CN117642411A - 小分子cd73拮抗剂及其用途 - Google Patents
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Abstract
公开了一种式(I)的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，或含它们的药物组合物，及其作为CD73拮抗剂在制备治疗相关疾病的药物中的用途，式(I)中各基团与说明书定义一致。
Description
本发明属于药物领域，尤其涉及一种具有CD73抑制活性的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，及其在制备治疗相关疾病的药物中的用途。
癌症的治疗方法目前主要包括放射疗法、手术疗法、药物疗法，靶向病灶的药物治疗已经成为当今临床肿瘤治疗的主要手段，但是由于肿瘤细胞耐药性产生快，现阶段人们对于肿瘤的转移与复发基本仍是束手无策。
CD73是胞外5’-核苷酸酶。C端结构域中含有AMP结合位点，通过GPI锚定连接到质膜上。细胞外中ATP和ADP或NAD+通过不同酶转化为AMP，并通过CD73进一步水解转化为腺苷。CD73在不同组织中有不同程度的表达，尤其在结肠、肾、脑、肝、心、肺、脾、淋巴结和骨髓中含量丰富(Trends Cancer.2016 1；2(2):95-109.)。CD73将AMP水解成腺苷(Ado)后，胞外Ado与细胞表面的4种G蛋白偶联腺苷受体AR(A1R、A2AR、A2BR以及A3R)结合后，促进抗炎反应，抑制LCK、MAPK、PKC等一系列与免疫激活相关的信号通路，调控调节性T细胞、抑制炎症等多途径发挥广泛的免疫抑制活性。胞外Ado也可通过平衡的核苷转运体(如ENTs)进入到细胞内，或进一步代谢成肌苷(如ADA/CD26)，Ado可激活多种信号通路，如MAPK、PI3K、PLC、PKC和离子通道等。其中A2AR和A2BR信号刺激腺苷酸环化酶(AC)产生环腺苷酸环化酶(cAMP)，激活PKA激酶。A1R和A3R信号抑制AC。来调节保内cAMP的浓度(Front Immunol.2020 15；11:508.)。
CD73通过产生胞外腺苷，成为肿瘤微环境中的主要免疫抑制调节剂。CD73在癌细胞、DC细胞、Treg、NK细胞、MDSC、TAM等多种细胞表面均有表达。抑制免疫细胞(如效应T细胞、B细胞、NK细胞和DC细胞)的同时，维持免疫抑制细胞功能(Current Opinion in Pharmacology 2020,53:1–11)。CD73在不同的肿瘤中高表达，包括结直肠癌、肺、胰腺、卵巢、乳腺、黑色素瘤和甲状腺肿瘤等。与多种类型肿瘤的不良预后密切相关，可作为恶性肿瘤发展的一种关键因子。CD73过表达可促进肿瘤的增殖和生长，且肿瘤和宿主本身的CD73均对肿瘤生长有重要影响。体内体外实验均证实抑制CD73表达，可抑制肿瘤细胞的生长(Am J Physiol Cell Physiol.2019 317(6):C1079-C1092.)。
目前，CD73小分子拮抗剂研发在全球范围内尚处在较为初步的阶段，但依据已有的临床前数据与临床数据来看，抑制肿瘤微环境CD73生理功能的药物具有很大的潜力，尤其是 当其与其他免疫检查点抑制剂如PD-1、PD-L1以及A2aR拮抗剂的联用时在保证安全性的前提上均表现出了不错的疗效或活性。因此，开发新的CD73拮抗剂，通过降低肿瘤微环境胞外腺苷来解除免疫抑制为抑制肿瘤发展和转移提供了一种新的治疗思路。
发明内容
本发明提供了一种具有CD73抑制活性的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，以及其制备和用于治疗CD73诱导的疾病。本发明的化合物对CD73具有良好的抑制作用，能抑制肿瘤细胞增殖，具有良好的药代动力学特征，高的生物利用度，安全性好，毒副作用小，对CYP酶无抑制，吸收快。
1.本发明提供一种式(I)所示的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，
其中，
X
1选自O或S；
X
2选自CR
x2aR
x2b、O、S或NR
x2c；
Y选自OR
2、-C(R
y1R
y2)-P(＝O)(OR
2)OR
2、-C(R
y1R
y2)-P(＝O)(OR
2)NHR
y3、-C(R
y1R
y2)-P(＝O)(OR
2)SR
y3、-C(R
y1R
y2)-R
y4、-C(R
y1R
y2)-P(＝S)(OR
2)OR
2、-C(R
y1R
y2)-P(＝S)(OR
2)NHR
y3或-C(R
y1R
y2)-P(＝S)(OR
2)SR
y3；
每个R
1、R
2各自独立地选自H、氘、氨基、C
1-6烷基、C
2-6烯基、C
2-6炔基、C
3-10环烷基、3-10元杂环烷基、C
6-10芳基、5-10元杂芳基、-C(R
2aR
2b)-O-C(O)-OR
2c、-C
0-6烷基-S(O)
rR
2c、-C
0-6烷基-C(O)R
2c、-C
0-6烷基-C(O)OR
2c或-C
0-6烷基-C(O)NR
2c，所述的烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基任选进一步被1个或多个选自R
x的基团取代；
r选自1或2；
每个R
y1、R
y2、R
y3、R
x2a、R
x2b、R
x2c各自独立选自H、氘、羟基、氰基、C
1-6烷基、氘代C
1-6烷基或卤代C
1-6烷基；
R
y4选自4-10元杂环烷基、5-10元杂芳基、C
3-10环烷基或C
6-10芳基，所述的杂环烷基、杂芳基、环烷基或芳基任选进一步被1个或多个选自R
x的基团取代；
每个R
2a、R
2b各自独立选自H、氘、羟基、氰基、卤素、C
1-6烷基、氘代C
1-6烷基、卤 代C
1-6烷基、C
3-10环烷基、3-10元杂环烷基、C
6-10芳基或5-10元杂芳基；
每个R
2c各自独立选自H、氘、C
1-6烷基、氘代C
1-6烷基、卤代C
1-6烷基、C
3-10环烷基、3-10元杂环烷基、C
6-10芳基或5-10元杂芳基，所述的烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基任选进一步被1个或多个选自R
x的基团取代；
L
1选自键、S、O、NH、N(C
1-6烷基)或C
1-6烷基，所述的烷基任选进一步被1个或多个选自R
x的基团取代；
L
2选自-(CR
L2aR
L2b)n-、*-Z-C
6-10芳基、*-Z-(5-10元杂芳基)-、*-C
6-10芳基-Z-、*-(5-10元杂芳基)Z-、C
2-6烯基或C
2-6炔基，所述的烷基中碳原子任选被1个或多个选自N、O、S、S(O)或S(O)
2替代，所述的L
2任选进一步被1个或多个选自R
x的基团取代，*表示L
2与P原子相连接的位点；
每个R
L2a、R
L2b各自独立选自H、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、C
1-6烷基、C
1-6烷氧基、C
2-6烯基、C
2-6炔基或-C
1-6烷基-O-C
1-6烷基，所述烷基、烷氧基、烯基或炔基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氘代C
1-6烷基、卤代C
1-6烷基、羟基C
1-6烷基、C
1-6烷氧基、氘代C
1-6烷氧基、卤代C
1-6烷氧基、羟基C
1-6烷氧基、5-10元杂芳基、C
6-10芳基、4-10元杂环烷基或C
3-10环烷基的基团取代；
或者，同一个碳原子上的R
L2a和R
L2b与所连接的碳原子一起形成C
3-6元环烷基或4-6元杂环烷基；
每个n各自独立选自1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；
每个Z独立选自键、-O-或C
1-6烷基，所述烷基任选进一步被1个或多个选自R
x的基团取代；
R
4、R
5、R
6a、R
6b、R
7a、R
7b各自独立选自H、氘、羟基、氰基、卤素、叠氮基、氨基、C
1-6烷基、C
2-6烯基或C
2-6炔基，所述的氨基或烷基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、羟基或氰基的基团取代；或者R
4、R
5、R
6a、R
6b、R
7a、R
7b各自独立选自H、氘、羟基、氰基、卤素、叠氮基、氨基、C
1-6烷基、C
2-6烯基、C
2-6炔基或C
3-6环烷基，所述的氨基或烷基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、羟基、氰基或C
1-6烷氧基的基团取代；
或者，R
6a和R
6b、或R
7a和R
7b一起形成C
2-6烯基、C
3-6元环烷基或4-6元杂环烷基，所述的烯基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、羟基、氰基的基团取代；
或者，R
4和R
5、或者R
6a和X
2、或R
L2a和R
5、或R
4和R
7a一起形成C
5-7环烷基或5-7元杂环烷基；
或者，R
4和R
6a、或R
6b和R
7b、或R
4和R
L2a、或R
4和X
2一起形成C
3-7环烷基或3-7元杂环烷基；
或者，R
x2a和R
4、或R
x2a和R
5、或R
6a和R
4、或R
6b和R
7b、或R
7a和R
5一起形成一个 化学键，条件是最多一组形成一个化学键；
Hy选自5-15元杂芳基或5-15元杂环烷基，所述的杂芳基或杂环烷基任选进一步被1个或多个选自R
hy的基团取代；
R
3选自L
3-R
3a、5-10元杂环烷基、C
5-10环烷基、5-10元杂芳基或C
6-10芳基，所述的杂环烷基、环烷基、杂芳基或芳基任选进一步被1个或多个选自R
y的基团取代；
L
3选自**-N(R
L3)C
1-6烷基-、-N(R
L3)-、**-N(R
L3)S(O)-、**-N(R
L3)S(O)
2-、**-N(R
L3)S(O)-C
1-6烷基-、**-N(R
L3)S(O)
2-C
1-6烷基-、**-N(R
L3)-N＝CH-，或者**-N(R
L3)-O-，**表示L
3与Hy连接位点；
R
3a选自H、C
1-6烷基、5-15元碳环基、5-15杂环基或者苄基，所述的烷基、苄基、碳环基或杂环基任选进一步被1个或多个选自R
y的基团取代；
R
L3各自独立地选自H、氘、C
1-6烷基、卤代C
1-6烷基或氘代C
1-6烷基；
或者，R
L3和R
hy与所连接的原子一起形成5-8元杂环烷基；
每个R
hy、R
x各自独立选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、＝O、SF
5、叠氮基、C
1-6烷基、C
1-6烷氧基、C
2-6烯基或C
2-6炔基，所述烷基、烷氧基、烯基或炔基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氘代C
1-6烷基、卤代C
1-6烷基、羟基C
1-6烷基、C
1-6烷氧基、氘代C
1-6烷氧基、卤代C
1-6烷氧基、羟基C
1-6烷氧基、-O-C
1-6烷基-C
6-10芳基或-O-C
1-6烷基-(5-10元杂芳基)的基团取代；
R
y选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、＝O、SF
5、叠氮基、-P(＝O)(C
1-6烷基)
2、-P(＝S)(C
1-6烷基)
2、
-Si(C
1-6烷基)
3、-N＝S(＝O)(C
1-6烷基)
2、-C
1-6烷基-S(＝O)(＝N)、-C
1-6烷基、C
1-6烷氧基、C
2-6烯基或C
2-6炔基，所述烷基、烷氧基、氨基、烯基或炔基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氘代C
1-6烷基、卤代C
1-6烷基、羟基C
1-6烷基、C
1-6烷氧基、氘代C
1-6烷氧基、卤代C
1-6烷氧基或羟基C
1-6烷氧基的基团取代，
其余基团如1所述。
2.本发明所述的式I化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中
L
2选自*-O-(CR
L2aR
L2b)n’-、*-(CR
L2aR
L2b)n’-O-、-(CR
L2aR
L2b)n’-、-O-、*-O-(CR
L2aR
L2b)n’-O-(CR
L2aR
L2b)m-、*-(CR
L2aR
L2b)n’-O-(CR
L2aR
L2b)m-、*-O-(CR
L2aR
L2b)n’-O-、*-O-N(R
L2c)-、*-C(O)C
1-6烷基-、*-Z-C
6-10芳基-、*-Z-(5-10元杂芳基)-、-C
2-6烯基-、-C
2-6炔基-，所述的烷基、芳基、杂芳基、烯基、炔基任选进一步被1个或多个选自R
x的基团取代；
每个R
L2a、R
L2b、R
L2c各自独立选自H、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、C
1-6烷基、C
1-6 烷氧基、C
2-6烯基、C
2-6炔基或-C
1-6烷基-O-C
1-6烷基，所述烷基、烷氧基、烯基或炔基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氘代C
1-6烷基、卤代C
1-6烷基、羟基C
1-6烷基、C
1-6烷氧基、氘代C
1-6烷氧基、卤代C
1-6烷氧基、羟基C
1-6烷氧基、5-10元杂芳基、C
6-10芳基、4-10元杂环烷基或C
3-10环烷基的基团取代；
或者，同一个碳原子上的R
L2a和R
L2b与所连接的碳原子一起形成C
3-6元环烷基、或4-6元杂环烷基；
每个m、n、n’各自独立选自1、2、3、4或5。
进一步，本发明所提供式(I)化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中
L
2选自*-O-(CR
L2aR
L2b)n’-、*-(CR
L2aR
L2b)n’-O-、-O-、*-(CR
L2aR
L2b)n’-O-(CR
L2aR
L2b)m-、*-O-(CR
L2aR
L2b)n’-O-、*-O-N(R
L2c)-、*-C(O)C
1-6烷基、*-Z-C
6-10芳基-、-C
2-6烯基-或-C
2-6炔基-，所述的烷基、芳基、烯基或炔基任选进一步被1个或多个选自R
x的基团取代；
每个m、n、n’各自独立选自1、2或3；
每个R
L2a、R
L2b、R
L2c各自独立选自H、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、C
1-4烷基或-C
1-4烷基-O-C
1-4烷基，所述烷基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氘代C
1-4烷基、卤代C
1-4烷基、羟基C
1-4烷基、C
1-4烷氧基、氘代C
1-4烷氧基、卤代C
1-4烷氧基、羟基C
1-4烷氧基、5元杂芳基、6元杂芳基或8-10元双环杂芳基的基团取代；
Z独立选自键、-O-或C
1-4烷基，所述烷基任选进一步被1个或多个选自R
x的基团取代；
或者，同一个碳原子上的R
L2a和R
L2b与所连接的碳原子一起形成C
3-6元环烷基、4-6元杂环烷基。
进一步，本发明所提供式(I)化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中
L
2选自*-O-(CR
L2aR
L2b)n’-、*-(CR
L2aR
L2b)n’-O-、-O-、*-(CR
L2aR
L2b)n’-O-(CR
L2aR
L2b)m-、*-O-(CR
L2aR
L2b)n’-O-、*-O-N(R
L2c)-、*-C(O)C
1-4烷基、*-Z-C
6-10芳基-、-C
2-6烯基-或-C
2-6炔基-，所述的烷基、芳基、烯基或炔基任选进一步被1个或多个选自R
x的基团取代；
每个m、n、n’各自独立选自1、2或3；
Z独立选自键、-O-或C
1-3烷基，所述烷基任选进一步被1个或多个选自R
x的基团取代；
每个R
L2a、R
L2b、R
L2c各自独立选自H、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、C
1-4烷基或-C
1-4烷基-O-C
1-4烷基，所述烷基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氘代C
1-4烷基、卤代C
1-4烷基、羟基C
1-4烷基、C
1-4烷氧基、氘代C
1-4烷氧基、卤代C
1-4烷氧基、羟基C
1-4烷氧基、5元杂芳基、6元杂芳基或8-10元双环杂芳基的基团取代；
或者，同一个碳原子上的R
L2a和R
L2b与所连接的碳原子一起形成C
3-6元环烷基或4-6 元杂环烷基。
进一步，本发明所提供式(I)化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中
L
2选自*-O-(CR
L2aR
L2b)
2-、*-C(R
L2aR
L2b)-O-、-O-、*-C(R
L2aR
L2b)-O-C(R
L2aR
L2b)-、*-O-C(R
L2aR
L2b)-O-、*-O-N(R
L2c)-、*-C(O)C
1-3烷基、*-Z-苯基、C
2-4烯基或C
2-4炔基，所述的烷基、芳基、烯基或炔基任选进一步被1个或多个选自R
x的基团取代；
Z独立选自键、-O-、甲基或乙基，所述甲基或乙基任选进一步被1个或多个选自R
x的基团取代；
每个R
L2a、R
L2b、R
L2c各自独立选自H、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、甲基、乙基、丙基、异丙基、-甲基-O-甲基、-甲基-O-乙基、-甲基-O-丙基、-乙基-O-甲基、-乙基-O-乙基或-乙基-O-丙基，所述甲基、乙基、丙基或异丙基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氘代C
1-2烷基、氟代C
1-2烷基、羟基C
1-2烷基、C
1-2烷氧基、氘代C
1-2烷氧基、卤代C
1-2烷氧基、羟基C
1-2烷氧基、5元杂芳基、6元杂芳基或8-10元双环杂芳基的基团取代；
或者，同一个碳原子上的R
L2a和R
L2b与所连接的碳原子一起形成3元环烷基、4元环烷基、5元环烷基、6元环烷基、4元杂环烷基、5元杂环烷基或6元杂环烷基。
3.本发明所述的式I化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，
R
3选自L
3-R
3a；
R
3a选自H、C
1-6烷基、苄基、5-15元碳环基或者5-15杂环基，所述的烷基、苄基、碳环基或杂环基进一步被1个或多个选自R
y的基团取代；进一步，R
3a选自H、C
1-6烷基、5-15元碳环基或者5-15杂环基，所述的碳环基或杂环基进一步被1个或多个选自R
y的基团取代；进一步，R
3a选自苯基、5元杂芳基、6元杂芳基、5元单环环烷基、6元单环环烷基、5元单环杂环烷基、6元单环杂环烷基、8-10元双环杂芳基、8-10元双环杂环烷基、8-10元双环芳基、8-10元双环环烷基、11-15元三环环烷基或11-15元三环杂环烷基，所述的环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基进一步被1至3个选自R
y的基团取代；进一步，R
3a选自苯基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、苯并5元环烷基、苯并5元杂环烷基、苯并6元环烷基、苯并6元杂环烷基、苯并5元杂芳基、苯并6元杂芳基、吡啶并5元环烷基、吡啶并5元杂环烷基、吡啶并6元环烷基、吡啶并6元杂环烷基、吡啶并5元杂芳基、吡啶并6元杂芳基、5元环烷基并苯基、5元杂环烷基并苯基、6元环烷基并苯基、6元杂环烷基并苯基、5元杂芳基并苯基、6元杂芳基并苯基、5元环烷基并吡啶基、5元杂环烷基并吡啶基、6元环烷基并吡啶基、6元杂环烷基并吡啶基、5元杂芳基并吡啶基或6元杂芳基并吡啶基，其 中“并”字左侧的环表示与L
3链接的环，所述的苯基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、环烷基、杂环烷基或杂芳基进一步被1、2或3个选自R
y的基团取代；进一步，R
3a选自苯基，所述的苯基进一步被1、2或3个选自R
y的基团取代；
当R
3a被2个或2个以上(比如3、4个)R
y取代时，R
y选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、＝O、SF
5、叠氮基、-P(＝O)(C
1-6烷基)
2、-P(＝S)(C
1-6烷基)
2、
-Si(C
1-6烷基)
3、-N＝S(＝O)(C
1-6烷基)
2、-C
1-6烷基-S(＝O)(＝N)、-C
1-6烷基、C
1-6烷氧基、C
2-6烯基、C
2-6炔基，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氘代C
1-6烷基、卤代C
1-6烷基、羟基C
1-6烷基、C
1-6烷氧基、氘代C
1-6烷氧基、卤代C
1-6烷氧基、羟基C
1-6烷氧基的基团取代；进一步，R
y选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、＝O、SF
5、叠氮基、-P(＝O)(C
1-3烷基)
2、-P(＝S)(C
1-3烷基)
2、
-Si(C
1-3烷基)
3、-N＝S(＝O)(C
1-3烷基)
2、-C
1-3烷基-S(＝O)(＝N)、-C
1-3烷基、C
1-3烷氧基、C
2-4烯基或C
2-4炔基，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氘代C
1-3烷基、卤代C
1-3烷基、羟基C
1-3烷基、C
1-3烷氧基、氘代C
1-3烷氧基、卤代C
1-3烷氧基或羟基C
1-3烷氧基的基团取代；进一步，至少一个R
y选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、＝O、SF
5、叠氮基、-C
1-3烷基、C
1-3烷氧基、C
2-4烯基或C
2-4炔基；条件是，当R
3a被2个R
y取代时，R
y不为F和SF
5的组合；
当R
3a仅被一个R
y取代时，R
y选自叠氮基、-P(＝O)(C
1-6烷基)
2、-P(＝S)(C
1-6烷基)
2、
-Si(C
1-6烷基)
3、-N＝S(＝O)(C
1-6烷基)
2或-C
1-6烷基-S(＝O)(＝N)，所述烷基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氘代C
1-6烷基、卤代C
1-6烷基、羟基C
1-6烷基、C
1-6烷氧基、氘代C
1-6烷氧基、卤代C
1-6烷氧基或羟基C
1-6烷氧基的基团取代；进一步，R
y选自叠氮基、-P(＝O)(C
1-3烷基)
2、-P(＝S)(C
1-3烷基)
2、
-Si(C
1-3烷基)
3、-N＝S(＝O)(C
1-3烷基)
2或-C
1-3烷基-S(＝O)(＝N)，所述烷基任选进一步被1、2、3选自氘、F、Cl、氨基、羟基或氰基的基团取代，
其余基团如1所述。
4.本发明所述的式I化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中
R
4、R
5、R
6a、R
6b、R
7a、R
7b各自独立选自H、氘、羟基、氰基、卤素、叠氮基、氨基、C
1-6烷基、C
2-6烯基或C
2-6炔基，所述的氨基、烷基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、羟基或氰基的基团取代；
或者，R
6a和R
6b、或R
7a和R
7b一起形成C
2-6烯基、C
3-6元环烷基或4-6元杂环烷基，所述的烯基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、羟基或氰基的基团取代；进一步，R
6a和R
6b、或R
7a和R
7b一起形成C
2-4烯基、C
3-4元环烷基或4-5元杂环烷基，所述的烯基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、羟基或氰基的基团取代；进一步，R
6a和R
6b、或R
7a和R
7b一起形成乙烯基、丙烯基、3元环烷基、4元环烷基、含1个选自N或O原子的4元杂环烷基或含1个选自N或O原子的5元杂环烷基，所述的烯基任选进一步被1、2或3选自氘、F、Cl、羟基、氰基的基团取代；
或者，R
4、R
5和X
2、或者R
4、R
6a和X
2、或R
4、R
7a和X
2一起形成C
5-7环烷基、5-7元杂环烷基；进一步，R
4、R
5和X
2、或者R
4、R
6a和X
2、或R
4、R
7a和X
2一起形成5元环烷基、6元环烷基、7元环烷基、5元杂环烷基、6元杂环烷基或7元杂环烷基；进一步，R
4、R
5和X
2、或者R
4、R
6a和X
2、或R
4、R
7a和X
2一起形成5元环烷基、6元环烷基或、7元环烷基；进一步，R
4、R
5和X
2、或者R
4、R
6a和X
2、或R
4、R
7a和X
2一起形成5元杂环烷基、6元杂环烷基、或7元杂环烷基，进一步地，所述的杂环烷基含有1或2个氧原子；
或者，R
4和R
6a、或R
6b和R
7b、或R
4和X
2及其连接的原子一起形成C
3-7环烷基或3-7元杂环烷基；进一步，R
4和R
6a、或R
6b和R
7b、或R
4和X
2及其连接的原子一起形成3元环烷基、4元环烷基、5元环烷基、6元环烷基、7元环烷基、4元杂环烷基、5元杂环烷基、6元杂环烷基或7元杂环烷基，所述的杂环烷基含有1或2个氧原子；
或者，R
x2a和R
4、或R
x2a和R
5、或R
6a和R
4、或R
6b和R
7b、或R
7a和R
5及其连接的原子一起形成一个化学键，条件是最多一组形成一个化学键；
条件是
不选自如下结构：
其余基团如1所述。
5.本发明式I所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中
选自：
其余基团如1所述。
6.本发明式I所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中
R
L2a、R
5和X
2及其连接的原子一起形成C
5-7环烷基或5-7元杂环烷基；进一步，R
L2a、R
5和X
2及其连接的原子一起形成5元环烷基、6元环烷基、7元环烷基、5元杂环烷基、6元杂环烷基或7元杂环烷基；进一步，R
L2a、R
5和X
2及其连接的原子一起形成5元杂环烷基、6元杂环烷基或7元杂环烷基，所述的杂环烷基含有1或2个氧原子；进一步，R
L2a、R
5和X
2及其连接的原子一起形成6元杂环烷基或7元杂环烷基，所述的杂环烷基含有1或2个氧原子；
或者，R
4和R
L2a及其连接的原子一起形成C
3-7环烷基或3-7元杂环烷基；进一步，R
4和R
L2a及其连接的原子一起形成3元环烷基、4元环烷基、5元环烷基、6元环烷基、7元环烷基、4元杂环烷基、5元杂环烷基、6元杂环烷基或7元杂环烷基，所述的杂环烷基含有1或2个氧原子；进一步，R
4和R
L2a及其连接的原子一起形成3元环烷基、4元环烷基或5元环烷基，
其余基团如1所述。
7.本发明所述式I的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，所述化合物具有式(II)结构：
其余基团如1所述。
8.本发明所述的式I化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，所述化合物具有式(III)、(IV)、(V)、(VI)、(III-1)、(IV-1)、(V-1)、(VI-1)结构：
L
1选自S、O、NH、N(CH
3)或-CH
2-；进一步，L
1选自-CH
2-；进一步，L
1选自O、NH、N(CH
3)；进一步，L
1选自O；进一步，L
1选自NH、N(CH
3)；
L
1a选自键、S、O、NH、N(CH
3)或-CH
2-；进一步，L
1a选自键、O、NH、N(CH
3)或-CH
2-；进一步，L
1a选自键、或-CH
2-；
L
2选自*-O-(CR
L2aR
L2b)
2-、*-(CR
L2aR
L2b)n’-O-、-O-、*-O-(CR
L2aR
L2b)n’-O-(CR
L2aR
L2b)m-、*-(CR
L2aR
L2b)n’-O-(CR
L2aR
L2b)m-、*-O-(CR
L2aR
L2b)n’-O-、*-O-N(R
L2c)-、*-C(O)C
1-6烷基、 *-Z-C
6-10芳基-、*-Z-(5-10元杂芳基)-、-C
2-6烯基-或-C
2-6炔基-，所述的烷基、芳基、杂芳基、烯基或炔基任选进一步被1至3个选自R
x的基团取代；进一步，L
2选自*-O-(CR
L2aR
L2b)
2-、*-C(R
L2aR
L2b)-O-、*-(CR
L2aR
L2b)
2-O-、-O-、*-O-C(R
L2aR
L2b)-O-C(R
L2aR
L2b)-、*-O-(CR
L2aR
L2b)
2-O-(CR
L2aR
L2b)
2-、*-C(R
L2aR
L2b)-O-C(R
L2aR
L2b)-、*-(CR
L2aR
L2b)
2-O-(CR
L2aR
L2b)
2-、*-O-C(R
L2aR
L2b)-O-、*-O-(CR
L2aR
L2b)
2-O-、*-O-N(R
L2c)-、*-C(O)C
1-3烷基-、*-Z-苯基-、*-Z-(5元杂芳基)-、*-Z-(6元杂芳基)-、-C
2-4烯基-或-C
2-4炔基-，所述的烷基、苯基、杂芳基、烯基或炔基任选进一步被1至3个选自R
x的基团取代，*表示L
2与P原子相连接的位点；
L
2a选自*-O-(CR
L2aR
L2b)
2-、*-(CR
L2aR
L2b)
n’-O-、*-O-(CR
L2aR
L2b)
n’-O-(CR
L2aR
L2b)
m-、*-(CR
L2aR
L2b)
2-O-(CR
L2aR
L2b)
m-、*-O-(CR
L2aR
L2b)
n’-O-、*-O-N(R
L2c)-、*-C(O)C
1-6烷基-、*-Z-C
6-10芳基-、*-Z-(5-10元杂芳基)-、-C
2-6烯基-或-C
2-6炔基-，所述的烷基、芳基、杂芳基、烯基或炔基任选进一步被1至3个选自R
x的基团取代，*表示L
2与P原子相连接的位点；进一步，L
2a选自*-O-(CR
L2aR
L2b)
2-、*-(CR
L2aR
L2b)
n’-O-、*-O-(CR
L2aR
L2b)
n’-O-、*-O-N(R
L2c)-、*-C(O)C
1-6烷基-、*-Z-C
6-10芳基-、*-Z-(5-10元杂芳基)-、-C
2-6烯基-或-C
2-6炔基-，所述的烷基、芳基、杂芳基、烯基或炔基任选进一步被1至3个选自R
x的基团取代，*表示L
2与P原子相连接的位点；进一步，L
2a选自*-O-(CR
L2aR
L2b)
2-、*-(CR
L2aR
L2b)
n’-O-、*-O-(CR
L2aR
L2b)
n’-O-、*-C(O)C
1-3烷基-、*-Z-C
6-10芳基-、*-Z-(5-10元杂芳基)-、-C
2-6烯基-或-C
2-6炔基-，所述的烷基、芳基、杂芳基、烯基或炔基任选进一步被1、2、3个选自R
x的基团取代，*表示L
2与P原子相连接的位点；进一步，L
2a选自-O-CH
2CH
2CH
2-O-、-O-CH
2CH
2-O-、-O-CH
2CH
2-、*-C(O)CH
2-、苯基、*-CH
2-苯基-、*-O-苯基-、乙烯基、丙烯基或乙炔基，所述的苯基、乙烯基、丙烯基或乙炔基任选进一步被1、2个选自F、Cl的基团取代，*表示L
2与P原子相连接的位点；
L
2b选自*-O-(CR
L2aR
L2b)
2-、*-(CR
L2aR
L2b)n’-O-、-O-、*-O-(CR
L2aR
L2b)n’-O-(CR
L2aR
L2b)m-、*-(CR
L2aR
L2b)
n’-O-(CR
L2aR
L2b)
m-、*-O-(CR
L2aR
L2b)n’-O-、*-O-N(R
L2c)-、*-C(O)C
1-6烷基-、*-Z-C
6-10芳基-、*-Z-(5-10元杂芳基)-、-C
2-6烯基-或-C
2-6炔基-，所述的烷基、芳基、杂芳基、烯基或炔基任选进一步被1至3个选自R
x的基团取代，*表示L
2与P原子相连接的位点；进一步，L
2b选自*-O-(CR
L2aR
L2b)
2-、*-(CR
L2aR
L2b)n’-O-、-O-、*-(CR
L2aR
L2b)
n’-O-(CR
L2aR
L2b)
m-、*-O-(CR
L2aR
L2b)n’-O-、*-O-N(R
L2c)-、*-C(O)C
1-6烷基-、*-Z-C
6-10芳基-、*-Z-(5-10元杂芳基)-、-C
2-6烯基-或-C
2-6炔基-，所述的烷基、芳基、杂芳基、烯基或炔基任选进一步被1至3个选自R
x的基团取代，*表示L
2与P原子相连接的位点；进一步，L
2b选自*-(CR
L2aR
L2b)n’-O-、*-(CR
L2aR
L2b)
n’-O-(CR
L2aR
L2b)
m-；进一步，L
2b选自*-(CR
L2aR
L2b)-O-或*-(CR
L2aR
L2b)-O-(CR
L2aR
L2b)-；
每个R
L2a、R
L2b、R
L2c各自独立选自H、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、C
1-6烷基、C
1-6烷氧基、C
2-6烯基、C
2-6炔基或-C
1-6烷基-O-C
1-6烷基，所述烷基、烷氧基、烯基或炔基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氘代C
1-6烷基、卤代C
1-6烷基、羟基C
1-6烷基、C
1-6烷氧基、氘代C
1-6烷氧基、卤代C
1-6烷氧基、羟基C
1-6烷氧基、5-10元杂芳基、C
6-10芳基、4-10元杂环烷基或C
3-10环烷基的基团取代；进一步，每个R
L2a、R
L2b、R
L2c各自独立选自H、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、C
1-4烷基、C
1-4烷氧基、C
2-4烯基、C
2-4炔基或-C
1-4烷基-O-C
1-4烷基，所述烷基、烷氧基、烯基或炔基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氘代C
1-2烷基、卤代C
1-2烷基、羟基C
1-2烷基、C
1-2烷氧基、氘代C
1-2烷氧基、卤代C
1-2烷氧基、羟基C
1-2烷氧基、5-6元杂芳基、8-10元双环杂芳基、苯基、C
8-10双环芳基、4-6元单环杂环烷基、6-10元双环杂环烷基、C
3-6单环环烷基或C
6-10双环环烷基的基团取代；进一步，每个R
L2a、R
L2b、R
L2c各自独立选自H、氘、F、Cl、氨基、羟基、氰基、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、乙烯基、丙烯基、乙炔基、丙炔基、-甲基-O-甲基-、-甲基-O-乙基-或-乙基-O-乙基-，以上基团任选进一步被1、2、3个选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氘代C
1-2烷基、卤代C
1-2烷基、羟基C
1-2烷基、C
1-2烷氧基、氘代C
1-2烷氧基、卤代C
1-2烷氧基、羟基C
1-2烷氧基、5-6元杂芳基、苯基、4-6元单环杂环烷基、C
3-6单环环烷基或C
6-10双环环烷基的基团取代；
或者，同一个碳原子上的R
L2a和R
L2b与所连接的碳原子一起形成C
3-6元环烷基或4-6元杂环烷基；进一步，同一个碳原子上的R
L2a和R
L2b与所连接的碳原子一起形成3元环烷基、4元环烷基、5元环烷基、6元环烷基、4元杂环烷基、5元杂环烷基或6元杂环烷基；
X
2选自CH
2、O；进一步，X
2选自CH
2；进一步，X
2选自O；
每个Z独立选自键或-O-、C
1-6烷基，所述烷基任选进一步被1个或多个选自R
x的基团取代；进一步，每个Z独立选自键、-O-、C
1-3烷基，所述烷基任选进一步被1、2、3选自R
x的基团取代；进一步，每个Z独立选自键、-O-、甲基、乙基、丙基，所述甲基、乙基、丙基任选进一步被1、2、3选自R
x的基团取代；
每个m、n、n’独立选自1、2或3；进一步，每个m独立选自1或2，每个n、n’独立选自1或2、3；
条件是，式(V)中当L
2b选自*-C(R
L2aR
L2b)-O-C(R
L2aR
L2b)-时，R
L2a、R
L2b不能同时为H，
其余基团如1所述。
9.本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，所述化合物具有式(III-2)、(III-3)、(IV-2)、(IV-3)、(V-2)、(V-3)、(VI-2)、(VI-3)结构：
p选自0、1或2；进一步，p选自0或者1，进一步，p选自0；
R
3a选自5-6元单环环烷基、5-6元单环杂环烷基、8-10元双环环烷基、8-10元双环杂 环烷基、11-15元三环环烷基或11-15元三环杂环烷基，所述的环烷基或杂环烷基任选进一步被1至3个选自R
y的基团取代；进一步，R
3a选自5元单环环烷基、6元单环环烷基、5元单环杂环烷基、6元单环杂环烷基、苯并5元环烷基、苯并5元杂环烷基、苯并6元环烷基、苯并6元杂环烷基、苯并5元杂芳基、苯并6元杂芳基、吡啶并5元环烷基、吡啶并5元杂环烷基、吡啶并6元环烷基、吡啶并6元杂环烷基、吡啶并5元杂芳基、吡啶并6元杂芳基、5元环烷基并苯基、5元杂环烷基并苯基、6元环烷基并苯基、6元杂环烷基并苯基、5元杂芳基并苯基、6元杂芳基并苯基、5元环烷基并吡啶基、5元杂环烷基并吡啶基、6元环烷基并吡啶基、6元杂环烷基并吡啶基、5元杂芳基并吡啶基或6元杂芳基并吡啶基，其中“并”字左侧的环表示与氮原子链接的环，所述的苯基、吡啶基、环烷基、杂环烷基、杂芳基进一步被1、2或3个选自R
y的基团取代；进一步，R
3a选自5元单环环烷基、6元单环环烷基、5元单环杂环烷基、6元单环杂环烷基、5元环烷基并苯基、5元杂环烷基并苯基、6元环烷基并苯基或6元杂环烷基并苯基，其中“并”字左侧的环表示与氮原子链接的环，所述的苯基、环烷基、杂环烷基、杂芳基进一步被1、2或3个选自R
y的基团取代；
L
2选自*-O-(CR
L2aR
L2b)
2-、*-(CR
L2aR
L2b)n’-O-、-O-、*-C(R
L2aR
L2b)-O-C(R
L2aR
L2b)-、*-O-C(R
L2aR
L2b)-O-、*-O-N(R
L2c)-、*-C(O)C
1-3烷基-、*-Z-苯基-、*-Z-(5元杂芳基)-、*-Z-(6元杂芳基)-、-C
2-4烯基-或-C
2-4炔基-，所述的烷基、芳基、杂芳基、烯基或炔基任选进一步被1至3个选自R
x的基团取代；进一步，L
2选自*-O-(CR
L2aR
L2b)n’-、*-(CR
L2aR
L2b)n’-O-、-O-、*-(CR
L2aR
L2b)n’-O-(CR
L2aR
L2b)m-、*-O-(CR
L2aR
L2b)n’-O-、*-O-N(R
L2c)-、*-C(O)C
1-4烷基-、*-Z-C
6-10芳基-、-C
2-6烯基-或-C
2-6炔基-，所述的烷基、芳基、烯基或炔基任选进一步被1个或多个选自R
x的基团取代；进一步，L
2选自*-O-(CR
L2aR
L2b)
2-、*-C(R
L2aR
L2b)-O-、-O-、*-C(R
L2aR
L2b)-O-C(R
L2aR
L2b)-、*-O-C(R
L2aR
L2b)-O-、*-O-N(R
L2c)-、*-C(O)C
1-3烷基-、*-Z-苯基-、-C
2-4烯基-或-C
2-4炔基-，所述的烷基、芳基、烯基或炔基任选进一步被1个或多个选自R
x的基团取代；进一步，L
2选自*-O-(CR
L2aR
L2b)
2-、*-C(R
L2aR
L2b)-O-、*-(CR
L2aR
L2b)
2-O-、-O-、*-O-C(R
L2aR
L2b)-O-C(R
L2aR
L2b)-、*-O-(CR
L2aR
L2b)
2-O-(CR
L2aR
L2b)
2-、*-C(R
L2aR
L2b)-O-C(R
L2aR
L2b)-、*-(CR
L2aR
L2b)
2-O-(CR
L2aR
L2b)
2-、*-O-C(R
L2aR
L2b)-O-、*-O-(CR
L2aR
L2b)
2-O-、*-O-N(R
L2c)-、*-C(O)C
1-3烷基-、*-Z-苯基-、*-Z-(5元杂芳基)--、*-Z-(6元杂芳基)-、-C
2-4烯基-或-C
2-4炔基-，所述的烷基、苯基、杂芳基、烯基或炔基任选进一步被1、2、3个选自R
x的基团取代；
L
2a选自*-O-(CR
L2aR
L2b)
2-、*-(CR
L2aR
L2b)
n’-O-、*-O-(CR
L2aR
L2b)
n’-O-(CR
L2aR
L2b)
m-、*-(CR
L2aR
L2b)
2-O-(CR
L2aR
L2b)
m-、*-O-(CR
L2aR
L2b)
n’-O-、*-O-N(R
L2c)-、*-C(O)C
1-6烷基、*-Z-C
6-10芳基-、*-Z-(5-10元杂芳基)-、-C
2-6烯基-或-C
2-6炔基-，所述的烷基、芳基、杂芳基、烯基或炔基任选进一步被1至3个选自R
x的基团取代，*表示L
2与P原子相连接的位点；进一步， L
2a选自*-O-(CR
L2aR
L2b)
2-、*-(CR
L2aR
L2b)
n’-O-、*-O-(CR
L2aR
L2b)
n’-O-、*-O-N(R
L2c)-、*-C(O)C
1-6烷基-、*-Z-C
6-10芳基-、*-Z-(5-10元杂芳基)-、-C
2-6烯基-或-C
2-6炔基-，所述的烷基、芳基、杂芳基、烯基或炔基任选进一步被1至3个选自R
x的基团取代，*表示L
2与P原子相连接的位点；进一步，L
2a选自*-O-(CR
L2aR
L2b)
2-、*-(CR
L2aR
L2b)
n’-O-、*-O-(CR
L2aR
L2b)
n’-O-、*-C(O)C
1-3烷基-、*-Z-C
6-10芳基-、*-Z-(5-10元杂芳基)-、-C
2-6烯基-或-C
2-6炔基-，所述的烷基、芳基、杂芳基、烯基或炔基任选进一步被1、2、3个选自R
x的基团取代，*表示L
2与P原子相连接的位点；进一步，L
2a选自-O-CH
2CH
2CH
2-O-、-O-CH
2CH
2-O-、-O-CH
2CH
2-、*-C(O)CH
2-、苯基、*-CH
2-苯基-、*-O-苯基-、乙烯基、丙烯基或乙炔基，所述的苯基、乙烯基、丙烯基或乙炔基任选进一步被1、2个选自F、Cl的基团取代，*表示L
2与P原子相连接的位点；
L
2b选自*-O-(CR
L2aR
L2b)
2-、*-(CR
L2aR
L2b)n’-O-、-O-、*-O-(CR
L2aR
L2b)n’-O-(CR
L2aR
L2b)m-、*-(CR
L2aR
L2b)
n’-O-(CR
L2aR
L2b)
m-、*-O-(CR
L2aR
L2b)n’-O-、*-O-N(R
L2c)-、*-C(O)C
1-6烷基、*-Z-C
6-10芳基-、*-Z-(5-10元杂芳基)-、-C
2-6烯基-或-C
2-6炔基-，所述的烷基、芳基、杂芳基、烯基或炔基任选进一步被1至3个选自R
x的基团取代，*表示L
2与P原子相连接的位点；进一步，L
2b选自*-O-(CR
L2aR
L2b)
2-、*-(CR
L2aR
L2b)n’-O-、-O-、*-(CR
L2aR
L2b)
n’-O-(CR
L2aR
L2b)
m-、*-O-(CR
L2aR
L2b)n’-O-、*-O-N(R
L2c)-、*-C(O)C
1-6烷基-、*-Z-C
6-10芳基-、*-Z-(5-10元杂芳基)-、-C
2-6烯基-或-C
2-6炔基-，所述的烷基、芳基、杂芳基、烯基或炔基任选进一步被1至3个选自R
x的基团取代，*表示L
2与P原子相连接的位点；进一步，L
2b选自*-(CR
L2aR
L2b)n’-O-、*-(CR
L2aR
L2b)
n’-O-(CR
L2aR
L2b)
m-；进一步，L
2b选自*-(CR
L2aR
L2b)-O-、*-(CR
L2aR
L2b)-O-(CR
L2aR
L2b)-；
每个R
L2a、R
L2b、R
L2c各自独立选自H、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、C
1-6烷基、C
1-6烷氧基、C
2-6烯基、C
2-6炔基或-C
1-6烷基-O-C
1-6烷基，所述烷基、烷氧基、烯基或炔基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氘代C
1-6烷基、卤代C
1-6烷基、羟基C
1-6烷基、C
1-6烷氧基、氘代C
1-6烷氧基、卤代C
1-6烷氧基、羟基C
1-6烷氧基、5-10元杂芳基、C
6-10芳基、4-10元杂环烷基或C
3-10环烷基的基团取代；进一步，每个R
L2a、R
L2b、R
L2c各自独立选自H、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、C
1-4烷基、C
1-4烷氧基、C
2-4烯基、C
2-4炔基或-C
1-4烷基-O-C
1-4烷基，所述烷基、烷氧基、烯基或炔基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氘代C
1-2烷基、卤代C
1-2烷基、羟基C
1-2烷基、C
1-2烷氧基、氘代C
1-2烷氧基、卤代C
1-2烷氧基、羟基C
1-2烷氧基、5-6元杂芳基、8-10元双环杂芳基、苯基、C
8-10双环芳基、4-6元单环杂环烷基、6-10元双环杂环烷基、C
3-6单环环烷基或C
6-10双环环烷基的基团取代；进一步，每个R
L2a、R
L2b、R
L2c各自独立选自H、氘、F、Cl、氨基、羟基、氰基、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、 异丙氧基、丁氧基、乙烯基、丙烯基、乙炔基、丙炔基、-甲基-O-甲基-、-甲基-O-乙基-或-乙基-O-乙基-，以上基团任选进一步被1、2、3个选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氘代C
1-2烷基、卤代C
1-2烷基、羟基C
1-2烷基、C
1-2烷氧基、氘代C
1-2烷氧基、卤代C
1-2烷氧基、羟基C
1-2烷氧基、5-6元杂芳基、苯基、4-6元单环杂环烷基、C
3-6单环环烷基或C
6-10双环环烷基的基团取代；
或者，同一个碳原子上的R
L2a和R
L2b与所连接的碳原子一起形成C
3-6元环烷基或4-6元杂环烷基；进一步，同一个碳原子上的R
L2a和R
L2b与所连接的碳原子一起形成3元环烷基、4元环烷基、5元环烷基、6元环烷基、4元杂环烷基、5元杂环烷基或6元杂环烷基；
每个Z独立选自键、-O-或C
1-6烷基，所述烷基任选进一步被1个或多个选自R
x的基团取代；进一步，每个Z独立选自键、-O-或C
1-3烷基，所述烷基任选进一步被1、2、3选自R
x的基团取代；进一步，每个Z独立选自键、-O-、甲基、乙基或丙基，所述甲基、乙基或丙基任选进一步被1、2、3选自R
x的基团取代；
每个m、n、n’独立选自1、2或3；进一步，每个m各自独立选自1、2，每个n、n’各自独立选自1、2、3；
条件是，式(V-2)、(V-3)中当L
2b选自*-C(R
L2aR
L2b)-O-C(R
L2aR
L2b)-时，R
L2a、R
L2b不能同时为H。
10.本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中
Hy选自6元杂芳基、5元杂芳基并5元杂芳基、5元杂芳基并苯基、5元杂芳基并5元杂环烷基、5元杂芳基并6元杂环烷基、5元杂环烷基并5元杂芳基、5元杂环烷基并6元杂芳基、5元杂环烷基并苯基、5元杂环烷基并5元杂环烷基、5元杂环烷基并6元杂环烷基、6元杂芳基并5元杂芳基、6元杂芳基并6元杂芳基、6元杂芳基并苯基、6元杂芳基并5元杂环烷基、6元杂芳基并6元杂环烷基、6元杂环烷基并5元杂芳基、6元杂环烷基并6元杂芳基、6元杂环烷基并苯基、6元杂环烷基并5元杂环烷基、6元杂环烷基并6元杂环烷基或者
A环选自5-6元杂芳基、5-6元杂环烷基或苯基；
B环选自5-6元杂芳基、4-6元杂环烷基或4-6环烷基；
C环选自5-6元杂芳基、5-6元杂环烷基或苯基；
所述的杂芳基、芳基、苯基或杂环烷基任选进一步被1个或多个选自R
hy的基团取代；
每个R
hy各自独立选自H、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、C
1-6烷基、氘代C
1-6烷基、卤代C
1-6烷基、羟基C
1-6烷基、C
1-6烷氧基、氘代C
1-6烷氧基、卤代C
1-6烷氧基或羟基C
1-6 烷氧基的基团取代，
其余基团如1所述。
11.本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中
Hy选自
每个R
hy各自独立选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、SF
5、叠氮基、C
1-4烷基、C
1-4烷氧基、C
2-4烯基、C
2-4炔基，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基任选进一步被1至3个选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氘代C
1-4烷基、卤代C
1-4烷基、羟基C
1-4烷基、C
1-4烷氧基、氘代C
1-4烷氧基、卤代C
1-4烷氧基或羟基C
1-4烷氧基的基团取代，
其余基团如1所述。
12.本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中
Y选自-C(R
y1R
y2)-R
y4、-C(R
y1R
y2)-P(＝S)(OR
2)OR
2、-C(R
y1R
y2)-P(＝S)(OR
2)NR
y3、-C(R
y1R
y2)-P(＝S)(OR
2)SR
y3；
每个R
y1、R
y2、R
y3、R
x2a、R
x2b、R
x2c各自独立选自H、氘、羟基、氰基、C
1-6烷基、氘代C
1-6烷基或卤代C
1-6烷基；进一步，每个R
y1、R
y2、R
y3、R
x2a、R
x2b、R
x2c各自独立选自H、氘、羟基、氰基、C
1-3烷基、氘代C
1-3烷基或卤代C
1-3烷基；进一步，每个R
y1、R
y2、R
y3、R
x2a、R
x2b、R
x2c各自独立选自H、氘或羟基；
R
y4选自4-10元杂环烷基、5-10元杂芳基、C
3-10环烷基或C
6-10芳基，所述的杂环烷基、杂芳基、环烷基或芳基任选进一步被1个或多个选自R
x的基团取代；进一步，R
y4选自5元杂环烷基、6元杂环烷基或7元杂环烷基，所述的杂环烷基任选进一步被1、2、3个选自R
x的基团取代，
其余基团如1所述。
13.本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，其中所述化合物具有式(VII)结构：
每个R
L2a1、R
L2b1、R
L2a2、R
L2b2各自独立选自H、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、C
1-6烷基、C
1-6烷氧基、C
2-6烯基、C
2-6炔基、-C
1-6烷基-O-C
1-6烷基，所述烷基、烷氧基、烯基或炔基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氘代C
1-6烷基、卤代C
1-6烷基、羟基C
1-6烷基、C
1-6烷氧基、氘代C
1-6烷氧基、卤代C
1-6烷氧基或羟基C
1-6烷氧基的基团取代；进一步，每个R
L2a1、R
L2b1、R
L2a2、R
L2b2各自独立选自H、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、C
1-4烷基、C
1-4烷氧基、C
2-4烯基、C
2-4炔基、-C
1-4烷基-O-C
1-4烷基，所述烷基、烷氧基、烯基或炔基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氘代C
1-2烷基、卤代C
1-2烷基、羟基C
1-2烷基、C
1-2烷氧基、氘代C
1-2烷氧基、卤代C
1-2烷氧基或羟基C
1-2烷氧基的基团取代；
或者，同一个碳原子上的R
L2a1和R
L2b1与所连接的碳原子一起形成C
3-6元环烷基或4-6元杂环烷基；进一步，同一个碳原子上的R
L2a1和R
L2b1与所连接的碳原子一起形成3元环烷基、4元环烷基、5元环烷基、6元环烷基、4元杂环烷基、5元杂环烷基或6元杂环烷基；
或者，同一个碳原子上的R
L2a2和R
L2b2与所连接的碳原子一起形成C
3-6元环烷基或4-6元杂环烷基；进一步，同一个碳原子上的R
L2a2和R
L2b2与所连接的碳原子一起形成3元环烷基、4元环烷基、5元环烷基、6元环烷基、4元杂环烷基、5元杂环烷基或6元杂环烷基；
条件是，R
L2a1、R
L2b1、R
L2a2和R
L2b2其中至少3个基团不选自H；
L
3选自**-N(R
L3)C
1-6烷基-或-N(R
L3)-；进一步，L
3选自**-N(R
L3)C
1-2烷基-或-N(H)-；
R
3a选自5-15元碳环基或者5-15杂环基，所述的碳环基或杂环基任选进一步被1个或多个选自R
y的基团取代；进一步，R
3a选自5-6元单环环烷基、5-6元单环杂环烷基、8-10元双环环烷基、8-10元双环杂环烷基、11-15元三环环烷基、11-15元三环杂环烷基，所述的环烷基、杂环烷基任选进一步被1至3个选自R
y的基团取代；进一步，R
3a选自5元单环环烷基、6元单环环烷基、5元单环杂环烷基、6元单环杂环烷基、苯并5元环烷基、苯并5元杂环烷基、苯并6元环烷基、苯并6元杂环烷基、苯并5元杂芳基、苯并6元杂芳基、吡啶并5元环烷基、吡啶并5元杂环烷基、吡啶并6元环烷基、吡啶并6元杂环烷基、吡啶并5元杂芳基、吡啶并6元杂芳基、5元环烷基并苯基、5元杂环烷基并苯基、6元环烷基并苯基、6元杂环烷基并苯基、5元杂芳基并苯基、6元杂芳基并苯基、5元环烷基并吡啶基、5元杂环烷基并吡啶基、6元环烷基并吡啶基、6元杂环烷基并吡啶基、5元杂芳基 并吡啶基、6元杂芳基并吡啶基，其中“并”字左侧的环表示与氮原子链接的环，所述的苯基、吡啶基、环烷基、杂环烷基、杂芳基进一步被1、2或3个选自R
y的基团取代；进一步，R
3a选自5元单环环烷基、6元单环环烷基、5元单环杂环烷基、6元单环杂环烷基、5元环烷基并苯基、5元杂环烷基并苯基、6元环烷基并苯基或6元杂环烷基并苯基，其中“并”字左侧的环表示与氮原子链接的环，所述的苯基、环烷基、杂环烷基或杂芳基进一步被1、2或3个选自R
y的基团取代，
其余基团如1所述。
14.式I所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，所述化合物具有如下(VIII)结构：
其中，X
3选自CH或N；
R
4、R
5、R
6a、R
7a各自独立选自H、氘、羟基、氰基、卤素、叠氮基、氨基、C
1-6烷基、C
3-6环烷基、C
2-6烯基或C
2-6炔基，所述的氨基、烷基、环烷基或炔基任选进一步被1、2、3个选自氘、卤素、羟基、氰基或C
1-6烷氧基的基团取代；进一步地，R
4、R
5、R
6a、R
7a各自独立选自H、氘、羟基、氰基、卤素、叠氮基、氨基、C
1-6烷基、C
3-6环烷基、C
2-6烯基或C
2-6炔基，所述的氨基、烷基任选进一步被1、2、3个选自氘、卤素、羟基、氰基、或C
1-6烷氧基的基团取代；进一步地，R
4、R
5、R
6a、R
7a各自独立选自H、氘、羟基、C
1-6烷基或C
2-6炔基，所述的烷基任选进一步被1、2、3个选自卤素、羟基的基团取代；进一步地，R
4、R
5、R
6a、R
7a各自独立选自H、C
1-6烷基或C
2-4炔基，所述的烷基任选进一步被1、2、3个选自卤素或羟基的基团取代；进一步地，R
4、R
5、R
7a为H，R
6a为C
1-4烷基或C
2-4炔基，所述的烷基任选进一步被1、2、3个选自卤素、羟基的基团取代；进一步地，R
4、R
5、R
7a为H，R
6a为甲基、乙基、丙基或乙炔，任选进一步被1、2、3个选自卤素、羟基的基团取代；
R
3选自-NH-O-R
3a、3-6元单环环烷基、4-6元单环杂环烷基、5-10元螺环、4-10元并环或5-9元桥环，所述的环烷基、杂环环烷基、螺环、桥环或并环任选进一步被1、2、3个选自R
y的基团取代；进一步地，R
3选自-NH-O-R
3a、3-6元单环环烷基、或含有1-3个选自N、S、O杂原子的7-10元杂环并环，所述环烷基和杂环并环任选进一步被1、2、3个选自R
y的基团取代；进一步地，R
3选自-NH-O-R
3a、环戊基、环己基、或含有1-3个选自N、S、O 杂原子的8-10元杂环并环，所述环烷基和杂环并环任选进一步被1、2、3个选自R
y的基团取代；进一步地，R
3选自-NH-O-R
3a、环戊基、环己基、
上述环任选进一步被1、2、3个选自R
y的基团取代；
R
3a选自C
1-6烷基、苄基、3-6元单环环烷基、4-6元单环杂环烷基、5-12元螺环、4-10元并环或5-9元桥环，所述的环烷基、杂环烷基、螺环、桥环或并环任选进一步被1、2、3个选自R
y的基团取代；进一步地，R
3a选自C
1-6烷基、苄基、或3-6元单环环烷基，所述的烷基、苄基或环烷基任选进一步被1、2、3个选自R
y的基团取代；进一步地，R
3a选自C
1-4烷基、苄基、环丙基、环丁基、环戊基或环己基，所述的烷基、苄基或环烷基任选进一步被1、2、3个选自R
y的基团取代；进一步地，R
3a选自甲基、乙基、异丙基、丙基、苄基、环丙基、环丁基、环戊基或环己基，上述的烷基、苄基或环烷基任选进一步被1、2、3个选自R
y的基团取代；
R
y选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、＝O、SF
5、叠氮基；进一步地，R
y选自氘、卤素、氨基或羟基；
条件是，当R
3为取代或未取代的3-6元单环环烷基、4-6元单环杂环烷基、5-12元螺环、4-10元并环、或5-9元桥环时，R
4、R
5、R
6a或R
7a不同时为H或氘，
其余基团如1所述。
15.式VIII所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，R
4、R
5、R
6a、R
7a各自独立选自H、氘、羟基、氰基、卤素、叠氮基、氨基、C
1-6烷基、C
3-6环烷基、C
2-6烯基或C
2-6炔基，所述的氨基、烷基任选进一步被1、2、3个选自氘、卤素、羟基、氰基或C
1-6烷氧基的基团取代，条件是，R
4、R
5、R
6a、R
7a不同时为H或氘；进一步地，R
4、R
5、R
6a、R
7a各自独立选自H、氘、羟基、C
1-6烷基、C
2-6烯基或C
2-6炔基，所述的氨基或烷基任选进一步被1、2、3个选自卤素、羟基的基团取代，条件是，R
4、R
5、R
6a、R
7a不同时为H或氘；进一步地，R
4、R
5、R
6a、R
7a各自独立选自H、C
1-6烷基、C
2-6炔基，所述的烷基任选进一步被1、2、3个选自卤素、羟基的基团取代，条件是，R
4、R
5、R
6a、R
7a不同时为H或氘；
R
3选自3-6元单环环烷基、4-6元单环杂环烷基、5-10元螺环、4-10元并环或5-9元桥环，所述的环烷基、杂环环烷基、螺环、桥环或并环任选进一步被1、2、3个选自R
y的基团取代；进一步地，R
3选自3-6元单环环烷基、或含有1-3个选自N、S、O杂原子的7-10元杂环并环，所述环烷基和杂环并环任选进一步被1、2、3个选自R
y的基团取代；进一步 地，R
3选自-NH-O-R
3a、环戊基或环己基、或含有1-3个选自N、S、O杂原子的8-10元杂环并环，所述环烷基和杂环并环任选进一步被1、2、3个选自R
y的基团取代；进一步地，R
3选自-NH-O-R
3a、环戊基、环己基、
上述环任选进一步被1、2、3个选自R
y的基团取代；
R
y选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、＝O、SF
5、叠氮基；进一步地，R
y选自氘、卤素、氨基或羟基，
其余基团如14所述。
16.前述15所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，R
4、R
5、R
7a选自H；
R
6a选自C
1-6烷基或C
2-6炔基，所述的烷基任选进一步被1、2、3个选自氘、卤素、羟基、氰基或C
1-2烷氧基的基团取代；进一步地，R
6a为C
1-4烷基或C
2-4炔基，所述的烷基任选进一步被1、2、3个选自卤素或羟基的基团取代；进一步地，R
6a为甲基、乙基、丙基或乙炔，任选进一步被1、2、3个选自卤素、羟基的基团取代；
R
3选自4-10元并环，所述的并环任选进一步被1、2、3个选自R
y的基团取代；进一步地，R
3选自含有1-3个选自N、S、O杂原子的7-10元杂环并环，所述杂环并环任选进一步被1、2、3个选自R
y的基团取代；进一步地，R
3选自或含有1-3个选自N、S、O杂原子的8-10元杂环并环，所述环烷基和杂环并环任选进一步被1、2、3个选自R
y的基团取代；进一步地，R
3选自
上述环任选进一步被1、2、3个选自R
y的基团取代；进一步地，R
3选自
任选进一步被1、2、3个选自R
y的基团取代；
R
y选自氘、卤素、氨基、羟基或＝O；进一步地，R
y选自氘、卤素或羟基，
其余基团如15所述。
17.前述14所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，具有如下(IX)结构：
其中，X
3为CH或N；
R
4、R
5、R
6a、R
7a各自独立选自H、氘、羟基、氰基、卤素、叠氮基、氨基、C
1-6烷基、C
2-6烯基或C
2-6炔基，所述的氨基、烷基任选进一步被1、2、3个选自氘、卤素、羟基、氰基的基团取代；进一步地，R
4、R
5、R
6a、R
7a各自独立选自H、氘、羟基、C
1-6烷基、C
2-6烯基或、C
2-6炔基，所述的烷基、烯基或炔基任选进一步被1、2、3个选自氘、卤素、羟基、氰基的基团取代；进一步地，R
4、R
5、R
6a、R
7a各自独立选自H；
R
3a选自C
1-6烷基、苄基、3-6元单环环烷基、4-6元单环杂环烷基、5-12元螺环、4-10元并环或5-9元桥环，所述的环烷基、杂环环烷基、螺环、桥环或并环任选进一步被1、2、3个选自R
y的基团取代；进一步地，R
3a选自C
1-4烷基、苄基、3-6元单环环烷基或4-6元单环杂环烷基，并任选进一步被1、2、3个选自R
y的基团取代；进一步地，R
3a选自环丙基、环戊基、环己基、苄基、甲基、乙基、丙基、异丙基、氮杂环丁基、四氢吡咯基、哌啶基或四氢呋喃基，并任选进一步被1、2、3个选自R
y的基团取代；
R
y选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、＝O、SF
5、叠氮基；进一步地，R
y选自氘、卤素或羟基，
其余基团如14所述。
18.前述17所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，
其中，R
4、R
5、R
6a或R
7a选自H；
R
3a选自C
1-6烷基、苄基或3-6元单环环烷基，所述的环烷基任选进一步被1、2、3个选自R
y的基团取代；进一步地，R
3a选自C
1-4烷基、苄基、环丙基、环丁基、环戊基或环己基，并任选进一步被1、2、3个选自R
y的基团取代；进一步地，R
3a选自甲基、乙基、丙基、异丙基、苄基、环丙基、环丁基、环戊基或环己基，并任选进一步被1、2、3个选自R
y的基团取代；
R
y选自氘、卤素、氨基、羟基或＝O；进一步地，R
y选自氘、卤素、或羟基，
其余基团如17所述。
19.式I所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物， 具有如下(X)结构：
X
4为CH或N；
R
4、R
5、R
6a、R
7a各自独立选自H、氘、羟基、氰基、卤素、叠氮基、氨基、C
1-6烷基、C
2-6烯基或C
2-6炔基，所述的氨基、烷基任选进一步被1、2、3个选自氘、卤素、羟基、氰基的基团取代；进一步地，R
4、R
5、R
6a、R
7a各自独立选自H、氘、羟基、C
1-4烷基、C
2-4烯基或C
2-4炔基，所述的烷基任选进一步被1、2、3个选自氘、卤素或羟基的基团取代；进一步地，R
4、R
5、R
7a各自独立选自H，R
6a选自C
1-4烷基、C
2-4烯基或C
2-4炔基，所述的烷基任选进一步被1、2、3个选自卤素、羟基的基团取代；
R
y选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、＝O、SF
5、叠氮基、-P(＝O)(C
1-3烷基)
2、-P(＝S)(C
1-3烷基)
2、
-Si(C
1-3烷基)
3、-N＝S(＝O)(C
1-3烷基)
2、-C
1-3烷基-S(＝O)(＝N)、-C
1-3烷基、C
1-3烷氧基、C
2-4烯基、C
2-4炔基，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氘代C
1-3烷基、卤代C
1-3烷基、羟基C
1-3烷基、C
1-3烷氧基、氘代C
1-3烷氧基、卤代C
1-3烷氧基或羟基C
1-3烷氧基的基团取代；进一步地，R
y选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、＝O或SF
5；
p选自0、1、2；进一步地，p选自0或1；
R
hy选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、＝O、SF
5、叠氮基、C
1-6烷基、C
1-6烷氧基、C
2-6烯基或C
2-6炔基，所述烷基、烷氧基、烯基或炔基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氘代C
1-6烷基、卤代C
1-6烷基、羟基C
1-6烷基、C
1-6烷氧基、氘代C
1-6烷氧基、卤代C
1-6烷氧基、羟基C
1-6烷氧基、-O-C
1-6烷基-C
6-10芳基或-O-C
1-6烷基-(5-10元杂芳基)的基团取代；进一步地，R
hy选自氘、卤素羟基、C
1-6烷基、C
1-6烷氧基、C
2-6烯基或C
2-6炔基，任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、氨基、羟基或氰基的基团取代，
其余基团如1所述。
20.前述19所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，
其中，R
4、R
5、R
7a选自H；
R
6a选自C
1-6烷基，所述的烷基任选进一步被1、2、3个选自氘、卤素、羟基、氰基或C
1-2烷氧基的基团取代；进一步地，R
6a选自C
1-4烷基，并任选进一步被1、2、3个选自氘、卤素或羟基的基团取代；进一步地，R
6a选自甲基、乙基、丙基或异丙基，并任选进一步被1、2、3个选自卤素或羟基的基团取代；
p选自0；
R
hy选自F或Cl；进一步地，R
hy选自Cl。
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，X
1选自O，
其余基团如19所述。
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，X
2选自CR
x2aR
x2b或O；进一步，X
2选自CH
2或O；进一步，X
2选自O。
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，Y选自OH、-CH
2-P(＝O)(OH)OH、-CH
2-P(＝O)(OH)ONH
2、-CH
2-P(＝O)(OH)NH(OH)、-CH
2-P(＝O)(OH)SH、-CH
2-R
y4、-CH
2-P(＝S)(OH)OH、-CH
2-P(＝S)(OH)NH(OH)、-CH
2-P(＝S)(OH)SH；进一步，Y选自OH、-CH
2-P(＝O)(OH)OH、-CH
2-P(＝O)(OH)NH(OH)、-CH
2-P(＝O)(OH)ONH
2、-CH
2-P(＝O)(OH)SH、-CH
2-5元杂环烷基或-CH
2-P(＝S)(OH)SH；进一步，Y选自OH或-CH
2-P(＝O)(OH)OH；进一步，Y选自-CH
2-P(＝O)(OH)OH；进一步，Y选自OH。
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，每个R
1、R
2各自独立地选自H、氘、氨基、C
1-4烷基、C
2-4烯基、C
2-4炔基、C
3-6环烷基、3-6元杂环烷基、苯基、C
8-10s双环芳基、5-6元杂芳基、8-10元双环杂芳基、-CH
2-O-C(O)-OR
2c、-C
0-4烷基-S(O)
2R
2c、-C
0-4烷基-C(O)R
2c、-C
0-4烷基-C(O)OR
2c或-C
0-4烷基-C(O)NR
2c，所述的烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基任选进一步被1个或多个选自R
x的基团取代；进一步，每个R
1、R
2各自独立地选自H、氘、氨基。
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，每个R
y1、R
y2、R
y3、R
x2a、R
x2b、R
x2c各自独立选自H、氘、羟基、氰基、C
1-4烷基、氘代C
1-4烷基或卤代C
1-4烷基；进一步，每个R
y1、R
y2、R
y3、R
x2a、R
x2b、R
x2c各自独立选自H、氘、羟基；进一步，每个R
y1、R
y2、R
y3、R
x2a、R
x2b、R
x2c各自独立选自H、氘。
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，R
y4选自4-6元杂环烷基、8-10元双环杂环烷基、5-6元杂芳基、8-10元双环杂芳基、C
3-6环烷基、C
8-10双环环烷基、苯基或C
8-10双环芳基，所述的杂环烷基、杂芳基、环烷基、芳基任选进一步被1个或多个选自R
x的基团取代；进一步，R
y4选自4-6元杂环烷基、8-10 元双环杂环烷基，所述的杂环烷基任选进一步被1-3个选自R
x的基团取代；进一步，R
y4选自4元杂环烷基、5元杂环烷基或6元杂环烷基，所述的杂环烷基任选进一步被1-3个选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、＝O、SF
5、叠氮基、C
1-3烷基、C
1-3烷氧基、C
2-4烯基或C
2-4炔基的基团取代；进一步，R
y4选自4元杂环烷基、5元杂环烷基或6元杂环烷基，所述的杂环烷基任选进一步被1-3个选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、＝O、SF
5、叠氮基、C
1-3烷基、C
1-3烷氧基、C
2-4烯基或C
2-4炔基的基团取代；进一步，R
y4选自
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，每个R
2a、R
2b各自独立选自H、氘、羟基、氰基、卤素、C
1-4烷基、氘代C
1-4烷基、卤代C
1-4烷基、C
3-6环烷基、3-6元杂环烷基、苯基或5-6元杂芳基；进一步，每个R
2a、R
2b各自独立选自H、氘、羟基、氰基、卤素、C
1-4烷基、氘代C
1-4烷基或卤代C
1-4烷基；进一步，每个R
2a、R
2b各自独立选自H、氘或C
1-3烷基；进一步，每个R
2a、R
2b各自独立选自H、氘。
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，每个R
2c各自独立选自H、氘、C
1-4烷基、氘代C
1-4烷基、卤代C
1-4烷基、C
3-6环烷基、3-6元杂环烷基、苯基或5-6元杂芳基，所述的烷基、环烷基、杂环烷基、苯基或杂芳基任选进一步被1个或多个选自R
x的基团取代；进一步，每个R
2c各自独立选自H、氘、C
1-4烷基。
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，L
