAGC BMS2h-112 (SEQ ID NO: 487)
GTCTCGAGC BMS2h-113 (SEQ ID NO: 488)
GTCTCGAGC BMS2h-114 (SEQ ID NO: 489)
GTCTCGAGC BMS2h-115 (SEQ ID NO: 490)
AGC BMS2h-12 (SEQ1ID NO: 491)
TCGTGGCAGGGTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-120 (SEQ ID NO: 492)
GTCTCGAGC BMS2h-121 (SEQ ID NO: 493)
GTCTCGAGC BMS2h-123 (SEQ ID NO: 494)
GAGTCTAGTACTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-124 (SEQ ID NO: 495)
ACCGTCTCGAGC BMS2h-125 (SEQ ID NO: 496)
ACCGTCTCGAGC BMS2h-126 (SEQ ID NO: 497)
GTCTCGAGC BMS2h-127 (SEQ ID NO: 498)
ACCGTCTCGAGC BMS2h-128 (SEQ ID NO: 499)
ACTGTTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-129 (SEQ ID NO: 500)
CCAGGGAAGGGTCTAGAGTGGGTCTCATCTATTGATGGTGATGGTAAGTCTACATACTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCCcCGCGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
CAGTTTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-13 (SEQID NO: 501)
GTCTCGAGC BMS2h-130 (SEQ ID NO: 502)
CCAGGGAAGGGTCTAGAGTGGGTCTCAAGTATTACTAATGAGGGTGTTTCTACATACTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCECCcGCGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
AAGTATTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-131 (SEQ ID NO: 503)
BMS2h-132 (SEQ ID NO: 504)
GTTGCTTTTGACTACTGGGGTCAGGGGACCCTGGTCACCGTCTCGAAC BMS2h-133 (SEQ ID NO: 505)
GTCTCGAGC BMS2h-134 (SEQ ID NO: 506)
CCAGGGAAGGGTCTAGAGTGGGTCTCATCTATTACTAGTGATGGTGTTTCTACATACTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCECCcGCGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
GTTCAGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-135 (SEQ ID NO: 507)
CCAGGGAAGGGTCTAGAGTGGGTCTCATGGATTGAGGCTGATGGTCGTACGACATACTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCCeGCGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
AGC BMS2h-136 (SEQ ID NO: 508)
GGGATGCAGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-137 (SEQ ID NO: 509)
TCGCCTTATAAGCCGCAGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-138 (SEQ ID NO: 510)
GAGCCGGGGTTGGGTTCTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-139 (SEQ ID NO: 511)
GATAGTTCGATTGGGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-14 (SEQID NO: 512)
CGGGATTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-15 (SEQ ID NO: 513)
TTGATTATTCTTCCTGATTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-16 (SEQ ID NO: 514)
GTCTCGAGC BMS2h-17 (SEQ ID NO: 515)
GACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-176 (SEQ ID NO: 516)
CCAGGGAAGGGTCTAGAGTGGGTCTCAATTATTGATTGGGATGGTAATTCTACATACTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCCoGCGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
GATAATGTTGGTATTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-177 (SEQ ID NO: 517)
TCGAGC BMS2h-178 (SEQ ID NO: 518)
CCAGGGAAGGGTCTAGAGTGGGTCTCATCTATTAATGATCAGGGTTCTCTGACATACTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTECoGCGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
CAGTTTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-179 (SEQ ID NO: 519)
BMS2h-18 (SEQ1D NO: 520)
GGGAGTCCGCGGGAGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-180 (SEQ ID NO: 521)
CGTATTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-181 (SEQ ID NO: 522)
GTCTCGAGC BMS2h-182 (SEQ ID NO: 523)
TCGAGC BMS2h-183 (SEQ ID NO: 524)
AATTCTCGTAGGGGTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-184 (SEQ ID NO: 525)
AAGGATTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-185 (SEQ ID NO: 526)
CCAGGGAAGGGTCTAGAGTGGGTCTCATCGATTGGTAGGCTGGGTAATCGTACATACTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCECCcGCGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
TCGAGC BMS2h-186 (SEQ ID NO: 527)
TCGTTGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-187 (SEQ ID NO: 528)
CCAGGGAAGGGTCTAGAGTGGGTCTCAGGTATTAATCEGGGGTGGTACTCGTACATACTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCCcGCGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
AGGAGGGGGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-188 (SEQ ID NO: 529)
ACTGCGTCGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-189 (SEQ ID NO: 530)
GAGCAGCCTTGGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-19 (SEQID NO: 531)
CCTCTTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-190 (SEQ ID NO: 532)
GCTATGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-191 (SEQ ID NO: 533)
TGGGATTATCTGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-192 (SEQ ID NO: 534)
CAGGCGCCETTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-193 (SEQ ID NO: 535)
BMS2h-194 (SEQ ID NO: 536)
ACTGGTAGGTATTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-195 (SEQ ID NO: 537)
GTCTCGAGC BMS2h-196 (SEQ ID NO: 538)
ACTGCGTTTGACTACTGGGGTCCGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-197 (SEQ ID NO: 539)
ATGACTCCGTTTGACTACTGGGETCAGGGAACCCTGETCACCGTCTCGAGC BMS2h-198 (SEQ ID NO: 540)
TCGAGC BMS2h-199 (SEQ ID NO: 541)
AGTCGGTATGTTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-2 (SEQ ID NO: 542)
AGGTTTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-20 (SEQ ID NO: 543)
CGTAGGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-200 (SEQ ID NO: 544)
TCTGCGCATCTTCAGAGGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGETCACCGTCTCGAGC BMS2h-201 (SEQ ID NO: 545)
AGTACTTATCCTAGGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-202 (SEQ ID NO: 546)
CCTCAGGGTTCTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-203 (SEQ ID NO: 547)
ACCGTCTCGAGC BMS2h-204 (SEQ ID NO: 548)
GTCTCGAGC BMS2h-205 (SEQ ID NO: 549)
AGGGGTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-206 (SEQ ID NO: 550)
GTGTTGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-207 (SEQ ID NO: 551)
BMS2h-208 (SEQ ID NO: 552)
AAGCTTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-209 (SEQ ID NO: 553)
GAGCGGGATGATTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-21 (SEQ1D NO: 554)
GGTGGGACTCAGTATGAGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-22 (SEQID NO: 555)
GTTAAGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-23 (SEQID NO: 556)
AGGAAGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-24 (SEQID NO: 557)
AAGAATTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-24-1 (SEQ ID NO: 558)
AAGAATTTCGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-25 (SEQ ID NO: 559)
CGTTCTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-26 (SEQ ID NO: 560)
AAGACGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-27 (SEQ ID NO: 561)
TCTCCGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-28 (SEQID NO: 562)
BMS2h-29 (SEQID NO: 563)
CGGGCGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-30 (SEQID NO: 564)
AAGTTGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-300 (SEQ ID NO: 565)
AAGGAGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-301 (SEQ ID NO: 566)
AAGGATTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-302 (SEQ ID NO: 567)
GCGGGTGCTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-303 (SEQ ID NO: 568)
AAGGATTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-304 (SEQ ID NO: 569)
CAGGCTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-31 (SEQ1D NO: 570)
CTTTATTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGETCACCGTCTCGAGC BMS2h-32 (SEQID NO: 571)
CCGGAGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-4 (SEQ ID NO: 572)
CEGCCETTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-40 (SEQID NO: 573)
BMS2h-400 (SEQ ID NO: 574)
AGC BMS2h-401 (SEQ ID NO: 575)
GTCTCGAGC BMS2h-402 (SEQ ID NO: 576)
GTCTCGAGC BMS2h-403 (SEQ ID NO: 577)
TCGAGC BMS2h-404 (SEQ ID NO: 578)
BMS2h-407 (SEQ ID NO: 579)
TGGAATGGTGTGGATCTGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-408 (SEQ ID NO: 580)
AGTAATATGTCGTTTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-409 (SEQ ID NO: 581)
AATAGGTCTGAGGTTTTTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-41 (SEQ ID NO: 582)
CGEGCAGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-410 (SEQ ID NO: 583)
CCGETATTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-411 (SEQID NO: 584)
GTCTCGAGC BMS2h-412 (SEQ ID NO: 585)
ATTTATGGGGATTATTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-413 (SEQ ID NO: 586)
GTCTCGAGC BMS2h-414 (SEQ ID NO: 587)
GTCTCGAGC BMS2h-415 (SEQ ID NO: 588)
AATATTTATGGTCCTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-416 (SEQ ID NO: 589)
CCTTATTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-417 (SEQ ID NO: 590)
AGC BMS2h-418 (SEQ ID NO: 591)
TGGAATGGTGTGGATCTGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-419 (SEQ ID NO: 592)
CATGATGAGGGGTATTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-42 (SEQ ID NO: 593)
CGGGTTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-420 (SEQ ID NO: 594)
BMS2h-421 (SEQ ID NO: 595)
AATGATCAGGGGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-422 (SEQ ID NO: 596)
ATGATGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-423 (SEQ ID NO: 597)
AGGTCATTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-424 (SEQ ID NO: 598)
TTGACTTCGCATTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-425 (SEQ ID NO: 599)
CAGGCGGTTACTCGGTCTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGETCACCGTCTCGAGC BMS2h-426 (SEQ ID NO: 600)
GGGATGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-427 (SEQ ID NO: 601)
GTCTCGAGC BMS2h-428 (SEQ ID NO: 602)
CCTTTTATTACTACGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTGACCGTCTCGAGC BMS2h-429 (SEQ ID NO: 603)
TATTCGCTTCGTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-43 (SEQID NO: 604)
AGGGCTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-430 (SEQ ID NO: 605)
ACCGTCTCGAGC BMS2h-44 (SEQ ID NO: 606)
TTTACTGAGCTTGGTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-449 (SEQ ID NO: 607)
CCAGGGAAGGGTCTAGAGTGGGTCTCAACGATTACGCTGCCTGGTCCGTATACATTCTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCCcGCGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
GGGACGTTTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-45 (SEQID NO: 608)
ACGATGGATTATGAGAGGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-450 (SEQ ID NO: 609)
CCAGGGAAGGGTCTGGAGTGGGTCTCAGCTATTGGTAATAATGGTCTTAAGACATACTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCECcGCGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
AGC BMS2h-451 (SEQ ID NO: 610)
BMS2h-452 (SEQ ID NO: 611)
CCTTATCEGGCGGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-453 (SEQ ID NO: 612)
GGTTATAATGCGCAGTATTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-454 (SEQ ID NO: 613)
TATTCGCTTCGTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-455 (SEQ ID NO: 614)
CCAGGGAAGGGTCTAGAGTGGGTCTCAACTATTAGTTCGCATGGTGATAGTACATACTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCCcGCGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
GTTTTTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-456 (SEQ ID NO: 615)
GATTCTTTTGACTACAGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-457 (SEQ ID NO: 616)
TCTCAGGTTGAGTATTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-458 (SEQ ID NO: 617)
AAGCATGGTACTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-459 (SEQIDNO: 618)
AAGGGTACTAAGCAGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-46 (SEQ1D NO: 619)
TCGAGC BMS2h-460 (SEQ ID NO: 620)
GTTGAGTGGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-461 (SEQ ID NO: 621)
BMS2h-462 O (SEQ ID NO: 622)
TGGCGGACTCTTACTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-463 (SEQ ID NO: 623)
CGGGGTGCGAATTTTITTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-464 (SEQ ID NO: 624)
CCAGGGAAGGGTCTGGAGTGGGTCTCATCTATTACGCCTCATGGTACGAGTACATACTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCECcGCGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
GCTATTTTTAGTGAGGCGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-465 (SEQ ID NO: 625)
CCAGGGAAGGGTCTAGAGTGGGTCTCAACTATTACTCCGTCGGGTCTTACGACATACTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCCeGCGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
CAGGCGGTTACTCGGTCTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-466 (SEQ ID NO: 626)
GGTTCGCTGAGGGETCGTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-467 (SEQ ID NO: 627)
TGGGGTGTTGAGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-468 (SEQ ID NO: 628)
TATATTTATCATAGTCTGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-469 (SEQ ID NO: 629)
CATCCGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-470 (SEQ ID NO: 630)
CCGACTGGTTTTGACTACTGGGETCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-471 (SEQ ID NO: 631)
TATGATTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-472 (SEQ ID NO: 632)
BMS2h-473 (SEQID NO: 633)
TATTTGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-474 (SEQ ID NO: 634)
CTGGTGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-475 (SEQ ID NO: 635)
CCGTCTAATCAGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-476 (SEQ ID NO: 636)
CCTTTTATTAGTACGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGEGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-477 (SEQ ID NO: 637)
AGTGCTATTACTGGTAATTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-478 (SEQ ID NO: 638)
GTCTCGAGC BMS2h-479 (SEQ ID NO: 639)
AGC BMS2h-480 (SEQ ID NO: 640)
AGTACGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-481 (SEQ ID NO: 641)
TCGCCGGCECAGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-482 (SEQ ID NO: 642)
AGC BMS2h-483 (SEQ ID NO: 643)
CCGCCTTCGTCTCATTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-5 (SEQ ID NO: 644)
CTGCGTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-505 (SEQ ID NO: 645)
GAGCTTCCTCGTCTGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-506 (SEQ ID NO: 646)
GTCTCGAGC BMS2h-507 (SEQ ID NO: 647)
GTCTCGAGC BMS2h-515 (SEQ ID NO: 648)
CGTGATCTGGETTTTGCCTACTGGGETCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-516 (SEQ ID NO: 649)
AAGACTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-517 (SEQ ID NO: 650)
ATGCGTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-518 (SEQ ID NO: 651)
ACCGTCTCGAGC BMS2h-519 (SEQ ID NO: 652)
CCGAAGGGTATTGCGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-520 (SEQ ID NO: 653)
CCTCCEGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-521 (SEQ ID NO: 654)
ACTGGGTATACTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-522 (SEQ ID NO: 655)
CGGCTTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-523 (SEQ ID NO: 656)
CTGCCGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-524 (SEQ ID NO: 657)
GGTGCTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-525 (SEQ ID NO: 658)
TTGCGTAAGATGGAGAAGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-526 (SEQ ID NO: 659)
AAGAATTTTGACCACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-527 (SEQ ID NO: 660)
AATCTGTATACGGAGTCTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-528 (SEQ ID NO: 661)
GGTCAGGGTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-529 (SEQ ID NO: 662)
GCGCTTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-530 (SEQ ID NO: 663)
GATGAGCGTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-531 (SEQ ID NO: 664)
GGETCAGGGGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-532 (SEQ ID NO: 665)
CATACGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-533 (SEQ ID NO: 666)
GTCTCGAGC BMS2h-534 (SEQ ID NO: 667)
TCGAGC BMS2h-535 (SEQ ID NO: 668)
CATTCGTTGGGGCCTCTTTTTGACTACTGGGETCAGGGAACCCTGETCACCGTCTCGAGC BMS2h-54 (SEQID NO: 669)
GTCTCGAGC BMS2h-55 (SEQ ID NO: 670)
GTCTCGAGC BMS2h-553 (SEQ ID NO: 671)
CCAGGGAAGGGTCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAGTCATAATGGTATGTTGACATACTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCECCcGCGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
TCGAGC BMS2h-554 (SEQ ID NO: 672)
GGTCAGGGGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-555 1 (SEQ ID NO: 673)
CCAGGGAAGGGTCTAGAGTGGGTCTCATGTATTGATAATCTGGGTAGTCCTACATACTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCCcGCGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
TCTCATCAGTATGATAGGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-556 (SEQ ID NO: 674)
CCGCATAAGCAGTTGTCGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-557 (SEQ ID NO: 675)
ACGGCTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-558 (SEQ ID NO: 676)
ATGTCTCTTATTGAGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-559 (SEQ ID NO: 677)
AGC BMS2h-56 (SEQ ID NO: 678)
GTCTCGAGC BMS2h-560 (SEQ ID NO: 679)
CTGATTAGTCCTGGTCTTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-561 (SEQ ID NO: 680)
ACGAGGGGGGTGCCTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-562 (SEQ ID NO: 681)
CAGCATGCTCATGATCCTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-563 (SEQ ID NO: 682)
TTGACTGAGCCTATGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-564 (SEQ ID NO: 683)
GAGGCTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-565 (SEQ ID NO: 684)
GCTTCGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-566 (SEQ ID NO: 685)
GGTAATACTTCGGATTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-567 (SEQ ID NO: 686)
CCGCGTGATGAGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-568 (SEQ ID NO: 687)
GATCCGAATGGTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-569 (SEQ ID NO: 688)
GATTGGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-57 (SEQ1D NO: 689)
CTGAAGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-570 (SEQ ID NO: 690)
TCTTGGTCTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-571 (SEQ ID NO: 691)
CCTGGTAATAGGTATTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-572 (SEQ ID NO: 692)
AAGGAGAGTAATTTTGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-572-1 (SEQ ID NO: 693)
AAGGAGAGTAATTTTGACTACCGGGGTCAGGGGACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-572-10 (SEQ ID NO: 694)
AAGGAGAGTAATTCTGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-572-11 (SEQ ID NO: 695)
AAGGAGAGTAATTCTGACTACCGGGGTCAGGGAACCCAGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-572-12 (SEQ ID NO: 696)
AAGGAGAGTAATTCTGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-572-13 (SEQ ID NO: 697)
AAGGAGAGTAATTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-572-14 (SEQ ID NO: 698)
AAGGAGAGTAATTCTGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-572-15 (SEQ ID NO: 699)
AAGGAGAGTAATTCTGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-572-16 (SEQ ID NO: 700)
AAGGAGAGTAATTTTGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-572-17 (SEQ ID NO: 701)
AAGGAGAGTAATTTTGACTACCGGGGTCACGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-572-18 (SEQ ID NO: 702)
AAGGAGAGTAATTTTGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-572-19 (SEQ ID NO: 703)
AAGGAGAGTAATTTTGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-572-2 (SEQ ID NO: 704)
AAGGAGAGTAAGTTTGACTACCTGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-572-21 (SEQ ID NO: 705)
AAGGAGAGTAATCTTGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-572-22 (SEQ ID NO: 706)
AAGGAGAGTAATTCTGACTACCGGGGTCAGGGGACCCTEGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-572-23 (SEQ ID NO: 707)
AAGGAGAGTAATTCTGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-572-24 (SEQ ID NO: 708)
AAGGAGAGTGAATTTGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-572-3 (SEQ ID NO: 709)
AAGGAGAGTAATCTTGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-572-4 (SEQ ID NO: 710)
AAGGAGAGTAATTTTGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-572-5 (SEQ ID NO: 711)
AAGGAGAGTAATTTTGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-572-6 (SEQ ID NO: 712)
AAGGAGAGTAATTCTGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTATCGAGC BMS2h-572-601 (SEQID NO: 713)
AAGGAGAGTAATTCTGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTATCGAGC BMS2h-572-602 (SEQ ID NO: 714)
AAGGAGAGTAGTTCTGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTATCGAGC BMS2h-572-603 (SEQ1D NO: 715)
AAGGAGAGTAATTCTGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTATCGAGC BMS2h-572-604 (SEQ ID NO: 716)
AAGGAGAGTAATTCTGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTATCGAGC BMS2h-572-605 (SEQ ID NO: 717)
AAGGAGAGTAATTCTGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTATCGAGC BMS2h-572-606 (SEQ1ID NO: 718)
AAGGAGAGTAATTCTGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTATCGAGC BMS2h-572-607 (SEQ1D NO: 719)
AAGGAGAGTAATTCTGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTATCGAGC BMS2h-572-608 (SEQ ID NO: 720)
AAGGAGAGTAATTCTGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTATCGAGC BMS2h-572-609 (SEQ ID NO: 721)
CCAGGGAAGGGTCTAGAGTGGGTCTCAGGTATTGAGGGTCCAGGTGATGTTACATACTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCCeGCGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
AAGGAGAGTAATTCTGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTATCGAGC BMS2h-572-610 (SEQID NO: 722)
CCAGGGAAGGGTCTAGAGTGGGTCTCAGGTATTGAGGGTCCAGGTGATGTTACATACTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCcGCGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
AAGGACAGCAAGTCCGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTATCGAGC BMS2h-572-611 (SEQID NO: 723)
AAGGACAGCAAGTCGGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTATCGAGC BMS2h-572-612 (SEQID NO: 724)
CCAGGGAAGGGTCTAGAGTGGGTCTCAGGTATTGAGGGTCCAGGTGATGTTACATACTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTECCoGCGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
AAGGACAGCAACTCGGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTATCGAGC BMS2h-572-613 (SEQID NO: 725)
AAGGACAGCAAGTCCGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTATCGAGC BMS2h-572-614 (SEQ ID NO: 726)
AAGGACGCCAAGTCGGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTATCGAGC BMS2h-572-615 (SEQ ID NO: 727)
AAGGACAAGAACTCGGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTATCGAGC BMS2h-572-616 (SEQID NO: 728)
AAGGAGAGCAAGTCCGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTATCGAGC BMS2h-572-617 (SEQ ID NO: 729)
AGGGACAGCAAGTCGGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTATCGAGC BMS2h-572-618 (SEQ ID NO: 730)
AAGTACAGCAACTCGGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTATCGAGC BMS2h-572-619 (SEQID NO: 731)
AAGGACAGCAGGTCGGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTATCGAGC BMS2h-572-620 (SEQ ID NO: 732)
CCAGGGAAGGGTCTAGAGTGGGTCTCAGGTATTGAGGGTCCAGGTGATGTTACATACTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCCeGCGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
AAGGACGACAGCTCGGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTATCGAGC BMS2h-572-621 (SEQID NO: 733)
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AAGGACAGCACCTCGGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTATCGAGC BMS2h-572-623 (SEQID NO: 735)
CCAGGGAAGGGTCTAGAGTGGGTCTCAGGTATTGAGGGTCCAGGTGATGTTACATACTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTECCoGCGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
AAGGAGAGCAGCTCGGACTACCGGGETCAGGGAACCCTGGTCACCGTATCGAGC BMS2h-572-624 (SEQID NO: 736)
AAGGACAGCGCGTCCGACTACCGGGETCAGGGAACCCTGEGTCACCGTATCGAGC BMS2h-572-625 (SEQ ID NO: 737)
AACGACAGCTACTCGGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTATCGAGC BMS2h-572-626 (SEQ ID NO: 738)
AAGGACAGCAGCTCGGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTATCGAGC BMS2h-572-627 (SEQID NO: 739)
AAGGACAGCGCGTCGGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTATCGAGC BMS2h-572-630 (SEQ ID NO: 740)
AAGGACGCCAAGTCGGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTATCGAGC BMS2h-572-631 (SEQ1ID NO: 741)
AAGGACAGCAGGTCGGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTATCGAGC BMS2h-572-632 (SEQ ID NO: 742)
AAGGACAGCAAGTCCGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTATCGAGC BMS2h-572-633 (SEQID NO: 743)
CCAGGGAAGGGTCTAGAGTGGGTCTCAGGTATTGAGGGTCCAGGTGATGTTACATACTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCCeGCGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
AAGGACGCCAAGTCGGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTATCGAGC BMS2h-572-634 (SEQ ID NO: 744)
CCAGGGAAGGGTCTAGAGTGGGTCTCAGGTATTGAGGGTCCAGGTGATGTTACATACTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCcGCGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
AAGGACAGCAGGTCGGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTATCGAGC BMS2h-572-635 (SEQ ID NO: 745)
AAGGACAGCAAGTCCGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTATCGAGC BMS2h-572-7 (SEQ ID NO: 746)
AAGGAGAGTAATTTTGACTACCTGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-572-8 (SEQ ID NO: 747)
AAGGAGAGTAATTCTGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTTTCGAGC BMS2h-572-9 (SEQ ID NO: 748)
AAGGAGAGTAATTCTGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-573 (SEQ ID NO: 749)
CCGCAGTATCAGATTACATTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-574 (SEQ ID NO: 750)
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CCAGGGAAGGGTCTAGAGTGGGTCTCAACTATTTCTCEGTGGGGGTTGGTTCACATACTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCECCcGCGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
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TCGACTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-579 (SEQ ID NO: 755)
CCAGGGAAGGGTCTAGAGTGGGTCTCATCTATTTEGGGTACGGGTGGGCTTACATACTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCCcGCGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
CAGAATGCGACGCTTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-58 (SEQID NO: 756)
GTTTGGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-580 (SEQ ID NO: 757)
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CTGCTGGATTCTACTAAGTTTGACTACTGGGGETCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-582 (SEQ ID NO: 759)
AGC BMS2h-583 (SEQ ID NO: 760)
CGGGTTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-584 (SEQ ID NO: 761)
GATCGTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-586 (SEQ ID NO: 762)
AGC BMS2h-587 (SEQ ID NO: 763)
GGTACGGATTCGTCGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-588 (SEQ ID NO: 764)
CCAGGGAAGGGTCTGGAGTGGGTCTCATGTATTGGGCCGGGGGGTAAGCCTACATACTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCcGCGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
GGGCATTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-589 (SEQ ID NO: 765)
GGGGCTCETCGGCGGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-59 (SEQ ID NO: 766)
CCAGGGAAGGGTCTGGAGTGGGTCTCAACTATTTCTCCGATGGGTATGGGTACATACTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTECCoGCGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
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BMS2h-591 (SEQ ID NO: 768)
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BMS2h-596 (SEQ ID NO: 773)
TGGCCTTTTGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGATCACCGTCTCGAGC BMS2h-597 O (SEQ ID NO: 774)
CGTCCGTTTGATGAGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-598 (SEQ ID NO: 775)
TGGTCTCGGCATTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-599 (SEQ ID NO: 776)
CCAGGGAAGGGTCTAGAGTGGGTCTCAGGTATTTTGGATAATGGTAGTAATACATACTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCCoGCGACAATTCCAAGAACATGCTGTAT
AGGGATTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-600 (SEQ ID NO: 777)
CCGTGGGETTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-601 (SEQ ID NO: 778)
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GGTTATGGTGTTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-603 (SEQ ID NO: 780)
TCTGATTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-61 (SEQID NO: 781)
GGGATGCGTTGGAATTCTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-62 (SEQ ID NO: 782)
AGGAAGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-65 (SEQ ID NO: 783)
BMS2h-66 (SEQ ID NO: 784)
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GATATGCTGCTGTTTGGGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-702 (SEQ ID NO: 791)
TCTCATTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-703 (SEQ ID NO: 792)
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GTCTCGAGC BMS2h-706 (SEQ ID NO: 795)
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CAGCATCGTTTTGTTGTTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-71 (SEQ ID NO: 799)
GTCTCGAGC BMS2h-710 (SEQ ID NO: 800)
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TCTAGTTTTGACTACTGGGGTCGGEGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-713 (SEQ ID NO: 803)
GTCTCGAGC BMS2h-714 (SEQ ID NO: 804)
GATCAGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-715 (SEQ ID NO: 805)
AGTGTTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-716 (SEQ ID NO: 806)
GTCTCGAGC BMS2h-717 (SEQ ID NO: 807)
GATAATTTTACTATGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-718 (SEQ ID NO: 808)
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ACTGAGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCAGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-719-10 (SEQ ID NO: 811)
CCAGGGAAGGGTCTGGAGTGGGTCTCATCTATTTCGTCGGATGGTTCTTTTACATACTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCECCoGCGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
ACTGAGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-719-11 (SEQ ID NO: 812)
CCAGGGAAGGGTCTGGAGTGGGTCTCATCTATTTCGTCGGATGGTTCTTTTACATACTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTECoGCGACAATTCCGAGAACACGCTGTAT
ACTGAGTTTGACTATTGGGGTCAGGGTACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-719-12 (SEQ ID NO: 813)
ACTGAGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-719-13 (SEQ ID NO: 814)
ACTGAGCTTGACTACTGGGGTCATGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-719-14/ (SEQ ID NO: 815)
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ACTGAGATTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-719-16 (SEQ ID NO: 817)
CCAGGGAAGGGTCTGGAGTGGGTCTCATCTATTTCGTCGGATGGTTCTTTTACATACTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCcCGCGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
ACTGAGTTTGACTACCGGGCTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-719-17 (SEQ ID NO: 818)
ACTGAGATTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCAGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-719-18 (SEQ ID NO: 819)
CCAGGGAAGGGTCTGGAGTGGGTCTCATCTATTTCEGTCGGATGGTTCTTTTACATACTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCECcGCGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
ACTGAGTTTGACTACGGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-719-19 (SEQ ID NO: 820)
CCAGGGAAGGGTCTGGAGTGGGTCTCATCTATTTCGTCGGATGGTTCTTTTACATACTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCeGCGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
ACTGAGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-719-2 (SEQ ID NO: 821)
ACTGAGTTTGACTACTGGGGTCATGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-719-20 (SEQ ID NO: 822)
CCAGGGAAGGGTCTGGAGTGGGTCTCATCTATTTCGTCGGATGGTTCTTTTACATACTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGEGTTCACCATCTCECCoGCGACAATTCCAAGAACACTCTGTAT
ACTGAGATTGACTACCGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-719-202 (SEQ ID NO: 823)
CCAGGGAAGGGTCTGGAGTGGGTCTCATCTATTTCGTCGGATGGTTCTTTTACATACTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTECCoGCGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
ACTGAGTTTGACTACTGGGGTCATGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-719-203 (SEQID NO: 824)
ACTGAGTTTGACTACTGGGGTCATGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-719-21 (SEQ ID NO: 825)
ACTGAGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-719-213 (SEQID NO: 826)
ACGGAGATGGACTACTGGGGTCATGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-719-214 (SEQID NO: 827)
ACGGAGTTCGACTACTGGGGTCATGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-719-215 (SEQ ID NO: 828)
CCAGGGAAGGGTCTGGAGTGGGTCTCATCTATTTCGTCGGATGGTTCTTTTACATACTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCCcGCGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
ACGGAGTTGGACTACTGGGGTCATGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-719-218 (SEQID NO: 829)
ACTGAGTTTGACTACTGGGGTCATGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-719-225 (SEQ ID NO: 830)
CCAGGGAAGGGTCTGGAGTGGGTCTCATCTATTTCEGTCGGATGGTTCTTTTACATACTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGEGTTCACCATCTCECCoGCGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
ACTGAGTTTGACTACTGGGGTCATGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-719-226 (SEQID NO: 831)
CCAGGGAAGGGTCTGGAGTGGGTCTCATCTATTTCEGTCGGATGGTTCTTTTACATACTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTECoGCGACAATTCCAGGAACACGCTGTAT
ACTGAGTTTGACTACTGGGGTCATGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-719-3 (SEQ ID NO: 832)
ACTGAGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-719-4 (SEQ ID NO: 833)
ACTGAGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCAAGC BMS2h-719-5 (SEQ ID NO: 834)
ACTGAGTTTGACAACTGGGGTCAGGGAACCCTCGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-719-6 (SEQ ID NO: 835)
ACTGAGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCAGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-719-7 (SEQ ID NO: 836)
ACTGAGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-719-8 (SEQ ID NO: 837)
ACTGAGTTTGACTACAGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-719-9 (SEQ ID NO: 838)
ACTGAGTTTGACTACTGGGGTCGGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-72 (SEQID NO: 839)
ACCGTCTCGAGC BMS2h-720 (SEQ ID NO: 840)
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AGC BMS2h-723 (SEQ ID NO: 842)
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CTTCGGACGGGTCAGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-725 (SEQ ID NO: 844)
CCAGGGAAGGGTCTGGAGTGGGTCTCACTTATTGGGGATCGTGGTTCTTGGACATACTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCCcGCGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
GATCCTACTAAGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-725-1 (SEQ ID NO: 845)
GATCCTACTAAGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-725-10 (SEQ ID NO: 846)
GATCCTACTAAGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-725-11 (SEQ ID NO: 847)
CCAGGGAAGGGTCTGGAGTGGGTCTCACTTATTGGGGATCGTGGTTCTTGGACATACTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCCeGCGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
GATCCTACTAAGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-725-12 (SEQ ID NO: 848)
GATCCTACTATGTTTGTCTACTGGGGTCAGGGAACCCTTGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-725-13 (SEQ ID NO: 849)
GATCCTACTATGTTTGTCTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-725-14 (SEQ ID NO: 850)
GATCCTACTATGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-725-15 (SEQ ID NO: 851)
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GATCCTACTATGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-725-17 (SEQ ID NO: 853)
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GATCCTACTAAGTTTGTCTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-725-2 (SEQ ID NO: 856)
GGTCAGGGAACCCCGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-725-3 (SEQ ID NO: 857)
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GATCCTACTAAGTTTGTCTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-725-7 (SEQ ID NO: 861)
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GATCCTACTAAGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-725-9 (SEQ ID NO: 863)
GATCCTACTAAGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-726 (SEQ ID NO: 864)
ACGCGTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-727 (SEQ ID NO: 865)
TCGAGC BMS2h-728 (SEQ ID NO: 866)
GGTCCGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-729 (SEQ ID NO: 867)
TCGAGC BMS2h-73 (SEQID NO: 868)
CGTTTGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-74 (SEQID NO: 869)
BMS2h-741 (SEQ ID NO: 870)
GAGGTGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-742 (SEQID NO: 871)
GCTTTGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-743 (SEQ ID NO: 872)
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BMS2h-745-1 (SEQ ID NO: 875)
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GTCTCGAGC BMS2h-745-11 (SEQ ID NO: 877)
GTCTCGAGC BMS2h-745-12 (SEQ ID NO: 878)
GTCTCGAGC BMS2h-745-13 (SEQ ID NO: 879)
BMS2h-745-14 (SEQ ID NO: 880)
GTCTCGAGC BMS2h-745-15 (SEQ ID NO: 881)
GTCTCGAGC BMS2h-745-16 (SEQ ID NO: 882)
GTCTCGAGC BMS2h-745-17 (SEQ ID NO: 883)
GTTTCGAGC BMS2h-745-18 (SEQ ID NO: 884)
GTCTCGAGC BMS2h-745-19 (SEQ ID NO: 885)
GTCTCGAGC BMS2h-745-2 (SEQ ID NO: 886)
GTCTCGAGC BMS2h-745-3 (SEQ ID NO: 887)
GTCTCGAGC BMS2h-745-4 (SEQ ID NO: 888)
GTCTCGAGC BMS2h-745-5 (SEQ ID NO: 889)
GTCTCGAGC BMS2h-745-6 (SEQ ID NO: 890)
GTCTCGAGC BMS2h-745-7 (SEQ ID NO: 891)
GTCTCGAGT BMS2h-745-8 (SEQ ID NO: 892)
GTCTCCAGC BMS2h-745-9 (SEQ ID NO: 893)
GTCTCGAGC BMS2h-746 (SEQ ID NO: 894)
GTCTCGAGC BMS2h-747 (SEQ ID NO: 895)
CTGACTAATCGTCCGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-748 (SEQ ID NO: 896)
GGGACGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-749 (SEQ ID NO: 897)
GGTATGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-75 (SEQ1ID NO: 898)
ACCGTCTCGAGC BMS2h-750 (SEQ ID NO: 899)
GTCTCGAGC BMS2h-751 (SEQ ID NO: 900)
CTGCATTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-752 (SEQ ID NO: 901)
CGGCTTTATCGTCTGGEGGTTTGACTACTGEGGETCAGGGAACCCTGEGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-753 (SEQ ID NO: 902)
AGC BMS2h-754 (SEQ ID NO: 903)
ACCGTCTCGAGC BMS2h-755 (SEQ ID NO: 904)
BMS2h-756 (SEQ ID NO: 905)
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AGC BMS2h-758 (SEQ ID NO: 907)
GGTTATTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-758-1 (SEQ ID NO: 908)
GGTTATTATGAATACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-758-2 (SEQ ID NO: 909)
GGTTATTTTGAATACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-758-3 (SEQ ID NO: 910)
AGTTATTTTGAATACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-758-4 (SEQ ID NO: 911)
GGTTATTATGAGTACTGGGGTCATGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-758-5 (SEQ ID NO: 912)
GGTTATTTTGAATACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-758-6 (SEQ ID NO: 913)
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CCTAATTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-760 (SEQ ID NO: 915)
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GAGTATTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-763 (SEQIDNO: 918)
TGGCTGTTGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-764 (SEQ ID NO: 919)
CAGTATTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-765 (SEQ ID NO: 920)
CAGGGTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-766 (SEQ ID NO: 921)
ACCGTCTCGAGC BMS2h-767 (SEQ ID NO: 922)
AGC BMS2h-768 (SEQ ID NO: 923)
CTTTGGAAGTGGAGGTTGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-77 (SEQ ID NO: 924)
TCGAGC BMS2h-770 (SEQ ID NO: 925)
GTCTCGAGC BMS2h-771 (SEQ ID NO: 926)
AGC BMS2h-772 (SEQ ID NO: 927)
AGC BMS2h-773 (SEQID NO: 928)
AGGATGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-774 (SEQ ID NO: 929)
AGC BMS2h-775 (SEQ ID NO: 930)
ACCGTCTCGAGC BMS2h-776 (SEQ ID NO: 931)
GGTTATTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-777 (SEQ ID NO: 932)
CCAGGGAAGGGTCTAGAGTGGGTCTCAAGTATTGATGAGCATGGTACTATTACATACTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCECCcGCGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
CTGGATCGGGTTTGGATTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-778 (SEQ ID NO: 933)
CCAGGGAAGGGTCTAGAGTGGGTCTCAAGTATTTATTCTGCGGGTTCTCCTACATACTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTECCeGCGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
TCGAGC BMS2h-78 (SEQID NO: 934)
CCGGGEAAGGGTCTAGAGTGGGTCTCAACGATTAGTTCTGATGGTGGGGGGACATACTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCCcGCGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
CATCGGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-780 (SEQ ID NO: 935)
TTTGCTTCTCTTCCTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-781 (SEQ ID NO: 936)
TTTGGGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-782 (SEQ ID NO: 937)
TCGGCTATGTATCCTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-783 (SEQ ID NO: 938)
AGC BMS2h-784 (SEQ ID NO: 939)
GTCTCGAGC BMS2h-80 (SEQ ID NO: 940)
CGTCGGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-81 (SEQ1D NO: 941)
GTCTCGAGC BMS2h-82 (SEQID NO: 942)
GTCTCGAGC BMS2h-83 (SEQID NO: 943)
CGTGATTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-84 (SEQID NO: 944)
CGTGATTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-85 (SEQ ID NO: 945)
GATGGGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-92 (SEQ ID NO: 946)
BMS2h-93 (SEQID NO: 947)
GAGCATGGGGATGTTCCTTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-94 (SEQID NO: 948)
GTCTCGAGC BMS2h-95 (SEQ ID NO: 949)
CGTCAGTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-97 (SEQID NO: 950)
TATGATCGGAAGTCTAATTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC BMS2h-98 (SEQID NO: 951)
ACCGTCTCGAGC BMS2h-99 (SEQID NO: 952)
GTCTCGAGC TABELA 3 Sequências de Aminoácidos do Domínio VK do Anti-CD40L Humano BMS2h-100 — (SEQID NO: 953)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOP EDFATYYCQQ VRHRPYTFGQ GTKVEIKR BMS2h-101 — (SEQIDNO: 954)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOQP EDFATYYCQQ VALFPYTFGQ GTKVEIKR BMS2h-102 — (SEQID NO: 955)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOP EDSATYYCQQO WDRPPYTFGQO GTKVEIKR BMS2h-103 — (SEQIDNO: 956)
RSKLOSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ VRAVPYTFGQ GTKVEIKR BMS2h-104 (SEQ ID NO: 957)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOP EDFATYYCOQAQ VRFSPYTFGQ GTKVEIKR BMS2h-105 — (SEQIDNO: 958)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOP EDFATYYCQQ SYARPVTFGQ GTKVEIKR BMS2h-1086 — (SEQIDNO: 959)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YKVRPNTFGQ GTKVEIKR BMS2h-107 — (SEQID NO: 960)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ TYSSPHTFGQ GTKVEIKR BMS2h-108 — (SEQIDNO: 961)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOQP EDFATYYCQQ RAVRPFTFGQ GTKVEIKR BMS2h-109 (SEQ ID NO: 962)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ TYYRPLTFGQ GTKVEIKR BMS2h-110 (SEQ ID NO: 963)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ TSIRPYTFGQ GTKVEIKR BMS2h-116 (SEQ ID NO: 964) DIQMTOSPSS —LSASVGDRVT ITCRASQPIG PDLLWYQQAKP GKAPKLLIVYQ TSILASGVPS
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YWAFPVTFGQ GTKVEIKR BMS2h-116-1 (SEQ ID NO: 965) DIQMTOSPSS —LSASVGDRVT ITCRASQPIG PDILWYQAKP GKAPKLLIVYQ TSILASGVPS
RFSGSESGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YWAFPVTFGQ GTKVEIKR BMS2h-116-10 (SEQID NO: 966) DIQITASPSS — LSASVGDRVT ITCRASQPIG PDLLWYQOKP GKAPKLLIYQ TSILRSGVPS
