CN1178061C - 硫化氢或二价硫离子的定量方法及用其定量测定可产生硫化氢或二价硫离子的物质的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供较简便和灵敏的定量测定试样中硫化氢或二价硫离子的方法，即在含有硫化氢或二价硫离子的试样中，加入金属离子或解离出该金属离子的化合物及金属指示剂，所述金属指示剂与该金属离子反应而发色，此发色反应被硫化氢或二价硫离子抑制或促进，用所述金属指示剂测定发色强度。本发明还提供定量测定特定物质的方法，即在含有特定物质的试样中，加入作用于该特定物质产生硫化氢或二价硫离子的成分、金属离子或解离出该金属离子的化合物及金属指示剂，所述金属指示剂与该金属离子反应而发色，此发色反应被硫化氢或二价硫离子抑制或促进，用所述金属指示剂测定发色强度，从而对所述特定物质进行定量。
Description
技术领域
本发明涉及利用硫化氢或二价硫离子对金属离子和金属指示剂复合物形成的促进或抑制作用简便和灵敏地定量测定试样中硫化氢或二价硫离子的方法，及利用上述定量法测定试样中特定物质产生的硫化氢或由其产生的二价硫离子简便和灵敏地定量测定该特定物质的方法。
背景技术
硫是自然界中起重要作用的元素之一。特别是作为含硫氨基酸的半胱氨酸和甲硫氨酸构成成分的作用很大。而且，已知在植物和动物之间存在大的硫循环。在植物中，硫以硫酸离子的形式被摄取，还原成二价硫离子后，进行半胱氨酸合成，再继续合成甲硫氨酸。在动物中，通过食物链摄取甲硫氨酸，在机体内代谢为半胱氨酸。此代谢过程中产生高半胱氨酸中间体。
高半胱氨酸是正常情况下几乎不存在的中间代谢物，但是，据报道当其血浓度达到高值时，冠状动脉疾患和脑卒中的发生率高。因此，血液中高半胱氨酸量被认为是用于预测心肌梗塞和脑梗塞等血栓栓塞症或动脉硬化症发生的危险因子。
半胱氨酸是由甲硫氨酸代谢生成的氨基酸，因此也可成为把握高半胱氨酸代谢异常原因的辅助性指标。
而且，已知具有作用于高半胱氨酸或半胱氨酸使其分解或取代生成硫化氢作用的酶。但是，即便利用这样的酶对高半胱氨酸或半胱氨酸进行定量，也无法简便和灵敏地测定生成的硫化氢，因此未见有用上述酶对高半胱氨酸和半胱氨酸定量的实用方法。
另一方面，硫化氢或由其形成的二价硫离子也是大气污染和河流水质污染等环境污染的重要指标，通过测定这些试样中的硫化氢或由其形成的二价硫离子可确定污染状况。
以往测定硫化氢或由其形成的二价硫离子的方法已知有例如利用发色化合物的方法，如使用二硫化2，2’-二吡啶(Svenson，Anal.Biochem.，107：51-55(1980))和硝普酸钠的方法；在强酸性下使N，N-二甲基对苯二胺和氯化铁反应生成亚甲蓝、检测蓝色发色的方法(亚甲蓝法)；以硒为催化剂测定色素(甲苯胺蓝和亚甲蓝)退色量和速度的方法(Mousavi等，Bull.Chem.Soc.Jpn.65：2770-2772(1992)；Gokmen等，Analyst，119：703-708(1994))等。然而，任何一种方法都难说是足够简便和灵敏的方法。
发明的揭示
因此，本发明的一个目的在于提供硫化氢或二价硫离子的较简便和灵敏的定量方法。本发明的另一个目的在于提供用上述定量方法测定试样中由特定物质产生的硫化氢或由硫化氢形成的二价硫离子从而简便、灵敏地定量测定该特定物质的方法。
本发明者为了达到上述目的进行锐意研究的结果，发现利用硫化氢或二价硫离子抑制或促进金属离子和金属指示剂的发色反应，可简便且灵敏地对试样中的硫化氢或二价硫离子进行定量，从而完成了本发明。
即，本发明之一为提供硫化氢或二价硫离子的定量方法，其特征在于：在含有硫化氢或二价硫离子的试样中，加入金属离子或解离出该金属离子的化合物及金属指示剂，所述金属指示剂与该金属离子反应而发色，此发色反应被硫化氢或二价硫离子抑制或促进，用所述金属指示剂测定发色强度。