1选自键、S、O、NH、N(C
1-2烷基)或C
1-2烷基，所述的烷基任选进一步被1个或多个选自R
x的基团取代；进一步，L
1选自键、NH、N(CH
3)或甲基；进一步，L
1选自键、NH或甲基；进一步，L
1选自键；进一步，L
1选自NH；进一步，L
1选自甲基。
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，L
2选自-(CR
L2aR
L2b)n-、*-Z-苯基、*-Z-C
8-10s双环芳基、*-Z-(5-6元杂芳基)、*-Z-(8-10元双环杂芳基)、*-苯基-Z-、*-C
8-10双环芳基-Z-、*-(5-6元杂芳基)-Z-、*-(8-10元双环杂芳基)-Z-、C
2-4烯基或C
2-4炔基，所述的-(CR
L2aR
L2b)n-中碳原子任选被1个或多个选自N、O、S、S(O)或S(O)
2替代，所述的L
2任选进一步被1个或多个选自R
x的基团取代，*表示L
2与P原子相连接的位点；进一步，L
2选自*-O-(CR
L2aR
L2b)n-、*-(CR
L2aR
L2b)n-O-、-(CR
L2aR
L2b)n-、-O-、*-O-(CR
L2aR
L2b)n-O-(CR
L2aR
L2b)m-、*-(CR
L2aR
L2b)n-O-(CR
L2aR
L2b)m-、*-O-(CR
L2aR
L2b)n-O-、*-O-N(R
L2c)-、*-C(O)C
1-6烷基、*-Z-苯基、*-Z-C
8-10双环芳基、*-Z-(5-6元杂芳基)、*-Z-(8-10元双环杂芳基)、*-苯基-Z-、*-C
8-10双环芳基-Z-、*-(5-6元杂芳基)-Z-、*-(8-10元双环杂芳基)-Z-、C
2-4烯基或C
2-4炔基，所述的烷基、芳基、杂芳基、烯基或炔基 任选进一步被1个或多个选自R
x的基团取代；进一步，*-O-(CR
L2aR
L2b)n-、*-(CR
L2aR
L2b)n-O-、-O-、*-O-(CR
L2aR
L2b)n-O-、*-O-N(R
L2c)-、*-Z-苯基、*-(CR
L2aR
L2b)n-O-(CR
L2aR
L2b)m-、C
2-4烯基或C
2-4炔基，所述的烷基、芳基、杂芳基、烯基或炔基任选进一步被1个或多个选自R
x的基团取代。
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，同一个碳原子上的R
L2a和R
L2b与所连接的碳原子一起形成3元环烷基、4元环烷基、5元环烷基、6元环烷基、4元杂环烷基、5元杂环烷基、6元杂环烷基；进一步，同一个碳原子上的R
L2a和R
L2b与所连接的碳原子一起形成3元环烷基、4元环烷基、4元杂环烷基。
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，每个n各自独立选自1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；进一步，每个n各自独立选自1、2、3；进一步，每个n各自独立选自1、2。
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，每个n’各自独立选自1、2、3、4、5、6、7、8；进一步，每个n’各自独立选自1、2、3、4、5；进一步，每个n各自独立选自1、2、3；进一步，每个n各自独立选自1、2。
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，每个n’各自独立选自1、2、3、4、5、6、7、8；进一步，每个n’各自独立选自1、2、3、4、5；进一步，每个n各自独立选自1、2、3；进一步，每个n各自独立选自1、2。
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，每个m各自独立选自1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；进一步，每个m各自独立选自1、2、3；进一步，每个m各自独立选自1、2。
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，每个Z独立选自键、-O-、C
1-2烷基，所述烷基任选进一步被1个或多个选自R
x的基团取代；进一步，每个Z独立选自键、-O-、甲基。
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，R
4、R
5、R
6a、R
6b、R
7a、R
7b各自独立选自H、氘、羟基、氰基、卤素、叠氮基、氨基、C
1-2烷基、C
2-4烯基或C
2-4炔基，所述的氨基、烷基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、羟基或氰基的基团取代；进一步，R
4、R
5、R
6a、R
6b、R
7a、R
7b各自独立选自H、氘、羟基、氰基、卤素、叠氮基、C
2-4烯基或C
2-4炔基，所述的烷基任选进一步被1-3个选自氘、卤素、羟基或氰基的基团取代。
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，R
6a和R
6b一起形成C
2-4烯基、C
3-6元环烷基或4-6元杂环烷基，所述的烯基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、羟基或氰基的基团取代；进一步，R
6a和R
6b一起形成乙烯 基或乙炔基，所述的乙烯基、乙炔基任选进一步被1-3个选自氘、卤素、羟基或氰基的基团取代。
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，R
7a和R
7b一起形成C
2-4烯基、C
3-6元环烷基或4-6元杂环烷基，所述的烯基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、羟基或氰基的基团取代；进一步，R
7a和R
7b一起形成乙烯基或乙炔基，所述的乙烯基或乙炔基任选进一步被1-3个选自氘、卤素、羟基或氰基的基团取代。
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，R
4、R
5和X
2一起形成5元环烷基、6元环烷基、7元环烷基、5元杂环烷基、6元杂环烷基、7元杂环烷基；
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，R
4、R
6a和X
2一起形成5元环烷基、6元环烷基、7元环烷基、5元杂环烷基、6元杂环烷基或7元杂环烷基；
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，R
L2a、R
5和X
2一起形成5元环烷基、6元环烷基、7元环烷基、5元杂环烷基、6元杂环烷基或7元杂环烷基；
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，R
4、R
7a和X
2一起形成5元环烷基、6元环烷基、7元环烷基、5元杂环烷基、6元杂环烷基或7元杂环烷基；
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，R
4和R
6a一起形成3元环烷基、4元环烷基、5元环烷基、6元环烷基、7元环烷基、4元杂环烷基、5元杂环烷基、6元杂环烷基或7元杂环烷基；
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，R
6b和R
7b一起形成3元环烷基、4元环烷基、5元环烷基、6元环烷基、7元环烷基、4元杂环烷基、5元杂环烷基、6元杂环烷基或7元杂环烷基；
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，R
4和R
L2a一起形成3元环烷基、4元环烷基、5元环烷基、6元环烷基、7元环烷基、4元杂环烷基、5元杂环烷基、6元杂环烷基或7元杂环烷基；
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，R
4和X
2一起形成3元环烷基、4元环烷基、5元环烷基、6元环烷基、7元环烷基、4元杂环烷基、5元杂环烷基、6元杂环烷基或7元杂环烷基；
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物， 其中，R
x2a和R
4一起形成一个化学键，与环上的键一起形成了双键。
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，R
x2a和R
5一起形成一个化学键，与环上的键一起形成了双键。
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，R
6a和R
4一起形成一个化学键，与环上的键一起形成了双键。
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，R
6b和R
7b一起形成一个化学键，与环上的键一起形成了双键。
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，R
7a和R
5一起形成一个化学键，与环上的键一起形成了双键。
本发明R
x2a和R
4、或R
x2a和R
5、或R
6a和R
4、或R
6b和R
7b、或R
7a和R
5一起形成一个化学键，条件是最多一组形成一个化学键；
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，R
3选自L
3-R
3a、
进一步，R
3选自L
3-R
3a。
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，L
3选自**-N(R
L3)C
1-4烷基-、-N(R
L3)-、**-N(R
L3)S(O)-、**-N(R
L3)S(O)
2-、**-N(R
L3)S(O)-C
1-4烷基-、**-N(R
L3)S(O)
2-C
1-4烷基-或**-N(R
L3)-N＝CH-，**表示L
3与Hy连接位点；进一步，L
3选自**-N(R
L3)CH(CH
3)-、-N(R
L3)-、**-N(R
L3)S(O)
2-或**-N(R
L3)-N＝CH-，**表示L
3与Hy连接位点；进一步，L
3选自**-NHCH(CH
3)-、-NH-、**-NHS(O)
2-或**-NH-N＝CH-，**表示L
3与Hy连接位点；进一步，L
3选自**-NHCH(CH
3)-、-NH-；进一步，L
3选自**-NHS(O)
2-、**-NH-N＝CH-。
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，R
3a选自5-6元环烷基、5-6元杂环烷基、苯基、5-6元杂芳基、8-10元双环杂环基、8-10元双环环烷基、8-10元双环杂芳基或8-10元双环芳基，所述的碳环基或杂环基任选进一步被1个或多个选自R
y的基团取代；进一步，R
3a选自5-6元环烷基、5-6元杂环烷基、苯基或5-6元杂芳基，所述的碳环基或杂环基任选进一步被1个或多个选自R
y的基团取代。
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，R
L3各自独立地选自H、氘、C
1-4烷基、卤代C
1-4烷基或氘代C
1-4烷基；进一步，R
L3各自独立地选自H、氘、C
1-2烷基、卤代C
1-2烷基或氘代C
1-2烷基；进一步，R
L3各自独立地选自H、氘、甲基。
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，R
L3和R
hy与所连接的原子一起形成5元杂环烷基、6元杂环烷基、7元杂环烷基、8 元杂环烷基；进一步，R
L3和R
hy与所连接的原子一起形成5元杂环烷基、6元杂环烷基、7元杂环烷基；进一步，R
L3和R
hy与所连接的原子一起形成5元杂环烷基、6元杂环烷基；进一步，R
L3和R
hy与所连接的原子一起形成5元杂环烷基。
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，每个R
x各自独立选自氘、F、Cl、氨基、羟基、氰基、＝O、C
1-3烷基、C
1-3烷氧基、C
2-4烯基或C
2-4炔基，所述烷基、烷氧基、烯基或炔基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氘代C
1-6烷基、卤代C
1-6烷基、羟基C
1-6烷基、C
1-6烷氧基、氘代C
1-6烷氧基、卤代C
1-6烷氧基、羟基C
1-6烷氧基、-O-C
1-6烷基-C
6-10芳基或-O-C
1-6烷基-(5-10元杂芳基)的基团取代；进一步，每个R
x各自独立选自氘、F、Cl、氨基、羟基、氰基、＝O、C
1-3烷基或C
1-3烷氧基，所述烷基或烷氧基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氘代C
1-2烷基、卤代C
1-2烷基、羟基C
1-2烷基、C
1-2烷氧基、氘代C
1-2烷氧基、卤代C
1-2烷氧基、羟基C
1-2烷氧基、-O-C
1-2烷基-C
6-10芳基或、-O-C
1-2烷基-(5-10元杂芳基)的基团取代；进一步，每个R
x各自独立选自氘、F、Cl、氨基、羟基、氰基、＝O、C
1-3烷基或C
1-3烷氧基，所述烷基或烷氧基任选进一步被1、2、3个选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基或C
1-2烷氧基、氘代C
1-2烷氧基、卤代C
1-2烷氧基、羟基C
1-2烷氧基、-O-C
1-2烷基-苯基或-O-C
1-2烷基-(5-6元杂芳基)的基团取代。
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，每个R
hy各自独立选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、＝O、SF
5、叠氮基、C
1-4烷基、C
1-4烷氧基、C
2-4烯基或C
2-4炔基，所述烷基、烷氧基、烯基或炔基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氘代C
1-2烷基、卤代C
1-2烷基、羟基C
1-2烷基、C
1-2烷氧基、氘代C
1-2烷氧基、卤代C
1-2烷氧基、羟基C
1-2烷氧基、-O-C
1-2烷基-C
6-10芳基或-O-C
1-2烷基-(5-10元杂芳基)的基团取代；进一步，每个R
hy各自独立选自氘、F、Cl、甲基或乙基。
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，R
y选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、＝O、SF
5、叠氮基、-P(＝O)(C
1-2烷基)
2、-P(＝S)(C
1-2烷基)
2、
-Si(C
1-2烷基)
3、-N＝S(＝O)(C
1-2烷基)
2、-C
1-2烷基-S(＝O)(＝N)、-C
1-4烷基、C
1-4烷氧基、C
2-4烯基或C
2-4炔基，所述烷基、烷氧基、氨基、烯基或炔基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氘代C
1-2烷基、卤代C
1-2烷基、羟基C
1-2烷基、C
1-2烷氧基、氘代C
1-2烷氧基、卤代C
1-2烷氧基或羟基C
1-2烷氧基的基团取代；进一步，R
y选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、＝O、SF
5、叠氮基、-P(＝O)(C
1-2 烷基)
2、-P(＝S)(C
1-2烷基)
2、
-Si(C
1-2烷基)
3、-N＝S(＝O)(C
1-2烷基)
2或-C
1-2烷基-S(＝O)(＝N)。
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，当R
3a被一个取代基取代时，R
y选自-P(＝O)(C
1-2烷基)
2、-P(＝S)(C
1-2烷基)
2、
-Si(C
1-2烷基)
3、-N＝S(＝O)(C
1-2烷基)
2或-C
1-2烷基-S(＝O)(＝N)。
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，当R
3a被2个取代基取代，其中一个R
y选自卤素时，另一个R
y选自叠氮基、-P(＝O)(C
1-2烷基)
2、-P(＝S)(C
1-2烷基)
2、
-Si(C
1-2烷基)
3、-N＝S(＝O)(C
1-2烷基)
2或-C
1-2烷基-S(＝O)(＝N)。
本文所述的“被1个或多个”取代基取代，包括结构中所有氢原子被取代，进一步可以为被1-6个取代基取代，进一步可以为被1-5个取代基取代，进一步可以为被1-3个取代基取代，进一步被1-2个取代基取代，进一步被1个取代基取代。
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，p选自0、1或2；进一步，p选自0、1；进一步，p选自0；进一步，p选自1。
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，具有如下(VIII)结构：
X
2选自CH或N；
R
4、R
5、R
6a、R
7a各自独立选自H、氘、羟基、氰基、卤素、叠氮基、氨基、C
1-6烷基、C
3-6环烷基、C
2-6烯基或C
2-6炔基，所述的氨基、烷基任选进一步被1、2、3个选自氘、卤素、羟基、氰基或C
1-6烷氧基的基团取代，条件是，R
4、R
5、R
6a、R
7a不同时为H或氘；
R
3选自3-6元单环环烷基、4-6元单环杂环烷基、5-10元螺环、4-10元并环或5-9元桥环，所述的环烷基、杂环环烷基、螺环、桥环或并环任选进一步被1、2、3个选自R
y的基 团取代；
R
y选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、＝O、SF
5或叠氮基。
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，具有如下(IX)结构：
R
4、R
5、R
6a、R
7a各自独立选自H、氘、羟基、氰基、卤素、叠氮基、氨基、C
1-6烷基、C
2-6烯基或C
2-6炔基，所述的氨基、烷基任选进一步被1、2、3个选自氘、卤素、羟基或氰基的基团取代；进一步，R
4、R
5、R
6a、R
7a各自独立选自H、氘、羟基、氰基、卤素、叠氮基、氨基、C
1-4烷基、C
2-4烯基或C
2-4炔基，所述的氨基、烷基任选进一步被1、2、3个选自氘、卤素、羟基或氰基的基团取代；进一步，R
4、R
5选自H或氘，R
6a、R
7a各自独立选自H、氘、羟基、氰基、卤素、叠氮基、氨基、C
1-4烷基、C
2-4烯基或C
2-4炔基，所述的氨基、烷基任选进一步被1、2、3个选自氘、卤素、羟基或氰基的基团取代；
R
3a选自C
1-6烷基、苄基、3-6元单环环烷基、4-6元单环杂环烷基、5-10元螺环、4-10元并环或5-9元桥环，所述的环烷基、杂环环烷基、螺环、桥环或并环任选进一步被1、2、3个选自R
y的基团取代；进一步，R
3a选自C
1-4烷基、苄基、3元单环环烷基、4元单环环烷基、5元单环环烷基、6元单环环烷基、4元单环杂环烷基、5元单环杂环烷基、6元单环杂环烷基、5元螺环、6元螺环、7元螺环、8元螺环、9元螺环、10元螺环、11元螺环、4元并环、5元并环、6元并环、7元并环、8元并环、9元并环、10元并环、5元桥环、6元桥环、7元桥环、8元桥环或9元桥环，所述的环烷基、杂环环烷基、螺环、桥环或并环任选进一步被1、2、3个选自R
y的基团取代；
R
y选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、＝O、SF
5或叠氮基。
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，具有如下(X)结构：
R
4、R
5、R
6a、R
7a各自独立选自H、氘、羟基、氰基、卤素、叠氮基、氨基、C
1-6烷基、C
2-6烯基或C
2-6炔基，所述的氨基、烷基任选进一步被1、2、3个选自氘、卤素、羟基或氰基的基团取代；进一步，R
4、R
5、R
6a、R
7a各自独立选自H、氘、羟基、氰基、卤素、叠氮基、氨基、C
1-4烷基、C
2-4烯基或C
2-4炔基，所述的氨基或烷基任选进一步被1、2、3个选自氘、卤素、羟基或氰基的基团取代；进一步，R
4、R
5选自H或氘，R
6a、R
7a各自独立选自H、氘、羟基、氰基、卤素、叠氮基、氨基、C
1-4烷基、C
2-4烯基或C
2-4炔基，所述的氨基、烷基任选进一步被1、2、3个选自氘、卤素、羟基或氰基的基团取代；
R
y选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、＝O、SF
5、叠氮基、-P(＝O)(C
1-6烷基)
2、-P(＝S)(C
1-6烷基)
2、
-Si(C
1-6烷基)
3、-N＝S(＝O)(C
1-6烷基)
2、-C
1-6烷基-S(＝O)(＝N)、-C
1-6烷基、C
1-6烷氧基、C
2-6烯基或C
2-6炔基，所述烷基、烷氧基、烯基或炔基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氘代C
1-6烷基、卤代C
1-6烷基、羟基C
1-6烷基、C
1-6烷氧基、氘代C
1-6烷氧基、卤代C
1-6烷氧基或羟基C
1-6烷氧基的基团取代；进一步，R
y选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、＝O、SF
5、叠氮基、-P(＝O)(C
1-3烷基)
2、-P(＝S)(C
1-3烷基)
2、
-Si(C
1-3烷基)
3、-N＝S(＝O)(C
1-3烷基)
2、-C
1-3烷基-S(＝O)(＝N)、-C
1-3烷基、C
1-3烷氧基、C
2-4烯基、C
2-4炔基，所述烷基、烷氧基、烯基或炔基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氘代C
1-3烷基、卤代C
1-3烷基、羟基C
1-3烷基、C
1-3烷氧基、氘代C
1-3烷氧基、卤代C
1-3烷氧基或羟基C
1-3烷氧基的基团取代；进一步，R
y选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、＝O、SF
5、叠氮基、-C
1-3烷基、C
1-3烷氧基、C
2-4烯基或C
2-4炔基；
p选自0、1、2；进一步选自0或1；进一步选自0；
R
hy选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、＝O、SF
5、叠氮基、C
1-6烷基、C
1-6烷氧基、C
2-6烯基、C
2-6炔基，所述烷基、烷氧基、烯基或炔基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氘代C
1-6烷基、卤代C
1-6烷基、羟基C
1-6烷基、C
1-6烷氧基、氘代C
1-6烷氧基、卤代C
1-6烷氧基、羟基C
1-6烷氧基、-O-C
1-6烷基-C
6-10芳基或-O-C
1-6烷基-(5-10元 杂芳基)的基团取代。
本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，化合物选自以下结构之一：
本发明还涉及一种药物组合物，含有本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，以及药学上可接受的辅料和/或载体。
进一步地，前述药物组合物，还含有抗PD-1抗体。
本发明还涉及本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，或者所述的药物组合物在制备治疗CD73介导的疾病的药物中的用途，所述CD73介导的疾病为肿瘤或自身免疫疾病。进一步地，所述用途包括联合应用抗PD-1抗体。
本发明还涉及一种治疗CD73介导的疾病的治疗方法，其给药本发明所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，或者所述的药物组合物，所述CD73介导的疾病为肿瘤或自身免疫疾病。进一步地，所述治疗方法还包括给予另一种药物，所述药物为抗PD-1抗体。
合成路线
WO2017120508A1、WO2019213174A1等专利文献中介绍了CD73拮抗剂的制备方法，本领域技术人员可以结合该文献以及已知的有机合成技术制备本发明的化合物，其起始原料为市售化学品和(或)化学文献中所述的化合物。“市售化学品”是从正规商业来源获得的，供应商包括：泰坦科技、安耐吉化学、上海德默、成都科龙化工、韶远化学科技、南京药石、药明康德和百灵威科技等公司。
本领域的参考书和专著，详细介绍了可用于制备本文所述化合物的反应物的合成，或提供了描述该制备方法的文章以供参考。这些参考书和专著包括：“Synthetic Organic Chemistry”,John Wiley&Sons,Inc.,New York；S.R.Sandler et al.,“Organic Functional Group Preparations,”2nd Ed.,Academic Press,New York,1983；H.O.House,“Modern Synthetic Reactions”,2nd Ed.,W.A.Benjamin,Inc.Menlo Park,Calif.1972；T.L.Gilchrist,“Heterocyclic Chemistry”,2nd Ed.,John Wiley&Sons,New York,1992；J.March,“Advanced Organic Chemistry:Reactions,Mechanisms and Structure”,4th Ed.,Wiley-Interscience,New York,1992；Fuhrhop,J.and Penzlin G.“Organic Synthesis:Concepts,Methods,Starting Materials”,Second,Revised and Enlarged Edition(1994)John Wiley&Sons ISBN:3-527-29074-5；Hoffman,R.V.“Organic Chemistry,An Intermediate Text”(1996)Oxford University Press,ISBN 0-19-509618-5；Larock,R.C.“Comprehensive Organic Transformations:A Guide to Functional Group Preparations”2nd Edition(1999)Wiley-VCH,ISBN:0-471-19031-4；March,J.“Advanced Organic Chemistry:Reactions,Mechanisms,and Structure”4th Edition(1992)John Wiley&Sons,ISBN:0-471-60180-2；Otera,J.(editor)“Modern Carbonyl Chemistry”(2000)Wiley-VCH,ISBN:3-527-29871-1；Patai,S.“Patai’s 1992 Guide to the Chemistry of Functional Groups”(1992)Interscience ISBN:0-471-93022-9；Solomons,T.W.G.“Organic Chemistry”7th Edition(2000)John Wiley&Sons,ISBN:0-471-19095-0；Stowell,J.C.,“Intermediate Organic Chemistry”2nd Edition(1993)Wiley-Interscience,ISBN:0-471-57456-2；“Industrial Organic Chemicals:Starting Materials and Intermediates:An Ullmann’s Encyclopedia”(1999)John Wiley&Sons,ISBN:3-527-29645-X,in 8volumes；“Organic Reactions”(1942-2000)John Wiley&Sons,in over 55 volumes；and“Chemistry of Functional Groups”John Wiley&Sons,in 73 volumes。
通过美国化学会化学文摘社制备的已知化学物质的索引，可以选择性地识别特定和类似的反应物，这些索引可在大多数公共图书馆和大学图书馆以及在线获得。已知但在目录中不可商购的化学品可选地由定制化学合成工厂制备，其中许多标准化学供应工厂(例如，上面列出的那些)提供定制合成服务。制备和选择本文所述化合物的药用盐的参考文献是P.H.Stahl&C.G.Wermuth“Handbook of Pharmaceutical Salts”,Verlag Helvetica Chimica Acta,Zurich,2002。
术语
在本发明未特殊说明的情况下，本发明的术语具有以下含义：
“卤素”在本文中是指F、Cl、Br、I、或者它们的同位素。
“卤代”或“卤素取代”是指被一个以上选自F、Cl、Br、I、或者它们的同位素取代，卤素取代基数量的上限等于被取代基团可被取代的氢数之和，在未作特殊限定下，卤素取代基数量为1至该上限之间的任意整数，当卤素取代基数量大于1时，可以是相同或不同的卤素进行取代。
“氘代”或“氘代物”是指烷基、环烷基、亚烷基、芳基、杂芳基、巯基、杂环烷基、烯基、炔基等基团上的氢原子被至少一个同位素氘取代的情形，氘代的数量上限等于被取代基团 可被取代的氢数之和，在未作特殊限定下，氘代数量为1至该上限之间的任意整数，优选1-20个氘原子取代，更优选为1-10个氘原子取代，更优选为1-6个氘原子取代，进一步优选为1-3个氘原子取代。
“烷基”是指一价的直链或支链饱和脂肪族烃基，非限制性实施例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、新丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、正己基及其各种支链异构体；所述的烷基可以进一步被任意取代基取代。
“环烷基”是指一价饱和的、不饱和的非芳香环的碳环烃基，可以是单环、双环、螺环、桥环、并环，非限制性实施例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环戊烯基、
等。所述的环烷基可以任选进一步被任意取代基所取代。
“杂环烷基”是指取代或未取代、饱和或不饱和的非芳香环，未特殊限定时，包含1至5个选自N、O、P、Si或S的杂原子，进一步含有1至4个或者1至3个选自N、O、P、Si或S的杂原子，可以是单环或多环，多环可以是桥环、并环或螺环，未特殊限定时，为3至12元杂环，更优选为4-12元杂环，更优选为4-10元杂环。杂环基的环中选择性取代的N、S、P可被氧化成各种氧化态。非限制性实施例包括氮杂环丙基、氧杂环丙基、硫杂环丙基、氮杂环丁基、氮杂环戊基、哌啶、氧杂环丁基、氧杂环戊基、氧杂环己基、硫杂环丁基、吡咯烷基、吡唑烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、氮杂金刚烷基和氧杂螺[3.3]庚烷基、
等。所述的杂环烷基可以任选进一步被任意取代基所取代。
“杂环”或“杂环基”是指取代或未取代、饱和或不饱和的芳香环或者非芳香环，未特殊限定时，包含1至5个选自N、O或S的杂原子，进一步包含1至4个选自N、O或S的杂原子，更进一步包含1至3个选自N、O或S的杂原子，包括单环杂环或多环杂环，多环杂环包括双环桥杂环、双环并杂环和双环螺杂环等，未特殊限定时，为3至12元杂环，更优选为4-12元杂环，更优选为4-10元杂环，进一步优选为4-7元杂环。其定义包括杂环烷基和杂芳基。杂环基环中的N、S可被氧化成各种氧化态。杂环基可以连接在杂原子或者碳原子上，非限制性实施例包括环氧乙基、氮杂环丙基、氧杂环丁基、氮杂环丁基、1,3-二氧 戊环基、1,4-二氧戊环基、1,3-二氧六环基、氮杂环庚基、吡啶基、呋喃基、噻吩基、吡喃基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、咪唑基、哌啶基、哌叮基、吗啉基、硫代吗啉基、1,3-二噻基、二氢呋喃基、二氢吡喃基、二噻戊环基、四氢呋喃基、四氢吡咯基、四氢咪唑基、噁唑基、二氢噁唑基、四氢噁唑基、四氢噻唑基、四氢吡喃基、苯并咪唑基、苯并吡啶基、吡咯并吡啶基、苯并二氢呋喃基、氮杂二环[3.2.1]辛烷基、氮杂二环[5.2.0]壬烷基、氧杂三环[5.3.1.1]十二烷基、氮杂金刚烷基和氧杂螺[3.3]庚烷基、
等。
“碳环”或“碳环基”是指取代或未取代、饱和或不饱和的、芳香或非芳香的碳环基团，包括单环或多环碳环，多环碳环包括双环桥环、双环并环和双环螺环等，未特殊说明时，有3至12个碳原子，优选有3-10个碳原子，进一步优选有3-6个碳原子。其定义包括环烷基和芳基。非限制性实施例中，单环碳环包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基或苯基、
等，双环桥环包括
等，双环并环包括
等，双环螺环包括
等。
“芳基”是指取代的或未取代的5至15元具有芳香性的碳环，包括单环芳香基和稠环芳香基。优选5至10元芳香环，进一步优选5至8元芳香环，其非限制性实例包括苯基、萘基、蒽基和菲基等。所述芳基环可以稠合于杂芳基、杂环烷基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环，非限制性实施例包含：
所述的芳基可以任选进一步被任意取代基所取代。
“杂芳基”是指取代或未取代的5至15元的具有芳香性的环，且含有1至5个选自N、O、P、Si或S杂原子及其杂原子各种氧化形式，优选5至10元杂芳香环，进一步优选5 至8元。杂芳基的非限制性实施例包括但不限于呋喃基、恶唑基、呋喃基、噻吩基、N-烷基吡咯基、吡嗪基、哒嗪基、哌啶基、吗啉、硫代吗啉、1,3-二噻烷、苯并咪唑、哌叮基、
。所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环烷基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，非限制性实施例包含
所述的杂芳基可以任选进一步被任意取代基所取代。
“炔基”是指直链或支链的、含有一个以上碳碳三键的一价不饱和烃基，除非特殊说明，炔基含有2-6个碳原子，优选含有2-4个碳原子，非限制性地的实施例为乙炔基、丙炔基、炔丙基等。
“烯基”是指直链或支链的、含有一个以上碳碳双键的一价不饱和烃基，除非特殊说明，炔基含有2-6个碳原子，优选含有2-4个碳原子，非限制性地的实施例为乙烯基、丙烯基、烯丙基、2-丁烯基、1-丁烯基等。
“烷氧基”或“烷基氧基”是指-O-烷基。未特殊限定时，为-O-C
1-8烷基，优选为-O-C
1-6烷基，更优选为-O-C
1-4烷基，进一步优选为-O-C
1-2烷基。非限制性实施例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、正己氧基、环丙氧基和环丁氧基等。
“卤代烷氧基”是指-O-卤代烷基，未特殊限定时，为-O-卤代C
1-8烷基，优选为-O-卤代C
1-6烷基，更优选为-O-卤代C
1-4烷基，进一步优选为-O-卤代C
1-2烷基。非限制性实施例包括一氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、二氟乙基氧基等。
“烷基氨基”或“烷氨基”是指被单个或两个烷基取代的氨基，也写作-N-(烷基)
2或-NH-烷基，后者也写作单烷基氨基。非限制实施例包括二甲氨基、单甲基氨基、二乙氨基、单乙氨基等。
本发明中，“C
0烷基”表示键。
“取代”或“取代基”在未特殊说明时，是指在化学理论允许的位置发生任意取代，取代基个数符合化学键规则。示例性的取代基包括但不限于：氰基、卤素、硝基、氨基、羟基、C
1-6烷基、C
2-6烯基、C
2-6炔基、C
3-8杂烷基、C
5-12芳基、5-12元杂芳基、C
1-6烷氧基、C
5-12芳氧基、硫醇基、C
1-6烷硫基、C
1-6烷硫代羰基、C
1-6烷氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、甲硅烷基、亚磺酰基、磺酰基、亚砜、卤代C
1-6烷基、卤代C
1-6烷氧基、膦酸、-CO
2(C
1-6烷基)、-OC(＝O)(C
1-6烷基)、-OCO
2(C
1-6烷基)、-C(＝O)NH
2、-C(＝O)N(C
1-6烷基)
2、-OC(＝O)NH(C
1-6 烷基)、-NHC(＝O)(C
1-6烷基)、-N(C
1-6烷基)C(＝O)(C
1-6烷基)、-NHCO
2(C
1-6烷基)、-NHC(＝O)N(C
1-6烷基)
2、-HC(＝O)NH(C
1-6烷基)、-NHC(＝O)NH
2、-NHSO
2(C
1-6烷基)、-SO
2N(C
1-6烷基)
2、-SO
2NH(C
1-6烷基)、-SO
2NH
2、-SO
2C
1-6烷基等。
“任选”或“任选地”是指随后所描述的事件或环境可以但不必须发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生的场合。如：“任选被F取代的烷基”指烷基可以但不必须被F取代，说明包括烷基被F取代的情形和烷基不被F取代的情形。
“药学上可接受的盐”是指本发明化合物保持游离酸或者游离碱的生物有效性和特性，且所述的游离酸通过与无毒的无机碱或者有机碱，所述的游离碱通过与无毒的无机酸或者有机酸反应获得的盐。
“药物组合物”表示一种或多种本文所述化合物或其立体异构体、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，与其他组成成分的混合物，其中其他组分包含生理学/药学上可接受的载体和/赋形剂。
“载体”指的是：不会对生物体产生明显刺激且不会消除所给予化合物的生物活性和特性，并能改变药物进入人体的方式和在体内的分布、控制药物的释放速度并将药物输送到靶向器官的体系，非限制性的实例包括微囊与微球、纳米粒、脂质体等。
“赋形剂”指的是：其本身并非治疗剂，用作稀释剂、辅料、粘合剂和/或媒介物，用于添加至药物组合物中以改善其处置或储存性质或允许或促进化合物或药物组合物形成用于给药的单位剂型。如本领域技术人员所已知的，药用赋形剂可提供各种功能且可描述为润湿剂、缓冲剂、助悬剂、润滑剂、乳化剂、崩解剂、吸收剂、防腐剂、表面活性剂、着色剂、矫味剂及甜味剂。药用赋形剂的实例包括但不限于：(1)糖，例如乳糖、葡萄糖及蔗糖；(2)淀粉，例如玉米淀粉及马铃薯淀粉；(3)纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素、乙酸纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、微晶纤维素及交联羧甲基纤维素(例如交联羧甲基纤维素钠)；(4)黄蓍胶粉；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石；(8)赋形剂，例如可可脂及栓剂蜡；(9)油，例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油及大豆油；(10)二醇，例如丙二醇；(11)多元醇，例如甘油、山梨醇、甘露醇及聚乙二醇；(12)酯，例如油酸乙酯及月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，例如氢氧化镁及氢氧化铝；(15)海藻酸；(16)无热原水；(17)等渗盐水；(18)林格溶液(Ringer’s solution)；(19)乙醇；(20)pH缓冲溶液；(21)聚酯、聚碳酸酯和/或聚酐；及(22)其他用于药物制剂中的无毒相容物质。
“立体异构体”是指由分子中原子在空间上排列方式不同所产生的异构体，包括顺反异构体、对映异构体和构象异构体。
“溶剂化物”指本发明化合物或其盐与分子间非共价力结合的化学计量或非化学计量的 溶剂形成的物质。当溶剂为水时，则为水合物。
“共晶”是指活性药物成分(API)和共晶形成物(CCF)在氢键或其他非共价键的作用下结合而成的晶体，其中API和CCF的纯态在室温下均为固体，并且各组分间存在固定的化学计量比。共晶是一种多组分晶体，既包含两种中性固体之间形成的二元共晶，也包含中性固体与盐或溶剂化物形成的多元共晶。
图1为B16F10体内移植瘤模型实验的小鼠体重变化曲线。
图2为B16F10体内移植瘤模型实验的肿瘤体积生长曲线。
以下将通过实施例对本发明的内容进行详细描述。实施例中未注明具体条件的，按照常规条件的实验方法进行。所举实施例是为了更好地对本发明的内容进行说明，但并不能理解为本发明的内容仅限于所举实例。本领域常规技术人员根据上述发明内容对实施方案进行非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。
测试方法
化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或(和)质谱(MS)来确定的。NMR位移(δ)以10-6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用(Bruker Avance III 400和Bruker Avance 300)核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)，氘代氯仿(CDCl
3)，氘代甲醇(CD
3OD)，内标为四甲基硅烷(TMS)；
MS的测定用(Agilent 6120B(ESI)和Agilent 6120B(APCI))；
HPLC的测定使用Agilent 1260DAD高压液相色谱仪(Zorbax SB-C18 100×4.6mm,3.5μM)；
薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm-0.20mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm-0.5mm；
柱层析一般使用烟台黄海硅胶200-300目硅胶为载体。
以下将通过实施例对本发明的内容进行详细描述。实施例中未注明具体条件的，按照常规条件的实验方法进行。所举实施例是为了更好地对本发明的内容进行说明，但并不能理解为本发明的内容仅限于所举实例。本领域常规技术人员根据上述发明内容对实施方案进行非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。
实施例1：
(((((2R,3S,4R,5R)-5-((6-氯-4-(环戊基氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)-3,4-二羟四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物1)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-((6-chloro-4-(cyclopentylamino)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)methyl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物1)
第一步：6-氯-N-环戊基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(1a)
6-chloro-N-cyclopentyl-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine(1a)
将4,6-二氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶(5g，26.5mmol)溶于甲醇(50ml)中，加入三乙胺(8.02g，79.4mmol)，室温搅拌反应，反应结束后浓缩反应液，所得残留物中加入水(25ml)和二氯甲烷(25ml)，分离有机相，水相用二氯甲烷(25ml×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，所得残留物硅胶柱色谱纯化(洗脱剂比例：乙酸乙酯：石油醚＝0％～50％)，得化合物1a(5.02g，80.1％)。
LCMS m/z＝238.6[M+1]
+。
第二步：(3aR,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环-4-醇(1B)
(3aR,6R,6aR)-6-(hydroxymethyl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-ol(1B)
将化合物1A(15g，150.1mmol)溶于丙酮(150ml)中，加入硫酸(0.9ml)，室温搅拌过夜，反应结束后，加入碳酸氢钠固体调节体系pH至中性，过滤，浓缩，所得残留物硅胶柱色谱纯化(洗脱剂比例：乙酸乙酯：石油醚＝0％～30％)，得化合物1B(14.96g，78.7％)。
1H NMR(400MHz,CDCl
3)δ5.42(s,1H),4.84(d,1H),4.59(d,1H),4.41(t,1H),3.74(dd,2H),1.49(s,3H),1.33(s,3H)。
第三步：(3aR,6R,6aR)-6-((叔丁基二甲基硅基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3] 二氧杂环-4-醇(1C)
(3aR,6R,6aR)-6-(((tert-butyldimethylsilyl)oxy)methyl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-ol(1C)
将化合物1B(14.96g，78.2mmol)和咪唑(6.914g，101.7mmol)溶于无水二氯甲烷(150ml)中，室温搅拌30min，降温至0℃，加入叔丁基二甲基氯硅烷(13.08g，86.0mmol)，升至室温反应4h，反应结束后，加入水(150ml)，分离有机相，水相用二氯甲烷(150ml×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，所得残留物硅胶柱色谱纯化(洗脱剂比例：乙酸乙酯：石油醚＝0％～5％)，得化合物1C(17.57g，73.4％)。
1H NMR(400MHz,CDCl
3)δ5.28(s,1H),4.70(s,1H),4.51(s,1H),4.35(s,1H),3.75(s,2H),1.49(s,3H),1.33(s,3H),0.93(s,9H),0.14(d,6H)。
第四步：((3aS,4R,6R,6aR)-6-((叔丁基二甲基硅氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环-4-基)甲醇(1D)
((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((tert-butyldimethylsilyl)oxy)methyl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-yl)methanol(1D)
将三甲基碘化亚砜(1.10g，5.02mmol)和叔丁醇钾(562mg，5.02mmol)加入反应瓶中，0℃下搅拌，加入无水二甲亚砜(10ml)，0℃搅拌30min，升至室温搅拌30min。降温至0℃，将化合物1C(1.017g，3.35mmol)溶于无水四氢呋喃(10ml)中加入反应瓶中，保持0℃搅拌30min，升至室温搅拌过夜，反应结束后加入饱和氯化铵(5ml)，加入水(20ml)和乙酸乙酯(20ml)，分离有机相，水相用乙酸乙酯(20ml×2)萃取，合并有机相，用饱和碳酸氢钠溶液(20ml)、饱和食盐水(20ml)和水(20ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，所得残留物硅胶柱色谱纯化(洗脱剂比例：乙酸乙酯：石油醚＝0％～15％)，得化合物1D(355mg，33.4％)。
1H NMR(400MHz,CDCl
3)δ4.80(dt,2H),4.21(dd,1H),4.15(t,1H),3.89–3.80(m,2H),3.75–3.70(m,2H),1.51(s,3H),1.35(s,3H),0.89(s,9H),0.06(s,6H)。
第五步：叔丁基(((3aR,4R,6S,6aR)-6-(碘甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环-4-基)甲氧基)二甲基硅烷(1E)
tert-butyl(((3aR,4R,6S,6aR)-6-(iodomethyl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-yl)methoxy)dimethylsilane(1E)
将化合物1D(330mg，1.04mmol)，碘(580mg，2.28mmol)，咪唑(212mg，3.11mmol)和三苯基膦(565mg，2.08mmol)溶于甲苯(10ml)中，110℃回流反应3h，反应结束后加入水(10ml)和乙酸乙酯(10ml)，分离有机相，水相用乙酸乙酯(10ml×2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(20ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，所得残留物硅胶柱色谱纯化(洗脱剂比例：乙酸乙酯：石油醚＝0％～5％)，得化合物1E(310mg，69.6％)。
1H NMR(400MHz,CDCl
3)δ4.86(d,1H),4.80–4.72(m,1H),4.42(ddd,1H),4.16–4.08 (m,1H),3.78–3.65(m,2H),3.35–3.18(m,2H),1.49(s,3H),1.36(s,3H),0.90(s,9H),0.07(s,6H)。
第六步：1-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((叔丁基二甲基硅氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环-4-基)甲基)-6-氯-N-环戊基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(1F)
1-(((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((tert-butyldimethylsilyl)oxy)methyl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-yl)methyl)-6-chloro-N-cyclopentyl-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine(1F)
将化合物1E(250mg，0.58mmol)和1a(141mg，0.58mmol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(5ml)中，加入碳酸铯(570mg，1.74mmol)和干燥分子筛(2g)，110℃回流反应过夜，反应结束后浓缩，向残留物中加入水(5ml)和乙酸乙酯(5ml)，分离有机相，水相用乙酸乙酯(5ml×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，所得残留物硅胶柱色谱纯化(洗脱剂比例乙酸乙酯：石油醚＝0％～30％)，得化合物1F(150mg，48.1％)。
LCMS m/z＝538.3[M+1]
+。
第七步：((3aR,4R,6R,6aS)-6-((6-氯-4-(环戊基氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环-4-基)甲醇(1G)
((3aR,4R,6R,6aS)-6-((6-chloro-4-(cyclopentylamino)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)methyl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-yl)methanol(1G)
将化合物1F(250mg，0.47mmol)溶于无水四氢呋喃(5ml)中，加入1M的四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(1.40ml，1.40mmol)，室温搅拌30min，反应结束后加入水(5ml)和乙酸乙酯(5ml)，分离有机相，水相用乙酸乙酯(5ml×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，所得残留物硅胶柱色谱纯化(洗脱剂比例乙酸乙酯：石油醚＝0％～100％)，得化合物1G(160mg，81.2％)。
LCMS m/z＝424.1[M+1]
+。
第八步：((2R,3S,4R,5R)-5-((6-氯-4-(环戊基氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)-3,4-二羟四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物1)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-((6-chloro-4-(cyclopentylamino)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)methyl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物1)
将化合物1G(160mg，0.38mmol)溶于磷酸三甲酯(2ml)中，0℃搅拌，将亚甲基双氯化磷(285mg，1.14mmol)溶于磷酸三甲酯(1ml)中加入反应瓶中，0℃搅拌2h，底物转化完全后，加入水(0.6ml)，室温搅拌过夜，反应结束后浓缩，所得残留物用液相制备柱分离提纯，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从 5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间10.0min；得化合物1(80mg，36.2％)。
1H NMR(400MHz,CDCl
3)δ8.62(d,1H),8.45(s,1H),4.41(dd,3H),3.98(dd,5H),2.21(t,2H),1.99(s,2H),1.72(s,2H),1.57(s,3H),1.24(s,2H)。
MS M/Z(ESI)：m/z＝542.2[M+1]
+。
实施例2:
((((((2R,3S,4R,5R)-5-((2-氯-4-(环戊基氨基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基))-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物2)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-((2-chloro-4-(cyclopentylamino)pyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-yl)methyl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物2)
第一步:(3aR,4S,6R,6aR)-6-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环-4-甲醛(2B)
(3aR,4S,6R,6aR)-6-(((tert-butyldimethylsilyl)oxy)methyl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxole-4-carbaldehyde(2B)
化合物1D(2.0g，6.28mmol)溶于二氯甲烷(20ml)中，分批次加入戴斯马丁氧化剂(7.99g，18.84mmol),加完室温反应2小时，反应完毕反应液加入水(50ml)淬灭反应，过滤，滤饼用二氯甲烷淋洗，分液，水相用二氯甲烷(100ml×2)萃取两次，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得化合物2B(1.9g，95％),未纯化直接下一步。
第二步：((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环-4-基)(2,4-二氯吡咯烷[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲醇(2C)
((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((tert-butyldimethylsilyl)oxy)methyl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-yl)(2,4-dichloropyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-yl)methanol(2C)
7-溴-2,4-二氯吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪(1.92g，7.2mmol)溶于干燥四氢呋喃(20ml)中，氮气置换三次，用乙醇干冰体系降温至-78℃，控温滴加正丁基锂(2.64ml，6.6mmol，2.5mol/L), 滴完-78℃反应10分钟，控温-78℃滴加化合物2B(1.9g，6.0mmol)，滴完保持-78℃反应1小时，反应完毕用冰醋酸(1.5ml)淬灭反应，加入水(30ml)后乙酸乙酯(100ml×2)萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，干燥浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝5:1)得到标题化合物2C(0.52g，17％)。
LC-MS(ESI):m/z＝526.1[M+Na]
+；486.1[M+1-H
2O]
+。
第三步：((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环-4-基)(2-氯-4-(环戊基氨基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲醇(2D)
((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((tert-butyldimethylsilyl)oxy)methyl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-yl)(2-chloro-4-(cyclopentylamino)pyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-yl)methanol(2D)
化合物2C(0.52g，1.03mmol)和环戊胺(0.18，2.06mmol)，溶于二氯甲烷(10ml)中，加入N,N-二异丙基乙胺(0.51g，4.12mmol)，加完室温反应3小时，反应完毕反应液直接浓缩，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝5:1)得到标题化合物2D(0.48g，84％)。
LC-MS(ESI):m/z＝553.2[M+H]
+。
第四步：((2R,3S,4R,5R)-5-((2-氯-4-(环戊基氨基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基2,2,2-三氟乙酸酯(2E)
((2R,3S,4R,5R)-5-((2-chloro-4-(cyclopentylamino)pyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-yl)methyl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methyl 2,2,2-trifluoroacetate(2E)
化合物2D(0.48g，0.87mmol)溶于二氯甲烷(5ml)中，加入三氟乙酸(2ml)，降温0～5℃滴加三乙基硅烷(1.4ml，8.7mmol)，加完自然回温反应16小时，反应完毕将直接浓缩得目标化合物2E粗品(0.36g，86％)，直接下一步反应。
LC-MS(ESI):m/z＝479.1[M+H]
+。
第五步：(2R,3R,4S,5R)-2-((2-氯-4-(环戊基氨基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(2F)
(2R,3R,4S,5R)-2-((2-chloro-4-(cyclopentylamino)pyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-yl)methyl)-5-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-3,4-diol(2F)
化合物2E(0.36g，0.75mmol)溶于甲醇(5ml)和水(1ml)中，加入碳酸钾(0.1g，0.75mmol)加完室温下反应1小时，反应完毕用加水(10ml)，二氯甲烷(50ml×2)萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后得目标化合物2F粗品(0.27g，94％)，直接下一步。
LC-MS(ESI):m/z＝383.1[M+H]
+。
第六步：((3aR,4R,6R,6aS)-6-((2-氯-4-(环戊基氨基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基)-2，2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环-4-基)甲醇(2G)
((3aR,4R,6R,6aS)-6-((2-chloro-4-(cyclopentylamino)pyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-yl)methyl )-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-yl)methanol(2G)
化合物2F(0.27g，0.71mmol)溶于丙酮(5ml)中，加入催化量的对甲苯磺酸，在加入2,2-二甲氧基丙烷(0.37g，3.55mmol)，加完室温下反应2小时，反应完毕浓缩掉丙酮，加入水(100ml)，二氯甲烷(50ml×2)萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1:1)得到标题化合物2G(0.26g，94％)。
LC-MS(ESI):m/z＝423.1[M+H]
+。
第七步:((((2R,3S,4R,5R)-5-((2-氯-4-(环戊基氨基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基))-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物2)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-((2-chloro-4-(cyclopentylamino)pyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-yl)methyl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物2)
化合物2G(0.12g，0.31mmol)溶于磷酸三甲酯(3ml)中，冰浴下降温0℃，亚甲基双(二氯化膦)(0.23g，0.91mmol)溶于磷酸三甲酯(0.5ml)中缓慢滴加到反应液中，加完自然回温反应15小时，LCMS监控反应，反应完毕后加入水(1ml)，在加入4N盐酸(1ml)，加完搅拌5小时，反应完毕后直接将反应体系送制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间8.5min，得化合物2(50mg，30％)。
LC-MS(ESI):m/z＝539.0[M-H]
-。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.36(d,1H),6.98(d,1H),6.50(d,1H),4.46-4.43(m,1H),4.24-4.20(m,1H),4.06-3.85(m,5H),3.13-2.99(m,2H),2.22(t,2H),1.99-1.98(m,2H),1.73-1.58(m,6H)。
实施例3:
((((2R,3S,4R,5R)-5-((2-氯-4-(环戊基氨基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)甲基)膦酸(化合物3)
((((2R,3S,4R,5R)-5-((2-chloro-4-(cyclopentylamino)pyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-yl)methyl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)methyl)phosphonic acid(化合物3)
第一步:二乙基((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(((2-氯-4-(环戊基氨基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基))-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环-4-基)甲氧基)甲基)膦酸酯(3A)
diethyl((((3aR,4R,6R,6aS)-6-((2-chloro-4-(cyclopentylamino)pyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-yl)methyl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-yl)methoxy)methyl)phosphonate(3A)
化合物2G(0.14g，0.33mmol)和(二乙氧基磷酰基)2-硝基苯磺酸甲酯(0.17g，0.49mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(5ml)中，氮气置换三次，加入叔丁醇镁(0.17g，0.99mmol)，加完升温至80℃反应3小时，反应完毕用冷却至室温后用饱和氯化铵溶液淬灭反应，然后用乙酸乙酯(50ml×2)萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后残留物柱层析分离纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1:1～1:10)得到化合物3A(0.15g，79％)。
LC-MS(ESI):m/z＝573.1[M+H]
+。
第二步：((((2R,3S,4R,5R)-5-((2-氯-4-(环戊基氨基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)甲基)膦酸(化合物3)
((((2R,3S,4R,5R)-5-((2-chloro-4-(cyclopentylamino)pyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-yl)methyl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)methyl)phosphonic acid(化合物3)
化合物3A(0.15g，0.26mmol)溶于乙腈(5ml)中，加入三乙胺(0.79g，7.8mmol)，然后缓慢滴加三甲基溴硅烷(0.8g，5.2mmol)，加完反应15小时，反应完毕后过滤，滤饼用少量乙腈洗涤，滤液浓缩后加入4N盐酸(1ml)，加完搅拌5小时，LCMS监控反应反应完毕后直接将反应体系送制备，制备HPLC分离方法:1.仪器waters 2767制备液相色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间10.2min，得化合物3(45mg，36％)。
LC-MS(ESI):m/z＝475.0[M-H]
-。
1H NMR(400MHz,DMSO-d
6)δ8.36(d,1H),6.97(d,1H),6.48(d,1H),4.48-4.43(m,1H),4.20-4.17(m,1H),3.91-3.80(m,3H),3.64-3.48(m,4H),3.12-2.98(m,2H),1.98-1.95(m,2H),1.73-1.54(m,6H)。
实施例4:
(((((2R,3S,4R,5S)-5-((2-氯-4-(环戊基氨基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基]甲基))-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物4)
(((((2R,3S,4R,5S)-5-((2-chloro-4-(cyclopentylamino)pyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-yl)methyl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物4)
第一步：((3aS,4S,6R,6aR)-6-((((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环-4-基)甲醇(4A)
((3aS,4S,6R,6aR)-6-(((tert-butyldimethylsilyl)oxy)methyl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-yl)methanol(4A)
化合物1D(8.7g，28.32mmol)溶于二氯甲烷(100ml)中，分批次加入戴斯马丁氧化剂(34.76g，81.96mmol)，加完室温反应2小时，反应完毕反应液加入水(50ml)淬灭反应，过滤，滤饼用二氯甲烷淋洗，分液，水相用二氯甲烷(150ml×2)萃取两次，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩后产物用二氯甲烷(50ml)和异丙醇(50ml)溶解，加三乙胺(8.29g，81.96mmol)，加完室温下搅拌2天，浓缩掉溶剂后加入甲醇(50ml)，加完分批次加入硼氢化钠(2.07g，37.83mmol)，反应完毕后加水淬灭反应，过滤。滤液用二氯甲烷(150ml×2)萃取两次，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后残留物柱层析分离纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝10:3)得到化合物4A(2.5g，29％)。