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDLATYYCQQ YWAFPVTFGQ GTKVEIKR BMS2h-116-11 — (SEQID NO: 967) DIQMTOSPSS —LSASVGDRVT ITCRASQPIG PDLLWYQQKP GKAPKLLIYQ TSILRSGVPS
RFSGRGSGTD FTLTISSLOP EDFATYYCQQ YWAFPVTFGQ GTKVEIKR BMS2h-116-12. (SEQID NO: 968) DIQMTOSPSS —LSASVGDRVT ITCRASQPIG PDLLWYQQAKP GKAPKLLIVYAQ TSILRSGVPS
RFSGSGSGTD FTLTISSLOP EDFATYYCQQ YWTFPVYTFGQ GTKVEIKR BMS2h-116-13 — (SEQID NO: 969) DIQMTOSPSS —LSASVGDRVT ITCRASQPIG PDLLWYQQKP GKAPKLLIYQ TSILRSGVPS
RFSGSGSETD FTLTISNLOQP EDFATYYCQQ YWAFPVYTFGQO GTKVVIKR BMS2h-116-1312 (SEQ ID NO: 970) DIQMTOSPSS —LSASVGDRVT ITCRASQPIG PDLLWYQQAKP GKAPKLLIVYA TSILRSGVPS
RFSGSGSETD FTLTISNLQP EDLATYYCQQ YWAFPVTFGK GTKVVIKR BMS2h-116-1313 (SEQ ID NO: 971) DIQMTOSPSS —LSASVGDRVT ITCRASQPIG PDLLWYQQKP GKAPKLLIYQ TSILRSGVPS
RFSGSGSETD FTLTISNLQP EDFATYYCQQ YWAFPVYTFGR GTKVVIKR BMS2h-116-1314 (SEQ ID NO: 972)
RFSGSGSETD FTLTISNLQP EDFATYYCQQ YWAFPVYTFGQ GTKVVIKR BMS2h-116-1319 (SEQ ID NO: 973) DIQMTOSPSS —LSASVGDRVT ITCRASQPIG PDLLWYQOKP GKAPKLLIVYAQ TSIMRSGVPS
RFSGSGSETD FTLTISNLQP EDFATYYCQQ YWTFPVYTFGQ GTKVEIKR BMS2h-116-1320 (SEQ ID NO: 974) DIQMTOSPSS —LSAYVGDRVT ITCRASQPIG PDLLWYQAKP GKAPKLLIVYQ TSILRSGVPS
RFSGSGSETD FTLTISNLQP EDFAKYYCQQ YWAFPVTFGQ GTKVVIKR BMS2h-116-138 (SEQ ID NO: 975) DIQMTOSPSS —LSASVGDRVT ITCRASQPIG PDLLWYQAKP GKAPKLLIVAQ TSILRSGVPS
RFSGSGSETD FTLTISNLOQP VDFATYYCQQ YWAFPVTFGQO GTKVVIKR BMS2h-116-14 — (SEQID NO: 976) DIQMTOSPSS —LSASVGDRVT ITCRASQPIG PDLLWFOQQKP GKAPKLLIVYAQ TSILASGVPS
RFSGSESGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YWAFPVTFGQ GTKVEIKR BMS2h-116-15"" (SEQID NO: 977) DIQMTOSPSS —LSASVGDRVT ITCRASQPIG PDLLWYROKP GKAPKLLIYQ TSILASGVPS
RFSGSGSGTD FTLTISSLOQP EDFATYYCQQ YWTFPVYTFGQ GTKVEIKR BMS2h-116-16 (SEQID NO: 978) DIQMTOSPSS —LSASVGDRVT ITCRASQPID PDLLWYQQAKP GKAPKLLIVYQ TSILASGVPS
RFSGSGSGTV FTLTISSLOP EDFATYYCQQ YWAFPVYTFGQ GTKVEIKR BMS2h-116-17/" (SEQID NO: 979) DIQMTOSPSS —LSASVGDRVT ITCRASQPIG PDLLWYQQAKP GKAPKLLIVYAQ TSILRSGVPS
RFSGSGSGTD FTLTISSLOP EDFATYYCQQ YWAFPVTFGQ GTKVEIKR BMS2h-116-2 — (SEQID NO: 980)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YWASPVTFGQ GTKVEIKR BMS2h-116-3 — (SEQID NO: 981)
TSILOSGVPS RFSGSESGTD FTLTISSLQP EDIATYYCQQ YWAFPVTFGQ GTRVEIKR BMS2h-1164 (SEQ ID NO: 982) DIQMTOSPSS —LSASVGDRVT ITCRASQPIG PDLLWYQQKP GKAPKLLIVYQ TSILOSGVPS
RFSGSESGTD FTLTISSLOQP EDFATYYCQQ YWAFPVTFGQ GTKVEIKR BMS2h-116-5º"— (SEQID NO: 983)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDSATYYCQQ YWAFPYTFGQO GTKVEIKR BMS2h-116-68 — (SEQID NO: 984)
RFSGSGSVTD FTLTISSLOP EDFATYYCQQ YWAFPVYTFGQ GTKVGIKR BMS2h-1167 — (SEQID NO: 985)
RFSGSGSRTD FTLTISSLOQP EDFATYYCQQ YWAFPVTFGQ GTKVEIKR BMS2h-1168 — (SEQID NO: 986) DIQMTOSPSS —LSASVGDRVT ITCRASQPIG PDLLWYQQKP GKAPKLLIVYQ TSILASGVPS
RFSGSGSGTD FTLTISGLQP EDFATYYCQQ YWAFPVTFGQ GTKVEIKR BMS2h-116-9 (SEQ ID NO: 987) DIQMTOSPSS —LSASVGDRVT ITCRASMPIG PDLLWYQQKP GKAPKLLIVQ TSILRSGVPS
RFSGSESGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YWAFPVTFGQ GTKVEIKR BMS2h-141 — (SEQIDNO: 988)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ CISSPCTFGQ GTKVEIKR BMS2h-142 — (SEQIDNO: 989)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YHTSPTTFGR GTKVKIKR BMS2h-143 — (SEQIDNO: 990)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDLATYYCQQ YHGYPTTFGQO GTKVEIKR BMS2h-144 — (SEQIDNO: 991)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOP EDFATYYCQQ YHGYPITFGQO GTKVEIKR BMS2h-145" — (SEQIDNO: 992)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDSATYYCQQ VHOAPTTFGQ GTKVEIKR BMS2h-146 (SEQ ID NO: 993)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDSATYYCQL SSSMPHTFGQ GTKVEIKR BMS2h-147 — (SEQIDNO: 994)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YHQNPPTFGQ GTKVEIKR BMS2h-149 — (SEQIDNO: 995)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ ASKGPLTFGH GTKVEIKR BMS2h-150 — (SEQID NO: 996)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQOQ IYSFPITFGQ GTKVEIKR BMS2h-154º — (SEQIDNO: 997)
RFSGSRSGTD FTLTISSLOP EDFATYYCQQ HHTRPYTFGQ GTKVEIKR BMS2h-155 (SEQ ID NO: 998)
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RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YHKLPVTFGQ GTKVEIKR BMS2h-157/ — (SEQID NO: 1000)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YSSYPVTFGQ GTKVEIKR BMS2h-158 — (SEQIDNO: 1001)
RFSGSGSGTD FTLTISRLQP EDFATYYCQQ YHLLPATFGO GTKVEIKR BMS2h-159 — (SEQID NO: 1002)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOP KDFATYYCQQ YHTNPTTFGO GTKVEIKR BMS2h-160 — (SEQID NO: 1003)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YHMSPVTFGQ GTKVEIKR BMS2h-161 (SEQ ID NO: 1004)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YHSLPVTFGQ GTKVEIKR BMS2h-162 — (SEQ ID NO: 1005)
RFSGSGSGAD FTLTISSLOP EDFATYYCQQ YHSLPVTFGQ GTKVEIKR BMS2h-168 — (SEQIDNO: 1006)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YHHLPTTFGO GTKVEIKR BMS2h-164 — (SEQID NO: 1007)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOQP EDFATYYCQQ YRWIPVYTFGO GTKVEIKR BMS2h-165" — (SEQIDNO: 1008) DIQMTOSPSS —LSASVGDRVT ITCRASQOSIS TDLEWYQOKL GKAPKLLIYD ASLLOSGVPS
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YSSLPVTFGQ GTKVEIKR BMS2h-166 (SEQ ID NO: 1009)
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RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YSANPVTFGQ GTKVGIKR BMS2h-168 — (SEQIDNO: 1011)
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RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YHLHPVTFGQ GTKVEIKR BMS2h-170 — (SEQIDNO: 1013)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOQP EDFATYYCQQ YDSYPVTFGQ GTKVEIKR BMS2h-171 — (SEQIDNO: 1014)
RFSGSGSGTD FTLTISSLRP EDFATYYCQQ YDOQWPTTFGQ GTKVEIKR BMS2h-172 (SEQ ID NO: 1015)
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RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YSMNPVTFGQ GTKVEIKR BMS2h-306 (SEQ ID NO: 1020)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YDLRPQTFGQ GTKVEIKR BMS2h-307 — (SEQIDNO: 1021)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YEYNPITFGQ GTKVEIKR BMS2h-33 — (SEQIDNO: 1022)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ HHMLPSTFGQ GTKVEIKR BMS2h-355=— (SEQIDNO: 1023)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YMDIPITFGO GTKVEIKR BMS2h-36 — (SEQIDNO: 1024)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOQP EDFATYYCQQ YHSIPVYTFGQO GTKVEIKR BMS2h-37 — (SEQIDNO: 1025)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YHSLPATFGQ GTKVEIKR BMS2h-38 (SEQ ID NO: 1026)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YDFNPTTFGQ GTKVEIKR BMS2h-39 — (SEQIDNO: 1027)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ KAFEPFTFGQ GTKVEIKR BMS2h-405 — (SEQID NO: 1028)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YSHNPPTFGQ GTKVEIKR BMS2h-408 — (SEQID NO: 1029)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YHLAPTTFGP GTKVEIKR BMS2h-431 — (SEQIDNO: 1030)
RFSGRGSGTD FTLTISSLOP EDFATYYCQQ TYQLPLTFGQ GTKVEIKR BMS2h-432 (SEQ ID NO: 1031)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCVQ QAVYPITFGQ GTKVEIKR BMS2h-433 — (SEQIDNO: 1032)
RFSGRGSGTD FTLTISSLOP EDFATYYCQQ YHYQPATFGQ GTKVEIKR BMS2h-434 — (SEQIDNO: 1033)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YAQQAPTTFGA GTKVEIKR BMS2h-435 — (SEQIDNO: 1034)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCAQ GVVEPRTFGQ GTKVEIKR BMS2h-436 — (SEQIDNO: 1035)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOP EDFATYYCQQ YFRQPITFGQO GTKVEIKR BMS2h-437 — (SEQIDNO: 1036)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCGQ HVRPPATFGQ GTKVEIKR BMS2h-437-1 (SEQ ID NO: 1037)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCGQ HVRHPATFGQ GTKVEIKR BMS2h-437-2 — (SEQID NO: 1038)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOP EDFATYYCGQ HVRPPATFGQ GTKVGIKR BMS2h-437-3 — (SEQIDNO: 1039)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOP EDFATYYCGQ HVRPPATFGQ GTKVEIKR BMS2h-437-4 — (SEQIDNO: 1040)
RFSGCGSGTD FTLTISSLOP EDFATYYCGQ HVRPPATFGQ GTKVEIKR BMS2h-437-5"— (SEQIDNO: 1041)
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RFSGSGSGTD FTLTISSLOP EDFATYYCGQ WETVPATFGQ GTKVEIKR BMS2h-447 — (SEQIDNO: 1051)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOP EDFATYYCQA LARIPFTFGO GTKVGIKR BMS2h-448 — (SEQIDNO: 1052)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOP EDFATYYCQQ YNSYPDTFGQ GTKVEIKR BMS2h-47 (SEQ ID NO: 1053)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOP EDFATYYCQQ YLHTPSTFGQ GTKVEIKR BMS2h-484 — (SEQIDNO: 1054)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOP EDFATYYCQQ YGFNPPTFGQ GTKVEIKR BMS2h-485 — (SEQIDNO: 1055)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOP EDFATYYCGQ WEVOQPATFGQ GTKVEIKR BMS2h-488 — (SEQIDNO: 1056)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOP EDFATYYCQQ YHSAPATFGQ GTKVEIKR BMS2h-487 — (SEQIDNO: 1057)
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RFSGSGSGTD FTLTISSLOP EDFATYYCTO WDRPFTFGQ GTKVEIKR BMS2h-488 — (SEQIDNO: 1059)
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RFSSSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YASNPPTFGR GTKVEIKR BMS2h-491 — (SEQIDNO: 1061)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ LYFWPRTFGQ GTKVEIKR BMS2h-492 — (SEQID NO: 1062)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOQP EDFATYYCQQ YDVYPPTFGQ GTKVEIKR BMS2h-4921 — (SEQIDNO: 1063)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDLATYYCQQ YDAYPPTYGQ GTKVEIKR BMS2h-492-2 (SEQ ID NO: 1064)
RFGGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCLQ YDVYPPTFGQ GTKVEIKR BMS2h-492-3 — (SEQIDNO: 1065)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YDAYPPTFGQ GTKVEIKR BMS2h-4924 — (SEQIDNO: 1066)
RFSGRGSGTD FTLTISSLOP EDFATYYCQQ YDAYPPTFGQ GTKVEIKR BMS2h-492-5 (SEQID NO: 1067)
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RFSGSGSGTD FTLTISSLOQP EDFATYYCQQ YDVYPPTFGQ GTKVEIKR BMS2h-492-7 — (SEQID NO: 1069)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YDAYPPTFGQ GTKVEIKR BMS2h-493 (SEQ ID NO: 1070)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YFOYPPTFGQ GTKVEIKR BMS2h-494 — (SEQIDNO: 1071)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YFOYPPTFGQ GTKVEIKR BMS2h-494-1 — (SEQIDNO: 1072)
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RFSGSGSGTD FTLTISSLRP EDFATYYCQQ YFOYPPTLGO GTKVEIKR BMS2h-494-5 — (SEQIDNO: 1076)
RFSGSGSGTD FTLTISGLQP EDIATYYCKQ YSQYPPTFGQ GTKVEIKR BMS2h-4946 — (SEQIDNO: 1077)
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RFSGSGSGTD FTLTISSLOQP EDFATYYCLO NAMWPITFGQ GTKVEIKR BMS2h-496 — (SEQIDNO: 1079)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOQP EDFATYYCSQ VRSRPFTFGOQO GTKVEIKR BMS2h-497 — (SEQID NO: 1080)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ NYSLPITFGQ GTKVEIKR BMS2h-498 (SEQ ID NO: 1081)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCGQ WFRAPVYTFGQ GTKVEIKR BMS2h-499 — (SEQID NO: 1082)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOQP EDFATYYCVQ FAMWPFTFGQ GTKVEIKR BMS2h-500 (SEQ ID NO: 1083)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCGQ HERWPATFGQ GTKVEIKR BMS2h-501 (SEQ ID NO: 1084)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ MVYRPYTFGQ GTKVEIKR BMS2h-502 (SEQ ID NO: 1085)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YDKVPATFGQ GTKVEIKR BMS2h-503 (SEQ ID NO: 1086)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCGQ WWAPPPTFGQ GTKVEIKR BMS2h-503-1 (SEQ ID NO: 1087)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOP EDFATYYCGQ WWAPPQTFGQ GTKVEIKR BMS2h-503-2 — (SEQID NO: 1088)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCGQ WWAPPQTFGQ GTKVEIKR BMS2h-504 (SEQ ID NO: 1089)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOP EDFATYYCGQ GAVVPVTFGQ GTKVEIKR BMS2h-508 (SEQ ID NO: 1090)
RFSGSGSGSD FTLTISSLOP EDFATYYCQQ YNLOPPTFGQ GTKVEIKR BMS2h-509 (SEQ ID NO: 1091)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOQP EDFATYYCQQ MWQORPYTFGQ GTKVEIKR BMS2h-51 (SEQ ID NO: 1092) DIQMTOSPSS —LSASVGDRVT ITCRASQPIV DELDWYQQKP GKAPKLLIYA ASILOSGVPS
RFSGSGSGTD FTLTISSLOP EDFATYYCHQ WSTYPTTFGQ GTKVEIKR BMS2h-510 (SEQ ID NO: 1093)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCGQ DWDWPRTFGQ GTKVEIKR BMS2h-511 — (SEQIDNO: 1094)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCAQ TWDDPLTFGQ GTKVEIKR BMS2h-511-1 — (SEQID NO: 1095)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOQP EDFATYYCAQ TWYDPLTFGH GTKVEIKR BMS2h-512 — (SEQID NO: 1096)
RFSGSGSGTD FTLTISNLOP EDFATYYCAQ VWRRPFTFGQ GTKVEIKR BMS2h-513 (SEQ ID NO: 1097)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ TYALPVTFGO GTKVEIKR BMS2h-514 — (SEQIDNO: 1098)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YKYLPVTFGQ GTKVEIKR BMS2h-52 — (SEQIDNO: 1099)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ TAYFPTTFGO GTKVEIKR BMS2h-53 — (SEQIDNO: 1100)
RFSGSGSGTD FTLTISSLHP EDFATYYCQQ VYHKPFTFGQ GTKVEIKR BMS2h-536 — (SEQIDNO: 1101)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOQP EDFATYYCQQ TFSSPSTFGQ GTKVEIKR BMS2h-537 — (SEQIDNO: 1102)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ SFQFPYTFGQ GTKVEIKR BMS2h-538 (SEQ ID NO: 1103)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCGQ WGEPVTFGQ GTKVEIKR BMS2h-539 — (SEQIDNO: 1104)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOP EDFATYYCVQ PGMPPDTFGQ GTKVEIKR BMS2h-540 — (SEQIDNO: 1105)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOP EDFATYYCVQ GVWWAPGTFGQ GTKVEIKR BMS2h-541 — (SEQIDNO: 1106)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOP EDFATYYCGQ LWAGPPTFGQ GTKVEIKR BMS2h-542 — (SEQIDNO: 1107)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOP EDFATYYCGQ LWEGPPTFGQ GTKVEIKR BMS2h-543 — (SEQIDNO: 1108)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ TLAWPFTFGQ GTKVEIKR BMS2h-544 — (SEQIDNO: 1109)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOP EDFATYYCQQ LYDTPYTFGQ GTKVEIKR BMS2h-545 — (SEQIDNO: 1110)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOP EDFATYYCQQ TSYYPYTFGQ GTKVEIKR BMS2h-546 — (SEQIDNO: 1111)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOP EDFATYYCQQ VYSLPYTFGQ GTKVEIKR BMS2h-547'/ — (SEQIDNO: 1112)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOP EDFATYYCGQ LWNGPPTFGQ GTKVEIKR BMS2h-548 — (SEQIDNO: 1113)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOP EDFATYYCGQ LWLGPPTFGQ GTKVEIKQ BMS2h-5498 — (SEQIDNO: 1114)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOP EDFATYYCAQ VGEAPSTFGQ GTKVEIKR BMS2h-550 — (SEQIDNO: 1115)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCVQ PGGGPGTFGQ GTKVEIKR BMS2h-551 — (SEQIDNO: 1116)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCGQ LWHGPPTFGQ GTKVEIKR BMS2h-552º — (SEQ ID NO: 1117)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOP EDFATYYCMQ VGTAPATFGQO GTKVEIKR BMS2h-5855 = (SEQIDNO: 1118)
RFGGSGSGTD FTLTISSLOP EDFATYYCQQ TYSYPHTFGQ GTKVEIKR BMS2h-604 (SEQ ID NO: 1119)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCGQ LWSAPATFGQ GTKVEIKR BMS2h-805" — (SEQIDNO: 1120)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCGQ SVEAPWTFGQ GTKVEIKR BMS2h-606 — (SEQIDNO: 1121)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCGQ SVVVPWTFGQ GTKVEIKR BMS2h-607 — (SEQIDNO: 1122)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCGQ LWVGPPTFGQ GTKVEIKR BMS2h-608 — (SEQIDNO: 1123)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOQP EDFATYYCGQ LWRAPATFGQ GTKVEIKR BMS2h-609 — (SEQ ID NO: 1124)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCGQ WGGPVTFGQ GTKVEIKR BMS2h-610 (SEQ ID NO: 1125)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCGQ WWEYPPTFGQ GTKVEIKR BMS2h-611 — (SEQIDNO: 1126)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCGQ LEAAPATFGQ GTKVEIKR BMS2h-612 — (SEQIDNO: 1127)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCAQ WGTPPTTFGQ GTKVEIKR BMS2h-613 — (SEQIDNO: 1128)
RFSSSGSGTD FTLTISSLOQP EDFATYYCGQ LEAAPATFGQ GTKVEIKR BMS2h-614 — (SEQIDNO: 1129)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCGOQ LVEPPATFGQ GTKVEIKR BMS2h-615 (SEQ ID NO: 1130)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCGQ LHRAPATFGQ GTKVEIKR BMS2h-6168 — (SEQIDNO: 1131)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCGQ SSELPWTFGQ GTKVEIKR BMS2h-617 — (SEQIDNO: 1132)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCGQ LWEPPATFGQ GTKVEIKR BMS2h-618 — (SEQIDNO: 1133)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCGQ LWHTPPTFGQ GTKVEIKR BMS2h-619 — (SEQIDNO: 1134)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOQP EDFATYYCAQ DYTLPGTFGQ GTKVEIKR BMS2h-730 — (SEQIDNO: 1135)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDSATYYCQQ HYSTPYTSGQ GTKVEIKR BMS2h-731 (SEQ ID NO: 1136)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ HRSLPFTFGQ GTKVEIKR BMS2h-732 — (SEQIDNO: 1137)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YIRSPFTFGQ GTKVEIKR BMS2h-733 — (SEQIDNO: 1138)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ LFRLPLTFGO GTKVEIKR BMS2h-734 — (SEQIDNO: 1139)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOQP EDFATYYCQQ YAEAPITFGO GTKVEIKR BMS2h-735 — (SEQIDNO: 1140) DIQMTOSPSS —LSASVGDRVT ITCRASQNIG SSLIWYQQOKP GKAPTLLIYOY SSKLOSGVPS
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ SLSSPYTVGQ GTKVEIKR BMS2h-736 (SEQ ID NO: 1141)
RFSGSGSGTD FTLTISNLOP EDFATYYCQOA ILETPLTFGQ GTKVEIKR BMS2h-737 — (SEQIDNO: 1142)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ FYRWPHTFGQ GTKVEIKR BMS2h-738 — (SEQIDNO: 1143)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ MYKFPITFGQ GTKVEIKR BMS2h-739 — (SEQIDNO: 1144)
RFSGSRSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ IWGSPPTFGQ GTKVEIKR BMS2h-740 — (SEQIDNO: 1145)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOP EDFATYYCQQ DWYYPNTFGQ GTKVEIKR BMS2h-785" — (SEQIDNO: 1146)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQOQ IHSSPFTFGQ GTKVEIKR BMS2h-8 (SEQ ID NO: 1147)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDLATYYCQQ YWVLPLTFGQ GTKVEIKR BMS2h-86 — (SEQIDNO: 1148)
RFSGGGSGTD FTLTISSLOP EDFATYYCQQ RHSTPATFGQ GTKVEIKR BMS2h-87 (SEQ ID NO: 1149)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ RWKAPFTFGQ GTKVEIKR BMS2h-88 (SEQ ID NO: 1150)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOQP EDFATYYCQQ TRRRPYTFGQ GTKVEIKR BMS2h-89 (SEQ ID NO: 1151)
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ TLVTPYTFGQ GTKVEIKR BMS2h-90 (SEQ ID NO: 1152)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOP EDFATYYCQQ RFQEPVTFGQ GTKVEIKR BMS2h-91 (SEQ ID NO: 1153)
RFSGSGSGTD FTLTISSLOP EDFATYYCQQ WLSFPSTFGQ GTKVEIKR TABELA 4 Sequências de Nucleotídeos Que Codificam o Domínio VK do Anti- CD40L Humano BMS2h-100 (SEQ ID NO: 1154)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-101 (SEQ ID NO: 1155)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-102 (SEQ ID NO: 1156)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-103 (SEQ ID NO: 1157)
GGGACCAAGGTGGAAATTAAACGG BMS2h-104 (SEQ ID NO: 1158)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-105 (SEQ ID NO: 1159)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-106 (SEQ ID NO: 1160)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-107 (SEQIDNO: 1161)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-108 (SEQ ID NO: 1162)
GGGACCAAAGTGGAAATCAAACGG BMS2h-109 (SEQ ID NO: 1163)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-110 (SEQ ID NO: 1164)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-116 (SEQ ID NO: 1165)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-116-1 (SEQID NO: 1166)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-116-10 (SEQ ID NO: 1167)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-116-11 (SEQ ID NO: 1168)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-116-12 (SEQ ID NO: 1169)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-116-13 (SEQ ID NO: 1170)
GGGACCAAGGTGGTAATCAAACGG BMS2h-116-1312 (SEQ ID NO: 1171)
GGGACCAAGGTGGTAATCAAACGG BMS2h-116-1313 (SEQ ID NO: 1172)
GGGACCAAGGTGGTAATCAAACGG BMS2h-116-1314 (SEQ ID NO: 1173)
GGGACCAAGGTGGTAATCAAACGG BMS2h-116-1319 (SEQ ID NO: 1174)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-116-1320 (SEQ ID NO: 1175)
GGGACCAAGGTGGTGATCAAACGG BMS2h-116-138 (SEQID NO: 1176)
GGGACCAAGGTAGTAATCAAACGG BMS2h-116-14 (SEQ ID NO: 1177)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-116-15 (SEQ ID NO: 1178)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-116-16 (SEQ ID NO: 1179)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-116-17 (SEQ ID NO: 1180)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-116-2 (SEQ ID NO: 1181)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-116-3 (SEQ ID NO: 1182)
GGGACCAGGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-116-4 (SEQ ID NO: 1183)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-116-5 (SEQ ID NO: 1184)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-116-6 (SEQ ID NO: 1185)
GGGACCAAGGTGGGAATCAAGCGG BMS2h-116-7 (SEQ ID NO: 1186)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-116-8 (SEQ ID NO: 1187)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-116-9 (SEQ ID NO: 1188)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-141 (SEQ ID NO: 1189)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-142 (SEQ ID NO: 1190)