本发明之二为提供特定物质的定量方法，其特征在于：在含有特定物质的试样中，加入作用于该特定物质产生硫化氢或二价硫离子的成分、金属离子或解离出该金属离子的化合物及金属指示剂，所述金属指示剂与该金属离子反应而发色，此发色反应被硫化氢或二价硫离子抑制或促进，用所述金属指示剂测定发色强度。
按照本发明，利用二价硫离子对金属离子和金属指示剂形成络合物的促进或抑制作用，可简便和灵敏地定量测定硫化氢或二价硫离子。而且，在含特定物质的试样中加入作用于该特定物质产生硫化氢或二价硫离子的成分，利用上述反应测定生成的硫化氢，可简便和灵敏地定量测定试样中的特定物质。
附图的简单说明
图1显示用抑制发色法定量测定二价硫离子的结果。
图2显示用促进发色法定量测定二价硫离子的结果。
图3显示用促进发色法定量测定高半胱氨酸的结果。
图4显示用促进发色法定量测定半胱氨酸的结果。
实施发明的最佳状态
关于本发明的硫化氢或二价硫离子的定量方法，利用硫化氢或二价硫离子抑制金属离子和金属指示剂的发色反应的情况说明如下。即，试样中存在的硫化氢或二价硫离子与金属离子接触，生成金属硫化物，同时金属离子与金属指示剂反应，通过测定其发色强度求出金属离子与金属指示剂反应所生成的络合物量。然后，除了硫化氢或二价硫离子不存在外其余条件同上，从这时金属离子与金属指示剂反应生成的络合物量减去上面的络合物生成量，求出因金属硫化物不产生络合物的性质而络合物生成量减少的量。此络合物生成量减少的量相应于试样中存在的硫化氢或二价硫离子的量。因而，根据上述络合物生成量的减少量可计算出试样中硫化氢或二价硫离子的含量。
关于利用硫化氢或二价硫离子促进金属离子和金属指示剂的发色反应的情况说明如下。即，在含硫化氢或二价硫离子的试样中加入金属离子和金属指示剂，使其反应，通过测定其发色强度求出金属离子与金属指示剂反应所生成的络合物量。然后，从此络合物生成量减去除了硫化氢或二价硫离子不存在外其余均相同的条件下金属离子与金属指示剂反应生成的络合物量，求出络合物生成量的增加量。此络合物生成量的增加量系硫化氢或二价硫离子促进金属离子与金属指示剂的反应所致，因而相应于硫化氢或二价硫离子的量。因而，根据上述络合物生成量的增加量可计算出试样中硫化氢或二价硫离子的含量。
本发明中，金属离子无特别限制，只要金属离子与金属指示剂的发色反应被硫化氢或二价硫离子抑制或促进即可，但作为抑制金属离子与金属指示剂的发色反应者以使用锌离子为佳，作为促进金属离子与金属指示剂的发色反应者以使用二价或三价铁离子为佳。具体地说，无特别限制，若上述金属的盐酸盐、硫酸盐、乙酸盐等，只要溶解于水溶液中，生成游离的金属离子即可。
本发明中所用的金属指示剂无特别限制，只要金属离子与金属指示剂的发色反应被硫化氢或二价硫离子抑制或促进即可，但以其络合物形成时发色感度高者为佳，如可较好地利用吡啶基偶氮化合物和亚硝氨基酚化合物等。更具体地，可较好地利用吡啶基偶氮化合物2-(5-溴-2-吡啶基偶氮)-5-〔N-N-丙基-N-(3-磺基丙基)氨基)苯酚钠盐(商品名：5Br·PAPS，以下简称5Br·PAPS)和2-(5-硝基-2-吡啶基偶氮)-5-[N-N-丙基-N-(3-磺基丙基)氨基〕苯酚钠盐(商品名：硝基PAPS)，可较好地利用亚硝氨基酚化合物2-亚硝基-5-〔N-N-丙基-N-(3-磺基丙基)氨基〕苯酚钠盐(商品名：亚硝基PSAP)和2-亚硝基-5-[N-乙基-N-(3-磺基丙基)氨基〕苯酚钠盐(商品名：亚硝基ESAP)。这些化合物是水溶性的，与锌离子、铜离子、钴离子、铁离子等形成络合物，具有高度发色性质。这些金属指示剂具有各种特性，有市售，例如可购自株式会社同仁化学研究所。
本发明中的特定物质可以是经酶反应等可生成硫化氢或二价硫离子的任何物质，较佳为例如高半胱氨酸和半胱氨酸等。