LC-MS(ESI):m/z＝318.1[M+H]
+。
第二步：(3aR,4R,6R,6aR)-6-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环-4-甲醛(4B)
(3aR,4R,6R,6aR)-6-(((tert-butyldimethylsilyl)oxy)methyl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxole-4-carbaldehyde(4B)
化合物4A(2.50g，7.85mmol)溶于二氯甲烷(20ml)中，分批次加入戴斯马丁氧化剂(9.99g，23.55mmol)，加完室温反应2小时，反应完毕反应液加入水(50ml)淬灭反应，过滤，滤饼用二氯甲烷淋洗，分液，水相用二氯甲烷(100ml×2)萃取两次，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得化合物4B(2.4g，96％)，直接下一步反应。
第三步：((3aS,4S,6R,6aR)-6-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环-4-基)(2,4-二氯吡咯烷[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲醇(4C)
((3aS,4S,6R,6aR)-6-(((tert-butyldimethylsilyl)oxy)methyl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-yl)(2,4-dichloropyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-yl)methanol(4C)
7-溴-2,4-二氯吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪(2.43g，9.1mmol)溶于干燥四氢呋喃(40ml)中，氮气置换三次，用乙醇干冰体系降温至-78℃，控温滴加正丁基锂(3.34ml，8.3mmol，2.5mol/L)，滴完-78℃反应10分钟，控温-78℃滴加化合物4B(2.4g，7.6mmol)，滴完保持-78℃反应1小时，反应完毕用冰醋酸(1.5ml)淬灭反应，加入水(30ml)后乙酸乙酯(100ml×2)萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，干燥浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝5:1)得到标题化合物4C(0.81g，21％)。
LC-MS(ESI):m/z＝526.1[M+Na]
+；486.1[M+1-H
2O]
+。
第四步：((3aS,4S,6R,6aR)-6-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环-4-基)(2-氯-4-(环戊基氨基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲醇(4D)
((3aS,4S,6R,6aR)-6-(((tert-butyldimethylsilyl)oxy)methyl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-yl)(2-chloro-4-(cyclopentylamino)pyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-yl)methanol(4D)
化合物4C(0.81g，1.61mmol)和环戊胺(0.21g，2.41mmol)，溶于二氯甲烷(10ml)中，加入N,N-二异丙基乙胺(0.62g，4.83mmol)，加完室温反应3小时，反应完毕反应液直接浓缩，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝5:1)得到标题化合物4D(0.31g，35％)。
LC-MS(ESI):m/z＝553.2[M+H]
+。
第五步：((2R,3S,4R,5S)-5-(((2-氯-4-(环戊基氨基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基2,2,2-三氟乙酸酯(4E)
((2R,3S,4R,5S)-5-((2-chloro-4-(cyclopentylamino)pyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-yl)methyl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methyl 2,2,2-trifluoroacetate(4E)
化合物4D(0.3g，0.54mmol)溶于二氯甲烷(5ml)中，加入三氟乙酸(2ml)，降温0～5℃滴加三乙基硅烷(0.86ml，5.4mmol)，加完自然回温反应16小时，反应完毕将直接浓缩得化合物4E粗品(0.2g，77％)，直接下一步反应。
LC-MS(ESI):m/z＝479.1[M+H]
+。
第六步：(2S,3R,4S,5R)-2-((2-氯-4-(环戊基氨基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(4F)
(2S,3R,4S,5R)-2-((2-chloro-4-(cyclopentylamino)pyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-yl)methyl)-5-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-3,4-diol(4F)
化合物4E(0.2g，0.42mmol)溶于甲醇(5ml)和水(1ml)中，加入碳酸钾(58mg，0.42mmol)加完室温下反应1小时，反应完毕用加水，二氯甲烷(50ml×2)萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后得化合物4F粗品(0.15g，93％)，直接下一步反应。
LC-MS(ESI):m/z＝383.1[M+H]
+。
第七步：((3aR,4R,6S,6aS)-6-((2-氯-4-(环戊基氨基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环-4-基)甲醇(4G)
((3aR,4R,6S,6aS)-6-((2-chloro-4-(cyclopentylamino)pyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-yl)methyl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-yl)methanol(4G)
化合物4F(0.15g，0.39mmol)溶于丙酮(5ml)中，加入催化量的对甲苯磺酸，在加入2,2-二甲氧基丙烷(0.2g，1.95mmol)，加完室温下反应2小时，反应完毕浓缩掉丙酮，加入水(20ml)，二氯甲烷(50ml×2)萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1:1)得到标题化合物4G(0.11g，72％)。
LC-MS(ESI):m/z＝423.1[M+H]
+。
第八步：(((((2R,3S,4R,5S)-5-((2-氯-4-(环戊基氨基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基]甲基))-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物4)
(((((2R,3S,4R,5S)-5-((2-chloro-4-(cyclopentylamino)pyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-yl)methyl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物4)
化合物4G(0.050g，0.13mmol)溶于磷酸三甲酯(2ml)中，冰浴下降温0℃，亚甲基双(二氯化膦)(0.098g，0.39mmol)溶于磷酸三甲酯(0.5ml)中缓慢滴加到反应液中，加完自然回温反应15小时，LCMS监控反应，反应完毕后加入水(1ml)，在加入4N盐酸(1ml)，加完搅拌5小时，反应完毕后直接将反应体系送制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d.洗脱时间20min。保留时间8.0min，得化合物4(17mg，24％)。
LC-MS(ESI):m/z＝539.0[M-H]
-。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.38(d,1H),6.98(d,1H),6.51(d,1H),4.48-4.43(m,1H),4.02-3.89(m,3H),3.82-3.76(m,2H),3.70-3.68(m,1H),3.08-2.90(m,2H),2.23(t,2H),1.99-1.98(m,2H),1.73-1.58(m,6H)。
实施例5：
((((2R,3S,4R,5S)-5-((2-氯-4-(环戊基氨基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)甲基)膦酸(化合物5)
((((2R,3S,4R,5S)-5-((2-chloro-4-(cyclopentylamino)pyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-yl)methyl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)methyl)phosphonic acid(化合物5)
第一步：二乙基((((3aR,4R,6S,6aS)-6-((2-氯-4-(环戊基氨基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环-4-基)甲氧基)甲基)膦酸酯(5A)
diethyl((((3aR,4R,6S,6aS)-6-((2-chloro-4-(cyclopentylamino)pyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-yl)methyl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-yl)methoxy)methyl)phosphonate(5A)
化合物4G(0.057g，0.13mmol)和(二乙氧基磷酰基)2-硝基苯磺酸甲酯(0.069g，0.2mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(2ml)中，氮气置换三次，加入叔丁醇镁(0.066g，0.39mmol)，加完升温至80℃反应3小时，反应完毕冷却至室温后用饱和氯化铵溶液淬灭反应，然后用乙酸乙酯(30ml×2)萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后残留物柱层析分离纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1:1～1:10)得到化合物5A(0.052g，70％)。
LC-MS(ESI):m/z＝573.1[M+H]
+。
第二步：((((2R,3S,4R,5S)-5-((2-氯-4-(环戊基氨基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)甲基)膦酸(化合物5)
((((2R,3S,4R,5S)-5-((2-chloro-4-(cyclopentylamino)pyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-yl)methyl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)methyl)phosphonic acid(化合物5)
化合物5A(0.052g，0.09mmol)溶于乙腈(3ml)中，加入三乙胺(0.28g，2.76mmol)，然后缓慢滴加三甲基溴硅烷(0.28g，1.84mmol)，加完反应15小时，反应完毕后过滤，滤饼用少量乙腈洗涤，滤液浓缩后加入4N盐酸(1ml)，加完搅拌5小时，LCMS监控反应，反应完毕后直接将反应体系送制备HPLC，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相，色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％％；c.流量12mL/min；d.洗脱时间20min。保留时间9.8min，得化合物5(20mg，45％)。
LC-MS(ESI):m/z＝475.0[M-H]
-。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.37(d,1H),6.97(d,1H),6.49(d,1H),4.48-4.43(m,1H),3.98-3.94(m,1H),3.73-3.48(m,7H),3.07-2.91(m,2H),1.99-1.98(m,2H),1.73-1.58(m,6H)。
实施例6
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-2-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物6)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-2-ethynyl-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物6)
第一步：4-氯-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶7-氧化物(6A)
4-chloro-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridine 7-oxide(6A)
将4-氯-7-氮杂吲唑(13.0g,84.65mmol)和N-甲基吡咯烷酮(260ml)加入烧瓶中，加入间氯过氧苯甲酸(33.6g,194.69mmol)并在50℃下反应过夜，LCMC检测有产物生成。加入甲基叔丁基醚(50ml)，冷却，过滤得到标题化合物6A(7.9g,55.04％)。
LC-MS(ESI):m/z＝170.1[M+H]
+。
第二步：4,6-二氯-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(6B)
4,6-dichloro-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridine(6B)
将6A(7.9g,46.59mmol)和乙腈(160ml)加入烧瓶中，在冰浴下滴加入三氯氧磷(8.5ml,93.18mmol)并在室温下反应2小时。LCMS检测原料反应完全，有产物生成。将反应液缓慢倒入冰水中，加入饱和碳酸钠溶解调pH～9，搅拌，过滤，滤饼加入二氯甲烷溶解，洗涤，干燥，浓缩得到标题化合物6B(8.5g,97.0％)。
LC-MS(ESI):m/z＝188.0[M+H]
+。
第三步：(2R,3R,4R,5R)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(4,6-二氯-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸二乙酸酯(6C)
(2R,3R,4R,5R)-2-(acetoxymethyl)-5-(4,6-dichloro-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)tetrahydrofuran-3,4-diyl diacetate(6C)
将四乙酰核糖(23.7g,74.47mmol)加入烧瓶中，加热到90℃下搅拌10分钟，然后加入6B(7.0g,37.23mmol)和四氯化锡(0.12ml,1.01mmol)，升温至130℃在减压下搅拌20分钟。然后冷却，LCMS检测原料反应完全，有产物生成。加入二氯甲烷，直接过柱(PE:EA＝1:0～4:1)，得到标题化合物6C(17g,100％)。
LC-MS(ESI):m/z＝446.0[M+H]
+。
第四步：(2R,3R,4S,5R)-2-(4,6-二氯-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(6D)
(2R,3R,4S,5R)-2-(4,6-dichloro-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-5-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-3,4-diol(6D)
将6C(17.0g,38.10mmol)和甲醇(350ml)加入烧瓶中，再加入碳酸钾(15.8g,114.91mmol)，在室温下反应1小时。LCMS检测原料反应完全，有产物生成。二氯甲烷萃取，洗涤，干燥浓缩直接得到标题化合物6D(8.2g,67.2％)。
LC-MS(ESI):m/z＝320.1[M+H]
+。
第五步：((3a'R,4'R,6'R,6a'R)-4'-((4,6-二氯-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)四氢螺[环戊烷-1,2'-呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环]-6'-基)甲醇(6E)
((3a'R,4'R,6'R,6a'R)-4'-(4,6-dichloro-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)tetrahydrospiro[cyclopentane-1,2'-furo[3,4-d][1,3]dioxol]-6'-yl)methanol(6E)
将6D(8.0g,24.99mmol)，环戊酮(9.5g,112.45mmol)，原甲酸三甲酯(8.0g,74.97mmol)和乙腈(100ml)加入烧瓶中，再加入对甲苯磺酸(0.43g,2.5mmol)，然后在80℃下反应2小时。LCMS检测原料反应完全，有产物生成。二氯甲烷萃取，洗涤，干燥浓缩过柱(PE:EA＝3：1)得到标题化合物6E(7.2g,74.6％)。
LC-MS(ESI):m/z＝386.1[M+H]
+。
第六步：(3a'R,4'R,6'S,6a'S)-4'-(4,6-二氯-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)四氢螺[环戊烷-1,2'-呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环]-6'-甲醛(6F)
(3a'R,4'R,6'S,6a'S)-4'-(4,6-dichloro-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)tetrahydrospiro[cyclopentane-1,2'-furo[3,4-d][1,3]dioxole]-6'-carbaldehyde(6F)
将6E(7.2g,18.64mmol)和二氯甲烷(200ml)加入烧瓶中，再加入戴斯-马丁氧化剂(9.5g,22.37mmol)，然后在室温下反应16小时。LCMS检测原料反应完全，有产物生成。二氯甲烷萃取，洗涤，干燥浓缩过柱(PE:EA＝3：1)得到标题化合物6F(5.4g,75.4％)。
LC-MS(ESI):m/z＝384.1[M+H]
+。
第七步：(3a'S,6'R,6a'R)-6'-(4,6-二氯-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-4'-(羟甲基)四氢螺[环戊烷-1,2'-呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环]-4'-甲醛(6G)
(3a'S,6'R,6a'R)-6'-(4,6-dichloro-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-4'-(hydroxymethyl)tetrahyd rospiro[cyclopentane-1,2'-furo[3,4-d][1,3]dioxole]-4'-carbaldehyde(6G)
将6F(5.4g,14.05mmol)和二氧六环(55ml)加入烧瓶中，加入甲醛溶液(5.15ml,140.5mmol)和氢氧化钠溶液(2N,10.5ml)，然后在室温下反应3h，LCMS显示原料反应完全，加入水，乙酸乙酯萃取，洗涤，干燥，浓缩得到标题化合物6G(6克粗产品)。直接往下一步反应。
LC-MS(ESI):m/z＝414.2[M+H]
+。
第八步：((3a'R,4'R,6a'S)-4'-((4,6-二氯-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)四氢螺[环戊烷-1,2'-呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环]-6’,6'-二基)二甲醇(6H)
((3a'R,4'R,6a'S)-4'-(4,6-dichloro-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)tetrahydrospiro[cyclopentane-1,2'-furo[3,4-d][1,3]dioxole]-6',6'-diyl)dimethanol(6H)
将6G(6.0g,14.48mmol)和四氢呋喃/水(60ml/6ml)，在-78℃下加入硼氢化钠(0.55g,14.48mmol)。让温度自然升至室温下并搅拌反应2小时。LCMS检测原料反应完全，有产物生成。将反应液缓慢倒入水中，二氯甲烷萃取，洗涤，干燥，浓缩得到标题化合物6H(4.0g,66.36％)。
LC-MS(ESI):m/z＝416.1[M+H]
+。
第九步：((3a'R,4'R,6'S,6a'S)-4'-(4,6-二氯-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-6'-((三苯甲氧基)甲基)四氢螺[环戊烷-1,2'-呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环]-6'-基)甲醇(6I)
((3a'R,4'R,6'S,6a'S)-4'-(4,6-dichloro-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-6'-((trityloxy)methyl)tetrahydrospiro[cyclopentane-1,2'-furo[3,4-d][1,3]dioxol]-6'-yl)methanol(6I)
将6H(4.0g,9.61mmol)和二氯甲烷(80ml)，吡啶(2.33ml,28.83mmol)加入烧瓶中，在室温下加入三苯基氯甲烷(4.02g,14.41mmol)并搅拌反应4小时。TLC(PE:EA＝3：1)检测原料反应完全，有产物生成。将反应液缓慢倒入水中，二氯甲烷萃取，洗涤，干燥，浓缩过柱(PE:EA＝1：0～3：1)得到标题化合物6I(4.1g,64.8％)。
第十步：1-((3a'S,4'R,6'R,6a'R)-4'-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4'-((三苯氧基)甲基)四氢螺[环戊烷-1,2'-呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环]-6'-基)-4,6-二氯-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(6J)
1-((3a'S,4'R,6'R,6a'R)-4'-(((tert-butyldiphenylsilyl)oxy)methyl)-4'-((trityloxy)methyl)tetrahydrospiro[cyclopentane-1,2'-furo[3,4-d][1,3]dioxol]-6'-yl)-4,6-dichloro-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridine(6J)
将6I(4.1g,6.23mmol)和二氯甲烷(80ml)，咪唑(1.27g,18.69mmol)，硝酸银(3.17g,18.69mmol)加入烧瓶中，在室温下滴加叔丁基二苯基氯硅烷(3.42g,12.46mmol)并搅拌反应16小时。TLC检测原料反应完全，有产物生成。将反应液缓慢倒入水中，二氯甲烷萃取，洗涤，干燥，浓缩过柱(PE:EA＝1：0～5：1)得到标题化合物6J(4.8g,85.9％)。
第十一步：((3a'S,4'R,6'R,6a'R)-4'-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-6'-(4,6-二氯-1H- 吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)四氢螺[环戊烷-1,2'-呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环]-4'-基)甲醇(6K)
((3a'S,4'R,6'R,6a'R)-4'-(((tert-butyldiphenylsilyl)oxy)methyl)-6'-(4,6-dichloro-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)tetrahydrospiro[cyclopentane-1,2'-furo[3,4-d][1,3]dioxol]-4'-yl)methanol(6K)
将6J(4.0g,4.46mmol)和二氯甲烷(40ml)加入烧瓶中，再加入三氟乙酸(2ml,26.76mmol)和三乙基硅烷(1ml,6.69mmol)，然后在室温下反应1小时。LCMS检测原料反应完全，有产物生成。二氯甲烷萃取，洗涤，干燥浓缩过柱(PE:EA＝1：0～2：1)得到标题化合物6K(2.9g,99.3％)。
第十二步：(3a'S,4'R,6'R,6a'R)-4'-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-6'-(4,6-二氯-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)四氢螺[环戊烷-1,2'-呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环]-4'-甲醛(6L)
(3a'S,4'R,6'R,6a'R)-4'-(((tert-butyldiphenylsilyl)oxy)methyl)-6'-(4,6-dichloro-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)tetrahydrospiro[cyclopentane-1,2'-furo[3,4-d][1,3]dioxole]-4'-carbaldehyde(6L)
将6K(2.9g,4.43mmol)和二氯甲烷(60ml)加入烧瓶中，再加入戴斯-马丁氧化剂(4.7g,11.07mmol)，然后在室温下反应4小时。LCMS检测原料反应完全，有产物生成。二氯甲烷萃取，洗涤，干燥浓缩过柱(PE:EA＝0：1～3：1)得到标题化合物6L(2.8g,96.8％)。
第十三步：1-((3a'S,4'R,6'R,6a'R)-4'-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4'-乙炔基四氢螺[环戊烷-1,2'-呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环]-6'-基)-4,6-二氯-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(6M)
1-((3a'S,4'R,6'R,6a'R)-4'-(((tert-butyldiphenylsilyl)oxy)methyl)-4'-ethynyltetrahydrospiro[cyclopentane-1,2'-furo[3,4-d][1,3]dioxol]-6'-yl)-4,6-dichloro-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridine(6M)
将6L(1.6g,2.45mmol)和甲醇(20ml)加入烧瓶中，在冰浴下滴加入1-重氮-2-氧代丙基膦酸二甲酯(1.43g,7.35mmol)的甲醇(5ml)溶液，然后在0℃下反应4小时。LCMS检测原料反应完全，有产物生成。二氯甲烷萃取，洗涤，干燥浓缩过柱(PE:EA＝1：0～3：1)得到标题化合物6M(1.1g,66.1％)。
第十四步：((3a'R,4'R,6'R,6a'S)-4'-(4,6-二氯-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-6'-乙炔基四氢螺[环戊烷-1,2'-呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环]-6'-基)甲醇(6N)
((3a'R,4'R,6'R,6a'S)-4'-(4,6-dichloro-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-6'-ethynyltetrahydrospiro[cyclopentane-1,2'-furo[3,4-d][1,3]dioxol]-6'-yl)methanol(6N)
将6M(1.0g,1.54mmol)和四氢呋喃(10ml)加入烧瓶中，再加入四丁基氟化铵(1.2g,4.62mmol)，然后在室温下反应2小时。LCMS检测原料反应完全，有产物生成。二氯甲烷萃取，洗涤，干燥浓缩过柱(PE:EA＝0：1～1：1)得到标题化合物6N(0.27g,42.7％)。
LC-MS(ESI):m/z＝410.1[M+H]
+。
第十五步：((3a'R,4'R,6'R,6a'S)-4'-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-1-基)-6'-乙炔基四氢螺[环戊烷-1,2'-呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环]-6'-基)甲醇(6O)
((3a'R,4'R,6'R,6a'S)-4'-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-b] pyridin-1-yl)-6'-ethynyltetrahydrospiro[cyclopentane-1,2'-furo[3,4-d][1,3]dioxol]-6'-yl)methanol(6O)
将6N(0.27g,0.66mmol)和N,N-二甲基乙酰胺(10ml)加入烧瓶中，再加入(S)-1-(2-氟苯基)乙胺(0.28g,1.98mmol)和三乙胺(0.33g,3.30mmol)，然后在150℃下反应4小时。LCMS检测原料反应完全，有产物生成。乙酸乙酯萃取，洗涤，干燥浓缩过柱(PE:EA＝1：0～0：1)得到标题化合物6O(0.25g,73.8％)。
LC-MS(ESI):m/z＝513.1[M+H]
+。
第十六步：(2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-2-乙炔基-2-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(6P)
(2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-2-ethynyl-2-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-3,4-diol(6P)
将6O(0.12g,0.23mmol)和二氯甲烷(10ml)加入烧瓶中，在室温下加入三氟乙酸(0.3ml)和盐酸甲醇(0.3ml)。反应在室温下搅拌反应2小时。LCMS检测原料反应完全，有产物生成。加水，加碳酸钠溶液调pH～10，二氯甲烷萃取，洗涤，干燥，浓缩得到标题化合物6P(0.1g,97.3％)。
LC-MS(ESI):m/z＝447.1[M+H]
+。
第十七步：(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-2-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物6)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-2-ethynyl-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物6)
将6P(100mg,0.22mmol)和磷酸三甲酯(3ml)加入烧瓶中，在冰浴下加入亚甲基双氯化磷(270mg,1.1mmol)。让温度自然升至室温下并搅拌反应3小时。LCMS检测原料反应完全，有产物生成。加入1ml水搅拌10分钟，将反应液送去HPLC制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间8.5min。制备液浓缩冻干得到化合物6(50mg,37.6％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d
6)δ8.39(s,1H),8.23(d,1H),7.40–7.38(m,1H),7.33–7.30(m,1H),7.24–7.15(m,2H),6.15(d,1H),6.02(s,1H),5.07(s,1H),4.77(t,1H),4.32(d,1H),4.09–4.05(m,1H),3.92–3.88(m,1H),3.53(s,1H),2.21(t,2H),1.58(d,3H)。
LC-MS(ESI):m/z＝605.1[M+H]
+。
实施例7
(((((2R,3S,4S,5R)-4-叠氮基-5-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物7)
(((((2R,3S,4S,5R)-4-azido-5-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-3-hydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物7)
第一步：(2R,3R,4S,5R)-2-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(7A)
(2R,3R,4S,5R)-2-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-5-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-3,4-diol(7A)
将6D(6.2g,19.37mmol)和N,N-二甲基乙酰胺(80ml)加入烧瓶中，再加入(S)-1-(2-氟苯基)乙胺(6.74g,48.43mmol)和三乙胺(9.8g,96.85mmol)，然后在150℃下反应4小时。LCMS检测原料反应完全，有产物生成。乙酸乙酯萃取，洗涤，干燥浓缩过柱(PE:EA＝1：0～0：1)得到标题化合物7A(5.1g,61.1％)。
LC-MS(ESI):m/z＝423.2[M+H]
+。
第二步：(6aR,8R,9R)-8-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-2,2,4,4-四异丙基四氢-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧硅烷二基-9-醇(7B)
(6aR,8R,9R)-8-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-2,2,4,4-tetraisopropyltetrahydro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-ol(7B)
将7A(5.0g,11.82mmol)和吡啶(50ml)加入烧瓶中，在室温下滴加加入1,3二氯-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷(4.1g,13.00mmol)，然后在室温下反应1小时。TLC检测原料反应完全，有产物生成。二氯甲烷萃取，洗涤，干燥浓缩过柱(PE:EA＝1：0～3：1)得到标题化合物7B(7.8g,99.2％)。
1H NMR(400MHz,CDCl
3)δ7.90(s,1H),7.31–7.24(m,2H),7.18–7.07(m,2H),6.42(s, 1H),6.01(s,1H),5.30(s,1H),5.08–5.04(m,2H),4.62(t,1H),4.09–4.00(m,1H),3.97–3.94(m,2H),1.67(d,3H),1.20–0.88(m,28H)。
第三步：(6aR,8R,9R)-8-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-2,2,4,4-四异丙基四氢-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧硅烷二基-9-基三氟甲磺酸酯(7C)
(6aR,8R,9R)-8-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-2,2,4,4-tetraisopropyltetrahydro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-yltrifluoromethanesulfonate(7C)
将7B(2.0g,3.01mmol)，吡啶(2.14g,27.09mmol)，4-二甲氨基吡啶(0.44g,3.61mmol)和二氯甲烷(20ml)加入烧瓶中，在室温下滴加三氟甲磺酸酐(1.7g,6.02mmol)，然后在室温下反应2小时。TLC(PE:EA＝10：1)检测原料反应完全，有产物生成。二氯甲烷萃取，洗涤，干燥浓缩过柱(PE:EA＝1：0～5：1)得到标题化合物7C(1.5g,62.5％)。
1H NMR(400MHz,CDCl
3)δ7.89(s,1H),7.30–7.24(m,2H),7.13–7.07(m,2H),6.59(s,1H),6.13(s,1H),5.70(s,1H),5.28–5.26(m,2H),5.02(t,1H),4.08–4.05(m,1H),3.99–3.95(m,2H),1.67(d,3H),1.26–0.99(m,28H)。
第四步：1-((6aR,8R,9S)-9-叠氮基-2,2,4,4-四异丙基四氢-6H-呋喃[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧嘧啶-8-yl)-6-氯-N-((S)-1-(2-氟苯基)乙基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-胺(7D)
1-((6aR,8R,9S)-9-azido-2,2,4,4-tetraisopropyltetrahydro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-8-yl)-6-chloro-N-((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-4-amine(7D)
将7C(1.5g,1.88mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(20ml)加入烧瓶中，再加入叠氮化钠(0.37g,5.64mmol)，然后在80℃下反应8小时。LCMS检测原料反应完全，有产物生成。二氯甲烷萃取，洗涤，干燥浓缩过柱(PE:EA＝1：0～5：1)得到标题化合物7D(0.45g,34.7％)。
1H NMR(400MHz,CDCl
3)δ7.93(s,1H),7.31–7.24(m,2H),7.13–7.07(m,2H),6.65(d,1H),6.10(s,1H),5.29–5.26(m,2H),5.03(t,1H),4.40(t,1H),4.14–4.00(m,1H),3.99–3.89(m,2H),1.66(d,3H),1.42–0.92(m,28H)。
第五步：(2R,3S,4S,5R)-4-叠氮基-5-(6-氯-4-((((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-2-(羟甲基)四氢呋喃-3-醇(7E)
(2R,3S,4S,5R)-4-azido-5-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-2-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-3-ol(7E)
将7D(450mg,0.65mmol)和四氢呋喃(10ml)加入烧瓶中，再加入四丁基氟化铵(0.51g,1.95mmol)，然后在室温下反应4小时。LCMS检测原料反应完全，有产物生成。二氯甲烷萃取，洗涤，干燥浓缩过柱(PE:EA＝1：0～5：1)得到标题化合物7E(160mg,55.0％)。
LC-MS(ESI):m/z＝448.2[M+H]
+。
第六步：(((((2R,3S,4S,5R)-4-叠氮基-5-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-1H-吡唑并 [3,4-b]吡啶-1-基)-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物7)
(((((2R,3S,4S,5R)-4-azido-5-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-3-hydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物7)
将7E(70mg,0.16mmol)和磷酸三甲酯(3ml)加入烧瓶中，在冰浴下加入亚甲基双(二氯化膦)(200mg,0.8mmol)。让温度自然升至室温下并搅拌反应3小时。LCMS检测原料反应完全，有产物生成。加入1ml水搅拌10分钟，将反应液送去HPLC制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间8.5min。制备液浓缩冻干得到标题化合物7(26mg,26.8％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d
6)δ8.39(s,1H),8.24(d,1H),7.44(t,1H),7.43–7.33(m,1H),7.26–7.18(m,2H),6.51(d,1H),6.02(s,1H),5.07(s,1H),4.70(t,1H),4.58–4.55(m,1H),4.31–4.20(m,1H),4.07–3.98(m,2H),2.18(t,2H),1.59(d,3H)。
LC-MS(ESI):m/z＝606.2[M+H]
+。
实施例8
((((2R,3S,4R,5R)-5-(1-(2-氯-4-(环戊基氨基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)乙基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)甲基)膦酸(化合物8)
((((2R,3S,4R,5R)-5-(1-(2-chloro-4-(cyclopentylamino)pyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-yl)ethyl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)methyl)phosphonic acid(化合物8)
第一步:((3aR,4S,6R,6aR)-6-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环-4-基)(2-氯-4-(环戊基氨基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲酮(8A)
((3aR,4S,6R,6aR)-6-(((tert-butyldimethylsilyl)oxy)methyl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-yl)(2-chloro-4-(cyclopentylamino)pyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-yl)methanone(8A)
化合物2D(0.6g，1.08mmol)溶于二氯甲烷(10ml)中，分批次加入戴斯马丁氧化剂(0.69g， 1.62mmol)，加完室温反应2小时，反应完毕反应液加入水(10ml)淬灭反应，过滤，滤饼用二氯甲烷淋洗，分液，水相用二氯甲烷(50ml×2)萃取两次，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤,滤液浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝4:1)得到标题化合物8A(0.25g，42％)。
LC-MS(ESI):m/z＝551.2[M+H]
+。
第二步:1-((3aR,4S,6R,6aR)-6-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环-4-基)-1-(2-氯-4-(环戊基氨基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)乙烷-1-醇(8B)
1-((3aR,4S,6R,6aR)-6-(((tert-butyldimethylsilyl)oxy)methyl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-yl)-1-(2-chloro-4-(cyclopentylamino)pyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-yl)ethan-1-ol(8B)
氮气保护下化合物8A(0.25g，0.45mmol)溶于四氢呋喃(5ml)中，降温至0℃缓慢滴加甲基溴化镁溶液(0.45ml，1.35mmol，3.0mol/L)，加完室温反应2小时，反应完毕反应液加入饱和氯化铵(10ml)淬灭反应，用二氯甲烷(50ml×2)萃取两次，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤,滤液浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝4:1)得到标题化合物8B(0.25g，98％)，粗品未纯化直接下一步。
LC-MS(ESI):m/z＝567.2[M+H]
+。
第三步：((3aR,4R,6R,6aS)-6-(1-(2-氯-4-(环戊基氨基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)乙基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环-4-基)甲醇(8C)
((3aR,4R,6R,6aS)-6-(1-(2-chloro-4-(cyclopentylamino)pyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-yl)ethyl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-yl)methanol(8C)
化合物8B(0.21g，0.37mmol)溶于二氯甲烷(5ml)中，加入三乙基硅烷(0.43g，3.7mmol)，加完降温至-10℃，缓慢滴加三氟乙酸(0.5ml)，加完自然回温反应16小时。反应完毕将直接浓缩得产物溶于甲醇(5ml)和水(1ml)的混合溶剂中，再加入碳酸钾(88mg，0.64mmol)加完室温下反应1小时。反应完毕用加水，二氯甲烷(50ml×2)萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后得产物溶解于丙酮(5ml)中，加入催化量的对甲苯磺酸，再加入2,2-二甲氧基丙烷(0.15g，1.4mmol)，加完室温下反应2小时，反应完毕浓缩掉丙酮，加入水(20ml)，二氯甲烷(50ml×2)萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝4:1～2:1)得到标题化合物8C(0.12g，74％)。
LC-MS(ESI):m/z＝437.2[M+H]
+。
第四步：二乙基((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(1-(2-氯-4-(环戊基氨基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7- 基)乙基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环-4-基)甲氧基)甲基)膦酸酯(8D)
diethyl((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(1-(2-chloro-4-(cyclopentylamino)pyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-yl)ethyl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-yl)methoxy)methyl)phosphonate(8D)
化合物8C(0.12g，0.27mmol)和(二乙氧基磷酰基)2-硝基苯磺酸甲酯(0.29g，0.81mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(5ml)中，氮气置换三次，加入叔丁醇镁(0.23g，1.35mmol)，加完升温至80℃反应15小时，反应完毕用冷却至室温后用饱和氯化铵溶液淬灭反应，加入水(20ml)后用乙酸乙酯(50ml×2)萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1:1～1:9)得到标题化合物8D(0.1g，63％)。
LC-MS(ESI):m/z＝587.2[M+H]
+。
第五步：((((2R,3S,4R,5R)-5-(1-(2-氯-4-(环戊基氨基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪7-基)乙基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)甲基)膦酸(化合物8)
((((2R,3S,4R,5R)-5-(1-(2-chloro-4-(cyclopentylamino)pyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-yl)ethyl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)methyl)phosphonic acid(化合物8)
化合物8D(0.1g，0.17mmol)溶于乙腈(5ml)中，加入三乙胺(0.52g，5.1mmol)，然后缓慢滴加三甲基溴硅烷(0.52g，3.4mmol)，加完反应15小时，反应完毕后过滤，滤饼用少量乙腈洗涤，滤液浓缩后加入4N盐酸(1ml)，加完搅拌5小时，LCMS监控反应反应完毕后直接将反应体系送制备，制备HPLC分离方法:1.仪器waters 2767制备液相色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间10.8min得化合物8(46mg，55％)。
LC-MS(ESI):m/z＝489.1[M-H]
-。
1H NMR(400MHz,DMSO-d
6)δ8.30(d,1H),6.95(d,1H),6.43(d,1H),4.48-4.43(m,1H),4.21-4.18(m,1H),3.98-3.96(m,2H),3.73-3.44(m,6H),2.01-1.98(m,2H),1.73-1.58(m,6H),1.11(d,3H)。
实施例9
(((((2S,4R,5R)-5-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-4-羟基-3-亚甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物9)
(((((2S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-4-hydroxy-3-methylenetetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物9)
第一步：((3aR,5R,6S,6aR)-6-羟基-2,2-二甲基四氢呋喃[2,3-d][1,3]二氧杂环-5-基)苯甲酸甲酯(9B)
((3aR,5R,6S,6aR)-6-hydroxy-2,2-dimethyltetrahydrofuro[2,3-d][1,3]dioxol-5-yl)methyl benzoate(9B)
化合物9A(20g，105.16mmol)和三乙胺(31.92g，315.48mmol)溶于二氯甲烷(150ml)中，冰水浴下分批次加入苯甲酰氯(12.22mL，105.16mmol)，加完室温反应2小时，反应完毕反应液加入水(50ml)淬灭反应，水相用二氯甲烷(150ml×2)萃取两次，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，过滤浓缩后残留物柱层析分离纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝2:1)得到化合物9B(22g，71％)。
1H NMR(400MHz,CDCl
3)δ8.09–8.01(m,2H),7.60(t,1H),7.46(t,2H),5.96(d,1H),4.81(dd,1H),4.60(d,1H),4.42–4.32(m,2H),4.18(d,1H),1.51(s,3H),1.32(s,3H)。
第二步：((3aR,5R,6aS)-2,2-二甲基-6-氧四氢呋喃[2,3-d][1,3]二氧戊环-5-基)苯甲酸甲酯(9C)
((3aR,5R,6aS)-2,2-dimethyl-6-oxotetrahydrofuro[2,3-d][1,3]dioxol-5-yl)methyl benzoate(9C)
化合物9B(22g，74.75mmol)溶于二氯甲烷(200ml)中，分批次加入戴斯马丁氧化剂(63.4g，149.5mmol)，加完室温反应2小时，反应完毕反应液加入水(200ml)淬灭反应，过滤，滤饼用二氯甲烷淋洗，分液，水相用二氯甲烷(100ml×2)萃取两次，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得化合物9C(16g，73％)，直接下一步反应。
第三步：((3aR,5S,6aR)-2,2-二甲基-6-亚甲基四氢呋喃[2,3-d][1,3]二氧杂环-5-基)苯甲酸甲酯(9D)
((3aR,5S,6aR)-2,2-dimethyl-6-methylenetetrahydrofuro[2,3-d][1,3]dioxol-5-yl)methyl benzoate(9D)
甲基三苯基溴化膦(55g，153.96mmol)溶于干燥四氢呋喃(500ml)中，冰水浴下加入叔戊醇钠(16.96g，153.96mmol)，滴完0℃反应30分钟，0℃分批加入化合物9C(15g，7.6mmol)，加完后室温反应2小时，反应完毕用饱和氯化铵(200ml)淬灭反应，加入水(300ml)后乙酸乙 酯(300ml×2)萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，干燥浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝5:1)得到标题化合物9D(7.9g，53％)。
第四步：(3R,5S)-5-((苯甲酰氧基)甲基)-4-亚甲基四氢呋喃-2,3-二乙酸二乙酸酯(9E)
(3R,5S)-5-((benzoyloxy)methyl)-4-methylenetetrahydrofuran-2,3-diyl diacetate(9E)
化合物9D(3.5g，12.06mmol)溶于三氟乙酸(10mL)和水(5mL)，加完室温反应3小时，反应完毕后浓缩除去三氟乙酸，水相用乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合并有机相浓缩，然后加入醋酸酐(5mL)，吡啶(15mL)，室温反应过夜，反应液直接浓缩，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝5:1)得到标题化合物9E(0.8g，20％)。
1H NMR(400MHz,CDCl
3)δ8.07(dd,2H),7.61–7.52(m,1H),7.49–7.40(m,2H),6.24(s,1H),5.74–5.69(m,1H),5.56(s,1H),5.48(s,1H),5.09(dd,1H),4.52(dd,1H),4.43(dd,1H),2.11(s,3H),2.01(s,3H)。
第五步：((2S,4R,5R)-4-乙酰氧基-5-(4,6-二氯-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-3-亚甲基四氢呋喃-2-基)苯甲酸甲酯(9F)
((2S,4R,5R)-4-acetoxy-5-(4,6-dichloro-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-3-methylenetetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(9F)
将化合物9E(0.7g，2.09mmol)加入到50mL反应瓶中，加热到90℃后加入4,6-二氯-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(0.39g，2.09mmol)，加完后滴加四氯化锡两滴，然后升温至130℃减压反应三十分钟，冷却至室温，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝10:1-5:1)得到标题化合物9F(0.8g，83％)。
LC-MS(ESI):m/z＝462.0[M+H]
+。
第六步：((2S,4R,5R)-4-乙酰氧基-5-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-3-亚甲基四氢呋喃-2-基)苯甲酸甲酯(9G)
((2S,4R,5R)-4-acetoxy-5-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-3-methylenetetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(9G)
化合物9F(0.70g，1.51mmol)溶于DMF(5ml)中，加入三乙胺(0.46g，4.53mmol)和(S)-1-(2-氟苯基)乙-1-胺(0.40g，3.02mmol)加完150℃下反应1小时，反应完毕用加水，乙酸乙酯(50ml×2)萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝5:1-1:1)得到标题化合物9G(0.3g，35％)。
LC-MS(ESI):m/z＝565.2[M+H]
+。
第七步：(2R,3R,5S)-2-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-5-(羟甲基)-4-亚甲基四氢呋喃-3-醇(9H)
(2R,3R,5S)-2-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-5-(hydroxymethyl)-4-methylenetetrahydrofuran-3-ol(9H)
化合物9G(0.25g，0.44mmol)溶于甲醇(5ml)中，加入碳酸钾(0.24g，1.76mmol)，加完室温下反应2小时，加入水(20ml)析出固体，过滤，滤饼用水(2mL)洗涤一次，滤饼用甲苯带水减压旋干得到标题化合物9H(0.16g，86％)。
LC-MS(ESI):m/z＝419.2[M+H]
+。
第八步：(((((2S,4R,5R)-5-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-4-羟基-3-亚甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物9)
(((((2S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-4-hydroxy-3-methylenetetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物9)
化合物9H(0.080g，0.19mmol)溶于磷酸三甲酯(2ml)中，冰浴下降温0℃，亚甲基双(二氯化膦)(0.14g，0.57mmol)溶于磷酸三甲酯(0.5ml)中缓慢滴加到反应液中，加完0℃反应3小时，LCMS监控反应，反应完毕后加入水(1ml)，加完搅拌1小时，反应完毕后直接将反应体系送制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间8.0min，得化合物9(50mg，46％)。
LC-MS(ESI):m/z＝575.0[M-H]
-。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.27(s,1H),7.37(t,1H),7.34–7.24(m,1H),7.13(dd,2H),6.14–6.02(m,2H),5.44(t,1H),5.39–5.28(m,2H),5.07(d,1H),4.90(s,1H),4.30–4.21(m,1H),4.17(dd,1H),2.43(t,2H),1.64(d,3H)。
实施例10
(((((2S,3S,4R,5R)-3-叠氮基-5-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-4-羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物10)
(((((2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物10)
第一步：((3aR,5R,6S,6aR)-2,2-二甲基-6-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)四氢呋喃[2,3-d][1,3]二氧杂环-5-基)苯甲酸甲酯(10A)
((3aR,5R,6S,6aR)-2,2-dimethyl-6-(((trifluoromethyl)sulfonyl)oxy)tetrahydrofuro[2,3-d][1,3]dioxol-5-yl)methyl benzoate(10A)
化合物9B(6.0g，20.39mmol)，N,N-二甲基吡啶-4-胺(2.49g，20.39mmol)和吡啶(16.46mL，203.9mmol)溶于二氯甲烷(100ml)中，冰水浴下分批次加入三氟甲磺酸酐(5.14mL，30.59mmol)，加完室温反应2小时，反应完毕反应液浓缩后残留物柱层析分离纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝10:1-3:1)得到化合物10A(8.0g，92％)。
第二步：((3aR,5S,6R,6aR)-6-叠氮基-2,2-二甲基四氢呋喃[2,3-d][1,3]二氧杂环-5-基)苯甲酸甲酯(10B)
((3aR,5S,6R,6aR)-6-azido-2,2-dimethyltetrahydrofuro[2,3-d][1,3]dioxol-5-yl)methyl benzoate(10B)
化合物10A(5.0g，11.73mmol)溶于乙醇(100ml)中，加入叠氮化钠(2.29g，35.19mmol)，加完85℃反应48小时，反应完毕反应液加入水(200ml)淬灭反应，水相用乙酸乙酯(300ml×2)萃取两次，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩残留物柱层析分离纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝3:1)得到化合物10B(1.4g，41％)。
第三步：(3R,4R,5S)-4-叠氮基-5-((苯甲酰氧基)甲基)四氢呋喃-2,3-二乙酸二乙酸酯(10C)
(3R,4R,5S)-4-azido-5-((benzoyloxy)methyl)tetrahydrofuran-2,3-diyl diacetate(10C)
化合物10B(0.55g，1.72mmol)溶于乙酸(30mL)和乙酸酐(2mL)，滴加浓硫酸(0.9mL)加完室温反应16小时，反应完毕后加水(100mL)，水相用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机相，水(100mL×2)洗涤，碳酸氢钠水溶液洗涤，分液，有机相干燥浓缩，得到标题化合物10C(0.4g，64％)，直接用于下一步。
1H NMR(400MHz,CDCl
3)δ8.08(dd,2H),7.59(t,1H),7.46(td,2H),6.17(s,1H),5.38(d,1H),4.67(dd,1H),4.50–4.44(m,1H),4.38(dt,1H),4.22(dd,1H),2.19(s,3H),1.92(s,3H)。
第四步：(((2S,3R,4R,5R)-4-乙酰氧基-3-叠氮基-5-(4,6-二氯-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)四氢呋喃-2-基)苯甲酸甲酯(10D)
((2S,3R,4R,5R)-4-acetoxy-3-azido-5-(4,6-dichloro-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)tetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(10D)
将化合物10C(0.5g，1.38mmol)加入到50mL反应瓶中，加热到90℃后加入4,6-二氯-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(0.26g，1.38mmol)，加完后滴加四氯化锡两滴，然后升温至130℃减压反应三十分钟，冷却至室温，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝10:1-5:1)得到标题化合物10D(0.45g，66％)。
LC-MS(ESI):m/z＝491.0[M+H]
+。
第五步：((2S,3R,4R,5R)-4-乙酰氧基-3-叠氮基-5-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)四氢呋喃-2-基)苯甲酸甲酯(10E)
((2S,3R,4R,5R)-4-acetoxy-3-azido-5-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)tetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(10E)
化合物10D(0.45g，1.51mmol)溶于N,N-二乙基乙酰胺(5ml)中，加入三乙胺(0.28g，2.76mmol)和(S)-1-(2-氟苯基)乙-1-胺(0.26g，3.02mmol)加完150℃下反应1小时，反应完毕用加水，乙酸乙酯(50ml×2)萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝5:1-1:1)得到标题化合物10E(0.25g，46％)。
LC-MS(ESI):m/z＝594.1[M+H]
+。
第六步：(2R,3R,4S,5S)-4-叠氮基-2-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3-醇(10F)
(2R,3R,4S,5S)-4-azido-2-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-5-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-3-ol(10F)
化合物10E(0.25g，0.42mmol)溶于甲醇(5ml)中，加入碳酸钾(0.23g，1.68mmol)，加完室温下反应2小时，加入水(20ml)析出固体，过滤，滤饼用水(2mL)洗涤一次，滤饼用甲苯带水减压旋干得到标题化合物10F(0.15g，79％)。
LC-MS(ESI):m/z＝448.2[M+H]
+。
第七步：(((((2S,3S,4R,5R)-3-叠氮基-5-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-4-羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物10)
(((((2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物10)
化合物10F(0.15g，0.33mmol)溶于磷酸三甲酯(2ml)中，冰浴下降温0℃，亚甲基双(二氯化膦)(0.25g，0.99mmol)溶于磷酸三甲酯(0.1ml)中缓慢滴加到反应液中，加完0℃反应3小时，LCMS监控反应，反应完毕后加入水(1ml)，加完搅拌1小时，反应完毕后直接将反 应体系送制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d.洗脱时间20min。保留时间8.0min，得化合物10(40mg，20％)。
LC-MS(ESI):m/z＝604.1[M-H]