GGGACCAAGGTGAAAATCAAACGG BMS2h-143 (SEQ ID NO: 1191)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-144 (SEQ ID NO: 1192)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-145 (SEQ ID NO: 1193)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-146 (SEQ ID NO: 1194)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-147 (SEQ ID NO: 1195)
GGAACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-149 (SEQIDNO: 1196)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-150 (SEQ ID NO: 1197)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-154 (SEQ ID NO: 1198)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-155 (SEQ ID NO: 1199)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-156 (SEQ ID NO: 1200)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-157 (SEQ ID NO: 1201)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-158 (SEQ ID NO: 1202)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-159 (SEQID NO: 1203)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-160 (SEQ ID NO: 1204)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-161 (SEQ ID NO: 1205)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-162 (SEQ ID NO: 1206)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-163 (SEQ ID NO: 1207)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-164 (SEQ ID NO: 1208)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-165 (SEQ ID NO: 1209)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-166 (SEQ ID NO: 1210)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-167 (SEQIDNO: 1211)
GGGACCAAGGTGGGAATCAAACGG BMS2h-168 (SEQ ID NO: 1212)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-169 (SEQ ID NO: 1213)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-170 (SEQ ID NO: 1214)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-171 (SEQ ID NO: 1215)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-172 (SEQ ID NO: 1216)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-173 (SEQ ID NO: 1217)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-174 (SEQIDNO: 1218)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-175 (SEQ ID NO: 1219)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-305(SEQ ID NO: 1220)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-306 (SEQ ID NO: 1221)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-307 (SEQ ID NO: 1222)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-33 (SEQID NO: 1223)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-35. (SEQ ID NO: 1224)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-36 (SEQ1ID NO: 1225)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-37 (SEQID NO: 1226)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-38 (SEQ ID NO: 1227)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-39 (SEQID NO: 1228)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-405 (SEQ ID NO: 1229)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-406 (SEQ ID NO: 1230)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-431 (SEQ ID NO: 1231)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-432 (SEQ ID NO: 1232)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-433 (SEQ ID NO: 1233)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-434 (SEQ ID NO: 1234)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-435 (SEQ ID NO: 1235)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-436 (SEQ ID NO: 1236)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-437 (SEQIDNO: 1237)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-437-1 (SEQ ID NO: 1238)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAGCGG BMS2h-437-2 (SEQ ID NO: 1239)
GGGACCAAGGTGGGAATCAAACGG BMS2h-437-3 (SEQ ID NO: 1240)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-437-4 (SEQ ID NO: 1241)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-437-5' (SEQ ID NO: 1242)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-438 (SEQ ID NO: 1243)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-439 (SEQ ID NO: 1244)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-440 (SEQ ID NO: 1245)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-441 (SEQ ID NO: 1246)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-442 (SEQ ID NO: 1247)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-443 (SEQ ID NO: 1248)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-444 (SEQ ID NO: 1249)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-445 (SEQ ID NO: 1250)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-446 (SEQ ID NO: 1251)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-447 (SEQIDNO: 1252)
GGGACCAAGGTGGGAATCAAACGG BMS2h-448 (SEQ ID NO: 1253)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-47 (SEQID NO: 1254)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-484 (SEQ ID NO: 1255)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-485 (SEQ ID NO: 1256)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-486 (SEQ ID NO: 1257)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-487 (SEQ ID NO: 1258)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-488 (SEQ ID NO: 1259)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-489 (SEQ ID NO: 1260)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-490 (SEQ ID NO: 1261)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-491 (SEQ ID NO: 1262)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-492 (SEQ ID NO: 1263)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-492-1 (SEQ ID NO: 1264)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-492-2 (SEQ ID NO: 1265)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-492-3 (SEQ ID NO: 1266)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-492-4 (SEQ ID NO: 1267)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-492-5 (SEQ ID NO: 1268)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-492-6 (SEQ ID NO: 1269)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-492-7/ (SEQ ID NO: 1270)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-493 (SEQ ID NO: 1271)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-494 (SEQ ID NO: 1272)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-494-1 (SEQ ID NO: 1273)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-494-2 (SEQ ID NO: 1274)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-494-3 (SEQ ID NO: 1275)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-494-4 (SEQ ID NO: 1276)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-494-5 (SEQ ID NO: 1277)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-494-6 (SEQ ID NO: 1278)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-495 (SEQ ID NO: 1279)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-496 (SEQ ID NO: 1280)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-497 (SEQIDNO: 1281)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-498 (SEQ ID NO: 1282)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-499 (SEQ ID NO: 1283)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-500 (SEQ ID NO: 1284)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-501 (SEQ ID NO: 1285)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-502 (SEQ ID NO: 1286)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-503 (SEQ ID NO: 1287)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-503-1 (SEQ ID NO: 1288)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-503-2 (SEQ ID NO: 1289)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-504 (SEQ ID NO: 1290)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-508 (SEQ ID NO: 1291)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-509 (SEQ ID NO: 1292)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-51 (SEQ ID NO: 1293)
GGGACCAAGGTGGAAATTAAACGG BMS2h-510 (SEQ ID NO: 1294)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-511 (SEQ ID NO: 1295)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-511-1 (SEQ ID NO: 1296)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-512 (SEQ ID NO: 1297)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-513 (SEQ ID NO: 1298)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-514 (SEQ ID NO: 1299)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-52 (SEQID NO: 1300)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-53 (SEQID NO: 1301)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-536 (SEQ ID NO: 1302)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-537 (SEQ ID NO: 1303)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-538 (SEQ ID NO: 1304)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-539 (SEQ ID NO: 1305)
GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-540 (SEQ ID NO: 1306)
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GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG BMS2h-542 (SEQ ID NO: 1308)
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Exemplo 1 Geração de Domínios Variáveis de Anti-CD40L Humano BMS2h-2 até BMS2h-785
[00118] O exemplo a seguir descreve a geração da linhagem 2h de domínios variáveis de anti-CD40L humano, denominada BMS2h-2 até BMS2h-785. Após a expressão recombinante de um repertório de do- mínios variáveis de imunoglobulina isolados sobre a superfície de fa- go, a seleção é realizada através do contato do repertório do fago com antígeno alvo imobilizado, lavando para remover o fago não ligado e propagando o fago ligado. Este processo é frequentemente referido como "mineiração". Este é aplicável à verificação de domínios variá- veis de imunoglobulina isolados, bem como outros fragmentos de anti- corpo que podem ser expressos sobre uma biblioteca de exibição, por exemplo, scFv, Fab e Fab”. Alternativamente, o fago pode ser pré- selecionado para a expressão de variantes de membros dobrados a- propriadamente através da "mineiração" contra um ligante genérico imobilizado (por exemplo, proteína A ou proteína L) que é apenas liga- do por membros dobrados. Isto possui a vantagem de reduzir a pro- porção de membros não funcionais, aumentando assim a proporção de membros que provavelmente se ligarão a um antígeno alvo. A pré- seleção com ligantes genéricos é ensinada na WO 99/20749, por e- xemplo. A verificação de bibliotecas de anticorpos em fagos é geral- mente descrita, por exemplo, por Harrison e outros, Meth. Enzymol. 267: 83-109 (1996).
[00119] A verificação é comumente realizada utilizando antígeno purificado imobilizado sobre um suporte sólido, por exemplo, tubos de plásticos ou poços ou sobre uma matriz de cromatografia, por exem- plo, Sepharose"" (Pharmacia). A verificação ou a seleção também po- de ser realizada sobre antígenos complexos, tal como a superfície de células (Marks e outros, BioTechnology 11: 1145 (1993); de Kruif e ou-
tros, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92: 3938 (1995)). Outra alternativa en- volve a seleção através da ligação com antígeno biotinilado em solu- ção, seguida pela captura sobre esferas revestidas com estreptavidina. Seleção de dAb para a Série de Clones BMS2h-719 e BMS2h-7xx:
[00120] Três rodadas de seleção utilizando concentrações decres- centes de antígeno (500 nM na rodada 1; 50 nM na rodada 2; 50 nM ou 5 nM na rodada 3 dependendo da produção da biblioteca utilizada) foram realizadas em paralelo contra o triplo mutante de monômero de CD40L humano biotinilado (1,2 mol de biotina/mol de CD40L) (T211E, S222Y, H224K, [108-261] Construção tf7) fornecido pela Bristol-Myers Squibb. O fago proveniente das bibliotecas de dAb naiíve 4G e 6G Domantis foram combinados dentro dos grupos a) até g) indicados a seguir antes do início das seleções:
[00121] 4GVHCDR3 comprimentos entre 7 — 10 aminoácidos.
[00122] 4GVHCDR3 comprimentos entre 11 — 15 aminoácidos.
[00123] 4GVHCDR3 comprimentos entre 7 — 15 aminoácidos.
[00124] 4GVK
[00125] 6GVH CDR3 comprimentos entre 7-9
[00126] 6GVHCDR3 comprimentos entre 10-15
[00127] 6GVK
[00128] Cada rodada de seleção envolvia a adição da concentração desejada de CD40L biotinilado a uma mistura de 200 ul de fago (de um dos grupos de biblioteca naiíve indicados anteriormente ou seleção subsequente do fago de produção) e 1000 ul de 2% de MPBS (Solu- ção Salina Tamponada com Fosfato) contendo 2% (p/v) de Marvel [Premier Foods, UK]J) e incubando à temperatura ambiente durante 1 hora através da mistura em movimento de gangorra. O complexo de fago de antígeno biotinilado foi então capturado através da adição de 100 uL de Dynabeads M-280 Streptavidin [Invitrogen, UK] ressuspen- saseincubados durante 5 minutos com misturador com movimento de gangorra à temperatura ambiente. As Dynabeads foram então recupe- radas utilizando um separador magnético KingFisher [Thermo Fisher Scientific, UK] e lavadas 7 x 1 mL de PBST (PBS contendo 0,1% (v/v) de monolaurato de polioxietilenossorbitana 20 [Sigma-Aldrich, UK]) seguido por 1 x 1 mL de PBS. O fago ligado retido sobre as Dynabe- ads lavadas foram eluídos através da incubação com 500 uL de tripsi- na-PBS (50 ul de 10 mg/mL de tripsina [Sigma-Aldrich, UK] dissolvi- dos em 50 mM de Tris-HCl pH 7,4, 1 mM de CaCl, adicionados a 450 ul de PBS). A solução contendo os fagos foi recuperada e 250 ul foram utilizados para infectar 1,75 mL de E. coli TG1 em fase de cres- cimento logarítmico (a uma DOgo,o de 0,4) durante 30 minutos a 37ºC.
A cultura infectada com fago de E. coli TG1 foi centrifugada a 11.600 g em uma microcentrífuga durante 1 minuto e a pelota de células resul- tante foi ressuspensa em 1 mL de 2xTY (16 g de Triptona, 10 g de Ex trato de Levedura e 5 g de NaCl em 1 litro, autoclavado durante 15 mi- nutos a 121ºC) e plaqueada sobre uma placa de Petri de 9 cm conten- do meio TYE suplementado com 15 pg/mL de tetraciclina. As placas foram incubadas durante toda a noite a 37ºC então 2 mL de 2xTY su- plementado com 15% de glicerol foram adicionados em cada placa e as células desprendidas com um espalhador de vidro e misturadas vi- gorosamente. Cinquenta microlitros das bactérias raspadas foram utili- zados para inocular 50 mL de 2xTY suplementado com 15 ug/mL de tetraciclina e crescidos durante toda a noite a 37ºC com agitação a 250 rpm. A cultura realizada durante toda a noite foi centrifugada a
3.300 g durante 15 min para a obtenção de uma pelota de bactérias. Para precipitar o fago, 10 mL de PEG/NaCl (20% de Polietileno glicol 8000, 2,5 M de NaCl) foram adicionados a 40 mL de sobrenadante. À solução de fago/PEG foi misturada e deixada sobre gelo durante 1 h, então centrifugada a 3.300 g durante 30 min a 4ºC e o sobrenadante foidescartado. A pelota foi ressuspensa em 2 mL de PBS e centrifu-
gada a 11.600 g durante 10 min em uma microcentrífuga para remover os restos celulares bacterianos remanescentes. O sobrenadante con- tendo fago resultante foi então utilizado para a próxima rodada de se- leção contra a concentração apropriada de antígeno de triplo mutante demonômero de CD40L biotinilado. ELISA de Fago:
[00129] ELISAs de fagos monoclonais foram realizados após as ro- dadas de seleção 2 e 3. Todas as lavagens foram realizadas utilizando 3 lavagens de 250 uL de PBST seguidas por 3 lavagens de 250 uL de PBS.As placas foram revestidas durante toda a noite a 4ºC com 50 ul/poço de 1 ug/mL de NeutrAvidin [Thermo Scientific, UK] em 0,2 M de tampão carbonato-bicarbonato, pH 9,4. As placas foram lavadas e então bloqueadas com 2% de MPBS durante 1 hora à temperatura ambiente. As placas foram então lavadas e incubadas com 50 uL/poço de->-1,0 ugmL de triplo mutante de monômero de CDA40L biotinilado em 2% de MPBS. As placas foram lavadas e 25 uL/poço de sobrena- dantes de fago foram adicionados a um volume equivalente de 2% de MPBS e incubados durante 1 hora à temperatura ambiente. As placas foram lavadas e o fago ligado detectado com 50 yuL/poço de conjugado anti-M13-HRP [GE Healthcare, UK] diluído 1:5000 em 2% de MPBS e incubado durante 1 hora à temperatura ambiente. As placas foram la- vadas e o ELISA revelado utilizando 50 ul/poço de solução de Sure- Blue 1-Component TMB MicroWell Peroxidase [KPL Inc, USA]. A rea- ção colorimétrica foi interrompida através da adição de um volume e- quivalente de 1M de HCl e a placa de ELISA foi lida a 450 nm. O fago específico foi identificado através da comparação com poços revesti- dos com NeutrAvidin, mas sem triplo mutante de monômero de CD40L biotinilado. Recuperação de genes de dAb de Plasmídeo MidiPrep pDOM4:
[00130] Os genes V de dAb provenientes dos produtos da rodada 3 a seguir foram recuperados através da digestão com enzima de restri- ção de DNA do vetor de fago pDOM4:
[00131] 4G VH CDR3 comprimentos entre 7 — 10 aminoácidos (50 nM de concentração de antígeno).
[00132] 4G VH CDR3 comprimentos entre 11 — 15 aminoácidos (50 nM de concentração de antígeno).
[00133] 4G VH CDR3 comprimentos entre 11 — 15 aminoácidos (5 nM de concentração de antígeno).
[00134] 4G VH CDR3 comprimentos entre 7 — 15 aminoácidos (50nM de concentração de antígeno)..
[00135] 4G VK (50 nM de concentração de antígeno).
[00136] 4GVK(5nM de concentração de antígeno).
[00137] 6G VH CDR3 comprimentos entre 7-9 (50 nM de concen- tração de antígeno).
[00138] 6GVHCDR3 comprimentos entre 10-15 (5 nM de concen- tração de antígeno).
[00139] Aproximadamente 20 ug de MidiPrep [Qiagen, UK] DNA foram digeridos com Sa/l e Notl como a seguir: 20 ul de DNA (1 ug/uL) foram misturados com 1,5 ul de Sa/l (20 U/uL) [NEB, UK] e 3ul de Notl (10 U/uL) [NEB, UK], 41/L de Tampão 3 [NEB, UK], 0,4 uL de BSA (10 mg/mL) [NEB, UK] e água de grau de cultura de tecido [Sigma, UK] adicionada até 40 ul. As amostras foram incuba- das durante 5 horas a 37ºC em uma incubadora com ar após as quais os genes de dAb digeridos foram isolados correndo a mistura de di- gestão sobre um gel de agarose a 2% [E-gel, Invitrogen, UK], as ban- das de DNA apropriadas foram cortadas e limpas utilizando um kit de purificação de PCR [Qiagen, UK]. Os genes V purificados foram liga- dos dentro de um vetor de expressão pDOMS com digestão dupla com Sall e Notl. ELISA de daAb Solúvel:
[00140] Os dAbs que se ligam foram identificados como a seguir.
Noventa e seis colônias individuais contendo os genes V de dAb clo- nados dentro do vetor de expressão de dAb solúvel pDOMSB5 foram se- lecionadas de cada produção dentro de 200 uL de Terrific Broth con-
tendo meio OnEx Autoinduction [Novagen, UK] e incubadas durante toda a noite a 37º C com agitação a 250 rpm em Costar 96 Well Cell Culture Clusters [Corning Incorporated, USA] seladas com uma tira de plástico adesivo permeável por gás.
As culturas foram centrifugadas para peletizar as células e os sobrenadantes foram analisados através de ELISA de ligação ao antígeno em relação aos dAbs que se ligam ao triplo mutante de monômero de CD40L e mutante IZ-CD40L (CD40L contendo um domínio de trimerização com zíper de isoleucina, fornecido pela Bristol-Myers Squibb). Imunoplacas de 96 poços Maxi- Sorp [Nunc, USA] foram revestidas durante toda a noite a 4ºC com 50 ul/poço de 1 ugiml de NeutrAvidin em 0,2 M de tampão carbonato- bicarbonato, pH 9,4. Todas as lavagens ocorreram como descrito para o ELISA de fago.
As placas foram bloqueadas durante 1 hora à tempe- ratura ambiente com 200 ul de PBS contendo 1% de Tween 20. À placa foi então lavada e incubada durante 1 hora à temperatura ambi-
entecom 50 ul/poço de 1 ug/mL de triplo mutante de monômero de CD40L biotinilado em PBST ou 1 ug/mL de mutante IZ-CD40L humano biotinilado em PBST (ambos os antígenos fornecidos pela Bristol- Myers Squibb). A placa de ELISA foi lavada e o sobrenadante de cultu-
ra contendo dAb foi clarificado por centrifugação a 1.800 g durante 10 mina4ºC, então adicionado à placa de ELISA (30 uL/poço) à qual foi adicionado um volume equivalente de PBST.
As placas foram incuba-
das durante 1 hora à temperatura ambiente e então lavadas.
O dAb ligado foi detectado através da adição de 50 ul/poço de 9E10 [anti-
myc IgG, Sigma-Aldrich, UK] diluído 1:2000 em PBST e da incubação durante 1 hora à temperatura ambiente; a placa de ELISA foi então lavada e 50 ul/poço de Fc-HRP anticamundongo [Sigma-Aldrich, UK] diluído 1:2000 em PBST foram adicionados e incubados durante 1 ho- ra à temperatura ambiente. As placas foram lavadas e o ELISA revela- do através da adição de 50ul/poço de solução SureBlue 1- Component TMB MicroWell Peroxidase [KPL Inc, USA] e foi permitido que a coloração se desenvolvesse. A reação colorimétrica foi inter- rompida através da adição de um volume equivalente de 1 M de HCl e a placa de ELISA foi lida a 450 nm. Os dAbs que se ligam ao antígeno foram identificados através da comparação da intensidade de sinal proveniente dos poços com triplo mutante de monômero de CD40L humano e com mutante IZ-CD40L humano com poços de controle que não continham antígeno. Expressão & Purificação de dAb na Escala de 50 mL:
[00141] dAbs únicos foram identificados através do sequenciamento do DNA de clones positivos para ELISA. Os dAbs únicos foram ex- pressos como a seguir em frascos com chicanas de 250 mL, aos quais foi adicionado:
[00142] 50mL de Terrific Broth [Sigma-Aldrich, UK].
[00143] 100 ug/mL de carbenicilina [Sigma-Aldrich, UK].
[00144] 1gotade antiespumante A204 [Sigma-Aldrich, UK].