特定物质为高半胱氨酸时，作为从特定物质生成硫化氢或二价硫离子的成分，可使用具有作用于高半胱氨酸生成硫化氢或二价硫离子作用的酶(E1)。这样的酶可列举例如L-甲硫氨酸-γ-裂解酶(酶编号EC类4.4.1.11)和O-乙酰高丝氨酸裂解酶(酶编号EC类4.2.99)，特别以使用O-乙酰高丝氨酸裂解酶为佳。
已知L-甲硫氨酸-γ-裂解酶是在无硫醇化合物时对高半胱氨酸显示分解作用产生硫化氢而在有硫醇化合物时起催化γ-取代作用的酶。此酶可从产生它的微生物如假单胞菌属细菌得到，有市售品，例如可购自和光纯药株式会社等。
已知O-乙酰高丝氨酸裂解酶是具有氨基酸合成作用(例如从O-乙酰高丝氨酸和硫化氢生成高半胱氨酸和从甲硫醇生成甲硫氨酸的作用)的酶(参见《酵素ハンドバツク》，丸尾等编著，朝倉书店，1982年)。本发明者最近发现在硫醇化合物存在下O-乙酰高丝氨酸裂解酶作用于高半胱氨酸和通过γ-取代作用生成硫化氢的催化作用(日本专利申请No.10-347003号公报)。
产生O-乙酰高丝氨酸裂解酶的各种微生物是已知的(参见如Ozaki等，J.Biochem.91：1163-1171(1982)；Yamagata，J.Biochem.96：1511-1523(1984)；Brzywczy等，Acta.Biochimica.Polonica.40(3)：421-428(1993))，将这些微生物进行培养可得到O-乙酰高丝氨酸裂解酶，但也有市售品，例如可购自Yunitica Ltd.等。这些酶(E1)对高半胱氨酸具有强烈作用，对半胱氨酸也有一些作用，生成硫化氢。
Yunitica Ltd.制的来自杆菌属的O-乙酰高丝氨酸裂解酶(商品名GCS)的理化性质如下。下述理化性质中，除分子量以外的项目是本发明者测得的。
<理化性质>
1)作用：催化L-高半胱氨酸和硫醇化合物的γ-取代反应，生成硫化氢和硫醇化合物取代的高半胱氨酸；并催化L-甲硫氨酸和硫醇化合物的取代反应，生成甲基硫醇和硫醇化合物取代的高半胱氨酸。
2)底物特异性：作用于L-高半胱氨酸和L-甲硫氨酸；通过β-取代反应对L-半胱氨酸有一些作用。
3)分子量：180,000(凝胶过滤法)。
4)最适pH：8.5-9.0。
5)Km：0.9mM(L-高半胱氨酸)。
特定物质为半胱氨酸时，作为从特定物质生成硫化氢或二价硫离子的成分，可使用具有作用于半胱氨酸生成硫化氢或二价硫离子作用的酶(E2)。这样的酶可列举例如O-乙酰丝氨酸裂解酶、β-氰基丙氨酸合成酶和半胱氨酸裂解酶等，特别以使用O-乙酰丝氨酸裂解酶为佳。
已知O-乙酰丝氨酸裂解酶是具有半胱氨酸合成作用(从O-乙酰丝氨酸和硫化氢生成半胱氨酸的作用)的酶。本发明者最近发现在硫醇化合物存在下O-乙酰丝氨酸作用于半胱氨酸及通过β-取代反应生成硫化氢的催化作用(日本专利申请No.11-84035号公报)。此作用对半胱氨酸具有特异性。O-乙酰丝氨酸裂解酶可从产生它的微生物(如Burnell等，Biochim.Biophys.Acta481：246-265(1977)；Nagasaw等，Methods Eczymol 143：474-478(1987))及植物(如Droux等，Arch.Biochem.Biophys.295(2)：379-390(1992)；Yamaguchi等，Biochim.Biophys.Acta 1251：91-98(1995))等得到。
例如，按Yamaguchi等，Biochim.Biophys.Acta 1251：91-98(1995)中记载的方法得自菠菜的O-乙酰丝氨酸裂解酶，其理化性质如下。下述理化性质中，除分子量以外的项目是本发明者测得的。
<O-乙酰丝氨酸裂解酶的理化性质>
1)作用：催化L-半胱氨酸和硫醇化合物的β-取代反应，生成硫化氢和硫醇化合物取代的半胱氨酸。