-。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.39(s,1H),8.24(d,1H),7.40(t,1H),7.32(dd,1H),7.20(dt,2H),7.01(d,1H),6.07(t,2H),5.06(s,1H),4.96(t,1H),4.41–4.32(m,1H),4.16–4.01(m,2H),3.90(dd,1H),2.13(t,2H),1.58(d,3H)。
实施例11:
(((((2S,3S,4R,5R)-3-氨基-5-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-4-羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物11)
(((((2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物11)
化合物10(0.035g，0.066mmol)溶于甲醇(5ml)中，加入邻二氯苯(1mL)钯碳(10mg)，反应体系用氢气置换三次，室温反应15分钟，LCMS监控反应，反应完毕后浓缩除去甲醇，加入水(5ml)，乙酸乙酯(5mL)，分液，水相直接送制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间8.0min，得化合物11(10mg，26％)。
LC-MS(ESI):m/z＝580.1[M+H]
+。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.21(s,1H),7.36(dd,1H),7.32–7.24(m,1H),7.13(dd,2H),6.35(s,1H),6.04(s,1H),5.08-5.03(m,1H),4.47(s,2H),4.23-4.17(m,1H),4.00-3.94(m,1H),2.28(t,2H),1.64(d,3H)。
实施例12:
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-b)]吡啶-1-基)-3,4-二羟基-3-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物12)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物12)
化合物9(0.050g，0.087mmol)，N-甲基吗啉氧化物(0.030g，0.26mmol)溶于丙酮(2ml)和水(1mL)中，室温下滴加四氧化锇的叔丁醇溶液(1mL，2mg/mL)，加完室温反应16小时，反应完毕加亚硫酸钠淬灭反应，反应液浓缩后送制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间8.0min得化合物12(20mg，38％)。
LC-MS(ESI):m/z＝609.0[M-H]
-。
1H NMR(400MHz,D
2O)δ8.28(s,1H),7.40(t,1H),7.31(dd,1H),7.15(dt,2H),6.24–6.16(m,2H),5.11(d,1H),4.93(d,1H),4.32(t,1H),4.11(dd,1H),4.05(dd,1H),3.96(d,1H),3.84(d,1H),2.07(td,2H),1.62(d,3H)。
实施例13
(((((2R,3S,4R,5R)-4-叠氮基-5-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物13)
(((((2R,3S,4R,5R)-4-azido-5-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-3-hydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物13)
第一步：(6aR,8R)-8-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-2,2,4,4-四异丙基二氢-6H-呋喃[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧硅烷二基-9(8H)-酮(13A)
(6aR,8R)-8-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-2,2,4,4-tetraisopropyldihydro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9(8H)-one(13A)
将7B(5.0g，7.51mmol)溶于二氯甲烷(100ml)中，分批次加入戴斯马丁氧化剂(7.96g，18.77mmol)，加完室温反应16小时，反应完毕反应液加入水(50ml)淬灭反应，过滤，滤饼用二氯甲烷淋洗，分液，水相用二氯甲烷(100ml×2)萃取两次，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩过柱(PE:EA＝1：0-3：1)得到标题化合物13A(1.48g,29.7％)。
1H NMR(400MHz,CDCl
3)δ7.90(s,1H),7.30–7.24(m,2H),7.12–7.07(m,2H),6.18(s,1H),6.08(s,1H),5.21(d,1H),5.03(s,1H),4.14–4.09(m,2H),4.03–4.00(m,1H),1.71–1.66(m,3H),1.67(d,3H),1.26–0.92(m,28H)。
第二步：(6AR,8R,9S)-8-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-2,2,4,4-四异丙基四氢-6H-呋喃[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧硅烷二基-9-醇(13B)
(6aR,8R,9S)-8-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-2,2,4,4-tetraisopropyltetrahydro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-ol(13B)
将13A(1.48g,2.23mmol)和四氢呋喃(20ml)，水(2ml)加入烧瓶中，在-78℃下加入硼氢化钠(84mg,2.23mmol)，然后在室温下反应1小时。TLC检测原料反应完全，有产物生成。二氯甲烷萃取，洗涤，干燥浓缩过柱(PE:EA＝1：0-3：1)得到标题化合物13B(1.4g,94.4％)。
1H NMR(400MHz,CDCl
3)δ7.96(s,1H),7.30–7.24(m,2H),7.12–7.07(m,2H),6.53(d,1H),6.09(s,1H),5.03(s,1H),4.88(t,1H),4.64(t,1H),3.91–3.88(m,3H),1.67(d,3H),1.26–0.88(m,28H)。
第三步：(6AR,8R,9S)-8-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-2,2,4,4-四异丙基四氢-6H-呋喃[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧硅烷二基-9-基三氟甲磺酸盐(13C)
(6aR,8R,9S)-8-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-2,2,4,4-tetraisopropyltetrahydro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-yltrifluoromethanesulfonate(13C)
将13B(1.4g,2.10mmol)，吡啶(1.5g,18.90mmol)，4-二甲氨基吡啶(0.31g,2.52mmol)和二氯甲烷(20ml)加入烧瓶中，在室温下滴加三氟甲磺酸酐(1.7g,6.02mmol)，然后在室温下反应2小时。TLC(PE:EA＝10：1)检测原料反应完全，有产物生成。二氯甲烷萃取，洗涤，干燥浓缩过柱(PE:EA＝1：0-5：1)得到标题化合物13C(1.1g,65.7％)。
1H NMR(400MHz,CDCl
3)δ7.95(s,1H),7.30–7.26(m,2H),7.12–7.08(m,2H),6.77(s,1H),6.14(s,1H),5.63(t,1H),5.49(t,1H),5.03(s,1H),4.17–4.09(m,1H),3.97–3.89(m,2H),1.67(d,3H),1.26–0.88(m,28H)。
第四步：1-((6aR,8R,9R)-9-叠氮基-2,2,4,4-四异丙基四氢-6H-呋喃[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧嘧啶-8-基)-6-氯-N-((S)-1-(2-氟苯基)乙基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-胺(13D)
1-((6aR,8R,9R)-9-azido-2,2,4,4-tetraisopropyltetrahydro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-8-yl)-6-chloro-N-((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-4-amine(13D)
将13C(1.4g,1.76mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(20ml)加入烧瓶中，再加入叠氮化钠(0.34g,5.28mmol)，然后在80℃下反应8小时。LCMS检测原料反应完全，有产物生成。二氯甲烷萃取，洗涤，干燥浓缩过柱(PE:EA＝1：0-5：1)得到标题化合物13D(1.1g,90.5％)。
1H NMR(400MHz,CDCl
3)δ7.91(s,1H),7.31–7.24(m,2H),7.12–7.07(m,2H),6.28(s,1H),6.13(s,1H),5.34–5.30(m,1H),5.04(s,1H),4.58(d,1H),4.06–4.03(m,1H),3.95(t,2H),1.68(d,3H),1.24–0.88(m,28H)。
第五步：(2R,3S,4R,5R)-4-叠氮基-5-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-B]吡啶-1-基)-2-(羟甲基)四氢呋喃-3-醇(13E)
(2R,3S,4R,5R)-4-azido-5-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-2-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-3-ol(13E)
将13D(1.1g,1.59mmol)和四氢呋喃(20ml)加入烧瓶中，再加入四丁基氟化铵(1.25g,4.77mmol)，然后在室温下反应4小时。LCMS检测原料反应完全，有产物生成。二氯甲烷萃取，洗涤，干燥浓缩过柱(PE:EA＝1：0-0：1)得到标题化合物13E(600mg,84.3％)。
LC-MS(ESI):m/z＝448.2[M+H]
+。
第六步：(((((2R,3S,4R,5R)-4-叠氮基-5-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物13)
(((((2R,3S,4R,5R)-4-azido-5-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-3-hydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物13)
将13E(200mg,0.45mmol)和磷酸三甲酯(4ml)加入烧瓶中，在冰浴下加入亚甲基双(二氯化膦)(340mg,1.35mmol)。让温度自然升至室温下并搅拌反应3小时。LCMS检测原料反应完全，有产物生成。加入1ml水搅拌10分钟，将反应液送去HPLC制备，制备HPLC 分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间：7.56min。制备液浓缩冻干得到标题化合物13F(110mg,40.3％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d
6)δ8.41(s,1H),8.26(d,1H),7.40(t,1H),7.34–7.30(m,1H),7.24–7.16(m,2H),6.12(d,1H),6.04(s,1H),5.07(s,1H),4.66(t,2H),4.06(d,2H),3.96–3.91(m,1H),2.02(t,2H),1.58(d,3H)。
LC-MS(ESI):m/z＝606.2[M+H]
+。
实施例14：
(2-(((2R,3S,4R,5R)-5-((2-氯-4-(环戊基氨基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-1-羟基-3-甲氧基丙烷-2-基)膦酸(化合物14)
(2-(((2R,3S,4R,5R)-5-((2-chloro-4-(cyclopentylamino)pyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-yl)methyl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)-1-hydroxy-3-methoxypropan-2-yl)phosphonicacid(化合物14)
第一步:7-(((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环-4-基)甲基)-2-氯-N-环戊基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺(14A)
7-(((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((tert-butyldimethylsilyl)oxy)methyl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-yl)methyl)-2-chloro-N-cyclopentylpyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amine(14A)
化合物2G(1.18g，2.79mmol)溶于DCM(15ml)中，加入咪唑(0.57g，8.37mmol)，加完氮气保护下降温0～5℃，分批次加入TBSCl(0.63g，4.19mmol)，加完自然回温反应2小时，反应完毕后加入水淬灭反应，二氯甲烷(50ml×2)萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，干燥浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝5:1)得到标题化合物14A(1.4g，93％)。
LC-MS(ESI):m/z＝537.2[M+H]
+。
第二步:叔丁基(7-(((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-2,2-二甲 基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环)-4-基)甲基)-2-氯吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)(环戊基)氨基甲酸酯(14B)
tert-butyl(7-(((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((tert-butyldimethylsilyl)oxy)methyl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-yl)methyl)-2-chloropyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-yl)(cyclopentyl)carbamate(14B)
化合物14A(1.4g，2.61mmol)溶于乙腈(20ml)中，加入二碳酸二叔丁酯(2.85g，13.05mmol)，三乙胺(2.64g，26.1mmol)和DMAP(0.64g，5.22mol)，加完升温至75℃反应15小时，反应完毕后加入水淬灭反应，乙酸乙酯(100ml×2)萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，干燥浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝10:1)得到标题化合物14B(1.3g，78％)。
LC-MS(ESI):m/z＝637.2[M+H]
+。
第三步:叔丁基(2-氯-7-(((3aS,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二恶醇-4-基)甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)(环戊基)氨基甲酸酯(14C)
tert-butyl(2-chloro-7-(((3aS,4R,6R,6aR)-6-(hydroxymethyl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-yl)methyl)pyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-yl)(cyclopentyl)carbamate(14C)
化合物14B(1.3g，2.04mmol)溶于四氢呋喃(15ml)中，加入四丁基氟化铵四氢呋喃溶液(2.45ml，2.45mmol,1.0mol/L)，加完室温反应2小时，反应完毕后直接浓缩反应液。浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝2:1)得到标题化合物14C(0.90g，84％)。
LC-MS(ESI):m/z＝467.2[M-tBu+H]
+。
第四步：乙基2-(((3aR,4R,6R,6aS)-6-((4-((叔丁氧基羰基)(环戊基)氨基)-2-氯吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪)-7-基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环-4-基)甲氧基)-2-(二乙氧基磷酰基)乙酸酯(14D)
ethyl2-(((3aR,4R,6R,6aS)-6-((4-((tert-butoxycarbonyl)(cyclopentyl)amino)-2-chloropyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-yl)methyl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-yl)methoxy)-2-(diethoxyphosphoryl)acetate(14D)
化合物14C(0.90g，1.72mmol)溶于甲苯(15ml)中，加入2-重氮-2-(二乙氧基磷酰基)乙酸乙酯(1.29g，5.16mmol)，二聚醋酸铑(0.076g，0.17mmol)，加完氮气保护下升温至100℃反应3小时，反应完毕后反应液直接浓缩，浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝4:1)得到标题化合物14D(1.1g，85％)。
LC-MS(ESI):m/z＝745.3[M+H]
+。
第五步：乙基2-(((3aR,4R,6R,6aS)-6-((4-((叔丁氧基羰基)(环戊基)氨基)-2-氯吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪)-7-基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环-4-基)甲氧基)-2-(二乙 氧基磷酰基)-3-甲氧基丙酸酯(14E)
ethyl2-(((3aR,4R,6R,6aS)-6-((4-((tert-butoxycarbonyl)(cyclopentyl)amino)-2-chloropyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-yl)methyl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-yl)methoxy)-2-(diethoxyphosphoryl)-3-methoxypropanoate(14E)
化合物14D(1.1g，1.48mmol)溶于干燥四氢呋喃(15ml)中，氮气置换三次，用乙醇干冰体系降温至-15℃，控温滴加双(三甲基硅基)氨基钠(1.48ml，2.96mmol，2.0mol/L)，滴完-15℃反应20分钟，控温-15℃加入四丁基碘化铵(0.27g，0.74mmol)，再缓慢滴加溴甲基甲基醚(0.55g，4.44mmol)滴完保持-15℃反应3小时，反应完毕用饱和氯化铵水溶液淬灭反应，加入水后乙酸乙酯(100ml×2)萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，干燥浓缩后得到标题化合物14E(1.0g，85％)，粗品未纯化直接用于下一步反应。
LC-MS(ESI):m/z＝789.3[M+H]
+。
第六步：叔丁基(2-氯-7-(((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((2-(二乙氧基磷酰基)-1-羟基-3-甲氧基丙-2-基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环-4-基)甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)(环戊基)氨基甲酸酯(14F)
tert-butyl(2-chloro-7-(((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((2-(diethoxyphosphoryl)-1-hydroxy-3-methoxypropan-2-yl)oxy)methyl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-yl)methyl)pyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-yl)(cyclopentyl)carbamate(14F)
化合物14E(1.0g，1.27mmol)溶于乙醇(15ml)中，加入无水氯化钙(0.28g，2.54mmol)，加完氮气保护下降温0～5℃，分批次加入硼氢化钠(0.1g，2.54mmol)，加完自然回温反应3小时，反应完毕后加入水淬灭反应，二氯甲烷(50ml×2)萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，干燥浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1:5)得到标题化合物14F(0.5g，52％)。
LC-MS(ESI):m/z＝747.3[M+H]
+。
第七步：(2-(((2R,3S,4R,5R)-5-((2-氯-4-(环戊基氨基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-1-羟基-3-甲氧基丙烷-2-基)膦酸(化合物14)
(2-(((2R,3S,4R,5R)-5-((2-chloro-4-(cyclopentylamino)pyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-yl)methyl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)-1-hydroxy-3-methoxypropan-2-yl)phosphonic acid(化合物14)
化合物14F(0.069g，0.092mmol)溶于乙腈(2ml)中，加入三乙胺(0.28g，2.76mmol)，然后缓慢滴加化合物三甲基溴硅烷(0.28g，1.84mmol)，加完反应15小时，反应完毕后过滤，滤饼用少量乙腈洗涤，滤液浓缩后加入三氟乙酸与水的混合物(2ml，1:1混合)，加完搅拌15小时，反应完毕后直接将反应体系送制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样 品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间7.3min，得化合物14(20mg，39％)。
LC-MS(ESI):m/z＝549.1[M-H]
-
1H NMR(400MHz,DMSO-d
6)δ8.35(d,1H),6.97(d,1H),6.49(d,1H),4.48-4.43(m,1H),4.20-4.18(m,1H),4.00-3.95(m,1H),3.86-3.60(m,8H),3.25(s,3H),3.11-2.98(m,2H),1.99-1.98(m,2H),1.73-1.58(m,6H)。
实施例15:
((((2R,3S,4R,5R)-5-((2-氯-4-(甲氨基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)甲基)膦酸(化合物15)
((((2R,3S,4R,5R)-5-((2-chloro-4-(methylamino)pyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-yl)methyl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)methyl)phosphonic acid(化合物15)
第一步：(R)-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环-4-基)(2-氯-4-(甲氨基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲醇(15A)
(R)-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((tert-butyldimethylsilyl)oxy)methyl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-yl)(2-chloro-4-(methylamino)pyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-yl)methanol(15A)
化合物2C(0.50g，0.99mmol)溶于异丙醇(5ml)中，然后加入甲胺醇溶液(2.0ml，1.98mmol，1.0mol/L)，加完室温反应3小时，反应完毕后反应液直接浓缩，浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝3:1)得到标题化合物15A(0.40g，81％)。
LC-MS(ESI):m/z＝499.2[M+H]
+。
第二步：((3aR,4R,6R,6aS)-6-((2-氯-4-(甲氨基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧戊环-4-基)甲醇(15B)
((3aR,4R,6R,6aS)-6-((2-chloro-4-(methylamino)pyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-yl)methyl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-yl)methanol(15B)
化合物15A(0.40g，0.80mmol)溶于二氯甲烷(5ml)中，加入三乙基硅烷(0.80g，8.0mmol)，加完缓慢滴加三氟乙酸(0.5ml)，加完室温下反应16小时。反应完毕将直接浓缩得产物溶于甲醇(5ml)和水(1ml)的混合溶剂中，再加入碳酸钾(0.11g，0.80mmol)加完室温下反应1小时。 反应完毕用加水，乙酸乙酯(50ml×2)萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后得产物溶解于丙酮(5ml)中，加入催化量的对甲苯磺酸，再加入2,2-二甲氧基丙烷(0.42g，4.0mmol)，加完室温下反应2小时，反应完毕浓缩掉丙酮，加入水(20ml)，二氯甲烷(50ml×2)萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤,滤液浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1:1～1:5)得到标题化合物15B(0.21g，77％)。
LC-MS(ESI):m/z＝369.1[M+H]
+。
第三步：二乙基((((3aR,4R,6R,6aS)-6-((2-氯-4-(甲氨基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧戊环-4-基)甲氧基)甲基)膦酸盐(15C)
diethyl((((3aR,4R,6R,6aS)-6-((2-chloro-4-(methylamino)pyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-yl)methyl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-yl)methoxy)methyl)phosphonate(15C)
化合物15B(0.21g，0.57mmol)和(二乙氧基磷酰基)2-硝基苯磺酸甲酯(0.3g，0.85mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(5ml)中，氮气置换三次，加入化合物叔丁醇镁(0.29g，1.7mmol)，加完升温至80℃反应3小时，反应完毕用冷却至室温后用饱和氯化铵溶液淬灭反应，加入水后乙酸乙酯(50ml×2)萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1:5)得到标题化合物15C(0.24g，81％)。
LC-MS(ESI):m/z＝519.2[M+H]
+。
第四步：((((2R,3S,4R,5R)-5-((2-氯-4-(甲氨基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)甲基)膦酸(化合物15)
((((2R,3S,4R,5R)-5-((2-chloro-4-(methylamino)pyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-yl)methyl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)methyl)phosphonic acid(化合物15)
化合物15C(0.24g，0.46mmol)溶于乙腈(5ml)中，加入三乙胺(1.4g，13.8mmol)，然后缓慢滴加三甲基溴硅烷(1.4g，9.2mmol)，加完反应15小时，反应完毕后过滤，滤饼用少量乙腈洗涤，滤液浓缩后加入4N盐酸(1ml)，加完搅拌5小时，反应完毕后直接将反应体系送制备，制备HPLC分离方法:1.仪器waters 2767制备液相色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间7.5min得化合物15(110mg，56％)。
LC-MS(ESI):m/z＝475.1[M-H]
-。
1H NMR(400MHz,DMSO-d
6)δ8.57(d,1H),6.85(d,1H),6.49(d,1H),4.23-4.18(m,1H),3.91-3.82(m,3H),3.85-3.48(m,4H),3.13-2.96(m,5H)。
实施例16
((((3S,4R,5R)-5-((6-氯-4-(环戊基氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)氧基)甲基)膦酸(化合物16)
((((3S,4R,5R)-5-((6-chloro-4-(cyclopentylamino)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)methyl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)oxy)methyl)phosphonic acid(化合物16)
第一步：(3aS,4S,6R,6aS)-6-((6-氯-4-(环戊基氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二氧杂环-4-羧酸(16A)
(3aS,4S,6R,6aS)-6-((6-chloro-4-(cyclopentylamino)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)methyl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxole-4-carboxylic acid(16A)
将((3aR,4R,6R,6aS)-6-((6-氯-4-(环戊基氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环-4-基)甲醇(1G)(1.1g，2.5mmol)加入到乙腈(4mL)和水(4mL)中，再加入二乙酰氧基碘苯(1.84g，5.5mmol)和TEMPO(0.1g，0.6mmol)，室温搅拌16小时，加水(50mL)和EA(50mL)萃取，EA相浓缩至干，得到1.3g 16A粗品，直接用于下一步反应。
LCMS m/z＝438.2[M+1]
+。
第二步：(3aS,6R,6aS)-6-((6-氯-4-(环戊基氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环-4-基)乙酸酯(16B)
(3aS,6R,6aS)-6-((6-chloro-4-(cyclopentylamino)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)methyl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-yl acetate(16B)
将(3aS,4S,6R,6aS)-6-((6-氯-4-(环戊基氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二氧杂环-4-羧酸(16A)(1.3g，3.0mmol)加入到无水DMF中(12mL)，再加入四醋酸铅(3.6g，9.0mmol)，氮气保护，光照条件下反应16小时，加水(50mL)和乙酸乙酯(50mL)萃取，乙酸乙酯相浓缩至干，柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝2:1)得到1.0g 16B(两步收率＝94％)。
LCMS m/z＝452.2[M+1]
+。
第三步：(3S,4R,5R)-5-((6-氯-4-(环戊基氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)四氢呋喃-2,3,4-三醇(16C)
(3S,4R,5R)-5-((6-chloro-4-(cyclopentylamino)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)methyl)tetrahydrofuran-2,3,4-triol(16C)
向(3aS,6R,6aS)-6-((6-氯-4-(环戊基氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环-4-基)乙酸酯(16B)(0.4g，0.88mmol)中加入90％的TFA水溶液(4mL)，室温搅拌3h(有原料和中间态未反应完)，氮气吹干TFA，加水溶解产物过反相柱纯化(酸法：0.5％TFA in H
2O)，(ACN：H
2O＝15％)，直接冻干，得到80mg 16C(收率＝25％)。
LCMS m/z＝370.2[M+1]
+。
第四步：(3S,4S,5R)-5-((6-氯-4-(环戊基氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)四氢呋喃-2,3,4-三乙酸酯(16D)
(3S,4S,5R)-5-((6-chloro-4-(cyclopentylamino)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)methyl)tetrahydrofuran-2,3,4-triyl triacetate(16D)
将(3S,4R,5R)-5-((6-氯-4-(环戊基氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)四氢呋喃-2,3,4-三醇(16J)(80mg,0.217mmol)加入到DCM中(2mL)，再加入乙酸酐(110mg,1.08mmol)，三乙胺(175mg,1.736mmol)和DMAP(13mg，0.108mmol)。室温搅拌过夜，加水(10mL)和DCM(10mL)萃取，DCM相浓缩至干，薄层得到40mg 16D(收率＝30％)。
LCMS m/z＝496.2[M+1]
+。
第五步：(2R,3S,4S)-2-((6-氯-4-(环戊基氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)-5-((二乙氧基磷酰基)甲氧基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯(16E)
(2R,3S,4S)-2-((6-chloro-4-(cyclopentylamino)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)methyl)-5-((diethoxyphosphoryl)methoxy)tetrahydrofuran-3,4-diyl diacetate(16E)
将羟甲基膦酸二乙酯(100mg，0.59mmol)和糖精(11mg，0.059mmol)加入到双(三甲基硅)胺(2mL)中，氮气保护，100℃搅拌8小时，冷却后浓缩除去多余的溶剂，再用甲苯带两次，氮气保护下，加入超干乙腈(2mL)，(3S,4S,5R)-5-((6-氯-4-(环戊基氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)四氢呋喃-2,3,4-三乙酸酯(16D)(40mg，0.08mmol)，再滴加四氯化锡(307mg，1.18mmol)，室温搅拌1小时。加入饱和碳酸钠淬灭反应，乙酸乙酯萃取后浓缩至干，薄层纯化得到30mg 16E(收率＝60％)。
LCMS m/z＝604.2[M+1]
+。
第六步：((((3S,4S,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-((6-氯-4-(环戊基氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)四氢呋喃-2-基)氧基)甲基)膦酸(16F)
((((3S,4S,5R)-3,4-diacetoxy-5-((6-chloro-4-(cyclopentylamino)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)methyl)tetrahydrofuran-2-yl)oxy)methyl)phosphonic acid(16F)
将(2R,3S,4S)-2-((6-氯-4-(环戊基氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)-5-((二乙氧基磷酰基)甲氧基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯(16E)(30mg，0.05mmol)加入到乙腈中(2mL)，再加入三乙胺(750mg，7.5mmol)和三甲基溴硅烷(760mg，5mmol),室温搅拌16小时，过滤，乙腈洗，低温浓缩至干，过反相柱纯化得到20mg(16F)(收率＝74％)。
LCMS m/z＝548.2[M+1]
+。
第七步：((((3S,4R,5R)-5-((6-氯-4-(环戊基氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)氧基)甲基)膦酸(化合物16)
((((3S,4R,5R)-5-((6-chloro-4-(cyclopentylamino)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)methyl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)oxy)methyl)phosphonic acid(化合物16)
将((((3S,4S,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-((6-氯-4-(环戊基氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)四氢呋喃-2-基)氧基)甲基)膦酸(16F)(15mg，0.027mmol)加入到甲醇(2mL)和水(0.5mL)中，再加入碳酸钠(29mg，0.27mmol)室温搅拌1小时，用液相制备柱分离提纯(液相制备条件：C18反相制备柱，流动相为含0.1％三氟乙酸的去离子水(A)，含0.1％三氟乙酸的乙腈(B)，梯度洗脱，B含量＝5％至70％，洗脱时间15min，流速12mL/min，柱温：30℃，保留时间：4.25min得到4mg(化合物16)(收率＝32％)。
1HNMR(400MHz,MeOD and DMSO-d
6)δ7.17(s,1H),6.65(s,1H),5.34-5.33(d,1H),4.60-4.25(m,7H),3.18-3.14(m,1H),2.05-1.90(m,4H),1.70-1.48(m,4H)。
LCMS m/z＝464.1[M+1]
+。
实施例17
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物17)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-1H-benzo[d][1,2,3]triazol-1-yl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonicacid(化合物17)
第一步：4,6-二氯-1H-苯并[d][1,2,3]三唑(17A)
4,6-dichloro-1H-benzo[d][1,2,3]triazole(17A)
将(2-氨基-3,5-二氯苯)胺(5.0g,28.6mmol)加入烧瓶中，加入乙酸(10ml)和水(3ml)。然后冷却到0℃，接着滴加亚硝酸钠溶液(2.9g,42.9mmol，6ml水)。滴完之后在室温继续搅拌2小时。LCMS检测原料反应完全，有产物生成。调碱至pH-10，过滤，滤液用二氯甲烷萃取，洗涤，浓缩，然后和滤饼合并在一起。得到标题化合物17A(4.8g,90.4％)。
LC-MS(ESI):m/z＝188.0、190.0[M+H]
+。
第二步：(2R,3R,4R,5R)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(4,6-二氯-1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-基)四氢呋喃-3,4-双乙酸二酯(17B)
(2R,3R,4R,5R)-2-(acetoxymethyl)-5-(4,6-dichloro-1H-benzo[d][1,2,3]triazol-1-yl)tetrahydrofuran-3,4-diyl diacetate(17B)
将四乙酰核糖(2.71g,2.10mmol)加入烧瓶中，加热到90℃下搅拌10分钟，然后加入17A(0.8g,4.26mmol)和四氯化锡(0.005ml,0.043mmol)，升温至130℃在减压下搅拌20分钟。然后冷却，LCMS检测原料反应完全，有产物生成。加入二氯甲烷，直接过柱(PE:EA＝1:0～4:1)，得到标题化合物17B(3.6g,粗品)。
LC-MS(ESI):m/z＝468.1[M+Na]
+。
第三步：(2R,3R,4S,5R)-2-(4,6-二氯-1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(17C)
(2R,3R,4S,5R)-2-(4,6-dichloro-1H-benzo[d][1,2,3]triazol-1-yl)-5-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-3,4-diol(17C)
将17B(3.6g,8.07mmol)和甲醇(80ml)加入烧瓶中，再加入碳酸钾(3.35g,24.21mmol)，在室温下反应1小时。LCMS检测原料反应完全，有产物生成。二氯甲烷萃取，洗涤，干燥浓缩直接得到标题化合物17C(630mg,24.4％)。
LC-MS(ESI):m/z＝320.1[M+H]
+。
第四步：(2R,3R,4S,5R)-2-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(17D)
(2R,3R,4S,5R)-2-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-1H-benzo[d][1,2,3]triazol-1-yl)-5-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-3,4-diol(17D)
将17C(100mg,0.31mmol)和四氢呋喃(8ml)加入烧瓶中，再加入(S)-1-(2-氟苯基)乙胺(86mg,0.62mmol)、甲磺酸(2-二环己基膦-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯)(2'-氨基-1,1'-联苯基-2-基)钯(II)(28mg,0.031mmol)、2-(二环己基膦)-3,6-二甲氧基-2'-4'-6'-三-I-丙基-11'-联苯(17mg,0.031mmol)和双三甲基硅基胺基锂(1.0M/THF,0.29ml,1.55mmol)。然后在氮气保护、70℃下反应4小时。LCMS检测原料反应完全，有产物生成。冷却、加入饱和氯化铵，乙酸乙酯萃取，洗涤，干燥浓缩过柱(PE:EA＝1：0～0：1)得到标题化合物17D(96mg,73.2％)。
LC-MS(ESI):m/z＝423.2[M+H]
+。
第五步：(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物17)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-1H-benzo[d][1,2,3]triazol-1-yl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物17)
将17D(92mg,0.22mmol)和磷酸三甲酯(3ml)加入烧瓶中，在冰浴下加入亚甲基双(二氯化膦)(160mg,0.66mmol)。让温度自然升至室温下并搅拌反应3小时。LCMS检测原料反应完全，有产物生成。加入1ml水搅拌10分钟，将反应液送去HPLC制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min，保留时间：7.36min。制备液浓缩冻干得到标题化合物17(10mg,7.8％)。
1H NMR(400MHz,CD
3OD-d
4)δ7.44(t,1H),7.28(d,1H),7.17–7.10(m,2H),7.06(s,1H),6.31(s,1H),6.29–6.25(m,1H),5.11(d,1H),5.00(t,1H),4.37(s,2H),4.25–4.16(m,1H),4.05(s,2H),2.25–2.06(m,2H),1.64(d,3H)。
LC-MS(ESI):m/z＝581.2[M+H]
+。
实施例18：
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-(甲氧基氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物18)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-(methoxyamino)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物18)
第一步:(2R,3R,4R,5R)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(4,6-二氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸二酯(18B)
(2R,3R,4R,5R)-2-(acetoxymethyl)-5-(4,6-dichloro-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)tetrahydrofuran-3,4-diyl diacetate(18B)
1,2,3,5-四乙酰-β-D-呋喃核糖(5.56g，17.46mmol)加热到90℃融化后，加入18A(3.0g，15.87mmol)，和四氯化锡(0.21g，0.79mmol)，减压下加热到130℃，反应15分钟，反应完毕后将反应液缓慢倾倒入冰水中淬灭，二氯甲烷(100ml×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝5:1)得到标题化合物18B(4.5g，63％)。
LC-MS(ESI):m/z＝447.1[M+H]
+。
第二步：(2R,3R,4R,5R)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(6-氯-4-(甲氧基氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸二酯(18C)
(2R,3R,4R,5R)-2-(acetoxymethyl)-5-(6-chloro-4-(methoxyamino)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)tetrahydrofuran-3,4-diyldiacetate(18C)
化合物18B(1.0g，2.24mmol)溶于二氯甲烷(15ml)中，然后加入甲氧基胺盐酸盐(0.37g，4.48mmol)，三乙胺(1.16g，8.96mmol)加完室温反应3小时，反应完毕后反应液直接浓缩，浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝2:1)得到标题化合物18C(0.70g，68.1％)。
LC-MS(ESI):m/z＝458.1[M+H]
+。
第三步：(2R,3R,4S,5R)-2-(6-氯-4-(甲氧基氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(18D)
(2R,3R,4S,5R)-2-(6-chloro-4-(methoxyamino)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-5-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-3,4-diol(18D)
化合物18C(0.70g，1.53mmol)溶于甲醇(2ml)中，加入氨甲醇溶液(10ml，7.0mol/L)，加完室温下反应15小时，反应完毕直接浓缩反应液得化合物18D(0.42g，82.7％)，产物未纯化直接下一步反应。
LC-MS(ESI):m/z＝330.1[M-H]
-。
第四步：((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-氯-4-(甲氧基氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环-4-基)甲醇(18E)
((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-chloro-4-(methoxyamino)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-yl)methanol(18E)
化合物18D(0.42g，1.27mmol)溶于丙酮(5ml)中，加入催化量的对甲苯磺酸，在加入2,2-二甲氧基丙烷(0.53g，5.08mmol)，加完升室温下反应2小时，反应完毕浓缩掉丙酮，加入水(20ml)，二氯甲烷(50ml×2)萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1:1)得到标题化合物18E(0.38g，80.5％)。
LC-MS(ESI):m/z＝372.1[M+H]
+。
第五步：(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-(甲氧基氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物18)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-(methoxyamino)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物18)
化合物18E(0.10g，0.27mmol)溶于磷酸三甲酯(3ml)中，冰浴下降温0℃，亚甲基双(二氯化膦)(0.20g，0.81mmol)溶于磷酸三甲酯(0.5ml)中缓慢滴加到反应液中，加完自然回温反应15小时，LCMS监控反应，反应完毕后加入水(1ml)，在加入4N盐酸(1ml)，加完搅拌5小时，反应完毕后直接将反应体系送制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间4.8min得化合物18(25mg，19％)。
LC-MS(ESI):m/z＝488.0[M-H]
-。
1H NMR(400MHz,DMSO-d
6)δ8.20(s,1H),6.07(d,1H),4.56-4.54(m,1H),4.31-4.29(m,1H),4.13-4.05(m,2H),3.94-3.90(m,1H),3.82(s,3H),2.21-2.11(m,2H)。
实施例19:
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((2-氟苯基)磺酰氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物19)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((2-fluorophenyl)sulfonamido)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin- 1-yl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物19)
第一步：N-(6-氯-1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)-2-氟代苯磺酰胺(19B)
N-(6-chloro-1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-4-yl)-2-fluorobenzenesulfonamide(19B)
化合物19A(0.70g，4.0mmol)和中间体6C(0.90g，2.0mmol)，碳酸铯(3.91g，12mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10ml)中，100℃反应16小时，反应完毕反应液加入水(50ml)淬灭反应，水相用二氯甲烷(150ml×2)萃取两次，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，过滤浓缩后残留物柱层析分离纯化(二氯甲烷：甲醇(v/v)＝10:1)得到化合物19B(0.15g，16％)。
LC-MS(ESI):m/z＝459.10[M+H]
+。
第二步：(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((2-氟苯基)磺酰氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物19)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((2-fluorophenyl)sulfonamido)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物19)
化合物19B(0.05g，0.11mmol)溶于磷酸三甲酯(2ml)中，冰浴下降温0℃，亚甲基双(二氯化膦)(0.11g，0.44mmol)溶于磷酸三甲酯(0.5ml)中缓慢滴加到反应液中，加完0℃反应3小时，LCMS监控反应，反应完毕后加入水(1ml)，加完搅拌1小时，反应完毕后直接将反应体系送制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间8.0min得化合物19(25mg，37％)。
LC-MS(ESI):m/z＝615.0[M-H]
-。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.54(s,1H),8.06(dd,1H),7.79(dt,2H),7.45(dt,2H),6.92(s,1H),6.14(d,1H),4.56(t,1H),4.32–4.26(m,1H),4.12–4.03(m,3H),3.88(dd,3H),2.18(t,2H)。
实施例20:
(((((2S,4R,5R)-5-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-4-羟基-3-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物20)
(((((2S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-4-hydroxy-3-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物20)
第一步：(((((2S,4R,5R)-5-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-4-羟基-3-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物20)
(((((2S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-4-hydroxy-3-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物20)
化合物9(0.050g，0.087mmol)，溶于四氢呋喃(5ml)和磷酸三甲酯(2mL)中，室温下滴加硼烷四氢呋喃络合物的四氢呋喃溶液(1mL，1mmol/mL)，加完室温反应3小时，然后加入过氧化氢(1mL)和3N氢氧化钠(1mL)加完后室温反应3小时，反应液浓缩后送制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间8.0min得化合物20(15mg，29％)。
LC-MS(ESI):m/z＝593.0[M-H]
-。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.38(s,1H),8.21(d,1H),7.40(t,1H),7.32(dd,1H),7.19(dt,2H),6.00(dd,2H),5.07(s,1H),4.73–4.63(m,1H),4.49(t,1H),4.38(d,1H),4.31–4.13(m,2H),4.05–3.94(m,2H),3.87(s,1H),3.75(d,1H),3.68(s,2H),2.39–1.86(m,3H),1.58(d,3H)。
实施例21
(((((2R,3S,4R,5R)-4-氨基-5-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物21)
(((((2R,3S,4R,5R)-4-amino-5-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-3-hydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosp honic acid(化合物21)
将化合物13(100mg,0.17mmol)和甲醇(20ml)，Pd/C(90mg))加入烧瓶中，在室温下氢气还原反应20分钟。LCMS检测原料反应完全，有产物生成。将反应液过滤，浓缩，然后送去HPLC制备；制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min，保留时间：6.75min。制备液浓缩冻干得到标题化合物21，白色固体(40mg,40.6％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d
6)δ8.44(s,1H),8.28(d,1H),7.40(t,1H),7.38–7.27(m,1H),7.24–7.16(m,2H),6.37(d,1H),6.06(s,1H),5.07(s,1H),4.67(t,1H),4.41(t,1H),4.14(s,2H),3.87–3.83(m,3H),1.99(t,2H),1.59(d,3H)。
LC-MS(ESI):m/z＝580.0[M+H]
+。
实施例22:
((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-B]吡啶-1-基)-2-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)甲基)膦酸(化合物22)
((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-2-ethynyl-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)methyl)phosphonic acid(化合物22)
第一步:二乙基((((3a'R,4'R,6'R,6α'S)-4'-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-6'-乙炔基四氢螺[环戊烷-1,2'-呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环]-6'-基)甲氧基)甲基)膦酸酯(22A)
diethyl((((3a'R,4'R,6'R,6a'S)-4'-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-6'-ethynyltetrahydrospiro[cyclopentane-1,2'-furo[3,4-d][1,3]dioxol]-6'-yl)methoxy)methyl)phosphonate(22A)
化合物6O(200mg，0.39mmol)和(二乙氧基磷酰基)2-硝基苯磺酸甲酯(410mg，1.17mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(8ml)中，氮气置换三次，加入叔丁醇镁(350mg，1.95mmol)，加完升温至80℃反应48小时，反应完毕用冷却至室温后用饱和氯化铵溶液淬灭反应，然后用乙酸乙酯(50ml×2)萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后残留物柱层析分离纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1:1～1:10)得到化合物22A(55mg，21.3％)。
LC-MS(ESI):m/z＝663.1[M+H]
+。
第二步：((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-B]吡啶-1-基)-2-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)甲基)膦酸(化合物22)
((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-2-ethynyl-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)methyl)phosphonic acid(化合物22)
化合物22A(55mg，0.083mmol)溶于乙腈(5ml)中，加入三乙胺(250mg，2.49mmol)，然后缓慢滴加三甲基溴硅烷(250mg，1.66mmol)，加完反应2小时。反应完毕后过滤，滤饼用少量乙腈洗涤，滤液浓缩后加入二氯甲烷(6ml)，接着加入三氟乙酸(0.2ml)和盐酸甲醇溶液(1ml)，加完后室温搅拌1小时，LCMS监控反应反应完毕将反应液浓缩，然后送去HPLC制备。制备HPLC分离方法:1.仪器waters 2767制备液相色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min，保留时间：7.47min。制备液冻干得到化合物22(12mg，22.4％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d
6)δ8.38(s,1H),8.21(d,1H),7.41–7.38(m,1H),7.35–7.29(m,1H),7.24–7.15(m,2H),6.13(d,1H),6.02(s,1H),5.33(d,1H),5.07(s,1H),4.76(q,1H),4.26(d,1H),3.73(d,1H),3.63–3.59(m,3H),3.50(s,1H),1.58(d,3H)。
LC-MS(ESI):m/z＝541.1[M+H]
+。
实施例23
(氨基氧基)((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)甲基)次膦酸(化合物23)
(aminooxy)((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-1H-pyrazo lo[3,4-b]pyridin-1-yl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)methyl)phosphinic acid(化合物23)
第一步：((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶1-基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环-4-基)甲醇(23A)
((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-yl)methanol(23A)
将7A(2.0g，4.73mmol)溶于丙酮(20ml)中，加入2,2-二甲氧基丙烷(2.46g，23.65mmol)和对甲苯磺酸(0.08g，0.47mmol)，加完室温反应2小时，反应完毕；反应液加入饱和碳酸氢钠溶液(20ml)，用二氯甲烷萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩过柱(PE:EA＝1：0～1：1)得到标题化合物23A(2.1g,95.9％)。
LC-MS(ESI):m/z＝463.2[M+H]
+。
第二步：((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环-4-基)甲氧基)甲基)膦酸二乙酯(23B)
diethyl((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-yl)methoxy)methyl)phosphonate(23B)
将23A(2.0g，4.32mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(40ml)中，加入氢化钠(390mg，12.96mmol)并在室温下反应10分钟；接着加入对甲苯磺酰氧甲基膦酸二乙酯(4.18g，12.96mmol)加完升温至50℃反应16小时，反应完毕用冷却至室温后用乙酸乙酯(100ml×3)萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后残留物柱层析分离纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝5:1～1:10)得到化合物23B(2.0g，75.5％)。
LC-MS(ESI):m/z＝613.2[M+H]
+。
第三步：((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-B]吡啶-1-基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环-4-基)甲氧基)甲基)膦酸(23C)
((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-yl)methoxy)methyl)phosphonic acid(23C)
将23B(0.5g，0.82mmol)溶于乙腈(10ml)中，加入三乙胺(0.83g，8.2mmol)，然后缓慢滴加三甲基溴硅烷(1.62ml，12.30mmol)，加完反应2小时。反应完毕后浓缩得到目标化合物23C(2.1g粗品)。
LC-MS(ESI):m/z＝557.2[M+H]
+。
第四步：((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环-4-基)甲氧基)甲基)膦酰二氯(23D)
((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-yl)methoxy)methyl)phosphonicdichloride(23D)