[00145] “Novagen Overnight Express Autoinduction Kit [Novagen, UK].
[00146] Um raspado bacteriano proveniente de uma placa com ágar de 9 cm de diâmetro confluente fresca ou proveniente de um estoque emglicerol do clone de dAb desejado foi utilizado para inocular o Terri- fic Broth, então o frasco foi selado com membrana Milliwrap PTFE [Mil- lipore, UK] e incubado durante 48 h, agitação a 250 rpm a 30ºC. A cul- tura bacteriana durante toda a noite foi clarificada por centrifugação e o dAb de VH ou de VK purificado utilizando Streamline Protein A [GE Healthcare, UK] ou Protein L agarose [gerada no local] respectivamen-
te. As proteínas purificadas resultantes foram analisadas por RBA para determinar quais clones poderiam inibir a ligação de CD40L para CD40. Ensaio de Ligação ao Receptor em Esfera de CD40L:
[00147] dAbs inibidores foram inicialmente identificados através da verificação de dAb purificado em um ensaio de ligação ao receptor em esfera (RBA) de CD40L. Esferas de estreptavidina poliestireno Sphero (0,5% p/v, 6,7 um de diâmetro) [Saxon, Europa] foram preparadas e lavadas de acordo com as instruções do fabricante. As esferas foram então peletizadas a 11.600 g durante 1 minuto, o sobrenadante des- cartado e as esferas ressuspensas em 1 mL de PBS através do uso de um vortex. A etapa de lavagem foi repetida mais duas vezes, o sobre- nadante foi descartado e as esferas foram ressuspensas em 1 mL (0,5 mg/mL) de IZ-CD40L humano biotinilado em PBS e incubadas du- rante toda a noite à temperatura ambiente com rotação em movimento de gangorra. Após a incubação, as esferas foram peletizadas e lava- das três vezes com 1 mL de PBS como anteriormente e então ressus- pensas em 0,5 mL de PBS contendo 0,1% de albumina do soro bovino (BSA). As esferas revestidas com antígeno foram então diluídas 1:10 em PBS contendo 0,1% de BSA antes do uso. Os reagentes para o ensaio de RBA foram adicionados como a seguir a poços em duplicata em uma placa FMAT com fundo transparente com preto nas laterais de 384 poços [Applied Biosystems, UK]:
[00148] 12,5uL de proteína dAb ou controle de tampão. A concen- tração de início de titulação de dAb era tipicamente de 10 uM (concen- tração final) que foi diluída 1:3,3 (isto é, 30 ul de amostra adicionados a 70 ul de PBS contendo 0,1% de BSA) para produzir uma curva de efeito de titulação de 8 pontos.
[00149] 12,5uUL de CD40-Fc [fornecido pela Bristol-Myers Squibb, USA; lote CY24Feb06-1] a 0,2 ug/mL (para uma concentração final de
0,05 pug/mL) diluídos em PBS contendo 0,1% de BSA.
[00150] 12,5uL de Mistura de antidcFc humano de camundongo [Sigma-Aldrich, UK] a 2 ug/mL (para uma concentração final de 0,5 pg/mL) e anticamundongo de caprino Alexa Fluor 647 [Invitrogen, UK] a1ugml (para uma concentração final de 0,25 ug/mL) diluídos em PBS contendo 0,1% de BSA.
[00151] 12,5 uL de esferas revestidas com IZ-CD40L descrito ante- riormente foram adicionados no centro do poço de forma que não se dispersassem para a beirada do poço.
[00152] Após a adição dos reagentes na placa de 384 poços, esta foi incubada à temperatura ambiente durante 6 horas na escuridão e então lida em um sistema AB8200 FMAT [Applied Biosystems, UK]. Exemplo 2 Seleção de dAb para o Clone BMS2h-572
[00153] Três rodadas de seleção utilizando concentrações decres- centes de antígeno (300 nM na rodada 1; 30 nM na rodada 2; 3 NM na rodada 3) foram realizadas em paralelo contra zíper de leucina-CD40L humano biotinilado (IZ-hCD40L) (1,42 mol de biotina/mol de trímero) fornecido pela Bristol-Myers Squibb. O fago proveniente das bibliote- cas de dAb naive 4G e 6G Domantis foram combinados dentro dos grupos a) até h) indicados a seguir antes de iniciar as seleções:
[00154] 4GVH CDR3 comprimentos entre 7 — 9 aminoácidos.
[00155] 4GVHCDR3 comprimentos entre 10 — 12 aminoácidos.
[00156] 4GVHCDR3 comprimentos entre 13 — 15 aminoácidos.
[00157] 4GVK
[00158] 6GVHCDR3 comprimentos entre 7-9
[00159] 6G VH CDR3 comprimentos entre 10-12
[00160] 6G VH CDR3 comprimentos entre 13-15
[00161] 6GVK
[00162] Cada rodada de seleção envolvia a adição da concentração desejada de CD40L biotinilado a uma mistura de fago (proveniente de um dos grupos de biblioteca naive indicados anteriormente ou fago de produção de seleção subsequente) em 1000 ul de 2% de MPBS (So- lução Salina Tamponada com Fosfato contendo 2% (p/v) de Marvel [Premier Foods, UK]) e a incubação à temperatura ambiente durante 1 hora através da mistura em movimento de gangorra. O complexo de fago antígeno biotinilado foi então capturado através da adição de 100 ul de Dynabeads M-280 Streptavidin ressuspensas [Invitrogen, UK] (rodadas 1 e 3) ou 50 ul de M-280 tosylactivated Dynabeads (Invi- trogen) que foram acopladas com NeutrAvidin [Thermo Fisher Scienti- fic, UK] (rodada 2) e incubadas durante 5 minutos com mistura em movimento de gangorra à temperatura ambiente. As Dynabeads foram então recuperadas utilizando um separador magnético KingFisher [Thermo Fisher Scientific, UK] e lavadas 7 x 1 mL de PBST (PBS con- tendo 0,1% (v/v) de monolaurato de polioxietilenossorbitana 20 [Sig- ma-Aldrich, UKJ) seguido por 1 x 1 mL PBS. O fago ligado retido sobre as Dynabeads lavadas foram eluídos através da incubação com 500 uL de tripsina-PBS (50 ul de 10 mg/mL de tripsina [Sigma-Aldrich, UK] dissolvidos em 50 mM de Tris-HCI pH 7,4, 1 mM de CaCl, adicio- nados a 450 ul de PBS). A solução contendo fagos foi recuperada e 250 uL foram utilizados para infectar 1,75 mL de E. coli TG1 em fase de crescimento logarítmico (em uma DOçoo de 0,4) durante 30 minutos a 37ºC. A cultura infectada com o fago de E. coli TG1 foi centrifugada a 11.600 g em uma microcentrífuga durante 1 minuto e a pelota de cé- lulas resultante foi ressuspensa em 1 mL de 2xTY (16 g de Triptona, 10 g de Extrato de Levedura e 5 g de NaCl em 1 litro, autoclavado du- rante 15 minutos a 121ºC) e plaqueada sobre uma placa de Petri de 9 cm contendo meio TYE suplementado com 15 pug/mL de tetraciclina.
As placas foram incubadas durante toda a noite a 37ºC então 2 mL de 2xTY suplementado com 15% de glicerol foram adicionados em cada placa e as células foram desprendidas com um espalhador de vidro e misturadas vigorosamente. Cinquenta microlitros das bactérias raspa- das foram utilizados para inocular 50 mL de 2xTY suplementado com 15 pg/mL de tetraciclina e crescidos durante toda a noite a 37 com agitação a 250 rpm. A cultura realizada durante toda a noite foi centri- fugada a 3.300 g durante 15 min para peletizar as bactérias. Para pre- cipitar o fago, 10 mL de PEG/NaCl (20% de Polietileno glicol 8000, 2,5 M de NaCl) foram adicionados a 40 mL de sobrenadante. A solução de fago/PEG foi misturada e deixada sobre gelo durante 1 h, então centri- fugada a 3.300 g durante 30 min a 4ºC e o sobrenadante foi descarta- do. A pelota foi ressuspensa em 2 mL de PBS e centrifugada a 11.600 g durante 10 min em uma microcentrífuga para remover os restos celu- lares bacterianos remanescentes. O sobrenadante contendo fago re- sultante foi então utilizado para a rodada de seleção seguinte contra a concentração apropriada de IZ-hCD40L biotinilado. ELISA de Fago:
[00163] ELISAs de fago monoclonal foram realizados após as roda- das de seleção 2 e 3. Todas as lavagens foram realizadas utilizando 3 lavagens de 250 ul de PBST seguidas por 3 lavagens de 250 uL de PBS.As placas foram revestidas durante toda a noite a 4ºC com 50 ul/poço de 1 ug/mL de IZ-hCD40L em PBS. As placas foram lavadas e então bloqueadas com 2% de MPBS durante 1 hora à temperatura ambiente. As placas foram lavadas e 25 uL/poço de sobrenadantes de fago foram adicionados a um volume equivalente de 2% de MPBS e incubadas durante 1 hora à temperatura ambiente. As placas foram lavadas e o fago ligado foi detectado com 50 ul/poço de conjugado anti-M13-HRP [GE Healthcare, UK] diluído 1:5000 em 2% de MPBS e incubados durante 1 hora à temperatura ambiente. As placas foram lavadas e o ELISA foi revelado utilizando 50 uL/poço de solução Sure- Blue 1-Component TMB MicroWell Peroxidase [KPL Inc, USA]. A rea-
ção colorimétrica foi interrompida através da adição de um volume e- quivalente de 1 M de HCl e a placa de ELISA foi lida a 450 nm. O fago específico foi identificado através da comparação com poços que não foram revestidos com antígeno, mas foram de outra maneira tratados deforma idêntica. Recuperação de genes dAb do plasmídeo pDOM4:
[00164] Os genes V de dAb provenientes dos produtos das rodadas 2 e 3 foram recuperados através da digestão com enzimas de restrição Sall e Notl do vetor de fago pDOMA4 e ligados dentro de um vetor de expressão pDOMSB digerido duplamente com Sa/l e Notl. ELISA de dAb Solúvel:
[00165] Os dAbs de ligação foram identificados como a seguir. No- venta e seis colônias individuais contendo genes V de dAb clonados dentro do vetor de expressão de dAb solúvel pDOMS5 foram seleciona- das de cada produção em 200 uL de Terrific Broth contendo meio O- nEx Autoinduction [Novagen, UK] e incubadas durante toda a noite a 37º C com agitação a 250 rpm em Costar 96 Well Cell Culture Clusters [Corning Incorporated, USA] seladas com uma tira de plástico adesivo permeável a gás. As culturas foram centrifugadas para peletizar as cé- lulaseos sobrenadantes foram analisados através de ELISA com liga- ção de antígeno para dAbs que se ligavam ao IZ-hCD40L. Imunopla- cas com 96 poços MaxiSorp 96 [Nunc, USA] foram revestidas durante toda a noite a 4ºC com 50 ulL/poço de 1 ug/mL de IZ-hCD40L em PBS. Todas as lavagens ocorreram como descrito para o ELISA de fago. As placas foram bloqueadas durante 1 hora à temperatura ambiente com 200 ul de PBS contendo 1% de Tween 20. A placa de ELISA foi lava- da e o sobrenadante de cultura contendo dAb foi clarificado por centri- fugação a 1.800 g durante 10 min a 4ºC, então adicionado à placa de ELISA (30 uL/poço) à qual foi adicionado um volume equivalente de PBST.As placas foram incubadas durante 1 hora à temperatura ambi-
ente e então lavadas. O dAb ligado foi detectado através da adição de 50 ul/poço de 9E10 [anti-myc IgG, Sigma-Aldrich, UK] diluído 1:2000 em PBST e da incubação durante 1 hora à temperatura ambiente; a placa de ELISA foi então lavada e 50 ul/poço de Fc-HRP anticamun- dongo [Sigma-Aldrich, UK] diluídos 1:2000 em PBST foram adiciona- dos e incubados durante 1 hora à temperatura ambiente. As placas foram lavadas e o ELISA revelado através da adição de 50 yL/poço de solução SureBlue 1-Component TMB MicroWell Peroxidase [KPL Inc, USA] e foi permitido que a coloração se desenvolvesse. A reação colo- rimétrica foi interrompida através da adição de um volume equivalente de 1 M de HCl e a placa de ELISA foi lida a 450 nm. Os dAbs que li- gam ao antígeno foram identificados através da comparação da inten- sidade de sinal de poços com IZ-hCD40L com poços de controle que não continham o antígeno. Exemplo3 Identificação dos Clones BMS2h-503-1, BMS2h-719-2 e BMS2h- 572-6
[001668] Os dAbs BMS2h-503, BMS2h-719 e BMS2h-572 foram submetidos à maturação da afinidade propensa a erros para gerar as linhagens BMS2h-503, BMS2h-719 e BMS2h-572, respectivamente. Esta foi realizada utilizando mutagênese aleatória em que na média 3,6 alterações de aminoácidos foram introduzidas por dAb. As bibliote- cas de fago (tamanho médio de 6x10º) foram selecionadas utilizando CD40L monomérico e trimérico humano biotinilado com captura de es- feras alternante de estreptavidina/neutravidina do antígeno (como des- crito). Três rodadas de seleções utilizando concentrações decrescen- tes de antígeno (100 nM na rodada 1; 10 nM na rodada 2; 1 NM na ro- dada 3) foram realizadas. O sequenciamento foi utilizado para monito- rar a diversidade após cada rodada de seleção. As produções da sele- ção (a rodada 2 selecionada no trímero de CD40L para BMS2h-572;
rodada 3 selecionada no trímero de CD40L para BMS2h-503 e rodada 3 selecionada no monômero de CD40L para BMS2h-719) foram sub- clonadas dentro do vetor de expressão solúvel pDOM13 (no tag C terminal) (como descrito) e verificadas na forma de sobrenadantes de microcultura bacteriana monoclonal por BlAcore para aprimorada taxa de dissociação comparada com clones parentais sobre o CD40L tanto monomérico quanto trimérico. Os variantes aprimorados identificados tiveram seu DNA sequenciado e os dAbs únicos foram expressos, pu- rificados e então analisados utilizando o RBA com esferas de BMS2h bem como ensaios controlados por CD40L celular (como descrito). Como um resultado, os dAbs BMS2h-503-1 (sequência listada na TABELA 3), BMS2h-719-2 e BMS2h-572-6 (sequências listadas na TABELA 1) foram identificados. As atividades destes dAbs estão lista- das na TABELA 5 a seguir.
Formatação de BMS2h-503-1, BMS2h-719-2 e BMS2h-572-6 na forma de fusões de Fc
[00167] Os dAbs BMS2h-572-6, BMS2h-503-1 e BMS2h-719-2 fo- ram clonados no vetor pPDOM38 contendo cauda Fc derivada de I9G1 humana para criar DMS0502, DMS0500 e DMSO0501, respectivamente.
Os dAbsBMS2h-572-6, BMS2h-503-1 e BMS2h-719-2 também foram clonados no vetor pDOM38 contendo cauda Fc derivada de IgG4 hu- mana para criar DMS0505, DMSO0506 e DMSO0504, respectivamente. As construções foram expressas de forma transitória em células HEK293 e as proteínas foram purificadas utilizando Proteína A. As fu- sões de Fc purificadas foram analisadas por Biacore em relação à li- gação ao CD40L monomérico e trimérico bem como em vários ensaios celulares (como descrito). Identificação dos clones BMS2h-572-608, BMS2h-572-614 e BMS2h-572-619
[00168] OdAbBMS2h-572-6foisubmetidoà maturação da afinida-
de utilizando a abordagem de "doped" oligo. Quatro bibliotecas "do- ped" foram construídas para este dAb:
[00169] Biblioteca 1 — 5 resíduos na CDR1 diversificados
[00170] Biblioteca 2 — 6 resíduos na CDR?2 diversificados
[00171] Biblioteca3-13 resíduos na CDR2 diversificados
[00172] Biblioteca 4 — 7 resíduos na CDR3 diversificados
[00173] Em cada biblioteca, a diversificação foi realizada utilizando códons nnS em que n mantinha uma fração grande da base original (85%) e separação do resto entre as quantidades equimolares das três bases remanescentes (5% cada) e S representa G ou C. As bibliote- cas de fago (tamanho médio de 8x10º) foram selecionadas utilizando CD40L monomérico e trimérico humano biotinilado com captura de es- feras de estreptavidina/neutravidina alternada do antígeno (como des- crito). As bibliotecas 2 e 3 foram reunidas durante o processo de sele- ção. Três rodadas de seleções utilizando concentrações decrescentes de antígeno (50 nM na rodada 1; 5 nM na rodada 2; 1 NM na rodada 3 com excesso de 200 vezes do competidor — trímero de CD40L não biotinilado) foram realizadas. O sequenciamento foi utilizado para mo- nitorar a diversidade após cada rodada de seleção. As produções de seleção (rodadas 2 e 3) foram subclonadas dentro do vetor de expres- são solúvel pDOM13 (sem tag C terminal) (como descrito) e verifica- das na forma de sobrenadantes de microcultura bacteriana monoclonal por BlAcore em relação a aprimorada taxa de dissociação comparada com o de clones parentais sobre CD40L tanto monomérico quanto tri- mérico. Os variantes aprimorados identificados tiveram o DNA se- quenciado e os dAbs únicos foram expressos, purificados e então ana- lisados utilizando o RBA de esferas de BMS2h bem como ensaios con- trolados por CD40L celular (como descrito). Como um resultado, os dAbs BMS2h-572-608, BMS2h-572-614 e BMS2h-572-619 foram iden- tificados.
Construção do clone BMS2h-572-633
[00174] A análisede sequência revelou que todos as diferenças de aminoácidos entre BMS2h-572-608 e o dAb parental BMS2h-572-6 estavam localizadas na CDR1 e as diferenças entre BMS2h-572-614 e dAb parental BMS2h-572-6 estavam localizadas na CDR3. Ambos os dAbs maturados compartilhavam CDR2 com o dAb parental BMS2h- 572-6. Isto criou uma oportunidade de construir um mutante de combi- nação que tinha CDR1 de BMS2h-572-608 e CDR3 de BMS2h-572-
614. Em primeiro lugar, a região de CDR1 de BMS2h-572-608 foi am- plificada por POR. Em segundo lugar, o fragmento CDR2+CDR3 de BMS2h-572-614 foi amplificado por PCR. Isto foi seguido pela monta- gem de SOE PCR dos dois fragmentos para criar um mutante de com- binação BMS2h-572-633. O produto de PCR de dAb montado foi clo- nado no vetor de expressão solúvel pDOM13 (sem tag C terminal), a sequência foi verificada, expressa, purificada e então analisada utili- zando o RBA com esferas de BMS2h bem como ensaios controlados por CD40L celular (como descrito). Formatação de BMS2h-572-633 como uma fusão de Fc
[00175] OdAb BMS2h-572-633 foi clonado no vetor pDOM38 con- tendo cauda de Fc derivada de IgG1 humana para criar DMS0507. À construção foi expressa de forma transitória em células HEK293 e a proteína foi purificada utilizando Proteína A. A fusão de Fc purificada foi analisada por Biacore em relação à ligação com CD40L monoméri- co e trimérico bem como em vários ensaios celulares (como descrito). Exemplo4 Ensaios Celulares de Atividade de CD40L
[00176] Os dAbs anti-CD40L humano foram analisados funcional- mente em relação a sua capacidade de antagonizar as atividades de CD40L. As atividades de CD40L testadas foram a proliferação de célu- lasBea produção de citocinas através da ativação controlada por hCD40L de células dendríticas (DCs) derivadas de monócitos primá- rios. A não ser que seja citado o contrário, todos os ensaios foram rea- lizados em meio RPMI suplementado com 10% de soro fetal de bezer- ro (FCS). Os resultados de vários ensaios, descritos em detalhes a seguir, são mostrados na TABELA 5 e na TABELA 6. Proliferação de células B humanas primárias controladas por IZ- hCDA40L solúvel:
[00177] 1x10º células B humanas da amígdala foram incubadas com 0,6 ug/mL de IZ-hCD40L junto com titulação variável de dAb ou mMAb em um volume final de 200uL/poço em uma placa de fundo arre- dondado de 96 poços. As placas foram incubadas a 37ºC durante 72 horas após as quais timidina (º?H; 0,5 pci/poço) foi adicionada durante 6 horas. A proliferação de células B foi quantificada com base na in- corporação de timidina. Todos os ensaios, a não ser que seja citado o contrário, foram realizados em meio RPMI suplementado com 10% de soro fetal de bezerro (FCS). Proliferação de células B humanas primárias controlada por CHO- hCDA40L:
[00178] As células CHO foram transfectadas com CD40L humano paragerar uma linhagem de célula estável expressando altos níveis de CD40L sobre a superfície celular. As células CHO-CDA40L foram irradi- adas a 10.000 Rads antes da incubação com células B humanas. 1x10º células B humanas da amígdala foram incubadas com 1x10º cé- lulas CHO-CDA40L (proporção de 1:100 de CHO-CD40L: células B hu- manas) junto com a titulação variável de dAb ou mAb em um volume final de 200uL/poço em uma placa de fundo arredondado de 96 poços. As placas foram incubadas a 37ºC durante 72 horas após as quais ti- midina (?H; 0,5 pci/poço) foi adicionada durante 6 horas. A proliferação de células B foi quantificada com base na incorporação de timidina. Todos os ensaios, a não ser que seja citado o contrário, foram realiza-
dos em meio RPMI suplementado com 10% de soro fetal de bezerro (FCS). Proliferação de células B humanas controlada por células T pri- márias:
[00179] As célulasT foram isoladas de células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) humano e enriquecidas utilizando afinidade de células sanguíneas vermelhas de caprino (SRBC). As células T humanas enriquecidas foram cultivadas com PM-LCLs (linhagem de célula B transformada com EBV; irradiada a 10.000 Rads) em uma proporção de 5:1 (T:LCL) durante 6 dias a 37ºC para gerar uma popu- lação de células T alogenéticas. No dia 6, as células T expandidas fo- ram isoladas e irradiadas a 3000 Rads e então cultivadas (5x10º célu- las T/poço) com células B de amígdala humanas primárias (1x10º célu- las B/poço) em uma proporção de 1:2 em placa de fundo chato de 96 poços revestida com mAb anti-CD3 (OKT3). Titulações variáveis de dAbs/mAbs foram adicionadas em cada poço; o volume final em cada poço era de 200 uL. As placas de teste foram incubadas a 37ºC duran- te 3 dias. A proliferação de células B humanas foi determinada através da adição de timidina (º*H; 0,5 pci/poço) nas culturas ao longo das últi- vas18 horas. Todos os ensaios, a não ser que seja citado o contrário, foram realizados em meio RPMI suplementado com 10% de soro fetal de bezerro (FCS). Em alguns casos, o sobrenadante foi coletado e medido em relação à presença de IL-6. Ativação controlada por CHO-hCD40L de células dendríticas (DCs) derivadas de monócitos humanos primários:
[00180] As PBMCs humanas foram enriquecidas em relação aos monócitos através da eliminação de células T via restauração de SRBC. As PBMCs enriquecidas com monócitos foram cultivadas com 10 ng/ml de GM-CSF e 5 ng/mL de IL-4 em placas de 6 poços durante seis dias a 37ºC. As placas cultivadas foram reabastecidas com meio fresco (com GM-CSF e IL-4) nos dias 2 e 5. As DCs imaturas foram utilizadas nos ensaios de células no dia 6. 8x10º DCs imaturas foram cultivadas com 4x10º células CHO-hCD40L (irradiadas a 10.000 Rads) junto com titulações variáveis de dAbs/mAbs em uma placa de fundo chato de 96 poços.