2)底物特异性：对L-半胱氨酸有特异作用。
3)分子量：63,000(凝胶过滤法)。
4)最适pH：9.0-11.0。
5)Km：0.27mM(L-半胱氨酸)。
另一方面，已知β-氰基丙氨酸合成酶在氰基存在下作用于半胱氨酸时，显示通过β-取代反应催化硫化氢生成的作用，而半胱氨酸裂解酶在亚硫酸离子存在下作用于半胱氨酸时，显示通过β-取代反应催化硫化氢生成的作用。
本发明中使用的硫醇化合物无特别限制，只要能进行取代反应即可，如甲硫醇、2-巯基乙醇、二硫苏糖醇、硫甘油、胱胺等，较佳为2-巯基乙醇和胱胺。
本发明的硫化氢或二价硫离子测定方法中的反应若用反应式表示，可表示为下列化学式1和化学式2。
<化学式1>
反应A：金属离子+金属指示剂→络合物形成(发色)
(锌) (吡啶基偶氮化合物)
反应B：金属离子+二价硫离子
(锌) (硫化氢)
→金属硫化物+金属指示剂——(抑制)→络合物形成(X)
(硫化锌) (吡啶基偶氮化合物)
<化学式2>
反应C：金属离子+金属指示剂——(不反应)→络合物形成(X)
(铁) (吡啶基偶氮化合物或
亚硝基氨基酚化合物)
反应D：金属离子+二价硫离子+金属指示剂
(铁) (硫化氢) (吡啶基偶氮化合物或
亚硝基氨基酚化合物)
——(促进反应)→络合物形成(发色)上述化学式1中，反应A表示在不存在二价硫离子时，金属离子(如锌离子)与金属指示剂(如吡啶基偶氮化合物)迅速形成络合物而发色。
反应B则表示金属离子(如锌离子)与二价硫离子预先接触，生成金属硫化物(如硫化锌)，生成的化合物(硫化锌)不能与金属指示剂形成络合物而减少其发色值。因此，通过计算其发色值的减少量可测定硫化氢或二价硫离子。
即上述化学式1中，选择与二价硫离子反应形成稳定的金属硫化物的金属离子及与该金属离子迅速形成络合物的金属指示剂的组合是重要的。这样的金属离子与金属指示剂的组合可列举如锌离子和吡啶基偶氮化合物的组合。以下说明中，用上述化学式1原理的测定方法称作发色抑制法。
上述化学式2中，反应C表示预先使金属离子(如铁离子)与金属指示剂(如吡啶基偶氮化合物或亚硝基氨基酚化合物)共存于诸如中性～弱碱性(pH7.0～9.0)的适当缓冲液中，抑制该金属离子与金属指示剂形成络合物，从而不出现发色。
而反应D则表示在如上条件下添加二价硫离子，对应于二价硫离子的浓度，络合物的形成受到促进，其发色值增加。因此，通过计算该发色值的增加量可测定硫化氢或二价硫离子。
即，上述化学式2中，形成金属离子和金属指示剂难生成络合物的条件是重要的。这样的金属离子与金属指示剂的组合可列举如铁离子和吡啶基偶氮化合物或亚硝基氨基酚化合物的组合。以下说明中，用上述化学式2原理的测定方法称作发色促进法。
若从铁离子与吡啶基偶氮化合物的组合上推测，上述发色促进法的反应机制可考虑如下。
已知受pH条件等要素的影响，铁离子在水溶液中以水络合物和羟络合物等各种形式存在。在高度碱性条件下也可形成氢氧化物沉淀。本测定系统中铁离子与吡啶基偶氮化合物的组合，可考虑使二价和三价铁离子预先共存于中性至弱碱性(pH7.0-9.0)的适当缓冲液中，铁离子在溶液中自身形成络合物，从而抑制与金属指示剂(吡啶基偶氮化合物)的反应。特别是在二价铁离子的情况下，除了形成络合物外，易受氧的氧化，结果以三价铁离子的形式存在。而且，在此状态的铁离子中若添加二价硫离子使二者共存，因二价硫离子的还原能力而使三价铁离子还原为二价铁离子，成为可与吡啶基偶氮化合物反应的状态，从而可见发色反应。某些金属指示剂难以与三价铁离子形成络合物，这种情况下，即使在上述pH范围外也可适用促进反应原理。
即，本发明的发色促进法首先将受二价硫离子还原可与金属指示剂反应的金属离子置于不与金属指示剂反应的状态，例如将金属离子的溶液调节成适当的条件。然后，通过添加二价硫离子，从不反应的状态变成可反应的状态，与金属指示剂发生反应。