将23C(2.0g,粗品)和2滴催化量的N,N-二甲基甲酰胺加入烧瓶中。在冰浴下滴加草酰氯(0.76ml,8.97mmol)，让温度自然升至室温下并搅拌反应1小时。将反应液浓缩得到目标化合物23D(2.5g粗品)。
第五步：(((叔丁氧基羰基)氨基)氧基)((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环-4-基)甲氧基)甲基)次膦酸(23E)
(((tert-butoxycarbonyl)amino)oxy)((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-yl)methoxy)methyl)phosphinic acid(23E)
将23D(2.5g,粗品)和二氯甲烷(10ml)，N-羟基氨基甲酸叔丁酯(220mg,1.64mmol)加入烧瓶中，接着加入三乙胺(250mg,2.46mmol)。在室温下搅拌2小时。LCMS检测原料反应完全，有产物生成。将反应液缓慢倒入水中，二氯甲烷萃取，洗涤，干燥，浓缩得到灰色目标产物23E(300mg,粗品)。
LC-MS(ESI):m/z＝672.2[M+H]
+。
第六步：(氨基氧基)((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)甲基)次膦酸(化合物23)
(aminooxy)((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)methyl)phosphinic acid(化合物23)
将23E(300mg,粗品)和二氯甲烷(10ml)加入烧瓶中，在室温下下加入三氟乙酸(1ml,13.42mmol)和盐酸甲醇溶液(1ml)。在室温下搅拌反应2小时。LCMS检测原料反应完全。将反应液浓缩干再送去HPLC制备。制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间7.6min。制备液浓缩冻干得到目标化合物(25mg,10.45％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.37(s,1H),8.26(d,1H),7.40(t,1H),7.32–7.28(m,1H),7.24–7.14(m,2H),6.03(d,1H),6.00(s,1H),5.06(s,1H),4.49(t,1H),4.24(d,1H),4.00–3.95(m,1H),3.65–3.61(m,1H),3.50–3.46(m,1H),3.37(s,2H),3.34(s,2H),1.58(d,3H)。
实施例24：
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-(甲氧基氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物24)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-(methoxyamino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物24)
第一步：(2R,3R,4R,5R)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(6-氯-4-(甲氧氨基)-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-1-基)四氢呋喃-3,4-二基二乙酸酯(24A)
(2R,3R,4R,5R)-2-(acetoxymethyl)-5-(6-chloro-4-(methoxyamino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)tetrahydrofuran-3,4-diyl diacetate(24A)
化合物6C(0.5g，1.12mmol)溶于N-甲基吡咯烷酮(5ml)中，然后加入甲氧基胺盐酸盐(0.18g，2.24mmol)，N,N-二异丙基乙胺(0.58g，4.48mmol)加完升温至120℃反应3小时，反应完毕后反应液冷却至室温加入水(20ml)，乙酸乙酯(50ml×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝4:1)得到标题化合物24A(0.30g，58.9％)。
LC-MS(ESI):m/z＝457.1[M+H]
+。
第二步：(2R,3R,4S,5R)-2-(6-氯-4-(甲氧氨基)-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-1-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(24B)
(2R,3R,4S,5R)-2-(6-chloro-4-(methoxyamino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-5-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-3,4-diol(24B)
化合物24A(0.30g，0.65mmol)溶于甲醇(2ml)中，加入氨甲醇溶液(3ml，7.0mol/L)，加完室温下反应15小时，反应完毕直接浓缩得化合物24B(0.17g，80.1％)，产物未纯化直接下一步反应。
LC-MS(ESI):m/z＝329.1[M-H]
-。
第三步：((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-氯-4-(甲氧基氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧六环-4-基)甲醇(24C)
((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-chloro-4-(methoxyamino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-yl)methanol(24C)
化合物24B(0.17g，0.52mmol)溶于丙酮(5ml)中，加入催化量的对甲苯磺酸，在加入2,2-二甲氧基丙烷(0.26g，2.54mmol)，加完升室温下反应2小时，反应完毕浓缩掉丙酮，加入水(100ml)，二氯甲烷(25ml×2)萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1:1)得到标题化合物24C(0.1g，52.6％)。
LC-MS(ESI):m/z＝371.1[M+H]
+。
第四步：(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-(甲氧基氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物24)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-(methoxyamino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物24)
化合物24C(0.10g，0.27mmol)溶于磷酸三甲酯(3ml)中，冰浴下降温0℃，亚甲基双(二氯化膦)(0.20g，0.81mmol)溶于磷酸三甲酯(0.5ml)中缓慢滴加到反应液中，加完自然回温反应15小时，LCMS监控反应，反应完毕后加入水(1ml)，在加入4N盐酸(1ml)，加完搅拌5小时，反应完毕后直接将反应体系送制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间5.2min得化合物24(21mg，16.1％)。
LC-MS(ESI):m/z＝487.0[M-H]
-。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.04(s,1H),8.10(s,1H),6.41(s,1H),6.14(d,1H),4.58-4.55(m,1H),4.31-4.28(m,1H),4.12-4.04(m,2H),3.93-3.89(m,1H),3.77(s,3H),2.23-2.13(m,2H)。
实施例25：
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((环戊氧基)氨基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)膦酰基)甲基)磷酸(化合物25)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((cyclopentyloxy)amino)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物25)
第一步：2-(环戊氧基)异吲哚啉-1,3-二酮(25A)
2-(cyclopentyloxy)isoindoline-1,3-dione(25A)
将已知化合物2-羟基异吲哚啉-1,3-二酮(3.4g，20.8mmol)和三苯基膦(6.55g，25.0mmol)加入到超干四氢呋喃(34mL)中，氮气保护下，降温至0℃，滴加偶氮二甲酸二异丙酯(5.05g，25.0mmol)，滴毕，搅拌30min，再滴加环戊醇(2.0g，20.8mmol)室温搅拌16小时，加水(50mL)和EA(50mL)萃取，EA相浓缩至干，柱层析纯化，得到1.4g 25A(收率＝29％)。
LCMS m/z＝242.1[M+1]
+。
第二步：邻环戊基羟胺(25B)
O-cyclopentylhydroxylamine(25B)
将2-(环戊氧基)异吲哚啉-1,3-二酮(25A)(1.4g，6.0mmol)加入到二氯甲烷中(14mL)，再加入水合肼(0.73g，12mmol)，室温搅拌16h，大量白色固体析出，过滤，二氯甲烷洗滤饼，母液加水搅拌后分液，向二氯甲烷相加入10ml氯化氢/1,4-二氧六环溶液，搅拌5分钟，浓缩至干，得到0.8g 25B(收率＝96％)。
LCMS m/z＝102.2[M+1]
+。
第三步：(2R,3R,4R,5R)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(6-氯-4-((环戊氧基)氨基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯(25C)
(2R,3R,4R,5R)-2-(acetoxymethyl)-5-(6-chloro-4-((cyclopentyloxy)amino)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)tetrahydrofuran-3,4-diyl diacetate(25C)
将18B(0.5g，1.11mmol)和邻环戊基羟胺盐酸盐(0.14g，1.33mmol)加入到二氯甲烷中，再加入三乙胺(0.5g，4.44mmol)，室温搅拌16h，加水(10mL)和二氯甲烷(10mL)萃取，二氯甲烷相浓缩至干，柱层析纯化(PE:EA＝2:1)得到0.3g 25C(收率＝70％)。
LCMS m/z＝512.2[M+1]
+。
第四步：(2R,3R,4S,5R)-2-)6-氯-4-((环戊氧基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(25D)
(2R,3R,4S,5R)-2-(6-chloro-4-((cyclopentyloxy)amino)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-5-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-3,4-diol(25D)
将化合物25C(0.3g,0.58mmol)加入到氨气/甲醇溶液中(3mL)，室温搅拌过夜，直接浓缩至干，得到220mg 25D(收率＝100％)。
LCMS m/z＝386.2[M+1]
+。
第五步：((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-氯-4-((环戊氧基)氨基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环-4-基)甲醇(25E)
((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-chloro-4-((cyclopentyloxy)amino)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-yl)methanol(25E)
将化合物25D(220mg，0.57mmol)和2,2-二甲氧基丙烷(307mg，2.85mmol)加入到丙酮(4.4mL)中，再加入催化量的对甲苯磺酸，室温搅拌3小时。加水(20mL)和乙酸乙酯(20mL)萃取，乙酸乙酯萃取后浓缩至干，柱层析纯化(PE:EA＝2:1)得到200mg 25E(收率＝82％)。
LCMS m/z＝426.2[M+1]
+。
第六步：(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((环戊氧基)氨基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)膦酰基)甲基)磷酸(化合物25)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((cyclopentyloxy)amino)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物25)
将化合物25E(200mg，0.47mmol)加入到磷酸三甲酯中(2mL)，降温至0℃，再加入亚甲基二(二氯膦)(106mg，1.41mmol)，室温搅拌2小时，向反应体系中加入1mL 6N盐酸溶液，搅拌1h，用液相制备柱分离提纯(液相制备条件：C18反相制备柱，流动相为含0.1％三氟乙酸的去离子水(A)，含0.1％三氟乙酸的乙腈(B)，梯度洗脱，B含量＝5％～70％，洗脱时间15min，流速12mL/min，柱温：30℃，保留时间：4.56min，得到100mg(化合物25)(收 率＝39％)。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.08(s,1H),7.00-5.50(m,7H),4.56-4.50(m,2H),4.30-4.28(t,1H),4.14-4.06(m,2H),3.95-3.90(m,1H),2.24-2.14(t,2H),1.95-1.88(m,2H),1.81-1.70(m,4H),1.58-1.54(m,2H)。
LCMS m/z＝544.1[M+1]
+。
实施例26：
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-(异丙氧基氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-3,4-二羟四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物26)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-(isopropoxyamino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物26)
第一步：2-异丙基氧代异吲哚啉-1,3-二酮(26A)
2-isopropoxyisoindoline-1,3-dione(26A)
将2-羟基异吲哚啉-1,3-二酮(1g，6.13mmol)、异丙醇(0.47ml，6.13mmol)和三苯基磷(1.93g，7.36mmol)溶于无水四氢呋喃(40ml)中，冰水浴中搅拌，滴加偶氮二甲酸二异丙酯(1.487g，7.36mmol)，滴加完成后移除冰水浴，室温搅拌过夜，反应结束后浓缩，所得残留物硅胶柱色谱纯化(洗脱剂比例：EA：PE＝0％～80％)，得产物26A(1.12g，89.0％)，无色油状物。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.87(s,4H),4.48-4.43(m,1H),1.30(d,6H)。
第二步：氧代异丙基羟胺盐酸盐(26B)
O-isopropylhydroxylamine hydrochloride(26B)
将化合物26A(1.12g，5.46mmol)溶于二氯甲烷(10ml)中，加入80％水合肼溶液(0.66ml，10.93mmol)，室温搅拌过夜，反应结束后过滤，滤液用水(10ml)和饱和食盐水(10ml)洗涤，滤液中加入4M盐酸二氧六环溶液(1.4ml)，浓缩，得化合物26B(320mg，52.8％)，淡黄色固体。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.00(s,3H),4.36(s,1H),1.23(s,6H)。
第三步：(2R,3R,4R,5R)-2-(乙酰氧甲基)-5-(6-氯-4-(异丙氧基胺)-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-1-基)四氢呋喃-3,4-二基二乙酸酯(26C)
(2R,3R,4R,5R)-2-(acetoxymethyl)-5-(6-chloro-4-(isopropoxyamino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)tetrahydrofuran-3,4-diyl diacetate(26C)
将化合物6C(500mg，1.12mmol)、化合物26B(187mg，1.68mmol)和N,N-二异丙基乙胺(434mg，3.36mmol)溶于N-甲基吡咯烷酮(8ml)中，130℃回流反应3h，反应结束后，加入水(10ml)和乙酸乙酯(20ml)，分离有机相，水相用乙酸乙酯(10ml×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，所得残留物硅胶柱色谱纯化(洗脱剂比例：乙酸乙酯:石油醚＝0％～50％)，得化合物26C(253mg，46.6％)，白色固体。
LCMS m/z＝485.1[M+1]
+。
第四步：(2R,3R,4S,5R)-2-(6-氯-4-(异丙氧基胺)-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-1-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(26D)
(2R,3R,4S,5R)-2-(6-chloro-4-(isopropoxyamino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-5-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-3,4-diol(26D)
将化合物26C(253mg，1.523mmol)和碳酸钾(220mg，1.57mmol)溶于甲醇(5ml)中，室温搅拌1h，反应结束后，用1M盐酸调节pH至6～7，用乙酸乙酯(10ml×4)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，得化合物26D(184mg，98.6％)，淡黄色固体。
LCMS m/z＝359.2[M+1]
+。
第五步：((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-氯-4-(异丙氧基胺)-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-1-基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环-4-基)甲醇(26E)
((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-chloro-4-(isopropoxyamino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-yl)methanol(26E)
将化合物26D(184mg，0.514mmol)、2,2-二甲氧基丙烷(267mg，2.57mmol)和对甲苯磺酸(10mg，0.0514mmol)溶于丙酮(5ml)中，室温搅拌过夜，反应结束后，加入饱和碳酸氢钠溶液调节pH至6～7，浓缩，所得残留物硅胶柱色谱纯化(洗脱剂比例：乙酸乙酯:石油醚＝0％～50％)，得化合物26E(126mg，61.9％)。
LCMS m/z＝399.2[M+1]
+。
第六步：(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-(异丙氧基胺)-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-1-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)膦酰基)甲基)膦酸(化合物26)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-(isopropoxyamino)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物26)
将化合物26E(126mg，0.317mmol)溶于磷酸三甲酯(1ml)中，0℃冰水浴中搅拌，将亚甲基双氯化磷(237mg，0.950mmol)溶于磷酸三甲酯(2ml)中滴加入反应瓶中，滴加完成后升至室温搅拌过夜，加入6M盐酸(3ml)，室温搅拌6h，反应结束后浓缩，所得残留物用液相制备柱分离提纯，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间10.0min得化合物26(20mg，12.9％)，淡黄色固体。
LCMS m/z＝517.0[M+1]
+。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.84(s,1H),8.12(s,1H),6.41(s,1H),6.13(d,1H),4.57(t,1H),4.29(t,1H),4.08(dt,3H),3.88(d,2H),2.16(t,2H),1.27(d,6H)。
实施例27：
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-(异丙氧基氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物27)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-(isopropoxyamino)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物27)
第一步：(2R,3R,4R,5R)-2-(乙酰氧甲基)-5-(6-氯-4-(异丙氧基胺)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)四氢呋喃-3,4-二基乙酸酯(27A)
(2R,3R,4R,5R)-2-(acetoxymethyl)-5-(6-chloro-4-(isopropoxyamino)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)tetrahydrofuran-3,4-diyl diacetate(27A)
将底物18B(600mg，1.34mmol)，化合物26B(223mg，2.01mmol)和二异丙基乙基胺(519mg，4.03mmol)溶于异丙醇(14ml)中，40℃回流5h，反应结束后浓缩，所得残留物硅胶柱色谱纯化(洗脱剂比例：EA:PE＝0％～50％)，得产物27A(527mg，80.9％)。
1H NMR(400MHz,CDCl
3)δ8.14(s,1H),6.52(d,1H),5.94(dd,1H),5.78(t,1H),4.47–4.38(m,2H),4.32–4.14(m,2H),2.16–2.05(m,9H),1.42–1.33(m,6H)。
第二步：(2R,3R,4S,5R)-2-(6-氯-4-(异丙氧基胺)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(27B)
(2R,3R,4S,5R)-2-(6-chloro-4-(isopropoxyamino)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-5-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-3,4-diol(27B)
将化合物27A(523mg，1.08mmol)溶于7M氨甲醇溶液(10ml)中，室温搅拌5.5h，反应结束后，浓缩，得化合物27B(380mg，100％)，黄色油状物。
LCMS m/z＝360.1[M+1]
+。
第三步：((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-氯-4-(异丙基氧胺)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环-4-基)甲醇(27C)
((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-chloro-4-(isopropoxyamino)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-yl)methanol
将化合物27B(380mg，1.08mmol)和2,2-二甲氧基丙烷(550mg，5.40mmol)和对甲苯磺酸(20mg，0.108mmol)溶于丙酮(10ml)中，室温搅拌过夜，反应结束后，加入饱和碳酸氢钠溶液调节pH至6～7，浓缩，所得残留物硅胶柱色谱纯化(洗脱剂比例：EA:PE＝0％～50％)，得产物27C(323mg，76.9％)。
LCMS m/z＝400.1[M+1]
+。
第四步：(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-(异丙基氧基胺)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)膦酰基)甲基)磷酸(化合物27)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-(isopropoxyamino)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物27)
将化合物27C(323mg，0.809mmol)溶于磷酸三甲酯(2ml)中，0℃冰水浴中搅拌，将亚甲基双氯化磷(607mg，2.43mmol)溶于磷酸三甲酯(2ml)中滴加入反应瓶中，滴加完成后升至室温搅拌过夜，加入6M盐酸(3ml)，室温搅拌6h，反应结束后浓缩，所得残留物用液相制备柱分离提纯，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间12.0min得化合物27(162mg， 38.6％)。
LCMS m/z＝518.1[M+1]
+。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.17(s,1H),6.07(d,1H),4.55(t,1H),4.29(t,1H),4.19(dq,1H),4.10(ddd,2H),3.96–3.87(m,1H),2.19(t,2H),1.27(t,6H)。
实施例28:
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊烷[c]吡咯-2(1H)-yl)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)膦酰基)甲基)膦酸(化合物28)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物28)
第一步：((2S,4R)-4-乙酰氧基-5-(4,6-二氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-亚甲基四氢呋喃-2-基)苯甲酸甲酯(28B)
((2S,4R)-4-acetoxy-5-(4,6-dichloro-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-methylenetetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(28B)
化合物4,6-二氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶(3.68g，19.46mmol)溶于六甲基二硅氮烷(50ml)中，添加硫酸铵(30mg，0.2mmol)，回流3小时，减压浓缩除去六甲基二硅氮烷，粗品溶于乙腈(50ml)，添加28A(5g，14.97mmol)，冷却至0℃，滴加三氟甲磺酸三甲基硅酯(333mg，14.97mmol)室温搅拌18h，反应结束加乙酸乙酯(50ml)稀释，用碳酸氢钠水溶液(20ml)和饱和食盐水(20ml)洗涤，有机相无水硫酸钠干燥，浓缩，所得残留物硅胶柱色谱纯化(洗脱剂比例：EA:PE＝0％～50％)，得产物(4.5g，65％)。
第二步：((2S,4R,5R)-4-乙酰氧基-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-亚甲基四氢呋喃-2-基)苯甲酸甲酯(28C)
((2S,4R,5R)-4-acetoxy-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1 H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-methylenetetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(28C)
化合物28B(4.5g，9.72mmol)溶于甲醇(50ml)中，加入三乙胺(2.45g，24.3mmol)和顺式-7-氮杂双环[3.3.0]辛烷(1.29g，11.66mmol)加完室温下反应3小时，反应完毕减压浓缩后得28C和31A混合物。
LC-MS(ESI):m/z＝538.2[M+1]
+。
化合物28C和31A的纯化
取上述混合物用于纯化，分离后得到化合物28C(保留时间：0.794s，1.23g)，化合物31A(保留时间：1.366s，0.23g)。
纯化条件：
仪器:Waters 150MGM；柱:DAICEL CHIRALPAK AD；
流动相:A for CO
2and B for EtOH(0.1％NH
3·H
2O)；梯度:B 40％；流量:120mL/min；背压:100bar；
柱温:35℃；波长:220nm；周期:13min；
第三步：(2R,3R,5S)-2-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡唑-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-5-(羟甲基)-4-亚甲基四氢呋喃-3-醇(28D)
(2R,3R,5S)-2-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-5-(hydroxymethyl)-4-methylenetetrahydrofuran-3-ol(28D)
化合物28C(300mg，0.56mmol)溶于甲醇(3ml)中，加入碳酸钾(309mg，2.24mmol)，加完室温下反应2小时，加入水(3ml)淬灭反应，乙酸乙酯(5ml×3)萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩所得残留物硅胶柱色谱纯化(洗脱剂比例：EA:PE＝0％～70％)，得产物28D(295mg，98％)。
LC-MS(ESI):m/z＝392.1[M+1]
+。
第四步：(((((2S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-4-羟基-3-亚甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)膦酰基)甲基)磷酸(28E)
(((((2S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-4-hydroxy-3-methylenetetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(28E)
化合物28D(295mg，0.57mmol)溶于磷酸三甲酯(3ml)中，冰浴下降温0℃，亚甲基双(二氯化膦)(570mg，2.28mmol)溶于磷酸三甲酯(2ml)中缓慢滴加到反应液中，加完0℃反应3小时，LCMS监控反应，反应完毕后加入水(2ml)，加完搅拌1小时，反应完毕后直接将反应体系送制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从 5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间7.0min得化合物28E(100mg，32％)。
LC-MS(ESI):m/z＝550.1[M-H]
-。
第五步：(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊烷[c]吡咯-2(1H)-yl)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)膦酰基)甲基)膦酸(化合物28)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物28)
化合物28E(100mg，0.18mmol)，N-甲基吗啉氧化物(63mg，0.54mmol)溶于丙酮(3ml)和水(1mL)中，室温下加入锇酸钾(VI)二水合物(6mg，0.018mmol)，加完室温反应16小时，反应完毕加亚硫酸钠淬灭反应，反应液浓缩后送制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间6.5min得化合物28(20mg，20％)。
LC-MS(ESI):m/z＝584.0[M+1]
+。
1H NMR(400MHz,D
2O)δ8.07(d,1H),6.12(d,1H),4.95(s,1H),4.32(s,1H),4.15(s,2H),4.02–3.63(m,4H),3.62–3.46(m,1H),3.39(s,1H),2.87(s,1H),2.76(s,1H),2.30(t,2H),1.93–1.80(m,2H),1.78–1.69(m,1H),1.64(m,1H),1.57–1.36(m,2H)。
实施例29:
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-1-yl)-3,4-二羟基-3-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)膦酰基)甲基)磷酸(化合物29)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物29)
第一步：((2S,4R,5R)-4-乙酰氧基-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡咯[3,4-b]吡啶-1-基)-3-亚甲基四氢呋喃-2-基)苯甲酸酯(29A)
((2S,4R,5R)-4-acetoxy-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-3-methylenetetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(29A)
化合物9F(1.2g，2.6mmol)溶于异丙醇(20ml)中，加入三乙胺(1.05g，10.4mmol)和顺式-7-氮杂双环[3.3.0]辛烷盐酸盐(0.58g，5.2mmol)加完80℃下反应3小时，反应完毕减压浓缩后粗品29A直接用于下一步反应。
LC-MS(ESI):m/z＝537.3[M+H]
+。
第二步：(2R,3R,5S)-2-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-1-基)-5-(羟甲基)-4-亚甲基四氢呋喃-3-醇(29B)
(2R,3R,5S)-2-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-5-(hydroxymethyl)-4-methylenetetrahydrofuran-3-ol(29B)
粗品29A溶于甲醇(20ml)中，加入碳酸钾(1.49g，10.8mmol)，加完室温下反应2小时，加入水(20ml)析出固体，过滤，滤饼用水(2mL)洗涤一次，滤饼用甲苯带水减压旋干得到标题化合物29B(0.65g，两步收率64％)。
LC-MS(ESI):m/z＝391.1[M+H]
+。
第三步：(((((2S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-1-基)-4-羟基-3-亚甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)膦酰基)甲基)磷酸(29C)
(((((2S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-4-hydroxy-3-methylenetetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(29C)
化合物29B(0.35g，0.9mmol)溶于磷酸三甲酯(3ml)中，冰浴下降温0℃，亚甲基双(二氯化膦)(0.67g，2.7mmol)溶于磷酸三甲酯(1.5ml)中缓慢滴加到反应液中，加完0℃反应3小时，LCMS监控反应，反应完毕后加入水(1ml)，加完搅拌1小时，反应完毕后直接将反应体系送制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间7.0min得化合物29C(80mg，16％)。
LC-MS(ESI):m/z＝547.0[M-H]
-。
第四步：(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-1-yl)-3,4-二羟基-3-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)膦酰基)甲基)磷酸(化合物29)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物29)
化合物29C(0.080g，0.15mmol)，N-甲基吗啉氧化物(0.053g，0.45mmol)溶于丙酮(3ml)和水(1mL)中，室温下加入锇酸钾(VI)二水合物(0.006g，0.015mmol)，加完室温反应16小时，反应完毕加亚硫酸钠淬灭反应，反应液浓缩后送制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间6.5min得化合物29(45mg，51％)。
LC-MS(ESI):m/z＝581.0[M-H]
-。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.24(s,1H),6.33(d,1H),6.14(s,1H),4.92(d,1H),4.44–4.20(m,3H),3.83(q,4H),3.48(s,2H),2.90(s,2H),2.58-2.34(m,2H),2.01-1.82(m,3H),1.78–1.56(m,3H)。
实施例30：
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-((苄氧基)氨基)-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物30)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-((benzyloxy)amino)-6-chloro-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物30)
第一步：(2R,3R,4R,5R)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(4-((苄氧基)氨基)-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸二酯(30A)
(2R,3R,4R,5R)-2-(acetoxymethyl)-5-(4-((benzyloxy)amino)-6-chloro-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)tetrahydrofuran-3,4-diyl diacetate(30A)
将化合物18B(600mg，1.34mmol)溶于二氯甲烷(6ml)中，添加邻苄基羟胺(248mg，2.01mmol)和三乙胺(135mg，2.01mmol)室温搅拌2h，反应结束后浓缩，所得残留物硅胶柱色谱纯化(洗脱剂比例：EA:PE＝0％～50％)，得产物30A(548mg，77％)。
LCMS m/z＝534.2[M+1]
+。
第二步：(2R,3R,4S,5R)-2-(4-((苄氧基)氨基)-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(30B)
(2R,3R,4S,5R)-2-(4-((benzyloxy)amino)-6-chloro-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-5-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-3,4-diol(30B)
将化合物30A(548mg，1.03mmol)溶于甲醇(6ml)中，添加碳酸钾(426mg，3.09mmol)室温搅拌2h，反应结束后，浓缩，得化合物30B(400mg，95％)。
LCMS m/z＝408.1[M+1]
+。
第三步：((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((苄氧基)氨基)-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]dioxol-4-yl)甲醇(30C)
((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((benzyloxy)amino)-6-chloro-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-yl)methanol(30C)
将化合物30B(167mg，0.41mmol)和2,2-二甲氧基丙烷(213mg，2.05mmol)和对甲苯磺酸(7.79mg，0.041mmol)溶于丙酮(2ml)中，室温搅拌过夜，反应结束后，加入饱和碳酸氢钠溶液调节pH至6～7，浓缩，所得残留物硅胶柱色谱纯化(洗脱剂比例：EA:PE＝0％～50％)，得产物30C(137mg，75％)。
LCMS m/z＝448.2[M+1]
+。
第四步：(((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-((苄氧基)氨基)-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物30)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-((benzyloxy)amino)-6-chloro-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物30)
将化合物30C(137mg，0.31mmol)溶于磷酸三甲酯(2ml)中，0℃冰水浴中搅拌，将亚甲基双氯化磷(77.5mg，0.93mmol)溶于磷酸三甲酯(2ml)中滴加入反应瓶中，滴加完成后升至室温搅拌过夜，加入6M盐酸(3ml)，室温搅拌6h，反应结束后浓缩，所得残留物用液相制备柱分离提纯，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间12.0min，得产物30(58mg，33％)。
LCMS m/z＝566.20[M+1]
+。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.10(s,1H),7.49(d,2H),7.41(m,3H),6.05(m,1H),5.02(d,2H),4.54(s,1H),4.29(s,1H),4.07(s,2H),3.88(s,1H),2.15(t,2H)。
实施例31：
(((((2R,3S,4R,5S)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)膦酰基)甲基)磷酸(化合物31)
(((((2R,3S,4R,5S)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物31)
第一步：(2S,3R,5S)-2-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-5-(羟甲基)-4-亚甲基四氢呋喃-3-醇(31B)
(2S,3R,5S)-2-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-5-(hydroxymethyl)-4-methylenetetrahydrofuran-3-ol(31B)
化合物31A(300mg，0.56mmol)溶于甲醇(3ml)中，加入碳酸钾(309mg，2.24mmol)，加完室温下反应2小时，加入水(3ml)淬灭反应，乙酸乙酯(5ml×3)萃取，无水硫酸钠干燥， 浓缩所得残留物硅胶柱色谱纯化(洗脱剂比例：EA:PE＝0％～70％)，得产物31B(290mg，98％)。
LC-MS(ESI):m/z＝392.1[M+1]
+。
第二步：(((((2S,4R,5S)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-4-羟基-3-亚甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)膦酰基)甲基)磷酸(31C)
(((((2S,4R,5S)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-4-hydroxy-3-methylenetetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(31C)
化合物31B(290mg，0.57mmol)溶于磷酸三甲酯(3ml)中，冰浴下降温0℃，亚甲基双(二氯化膦)(570mg，2.28mmol)溶于磷酸三甲酯(2ml)中缓慢滴加到反应液中，加完0℃反应3小时，LCMS监控反应，反应完毕后加入水(2ml)，加完搅拌1小时，反应完毕后直接将反应体系送制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间7.0min得化合物31C(80mg，26％)。
LC-MS(ESI):m/z＝550.1[M+H]
-。
第三步：(((((2R,3S,4R,5S)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)膦酰基)甲基)磷酸(化合物31)
(((((2R,3S,4R,5S)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物31)
化合物31C(80mg，0.15mmol)，N-甲基吗啉氧化物(53mg，0.45mmol)溶于丙酮(3ml)和水(1mL)中，室温下加入锇酸钾(VI)二水合物(0.006g，0.015)，加完室温反应16小时，反应完毕加亚硫酸钠淬灭反应，反应液浓缩后送制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间6.5min，得化合物31(20mg，20％)。
LC-MS(ESI):m/z＝584.0[M+1]
+。
1H NMR(400MHz,D
2O):8.12(d,1H),6.18(d,1H),4.98-4.95(m,1H),4.52-4.50(m,1H),4.26-4.15(m,2H),3.94-3.75(m,4H),3.58-3.46(m,2H),2.90-2.77(m,2H),2.41-2.31(m,2H),1.91-1.48(m,6H)。
实施例32:
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-1-yl)-3-(二氟甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)膦酰基)甲基)磷酸(化合物32)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-3-(difluoromethyl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物32)
第一步：(3aR,5R,6R,6aR)-5-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-6-(二氟(苯磺酰基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[2,3-d][1,3]二氧戊环-6-醇(32B)
(3aR,5R,6R,6aR)-5-(((tert-butyldiphenylsilyl)oxy)methyl)-6-(difluoro(phenylsulfonyl)methyl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[2,3-d][1,3]dioxol-6-ol(32B)
将32A(20g，46.95mmol)溶于干燥的四氢呋喃(200ml)中，加入[(二氟甲基)磺酰基]苯(13.52g，70.43mmol)和六甲基磷酰三胺(20ml)，置换氮气三次，将反应体系冷却至-78℃，缓慢滴加双三甲基硅基胺基锂(80ml，80mmol)，在-78℃下反应2h，反应结束用饱和氯化铵溶液(100ml)淬灭，乙酸乙酯(3×100ml)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，过滤浓缩后残留物柱层析快速分离纯化(洗脱剂比例：EA:PE＝0％～30％)得化合物32B(21.56g，75％)。
1H NMR(400MHz,CDCl
3):7.93(d,2H),7.77–7.70(m,1H),7.66–7.62(m,4H),7.61–7.55(m,2H),7.41–7.37(m,3H),7.37–7.31(m,3H),6.06(d,1H),5.23(d,1H),4.36(dd,1H),4.00(s,1H),3.97–3.88(m,1H),3.50(s,1H),1.61(s,3H),1.45(s,3H),1.01(s,9H)。
19F NMR(376MHz,CDCl
3):-101.22,-101.87,-103.37,-104.03。
第二步：(3aR,5R,6R,6aR)-5-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-6-(二氟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[2,3-d][1,3]二氧戊环-6–醇(32C)
(3aR,5R,6R,6aR)-5-(((tert-butyldiphenylsilyl)oxy)methyl)-6-(difluoromethyl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[2,3-d][1,3]dioxol-6-ol(32C)
将32B(21.56g，34.84mmol)溶于干燥的六甲基磷酰三胺(20ml)，置换氮气三次，将反应体系置于冰浴中冷却，加入溶于四氢呋喃中的碘化钐(0.1M)(174.2mmol)，转移至室温反应10min，反应结束用饱和氯化铵水溶液(500ml)淬灭，乙酸乙酯(3×500ml)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，过滤浓缩后残留物柱层析快速分离纯化(洗脱剂比例：EA:PE＝0％～30％)得化合物32C(13.21g，78％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):7.68(m,4H),7.46–7.35(m,6H),6.19–5.90(m,1H),5.92(d,1H),4.65(d,1H),4.09(dd,5.1,1H),3.94(d,2H),3.03(s,1H),1.58(s,3H),1.41(s,3H),1.06(s,9H)。
19F NMR(376MHz,CDCl
3):-127.34,-128.12,-129.08,-129.86。
第三步：(3aR,5R,6R,6aR)-6-(二氟甲基)-5-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[2,3-d][1,3]二氧杂环-6-醇(32D)
(3aR,5R,6R,6aR)-6-(difluoromethyl)-5-(hydroxymethyl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[2,3-d][1,3]dioxol-6-ol(32D)
将化合物32C(13.21g，27.64mmol)溶于四氢呋喃(130ml)中，加入四丁基氟化铵(9.40g，35.93mmol)，室温下反应1小时，反应完毕向反应液加入水(50ml)淬灭反应，水相用乙酸乙酯(100ml×3)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，过滤浓缩得化合物32D(13.21g)粗品，直接用于下一步。
1H NMR(400MHz,CDCl
3):6.14–5.84(m,1H),5.90(d,1H),4.62(d,1H),4.06(dd,1H),4.00(dd,1H),3.93(dd,1H),3.03(s,1H),1.60(s,3H),1.41(s,3H)。
19F NMR(376MHz,CDCl
3):-127.56,-128.34,-128.63,-129.41。
第四步：((3aR,5R,6R,6aR)-6-(二氟甲基)-6-羟基-2,2-二甲基四氢呋喃[2,3-d][1,3]二氧杂环-5-基)苯甲酸甲酯(32E)
((3aR,5R,6R,6aR)-6-(difluoromethyl)-6-hydroxy-2,2-dimethyltetrahydrofuro[2,3-d][1,3]dioxol-5-yl)methyl benzoate(32E)
上步化合物32D粗品(13.21g，27.64mmol)和三乙胺(8.39g，82.92mmol)溶于二氯甲烷(130ml)中，加入苯甲酰氯(4.66g，33.17mmol),加完室温反应2小时，反应完毕反应液加入水(50ml)淬灭反应，水相用二氯甲烷(80ml×3)萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，过滤浓缩后残留物柱层析分离纯化(洗脱剂比例：EA:PE＝0％～20％)得到化合物32E(8g，两步收率84％)。
1H NMR(400MHz,CDCl
3):8.06(m,2H),7.60–7.54(m,1H),7.44(m,2H),6.10–5.81(m,1H),5.95(t,1H),4.71(m,1H),4.65(d,1H),4.57(m,1H),4.36–4.28(m,1H),3.19(s,1H), 1.62(s,3H),1.42(s,3H)。
19F NMR(376MHz,CDCl
3):-127.54,-128.32,-128.88,-129.67。
第五步：((2R,3S,4R,5S)-3-(二氟甲基)-3,4,5-三羟基四氢呋喃-2-基)苯甲酸甲酯(32F)
((2R,3S,4R,5S)-3-(difluoromethyl)-3,4,5-trihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(32F)
将化合物32E(8g，23.23mmol)加入到100mL反应瓶中，加入三氟乙酸(9ml)/水(1ml)，在室温下反应1h，反应结束用饱和碳酸氢钠水溶液调节pH＝7，水相用乙酸乙酯萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，过滤浓缩后残留物柱层析分离纯化(洗脱剂比例：EA:PE＝0％～50％)得到化合物32F(6.72g，95％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):8.08–7.98(m,2H),7.59(t,1H),7.46(t,2H),5.96(t,1H),5.54(d,1H),4.65(t,1H),4.55–4.46(m,2H),4.35(d,1H)。
19F NMR(376MHz,CDCl3):-127.38,-128.16,-128.69,-129.47。
第六步：(3R,4R,5R)-5-((苯甲酰氧基)甲基)-4-(二氟甲基)-4-羟基四氢呋喃-2,3-二乙酸二酯(32G)
(3R,4R,5R)-5-((benzoyloxy)methyl)-4-(difluoromethyl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2,3-diyldiacetate(32G)
将化合物32F(1.0g，3.29mmol)溶于吡啶(10ml)中，冰浴下降温0℃，加入乙酸酐(840mg，8.23mmol)和4-二甲氨基吡啶(40mg，0.33mmol)，转移至室温反应3h，反应结束加乙酸乙酯(50ml)稀释，用0.1N的盐酸(100ml)洗去吡啶，减压浓缩后快速分离纯化(洗脱剂比例：EA:PE＝0％～30％)得化合物32G(1.2g，94％)。
1H NMR(400MHz,CDCl
3):8.10(d,2H),7.60(t,1H),7.48(t,2H),6.24(d,1H),6.10(t,1H),5.69(d,1H),4.78(dd,1H),4.54(t,1H),4.39(m,1H),2.17(s,3H),1.93(s,3H)。
19F NMR(376MHz,CDCl
3):-126.61,-127.40,-129.45,-130.23。
第七步：((2R,3R,4R,5R)-4-乙酰氧基-5-(4,6-二氯-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-3-(二氟甲基)-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲基苯甲酸酯(32H)
((2R,3R,4R,5R)-4-acetoxy-5-(4,6-dichloro-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-3-(difluoromethyl)-3-hydroxytetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(32H)
将化合物32G(0.6g，1.55mmol)加入到25mL反应瓶中，加热到90℃后加入4,6-二氯-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(0.38g，2.02mmol)，加完后滴加四氯化锡两滴，然后升温至130℃减压反应三十分钟，冷却至室温，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝10:1-5:1)得到标题化合物32H(0.6g，75％)。
LC-MS(ESI):m/z＝474.1[M-42+H]
+。
第八步：((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡咯 [3,4-b]吡啶-1-基)-3-(二氟甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基苯甲酸酯(32I)
((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-3-(difluoromethyl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(32I)
化合物32H(600mg，1.17mmol)溶于异丙醇(6ml)中，加入三乙胺(355mg，3.51mmol)和顺式-7-氮杂双环[3.3.0]辛烷盐酸盐(195mg，1.76mmol)，在80℃的油浴锅中反应3h，反应完毕减压浓缩后快速分离纯化(洗脱剂比例：EA:PE＝0％～50％)得化合物32I(300mg，47％)。
LC-MS(ESI):m/z＝549.2[M+H]
+。
第九步：(2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-1-基)-3-(二氟甲基)-2-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(32J)
(2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-3-(difluoromethyl)-2-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-3,4-diol(32J)
化合物32I(300mg，0.55mmol)溶于甲醇(3ml)中，加入碳酸钾(228mg，1.65mmol)，加完室温下反应2h，加入水(3ml)淬灭反应，乙酸乙酯(5ml×3)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，过滤浓缩后残留物柱层析快速分离纯化(洗脱剂比例：EA:PE＝0％～70％)，得产物32J(200mg，82％)。
LC-MS(ESI):m/z＝445.2[M+H]
+。
第十步：(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-1-yl)-3-(二氟甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)膦酰基)甲基)磷酸(化合物32)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-3-(difluoromethyl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物32)
化合物32J(200mg，0.45mmol)溶于磷酸三甲酯(2ml)中，冰浴下降温0℃，亚甲基双(二氯化膦)(338mg，1.35mmol)溶于磷酸三甲酯(2ml)中缓慢滴加到反应液中，加完0℃反应3h，LCMS监控反应，反应完毕后加入水(2ml)，加完搅拌1h，反应完毕后直接将反应体系送制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间7.0min得化合物32(162mg，60％)。
LC-MS(ESI):m/z＝603.2[M+H]
+。
1H NMR(400MHz,D
2O):8.21(s,1H),6.51–6.08(t,1H),6.17(d,1H),5.24(d,1H),4.34 (s,1H),4.10(s,2H),3.71(s,2H),3.37(s,2H),2.81(s,2H),2.24(m,2H),1.67(m,6H)。
19F NMR(376MHz,D
2O):-125.50,-126.30,-129.85,-130.62
实施例33：
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡咯[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-(二氟甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)膦酰基)甲基)磷酸(化合物33)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-(difluoromethyl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物33)
第一步：6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶(33A)
6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidine(33A)
4,6-二氯-1H-吡唑并[3,4-C]嘧啶(2.0g，10.58mmol)溶于二氯甲烷(30ml)中，然后加入顺式-7-氮杂双环[3.3.0]辛烷盐酸盐(1.88g，12.72mmol)，三乙胺(3.22g，31.74mmol)加完室温反应1小时，反应完毕后加水，二氯甲烷(50ml×2)萃取两次，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩后用二氯甲烷石油醚结晶得化合物33A(2.4g，86％)。
LC-MS(ESI):m/z＝264.1[M+H]
+。
第二步：((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡咯[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-(二氟甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基苯甲酸酯(33B)
((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-(difluoromethyl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(33B)
氮气保护下，化合物32F(1.0g，3.29mmol)溶于无水乙腈(20ml)中，降温至0℃，偶氮二甲酰二哌啶(1.24g，4.94mmol)溶于无水乙腈(5ml)中，控温0℃缓慢滴加至反应液中，滴加完毕后搅拌10min，再将三正丁基膦(1.07g，5.26mmol)缓慢滴加至反应液中，加完升至室温反应10min后升温至35℃反应1小时，另取一反应瓶氮气保护下将化合物33A(1.65g，6.25mmol)溶于无水乙腈(15ml)中，加入DBU(0.95g，6.25mmol)加完室温搅拌30min后将此反应液缓慢滴加至另一反应液中，加完升温至35℃反应2小时，反应完毕后冷却至室温加 入饱和氯化铵溶液淬灭反应，乙酸乙酯(50ml×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝2:1)得到标题化合物33B(0.5g，27.6％)。
LC-MS(ESI):m/z＝550.1[M+H]
+。
第三步：(2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡咯[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-(二氟甲基)-2-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(33C)
(2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-(difluoromethyl)-2-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-3,4-diol(33C)
化合物33B(0.5g，0.91mmol)溶于甲醇(10ml)中，碳酸钾(0.25g，1.82mmol)溶于水(4ml)中加入到反应液中，加完室温搅拌1小时，反应完毕后，反应液浓缩，浓缩残留物加入水，二氯甲烷(50ml×2)萃取两次，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1:1)得到标题化合物33C(0.27g，66.5％)。
LC-MS(ESI):m/z＝446.1[M+H]
+。
第四步：(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡咯[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-(二氟甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)膦酰基)甲基)磷酸(化合物33)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-(difluoromethyl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物33)
化合物33C(0.26g，0.58mmol)溶于磷酸三甲酯(3ml)中，冰浴下降温0℃，亚甲基双(二氯化膦)(0.43g，1.74mmol)溶于磷酸三甲酯(2ml)中缓慢滴加到反应液中，加完控温0℃反应2小时，反应完毕后加入水(1ml)后直接将反应体系送制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间6.2min得化合物33(180mg，51.4％)。
LCMS m/z＝602.1[M-H]
-。
1H NMR(400MHz,D
2O):8.13(d,1H),6.34(t,1H),6.13(d,1H),5.24(d,1H),4.37(s,1H),4.16(s,2H),3.93-3.73(m,2H),3.56-3.42(m,2H),2.89-2.78(m,2H),2.38-2.29(m,2H),1.91-1.48(m,6H)。
实施例34：
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-2H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-2-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物34)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-2H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-2-yl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物34)