Após 24 horas, os sobrenadantes foram coletados e testados em relação à presença de várias citocinas (IL-12, TNF, IL- 23). A ativação das DCs foi determinada através dos níveis de produ- ção de citocina.
Todos os ensaios, a não ser que seja citado o contrá- rio, foram realizados em meio RPMI suplementado com 10% de soro fetal de bezerro (FCS). TABELA 5 Potência de Moléculas de dAb Monoméricas em Vários Ensaios com Células Primárias Proliferação | Proliferação de de células B células B hu- 4 Ativação de DCs GCions) humanas manas contro- MER) de células controlada por controlada lada por CHO- EC50 (nM) CHO-hcD40L por hiZCD40L hcD40L IL-12 EC50 (nM) EC50 (nM) EC50 (nM) 888,0, >2000,0, 2911613 | 130,0+40,0 | 1309.0, 700,0 | 1000,0 2h116-1312 23,0 +3,0 530,0 + 300,0 234 + 46 112,0 +47,0 2h116-1313 29,0 + 4,0 211,0, 334,0 258 + 79 136,0 + 51,0 2h116-1314 | 41,0+10,0 | 1300,0,4400,0 1687 + 1150 664,0 + 353,0 2h116-1319 | 180,0 +57,0 >7000,0 o 2h116-1320 20,0 + 7,0 138,0 + 60,0 191 +72 32,0 + 10,0 2h437 5700,0 + 1800 [| 2h437-4 203,0 + 90,0 >7000,0 | |] 132904120 2h492 EXU RC E | 204923 |1100,0+400,0 ECT RR 2h492-4 | 1700,0 + 900,0 >7000,0 2h492-5 — | 2300,0 + 700,0 |U | 2h492-6 1400,0 2h492-7 | 1900,0 + 600,0 |U | 6100,0 + 2h494 1200,0 4800,0 + 2h494-2 2300,0 2h494-3 EVORA RR 2h494-4 | 590,0+250,0 >7ooa,0 Po 2h494-6 2100,0 >7000,0 | 29508 |[4200,0+316,0 PTB 2h503-1 24,0 +2,0 2300,0 + 700,0 Fm F56,0+333,0 2h503-104 16,07 190
Proliferação | Proliferação de decélulas B | células Bhu- | nm R de células | Ativação de DCs humanas manas contro- T-B controlada por controlada lada por CHO- EC50 (nM) CHO-hcD40L por hiZCD40L hcp4oL I1L-12 EC50 (nM) EC50 (nM) EC50 (nM) | 205032 | 440+60 /30000+1000.0 | | 15620+960 | ans aaa | 2ns7es | 2om0s7ao | cromo | cromo | O Gsao oo | 2h572-6 208,0 + 73,0 >7000,0 >7000,0 260,0 | 20572-604 | 254,0,3540 | >7000 [UU | 380 | | 29572608 | 960x19,0 | [| >70000 | 1520+610 | | 20572610 | 1090340 | [| =>700060 | 2070:870 | | 20572614 | 930x580 | | =>70000 | 1350:540 | | 20572616 | 20403400 | [| >7000 | G6080+1360 | | 20572617 | 1570,1890 | | =>700060 | 3380+1010 | | 20572622 | 3010209830 | | >70000 | 2810:1270 | | 20572623 | 1810,2861,0 | | >7000 | 2800+730 | | 20572630 | 1030871,0 UP | 2460+2400 | | 2h572-631 || 1080 FP O 230,0+2000 | | 2h572-632 | 1170970 SS 2410+1900 | | 2h572-633 | 2004150 530+600 | | 2h572-634 [310180 770+670 | | 2h572635 | 290190 NA o 620+260 | | 205729 | 3240/2430 20000 -— | | 29057211 | 1400330 | >70000 [| | 6710+1650 | | 2057212 [| 790760 NA ps 2250,>20000 | | 2057214 | 1340720 | >70000 [| "| 8820+3100 | | 2057215 | 1680670 | >70000 [| "| 8760+3910 | | 2h572-22 | 367,0 305,08 ano aaa anos aaa anos aaa ano aaa ano aaa ani aaa az aaa | 20719 | 6000+6400 UU [E "| 1340,6460 | | 207192 | 820+x390 | >70000 [| | 1960+1500 | | 20719-202 | 290120 NNNAAdP 790+290 | | ah719-2038 810, dB | 2h719-213 | 62,0, 980 | 2h719-214 | 660, 80 Lanza aaa a aaa ra BB | 20719-225 | 2530, 1980 AP o 1760+840 | | 20719-226 | 1640.2470 UP | 8120+530 | | 2071912 | 36801590 [PN | 2660+660 | Cores | seoso [EHETBel emesmo | 2h719-13 50,0 + 8,0 4450,0, 1750,0 219,0 + 88,0 | 20719-17 | 1320500 | 2360/2660 | | 7130+490 | 202,0, >7000,0, >7000,0, 2h719-19 138,0 + 31,0 3800,0, 5400,0 184,0 + 99,0 a aaa NNENZ0 RE RR RR
Proliferação | Proliferação de de células B | células Bhu- | nm ÀR de células | Ativação de DCs Clone humanas manas contro- T-B controlada por controlada lada por CHO- EC50 (nM) CHO-hcD40L por hIiZCD40L hcDp40L I1L-12 EC50 (nM) EC50 (nM) EC50 (nM) | amas É o 2h725 1200,0 | an7as-a o raaa a | an7asa ras | anzas- 1a | raaa a Lanza ras Lanza aaa [amar É so 2h731 2500,0 o anzaa o aaa as a 3500,0, 2h745 >7000,0 LL anzas to araaa a LL anzas-2 | >roaa o LL anzas-o o sraaa o | 2n7a5-13 [O >70090 | | anzas ta aaa ara aaa ara aaa asa BB o 2hzsa esa BEBA az | 6400 E BEBO [ams É so 2h758 1500,0 Lanza t o rasa | an7se-2 ras | an7s8-3 ros Lanza ras Lanza 7aaa a Lo anzes raaa o anzes o ras Lanza ras Lanza ras Lanza ras Lanzar aaa Lanza araaa a Lanza aaa Lanza aaa a DE 2h785 >7000,0
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Exemplo 5 Cinética de Ligação e Afinidade ao CD40L de Vários Anticorpos
[00181] BMS-986004 é uma proteína de fusão dimérica, composta de um fragmento Fc modificado de IgG1 ligado ao terminal C do dAb BMS2h-572-633. A ressonância de plasmon de superfície (SPR) foi utilizada para caracterizar a cinética e a afinidade de BMS-986004 ou a ligação do anticorpo de domínio de componente monovalente BMS2h-572-633 ao CD40L. Os valores de BMS-986004 foram compa- rados com aqueles para os anticorpos de referência 5c8-l9G1 e 5c8- CTeofragmento FAB do componente monovalente de 5c8. Os expe- rimentos de SPR utilizavam uma construção de hcD40L contendo um motivo de zíper de isoleucina N-terminal (IZ-hCD40L) que facilita a montagem específica da molécula de CD40L na forma trimérica nativa. Uma versão biotinilada de IZ-hCD40L (biot-IZ-hCD40L) com atividade de ligação equivalente também foi utilizada para alguns experimentos de SPR.
[00182] O anticorpo de domínio monovalente BMS2h-572-633 se liga ao biot-IZ-hCD40L com uma Kd de 7,8 nM, comparada com uma afinidade de 5,4 nM para o fragmento FAB monovalente de 5cê8, TABELA 7. Devido ao fato de que o BMS-986004 é bivalente e o alvo IZ-hCD40L é trivalente, os dados de ligação de SPR são influenciados independentemente do fato do alvo CD40L estar sobre a superfície de um chip ou em solução. Para estimar a afinidade de ligação influencia- da pela avidez, os dados de SPR para a ligação de BMS-986004 a uma superfície de biot-IZ-hCD40L foram ajustados para um modelo de Langmuir de 1:1, sugerindo uma constante de dissociação de menos que 1 nM, TABELA 7. Resultados similares foram obtidos para 5c8- IgG1 e 5c8-CT. TABELA 7 Cinética e valores de afinidade de IZ-hCD40L que são determina-
dos utilizando SPR (Biacore) CD40L tura (ºC! 986004 11 FAB de 5c8 11
[00183] O valor é influenciado pela avidez devida à bivalência do analito.
[00184] AFIG.5 mostra dados de sensorgrama de SPR para a li- gação de 12,5-0,39 nM de BMS-986004 (série de diluição de 2:1) com biot-IZ-hCD40L capturado sobre um chip sensor de SPR com estrep- tavidina a 25 ºC. As linhas coloridas mostram os dados de sensorgra- ma com referência dupla e as linhas em preto mostram o ajuste de Langmuir 1:1 aos dados, com um valor de Kd aparente influenciado pela avidez de 0,11 nM.
[00185] A afinidade e a termodinâmica da ligação de BMS-986004 ao CD40L também foram caracterizadas em solução utilizando calori- metria de titulação isotérmica (ITC) a temperaturas variando de 15 37ºC. Estes dados sugeriam a presença de vários modos de ligação termodinamicamente distintos (FIG. 6) com valores de Kd para os mo- dos diferentes além do limite de detecção de alta afinidade (Kd <2 nM) (TABELA 8), coerente com os dados de SPR. A afinidade do fragmento FAB monovalente de 5c8 FAB por IZ-hCD40L que é determinada por ITC (3,5 nM) também era coerente com o valor determinado por SPR.
TABELAS Afinidade de IZ-hCD40L que é determinada utilizando ITC
| IZ-hcD40L Exemplo 5 Afinidade do receptor de Fc de Vários Anticorpos
[00186] O domínio Fc de BMS-986004 (denominado "CT") foi enge- nheirado partindo de um domínio Fc de IgG1 do tipo selvagem para manter a capacidade de se ligar a FCRn, mas para interromper a liga- ção a receptores de Fcy. Para confirmar que a molécula engenheirada possui o perfil de ligação do receptor de Fc desejado, as afinidades de ligação de BMS-986004 por FcRn humano e os receptores de Fcy humanos CD64 (FcyRI)) CD32a (FcyRlla),) CD32b/c (FeyRllb/c), CD16a (FeyRllla),) CD16b (FeyRlllb) foram medidas utilizando SPR, em comparação com 5c8-lgG1 e 5c8-CT. Para estes experimentos, o BMS-986004 foi capturado através dos domínios do anticorpo de do- mínio sobre uma superfície de sensor de biot-IZ-hCD40L e as proteí- nas do receptor de Fc solúveis foram testadas em relação à ligação como domínio Fc exposto. Similarmente, 5c8-l9G1 e 5c8-CT foram capturados sobre uma superfície de biot-IZ-hCD40L através dos domí- nios de FAB, com ligação ao FcR solúvel.
[00187] O BMS-986004 se ligava ao FcºRn com Kd de 670 nM em pH 6,0 que é o pH relevante para a ligação dentro do endossomo, TABELA 9. Entretanto, a ligação era significativamente reduzida (Kd >5000 nM) em pH neutro sugerindo a liberação eficiente de FCcRn sob estas condições. BMS-986004 se ligava ao CD64 com uma Kd de 0,6 nM e tinha uma afinidade estatisticamente fraca por CD32a, CD32b/c, CD16a e CD16b (Kd >3000 nM). Tanto 5c8-lgG1 quanto 5c8-CT ti- nham uma afinidade por FcRn similar à do BMS-986004. 5c8-CT, que possui a região de Fc "CT" idêntica à do BMS-986004, também tinha propriedades deligação ao FcyR similares àquelas do BMS-986004, enquanto que 5c8-lgG1, que possui um domínio Fc de IgG1 do tipo selvagem, se ligava mais fortemente aos FcyRs, TABELA 9. TABELA 9 Afinidade ao receptor de Fc que é determinada utilizando SPR (Biacore). Kd de BMS- Kd de 5c8-lgG1 Kd de 5c8-CT 986004 (nM) (nM) (nM) [FR e o 6 sao 720 hFeRn [DR TI | es — 5 | 6:05 |
[00188] Aligaçãode CD32a a 5c8-lg9G1 era bifásica. A Kd foi esti- mada como —-10” M baseada no ajuste de estado estacionário ao e- vento de ligação dominante. Esta Kd está na faixa de KD relatada na literatura para a ligação de CD32a à IgG1. Exemplo 6 Ensaios à Base de Células /n-Vitro
[00189] A potência de BMS-986004 foi avaliada em vários ensaios de células imunológicas primárias para garantir potência robusta atra- vés de tipos de células diferentes. Os ensaios de proliferação de célu- las B humanas primárias foram conduzidos de duas maneiras, que são descritas em detalhes no Exemplo 4 anterior: (1) o trímero de CD40L recombinante foi utilizado para controlar a proliferação de células B; e (2) as células CHO expressando CD40L sobre a membrana (CHO- CD40L) foram utilizadas para induzir a proliferação de células B. A uti- lidade de células CHO-CDA40L era particularmente importante para ga- rantir que sinais provenientes do CD40L ligado à membrana fossem inibidos igualmente bem quando comparado com o trímero de CD40L solúvel. As células CHO-CD40L também foram utilizadas para contro- lar a ativação de DCs humanas primárias diferenciadas partindo da cultura de monócitos derivados de PBMCs na presença de GM-CSF e
IL-4. Similarmente, o ensaio de T-B MLR media a ativação de células B controlada pelo CD40L presente sobre as células T ativadas. Em todos os ensaios primários descritos anteriormente, o BMS-986004 era equipotente ao mAb 5c8 de referência: as potências variavam de nM comum único dígito até sub-nM, dependendo do ensaio (TABELA 10). TABELA 10 Potência de BMS-986004 em Vários Ensaios de Células Primárias ECSO(NM) ECSO(NM) ECSO(NM) ECSO(NM) ECSO(nM) EC50(nM) EC50 (NV) do Ensaio do Ensaio de deT-B dell-6deT- dell-12do dell-6do deTNF-a mo cambios o ME A Disco AsDES MAWdAb-Fc trimero — CD40L AL o AO se6 ha! 8219 20:20 34 501s 021 + 006 082 5964 07305 23H13 Sã 5,0 +0,5 1,0+:0,5º 0,16+005 0,13+04 31+16 19+0,6 36H11 Exemplo 7 Avaliação da Ocupação do Receptor (RO) no Sangue Total
[00190] Um método de ocupação do receptor foi desenvolvido para medir o comprometimento do alvo CD40L pelo BMS-986003 em amos- tras de sangue total de macacos cynomolgus e, subsequentemente, no BMS-986004 em amostras de sangue total humano. O BMS- 986003 é um dAb que compartilha a mesma sequência de aminoáci- dos que ado BMS-986004, exceto por um resíduo de glicina não nati- vo em seu terminal amino.
[00191] A ocupação é medida sobre as células T CD4+ por citome- tria de fluxo utilizando um mMAb anti-CD40L que compete pela ligação ao CD40L com BMS-986003 / BMS-986004 e reage de forma cruzada com CD40L humano e de macaco cynomolgus. Na presença de dAb ligado, o mAb de detecção anti-CD40L é bloqueado de se ligar ao CD40L de uma maneira dependente da concentração, fornecendo uma medida da ocupação do alvo. Considerando que o CD40L basal é expresso em baixos níveis sobre células T em repouso no sangue pe-
riférico, a RO foi avaliada tanto em amostras de sangue não estimula- das quanto em amostras em que a fitohemaglutinina (PHA) foi utilizada para induzir a regulação para mais de CD40L sobre a superfície de células T. As curvas de potência de ligação foram geradas após o tra- tamento do sangue total ex vivo com BMS-986003 e BMS-986004. Os valores médios de ECs5,o e EC9, obtidos são mostrados na TABELA 11. TABELA 11 Potência de Ligação de BMS-986003 e BMS-986004 sobre células T CD4+ no Ensaio de Ocupação do Receptor no Sangue Total ex vivo BMS-986003 | n | ECsomédia,nM|ECs, média, nM | Humano (basal) Humano (induzido por
PHA Cyno (basal) Ps go Cyno (induzido por PHA
RR RR RC BMS-986004 o Humano (basal) Humano (induzido por
[00192] A potência de ligação ao alvo no sangue total para BMS- 986003 e BMS-986004 se correlaciona intimamente entre o ser huma- no e o macaco cynomolgus. Os valores de ECso, para BMS-986003 e BMS-986004 também são similares quando ligados ao CD40L basal e induzido por PHA. Adicionalmente, estes valores são comparáveis com aqueles obtidos em ensaios à base de células humanas in vitro (vide a TABELA 10). Com base nos valores de ECºo medidos, a satu- ração completa do alvo no sangue periférico deve ser atingida em concentrações < 10nM.