从而，通过上述金属与适当的金属指示剂组合，完成本发明的发色促进法。
特定物质为高半胱氨酸和半胱氨酸时的测定方法中的反应可表示为如下的化学式3。
<化学式>
反应E：高半胱氨酸——(酶(E1))→硫化氢
反应F：半胱氨酸——(酶(E2))→硫化氢
上述化学式3中，反应E表示在催化作用于高半胱氨酸生成硫化氢的酶(E1)(如O-乙酰高丝氨酸裂解酶)的作用下生成硫化氢。反应F表示在催化作用于半胱氨酸生成硫化氢的酶(E2)(如O-乙酰丝氨酸裂解酶)的作用下生成硫化氢。然后，利用上述化学式1或化学式2的反应测定所生成的硫化氢，可对高半胱氨酸和半胱氨酸进行定量。
以下举实施例对本发明作更详细的说明，但本发明并不受其限制。
实施例1(用发色抑制法定量测定二价硫离子)
用以下的物质作为试样和试剂。
试样：二价硫离子—含0-100μM硫化钠(和光纯药社制)的水溶液。
第一试剂：Tris缓冲液(pH8.5)100mM；氯化锌10μM
第二试剂：5Br·PAPS(同仁化学研究所社制)1mM
在50μl试样中加入900μl第一试剂，室温放置5分钟后，加入第二试剂50μl，室温放置5分钟。然后，在550nm的波长下测定反应液的吸光度。结果见图1。
从图1的结果，确认吸光度的减少对应于二价硫离子的浓度，并了解此关系是定量的。从此结果表明，利用金属离子与金属指示剂络合物形成的抑制反应可测定二价硫离子。
实施例2(用发色促进法定量测定二价硫离子)
用以下的物质作为试样和试剂。
试样：二价硫离子—含0-100μM硫化钠(和光纯药社制)的水溶液。
第一试剂：Tris缓冲液(pH8.0)100mM；氯化亚铁33.3μM；2-巯基乙醇4mM
第二试剂：5Br·PAPS(同仁化学研究所社制)0.25mM
第三试剂：EDTA(pH7.0)200mM
在20μl试样中加入600μl第一试剂，37℃放置10分钟后，加入第二试剂160μl，37℃放置5分钟。再加入第三试剂20μl，室温放置5分钟后，于550nm波长下测定溶液的吸光度。结果见图2。
从图2的结果，确认吸光度的增加对应于二价硫离子的浓度，并了解此关系是定量的。从此结果表明，利用金属离子与金属指示剂络合物形成的促进反应可测定二价硫离子。
以下的实施例中，使用得自杆菌属的O-乙酰高丝氨酸裂解酶(商品名GCS，Yunitica Ltd.制，下面记载的效价为制造商的表示值)作为高半胱氨酸定量用的酶(E1)，使用O-乙酰丝氨酸裂解酶(得自菠菜)作为半胱氨酸定量用的酶(E2)。
O-乙酰丝氨酸裂解酶根据山口等的方法(Biochim.Biophys.Acta1251：91-98(1995))制备。
具体地说，从2kg菠菜叶中提取，经离子交换色谱法、疏水色谱法和凝胶过滤色谱法制成4,000单位的酶，加以使用。按同一文献记载的方法测定效价。
实施例3(用发色促进法定量测定高半胱氨酸)
用以下的物质作为试样和试剂。
试样：含0-50μM L-高胱氨酸(Sigma K.K.制)的水溶液(作为L-高半胱氨酸，0-100μM)。
第一试剂：Tris缓冲液(pH8.0)100mM；氯化亚铁33.3μM；2-巯基乙醇4mM；O-乙酰高丝氨酸裂解酶(Yunitica Ltd.制)3u/ml
第二试剂：5Br·PAPS(同仁化学研究所社制)0.25mM
第三试剂：EDTA(pH7.0)200mM
在20μl试样中加入600μ1第一试剂，37℃放置10分钟后，加入第二试剂160μl，37℃放置5分钟。再加入第三试剂20μl，室温放置5分钟后，于550nm波长下测定溶液的吸光度。结果见图3。
从图3的结果，确认吸光度的增加对应于高半胱氨酸的浓度，并了解此关系是定量的。从此结果表明，利用金属离子与金属指示剂络合物形成的促进反应可测定高半胱氨酸。