第一步：(2R,3R,4R,5R)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(4,6-二氯-2H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-2-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸二酯(34B)
(2R,3R,4R,5R)-2-(acetoxymethyl)-5-(4,6-dichloro-2H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-2-yl)tetrahydrofuran-3,4-diyl diacetate(34B)
将化合物4,6-二氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶18A(8.0g,42.55mmol)溶于六甲基二硅氮烷(40mL)中，加入硫酸铵(0.8g)，氮气下120℃反应5小时。浓缩后加入乙腈(80mL)，(2S,3R,4R,5R)-5-(乙酰氧基甲基)四氢呋喃-2,3,4-三乙酸三酯(14.9g,46.81mmol)，再室温下滴加三氟甲磺酸三甲基硅酯(14.2g,63.83mmol)，室温下反应12小时，浓缩后加入饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)，乙酸乙酯萃取(100mL×3)，饱和食盐水洗(200mL×1)，无水硫酸钠干燥浓缩后硅胶柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝100:40)得到产物34B(6.5g，产率26％)。
LCMS m/z＝447.1[M+1]
+。
第二步：(2R,3R,4S,5R)-2-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-2H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-2-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(34C)
(2R,3R,4S,5R)-2-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-2H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-2-yl)-5-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-3,4-diol(34C)
将化合物34B(0.8g,1.8mmol)溶于甲醇中(30mL)中，加入(S)-1-(2-氟苯基)乙胺盐酸盐(315mg,1.8mmol)，三乙胺(545mg,5.4mmol)，室温反应2小时，加入氨甲醇溶液(7N,60mL)，室温反应12小时，浓缩后后得到粗品产物34C(1.6g，产率100％)。
LCMS m/z＝424.1[M+1]
+。
第三步：((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-2H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-2-基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧杂环-4-基)甲醇(34D)
((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-2H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-2-yl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-yl)methanol(34D)
将化合物34C(1.6g,1.8mmol)加入到丙酮中(40mL)中，再加入2,2-二甲氧基丙烷(0.56g,5.4mmol)，对甲苯磺酸(0310mg,1.8mmol)，室温反应12小时，浓缩后硅胶柱层析纯化(甲醇：二氯甲烷(v/v)＝5:100)得到产物34D(400mg，产率48％)。
LCMS m/z＝464.1[M+1]
+。
第四步：(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-(((S)-1-(2-氟苯基)乙基)氨基)-2H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-2-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物34)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-(((S)-1-(2-fluorophenyl)ethyl)amino)-2H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-2-yl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物34)
将化合物34D(400mg,0.86mmol)加入到磷酸三甲酯(3mL)中，再加入亚甲基双(膦酰二氯)(639mg,2.58mmol)，室温下反应1h。再加盐酸(6N,2mL)，室温反应0.5小时，直接用液相制备柱分离提纯(液相制备条件：C18反相制备柱，流动相为含0.1％三氟乙酸的去离子水(A)，乙腈(B)，梯度洗脱，B含量＝5％～50％，洗脱时间15min，流速15mL/min，柱温：30℃)；得到标题化合物34(40mg，产率8％，保留时间约为7.2min)。
MS M/Z(ESI)：m/z＝582.1[M+1]
+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.57(d,1H),8.97(s,1H),7.69–7.46(m,1H),7.32–7.25(m,1H),7.20–7.12(m,2H),5.88(d,1H),5.67–5.56(m,1H),4.33–4.28(m,1H),4.27–4.05(m,4H),2.45–2.27(m,2H),1.54(d,3H)。
实施例35：
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-(5,5-二氟六氢环戊二烯[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物35)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-(5,5-difluorohexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物35)
第一步：1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-异吲哚-2-碳酸叔丁酯(35B)
tert-butyl 1,3,3a,4,7,7a-hexahydro-2H-isoindole-2-carboxylate(35B)
室温下，将化合物35A(20.0g,132.3mmol)溶于四氢呋喃(200mL)中，T<35℃分批加入氢化铝锂(12.6g,330.8mmol)，加完后，升温至60℃反应2小时。将反应液冷却至室温，T<35℃将水(24mL)滴加至反应液中，加入二碳酸二叔丁酯(28.9g,132.3mmol)，室温反应2小时，将反应液过滤，滤液浓缩干，柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯(v:v)＝10:1-1:1)，得化合物35B(16.0g,54％)。
LC-MS(ESI):m/z＝168.2[M+H-tBu]
+。
第二步：2,2'-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3,4-二基)二乙酸(35C)
2,2'-(1-(tert-butoxycarbonyl)pyrrolidine-3,4-diyl)diacetic acid(35C)
室温下，将高锰酸钾(14.2g,89.6mmol)溶于水(300mL)中，将化合物35B(8.0g,35.8mmol)用丙酮(150mL)溶解，于T<30℃滴加至反应液中，室温反应3小时。T<30℃将反应液用3N盐酸调节pH值约4-5，加入硫代硫酸钠饱和溶液直至体系变为无色透明，乙酸乙酯(200mL×2)萃取，有机相浓缩干，得粗品化合物35C(9.0g)，不做纯化直接进行下一步。
LC-MS(ESI):m/z＝286.1[M-H]
-。
第三步：5-氧代六氢环戊二烯[c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯(35D)
tert-butyl 5-oxohexahydrocyclopenta[c]pyrrole-2(1H)-carboxylate(35D)
室温下，将化合物35C(9.0g,31.3mmol)溶于乙酸酐(100mL)中，升温至130℃反应1小时，加入无水乙酸钠(3.1g,37.6mmol)，130℃反应2小时。将反应液浓缩干，加入乙酸乙酯(100mL)溶解，用水(50mL×1)洗，有机相浓缩干，柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯(v:v)＝10:1-3:1)，得化合物35D(2.5g,35％)。
LC-MS(ESI):m/z＝170.1[M+H-tBu]
+。
第四步：5,5-二氟六氢环戊二烯[c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯(35E)
tert-butyl 5,5-difluorohexahydrocyclopenta[c]pyrrole-2(1H)-carboxylate(35E)
室温下，将化合物35D(2.5g,11.1mmol)溶于二氯甲烷(100mL)中，加入二乙氨基三氟化硫(8.1g,50.0mmol)，室温反应16小时。将反应液倒入饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)中，二氯甲烷(100mL×1)萃取，有机相浓缩干，柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯(v:v)＝10:1-5:1)，得化合物35E(0.75g,27％)。
LC-MS(ESI):m/z＝248.2[M+H]
+。
第五步：5,5-二氟八氢环戊二烯[c]吡咯(35F)
5,5-difluorooctahydrocyclopenta[c]pyrrole(35F)
化合物35E(0.75g，3.03mmol)溶于二氯甲烷(10ml)和三氟乙酸(2ml)的混合溶剂中，室温下反应3小时，反应完毕后直接浓缩得化合物35F(0.79g，100％)。
LC-MS(ESI):m/z＝148.2[M+H]
+。
第六步：((2S,4R,5R)-乙酰氧基-5-(6-氯-4-(5,5-二氟六氢环戊二烯[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-亚甲基四氢呋喃-2-基)苯甲酸甲酯(35G)
((2S,4R,5R)-4-acetoxy-5-(6-chloro-4-(5,5-difluorohexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-methylenetetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(35G)
化合物28B(0.7g，1.51mmol)溶于二氯甲烷(10ml)中，然后加入化合物35F(0.47，1.81mmol)，降温至0℃，然后加入三乙胺(0.46g，4.53mmol)加完室温反应1小时，反应完毕后反应液直接浓缩，浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1:2)得到化合物35G(0.5g，57.6％)。
LC-MS(ESI):m/z＝574.2[M+H]
+。
第七步：((2S,4R,5R)-乙酰氧基-5-(6-氯-4-(5,5-二氟六氢环戊二烯[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-5-(羟甲基)-4-亚甲基四氢呋喃-3-醇(35H)
(2R,3R,5S)-2-(6-chloro-4-(5,5-difluorohexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-5-(hydroxymethyl)-4-methylenetetrahydrofuran-3-ol(35H)
化合物35G(0.5g，0.87mmol)溶于甲醇(10ml)中，碳酸钾(0.36g，2.61mmol)溶于水(4ml)中加入到反应液中，加完室温搅拌3小时，反应完毕后，反应液浓缩，浓缩残留物加入水， 二氯甲烷(50ml×2)萃取两次，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1:3)得到标题化合物35H(0.34g，91.3％)。
LC-MS(ESI):m/z＝428.1[M+H]
+。
第八步：(((((2S,4R,5R)-5-(6-氯-4-(5,5-二氟六氢环戊二烯[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-4-羟基-3-亚甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(35I)
(((((2S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-(5,5-difluorohexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-4-hydroxy-3-methylenetetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(35I)
化合物35H(0.34g，0.79mmol)溶于磷酸三甲酯(3ml)中，冰浴下降温0℃，亚甲基双((二氯化膦))(0.59g，2.37mmol)溶于磷酸三甲酯(2ml)中缓慢滴加到反应液中，加完控温0℃反应2小时，反应完毕后加入水(2ml)后直接将反应体系送制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间8.5min得化合物35I(0.26g，56.1％)。
LC-MS(ESI):m/z＝584.1[M-H]
-。
第九步：(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-(5,5-二氟六氢环戊二烯[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物35)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-(5,5-difluorohexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物35)
化合物35I(0.26g，0.44mmol)溶于丙酮(6ml)和水(2ml)的混合溶剂中，加入N-甲基氧化吗啉(0.25g，2.2mmol)，加入催化量二水合锇酸钾(16mg)加完室温下反应15小时，反应完毕后浓缩掉丙酮后直接将反应体系送制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters2767制备液相；色谱柱:SunFire@PrepC18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间6.4min得化合物35(0.13g，46.9％)。
LC-MS(ESI):m/z＝618.1[M-H]
-。
1H NMR(400MHz,D
2O):8.09(d,1H),6.12(d,1H),4.95(d,1H),4.33-4.31(m,1H), 4.18-4.11(m,2H),4.07-3.15(m,6H),3.14-3.02(m,2H),2.53-2.11(m,6H)。
实施例36：
(((((2R,4R,5R)-5-(6-氯-4-(四氢-1H-呋喃[3,4-c]吡咯-5(3H)-基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)膦酰基)甲基)磷酸(化合物36)
(((((2R,4R,5R)-5-(6-chloro-4-(tetrahydro-1H-furo[3,4-c]pyrrol-5(3H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物36)
第一步：5-苄基四氢-1H-呋喃[3,4-c]吡咯-1,3(3aH)-二酮(36B)
5-benzyltetrahydro-1H-furo[3,4-c]pyrrole-1,3(3aH)-dione(36B)
室温下，将化合物36A(10.0g,42.1mmol)和顺丁烯二酸酐(4.5g,46.3mmol)溶于二氯甲烷(200mL)中，加入三氟乙酸(0.5g,4.2mmol)，室温反应2小时，将反应液浓缩干，得粗品标题化合物(9.7g)，直接投下一步。
第二步：(1-苄基吡咯烷-3,4-二酰基)二甲醇(36C)
(1-benzylpyrrolidine-3,4-diyl)dimethanol(36C)
室温下，将化合物36B(9.7g,42.0mmol)溶于四氢呋喃(200mL)中，T<35℃分批加入氢化铝锂(3.5g,92.3mmol)，室温反应2小时。T<35℃将水(6.6mL)滴加至反应液中，过滤，固体用乙酸乙酯(200mL×1)淋洗，有机相合并，浓缩干，柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇(v/v)＝30/1)，得到标题化合物(3.8g,产率41％)。
LC-MS(ESI):m/z＝222.3[M+H]
+。
第三步：5-苄基六氢-1H-呋喃[3,4-c]吡咯(36D)
5-benzylhexahydro-1H-furo[3,4-c]pyrrole(36D)
室温下，将化合物36C(3.8g,17.2mmol)溶于四氢呋喃(100mL)中，加入叔丁醇钾(4.1g,36.1mmol)，反应30分钟，将甲基磺酰氯(2.2g,18.9mmol)滴加至反应液中，反应10分钟，加入叔丁醇钾(1.9g,17.2mmol)，室温反应30分钟，升温至60℃反应2小时，将反应液倒入饱和氯化铵水溶液(200mL)中，乙酸乙酯(100mL×1)萃取，有机相浓缩干，柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1/1)，得到标题化合物(2g，产率57％)。
LC-MS(ESI):m/z＝204.3[M+H]
+。
第四步：六氢-1H-呋喃[3,4-c]吡咯盐酸盐(36E)
hexahydro-1H-furo[3,4-c]pyrrole hydrochloride(36E)
室温将化合物36D(2.0g,9.8mmol)溶于四氢呋喃(20mL)中，加入4N氯化氢二氧六环溶液(0.7mL，28mmol)，浓缩干，将甲醇(40mL)加入其中，加入10％钯炭(0.1g)，氢气置换并导入，室温反应16小时，将反应液过滤，浓缩干，得到标题化合物(1.2g,产率81％)。
第五步：((2S,4R,5R)-4-乙酰氧基-5-(6-氯-4-(四氢-1H-呋喃[3,4-c]吡咯-5(3H)-基)-1H-吡唑并[3],4-d]嘧啶-1-基)-3-亚甲基四氢呋喃-2-基)苯甲酸甲酯(36F)
((2S,4R,5R)-4-acetoxy-5-(6-chloro-4-(tetrahydro-1H-furo[3,4-c]pyrrol-5(3H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-methylenetetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(36F)
将28B(750mg,1.62mmol)和36E(290mg,1.94mmol)加入二氯甲烷中，再加入N,N-二异丙基乙胺(840mg,6.48mmol)，室温反应2h。TLC监测原料消失，直接将反应液加入硅胶，浓缩后色谱柱层析分离(EA:PE(v/v)＝1/1)，得到标题化合物(500mg,57％)。
LC-MS(ESI):m/z＝540.2[M+H]
+。
第六步：(2R,3R,5S)-2-(6-氯-4-(四氢-1H-呋喃[3,4-c]吡咯-5(3H)-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-5-(羟甲基)-4-亚甲基四氢呋喃-3-醇(36G)
(2R,3R,5S)-2-(6-chloro-4-(tetrahydro-1H-furo[3,4-c]pyrrol-5(3H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-5-(hydroxymethyl)-4-methylenetetrahydrofuran-3-ol(36G)
将36F(500mg,0.93mmol)，碳酸钾(390mg,2.79mmol)加入甲醇(10ml)中，室温反应3h，LC-MS监测反应完全，反应液直接加入硅胶减压浓缩后硅胶柱色谱分离纯化(DCM:MeOH(v/v)＝10/1)，得到标题化合物(220mg,60％)。
LC-MS(ESI):m/z＝394.1[M+H]
+。
第七步：(((((2S,4R,5R)-5-(6-氯-4-(四氢-1H-呋喃[3,4-c]吡咯-5(3H)-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-4-羟基-3-亚甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(36H)
(((((2S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-(tetrahydro-1H-furo[3,4-c]pyrrol-5(3H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-4-hydroxy-3-methylenetetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(36H)
将36G(220mg,0.56mmol)加入磷酸三甲酯(4ml)中，再将亚甲基双氯化磷(420mg, 1.68mmol)溶于磷酸三甲酯(1ml)后于冰浴下滴入反应体系中，保持0℃反应3h，LC-MS监测原料消失，冰浴下加入水(0.5ml)，继续0℃反应5h，LC-MS监测后HPLC分离提纯得到标题化合物(100mg 32％)。制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用DMF溶解，用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至40％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。
LC-MS(ESI):m/z＝552.1[M+H]
+。
第八步：(((((2R,4R,5R)-5-(6-氯-4-(四氢-1H-呋喃[3,4-c]吡咯-5(3H)-基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)膦酰基)甲基)磷酸(化合物36)
(((((2R,4R,5R)-5-(6-chloro-4-(tetrahydro-1H-furo[3,4-c]pyrrol-5(3H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物36)
将36H(100mg,0.18mmol)，二水合锇酸钾(10mg)和N-甲吗啉啉氧化物(110mg,0.9mmol)加入丙酮(3ml)和水(1ml)的混合体系中。室温反应过夜，LC-MS监测反应完全，将反应液过滤，滤液减压浓缩掉丙酮，HPLC分离提纯得到标题化合物(18mg 17％)。制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用DMF溶解，用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至40％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.22(s,1H),6.26(d,1H),4.95(d,1H),4.40-4.35(m,1H),4.30-4.24(m,2H),4.20-4.10(m,1H),4.07–3.92(m,3H),3.85-3.73(m,6H),2.52–2.33(m,2H),1.33-1.28(m,2H)。
LC-MS(ESI):m/z＝586.1[M+H]
+。
实施例37：
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-(甲氧基甲基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物37)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(methoxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物37)
第一步：((2S,4R,5R)-4-乙酰氧基-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑并[(3,4)-d]嘧啶-1-基)-3-亚甲基四氢呋喃-2-基)乙酸甲酯(37A)
((2S,4R,5R)-4-acetoxy-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-methylenetetrahydrofuran-2-yl)methyl acetate(37A)
化合物28D(2.00g，5.10mmol)溶于干燥二氯甲烷(80ml)中，加入三乙胺(1.55g,15.3mmol)、4-二甲氨基吡啶(312mg，2.55mmol)和乙酸酐(1.04g，10.2mmol)，加完于室温反应2小时，TLC监测反应完毕后加入饱和氯化铵水溶液(100ml)，以二氯甲烷(30ml x 3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，并过滤，滤液浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝4:1)得到白色泡状固体37A(2.24g，92.4％)。
第二步：((2R,3R,4R,5R)-4-乙酰氧基-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑并[3],4-d]嘧啶-1-基)-3-羟基-3-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)乙酸甲酯(37B)
((2R,3R,4R,5R)-4-acetoxy-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-hydroxy-3-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methylacetate(37B)
化合物37A(2.28g，4.79mmol)溶于丙酮：水＝3：1(80ml)中，加入N-甲基-N-氧化吗啉(2.81g，23.9mmol)和锇酸钾四水合物(353mg，0.958mmol)加完于室温下反应15小时，TLC监测反应完毕后加入饱和硫代硫酸钠水溶液(10mL)和水100(mL)，以乙酸乙酯(30ml x8)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后经柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1:2)得白色泡状化合物37B(1.84g，75.5％)。
LC-MS(ESI):m/z＝510.2[M+H]
+。
第三步：((2R,3R,4R,5R)-4-乙酰氧基-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-羟基-3-(甲氧基甲基)四氢呋喃-2-基)乙酸甲酯(37C)
((2R,3R,4R,5R)-4-acetoxy-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-hydroxy-3-(methoxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methylacetate(37C)
化合物37B(1.00g，1.96mmol)溶于干燥二氯甲烷(50ml)，于室温下加入2,6-二叔丁基-4-甲基吡啶(1.59g,9.80mmol)，10分钟后分批次加入三甲基氧鎓四氟硼酸盐(580mg，3.92mmol)，加完于室温下反应3小时。TLC监测反应结束后直接抽干。粗品经硅胶柱色谱纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1:1)得白色发泡状固体化合物37C(720mg，70.1％)。
LC-MS(ESI):m/z＝524.2[M+H]
+。
第四步：(2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(羟甲基)-3-(甲氧基甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(37D)
(2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-2-(hydroxymethyl)-3-(methoxymethyl)tetrahydrofuran-3,4-diol(37D)
化合物37C(720mg，1.37mmol)溶于甲醇(30ml)，于室温下加入碳酸钾(570mg,4.12mmol)，加完于室温下反应1小时。TLC监测反应结束后加入饱和氯化铵水溶液(50mL)和水50(mL)，以乙酸乙酯(10ml x 8)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后经柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1:2至1:10)得化合物37D(510mg，84.2％)。
第五步：(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-(甲氧基甲基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物37)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(methoxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物37)
化合物37D(260mg，0.592mmol)溶于磷酸三甲酯(3ml)中，冰浴下降温至0℃，将亚甲基双(二氯化膦)(393mg，2.37mmol)溶于磷酸三甲酯(0.5ml)中缓慢滴加到反应液中，加完继续于0℃反应3小时，LCMS监控反应完毕后加入水(1ml)，加完搅拌0.5小时，反应完毕后直接将反应体系送制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters2767制备液相；色谱柱:SunFire@PrepC18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d.洗脱时间10min。保留时间3.93min得化合物37(45mg，12.7％)。
LC-MS(ESI):m/z＝580.0[M-OH]
+。
1H NMR(400MHz,CD
3OD)δ8.20(s,1H),6.28(d,1H),4.74–4.51(m,3H),4.30–4.11(m,2H),4.06(dd,2H),4.00–3.90(m,1H),3.68–3.56(m,2H),3.36(s,3H),3.03–2.92(m, 1H),2.88–2.78(m,1H),2.71(t,2H),2.04–1.81(m,3H),1.77–1.52(m,3H)。
实施例38:
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡咯[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)膦酰基)甲基)磷酸(化合物38)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-methyltetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物38)
第一步：(3aR,5R,6R,6aR)-5-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2,2,6-三甲基四氢呋喃[2,3-d][1,3]二氧杂环-6-醇(38B)
(3aR,5R,6R,6aR)-5-(((tert-butyldiphenylsilyl)oxy)methyl)-2,2,6-trimethyltetrahydrofuro[2,3-d][1,3]dioxol-6-ol(38B)
将32A(1g，2.35mmol)溶于干燥的四氢呋喃(10ml)中，置换氮气三次，将反应体系冷却至-78℃，缓慢滴加甲基溴化镁(7.05mmol)，在-78℃下反应2h，反应结束用饱和氯化铵溶液(100ml)淬灭，乙酸乙酯(3×100ml)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，过滤浓缩后残留物柱层析快速分离纯化(洗脱剂比例：EA:PE＝0％～30％)得化合物38B(1g，96％)。
1H NMR(400MHz,CDCl
3)δ7.71–7.68(m,4H),7.46–7.33(m,6H),5.76(d,1H),4.07(d,1H),3.89(dd,1H),3.83(s,1H),3.82(d,1H),1.56(s,3H),1.34(s,3H),1.11(s,3H),1.06(s,9H)。
第二步：(3aR,5R,6R,6aR)-5-(羟甲基)-2,2,6-三甲基四氢呋喃[2,3-d][1,3]二氧杂环-6-醇(38C)
(3aR,5R,6R,6aR)-5-(hydroxymethyl)-2,2,6-trimethyltetrahydrofuro[2,3-d][1,3]dioxol-6-ol(38C)
将化合物38B(1g，2.26mmol)溶于四氢呋喃(10ml)中，加入四丁基氟化铵(0.89g，3.39mmol)，室温下反应1小时，反应完毕向反应液加入水(10ml)淬灭反应，水相用乙酸乙酯(20ml×3)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，过滤浓缩得化合物38C(1g)粗品，直接 用于下一步。
1H NMR(400MHz,CDCl
3)δ5.78(d,1H),4.12(d,1H),3.90(dd,1H),3.81(dd,1H),3.73(dd,1H),1.59(s,3H),1.36(s,3H),1.16(s,3H)。
第三步：((3aR,5R,6R,6aR)-6-羟基-2,2,6-三甲基四氢呋喃[2,3-d][1,3]二氧杂环-5-基)苯甲酸甲酯(38D)
((3aR,5R,6R,6aR)-6-hydroxy-2,2,6-trimethyltetrahydrofuro[2,3-d][1,3]dioxol-5-yl)methylbenzoate(38D)
上步化合物38C粗品和三乙胺(0.7g，6.78mmol)溶于二氯甲烷(10ml)中，加入苯甲酰氯(0.48g，3.39mmol),加完室温反应2小时，反应完毕反应液加入水(10ml)淬灭反应，水相用二氯甲烷(10ml×3)萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，过滤浓缩后残留物柱层析分离纯化(洗脱剂比例：EA:PE＝0％～20％)得到化合物38D(0.66g，两步收率95％)。
1H NMR(400MHz,CDCl
3)δ8.14–7.99(m,2H),7.59–7.48(m,1H),7.43(t,2H),5.83(d,1H),4.57(dd,1H),4.38(dd,1H),4.15(d,1H),4.11(dd,1H),2.76(s,1H),1.60(s,3H),1.37(s,3H),1.25(s,3H)。
第四步：((2R,3S,4R)-3,4,5-三羟基-3-甲基四氢呋喃-2-基)甲基苯甲酸酯(38E)
((2R,3S,4R)-3,4,5-trihydroxy-3-methyltetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(38E)
将化合物38D(3g，9.74mmol)加入到100mL反应瓶中，加入三氟乙酸(9ml)/水(1ml)，在室温下反应1h，反应结束用饱和碳酸氢钠水溶液调节pH＝7，水相用乙酸乙酯萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，过滤浓缩后残留物柱层析分离纯化(洗脱剂比例：EA:PE＝0％～50％)得到化合物38E(2.45g，94％)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.14–7.89(m,2H),7.54(t,1H),7.42(t,2H),5.38(d,1H),4.50(dd,1H),4.37(dd,1H),4.26(dd,1H),3.84(d,1H),1.33(s,3H)。
第五步：((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡咯[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-甲基四氢呋喃-2-基)甲基苯甲酸酯(38F)
((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-methyltetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(38F)
氮气保护下，化合物化合物38E(1g，3.73mmol)溶于无水四氢呋喃(20ml)中，降温至0℃，偶氮二甲酰二哌啶(1.41g，5.6mmol)溶于无水乙腈(5ml)中，控温0℃缓慢滴加至反应液中，滴加完毕后搅拌10分钟，再将三正丁基膦(1.13g，5.6mmol)缓慢滴加至反应液中，加完升至室温反应10分钟后升温至35℃反应1小时，另取一反应瓶氮气保护下将化合物33A(1.96g，7.46mmol)溶于无水乙腈(15ml)中，加入DBU(1.13g，7.46mmol)加完室温搅拌30min后将次反应液缓慢滴加至另一反应液中，加完升温至35℃反应2小时，反应完毕 后冷却至室温加入饱和氯化铵溶液淬灭反应，乙酸乙酯(50ml×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝2:1)得到目标化合物38F(0.18g，9％)。
LC-MS(ESI):m/z＝514.3[M+H]
+。
第六步：(2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-yl)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(羟基甲基)-3-甲基四氢呋喃-3,4-二醇(38G)
(2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-2-(hydroxymethyl)-3-methyltetrahydrofuran-3,4-diol(38G)
化合物38F(180mg，0.35mmol)溶于甲醇(3ml)中，加入碳酸钾(193mg，1.4mmol)，加完室温下反应2h，加入水(3ml)淬灭反应，乙酸乙酯(5ml×3)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，过滤浓缩后残留物柱层析快速分离纯化(洗脱剂比例：EA:PE＝0％～70％)，得产物38G(140mg，98％)。
LC-MS(ESI):m/z＝410.2[M+H]
+。
第七步：(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡咯[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)膦酰基)甲基)磷酸(化合物38)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-methyltetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物38)
化合物38G(140mg，0.45mmol)溶于磷酸三甲酯(2ml)中，冰浴下降温0℃，亚甲基双(二氯化膦)(338mg，1.35mmol)溶于磷酸三甲酯(2ml)中缓慢滴加到反应液中，加完0℃反应3h，LCMS监控反应，反应完毕后加入水(2ml)，加完搅拌1h，反应完毕后直接将反应体系送制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间7.0min得化合物38(90mg，46％)。
LC-MS(ESI):m/z＝566.0[M-H]
-。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.85(s,1H),5.76(d,1H),4.18–4.12(m,2H),4.07(d,2H),4.03(d,2H),3.90–3.82(m,1H),3.61(dd,1H),3.47(dd,1H),2.95–2.83(m,1H),2.73(dd,1H),2.23(t,2H),1.91–1.79(m,2H),1.78–1.71(m,1H),1.67–1.56(m,2H),1.55–1.45(m,1H),1.27(s,3H)。
实施例39:
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-乙烯基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)膦酰基)甲基)磷酸(化合物39)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-vinyltetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物39)
第一步：(3aR,5R,6R,6aR)-5-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氢呋喃[2,3-d][1,3]二氧杂环-6-醇(39B)
(3aR,5R,6R,6aR)-5-(((tert-butyldiphenylsilyl)oxy)methyl)-2,2-dimethyl-6-vinyltetrahydrofuro[2,3-d][1,3]dioxol-6-ol(39B)
将化合物32A(5g，11.72mmol)溶于干燥的四氢呋喃(50ml)中，置换氮气三次，将反应体系冷却至-78℃，缓慢滴加乙烯基溴化镁(35.16mmol)，在-78℃下反应2h，反应结束用饱和氯化铵溶液(100ml)淬灭，乙酸乙酯(3×100ml)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，过滤浓缩后残留物柱层析快速分离纯化(洗脱剂比例：EA:PE＝0％～30％)得化合物39B(4.5g，84％)。
1H NMR(400MHz,CDCl
3)δ7.71–7.63(m,4H),7.45–7.31(m,6H),5.83(d,1H),5.73(dd,1H),5.47(dd,1H),5.22(dd,1H),4.21(d,1H),4.04(t,1H),3.77–3.72(m,2H),1.60(s,3H),1.36(s,3H),1.05(s,9H)。
第二步：(3aR,5R,6R,6aR)-5-(羟甲基)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氢呋喃[2,3-d][1,3]二氧杂环-6-醇(39C)
(3aR,5R,6R,6aR)-5-(hydroxymethyl)-2,2-dimethyl-6-vinyltetrahydrofuro[2,3-d][1,3]dioxol-6-ol(39C)
将化合物39B(4.5g，9.90mmol)溶于四氢呋喃(50ml)中，加入四丁基氟化铵(3.36g，12.87mmol)，室温下反应1小时，反应完毕向反应液加入水(10ml)淬灭反应，水相用乙酸乙酯(20ml×3)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，过滤浓缩得化合物39C(5.13g)粗品，直接用于下一步。
第三步：((3aR,5R,6R,6aR)-6-羟基-2,2-二甲基-6-乙烯基四氢呋喃[2,3-d][1,3]二氧杂环-5-基)苯甲酸甲酯(39D)
((3aR,5R,6R,6aR)-6-hydroxy-2,2-dimethyl-6-vinyltetrahydrofuro[2,3-d][1,3]dioxol-5-yl)methyl benzoate(39D)
上步化合物39C粗品和三乙胺(3.01g，29.7mmol)溶于二氯甲烷(40ml)中，加入苯甲酰氯(2.09g，14.85mmol),加完室温反应2小时，反应完毕反应液加入水(10ml)淬灭反应，水相用二氯甲烷(10ml×3)萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，过滤浓缩后残留物柱层析分离纯化(洗脱剂比例：EA:PE＝0％～20％)得到化合物39D(2.54g，两步收率80％)。
1H NMR(400MHz,CDCl
3)δ8.18–7.95(m,2H),7.54(d,1H),7.42(t,2H),5.90(d,1H),5.81(dd,1H),5.59(dd,1H),5.35(dd,1H),4.45(dd,1H),4.33–4.18(m,3H),1.62(s,3H),1.37(s,3H)。
第四步：((2R,3S,4R)-3,4,5-三羟基-3-乙烯基四氢呋喃-2-基)苯甲酸甲酯(39E)
((2R,3S,4R)-3,4,5-trihydroxy-3-vinyltetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(39E)
将化合物39D(2.54g，7.98mmol)加入到100mL反应瓶中，加入三氟乙酸(9ml)/水(1ml)，在室温下反应1h，反应结束用饱和碳酸氢钠水溶液调节pH＝7，水相用乙酸乙酯萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，过滤浓缩后残留物柱层析分离纯化(洗脱剂比例：EA:PE＝0％～50％)得到化合物39E(2.1g，95％)。
1H NMR(400MHz,CDCl
3)δ8.03–7.97(m,2H),7.57(t,1H),7.48–7.40(m,2H),5.91(dd,1H),5.58(dd,1H),5.45(d,1H),5.37(d,1H),4.50–4.40(m,2H),4.22(dd,1H),4.13(d,1H),3.23(t,3H)。
第五步：((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-乙烯基四氢呋喃-2-基)甲基苯甲酸酯(39F)
((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-vinyltetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(39F)
氮气保护下，化合物化合物39E(1g，3.57mmol)溶于无水四氢呋喃(20ml)中，降温至0℃，偶氮二甲酰二哌啶(1.80g，7.14mmol)溶于无水乙腈(5ml)中，控温0℃缓慢滴加至反应液中，滴加完毕后搅拌10min，再将三正丁基膦(1.44g，7.14mmol)缓慢滴加至反应液中，加完升至室温反应10min后升温至35℃反应1小时，另取一反应瓶氮气保护下将化合物33A(1.41g，5.35mmol)溶于无水乙腈(15ml)中，加入DBU(0.82g，5.35mmol)加完室温搅拌30min后将次反应液缓慢滴加至另一反应液中，加完升温至35℃反应2小时，反应完毕后冷却至室温加入饱和氯化铵溶液淬灭反应，乙酸乙酯(50ml×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝2:1) 得到目标化合物39F(100mg，5％)。
LC-MS(ESI):m/z＝526.2[M+H]
+。
第六步：(2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(羟基甲基)-3-乙烯基四氢呋喃-3,4-二醇(39G)
(2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-2-(hydroxymethyl)-3-vinyltetrahydrofuran-3,4-diol(39G)
化合物39F(50mg，0.35mmol)溶于甲醇(3ml)中，加入碳酸钾(193mg，1.4mmol)，加完室温下反应2h，加入水(3ml)淬灭反应，乙酸乙酯(5ml×3)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，过滤浓缩后残留物柱层析快速分离纯化(洗脱剂比例：EA:PE＝0％～70％)，得产物39G(40mg，98％)。
LC-MS(ESI):m/z＝422.1[M+H]
+。
第七步：(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-乙烯基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)膦酰基)甲基)磷酸(化合物39)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-vinyltetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物39)
化合物39G(40mg，0.095mmol)溶于磷酸三甲酯(0.5ml)中，冰浴下降温0℃，亚甲基双(二氯化膦)(72mg，0.285mmol)溶于磷酸三甲酯(0.5ml)中缓慢滴加到反应液中，加完0℃反应3h，LCMS监控反应，反应完毕后加入水(1ml)，加完搅拌1h，反应完毕后直接将反应体系送制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间7.0min得化合物39(14mg，25％)。
LC-MS(ESI):m/z＝578.0[M-H]
-。
1H NMR(400MHz,D
2O)δ8.21(d,1H),6.21(d,1H),6.10(dd,1H),5.59(d,1H),5.49(d,1H),5.11(d,1H),4.25(s,1H),4.09–3.90(m,3H),3.83(dd,1H),3.62(s,1H),3.50(d,1H),2.92(s,1H),2.80(s,1H),2.25(t,2H),1.88(dd,2H),1.77(d,1H),1.71–1.61(m,1H),1.51(s,2H)。
实施例40:
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧 啶-1-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)膦酰基)甲基)磷酸(化合物40)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-ethynyl-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物40)
第一步：(3aR,5R,6R,6aR)-5-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2,2-二甲基-6-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)四氢呋喃[2,3-d][1,3]二氧杂环-6-醇(40B)
(3aR,5R,6R,6aR)-5-(((tert-butyldiphenylsilyl)oxy)methyl)-2,2-dimethyl-6-((trimethylsilyl)ethynyl)tetrahydrofuro[2,3-d][1,3]dioxol-6-ol(40B)
将乙炔基三甲基硅烷(2.88g，29.3mmol)溶于干燥的四氢呋喃(30ml)中，置换氮气三次，将反应体系冷却至-78℃，缓慢滴加正丁基锂(25.78ml)，在-78℃下反应30min，向体系中滴加溶于四氢呋喃(10ml)的化合物32A(5g，11.72mmol)，在-78℃下继续反应2h，反应结束用饱和氯化铵溶液(100ml)淬灭，乙酸乙酯(3×100ml)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，过滤浓缩后残留物柱层析快速分离纯化(洗脱剂比例：EA:PE＝0％～30％)得化合物40B(5.72g，93％)。
1H NMR(400MHz,CDCl
3)δ7.69(m,4H),7.48–7.30(m,6H),5.85(d,1H),4.54(d,1H),4.05(d,1H),4.02(d,1H),3.98(dd,1H),1.59(s,3H),1.37(s,3H),1.08(s,9H),0.11(s,9H)。
第二步：(3aR,5R,6R,6aR)-6-乙炔基-5-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[2,3-d][1,3]二氧杂环-6-醇(40C)
(3aR,5R,6R,6aR)-6-ethynyl-5-(hydroxymethyl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[2,3-d][1,3]dioxol-6-ol(40C)
将化合物40B(5.72g，10.90mmol)溶于四氢呋喃(50ml)中，加入四丁基氟化铵(14.17ml，14.17mmol)，室温下反应1小时，反应完毕向反应液加入水(10ml)淬灭反应，水相用乙酸乙酯(20ml×3)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，过滤浓缩得化合物40C(2.3g)粗品，直接用于下一步。
1H NMR(400MHz,CDCl
3)δ5.90(d,1H),4.56(d,1H),4.02–3.94(m,3H),2.63(s,1H),1.60(s,3H),1.39(s,3H)。
第三步：((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙炔基-6-羟基-2,2-二甲基四氢呋喃[2,3-d][1,3]二氧杂环-5-基)苯甲酸甲酯(40D)
((3aR,5R,6R,6aR)-6-ethynyl-6-hydroxy-2,2-dimethyltetrahydrofuro[2,3-d][1,3]dioxol-5-yl)methyl benzoate(40D)
上步化合物40C粗品和三乙胺(3.31g，32.7mmol)溶于二氯甲烷(30ml)中，加入苯甲酰氯(2.30g，16.35mmol),加完室温反应2小时，反应完毕反应液加入水(20ml)淬灭反应，水相用二氯甲烷(20ml×3)萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，过滤浓缩后残留物柱层析分离纯化(洗脱剂比例：EA:PE＝0％～20％)得到化合物40D(3.4g)粗品，直接用于下一步。
1H NMR(400MHz,CDCl
3)δ8.13–8.00(m,2H),7.55(d,1H),7.43(t,2H),5.94(d,1H),4.74(dd,1H),4.62–4.57(m,2H),4.21(dd,1H),2.66(s,1H),1.60(s,3H),1.39(s,3H)。
第四步：((2R,3S,4R)-3-乙炔基-3,4,5-三羟基四氢呋喃-2-基)苯甲酸甲酯(40E)
((2R,3S,4R)-3-ethynyl-3,4,5-trihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(40E)
将化合物40D粗品加入到100mL反应瓶中，加入三氟乙酸(9ml)/水(1ml)，在室温下反应1h，反应结束用饱和碳酸氢钠水溶液调节pH＝7，水相用乙酸乙酯萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，过滤浓缩后残留物柱层析分离纯化(洗脱剂比例：EA:PE＝0％～50％)得到化合物40E(2.5g，三步收率83％)。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.11–8.00(m,2H),7.62(t,1H),7.48(t,2H),5.40(d,1H),4.58(d,1H),4.50(d,1H),4.43(d,1H),4.15(d,1H),3.09(s,1H)。
第五步：((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基苯甲酸酯(40F)
((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-ethynyl-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(40F)
氮气保护下，化合物化合物40E(1g，3.59mmol)溶于无水四氢呋喃(20ml)中，降温至0℃，偶氮二甲酰二哌啶(1.36g，5.38mmol)溶于无水乙腈(5ml)中，控温0℃缓慢滴加至反应液中，滴加完毕后搅拌10min，再将三正丁基膦(1.09g，5.38mmol)缓慢滴加至反应液中，加完升至室温反应10min后升温至35℃反应1小时，另取一反应瓶氮气保护下将化合物33A(1.89g，7.18mmol)溶于无水乙腈(15ml)中，加入DBU(1.09g，7.18mmol)加完室温搅拌30min后将次反应液缓慢滴加至另一反应液中，加完升温至35℃反应2小时，反应完毕后冷却至室温加入饱和氯化铵溶液淬灭反应，乙酸乙酯(50ml×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝2:1)得到目标化合物40F(0.18g，9％)。
LC-MS(ESI):m/z＝524.2[M+H]
+。
第六步：(2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-乙炔基-2-(羟基甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(40G)
(2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-ethynyl-2-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-3,4-diol(40G)
化合物40F(180mg，0.35mmol)溶于甲醇(3ml)中，加入碳酸钾(145mg，1.05mmol)，加完室温下反应2h，加入水(3ml)淬灭反应，乙酸乙酯(5ml×3)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，过滤浓缩后残留物柱层析快速分离纯化(洗脱剂比例：EA:PE＝0％～70％)，得产物40G(140mg，97％)。
LC-MS(ESI):m/z＝420.1[M+H]
+。
第七步：(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)膦酰基)甲基)磷酸(化合物40)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-ethynyl-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物40)
化合物40G(140mg，0.36mmol)溶于磷酸三甲酯(2ml)中，冰浴下降温0℃，亚甲基双(二氯化膦)(270mg，1.08mmol)溶于磷酸三甲酯(2ml)中缓慢滴加到反应液中，加完0℃反应3h，LCMS监控反应，反应完毕后加入水(2ml)，加完搅拌1h，反应完毕后直接将反应体系送制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间7.0min得化合物40(72mg，35％)。
LC-MS(ESI):m/z＝576.0[M-H]
-。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.88(d,1H),5.80(dd,1H),4.68(dd,2H),4.37–4.28(m,1H),4.27–4.17(m,2H),4.04(dd,1H),3.87(dd,1H),3.66–3.55(m,2H),3.47(dd,1H),2.96–2.81(m,1H),2.74(d,1H),2.28–2.14(m,2H),1.91–1.79(m,2H),1.76(dd,1H),1.67–1.56(m,2H),1.53(dd,1H)。
实施例41:
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-(三氟甲基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)膦酰基)甲基)磷酸(化合物41)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(trifluoromethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物41)
第一步：((3aR,5R,6R,6aR)-6-羟基-2,2-二甲基-6-(三氟甲基)四氢呋喃[2,3-d][1,3]二氧杂环-5-基)苯甲酸甲酯(41B)
((3aR,5R,6R,6aR)-6-hydroxy-2,2-dimethyl-6-(trifluoromethyl)tetrahydrofuro[2,3-d][1,3]dioxol-5-yl)methyl benzoate(41B)
将41A(1g，3.42mmol)溶于干燥的四氢呋喃(10ml)中，置换氮气三次，将反应体系冷却至0℃，缓慢滴加三甲基硅基三氟甲烷(1.02g，7.18mmol)，和四丁基氟化铵(1.07g，4.10mmol)，反应结束用水(5ml)淬灭，乙酸乙酯(3×5ml)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，过滤浓缩后残留物柱层析快速分离纯化(洗脱剂比例：EA:PE＝0％～30％)得化合物41B(0.8g，65％)。
1H NMR(400MHz,CDCl
3)δ8.16–8.05(m,2H),7.66–7.55(m,1H),7.51–7.38(m,2H),5.99(d,1H),4.76(dd,1H),4.62(d,1H),4.55–4.47(m,1H),4.42–4.31(m,1H),1.63(s,3H),1.43(s,3H)。
19F NMR(376MHz,CDCl
3)δ-73.95。
第二步：((2R,3S,4R,5S)-3,4,5-三羟基-3-(三氟甲基)四氢呋喃-2-基)苯甲酸甲酯(41C)
((2R,3S,4R,5S)-3,4,5-trihydroxy-3-(trifluoromethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(41C)
将化合物41B(3.14g，8.67mmol)加入到100mL反应瓶中，加入三氟乙酸(9ml)/水(1ml)，在室温下反应1h，反应结束用饱和碳酸氢钠水溶液调节pH＝7，水相用乙酸乙酯萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，过滤浓缩后残留物柱层析分离纯化(洗脱剂比例：EA:PE＝0％～50％)得到化合物41C(2.65g，95％)。
1H NMR(400MHz,CDCl
3)δ8.09–7.97(m,2H),7.57(t,1H),7.44(dd,2H),5.61(d,1H),4.74(dd,1H),4.52(d,2H),4.35(d,1H)。
19F NMR(376MHz,CDCl
3)δ-74.89。
第三步：(3R,4R,5R)-5-((苯甲酰氧基)甲基)-4-羟基-4-(三氟甲基)四氢呋喃-2,3-二乙酸二酯(41D)
(3R,4R,5R)-5-((benzoyloxy)methyl)-4-hydroxy-4-(trifluoromethyl)tetrahydrofuran-2,3-diyldiacetate(41D)
将化合物41C(500mg，1.55mmol)溶于吡啶(5ml)中，冰浴下降温0℃，加入乙酸酐(396mg，3.88mmol)和4-二甲氨基吡啶(19mg，0.16mmol)，转移至室温反应3h，反应结束加乙酸乙酯(50ml)稀释，用0.1N的盐酸(20ml)洗去吡啶，减压浓缩后快速分离纯化(洗脱剂比例：EA:PE＝0％～30％)得化合物41D(550g，87％)。
1H NMR(400MHz,CDCl
3)δ8.08–8.02(m,2H),7.58(t,1H),7.45(t,2H),6.54(d,1H),5.53(d,1H),4.74–4.67(m,2H),4.46(dd,1H),3.64(dd,1H),2.17(s,3H),2.11(s,3H)。
第四步：((2R,3R,4R,5R)-4-乙酰氧基-5-(4,6-二氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-羟基-3-(三氟甲基)四氢呋喃-2-基)苯甲酸甲酯(41E)
((2R,3R,4R,5R)-4-acetoxy-5-(4,6-dichloro-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-hydroxy-3-(trifluoromethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(41E)
将化合物41D(550mg，1.35mmol)加入到25mL反应瓶中，加热到90℃后加入4,6-二氯-1H-吡唑并[3,4-C]嘧啶(383mg，2.03mmol)，加完后滴加四氯化锡两滴，然后升温至130℃减压反应三十分钟，冷却至室温，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝10:1-5:1)得到标题化合物41E(293mg，41％)。
LC-MS(ESI):m/z＝535.0[M+H]
+。
第五步：((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-(三氟甲基)四氢呋喃-2-基)甲基苯甲酸酯(41F)
((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(trifluoromethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(41F)
将化合物41E(293mg，0.55mmol)溶于甲醇(3ml)中，加入三乙胺(167mg，1.65mmol)和顺式-7-氮杂双环[3.3.0]辛烷盐酸盐(122mg，1.1mmol)，在室温反应2h，反应完毕减压浓 缩得化合物41F粗品直接用于下一步。
LC-MS(ESI):m/z＝568.2[M+H]
+。
第六步：(2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(羟甲基)-3-(三氟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(41G)
(2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-2-(hydroxymethyl)-3-(trifluoromethyl)tetrahydrofuran-3,4-diol(41G)
将上步化合物41F粗品溶于甲醇(3ml)中，加入碳酸钾(228mg，1.65mmol)，加完室温下反应2h，加入水(3ml)淬灭反应，乙酸乙酯(5ml×3)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，过滤浓缩后残留物柱层析快速分离纯化(洗脱剂比例：EA:PE＝0％～70％)，得化合物41G(158mg，62％)。
LC-MS(ESI):m/z＝464.1[M+H]
+。
第七步：(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-(三氟甲基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)膦酰基)甲基)磷酸(化合物41)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(trifluoromethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物41)
化合物41G(158mg，0.34mmol)溶于磷酸三甲酯(2ml)中，冰浴下降温0℃，亚甲基双(二氯化膦)(255mg，1.02mmol)溶于磷酸三甲酯(1ml)中缓慢滴加到反应液中，加完0℃反应3h，LCMS监控反应，反应完毕后加入水(1ml)，加完搅拌1h，反应完毕后直接将反应体系送制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间7.0min得化合物41(100mg，47％)。
LC-MS(ESI):m/z＝622.1[M+H]
+。
1H NMR(400MHz,D
2O)δ8.15(d,1H),6.14(d,1H),5.30(d,1H),4.44(d,1H),4.26(s,1H),4.17(s,1H),4.04–3.86(m,1H),3.85–3.73(m,1H),3.65–3.52(m,1H),3.47(d,1H),2.91(s,1H),2.79(s,1H),2.23(t,2H),1.98–1.81(m,2H),1.77(d,1H),1.70–1.62(m,1H),1.51(dd,2H)。
19F NMR(376MHz,D
2O)δ-73.67。
实施例42:
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-(((1S,5R)-5-羟基金刚烷-2-基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物42)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-(((1S,5R)-5-hydroxyadamantan-2-yl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物42)
第一步：((2S,4R,5R)-4-乙酰氧基-5-(6-氯-4-(((1S,5R)-5-羟基金刚烷-2-基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-亚甲基四氢呋喃-2-基)苯甲酸甲酯(42B)
((2S,4R,5R)-4-acetoxy-5-(6-chloro-4-(((1S,5R)-5-hydroxyadamantan-2-yl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-methylenetetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(42B)
化合物28B(3g，6.48mmol)溶于二氯甲烷(30ml)中，加入三乙胺(1.97g，19.44mmol)和(1R,3S)-4-氨基金刚烷-1-醇盐酸盐(2.64g，12.96mmol)加完室温下反应6小时，反应完毕浓缩所得残留物硅胶柱色谱纯化(洗脱剂比例：EA:PE＝0％～70％)得目标化合物42B(2.32g，58％)。
LC-MS(ESI):m/z＝594.2[M+1]
+。
第二步：(2R,3R,5S)-2-(6-氯-4-(((1S,5R)-5-羟基金刚烷-2-基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-5-(羟甲基)-4-亚甲基四氢呋喃-3-醇(42C)
(2R,3R,5S)-2-(6-chloro-4-(((1S,5R)-5-hydroxyadamantan-2-yl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-5-(hydroxymethyl)-4-methylenetetrahydrofuran-3-ol(42C)
化合物42B(2.32mg，3.91mmol)溶于甲醇(25ml)中，加入碳酸钾(1.62g，11.73mmol)，加完室温下反4小时，加入水(3ml)淬灭反应，乙酸乙酯(30ml×3)萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩所得残留物硅胶柱色谱纯化(洗脱剂比例：MeOH:EA＝0％～10％)，得产物42C(1.72g，98％)。
LC-MS(ESI):m/z＝448.1[M+1]
+。
第三步：(((((2S,4R,5R)-5-(6-氯-4-(((1S,5R)-5-羟基金刚烷-2-基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-4-羟基-3-亚甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(42D)
(((((2S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-(((1S,5R)-5-hydroxyadamantan-2-yl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-4-hydroxy-3-methylenetetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(42D)
化合物42C(500mg，1.12mmol)溶于磷酸三甲酯(4ml)中，冰浴下降温0℃，亚甲基双(二氯化膦)(840mg，3.36mmol)溶于磷酸三甲酯(2ml)中缓慢滴加到反应液中，加完0℃反应3小时，LCMS监控反应，反应完毕后加入水(2ml)，加完搅拌1小时，反应完毕后直接将反应体系送制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间7.0min得化合物42D(400mg，59％)。
LC-MS(ESI):m/z＝604.0[M-H]
-。
第四步：(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-(((1S,5R)-5-羟基金刚烷-2-基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物42)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-(((1S,5R)-5-hydroxyadamantan-2-yl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物42)
化合物42D(400mg，0.66mmol)，N-甲基吗啉氧化物(232mg，1.98mmol)溶于丙酮(3ml)和水(1mL)中，室温下加入锇酸钾(VI)二水合物(22mg，0.066),加完室温反应16小时，反应完毕加亚硫酸钠淬灭反应，反应液浓缩后送制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间6.5min得化合物42(150mg，36％)。
LC-MS(ESI):m/z＝640.0[M+1]
+。
1H NMR(400MHz,D2O)δ＝8.24(s,1H),6.15(d,1H),4.98(d,1H),4.82(d,1H),4.36–4.29(m,1H),4.13(dd,3H),3.88(t,2H),2.42–2.36(m,2H),2.30(d,1H),2.27–2.21(m,1H),2.18–2.11(m,1H),1.93(d,2H),1.79(s,2H),1.73(s,3H),1.63(d,2H)。
实施例43：
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-(((1R,5R)-5-羟基金刚烷-2-基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物43)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-(((1R,5R)-5-hydroxyadamantan-2-yl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物43)
第一步：((2S,4R,5R)-4-乙酰氧基-5-(6-氯-4-(((1R,5R)-5-羟基金刚烷-2-基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-亚甲基四氢呋喃-2-基)苯甲酸甲酯(43B)
((2S,4R,5R)-4-acetoxy-5-(6-chloro-4-(((1R,5R)-5-hydroxyadamantan-2-yl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-methylenetetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(43B)
化合物28B(3g，6.48mmol)溶于二氯甲烷(30ml)中，加入三乙胺(1.97g，19.44mmol)和(1R,3R)-4-氨基金刚烷-1-醇盐酸盐(2.64g，12.96mmol)加完室温下反应6小时，反应完毕浓缩所得残留物硅胶柱色谱纯化(洗脱剂比例：EA:PE＝0％～70％)得目标化合物43B(2.2g，55％)。
LC-MS(ESI):m/z＝594.2[M+1]
+。
第二步：(2R,3R,5S)-2-(6-氯-4-(((1R,5R)-5-羟基金刚烷-2-基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-5-(羟甲基)-4-亚甲基四氢呋喃-3-醇(43C)
(2R,3R,5S)-2-(6-chloro-4-(((1R,5R)-5-hydroxyadamantan-2-yl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-5-(hydroxymethyl)-4-methylenetetrahydrofuran-3-ol(43C)
化合物43B(2.2mg，3.70mmol)溶于甲醇(25ml)中，加入碳酸钾(1.54g，11.11mmol)，加完室温下反4小时，加入水(3ml)淬灭反应，乙酸乙酯(20ml×3)萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩所得残留物硅胶柱色谱纯化(洗脱剂比例：MeOH:EA＝0％～10％)，得产物43C(1.62g，98％)。
LC-MS(ESI):m/z＝448.1[M+1]
+。
第三步：(((((2S,4R,5R)-5-(6-氯-4-(((1R,5R)-5-羟基金刚烷-2-基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-4-羟基-3-亚甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(43D)
(((((2S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-(((1R,5R)-5-hydroxyadamantan-2-yl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-4-hydroxy-3-methylenetetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(43D)
化合物43C(500mg，1.12mmol)溶于磷酸三甲酯(4ml)中，冰浴下降温0℃，亚甲基双(二氯化膦)(840mg，3.36mmol)溶于磷酸三甲酯(2ml)中缓慢滴加到反应液中，加完0℃反应3小时，LCMS监控反应，反应完毕后加入水(2ml)，加完搅拌1小时，反应完毕后直接将反应体系送制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间7.0min得化合物43D(350mg，52％)。
LC-MS(ESI):m/z＝604.0[M-H]
-。
第四步：(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-(((1R,5R)-5-羟基金刚烷-2-基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物43)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-(((1R,5R)-5-hydroxyadamantan-2-yl)amino)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物43)
化合物43D(350mg，0.58mmol)，N-甲基吗啉氧化物(204mg，1.74mmol)溶于丙酮(3ml)和水(1mL)中，室温下加入锇酸钾(VI)二水合物(19mg，0.058)，加完室温反应16小时，反应完毕加亚硫酸钠淬灭反应，反应液浓缩后送制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间6.5min得化合物43(150mg，40％)。
LC-MS(ESI):m/z＝640.0[M+1]
+。
1H NMR(400MHz,D2O)δ＝8.23(s,1H),6.14(d,1H),4.98(s,1H),4.82(s,1H),4.41–4.35(m,1H),4.21(s,1H),4.17–4.08(m,2H),3.88(t,2H),2.29(t,5H),2.14(s,1H),1.91(s,4H),1.77(s,3H),1.55–1.47(m,2H)。
实施例44：
(((((2S,3R,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-4-羟基-3-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)膦酰基)甲基)磷酸(化合物44)
(((((2S,3R,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-4-hydroxy-3-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物44)
第一步：((2S,3S,4R,5R)-4-乙酰氧基-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)甲基苯甲酸酯(44B)
((2S,3S,4R,5R)-4-acetoxy-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(44B)
将化合物28B(2g，3.72mmol)溶于无水四氢呋喃(20ml)中，抽换氮气三次，在冰浴下滴加硼烷二甲基硫醚复合物(11.15mmol)，在室温下搅拌16h，在冰浴下滴加30％的双氧水(5ml)和饱和碳酸氢钠水溶液(1ml)加完室温反应2小时，反应完毕加水淬灭反应，用乙酸乙酯(20ml×3)萃取反应液，合并有机相，浓缩所得残留物硅胶柱色谱纯化(洗脱剂比例：EA:PE＝0％～70％)，得目标化合物44B(0.93g，45％)。
LC-MS(ESI):m/z＝556.2[M+1]
+。
第二步：((2S,3S,4R,5R)-4-乙酰氧基-3-((叔丁基二苯基氯硅)氧基)甲基)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)四氢呋喃-2-基)甲基苯甲酸酯(44C)
((2S,3S,4R,5R)-4-acetoxy-3-(((tert-butyldiphenylsilyl)oxy)methyl)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)tetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(44C)
将化合物44B(0.93g，1.67mol)溶解于二氯甲烷(10ml)中，添加咪唑(341mg，5.02mol)和叔丁基二苯基氯硅烷(689mg，2.51mol)，在室温下反应3h，反应结束加水(10ml)淬灭，分离有机相，水相用二氯甲烷(10ml×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩所得残留物硅胶柱色谱纯化(洗脱剂比例：EA:PE＝0％～70％)，得目标化合物44C(648mg，98％)。
1H NMR(400MHz,CDCl
3)δ8.09–7.92(m,2H),7.83(s,1H),7.72-7.66(m,4H),7.53(t,1H),7.46–7.30(m,8H),6.35(d,1H),5.95(t,1H),4.79–4.64(m,2H),4.55(dd,1H),4.10(d,2H),4.02–3.90(m,2H),3.56(s,2H),2.90(s,1H),2.82(dt,2H),1.99(s,3H),1.94(s,1H),1.82(dt,1H),1.74–1.67(m,1H),1.59-1.52(m,2H),1.26(s,1H),1.08(s,9H)。
第三步：(2R,3R,4R,5S)-4-(((叔丁基二苯基氯硅基)氧基)甲基)-2-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3-醇(44D)
(2R,3R,4R,5S)-4-(((tert-butyldiphenylsilyl)oxy)methyl)-2-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-5-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-3-ol(44D)
化合物44C(1.2g，1.51mmol)溶于甲醇(10ml)中，加入碳酸钾(626mg，4.53mmol)，加完室温下反应2小时，加入水(3ml)淬灭反应，乙酸乙酯(10ml×3)萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩所得残留物硅胶柱色谱纯化(洗脱剂比例：EA:PE＝0％～70％)，得目标化合物44D(648mg，98％)。
LC-MS(ESI):m/z＝648.2[M+1]
+。
第四步：(((((2S,3R,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-4-羟基-3-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)膦酰基)甲基)磷酸(化合物44)
(((((2S,3R,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-4-hydroxy-3-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物44)
化合物44D(350mg，0.54mmol)溶于磷酸三甲酯(3ml)中，冰浴下降温0℃，亚甲基双(二氯化膦)(405mg，1.62mmol)溶于磷酸三甲酯(2ml)中缓慢滴加到反应液中，加完0℃反应3小时，LCMS监控反应，反应完毕后加入6N HCl(2ml)，加完搅拌8小时，反应完毕后直接将反应体系送制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间7.0min得化合物44(180mg，58％)。
LC-MS(ESI):m/z＝568.0[M+H]
+。
1H NMR(400MHz,D
2O)δ8.11(d,1H),6.04(d,1H),4.96(dd,1H),4.61(td,1H),4.24–4.04(m,2H),3.95(dd,2H),3.90–3.70(m,2H),3.62–3.49(m,1H),3.50–3.36(m,1H),2.94-2.87(m,1H),2.37–2.19(m,2H),1.95–1.81(m,2H),1.76(dt,1H),1.70–1.60(m,1H),1.59–1.39(m,2H)。
实施例45:
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-1-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)膦酰基)甲基)磷酸(化合物45)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-3-ethynyl-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物45)
第一步：(3R,4R,5R)-5-((苯甲酰氧基)甲基)-4-乙炔基-4-羟基四氢呋喃-2,3-二乙酸二酯(45A)
(3R,4R,5R)-5-((benzoyloxy)methyl)-4-ethynyl-4-hydroxytetrahydrofuran-2,3-diyl diacetate(45A)
将化合物(40E)(1.0g，3.29mmol)溶于吡啶(10ml)中，冰浴下降温0℃，加入乙酸酐(840mg，8.23mmol)和4-二甲氨基吡啶(40mg，0.33mmol)，转移至室温反应3h，反应结束加乙酸乙酯(50ml)稀释，用0.1N的盐酸(100ml)洗去吡啶，减压浓缩后快速分离纯化(洗脱剂比例：EA:PE＝0％～30％)得化合物45A(1.2g，94％)。
1H NMR(400MHz,CDCl
3)δ8.11(d,2H),7.57(t,1H),7.45(t,2H),6.19(d,1H),5.50(d,1H),4.74(dd,1H),4.57(dd,1H),4.45(dd,1H),2.75(s,1H),2.18(s,3H),2.02(s,3H)。
1H NMR(400MHz,CDCl
3)δ8.05(d,2H),7.57(t,1H),7.45(t,2H),6.51(d,1H),5.44(d,1H),4.65(dd,1H),4.61–4.54(m,2H),2.68(s,1H),2.18(s,3H),2.11(s,3H)。
第二步：((2R,3R,4R,5R)-4-乙酰氧基-5-(4,6-二氯-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-1-基)-3-乙炔基-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲基苯甲酸酯(45B)
((2R,3R,4R,5R)-4-acetoxy-5-(4,6-dichloro-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-3-ethynyl-3-hyd roxytetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(45B)
将化合物45A(1.4g，3.31mmol)加入到25mL反应瓶中，加热到90℃后加入4,6-二氯-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(0.38g，4.97mmol)，加完后滴加四氯化锡两滴，然后升温至130℃减压反应三十分钟，冷却至室温，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝10:1-5:1)得到标题化合物45B(300mg，15％)。
LC-MS(ESI):m/z＝490.1[M+H]
+。
第三步：((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-1-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基苯甲酸酯(45C)
((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-3-ethynyl-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(45C)
化合物45B(300mg，0.61mmol)溶于异丙醇(6ml)中，加入三乙胺(370mg，3.66mmol)和顺式-7-氮杂双环[3.3.0]辛烷盐酸盐(203mg，1.83mmol)，在80℃的油浴锅中反应3h，反应完毕减压浓缩后快速分离纯化(洗脱剂比例：EA:PE＝0％～50％)得化合物45C(167mg，52％)。
LC-MS(ESI):m/z＝523.1[M+H]
+。
第四步：(2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-1-基)-3-乙炔基-2-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(45D)
(2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-3-ethynyl-2-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-3,4-diol(45D)
化合物45C(167mg，0.32mmol)溶于甲醇(3ml)中，加入碳酸钾(133mg，0.96mmol)，加完室温下反应2h，加入水(3ml)淬灭反应，乙酸乙酯(5ml×3)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，过滤浓缩后残留物柱层析快速分离纯化(洗脱剂比例：EA:PE＝0％～70％)，得产物45D(130mg，97％)。
LC-MS(ESI):m/z＝419.2[M+H]
+。
第五步：(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-1-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)膦酰基)甲基)磷酸(化合物45)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-3-ethynyl-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物45)
化合物45D(130mg，0.31mmol)溶于磷酸三甲酯(2ml)中，冰浴下降温0℃，亚甲基双(二氯化膦)(233mg，0.93mmol)溶于磷酸三甲酯(2ml)中缓慢滴加到反应液中，加完0℃反应3h，LCMS监控反应，反应完毕后加入水(2ml)，加完搅拌1h，反应完毕后直接将反应体 系送制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间7.0min得化合物45(50mg，28％)。
LC-MS(ESI):m/z＝577.1[M+H]
+。
1H NMR(400MHz,D
2O)δ8.81(s,1H),6.35(s,1H),5.96(d,1H),4.96(s,1H),4.46(s,1H),4.27(d,2H),4.19(s,1H),3.91(s,1H),3.76(s,1H),3.56(s,1H),3.15(s,1H),2.95(d,2H),2.32-2.20(m,2H),1.91(s,2H),1.86–1.76(m,1H),1.72–1.64(m,1H),1.56(s,2H)。
实施例46：
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡唑-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)膦酰基)甲基)磷酸(化合物46)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-ethyl-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物46)
第一步：(3R,4R,5R)-5-((苯甲酰氧基)甲基)-4-乙基-4-羟基四氢呋喃-2,3-二乙酸二乙酯(46A)
(3R,4R,5R)-5-((benzoyloxy)methyl)-4-ethyl-4-hydroxytetrahydrofuran-2,3-diyldiacetate(46A)
化合物45A(700mg，1.93mmoL)溶于乙酸乙酯(10mL)中，加入Pd/C(21mg,0.193mmoL)，抽干瓶中气体后插入氢气球，于室温反应2小时，TLC监测反应完毕后垫上硅藻 土过滤并用乙酸乙酯洗净，有机相抽干后所得残留物直接投入下一步反应。
第二步：((2R,3R,4R,5R)-4-乙酰氧基-5-(4,6-二氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-乙基-3-羟基四氢呋喃-2-基)苯甲酸甲酯(46B)
((2R,3R,4R,5R)-4-acetoxy-5-(4,6-dichloro-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-ethyl-3-hydroxytetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(46B)
化合物46A(730mg，2.17mmoL)与4,6-二氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶(452mg,2.39mmoL)溶解于干燥乙腈(30mL)中，搅拌下滴入四氯化锡(1.13g,4.35mmoL)加完升温至80℃反应2小时，TLC监测反应完毕后加入饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)和水100(mL),以乙酸乙酯(30mL x 8)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后经柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝2:1)得白色泡状化合物46B(65mg，6.7％2steps)。
第三步：((2R,3R,4R,5R)-4-乙酰氧基-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑基[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-乙基-3-羟基四氢呋喃-2-基)苯甲酸甲酯(46C)
((2R,3R,4R,5R)-4-acetoxy-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-ethyl-3-hydroxytetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(46C)
化合物46B(65mg，0.131mmoL)溶于干燥二氯甲烷(50mL)，于室温下加入三乙胺(67mg,0.657mmoL)与顺式-7-氮杂双环[3.3.0]辛烷(29mg，0.197mmoL)，加完于室温下反应2小时。TLC监测反应结束后直接抽干。粗品经硅胶柱色谱纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝2:1)得白色发泡状固体化合物46C(70mg，93.5％)。
LC-MS(ESI):1.07min,570.2[M+H]
+。
第四步：(2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-乙基-2-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(46D)
(2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-ethyl-2-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-3,4-diol(46D)
化合物46C(70mg，0.123mmoL)溶于甲醇(3mL)，于室温下加入碳酸钾(67.9mg,0.491mmoL)，加完于室温下反应1小时。TLC监测反应结束后加入饱和氯化铵水溶液(2mL)和水(5mL)，以乙酸乙酯(2mL x 8)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后经柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1:2至1:10)得白色泡状化合物46D(45mg，86.5％)。
第五步：(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡唑-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)膦酰基)甲基)磷酸(化合物46)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-ethyl-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosp horyl)methyl)phosphonic acid(化合物46)
化合物46D(45mg，0.106mmoL)溶于磷酸三甲酯(0.5mL)中，冰浴下降温至0℃，将亚甲基双(二氯化膦)(106mg，0.425mmoL)溶于磷酸三甲酯(0.5mL)中缓慢滴加到反应液中，加完继续于0℃反应3小时，LCMS监控反应完毕后加入水(0.3mL)，加完搅拌0.5小时，反应完毕后直接将反应体系送制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d.洗脱时间10min,得化合物46(27mg，43.7％)。
LC-MS(ESI):0.64min,580.1[M-H]
-；
1H NMR(400MHz,Deuterium Oxide)δ8.26(d,1H),6.23(d,1H),5.01(d,1H),4.36(t,1H),4.23–3.97(m,3H),3.94–3.85(m,1H),3.70(s,1H),3.57(dd,1H),3.00(s,1H),2.88(s,1H),2.32(t,2H),1.95(dt,3H),1.88–1.71(m,3H),1.71–1.52(m,2H),,1.12(t,3H)。
实施例47：
(((((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑基[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-环丙基-3,4-二羟四氢呋喃-2-基)甲氧基(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物47)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-cyclopropyl-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物47)
第一步：(3aR,5R,6R,6aR)-5-((叔丁基二苯基硅氧基)甲基)-6-环丙基-2,2-二甲基四氢呋喃 [2,3-d][1,3]二氧杂环-6-醇(47A)
(3aR,5R,6R,6aR)-5-(((tert-butyldiphenylsilyl)oxy)methyl)-6-cyclopropyl-2,2-dimethyltetrahydrofuro[2,3-d][1,3]dioxol-6-ol(47A)
化合物32A(6.0g，14.1mmoL)溶于干燥四氢呋喃(200mL)中，冰水浴条件下滴入环丙基溴化镁(28.1mL,1M in dry THF,28.1mmoL)，滴加完后升温至60℃反应约6小时。TLC监测反应完毕后，加入饱和氯化铵水溶液(100mL)和水(300mL)，以乙酸乙酯(100mL x 3)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩后所得残留物(7g)直接投入下一步反应。
第二步：(3aR,5R,6R,6aR)-6-环丙基-5-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[2,3-d][1,3]二氧杂环-6-醇(47B)
(3aR,5R,6R,6aR)-6-cyclopropyl-5-(hydroxymethyl)-2,2-dimethyltetrahydrofuro[2,3-d][1,3]dioxol-6-ol(47B)
化合物47A(7.0g，14.9mmoL)溶于干燥四氢呋喃(200mL)中，室温下四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(19.4mL,1M in dry THF,19.4mmoL)，滴加完后于室温下继续反应约2小时。TLC监测反应完毕后，加入饱和氯化铵水溶液(100mL)和水(200mL)，以乙酸乙酯(100mL x5)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩后所得粗品经硅胶柱色谱纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝3:7)得无色油状化合物47B(2.64g，81.5％2steps)。
第三步：((3aR,5R,6R,6aR)-6-环丙基-6-羟基-2,2-二甲基四氢呋喃[2,3-d][1,3]二氧杂环-5-基)甲基苯甲酸酯(47C)
((3aR,5R,6R,6aR)-6-cyclopropyl-6-hydroxy-2,2-dimethyltetrahydrofuro[2,3-d][1,3]dioxol-5-yl)methyl benzoate(47C)
化合物47B(2.64g，11.5mmoL)溶于干燥二氯甲烷(150mL)，于室温下加入三乙胺(3.49g,34.4mmoL)与苯甲酰氯(2.10g，14.9mmoL)，加完于室温下反应2小时。TLC监测反应结束后加入饱和氯化铵水溶液(100mL)和水(200mL)，以二氯甲烷(100mL x 5)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩后所得粗品经硅胶柱色谱纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝5:1)得白色发泡状固体化合物47C(3.64g，95.0％)。
第四步：((2R,3S,4R,5S)-3-环丙基-3,4,5-三羟基四氢呋喃-2-基)甲基苯甲酸酯(47D)
((2R,3S,4R,5S)-3-cyclopropyl-3,4,5-trihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(47D)
化合物47C(3.50g，10.5mmoL)溶于三氟乙酸(45mL)和水(5mL)的混合溶剂中，于室温下反应30分钟。加入饱和碳酸氢钠水溶液将PH调至中性后，以二氯甲烷(50mL x 10)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩后所得粗品经硅胶柱色谱纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1:1)得无色油状化合物47D(2.80g，90.9％)。
第五步：(3R,4R,5R)-5-((苯甲酰氧基)甲基)-4-环丙基-4-羟基四氢呋喃-2,3-二乙酸二乙酯(47E)
(3R,4R,5R)-5-((benzoyloxy)methyl)-4-cyclopropyl-4-hydroxytetrahydrofuran-2,3-diyldiacetate(47E)
化合物47D(2.80g，9.51mmoL)溶于吡啶(30mL)，于室温下加入4-二甲氨基吡啶(233mg,1.91mmoL)与乙酸酐(2.43g，23.8mmoL)，加完于室温下反应2小时。TLC监测反应结束后加入二氯甲烷(150mL)，有机相以1N稀盐酸水溶液洗涤(50mL x 3)，除去多余的吡啶后有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩后。粗品经硅胶柱色谱纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝4:1)得白色发泡状固体化合物47E(2.60g，72.2％)。
第六步：((2R,3R,4R,5R)-4-乙酰氧基-3-环丙基-5-(4,6-二氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-羟基四氢呋喃-2-基)苯甲酸甲酯(47F)
((2R,3R,4R,5R)-4-acetoxy-3-cyclopropyl-5-(4,6-dichloro-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-hydroxytetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(47F)
化合物47E(1.5g，3.97mmoL)与4,6-二氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶(825mg,4.37mmoL)溶解于干燥乙腈(50mL)中，搅拌下滴入四氯化锡(2.07g,7.94mmoL)加完于室温下反应4小时，TLC监测反应完毕后加入饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)和水100(mL)，以乙酸乙酯(30mL×8)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后经柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝2:1)得白色泡状化合物47F(140mg，7.0％)。
第七步：((2R,3R,4R,5R)-4-乙酰氧基-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑基[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-环丙基-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲基苯甲酸酯(47G)
((2R,3R,4R,5R)-4-acetoxy-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-cyclopropyl-3-hydroxytetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(47G)
化合物47F(140mg，0.276mmoL)溶于干燥二氯甲烷(10mL)，于室温下加入三乙胺(140mg,1.37mmoL)与顺式-7-氮杂双环[3.3.0]辛烷(61.3mg，0.414mmoL)，加完于室温下反应2小时。TLC监测反应结束后直接抽干。粗品经硅胶柱色谱纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝2:1)得白色发泡状固体化合物47G(130mg，81.1％)。
LC-MS(ESI):582.2[M+H]
+。
第八步：(2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-环丙基-2-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(47H)
(2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-cyclopropyl-2-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-3,4-diol(47H)
化合物47G(130mg，0.224mmoL)溶于甲醇(8mL)，于室温下加入碳酸钾(155mg,1.12mmoL)，加完于室温下反应2小时。TLC监测反应结束后加入饱和氯化铵水溶液(2mL)和水(5mL),以乙酸乙酯(2mL x 8)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后经柱层 析纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1:2至1:10)得化合物47H(89mg，91.2％)。
LC-MS(ESI):436.2[M+H]
+。
第九步：(((((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑基[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-环丙基-3,4-二羟四氢呋喃-2-基)甲氧基(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物47)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-cyclopropyl-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物47)
化合物47H(89mg，0.204mmoL)溶于磷酸三甲酯(1mL)中，冰浴下降温至0℃，将亚甲基双(二氯化膦)(153mg，0.612mmoL)溶于磷酸三甲酯(0.5mL)中缓慢滴加到反应液中，加完继续于0℃反应3小时，LCMS监控反应完毕后加入水(0.5mL)，加完搅拌0.5小时，反应完毕后直接将反应体系送制备HPLC，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d.洗脱时间10min。得化合物47(40mg，33.0％)。
LC-MS(ESI):0.59min,592.1[M-H]
-；
1H NMR(400MHz,Deuterium Oxide)δ8.25(d,1H),6.20(d,1H),5.03(d,1H),4.42–4.25(m,3H),4.13–3.95(m,1H),3.89(td,1H),3.68(td,1H),3.61–3.48(m,1H),3.00(s,1H),2.87(d,1H),2.48–2.27(m,2H),2.05–1.91(m,2H),1.89–1.69(m,2H),1.68–1.51(m,2H),1.24–1.13(m,1H),0.78–0.50(m,4H)。
实施例48：
(((((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑基[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-(1H-1,2,3-三唑-4-基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物48)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(1H-1,2,3-triazol-4-yl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物48)
第一步：((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-(1H-1,2,3-三唑-4-基)四氢呋喃-2-基)苯甲酸甲酯(48A)
((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(1H-1,2,3-triazol-4-yl)tetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(48A)
氮气保护下，将化合物40F(315mg，0.601mmoL)、无水硫酸铜(31mg,0.124mmoL)、抗坏血酸钠(49mg，0.247mmoL)和叠氮基三甲基硅烷(107mg，0.928mmoL)溶于N,N-二甲基甲酰胺/水(4:1,v/v)的混合溶剂(20mL)中，于100℃下反应4小时。TLC监测反应结束后加水(50mL),以二氯甲烷(20mL x 5)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩后所得粗品经硅胶柱色谱纯化(二氯甲烷：甲醇(v/v)＝10:1)得化合物48A(300mg，88.0％)。
LC-MS(ESI):567.2[M+H]
+。
第二步：(2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(羟甲基)-3-(1H-1,2,3-三唑-4-基)四氢呋喃-3,4-二醇(48B)
(2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-2-(hydroxymethyl)-3-(1H-1,2,3-triazol-4-yl)tetrahydrofuran-3,4-diol(48B)
化合物48A(150mg，0.265mmoL)溶于甲醇(6mL)与四氢呋喃(3mL)的混合溶剂中，于室温下加入碳酸钾(110mg,0.794mmoL)，加完于室温下反应5小时。TLC监测反应结束后加入饱和氯化铵水溶液(3mL)和水(5mL),以乙酸乙酯(2mL×8)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后经柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇(v/v)＝10:1)得棕黄色固体化合物48B(90mg，73.5％)。
LC-MS(ESI):463.1[M+H]
+。
第三步：(((((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑基[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-(1H-1,2,3-三唑-4-基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物48)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(1H-1,2,3-triazol-4-yl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物48)
化合物48B(90mg，0.194mmoL)溶于磷酸三甲酯(1mL)中，冰浴下降温至0℃，将亚甲基双(二氯化膦)(146mg，0.583mmoL)溶于磷酸三甲酯(1mL)中缓慢滴加到反应液中，加完继续于0℃反应3小时，LCMS监控反应完毕后加入水(0.5mL)，加完搅拌0.5小时，反应完毕后直接将反应体系送制备HPLC，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品 液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d.洗脱时间10min。得化合物48(38mg，31.4％)。
LC-MS(ESI):619.0[M-H]
-；
1H NMR(400MHz,D2O)δ8.39(s,1H),6.42(s,1H),5.80(s,1H),4.92–4.63(m,2H,overlapped),4.26–4.05(m,1H),3.99–3.71(m,4H),3.62(d,1H),3.03(s,1H),2.90(s,1H),2.07–1.57(m,8H)。
实施例49
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-(2-氮杂双环[2.2.2]辛烷-2-基)-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物49)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-(2-azabicyclo[2.2.2]octan-2-yl)-6-chloro-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物49)
第一步：((2S,4R,5R)-5-(4-(2-氮杂双环[2.2.2]辛烷-2-基)-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-4-乙酰氧基-3-亚甲基四氢呋喃-2-基)甲基苯甲酸酯(49B)
((2S,4R,5R)-5-(4-(2-azabicyclo[2.2.2]octan-2-yl)-6-chloro-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-4-acetoxy-3-methylenetetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(49B)
将28B(1g,2.16mmol)和2-氮杂双环[2.2.2]辛烷盐酸盐(410mg,2.79mmol)加入二氯甲烷中，再加入N,N-二异丙基乙胺(1.12g,8.64mmol)，室温反应2h。TLC监测原料消失，直接将反应液加入硅胶,浓缩后粗产物通过硅胶柱色谱分离纯化(洗脱剂EA/PE＝0-30％)，得到标题化合物(600mg,51.6％)。
LC-MS(ESI):m/z＝538.2[M+H]
+。
第二步：(2R,3R,5S)-2-(4-(2-氮杂双环[2.2.2]辛烷-2-基)-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1- 基)-5-(羟甲基)-4-亚甲基四氢呋喃-3-醇(49C)
(2R,3R,5S)-2-(4-(2-azabicyclo[2.2.2]octan-2-yl)-6-chloro-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-5-(hydroxymethyl)-4-methylenetetrahydrofuran-3-ol(49C)
将49B(600mg,1.12mmol)，碳酸钾(460mg,3.33mmol)加入甲醇(10ml)中，室温反应3h，LC-MS监测反应完全，浓缩除去甲醇，加水(20mL)和乙酸乙酯(20mL×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后粗产物通过硅胶柱色谱分离纯化(洗脱剂DCM:MeOH＝0-5％)，得到标题化合物(430mg,98％)。
LC-MS(ESI):m/z＝392.1[M+H]
+。
第三步：(((((2S,4R,5R)-5-(4-(2-氮杂双环[2.2.2]辛烷-2-基)-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-4-羟基-3-亚甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(49D)
(((((2S,4R,5R)-5-(4-(2-azabicyclo[2.2.2]octan-2-yl)-6-chloro-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-4-hydroxy-3-methylenetetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(49D)
将49C(430mg,1.1mmol)加入磷酸三甲酯(5ml)中，再将亚甲基双氯化磷(830mg,3.31mmol)溶于磷酸三甲酯(1ml)后于冰浴下滴入反应体系中，保持0℃反应3h，LC-MS监测原料消失，冰浴下加入水(1ml)，继续0℃反应1h，C18反相柱纯化，流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)，(A/B＝40％/60％)分离提纯得到标题化合物(200mg 33％)。
LC-MS(ESI):m/z＝550.1[M+H]
+。
第四步：(((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-(2-氮杂双环[2.2.2]辛烷-2-基)-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物49)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-(2-azabicyclo[2.2.2]octan-2-yl)-6-chloro-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物49)
将49D(200mg,0.36mmol)，二水合锇酸钾(10mg)和-N-甲基吗啉-N-氧化物(210mg,1.79mmol)加入丙酮(6ml)和水(2ml)的混合体系中。室温反应过夜，LC-MS监测反应完全，将反应液过滤，滤液减压浓缩掉丙酮，HPLC分离提纯得到标题化合物(18mg 8％)。制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用DMF溶解，用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至40％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。
1H NMR(400MHz,D
2O)δ8.25(s,1H),6.15(d,1H),4.97(d,1H),4.35–4.28(m,1H),4.11(s,2H),3.91–3.57(m,4H),2.31-2.17(m,2H),2.16–1.90(m,2H),1.90-1.66(m,,8H)。
LC-MS(ESI):m/z＝584.1[M+H]
+。
实施例50
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-(金刚烷-1-基氨基)-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物50)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-(adamantan-1-ylamino)-6-chloro-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物50)
第一步：((2S,4R,5R)-4-乙酰氧基-5-(4-(金刚烷-1-基氨基)-6-氯-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-甲基四氢呋喃-2-基)甲基苯甲酸酯(50B)
((2S,4R,5R)-4-acetoxy-5-(4-(adamantan-1-ylamino)-6-chloro-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-methylenetetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(50B)
将28B(1g,2.16mmol)和金刚烷胺(650mg,4.30mmol)加入二氯甲烷中，再加入N,N-二异丙基乙胺(0.83g,6.46mmol)，室温反应16h。TLC监测原料消失，直接将反应液加入硅胶，浓缩后粗产物通过硅胶柱色谱分离纯化(洗脱剂EA/PE＝0-30％)，得到标题化合物(730mg,58％)。
LC-MS(ESI):m/z＝612.2[M+H]
+。
第二步：(2R,3R,5S)-2-(4-(金刚烷-1-基氨基)-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-5-(羟甲基)-4-亚甲基四氢呋喃-3-醇(50C)
(2R,3R,5S)-2-(4-(adamantan-1-ylamino)-6-chloro-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-5-(hydroxymethyl)-4-methylenetetrahydrofuran-3-ol(50C)
将50B(730mg,1.26mmol)，碳酸钾(520mg,3.76mmol)加入甲醇(10ml)中，室温反应3h，LC-MS监测反应完全，有大量白色固体析出，加入水(20ml)，过滤，固体直接用水洗涤，减压浓缩干燥，得到标题化合物(500mg,91％)。
LC-MS(ESI):m/z＝432.2[M+H]
+。
第三步：(((((2S,4R,5R)-5-(4-(金刚烷-1-基氨基)-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-4-羟基-3-亚甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(50D)
(((((2S,4R,5R)-5-(4-(adamantan-1-ylamino)-6-chloro-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-4-hydroxy-3-methylenetetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(50D)
将50C(500mg,1.16mmol)加入磷酸三甲酯(10ml)中，再将亚甲基双氯化磷(870mg,3.48mmol)溶于磷酸三甲酯(2ml)后于冰浴下滴入反应体系中，保持0℃反应3h，LC-MS监测原料消失，冰浴下加入水(0.5ml)，继续0℃反应1h，C
18反相柱纯化，流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)，(A/B＝40％/60％)，分离提纯得到标题化合物(400mg 58％)。
LC-MS(ESI):m/z＝590.1[M+H]
+。
第四步：(((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-(金刚烷-1-基氨基)-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物50)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-(adamantan-1-ylamino)-6-chloro-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物50)
将50D(400mg,0.68mmol),二水合锇酸钾(10mg)和-N-甲基吗啉-N-氧化物(400mg,3.4mmol)加入丙酮(6ml)和水(2ml)的混合体系中。室温反应过夜，LC-MS监测反应完全，将反应液过滤，滤液减压浓缩掉丙酮，HPLC分离提纯得到标题化合物(45mg 10.6％)。制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用DMF溶解，用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至40％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。
1HNMR(400MHz,DMSO)δ8.38(s,1H),8.09(s,1H),6.00(d,1H),4.75(d,1H),4.27-4.22(m,1H),4.07-4.04(m,1H),3.99-3.92(m 1H),3.54(dd,2H),2.22–2.07(m,11H),1.70-1.67(m,6H)
LC-MS(ESI):m/z＝624.1[M+H]
+。
实施例51
((((((2R,4R,5R)-5-(4-(8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-6-氯-1H-吡唑基[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-(羟基甲基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物51)
(((((2R,4R,5R)-5-(4-(8-azabicyclo[3.2.1]octan-8-yl)-6-chloro-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)meth yl)phosphonic acid(化合物51)
第一步：((2S,4R,5R)-5-(4-(8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-6-氯-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-4-乙酰氧基-3-亚甲基四氢呋喃-2-基)苯甲酸甲酯(51A)
((2S,4R,5R)-5-(4-(8-azabicyclo[3.2.1]octan-8-yl)-6-chloro-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-4-acetoxy-3-methylenetetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(51A)
28B(1.0g，2.1mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，然后加入8-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(0.41g，2.7mmol)，二异丙基乙胺(1.1g，8.4mmol)加完室温反应2小时，反应完毕后加水，二氯甲烷(50mL×2)萃取两次，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝2:1)得到标题化合物51A(0.8g，69％)。
LC-MS(ESI):m/z＝538.2[M+H]
+。
第二步：(2R,3R,5S)-2-(4-(8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-6-氯-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-5-(羟甲基)-4-亚甲基四氢呋喃-3-醇(51B)
(2R,3R,5S)-2-(4-(8-azabicyclo[3.2.1]octan-8-yl)-6-chloro-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-5-(hydroxymethyl)-4-methylenetetrahydrofuran-3-ol(51B)
化合物51A(0.8g，1.49mmol)溶于甲醇(8mL)中，再加入碳酸钾(0.62g，4.47mmol)，加完室温搅2小时后，浓缩除去甲醇，加水(20mL)和乙酸乙酯(20mL×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后残留物得到标题化合物51B(0.58g，100％)。
LC-MS(ESI):m/z＝392.1[M+H]
+。
第三步：((((((2S,4R,5R)-5-(4-(8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-6-氯-1H-吡唑基[3,4-d]嘧啶-1-基)-4-羟基-3-亚甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(51C)
(((((2S,4R,5R)-5-(4-(8-azabicyclo[3.2.1]octan-8-yl)-6-chloro-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-4-hydroxy-3-methylenetetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(51C)
化合物51B(0.58g，1.48mmol)溶于磷酸三甲酯(3mL)中，冰浴下降温0℃，亚甲基双(二氯化膦)(1.15g，4.45mmol)溶于磷酸三甲酯(3mL)中缓慢滴加到反应液中，加完控温0℃反应2小时，反应完毕后加入水(1ml)后直接C18反相柱纯化，流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)，(A/B＝40％/60％)，得化合物51C(140mg，20％)。
LC-MS(ESI):m/z＝550.1[M+H]
+。
第四步：((((((2R,4R,5R)-5-(4-(8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-6-氯-1H-吡唑基[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-(羟基甲基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物51)
(((((2R,4R,5R)-5-(4-(8-azabicyclo[3.2.1]octan-8-yl)-6-chloro-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物51)
化合物51C(0.14g，0.25mmol)溶于丙酮(6ml)和水(2ml)的混合溶剂中，加入N-甲基氧化吗啉(0.15g，1.27mmol)，加入催化量二水合锇酸钾(5mg)加完室温下反应15小时，反应完毕后浓缩掉丙酮后直接将反应体系送制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间6.5min得化合物51(0.04g，27％)。
LCMS m/z＝582.0[M-H]
-。
1H NMR(400MHz,D
2O):8.25(s,1H),6.16-6.15(d,1H),4.98-4.96(d,1H),4.91(s,1H),4.70(d,1H),4.33-4.30(t,1H),4.13-4.10(t,2H),3.90-3.81(m,2H),2.29-1.56(m,12H)。
实施例52
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)膦酰基)甲基)磷酸(化合物52)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(prop-1-yn-1-yl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物52)
第一步：(3aR,5R,6R,6aR)-5-((叔丁基二苯基硅氧基)甲基)-2,2-二甲基-6-(丙基-1-炔-1基)四氢呋喃[2,3-d][1,3]二氧杂环-6-醇(52B)
(3aR,5R,6R,6aR)-5-(((tert-butyldiphenylsilyl)oxy)methyl)-2,2-dimethyl-6-(prop-1-yn-1-yl)tetrahydrofuro[2,3-d][1,3]dioxol-6-ol(52B)
32A(5.0g，11.78mmol)溶解于无水四氢呋喃(50mL)中，氮气保护下，干冰乙醇降温到-78℃，滴加1-丙炔基溴化镁(12.96mL，12.96mmol)的四氢呋喃南溶液，滴完后在该温度下反应3小时。反应完毕后，用氯化铵水溶液淬灭反应，用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干得到粗品52B(5.65g，103.22％)，直接用于下一步。
第二步：(3aR,5R,6R,6aR)-5-(羟甲基)-2,2-二甲基-6-(丙基-1-炔-1基)四氢呋喃[2,3-d][1,3]二氧杂环-6-醇(52C)
(3aR,5R,6R,6aR)-5-(hydroxymethyl)-2,2-dimethyl-6-(prop-1-yn-1-yl)tetrahydrofuro[2,3-d][1,3]dioxol-6-ol(52C)
化合物52B(7.0g，15.06mmol)溶于THF(100mL)中，加入四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(19.58mL，19.58mmol)，室温搅拌3小时。反应完毕后旋去四氢呋喃，加入乙酸乙酯(50mL)，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1:1)得到52C(2.82g，82.76％)。
第三步：((3aR,5R,6R,6aR)-6-羟基-2,2-二甲基-6-(丙基-1-炔-1基)四氢呋喃[2,3-d][1,3]二氧杂环-5-基)甲基苯甲酸酯(52D)
((3aR,5R,6R,6aR)-6-hydroxy-2,2-dimethyl-6-(prop-1-yn-1-yl)tetrahydrofuro[2,3-d][1,3]dioxol-5-yl)methyl benzoate(52D)