[00193] Para sustentar o perfil de PK/PD pré-clínico de BMS- 986003 e BMS-986004, a RO foi avaliada tanto no estudo com KLH em macaco cynomolgus (imunização com hemocianina da lapa do bu- raco da fechadura) com BMS-986003 quanto no estudo de ligação com IV com BMS-986004. Os detalhes adicionais destas descobertas podem ser encontrados nos Exemplos a seguir. Exemplo 8 Farmacologia In vivo
[00194] Para mostrar a eficácia de um dAb de CD40L em modelos de doença em camundongos, um dAb de CD40L de camundongo 2m126-24 foi formatado com Fc de IgG1 de camundongo com a muta- ção pontual D265A para diminuir adicionalmente a função efetora de Fc. Este dAb substituto de camundongo 2m126-24-Fc mostra potência comparável àquela de BMS-986004 e MR-1, um anticorpo anti-CD40L de camundongo de hamster (TABELA 12). TABELA 12 Comparação da Potência In vitro EC50 (nM) do Ensaio — EC50 (nM) do Ensaio EC50 (nM) de IL-6 mandanro Ps Rm Ta O DA com CHO-CD4OL Ser Humano Í Sc8 8,0 3,0 20+20 BMS-986004 5,0 +0,5 1,0 +0,5 1,9+0,6 Camundongo Í 2m126-24-Fc 4,7 +0,9 0,4 +0,06 0,5 +0,2 MR-1 (mAb) 1,7 +04 0,6 +0,2 0,6 +0,3 Inibição da Resposta de Anticorpo Induzida por KLH pelo dAb de CDA40L de Camundongo
[00195] Fêmeas de camundongos BALB/c receberam injeção de forma intraperitoneal (i.p.) de 250 ug de KLH no dia 0. Os camundon- gos foram dosados de forma subcutânea (s.c.) com MR-1 ou BMS-2m- 126-24-Fc nas doses indicadas no dia -1 e no dia 6. O sangue foi cole- tadoeo soro foi analisado em relação à IgM anti-KLH no dia 7 e IgG no dia 14 por ELISA. O soro dos camundongos BALB/c coletado no dia 14 após a imunização com KLH foi agrupado e utilizado como um comparador positivo e os dados são expressos na forma de uma pro- porção do título do soro de teste em relação ao título do soro de BALB/c agrupado. Como mostrado na FIG. 7, BMS-2m-126-24-Fc de-
monstrava uma supressão dependente da dose de títulos de IgG com efeito máximo mostrado em 3 mg/kg, com EDB50 calculada como sen- do de 0,26 mg/kg. Tanto o dAb de CD40L quanto o anticorpo foram testados em 1 mg/kg, mostrando uma redução de 70% vs. 30% na resposta de IgG, respectivamente. Uma exposição similar do dAb e do anticorpo foi observada em 1 mg/kg, sugerindo que o dAb é ligeira- mente mais potente que o anticorpo na supressão da resposta de IgG induzida por KLH. Em conclusão, o dAb de CD40L demonstrou pelo menos o mesmo nível de eficácia que o anticorpo anti-CD40L na inibi- çãode uma resposta de anticorpo dependente de células T. Inibição da Colite Induzida por TNBS pelo dAb de CD40L de Ca- mundongo
[00196] Machos de camundongos SJL/J receberam administração intratecal de 2,5 mg de ácido Trinitrobenzeno sulfônico (TNBS) em 50% de EtOH através de um cateter inserido a 4 cm de distância do ânus. Os camundongos foram dosados uma vez s.c. com MR-1 ou BMS-2m-126-24-Fc nas doses indicadas 4 horas antes da injeção de TNBS. A FIG. 8 apresenta as alterações no peso corporal médio e a porcentagem de sobrevivência de grupos de camundongos tratados com PBS/IgG ou níveis de doses variáveis de MR-1 ou do dAb. O Aba- tacept foi utilizado como um controle positivo (20 mg/kg, i.p. em dias alternados). Um perfil típico de colite induzida por TNBS foi mostrado no grupo de controle de IgG: perda de peso corporal, com máximo no dia 3-4; morte relacionada à colite ocorrendo no dia 3 e mais tarde; e os camundongos que sobreviveram mostrando sinais de recuperação após o dia 4. O tratamento com o dAb de CDA40L ou o anticorpo (am- bos testados em 2, 8 e 20 mg/kg) causou inibição dependente da dose da perda de peso corporal e o aumento na taxa de sobrevivência; am- bos os compostos em 8 mg/kg produziram um grau de eficácia que é comparável aquele do Abatacept em 20 mg/kg. Em conclusão, o dAb de CD40L de camundongo BMS-2m-126-24-Fc demonstrou eficácia comparável àquela do anticorpo anti-CD40L MR-1 em um modelo de colite aguda induzida por TNBS. Efeito Sinérgico entre CTLA4 Ig e o dAb de CD40L de camundon- gqgoemum Modelo de Transplante de "Coração-para-Ouvido" em Camundongos
[00197] Enxertos de coração provenientes de camundongos C57BI/6 neonatais (48-72 h) foram implantados dentro da bolsa subcu- tânea criada nas aurículas do ouvido de camundongos BALB/c. Os camundongos foram tratados com CTLA4-Ig (i.p. 2x/(semana), BMS- 2m126-24-Fc (s.c. 1X/semana) ou combinação de ambos nas doses indicadas, com a primeira dosagem iniciada no dia antes do transplan- te. O tempo de rejeição foi definido pela ausência de contratilidade cardíaca durante três dias consecutivos que é avaliada diariamente pelo dispositivo de eletrocardiograma (ECG) de aloenxerto. Como es- perado, sem qualquer tratamento, os camundongos C57BL/6 que re- ceberam o coração de BALB/c neonatal rejeitaram o enxerto logo após o mesmo, com tempo de sobrevivência médio (MST) de 12 dias. À monoterapia com 3, 20 mg/kg do dAb ou 25 mg/kg de CTLA4-Ig teve nenhum ou pouco impacto sobre o prolongamento da sobrevivência do aloenxerto (MST: 12, 15 e 13 dias respectivamente). Entretanto, nos grupos tratados com combinação de 20 mg/kg do dAb e 25 mg/kg de CTLA4-lg, a sobrevivência do enxerto foi significativamente prolonga- da exibindo MST de 35 dias (FIG. 9). Estes dados forneceram funda- mento lógico para a combinação de dAb de CD40L com belatacept em pacientes humanos de transplante renal. Estudos de transplantes futu- ros em primatas não humanos definirão adicionalmente o nível de do- se e avaliarão o efeito potencia sobre a indução de tolerância com dAb de CD40L BMS-986004. Exemplo9
Farmacocinética (PK) e Farmacodinâmica (PD) Não Clínicas /n vi- vo
[00198] Vários estudos in vivo foram conduzidos para caracterizar a PK e a PD de BMS-986004, BMS-986003 e um substituto de dAb de CD40L-Fc de camundongo BMS-2m-126-24-CT, no cenário não clíni- co. As descobertas principais estão resumidas a seguir.
ELISA para medir dAb BMS-986004
[00199] Métodos bioanalíticos baseados no ensaio de imunoabsor- vância ligada à enzima (ELISA) foram desenvolvidos para apoiar os estudos de PK, os estudos de eficácia aguda e crônica em camundon- gos e estudos de PK/PD exploratórios empregando macacos cyno- molgus. Em todos os casos, o sangue total foi obtido e o plasma foi preparado na presença de EDTA, as amostras foram então submeti- das à análise de ELISA.
[00200] As concentrações no plasma de BMS-986004 foram medi- das com um ensaio de ELISA que utilizava o antígeno CD40L humano para capturar o analito das amostras de teste. As amostras de teste foram descongeladas a 4ºC, misturadas bem e diluídas 1:100 no dilu- ente do ensaio composto de 1x PBS, 0,05% de Tween-20 e 1% de BSA(PTB).Foram feitas diluições subsequentes da amostra utilizando 1% de plasma de macaco normal/PTB como diluente. Isto permitiu que o analito de teste fosse analisado em várias diluições (10º — 10%) en- quanto a matriz da amostra era mantida a 1%.
[00201] O CDA40L trimérico humano recombinante foi obtido da Pro- tein Structure and Science (PSS), LVL e foi ligado a placas de 96 po- ços em uma concentração final de 2 ug/mL. As amostras de teste, as amostras de controle de qualidade (CQ) e os padrões foram detecta- dos com anticorpo policlonal antiestrutura do domínio de cadeia pesa- da (Vh) de coelho purificado por afinidade (Covance Research Pro- ducts, Denver, PA) diluído em uma concentração de 0,25 ug/ml em
PTB, seguido pelo anticorpo secundário policlonal anticoelho de burro marcado com peroxidase de raiz forte (Jackson Immunoresearch, West Grove, PA) com o substrato (TMB - tetrametilbenzidina) adicio- nado e a reação enzimática interrompida com 1 M de ácido fosfórico. À — absorbância foi medida em um comprimento de onda de 450 nm. À análise de BMS-986004 nas amostras de teste foi conduzida utilizando uma curva padrão. Calibradores de curva padrão preparados no dia de cada corrida em 1% de plasma de macaco foram utilizados para definir a faixa dinâmica do método bioanalítico. A faixa da curva padrão resul- tante em 100% de plasma era de 10 - 1200 ng/mL. O padrão de refe- rência para BMS-986004 foi obtido na Biologics Process and Product Development (BPPD), HPW. O material padrão de referência era re- presentativo da batelada de manufatura e foi utilizado no protocolo do estudo. Curvas padrões e CQs foram avaliados utilizando critérios pa- ra acurácia e precisão de < 20% que foram considerados como sendo aceitáveis para o desempenho do ensaio. As amostras de teste foram quantificadas utilizando um modelo de regressão com ajuste logístico de 4 parâmetros pesado pela concentração recíproca (1/x) derivada dos calibradores.
[00202] O desempenho das amostras de CQ, medido através do desvio da concentração calculada partindo de seu valor nominal indi- cou que o material de referência era estável no plasma de macaco pu- ro em concentrações de 30 - 1000 ng/mL quando armazenado a -70º C durante mais de 2 meses.
ELISA para medir o dAb substituto de camundongo
[00203] O dAb específico para CD40L de camundongo BMS-2m- 126-24-CT foi medido em amostras de plasma de camundongo para fornecer dados de exposição no suporte de vários estudos de eficácia agudos e crônicos bem como na avaliação da PK.
[00204] Embora o formato do ensaio para dAbs de camundongo fosse bastante similar aquele para dAbs humanos em amostras de Macaco, havia algumas diferenças. A matriz do plasma de camundon- go foi diluída para 1:10 (10%) no diluente do ensaio e todas as dilui- ções subsequentes das amostras de teste foram feitas utilizando 10% de matriz decamundongo. Similarmente, todos os padrões e os CQs também foram incubados sobre placas de ELISA em 10% de plasma de camundongo. A concentração de BMS-2m-126-24-CT nas amos- tras de teste provenientes dos camundongos foi medida utilizando CDA40L de camundongo para capturar o analito. Uma vez que o dAb de camundongo possui estrutura de Vk, todas as amostras de teste, os COQs e os padrões foram detectados com anticorpo policlonal antido- mínio kappa (Vk) de coelho purificado por afinidade (Covance Resear- ch Products, Denver, PA) diluído a uma concentração de 0,5 ug/mL em PTB. O resto do ensaio e o procedimento de análise eram simila- res ao procedimento para a análise de dAbs de CD40L humano. Os critérios de aprovação para concentrações retro calculadas de padrões e CQs também eram similares aqueles para dAbs de CD40L humano. A faixa quantitativa de BMS-2m-126-24-CT que é determinada partin- do da curva padrão era de 12,5 até 600 ng/mL na matriz de amostra pura. Farmacocinética Não Clínica
[00205] A TABELA 13 resume os parâmetros de PK para BMS- 986004, BMS-986003 e BMS-2m-126-24-CT em espécies de animais não clínicas. TABELA13 Parâmetros de PK de Dose Única (média + SD) Provenientes de Duas Espécies de Animais Não Clínicas Espé- | dAb Rota Dose | Cmax | Tmax | AUCO-inf| T1/2 CLTp Vss F Eee STE TES) EEE e es eos e
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[00206] BMS-986004 e BMS-986003 exibiam perfis de PK compa- ráveis em macacos (FIG. 11A e FIG. 11B). Após a administração |V, as concentrações no plasma de BMS-986004 e BMS -986003 exibiam um declínio biexponencial de até 504 e 408 h, respectivamente. Uma eliminação acelerada foi observada depois disso em 50% dos maca- cos registrados em ambos os estudos. O teste da imunogenicidade das amostras de plasma coletadas 38 d após o tratamento com BMS- 986004 sugeria que todos os macacos desenvolveram anticorpo anti- fármaco (ADA); e que os macacos com níveis de ADA mais altos exi- biam eliminação mais rápida. Embora nenhum teste de imunogenici- dade tenha sido conduzido para o estudo de PK IV com BMS-986003, um nível similar de imunogenicidade foi observado em macacos após a dosagem subcutânea com BMS-986003 no estudo de PK/PD, suge- rindo que ambas as proteínas eram imunogênicas em macacos. À meia-vida terminal (T1/2) de 124 e 106 h para BMS-986004 e BMS- 986003 foi, portanto, determinada utilizando as exposições coletadas até duas semanas (336 h) apenas. O volume de distribuição no estado estacionário (Vss) de BMS-986004 e BMS-986003 era de 0,098 e 0,074 L/kg, respectivamente. Os valores são maiores que o volume do plasma (0,06 L/kg)) mas menor que o volume do fluido extracelular (0,2 L/kg), sugerindo que as proteínas residem em grande parte no espaço extracelular. A eliminação do plasma corporal total (CLTp) de BMS-986004 e BMS-986003 era de 0,59 e 0,65 mL/h/kg, respectiva- mente.
[00207] Os parâmetros de PK de BMS-986004 em macacos foram comparados com aqueles de abatacept, uma proteína de tamanho si- milar (78,5 vs 78-kDa BMS-986004, com base na sequência de ami- noácidos), com o mesmo formato de Fc de IgG1 humana modificado. Como esperado, os parâmetros de BMS-986004 eram quase idênticos aqueles de abatacept (CLTp de 0,6 mL/h/kg, Vss de 0,087 L/kg, T1/2 de5d), sugerindo que a PK em seres humanos de BMS-986004 e a- batacept provavelmente deve ser similar.
[00208] A absorçãode BMS-986003 após a administração subcutâ- nea (SC) foi avaliada no estudo de PK/PD em macacos. Os macacos receberam administração de BMS-986003 na forma de doses subcu- tâneas únicas de O (controle de veículo), 0,2, 2 e 20 mg/kg, 24 h antes da imunização com hemocianina da lapa do buraco da fechadura (KLH), um antígeno dependente de células T. Após a dosagem, o BMS-986003 foi lentamente absorvido, com um Tmax variando de 6- 96 h (FIG. 12). A exposição de BMS-986003 parecia ser menor que proporcional à dose ao longo de todos os níveis de doses. Com uma proporção de dose de 1:10:100, as proporções médias de Cmax e AUCO-inf eram de 1:12:80 e 1:7:44, respectivamente. Com a exposi- ção após a dose IV (2 mg/kg) como referência e assumindo PK linear após a dosagem |V, a disponibilidade biológica SC de BMS-986003 era de 88%, 74% e 44% em 0,2, 2 e 20 mg/kg, respectivamente. A T1/2 terminal foi cofundida pela imunogenicidade observada com a maioria dos macacos em 2 até 5 semanas após a dosagem. Portanto, a T1/2 foi estimada como sendo de 85, 66 e 105 h em 0,2, 2 e 20 mg/kg, respectivamente.
[00209] A PK de 5c8-lg9G1, um anticorpo monoclonal anti-CD40L humano utilizado como um controle positivo no estudo de PK/PD, foi avaliada após a administração IV em 20 mg/kg (FIG. 12). 5c8-l9G1 exibia exposições no plasma 10 vezes mais altas e T1/2 4 vezes mais longa quando comparado com o BMS-986003 fornecido SC na mesma dose(TABELA 13).
[00210] A PK da proteína de fusão dAb-Fc substituta de camundon- go, BMS-2m-126-24-CT, foi avaliada em camundongos após única administração IV e SC (TABELA 13). Após uma única IV (1 mg/kg), as concentrações no plasma seguiam um declínio monoexponencial com uma T1/2 terminal de 101 h (FIG. 13). A CLTp era de 1,85 mL/h/kg; e Vss estava em 0,26 L/kg, indicando distribuição extracelular distributi- on. Após doses SC únicas de 1 e 10 mg/kg, o BMS-2m-126-24-CT foi lentamente absorvido com um Tmax de 24 h. As exposições sistêmi- cas aumentavam de uma maneira proporcional à dose. Com uma pro- porção de dose de 1:10, a Cmax e a AUCO-inf aumentaram na propor- ção de 1:11. A T1/2 terminal era de 100 e 120 hem 1 e 10 mg/kg, res- pectivamente. A proporção da exposição ajustada pela dose (AUCO- inf) após administração SC e IV era maior que 1, sugerindo absorção completa após a administração SC. Modelagem Farmacocinética / Farmacodinâmica
[00211] APD de BMS-986003 foi medida na forma da supressão da resposta de anticorpo anti-KLH no estudo de PK/PD. O BMS-986003 suprimia 70% da resposta de anticorpo para KLH (% de resposta su- a- AUEC 1008h títulos de IgG Sua tdo *100 + AUVECO1OOShtítulosdelgG grupo com veículo ) | primida = ) na dose mais altade20 mg/kg. A supressão marginal (15%) e nenhuma da resposta de anticorpo ocorreram em 2 e 0,2 mg/kg. Em comparação, 5c8-1I9G1 exibia exposições no plasma 10 vezes mais altas e T1/2 4 vezes mais longa que BMS-986003 no mesmo nível de dose (20 mg/kg). Como um resultado, 5c8-l9G1 suprimia 97% de resposta de anticorpo anti-
KLH. Com a finalidade de comparar a potência in vivo entre BMS- 986003 e 5c8-lgG1, a modelagem de PK/PD foi realizada utilizando SAAM |l (versão 1.2.1, Seattle, WA). As concentrações no plasma de BMS-986003 após a administração SC foram descritas utilizando uma cinética de absorção de primeira ordem acoplada a um modelo de 2 compartimentos, em que a eliminação ocorria em ambos os comparti- mentos central e periférico. Devido às complicações provenientes da imunogenicidade e da absorção não linear possível, os dados de PK foram ajustados individualmente em cada dose.
[00212] Para 5c8-lg9G1, foi utilizado um modelo de dois comparti- mentos com eliminação central. A resposta de anticorpo anti-KLH, ex- pressa na forma do valor médio de títulos de IgG, foi modelada utili- zando um modelo de transdução de sinal de 6 compartimentos. A ciné- tica de KLH no corpo foi assumida como sendo de um modelo de 1 compartimento. A inibição da produção de IgG por BMS-986003 e 5c8- IgG1 foi descrita utilizando um modelo Imax, com uma inibição máxima igual a 100%. Como mostrado na FIG. 14, as curvas ajustadas ao mo- delo eram capazes de descrever o perfil tanto de PK quanto de PD. À IC50 no plasma de BMS-986003 e de 5c8-lgG1 para a supressão da produção de IgG induzida por KLH foi estimada como sendo de 74 + 14 e 60 + 18 nM, respectivamente. Estes resultados demonstraram que a potência destas duas moléculas era comparável in vivo.
[00213] A ocupação do receptor (RO) de CD40L de BMS-986004 foi medida no estudo de PK IV. Após a administração IV de 11 mg/kg, a RO de BMS-986004 sobre as células mononucleares do sangue peri- férico (PBMC) era dependente do tempo e da concentração. A mode- lagem de PK/PD foi realizada para estimar uma EC50 de RO. As con- centrações no plasma foram modeladas utilizando um modelo de dois compartimentos modificado com uma constante de eliminação de pri- meira ordem mediada por ADA adicional introduzida 504 h após a do-
sagem; e a RO foi modelada utilizando um modelo Emax Roy, = Emax' cp” ( Ecso”+CP” ), Como mostrado na FIG. 15, as curvas ajustadas eram capazes de descrever tanto a exposição quanto a RO, com uma EC50 de RO estimada de 3,4 + 0,3 nM e o y (fator hill) de 3,1 + 0,1. Em comparação, a EC50 de RO era —-22 vezes menor que a IC50 de res- posta de anticorpo anti-KLH de 74 + 14 nM, sugerindo que >95% de RO são necessários com a finalidade de atingir supressão de anticor- po anti-KLH apreciável (>50%).
Exemplo 10 Estudo de PK/PD de Dose Única de Toxicologia Não Clínico
[00214] Os objetivos deste estudo eram 1) determinar a capacidade de tolerância de BMS-986003, incluindo sua imunogenicidade potenci- al, quando fornecido de forma subcutânea na forma de uma dose úni- ca a macacos; 2) avaliar sua PD (por exemplo, inibição da resposta de anticorpo a antígeno dependente de células T) e perfis de PK; 3) avali- ar a ocupação de receptor de BMS-986003 e contagens de células T periféricas após dosagem subcutânea; e 4) auxiliar na seleção de do- ses para estudos de transplante renal e dosagem primeira em seres humanos.
[00215] BMS-986003 foi administrado s.c. no tórax posterior na forma de doses únicas de O (controle de veículo), 0,2, 2 ou 20 mg/kg a grupos de 2 macacos cynomolgus por sexo. Dois macacos/sexo adi- cionais receberam uma única dose intravenosa de 20 mg/kg de 5c8- I9G1, um anticorpo monoclonal para CD40L humano que foi utilizado como um controle positivo neste estudo. Todas as doses foram admi- nistradas em 2 mL/kg no veículo (PBS; pH 7,2). Para avaliar os efeitos sobre a resposta de anticorpo dependente de células T, os animais foram imunizados em aproximadamente 24 horas após a dosagem com o artigo de teste ou imediatamente após a dosagem do controle positivo com 10 mg de KLH através de injeção intramuscular (quadri-
ceps posterior ou coxa caudal). Os critérios para avaliação incluíam sobrevivência, PK, imunogenicidade, PD (inibição da resposta de anti- corpo para o antígeno dependente de células T, KLH), sinais clínicos, pesos corporais, consumo de alimentos, imunofenotipagem do sangue periférico, ocupação de receptor e avaliações clínicas-patológicas (hematologia, química do soro e coagulação). Os animais foram devol- vidos para o estoque após um período de observação pós-dose de 6 semanas.
[00216] Em doses < 20 mg/kg, o BMS-986003 foi lentamente ab- sorvido (Tmax = 6-96 h) e os valores de Cmax e AUCtot aumentaram de uma maneira menos que proporcional à dose ao longo de todos os grupos de doses e não havia diferenças de gênero evidentes. Os valo- res de T1/2 estimados variavam de 69-104 h ao longo de todas as do- ses. BMS-986003 era substancialmente imunogênico; todos os maca- cos desenvolveram uma resposta de anticorpo antifármaco (ADA) po- sitiva durante o período pós-dose de 6 semanas. Em 0,2 e 2 mg/kg, a resposta de ADA total média do grupo tinha seu máximo no dia 22 nos títulos de ponto final médios do grupo (EPT) de 4203 e 6469, respecti- vamente. Em 20 mg/kg, a resposta de ADA, embora positiva, era de alguma maneira retardada e parcialmente suprimida, coerente com a farmacologia do alvo, tendo seu máximo no dia 36 em um EPT médio de grupo de 1828. A caracterização adicional dos anticorpos demons- trou a maior parte de ligação à porção de dAb (sem ser Fc) da molécu- la e foi mostrado que estes anticorpos bloqueiam a ligação de BMS- 986003 ao CD40L em 2 formatos de ensaio imunológico diferentes su- gerindo que o ADA era neutralizador. Em adição, a formação de ADA parecia acelerar a eliminação de BMS-986003 em vários macacos.
[00217] Os parâmetros médios de PK para BMS-986003 são apre- sentados na TABELA 14. TABELA 14
Sumário da Farmacocinética 0,2 mg/kg 2 mg/kg 20 mg/kg 20 mg/kg We | Woo Masculi- Masculi- Masculi- Masculi- Ca PE E 5 [to pg:h/mL o vel o 69/1071 45/49 88/91 Não aplicável oco OR A RSS
[00218] O peso molecular utilizado para a conversão era de 78104 Da para BMS-986003, 150000 Da para mAb 5c8-IgG1.
[00219] ND= não determinado; a AUCextra para indivíduos do sexo masculino ficava acima de 20%, portanto a T1/2 não foi relatada.
[00220] Não havia observações ou efeitos clínicos relacionados ao BMS-986003 ou ao 5c8-lgG1 sobre os pesos corporais ou parâmetros de patologia clínica exceto 1 indivíduo do sexo masculino tratado com 5c8-lg9G1 que teve células vermelhas do sangue (0,74 x controle), he- moglobina (0,73x pré-dose) e hematócrito (0,75x pré-dose) reduzidos no dia 8 e 3 de 4 macacos que receberam 5c8-IgG1 tinham linfócitos reduzidos (0,53x até 0,65x pré-dose) no dia 8, sugestivo de eliminação de linfócitos.