实施例4(用发色促进法定量测定半胱氨酸)
用以下的物质作为试样和试剂。
试样：含L-半胱氨酸0-500μM(Sigma公司制)的水溶液。
第一试剂：Tris缓冲液(pH8.0)100mM；氯化亚铁33.3μM；2-巯基乙醇4mM；O-乙酰丝氨酸裂解酶(得自菠菜)6u/ml
第二试剂：5Br·PAPS(同仁化学研究所社制)0.25mM
第三试剂：EDTA(pH7.0)200mM
在20μl试样中加入600μl第一试剂，37℃放置10分钟后，加入第二试剂160μl，37℃放置5分钟。再加入第三试剂20μl，室温放置5分钟后，于550nm波长下测定溶液的吸光度。结果见图4。
从图4的结果，确认吸光度的增加对应于半胱氨酸的浓度，并了解此关系是定量的。从此结果表明，利用金属离子与金属指示剂络合物形成的促进反应可测定半胱氨酸。
产业上利用的可能性
如上所述，按照本发明可简便、灵敏地定量测定试样中存在的硫化氢或二价硫离子。而且，在含特定物质的试样中加入作用于该特定物质产生硫化氢或二价硫离子的成分，用上述定量法测定生成的硫化氢，可简便、灵敏地定量测定试样中的特定物质。因此，本发明可用于机体试样中高半胱氨酸、半胱氨酸等的定量测定。
Claims (10)
1.硫化氢或二价硫离子的定量方法，其特征在于：在含有硫化氢或二价硫离子的试样中，加入金属离子或解离出该金属离子的化合物及金属指示剂，所述金属指示剂与该金属离子反应而发色，此发色反应被硫化氢或二价硫离子抑制或促进，用所述金属指示剂测定发色强度，
其中所述金属离子为锌离子或铁离子，所述金属指示剂为吡啶基偶氮化合物或亚硝基氨基酚化合物。
2.可产生硫化氢或二价硫离子的物质的定量方法，其特征在于：在含有可产生硫化氢或二价硫离子的物质的试样中，加入作用于所述可产生硫化氢或二价硫离子的物质而产生硫化氢或二价硫离子的成分、金属离子或解离出该金属离子的化合物及金属指示剂，所述金属指示剂与该金属离子反应而发色，此发色反应被硫化氢或二价硫离子抑制或促进，用所述金属指示剂测定发色强度，
其中所述金属离子为锌离子或铁离子，所述金属指示剂为吡啶基偶氮化合物或亚硝基氨基酚化合物。
3.如权利要求2所述的可产生硫化氢或二价硫离子的物质的定量方法，其中所述可产生硫化氢或二价硫离子的物质为高半胱氨酸时，作用于所述可产生硫化氢或二价硫离子的物质而产生硫化氢或二价硫离子的成分为具有作用于高半胱氨酸生成硫化氢或二价硫离子作用的酶(E1)。
4.如权利要求3所述的可产生硫化氢或二价硫离子的物质的定量方法，其中所述酶(E1)为在硫醇化合物存在下催化对高半胱氨酸的取代反应的酶。
5.如权利要求4所述的可产生硫化氢或二价硫离子的物质的定量方法，其中所述酶(E1)为O-乙酰高丝氨酸裂解酶。
6.如权利要求4所述的可产生硫化氢或二价硫离子的物质的定量方法，其中所述硫醇化合物为选自甲硫醇、2-巯基乙醇、二硫苏糖醇、硫甘油、胱胺的一种化合物。
7.如权利要求2所述的可产生硫化氢或二价硫离子的物质的定量方法，其中所述可产生硫化氢或二价硫离子的物质为半胱氨酸时，作用于所述可产生硫化氢或二价硫离子的物质而产生硫化氢或二价硫离子的成分为具有作用于半胱氨酸生成硫化氢或二价硫离子作用的酶(E2)。
8.如权利要求7所述的可产生硫化氢或二价硫离子的物质的定量方法，其中所述酶(E2)为在硫醇化合物存在下催化对半胱氨酸的取代反应的酶。
9.如权利要求7所述的可产生硫化氢或二价硫离子的物质的定量方法，其中所述酶(E2)为O-乙酰丝氨酸裂解酶。
10.如权利要求8所述的可产生硫化氢或二价硫离子的物质的定量方法，其中所述硫醇化合物为选自甲硫醇、2-巯基乙醇、二硫苏糖醇、硫甘油、胱胺的一种化合物。
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