[00221] A ocupação de receptor de CD40L era geralmente depen- dente do tempo e da dose e mais sustentada após a administração de mg/kg de BMS-986003, coerente com exposições mais altas e mais sustentadas nesta dose e atividade de PD. Para BMS-986003, ocupa- ção de receptor média máxima sobre as células mononucleares do sangue periférico (PBMC) foi atingida em 24 h (97%), 6 h (99%) ou 48 20 h (99%) pós-dose, diminuindo para <90% de ocupação em 240, 360 ou 696 h e para <50% de ocupação em 360, 696 ou 1032 h, em 0,2, 2 ou 20 mg/kg, respectivamente. Em comparação, para 5c8-lgG1 em 20 mg/kg, a ocupação de receptor média máxima sobre as PBMCs foi a- tingida em 48 horas (> 100%) e foi sustentada a > 97% durante o estu- dointeiro(1032 hou até o dia 44).
[00222] “BMS-986003 suprimia a resposta de anticorpo para KLH somente na dose alta de 20 mg/kg. Nos dias 8-30 em 20 mg/kg, havia uma supressão de 69 até 83% da resposta de anticorpo média de gru- po geomético para KLH, em relação ao grupo de controle, com uma supressão máxima de 83% ocorrendo no dia 16. Não ocorreu supres- são da resposta de anticorpo em 0,2 ou 2 mg/kg de BMS-986003. Es- tes dados demonstram que BMS-986003 em uma ocupação de recep- tor sustentada de >90% durante pelo menos 1 mês e em concentra- ções sustentadas no plasma acima de -10 ug/mL até o dia 11 é capaz de inibir uma resposta de anticorpo dependente de células T em ma- cacos cynomolgus. Para o anticorpo de controle positivo, 5c8-lg9G1, uma supressão de 74-97% da resposta de anticorpo média de grupo geométrico para KLH ocorreu nos dias 8-30, com supressão máxima de 97% no dia 16 que era geralmente sustentada até o dia 30.
[00223] Nenhuma alteração relacionada ao BMS-986003 biologi- camente relevante em números absolutos de células B (CD45+, CD20+, CD3-), células T totais (CD45+, CD3+), células T helper (CD45+, CD3+, CD4+, CDB8-), células T citotóxicas (CD45+, CD3+, CD4-, CD8+) ou células natural killer (CD45+, CD3-, CD16+) ocorreu durante o estudo, o que confirmou a ausência de qualquer função efe- tora de Fc. Entretanto, no dia 8, 3 de 4 macacos tratados com 20 mg/kg de 5c8-lgG1 tinham populações de linfócitos T (0,53x-0,66x pré- dose), tanto de células T helper (0,64x to 0,77x pré-dose) quanto cito- tóxicas (0,40x to 0,61x pré-dose) reduzidas, que sugeria eliminação.
[00224] Em conclusão, o BMS-986003 administrado na forma de doses SC únicas de 0,2, 2 ou 20 mg/kg (AUC < 14195 ug*h/mL) era bem tolerado em macacos cynomolgus sem efeitos adversos relacio- nados ao fármaco. O controle positivo, 5c8-l9G1, em uma dose de 20 mg/kg, resultou na inibição sustentada completa da resposta de anti- corpo para KLH e ocupação de receptor sustentada de aproximada- mente 100% ao longo de 30 dias pós-dose. Uma eliminação suave de células T também foi observada no dia 8 em macacos que receberam 5c8-I9G1 (0,40x até 0,77x pré-dose), que não foi observada com BMS-
986003. BMS-986003 era capaz de suprimir uma resposta de anticor- po paraKLH em 20 mg/kg (supressão máxima de 83%) após a imuni- zação com KLH no dia 1 e tinha ocupação de receptor sustentada de > 90% até o dia 22 e > 50% até o dia 29. Um refreamento similar da i- munogenicidade para BMS-986003 ocorreu em 20 mg/kg. Entretanto, doses mais baixas de BMS-986003 de 0,2 e 2 mg/kg não suprimiram a resposta de anticorpo para KLH ou a resposta de anticorpo antifárma- co. A falta de farmacologia nas doses mais baixas também se correla- cionava com ocupação de receptor reduzida (isto é, <90% no dia 11 [0,2 mg/kg] ou 16 [2 mg/kg]; <50% no dia 16 [0,2 mg/kg] ou 30 [2 mg/kg]l) e eliminação acelerada, presumivelmente devido à formação de ADA. A inibição de TDAR é coerente com o mecanismo de ação deste composto e não foi considerada adversa. Exemplo 11 Avaliação do Risco de TE / Trombose
[00225] Foilevantada uma hipótese de que a TE associada com a administração dos anticorpos monoclonais anti-CD40L é mediada pela ligação cruzada de plaquetas mediada pelo complexo imune (IC) anti- CD40L mAb-CD40L, facilitada pela ligação do IC com FegRlila, um re- ceptor de Fc de IgG, causando a ativação e a agregação (FIG. 10). É experado, portanto, que o bloqueio da interação do grupamento de Fc delgG com FcegRlla diminua a ligação cruzada de plaquetas e a trom-
bose. Os métodos e as abordagens a seguir foram planejados para avaliar o risco de TE e/ou trombose. Ensaios de ativação de plaquetas in vitro
[00226] Vários ensaios in vitro foram conduzidos para testar a hipó- tesede que as plaquetas são ativadas pelo IC CD40L mab/sCD40L de uma maneira dependente de FcgRlla. O controle positivo 5c8-Ig9G1 foi utilizado para validar os ensaios antes de testar BMS-986003 e BMS-
986004. O sangue de doadores humanos ou de camundongos que expressam o receptor de hFcgRlla sobre as plaquetas foi utilizado pa- raestes estudos. A ativação de plaquetas foi detectada por citometria de fluxo utilizando anticorpos contra os marcadores de ativação de plaquetas bem validados P-selectina (CD62P) e PAC-1 (GPIlb/llla ati- vado). Sucintamente, o sangue foi diluído 1:25 em Tyrodes-HEPES modificado contendo 1 mM de CaCl2 ao qual os anticorpos de detec- çãoe os reagentes de teste foram adicionados, incubados e analisa- dos em relação à ativação de plaquetas. Experimentos iniciais deter- minaram que sSCD40L ou 5c8I1gG1 isoladamente não ativavam as pla- quetas, mas proporções de complexos imunes diferentes de 1:1 até 1:8 de 5c8:sCD40L ativavam significativamente as plaquetas. Experi- mentos subsequentes utilizaram 5c8-l9G1 ou IC5c8-mIlgG2a, princi- palmente em uma proproção molar de 1:3 de 5c8:sCD40L. A ativação de plaquetas pelo IC 5c8/sCD40L pode ser bloqueada pelo anticorpo anti-FcegRlila
[00227] Foram conduzidos estudos com o anticorpo de bloqueio de FcecoRIla IV3 para testar se a ativação de plaquetas pelo IC 5c8/sCD40L era verdadeiramente mediada por FCcgRIIA. O sangue de doadores humanos foi pré-incubado com 0,5 ug/ul do anticorpo de bloqueio de FcgRila IV.3 antes da diluição e da incubação com anti- corpos de detecção como descrito anteriormente. Difosfato de adeno- sina (ADP), um ativador de plaquetas através de um mecanismo dife-
rente, foi utilizado como um controle positivo. Como ilustrado na FIG. 16, a ativação de plaquetas pelo IC 5c8/sCD40 foi completamente blo- queada pelo IV.3, enquanto que a ativação pelo ADP não era inibida pelo anticorpo de bloqueio, indicando que a ativação pelo IC é media- daporFecgRlla. Seleção de caudas de Fc inertes
[00228] Uma exigência para moléculas candidatas potenciais era a ausência de ligação a FcgRlla para prevenir a ativação potencial de plaquetas. Várias construções de 5c8 contendo mutações diferentes derivadas de IgG1 (por exemplo, 5c8-CT e N297Q) ou IgG4 (por e- xemplo, 5c8-S228P) foram expressas e verificadas em relação às caudas de Fc que não ativavam as plaquetas utilizando proporções molares diferentes de SCD40L em relação aos mAbs. Construções do tipo selvagem e mutadas principais ativavam as plaquetas exceto para 5c8-CT e 5c8-N297Q (FIG. 17). A ausência de Fc (5c8-Fab2) também não ativava as plaquetas confirmando adicionalmente que a ativação de plaquetas pelo IC é mediada pelo Fc. A cauda de CT foi escolhida para formatar os candidatos de dAb BMS-986003 e BMS-986004. Efeito do polimorfismo de FcgRlla sobre a ativação de plaquetas
[00229] O gene para FcgRlla é variável no códon 131, resultando no polimorfismo de His-Arg (CAT/CGT). A distribuição do genótipo em aproximadamente 100 indivíduos com distribuição aproximadamente igual de caucasianos e afro-americanos era A/A (homozigotos para His; 14%), A/G (heterozigotos para His/Arg; 60%) e G/G (homozigotos para Arginina; 26%) para americanos caucasianos e A/A (30%), A/G (51%) e G/G (19%) para afro-americanos. Reilly e outros, Clin. Diagn. Lab. Immunol. 1: 640-644 (1994). A agregação de plaquetas depen- dente de Fc foi observada em amostras provenientes de indivíduos R131 quando tratadas com anti-CD9 no formato de Fc mIgG2 ou mIgG1, enquanto que as plaquetas provenientes dos indivíduos H131 se agregavam apenas com anti-CD9 como o formato mIgG2; isto su- gere que a agregação dependente de Fc com um mAb de IgG1 pode- ria potencialmente segregar uma população de pacientes em aqueles que respondem pouco e muito, o que foi relatado previamente com este polimorfismo. Tomiyama e outros, Blood 80: 2261-2268 (1992).
Para se dirigir a quaisquer diferenças potenciais na ativação de pla- quetas com a cauda de Fc de IgG1 e CT, 19 doadores foram genoti- pados em relação ao polimorfismo de hFcegRlla e as amostras foram testadas em relação à ativação de plaquetas. O polimorfismo do grupo de doadores (RR; 42%, HH; 21%, HR; 37%) era suficiente para avaliar quaisquer diferenças potenciais na ativação de plaquetas para o for- mato de IgG1. Representativo dos relatórios na literatura, a ativação de plaquetas com o IC 5c8-lgG1/sCD40L era similar ao longo de todos os indivíduos genotipados. Não foi observada ativação com o IC 5c8- CT/sCD40L (FIG. 18), sugerindo nenhum ou um risco mínimo de maior TE em um paciente population com um anticorpo formatado com a cauda de CT. BMS-986004: Ativação de plaquetas em doadores de sangue hu- manos
[00230] Os experimentos descritos anteriormente utilizando 5c8, sustentaram a seleção da cauda de CT como o melhor formato para BMS-986004 (também chamado de BMS2h-572-633-CT-L2). O san- gue obtido de 6 doadores foi tratado com 5c8-lIgG1, 5c8-CT, F(ab); e BMS-986004. As plaquetas foram ativadas por 5c8-lgG1, mas não por qualquer uma das outras construções, incluindo BMS-986004 (FIG. 19), sugerindo que este dAb possui nenhum ou baixo risco de causar ativação de plaquetas e TE em estudos clínicos. BMS-986003: Ativação de plaquetas no sangue de camundongos que expressam hFecgRlla
[00231] Para confirmar adicionalmente que a ativação de plaquetas pelos anticorpos anti-CD40L era mediada pelo receptor de FcgRlla, o sangue de camundongos transgênicos expressando o receptor huma- no (genótipo R131) foi tratado com 5c8-lgG1, 5c8-lgG2a, dAb-IgG1, 5c8-CT e BMS-986003 (também chamado de BMS-2h572-633-CT). As plaquetas foram especificamente ativadas por 5c8-lg9G1, 5c8-lgG2a e IC dAb-IlgG1/sCD40L no sangue proveniente de camundongos ex- pressando hFcegRlla, mas não nos companheiros de ninhada do tipo selvagem. 5c8-CT e BMS-986003 não ativavam as plaquetas, confir- mando adicionalmente um baixo risco de TE com os anticorpos divul- gados aqui (FIG. 20). Exemplo 12 Experimentos de Ligação ao Epítopo
[00232] AFIG.25 mostra dados de sensorgrama de SPR para ex- perimentos planejados para testar se ou não as moléculas de dAb mo- novalentes BMS2h-503-1, BMS2h-572-6, BMS2h-719-17 e o fragmen- to Fab de anti-CD40L monovalente 5c8 competem um com o outro pe- la ligação ao CD40L. Os experimentos foram realizadis utilizando CD40L biotinilado (biot-IZ-hCD40L) que foi capturado sobre a superfí- cie de um chip sensor com estreptavidina. Os testes envolviam a inje- ção sequencial de uma molécula especificada (fase "a"), imediatamen- te seguida pela injeção da mesma molécula na presença de uma se- gunda molécula especificada (fase "b"), seguida pela dissociação (fase "c"). A competição pela ligação é identificada na forma de uma redu- ção (bloqueio) do sinal de ligação para a segunda molécula na pre- sença da primeira, com o nível de bloqueio sendo governado pela ci- nética de associação e dissociação de cada molécula. Para cada par de moléculas testado, foi mostrado que a ligação da segunda molécula era reduzida quando a primeira molécula estava presente. Estes resul- tados sugerem que BMS2h-503-1, BMS2h-572-6, BMS2h-719-17 e 5c8Fabcompetem um com os outros pela ligação ao biot-IZ-hCD40L.
[00233] A FIG. 26 mostra dados de sensorgrama de SPR para a ligação das moléculas de dAb-CT-long e de 5c8-CT-long indicadas ao monômero de CD40L humano (CDA40L triplo mutante (T211E, S222Y, H224K, [108-261])) ou ao trímero de CD40L (IZ-hCD40L). As molécu- lasdedAb-CT-ong e de 5c8-CT-long foram capturadas através de seu domínio de Fc de "CT-long" sobre a superfície de um chip sensor de anticorpo anti-Fc de IgG humana imobilizado (Biacore, GE Healthca- re). Os dados nos 3 painéis superiores mostram que o monômero de CD40L humano se liga especificamente ao BMS2h-719-202-CT-long e ao 5c8-CT-long, mas não se liga a qualquer uma das moléculas de dAb-CT-long indicadas que contêm dAbs da linhagem BMS2h-572-6. Em contraste, os 3 painéis inferiores mostram que o trímero de CD40L (IZ-hCD40L) se liga fortemente a todas as moléculas de dAb-CT-long testadas da linhagem BMS2h-572-6, bem como a BMS2h-719-202-CT- longe a 5c8-CT-long. Estes resultados sugerem que as moléculas da linhagem BMS2h-572-6xx-CT-long são específicas em relação a um epítopo que está presente apenas sobre o trímero de CD40L e não está presente sobre o CD40L humano monomérico, enquanto que BMS2h-719-202-CT-long e 5c8-CT-long se ligam a um epítopo que está presente tanto sobre o monômero quanto o trímero de CD40L.
[00234] Embora as presentes modalidades tenham sido descritas em detalhes com referência aos exemplos anteriores, é entendido que várias modificações podem ser feitas sem se afastar do espírito destas modalidades e seriam facilmente conhecidas pelo versado na técnica.
Claims (16)
1. Polipeptídeo de anticorpo isolado, caracterizado pelo fato de que compreende um primeiro domínio variável que se liga especifi- camente ao CD40L humano, em que o CD40L compreende a sequên- cia de aminoácidos da SEQ ID NO: 1, em que a sequência de aminoá- cidos do primeiro domínio variável compreende BMS2h-572-633 (SEQ ID NO: 274) ou difere da sequência de aminoácidos de BMS2h-572- 633 (SEQ ID NO: 274) por até 5 aminoácidos, e em que o dito polipep- tídeo de anticorpo é um anticorpo de domínio (dAb).
2. Polipeptídeo de anticorpo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a sequência de aminoácidos do pri- meiro domínio variável compreende: (a) uma região de CDR1 que possui uma sequência Trp-X,- Leu-Met-Gly (SEQ ID NO: 2), em que X, é Glu ou Gln; (b) uma região de CDR2 que possui uma sequência Gly-lle- Glu-Gly-Pro-Gly-Asp-Val-Thr-Tyr-Tyr-Ala-Asp-Ser-Val-Lys-Gly (SEQ ID NO: 3) e (c) uma região de CDR3 que possui uma sequência Lys-X,- Y2- Z2-Ser-Asp-Tyr (SEQ ID NO: 4), em que X, é Asp ou Glu, Y, é Ala ou Ser e Z, é Lys, Asn ou Arg.
3. Polipeptídeo de anticorpo de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que a sequência de aminoácidos do pri- meiro domínio variável compreende: (a) uma região de FR1 que possui uma sequência Glu-Val- Gln-Leu-Leu-Glu-Ser-Gly-Gly-Gly-Leu-Val-GlIn-Pro-Gly-Gly-Ser-Leu- Arg-Leu-Ser-Cys-Ala-Ala-Ser-Gly-Phe-Thr-Phe-Asn (SEQ ID NO: 5); (b) uma região de FR2 que possui uma sequência Trp-X,- Arg-Gln-Ala-Pro-Gly-Lys-Gly-Leu-Glu-Trp-Val-Ser (SEQ ID NO: 6), em que X, é Ala ou Val; (c) uma região de FR3 que possui uma sequência Arg-Thr-
Phe-lle-Ser-Arg-Asp-Asn-Ser-Lys-Asn-Thr-Leu-Tyr-Leu-Gln-Met-Asn- Ser-Leu-Arg-Ala-Glu-Asp-Thr-Ala-Val-Tyr-Tyr-Cys-Val-Lys-Val-Gly (SEQ ID NO: 7) e (d) uma região de FR4 que possui uma sequência Arg-Gly- GIn-Gly-Thr-Leu-Val-Thr-Val-Ser-Ser (SEQ ID NO: 8).
4. Polipeptídeo de anticorpo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o primeiro domínio variável compre- ende a sequência de aminoácidos de BMS2h-572-633 (SEQ ID NO: 274).
5. Polipeptídeo de anticorpo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo de anticorpo é a SEQ ID NO: 1355.
6. Polipeptídeo de anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo de anticorpo é um polipeptídeo de fusão que compreende o primeiro domínio variável e um domínio Fc.
7. Polipeptídeo de anticorpo de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo de fusão compreende uma sequencia de aminoácidos selecionada do grupo consistindo em um domínio CT-Long (SEQ ID NO: 1357), um domínio CT-short (SEQ ID NO: 1358), um domínio Fc de N297Q Long (SEQ ID NO: 1359) e um domínio Fc de N297Q Short (SEQ ID NO: 1360).
8. Polipeptídeo de anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo de anticorpo compreende ainda um segundo domínio variável que se liga especificamente a um segundo antígeno, em que o segundo antí- geno é um antígeno sem ser CD40L humano.
9. Ácido nucleico, caracterizado pelo fato de que codifica o polipeptídeo de anticorpo como definido em qualquer uma das reivin- dicações 1 a 8.
10. Vetor, caracterizado pelo fato de que compreende o ácido nucleico como definido na reivindicação 9.
11. Célula hospedeira isolada, caracterizada pelo fato de que compreende o vetor como definido na reivindicação 10.
12. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz do polipep- tídeo de anticorpo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 8, opcionalmente um agente imunossupressor/imunomodulador e/ou anti-inflamatório, e um veículo farmaceuticamente aceitável.
13. Uso de um polipeptídeo de anticorpo isolado como defi- nido em qualquer uma das reivindicações 1 a 8, e opcionalmente em combinação com um agente imunossupressor/imunomodulador e/ou anti-inflamatório, caracterizado pelo fato de que é para a preparação de um medicamento para o tratamento de um paciente, em que o pa- ciente tem ou está em risco de ter uma doença imune, em que a doen- ça imune é selecionada do grupo que consiste em doença de Addison, alergias, espondilite anquilosante, asma, aterosclerose, doenças au- toimunes do ouvido, doenças autoimunes do olho, hepatite autoimune, parotidite autoimune, colite, doença cardíaca coronariana, doença de Crohn, diabetes, incluindo diabetes do Tipo 1 e/ou do Tipo 2, epididimi- te, glomerulonefrite, doença de Graves, síndrome de Guillain-Barre, doença de Hashimoto, anemia hemolítica, púrpura trombocitopênica idiopática, doença inflamatória do intestino, resposta imunológica a produtos de fármacos recombinantes, lúpus eritematoso sistêmico, in- fertilidade do sexo masculino, esclerose múltipla, miastenia grave, pênfigo, psoríase, febre reumática, artrite reumatoide, sarcoidose, es- cleroderma, síndrome de Sjogren, espondiloartropatias, tireoidite, re- jeição a transplante, vasculite, AIDS, alergia atópica, asma bronquial, eczema, lepra, esquizofrenia, depressão herdada, síndrome de fadiga crônica, doença de Alzheimer, doença de Parkinson, enfarte do mio-
cárdio, derrame, autismo, epilepsia, fenômeno de Arthus, anafilaxia, dependência de álcool e dependência de drogas.
14. Uso de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que a doença imune é uma rejeição a transplante, e em que a rejeição a transplante é uma doença relacionada a enxerto, e em que o polipeptídeo de anticorpo isolado é opcionalmente coadmi- nistrado com uma molécula de CTLA4 mutante.
15. Uso de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que a doença imune é púrpura trombocitopênica idiopáti- ca.
16. Invenção, em quaisquer formas de suas concretizações ou em qualquer categoria aplicável de reivindicação, por exemplo, de produto ou de processo ou uso englobadas pela matéria inicialmente descrita, revelada ou ilustrada no pedido de patente.
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