52C(2.82g，12.46mmol)溶解于二氯甲烷(28mL)中，氮气保护下降温至0℃，加入三乙胺(3.78g，37.38mmol)，滴加苯甲酰氯(2.28g，16.20mmol)，滴完该温度下反应3小时。反应完全后，加入水淬灭反应，分液，水相用二氯甲烷(20mL)萃取一次，合并有机相，盐水洗，干燥，过滤，滤液浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝5:1)得到52D(3.27g，79.44％)。
第四步：((2R,3S,4R,5S)-3,4,5-三羟基-3-(丙基-1-炔-1基)四氢呋喃-2-基)甲基苯甲酸酯(52E)
((2R,3S,4R,5S)-3,4,5-trihydroxy-3-(prop-1-yn-1-yl)tetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(52E)
52D(3.27g，9.90mmol)放入单口瓶中，加入三氟乙酸(9mL)和水(1mL)，室温搅拌3小时。反应完后，旋去大部分三氟乙酸，加入乙酸乙酯(20mL),用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤直到水相为碱性，然后无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1:1)得到52E(1.37g，47.67％)。
第五步：(2R,3R,4R,5R)-5-((苯甲酰氧基)甲基)-4-羟基-4-(丙基-1-炔-1基)四氢呋喃-2,3-二乙酸二酯(52F)
(2R,3R,4R,5R)-5-((benzoyloxy)methyl)-4-hydroxy-4-(prop-1-yn-1-yl)tetrahydrofuran-2,3-diyl diacetate(52F)
52E(1.37g，4.72mmol)溶解在吡啶(13mL)中，加入DMAP(0.058g，0.47mmol)，滴入乙酸酐(0.96g，9.44mmol)，室温反应3小时。反应完毕后，旋除去大部分吡啶，加入乙酸乙酯(20mL),用1M的盐酸洗涤，直到将吡啶洗除为止，有机相再用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，旋干，过滤，滤液浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝2:1)得到52F(1.2g，67.91％)。
第六步：((2R,3R,4R,5R)-4-乙酰氧基-5-(4,6-二氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-羟基-3-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃-2-基)苯甲酸甲酯(52G)
((2R,3R,4R,5R)-4-acetoxy-5-(4,6-dichloro-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-hydroxy-3-(prop-1-yn-1-yl)tetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(52G)
52F(1.2g，3.31mmol)加入单口瓶中，搅拌加热到90℃呈现熔融状态，加入4,6-二氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶(0.94g，4.96mmol)和1滴四氯化锡,然后升温至130℃，水泵减压下搅拌30分钟，反应完全后，降温至室温，加入二氯甲烷和少量甲醇，超声至大部分溶解，直接加入硅胶拌样，硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝2:1)得到52G(0.5g，29.89％)。
第七步：((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑并 [3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃-2-基)苯甲酸甲酯(52H)
((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(prop-1-yn-1-yl)tetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(52H)
52G(0.5g，0.99mmol)用甲醇(5mL)溶解，加入三乙胺(0.30g，2.97mmol)和八氢环戊二烯[c]吡咯盐酸盐(0.219g，1.48mmol)，室温搅拌3小时，反应完毕后，旋干，硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝2:1)得到52H(0.35g，60.95％)。
第八步：(2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(羟甲基)-3-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃-3,4-二醇(52I)
(2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-2-(hydroxymethyl)-3-(prop-1-yn-1-yl)tetrahydrofuran-3,4-diol(52I)
52H(0.35g，0.6mmol)溶解于甲醇(5mL)中，加入碳酸钾(0.25g，1.80mmol)，室温搅拌3小时，反应完毕后，加入乙酸乙酯(10mL)，用水洗涤，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干，硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1:1)得到52I(0.19g，72.98％)。
第九步：(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊基[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)膦酰基)甲基)磷酸(化合物52)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(prop-1-yn-1-yl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物52)
52I(0.19g，0.44mmol)用溶于磷酸三甲酯(2mL)中，冰浴下降温0℃，亚甲基双(二氯化膦)(0.33g，1.32mmol)溶于磷酸三甲酯(2mL)中缓慢滴加到反应液中，加完控温在0℃下反应2小时，反应完毕后加入水(1mL)后直接将反应体系送制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间6.2min得化合物52(94mg，36.09％)。
LCMS m/z＝592.1[M+H]
-。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.30(s,1H),5.98(d,1H),4.82(t,1H),4.28(td,1H),4.13–4.02(m,2H),4.02–3.93(m,1H),3.91–3.81(m,1H),3.61(dd,1H),3.48(dd,1H),2.93–2.85(m,1H),2.80–2.69(m,1H),2.25–2.00(m,2H),1.93–1.70(m,6H),1.67–1.47(m,3H)。
实施例53:
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((R/S)-2-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物53)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((R/S)-2-(2-fluorophenyl)piperidin-1-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物53)
第一步：(5-(2-氟代苯基)-5-氧代戊基)碳酸叔丁酯(53B)
tert-butyl(5-(2-fluorophenyl)-5-oxopentyl)carbamate(53B)
将53A(10g，57.14mmol)溶于干燥的四氢呋喃(100ml)中，置换氮气三次，将反应体系冷却至-78℃，缓慢滴加异丙基溴化镁(62.86mmol)，滴加完毕温度升至0℃下反应1h。将反应体系冷却至-78℃，滴加溶在四氢呋喃的2-氧代哌啶-1-羧酸叔丁酯(62.86mmol)溶液，滴加完毕自然升温至室温，继续反应2h，应结束用饱和氯化铵溶液(100ml)淬灭，乙酸乙酯(3×100ml)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后得粗品化合物53B直接用于下一步。
LC-MS(ESI):m/z＝196.2[M-100+1]。
第二步：6-(2-氟苯基)-2,3,4,5-四氢吡啶(53C)
6-(2-fluorophenyl)-2,3,4,5-tetrahydropyridine(53C)
将上步粗品溶于甲苯(80ml)中，补加浓盐酸(10ml)，将反应体系置于65℃的油浴锅中 搅拌16h，反应结束将反应体系自然降温至室温，用2M的氢氧化钠水溶液调节反应体系pH＝14，乙酸乙酯(3×100ml)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后得粗品化合物53C直接用于下一步。
LC-MS(ESI):m/z＝178.1[M+1]
+。
第三步：2-(2-氟苯基)哌啶(53D)
2-(2-fluorophenyl)piperidine(53D)
将上步粗品溶于甲醇/水＝4/1(100ml)的混合溶液中，反应体系在冰浴下冷却，分批加入硼氢化钠(4.76g，125.71mmol)，自然升温至室温，在室温下反应1h。反应结束反应体系在0℃下用1M的盐酸水溶液淬灭反应，乙酸乙酯(100ml×3)萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩所得残留物硅胶柱色谱纯化(洗脱剂比例：EA:PE＝0％～50％)，得化合物53D(4.09g，40％)。
LC-MS(ESI):m/z＝180.1[M+1]
+。
第四步：2-(2-氟苯基)哌啶-1-羧酸苄酯(53E和54A)
benzyl-2-(2-fluorophenyl)piperidine-1-carboxylate(53E and 54A)
将53D(4.09g，22.86mmol)溶于二氯甲烷(40ml)中，补加三乙胺(6.93g，68.58mmol)，反应体系置于冰浴中冷却，滴加氯甲酸苄酯(5.85g，34.29mmol)，自然升温至室温，在室温下搅拌2h。反应结束加水(40ml)淬灭反应，二氯甲烷(40ml×2)萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩所得残留物硅胶柱色谱纯化(洗脱剂比例：EA:PE＝0％～20％)，得化合物53E和54A(6.80g，95％)。
LC-MS(ESI):m/z＝314.1[M+1]。
化合物53E和54A的拆分
取2-(2-氟苯基)哌啶-1-羧酸苄酯(化合物53E和54A)(5g)用于拆分，分离后得到化合物53E(保留时间：1.257s，2.31g,ee％＝100％)，化合物54A(保留时间：1.553s，2.34g，ee％＝100％)。拆分条件：仪器:Waters 150MGM；柱:DAICEL CHIRALPAK AD；流动相:A for CO
2and B for EtOH(0.1％NH3·H2O))；梯度:B 40％；流量:120mL/min；背压:100bar；柱温:35℃；波长:220nm；周期:13min；
第五步：(R/S)-2-(2-氟苯基)哌啶(53F)
(R/S)-2-(2-fluorophenyl)piperidine(53F)
将化合物53E(2g，6.48mmol)溶于甲醇(20ml)中，置换氮气三次，补加Pd/C(20mg)，置换氢气三次，在室温下反应过夜，反应完全后，过滤，滤饼用甲醇洗涤，滤液旋干得到化合物53F(1.12g，98％)。
LC-MS(ESI):m/z＝180.2[M+1]
+。
第六步：((2S,4R,5R)-4-乙酰氧基-5-(6-氯-4-((R/S)-2-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-1H-吡唑并 [3,4-d]嘧啶-1-基)-3-亚甲基四氢呋喃-2-基)苯甲酸甲酯(53G)
((2S,4R,5R)-4-acetoxy-5-(6-chloro-4-((R/S)-2-(2-fluorophenyl)piperidin-1-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-methylenetetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(53G)
化合物53F(1.12g，6.26mmol)溶于二氯甲烷(10ml)中，加入三乙胺(1.90g，18.77mmol)和化合物28B(2.42g，5.22mmol)加完室温下反应6小时，反应完毕浓缩所得残留物硅胶柱色谱纯化(洗脱剂比例：EA:PE＝0％～30％)得目标化合物53G(1.83g，58％)。
LC-MS(ESI):m/z＝606.2[M+1]
+。
第七步：(2R,3R,5S)-2-(6-氯-4-((R/S)-2-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-yl)-5-(羟甲基)-4-亚甲基四氢呋喃-3-醇(53H)
(2R,3R,5S)-2-(6-chloro-4-((R/S)-2-(2-fluorophenyl)piperidin-1-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-5-(hydroxymethyl)-4-methylenetetrahydrofuran-3-ol(53H)
化合物53G(1.83g，3.02mmol)溶于甲醇(20ml)中，加入碳酸钾(1.25g，9.06mmol)，加完室温下反应4小时，加入水(20ml)淬灭反应，乙酸乙酯(30ml×3)萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩所得残留物硅胶柱色谱纯化(洗脱剂比例：MeOH:EA＝0％～10％)，得产物53H(1.36g，98％)。
LC-MS(ESI):m/z＝460.1[M+1]
+。
第八步：(((((2S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((R/S)-2-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-1H-吡唑并[3,4-d])嘧啶-1-基)-4-羟基-3-亚甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(53I)
(((((2S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((R/S)-2-(2-fluorophenyl)piperidin-1-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-4-hydroxy-3-methylenetetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(53I)
化合物53H(200mg，0.43mmol)溶于磷酸三甲酯(2ml)中，冰浴下降温0℃，亚甲基双(二氯化膦)(435mg，1.74mmol)溶于磷酸三甲酯(2ml)中缓慢滴加到反应液中，加完0℃反应3小时，LCMS监控反应，反应完毕后加入水(2ml)，加完搅拌1小时，反应完毕后直接将反应体系送制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间7.0min得化合物53I(156mg，59％)。
LC-MS(ESI):m/z＝618.2[M+1]
+。
第九步：(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((R/S)-2-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物53)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((R/S)-2-(2-fluorophenyl)piperidin-1-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d ]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物53)
化合物53I(156mg，0.25mmol)，N-甲基吗啉氧化物(103mg，0.76mmol)溶于丙酮(3ml)和水(1mL)中，室温下加入锇酸钾(VI)二水合物(10mg)，加完室温反应16小时，反应完毕加亚硫酸钠淬灭反应，反应液浓缩后送制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间6.5min得化合物42(60mg，36％)。
LC-MS(ESI):m/z＝652.2[M+1]
+。
1H NMR(400MHz,D
2O)δ7.99(s,1H),7.09(t,4H),6.13(d,1H),5.90(s,1H),4.88(d,1H),4.51(s,1H),4.28(s,1H),4.09(s,2H),3.82(q,2H),3.49(d,1H),2.22(dd,4H),1.76(d,2H),1.53(d,,2H)。
19F NMR(377MHz,D
2O)δ-114.54。
实施例54：
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((S/R)-2-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物54)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((S/R)-2-(2-fluorophenyl)piperidin-1-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物54)
第一步：(S/R)-2-(2-氟苯基)哌啶(54B)
(S/R)-2-(2-fluorophenyl)piperidine(54B)
将化合物54A(2g，6.48mmol)溶于甲醇(20ml)中，置换氮气三次，补加Pd/C(20mg)，置换氢气三次，在室温下反应过夜，反应完全后，过滤，滤饼用甲醇洗涤，滤液旋干得到化合物54B(1.11g，98％)。
LC-MS(ESI):m/z＝180.2[M+1]
+。
第二步：((2S,4R,5R)-4-乙酰氧基-5-(6-氯-4-((S/R)-2-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-亚甲基四氢呋喃-2-基)苯甲酸甲酯(54C)
((2S,4R,5R)-4-acetoxy-5-(6-chloro-4-((S/R)-2-(2-fluorophenyl)piperidin-1-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-methylenetetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(54C)
化合物54B(1.11g，6.26mmol)溶于二氯甲烷(10ml)中，加入三乙胺(1.90g，18.77mmol)和化合物28B(2.42g，5.22mmol)加完室温下反应6小时，反应完毕浓缩所得残留物硅胶柱色谱纯化(洗脱剂比例：EA:PE＝0％～30％)得目标化合物54C(1.81g，48％)。
LC-MS(ESI):m/z＝606.2[M+1]
+。
第三步：(2R,3R,5S)-2-(6-氯-4-((S/R)-2-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-yl)-5-(羟甲基)-4-亚甲基四氢呋喃-3-醇(54D)
(2R,3R,5S)-2-(6-chloro-4-((S/R)-2-(2-fluorophenyl)piperidin-1-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-5-(hydroxymethyl)-4-methylenetetrahydrofuran-3-ol(54D)
化合物54C(1.81g，2.99mmol)溶于甲醇(20ml)中，加入碳酸钾(1.25g，9.06mmol)，加完室温下反应4小时，加入水(20ml)淬灭反应，乙酸乙酯(30ml×3)萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩所得残留物硅胶柱色谱纯化(洗脱剂比例：MeOH:EA＝0％～10％)，得产物54D(1.35g，98％)。
LC-MS(ESI):m/z＝460.1[M+1]
+。
第四步：(((((2S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((S/R)-2-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-1H-吡唑并[3,4-d])嘧啶-1-基)-4-羟基-3-亚甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(54E)
(((((2S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((S/R)-2-(2-fluorophenyl)piperidin-1-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-4-hydroxy-3-methylenetetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(54E)
化合物54D(200mg，0.43mmol)溶于磷酸三甲酯(2ml)中，冰浴下降温0℃，亚甲基双(二氯化膦)(435mg，1.74mmol)溶于磷酸三甲酯(2ml)中缓慢滴加到反应液中，加完0℃反应3小时，LCMS监控反应，反应完毕后加入水(2ml)，加完搅拌1小时，反应完毕后直接将反应体系送制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间7.0min得化合物54E(155mg，59％)。
LC-MS(ESI):m/z＝618.2[M+1]
+。
第五步：(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((S/R)-2-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧 啶-1-基)-3,4-二羟基-3-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物54)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((S/R)-2-(2-fluorophenyl)piperidin-1-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物54)
化合物54E(156mg，0.25mmol)，N-甲基吗啉氧化物(103mg，0.76mmol)溶于丙酮(3ml)和水(1mL)中，室温下加入锇酸钾(VI)二水合物(10mg),加完室温反应16小时，反应完毕加亚硫酸钠淬灭反应，反应液浓缩后送制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间6.5min得化合物54(57mg，35％)。
LC-MS(ESI):m/z＝652.2[M+1]
+。
1H NMR(400MHz,D
2O)δ8.09(s,1H),7.31(s,1H),7.19(dd,2H),7.10(t,1H),6.16(d,1H),5.97(s,1H),4.95(d,1H),4.58(s,1H),4.30(t,1H),4.15–4.00(m,2H),3.85(q,2H),3.62(s,1H),2.25(s,2H),2.19(d,1H),2.15(s,1H),1.90(s,1H),1.78(s,1H),1.66(s,2H)。
19F NMR(376MHz,D
2O)δ-114.64。
实施例55：
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-(4,4-二甲基-1,4-氮杂硅烷-1-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物55)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-(4,4-dimethyl-1,4-azasilinan-1-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(化合物55)
第一步：((2S,4R,5R)-4-乙酰氧基-5-(6-氯-4-(4,4-二甲基-1,4-氮杂硅烷-1-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-亚甲基四氢呋喃-2-基)苯甲酸甲酯(55A)
((2S,4R,5R)-4-acetoxy-5-(6-chloro-4-(4,4-dimethyl-1,4-azasilinan-1-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-methylenetetrahydrofuran-2-yl)methylbenzoate(55A)
化合物28B(1.5g，3.24mmol)溶于二氯甲烷(15ml)中，然后加入4,4-二甲基-[1,4]硅杂哌啶盐酸盐(0.64，3.86mmol)，降温至0℃，然后加入三乙胺(0.99g，9.74mmol)加完室温反应1小时，反应完毕后反应液直接浓缩，浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝4:1)得到化合物55A(0.7g，38.8％)。
LC-MS(ESI):m/z＝556.1[M+H]
+。
第二步：(2R,3R,5S)-2-(6-氯-4-(4,4-二甲基-1,4-氮杂硅烷-1-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-5-(羟甲基)-4-亚甲基四氢呋喃-3-醇(55B)
(2R,3R,5S)-2-(6-chloro-4-(4,4-dimethyl-1,4-azasilinan-1-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-5-(hydroxymethyl)-4-methylenetetrahydrofuran-3-ol(55B)
化合物55A(0.7g，1.26mmol)溶于甲醇(10ml)中，加入碳酸钾(3.78g，2.61mmol)加完室温搅拌3小时，反应完毕后，反应液浓缩，浓缩残留物加入水，二氯甲烷(50ml×2)萃取两次，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝3:1)得到标题化合物55B(0.46g，89.0％)。
LC-MS(ESI):m/z＝410.1[M+H]
+。
第三步：(((((2S,4R,5R)-5-(6-氯-4-(4,4-二甲基-1,4-氮杂硅烷-1-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶)-1-基)-4-羟基-3-亚甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(55C)
(((((2S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-(4,4-dimethyl-1,4-azasilinan-1-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-4-hydroxy-3-methylenetetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydr-oxy)phosphoryl)methyl)phosphonic acid(55C)
化合物55B(0.46g，1.12mmol)溶于磷酸三甲酯(5ml)中，冰浴下降温0℃，亚甲基双(二氯化膦)(0.84g，3.36mmol)溶于磷酸三甲酯(5ml)中缓慢滴加到反应液中，加完控温0℃反应2小时，反应完毕后加入水(5ml)后直接将反应体系送制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间8.9min得化合物55C(0.31g，48.7％)。
LC-MS(ESI):m/z＝568.1[M+H]
+。
第四步：(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-(4,4-二甲基-1,4-氮杂硅烷-1-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物55)
(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-(4,4-dimethyl-1,4-azasilinan-1-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)(hydroxy)phosphoryl )methyl)phosphonic acid(化合物55)
化合物55C(0.31g，0.2mmol)溶于丙酮(10ml)和水(3ml)的混合溶剂中，加入N-甲基氧化吗啉(0.19g，1.65mmol)，加入催化量二水合锇酸钾(6mg)加完室温下反应15小时，LCMS监控反应，反应完毕后浓缩掉丙酮溶剂后直接将反应体系送制备，制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间6.5min得化合物55(170mg，51.3％)。
LC-MS(ESI):m/z＝600.1[M-H]
-。
1H NMR(400MHz,D
2O):8.13(s,1H),6.11(d,1H),4.93(d,1H),4.29-4.27(m,1H),4.10-4.07(m,2H),3.94-3.78(m,6H),2.31-2.21(m,2H),0.82(d,4H),0.00(s,6H)。
实施例56：
2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊二烯[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-3,4-二羟基-3-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苄基)丙二酸(化合物56)
2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)-2-(4-(2-oxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)benzyl)malonic acid(化合物56)
第一步：(2R,3R,5S)-5-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊二烯[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-4-亚甲基四氢呋喃-3-醇(56A)
(2R,3R,5S)-5-(((tert-butyldimethylsilyl)oxy)methyl)-2-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydro cyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-4-methylenetetrahydrofuran-3-ol(56A)
化合物29B(5.0g，12.79mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(50ml)中，加入咪唑(4.35g，63.96mmol)，加完氮气保护下降温0～5℃，分批次加入叔丁基二甲基氯硅烷(2.12g，14.07mmol)，加完自然回温反应2小时，反应完毕后加入水淬灭反应，乙酸乙酯(100ml×2)萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，干燥浓缩后残留物柱层析分离纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝3:1)得到化合物56A(5.3g，82％)。
第二步：(2R,3R,5S)-5-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊二烯[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-4-亚甲基四氢呋喃-3-乙酸酯(56B)
(2R,3R,5S)-5-(((tert-butyldimethylsilyl)oxy)methyl)-2-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyc lopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-4-methylenetetrahydrofuran-3-yl a cetate(56B)
化合物56A(5.3g，10.49mmol)溶于二氯甲烷(50ml)中，加入三乙胺(3.18g，31.47mmol)和催化量4-二甲氨基吡啶，加完氮气保护下降温0～5℃，加入乙酸酐(2.14g，20.98mmol)，加完自然回温反应2小时，反应完毕后加入水淬灭反应，二氯甲烷(100ml×2)萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，干燥浓缩后残留物柱层析分离纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝5:1)得到化合物56B(5.6g，97％)。
第三步：(2R,3R,4R,5R)-5-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢-环戊二[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-4-羟基-4-(羟基-氧甲基)四氢呋喃-3-乙酸酯(56C)
(2R,3R,4R,5R)-5-(((tert-butyldimethylsilyl)oxy)methyl)-2-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydro-cyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-4-hydroxy-4-(hydroxymethyl)tetrah ydrofuran-3-yl acetate(56C)
化合物56B(5.6g，10.23mmol)溶于丙酮(120ml)和水(30ml)的混合溶剂中，加入N-甲基氧化吗啉(3.53g，30.69mmol)，加入催化量二水合锇酸钾(110mg)加完室温下反应15小时，反应完毕后浓缩掉丙酮，加入水(50ml)，乙酸乙酯(100ml×2)萃取两次，合并有机相，饱和食盐水洗，饱和碳酸氢钠水溶液洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩后残留物柱层析分离纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝3:1)得到化合物56C(4.6g，77.3％)。
LC-MS(ESI):m/z＝581.2[M+H]
+。
第四步：(6R,8R,9R)-6-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-8-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊二烯[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-2,2-二甲基-1,3,7-三氧杂螺[4.4]壬烷-9-乙酸酯(56D)
(6R,8R,9R)-6-(((tert-butyldimethylsilyl)oxy)methyl)-8-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahy-drocy clopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-2,2-dimethyl-1,3,7-trioxaspiro[4.4]nonan-9-yl acetate(56D)
化合物56C(4.6g，7.91mmol)溶于丙酮(50ml)中，加入催化量的对甲苯磺酸，再加入2,2-二甲氧基丙烷(8.24g，79.1mmol)，加完室温下反应24小时，反应完毕浓缩掉丙酮，加入水(50ml)，乙酸乙酯(100ml×2)萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩后残留物柱层析分离纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝6:1)得到化合物56D(4.0g，81％)。
第五步：(6R,8R,9R)-8-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊二[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基-1,3,7-三氧杂螺[4.4]壬烷-9-乙酸酯(56E)
(6R,8R,9R)-8-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazo-lo[3,4-b]pyridin-1-yl)-6-(hydroxymethyl)-2,2-dimethyl-1,3,7-trioxaspiro[4.4]nonan-9-yl acetate(56E)
化合物56D(4.0g，6.44mmol)溶于四氢呋喃(40ml)中，加入四丁基氟化铵(7.08ml，7.08mmol，1.0mol/L四氢呋喃溶液)，加完室温反应2小时，反应完毕后直接浓缩反应液。浓缩后残留物柱层析分离纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1:1)得到化合物56E(3.1g，95％)。
LC-MS(ESI):m/z＝507.1[M+H]
+。
第六步：二乙基2-(((6R,8R,9R)-9-乙酰氧基-8-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-2,2-二甲基-1,3,7-三氧杂螺[4.4]壬烷-6-基)甲氧基)丙二酸酯(56F)
Diethyl 2-(((6R,8R,9R)-9-acetoxy-8-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-2,2-dimethyl-1,3,7-trioxaspiro[4.4]nonan-6-yl)methoxy)malonate(56F)
化合物56E(3.1g，6.11mmol)溶于甲苯(30ml)中，加入重氮丙二酸二乙酯(2.27g，12.2mmol)，二聚醋酸铑(0.14g，0.32mmol)，加完氮气保护下升温至100℃反应1小时，反应完毕后反应液直接浓缩，浓缩后残留物柱层析分离纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝3:1)得到化合物56F(3.0g，74％)。
第七步：二乙基2-(((6R,8R,9R)-9-乙酰氧基-8-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-2,2-二甲基-1,3,7-三氧杂螺[4.4]壬烷-6-基)甲氧基)-2-(4-硝基苄基)丙二酸酯(56G)
Diethyl 2-(((6R,8R,9R)-9-acetoxy-8-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-2,2-dimethyl-1,3,7-trioxaspiro[4.4]nonan-6-yl)methoxy)-2-(4-nitrobenzyl)malonate(56G)
化合物56F(3.0g，4.51mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(30ml)中，氮气置换三次，加入碳酸钾(1.87g，13.53mmol),加完室温下搅拌30min，再加入对硝基卞溴(1.95g，9.02mmol)， 加完室温下搅拌16小时，反应完毕后加入饱和氯化铵淬灭反应后乙酸乙酯(100ml×2)萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩后残留物柱层析分离纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝3:1)得到化合物56G(2.6g，72％)。
第八步：二乙基2-(((6R,8R,9R)-9-乙酰氧基-8-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-2,2-二甲基-1,3,7-三氧杂螺[4.4]壬-6-基)甲氧基)-2-(4-氨基苄基)丙二酸酯(56H)
Diethyl 2-(((6R,8R,9R)-9-acetoxy-8-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-2,2-dimethyl-1,3,7-trioxaspiro[4.4]nonan-6-yl)methoxy)-2-(4-aminobenzyl)malonate(56H)
化合物56G(2.6g，3.25mmol)溶于乙醇(50mL)和水(10ml)的混合溶剂中，加入铁粉(900mg，16.15mmol)和氯化铵(171mg，3.25mmol)。加完升温至50℃反应4小时，反应完毕后过滤，滤液浓缩后残留物柱层析分离纯化(乙酸乙酯：石油醚(v/v)＝1:1)得到化合物56H(2.1g，84％)。
LC-MS(ESI):m/z＝770.3[M+H]
+。
第九步：二乙基2-(((6R,8R,9R)-9-乙酰氧基-8-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-2,2-二甲基-1,3,7-三氧杂螺[4.4]壬烷-6-基)甲氧基)-2-(4-(3-(3-氯丙基)脲基)苄基)丙二酸酯(56I)
Diethyl 2-(((6R,8R,9R)-9-acetoxy-8-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-2,2-dimethyl-1,3,7-trioxaspiro[4.4]nonan-6-yl)methoxy)-2-(4-(3-(3-chloropropyl)ureido)benzyl)malonate(56I)
化合物56H(2.1g，2.73mmol)溶于二氯甲烷(20ml)中，加入3-氯丙基异氰酸酯(1.31g，10.95mmol)，加完保持25℃反应24小时，反应完毕后反应液直接浓缩，浓缩后残留物柱层析分离纯化(乙酸乙酯：石油醚(v/v)＝1:1)得到化合物56I(1.9g，78.2％)。
第十步：2-(((6R,8R,9R)-8-(6-氯-4-((3aR,6aS)-六氢环戊[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-9-乙酰氧基-2,2-二甲基-1,3,7-三氧杂螺[4.4]壬烷-6-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苄基)丙二酸(56J)
2-(((6R,8R,9R)-8-(6-chloro-4-((3aR,6aS)-hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-9-hydroxy-2,2-dimethyl-1,3,7-trioxaspiro[4.4]nonan-6-yl)methoxy)-2-(4-(2-oxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)benzyl)malonic acid(56J)
化合物56I(0.12g，0.13mmol)溶于超干四氢呋喃(3ml)中，氮气置换三次后降温至0℃，加入氢化钠(10mg，60％含量，0.26mmol)加完升温至25℃反应3小时，反应完毕后冷却至0℃加入水(1ml)，加完室温下搅拌4小时，反应完全后直接送制备纯化。制备HPLC分离方法：1.仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm 滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间15.5min得化合物56J(10mg，10％)。
LC-MS(ESI):m/z＝755.2[M+H]
+。
第十一步：2-(((2R,3R,4R,5R)-5-(6-氯-4-(六氢环戊二烯[c]吡咯-2(1H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-3,4-二羟基-3-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苄基)丙二酸(化合物56)
2-(((2R,3R,4R,5R)-5-(6-chloro-4-(hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)-2-(4-(2-oxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)benzyl)malonic acid(化合物56)
化合物56J(10mg，0.013mmol)溶于三氟乙酸(0.5ml)和水(0.5ml)的混合溶剂中，室温下搅拌15小时，反应完毕直接制备纯化。制备HPLC分离方法：1仪器：waters 2767制备液相；SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间8.6min得化合物56(5mg，53％)。
LC-MS(ESI):m/z＝713.2[M-H]
-。
1H NMR(400MHz,CD
3OD):8.24(s,1H),7.32(d,2H),7.16(d,2H),6.22(s,1H),6.18(d,1H),4.21-4.12(m,4H),4.04-4.01(m,4H),3.87-3.77(m,4H),3.71-3.68(m,2H),3.37-3.35(m,2H),2.91-2.91(m,2H),2.06-1.60(m,8H)。
实施例57：
2-(((2R,3S/R,4R,5R)-5-(4-氨基-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苄基)丙二酸(化合物57)
2-(((2R,3S/R,4R,5R)-5-(4-amino-6-chloro-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)-2-(4-(2-oxotetrahydrop-yrimidin-1(2H)-yl)benzyl)malonic acid(化合物57)
2-(((2R,3R/S,4R,5R)-5-(4-氨基-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苄基)丙二酸(化合物58)
2-(((2R,3R/S,4R,5R)-5-(4-amino-6-chloro-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)-2-(4-(2-oxotetrahydrop-yrimidin-1(2H)-yl)benzyl)malonic acid(化合物58)
第一步：((2S,4R,5R)-4-乙酰氧基-5-(4-氨基-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-亚甲基四氢呋喃-2-基)苯甲酸甲酯(57A)
((2S,4R,5R)-4-acetoxy-5-(4-amino-6-chloro-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-methylenetetrahydrofuran-2-yl)methyl benzoate(57A)
化合物28B(18.0g，38.85mmol)溶于二氯甲烷(100ml)和异丙醇(100ml)的混合溶剂中，室温下加入氨水(14.60g，116.55mmol，28％)加完室温下反应16小时，反应完毕后浓缩掉二氯甲烷后加入水，然后乙酸乙酯(150ml×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝4:1)得到标题化合物57A(15.1g，87.5％)。
LC-MS(ESI):m/z＝444.1[M+H]
+。
第二步：((2S,4R,5R)-4-乙酰氧基-5-(4-(双(叔丁氧羰基)氨基)-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-亚甲基四氢呋喃-2-基)苯甲酸甲酯(57B)
((2S,4R,5R)-4-acetoxy-5-(4-(bis(tert-butoxycarbonyl)amino)-6-chloro-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-methylenetetrahydrofuran-2-yl)methyl-benzoate(57B)
化合物57A(15.0g，33.80mmol)溶于四氢呋喃(150ml)中，并依次加入三乙胺(10.26g，101.43mmol)，4-二甲氨基吡啶(0.41g，3.38mmol)，二碳酸二叔丁酯(22.13g，101.43mmol)，加完室温下反应5小时，反应完毕后直接浓缩，浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝5:1)得到标题化合物57B(19.2g，88.2％)。
第三步：叔丁基(叔丁氧羰基)(6-氯-1-((2R,3R,5S)-3-羟基-5-(羟基-甲基)-4-亚甲基四氢呋喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)氨基甲酸酯(57C)
Tert-butyl(tert-butoxycarbonyl)(6-chloro-1-((2R,3R,5S)-3-hydroxy-5-(hydroxyl-methyl)-4-methylenetetrahydrofuran-2-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-yl)carbam-ate(57C)
化合物57B(19.2g，29.81mmol)溶于二氯甲烷(100ml)和甲醇(190ml)的混合溶剂中，加入碳酸钾固体(12.36g，89.43mmol)，加入当量的水，加完室温下反应1小时，反应完毕后加入水，然后二氯甲烷(150ml×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝2:1)得到标题化合物57C(3.8g，32％)。
LC-MS(ESI):m/z＝498.1[M+H]
+。
第四步：叔丁基(叔丁氧羰基)(1-((2R,3R,5S)-5-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-甲基)-3-羟基-4-亚甲基四氢呋喃-2-基)-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)氨基甲酸酯(57D)
tert-butyl(tert-butoxycarbonyl)(1-((2R,3R,5S)-5-(((tert-butyldimethylsilyl)oxy)-methyl)-3-hydroxy-4-methylenetetrahydrofuran-2-yl)-6-chloro-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-yl)carbamate(57D)
化合物57C(3.8g，9.55mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(38ml)中，加入咪唑(3.25g，47.75mmol)，加完氮气保护下降温0～5℃，分批次加入叔丁基二甲基氯硅烷(2.59g，17.19mmol)，加完0～5℃反应1小时，反应完毕后加入水淬灭反应，乙酸乙酯(100ml×2)萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，干燥浓缩后得到化合物57D粗品(4.8g，98％)，未纯化直接下一步反应。
第五步：(2R,3R,5S)-2-(4-(双(叔丁氧羰基)氨基)-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-5-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-亚甲基四氢呋喃-3-乙酸酯(57E)
(2R,3R,5S)-2-(4-(bis(tert-butoxycarbonyl)amino)-6-chloro-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-5-(((tert-butyldimethylsilyl)oxy)methyl)-4-methylenetetrahydro-furan-3-yl acetate(57E)
化合物57D(4.8g，9.37mmol)溶于二氯甲烷(50ml)中，加入三乙胺(2.84g，28.14mmol)和催化量4-二甲氨基吡啶，加完氮气保护下降温0～5℃，加入乙酸酐(1.91g，18.79mmol)，加完自然回温反应2小时，反应完毕后加入水淬灭反应，二氯甲烷(100ml×2)萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，干燥浓缩后残留物柱层析分离纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝5:1)得到化合物57E(4.2g，80.9％)。
第六步：(2R,3R,5R)-2-(4-(双(叔丁氧羰基)氨基)-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-5-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-羟基-4-(羟甲基)四氢呋喃-3-乙酸酯(57F)
(2R,3R,5R)-2-(4-(bis(tert-butoxycarbonyl)amino)-6-chloro-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-5-(((tert-butyldimethylsilyl)oxy)methyl)-4-hydroxy-4-(hydroxyl-methyl)tetrahydrofuran-3-ylacetate(57F)
化合物57E(4.2g，7.58mmol)溶于丙酮(80ml)和水(20ml)的混合溶剂中，加入N-甲基氧 化吗啉(3.07g，22.74mmol)，加入催化量二水合锇酸钾(84mg)加完室温下反应15小时，反应完毕后浓缩掉丙酮，加入水(50ml)，乙酸乙酯(100ml×2)萃取两次，合并有机相，饱和食盐水洗，饱和碳酸氢钠水溶液洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩后残留物柱层析分离纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝3:1)得到化合物57F(3.8g，85％)。
第七步：(5R,6R,8R,9R)-8-(4-(双(叔丁氧羰基)氨基)-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-6-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-2,2-二甲基-1,3,7-三氧杂螺[4.4]壬烷-9-乙酸酯(57G)
(5R,6R,8R,9R)-8-(4-(bis(tert-butoxycarbonyl)amino)-6-chloro-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-6-(((tert-butyldimethylsilyl)oxy)methyl)-2,2-dimethyl-1,3,7-trioxaspiro[4.4]nonan-9-ylacetate(57G)
化合物57F(3.8g，6.46mmol)溶于丙酮(50ml)中，加入催化量的对甲苯磺酸，在加入2,2-二甲氧基丙烷(6.73g，64.6mmol)，加完升25℃下反应16小时，反应完毕浓缩掉丙酮，加入水(50ml)，乙酸乙酯(100ml×2)萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩后残留物柱层析分离纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝5:1)得到化合物57G(3.4g，83％)。
第八步：(5R,6R,8R,9R)-8-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基-1,3,7-三氧杂螺[4.4]壬烷-9-乙酸酯(57H)
(5R,6R,8R,9R)-8-(4-((tert-butoxycarbonyl)amino)-6-chloro-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-6-(hydroxymethyl)-2,2-dimethyl-1,3,7-trioxaspiro[4.4]nonan-9-yl acetate(57H)
化合物57G(3.4g，5.41mmol)溶于四氢呋喃(40ml)中，加入四丁基氟化铵(8.1ml，8.1mmol，1.0mol/L四氢呋喃溶液)，加完室温反应2小时，反应完毕后直接浓缩反应液。浓缩后残留物柱层析分离纯化(乙酸乙酯：石油醚(v/v)＝1:1)得到化合物57H(2.2g，79％)。
LC-MS(ESI):m/z＝514.1[M+H]
+。
第九步：二叔丁基2-(((5R,6R,8R,9R)-9-乙酰氧基-8-(4-((叔丁氧羰基)氨基)-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2,2-二甲基-1,3,7-三氧杂螺[4.4]壬烷-6-基)甲氧基)丙二酸酯(57I)
Di-tert-butyl 2-(((5R,6R,8R,9R)-9-acetoxy-8-(4-((tert-butoxycarbonyl)amino)-6-chloro-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-2,2-dimethyl-1,3,7-trioxaspiro[4.4]nonan-6-yl)methoxy)malonate(57I)
化合物57H(0.9g，1.75mmol)溶于甲苯(15ml)中，加入重氮丙二酸叔丁酯(0.85g，3.50mmol)，二聚醋酸铑(88mg，0.088mmol)，加完氮气保护下升温至100℃反应1小时，反应完毕后反应液直接浓缩，浓缩后残留物柱层析分离纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝4:1)得到化合物57I(0.8g，62.7％)。
第十步：二叔丁基2-(((5R,6R,8R,9R)-9-乙酰氧基-8-(4-((叔丁氧羰基)氨基)-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2,2-二甲基-1,3,7-三氧杂螺[4.4]壬烷-6-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶 -1(2H)-基)苄基)丙二酸酯(57J)
Di-tert-butyl 2-(((5R,6R,8R,9R)-9-acetoxy-8-(4-((tert-butoxycarbonyl)amino)-6-chloro-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-2,2-dimethyl-1,3,7-trioxaspiro[4.4]nonan-6-yl)methoxy)-2-(4-(2-oxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)benzyl)malonate(57J)
化合物57I(0.8g，1.1mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(10ml)中，氮气置换三次，加入碳酸铯(1.06g，3.25mmol)，加完室温下搅拌30min，再加入1-(4-(氯甲基)苯基)四氢嘧啶-2(1H)-酮(0.49g，2.2mmol)和碘化钾(91mg，0.55mmol)，加完室温下搅拌16小时，反应完毕后加入饱和氯化铵淬灭反应后乙酸乙酯(100ml×2)萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥浓缩后残留物柱层析分离纯化(乙酸乙酯：石油醚(v/v)＝10:1)得到化合物57J(0.9g，89％)。
第十一步：二叔丁基2-(((5S,6R,8R,9R)-8-(4-((叔丁氧羰基)氨基)-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-9-羟甲基-2,2-二甲基-1,3,7-三氧杂螺[4.4]壬烷-6-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苄基)丙二酸酯(57K)
Di-tert-butyl 2-(((5S,6R,8R,9R)-8-(4-((tert-butoxycarbonyl)amino)-6-chloro-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-9-hydroxy-2,2-dimethyl-1,3,7-trioxaspiro[4.4]nonan-6-yl)methoxy)-2-(4-(2-oxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)benzyl)malonate(57K)
化合物57J(0.9g，0.98mmol)溶于乙醇(10ml)中，加入碳酸钾(0.41g，2.97mmol)，加完室温下搅拌30min，再，反应完毕后加入饱和氯化铵淬灭反应后乙酸乙酯(50ml×2)萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥.浓缩后残留物柱层析分离纯化(二氯甲烷：甲醇(v/v)＝10:1)得到化合物57K(0.8g，93.3％)。
LC-MS(ESI):m/z＝874.3[M+H]
+。
第十二步：2-(((2R,3S/R,4R,5R)-5-(4-氨基-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-3-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苄基)丙二酸(化合物57和58)
2-(((2R,3S/R,4R,5R)-5-(4-amino-6-chloro-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxy-3-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)methoxy)-2-(4-(2-oxotetrahydrop-yrimidin-1(2H)-yl)benzyl)malonic acid(化合物57和58)
化合物57K(0.80g，0.91mmol)溶于三氟乙酸(8ml)和水(8ml)的混合溶剂中，室温下搅拌5小时，反应完毕直接制备纯化。制备HPLC分离方法：1仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；2.样品用0.45μm滤头过滤，制成样品液；3.制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈；流动相B：水(含0.1％TFA)；b.梯度洗脱，流动相A含量从5％至50％；c.流量12mL/min；d洗脱时间20min。保留时间7.8min得到化合物57(80mg，14.0％)，保留时间8.5min得化合物58(50mg，8.8％)。
化合物57：LC-MS(ESI):m/z＝620.1[M-H]
-。
化合物57：
1H NMR(400MHz,CD
3OD):8.10(s,1H),7.39(d,2H),7.25(d,2H),6.21(d,1H),4.94(d,1H),4.74(s,2H),4.65(s,1H),4.28-4.25(m,1H),4.01-3.77(m,4H),3.69-3.66(m,2H),3.39-3.36(m,2H),2.09-2.03(m,2H)。
化合物58：LC-MS(ESI):m/z＝620.1[M-H]
-。
化合物58：
1H NMR(400MHz,CD
3OD):8.09(s,1H),7.39(d,2H),7.25(d,2H),6.19(d,1H),4.75(s,2H),4.67(s,1H),4.18-4.17(m,1H),4.07-3.84(m,4H),3.69-3.66(m,2H),3.39-3.36(m,2H),2.09-2.03(m,2H)。
生物测试例
1、体外CD73酶活测试方法
人重组蛋白CD73(Acro,Cat.No.CD3-H52H7)配制成0.04ng/μL的蛋白溶液，底物AMP(Sigma,Cat.No.A1752-1G)配制成100μM的底物溶液。在384孔白色透明底板中加入5μL不同浓度的化合物，加入5μL 0.04ng/μL的重组CD73酶溶液，室温孵育15分钟。加入10μL 100μM的底物溶液，于37℃孵育40分钟后，加入5μL孔雀绿试剂A(R&D,Cat.No.DY996)，室温孵育10分钟，最后加入5μL孔雀绿试剂B，室温孵育20分钟，使用酶标仪PHERAstar FSX仪器检测620nm吸光值。运用origin9.2软件计算IC
50值。抑制率计算公式见式1，其中OD
样品为化合物读数，OD
阴性为不加底物的阴性对照读数，OD
阳性为溶媒对照读数。
抑制率％＝(1-(OD
样品-OD
阴性)/(OD
阳性-OD
阴性))×100％(式1)
实验结果：本发明化合物体外CD73酶活IC
50小于100nM，较优异的化合物IC
50小于50nM，更优异的化合物IC
50小于10nM，最优异的化合物IC
50小于1nM。部分实施例的具体的IC
50值见表1。
表1体外CD73酶活
| 化合物 | IC 50(nM) |
| 12 | 0.4 |
| 18 | 1.8 |
| 24 | 5.3 |
| 25 | 0.4 |
| 26 | 2.9 |
| 27 | 1.7 |
| 28 | 0.7 |
| 29 | 2.6 |
| 30 | 0.2 |
| 31 | 0.7 |
| 32 | 0.9 |
| 33 | 1.2 |
| 38 | 0.3 |
| 40 | 0.06 |
结论：本发明化合物对CD73具有良好的抑制作用。
2、体内药效测试
B16F10体内移植瘤模型
B16F10细胞购置于ATCC，细胞培养基为DMEM+10％FBS+1％双抗，培养于37℃、5％CO
2孵箱中。细胞生长达到接种数量后，收集细胞。含细胞的培养液转入50mL无菌离心管中，1500rpm离心3分钟，离心完毕取出，弃上清液。用预冷PBS重悬细胞后，1500rpm离心3分钟，离心完毕取出，弃上清液，重复2次。最后用预冷PBS重悬细胞，计数后，将细胞用预冷的PBS稀释为1×10
6个/mL。将准备好的细胞悬液置于冰上，用预冷的1mL注射器于右侧皮下腋窝处接种细胞，每只动物100μL。接种第2天记为Day0，随机分组后开始每天灌胃给予化合物28(溶媒为磷酸盐缓冲液)，PD-1抗体(anti-PD-1；BioXcell,Cat.CD279)组与联用组均腹腔注射PD-1抗体(每周2次)。用电子游标卡尺测量肿瘤长径与短径，并记录动物体重。数据分别按照式(1)、式(2)和式(3)处理，计算肿瘤体积与肿瘤生长抑制率，其中a为肿瘤长径，b为肿瘤短径。T为实验结束时给药组肿瘤体积，C为实验结束时溶媒(vehicle)组的肿瘤体积；T
0为实验开始时给药组肿瘤体积，C
0为实验开始时溶媒组的肿瘤体积。
肿瘤体积(mm
3)＝(a×b
2)/2 式(1)
T/C(％)＝(T-T
0)/(C-C
0)×100 式(2)
肿瘤生长抑制率(TGI％)＝100-T/C(％) 式(3)
结果：如图1所示，与溶媒对照组相比，所有给药组动物体重无显著差异，动物体重未出现明显下降，表明动物的耐受性良好，实施例化合物无明显的毒副作用表现。如下表2与图2所示，化合物28联用PD-1抗体的肿瘤生长抑制率达91.61％，明显优于AB680与PD-抗体联用组的抗肿瘤药效。
表2 B16F10体内移植瘤肿瘤生长抑制率
注：AB680结构CAS号为2105904-82-1。
3、各种属药代动力学测试
3.1大鼠药代动力学测试
实验目的：通过单剂量静脉给予受试物于SD大鼠，测定大鼠血浆中受试物的浓度，评价受试物在大鼠体内药代特征。
实验对象：本发明实施例化合物。
试验动物：雄性SD大鼠，220g左右，6～8周龄，3只/化合物。购于成都达硕实验动物有限公司。
试验方法：试验当天，6只SD大鼠按体重随机分组。给药前1天禁食不禁水12～14h，给药后4h给食。按照表3给药。
表3给药信息
静脉给药溶媒：5％DMA+5％Solutol+90％Saline
于给药前及给药后异氟烷麻醉经眼眶取血0.1ml，置于EDTAK2离心管中。5000rpm，4℃离心10min，收集血浆。采血时间点：0,5,15,30min,1,2,4,6,8,24h。分析检测前，所有样品存于-80℃。
3.2小鼠药代动力学测试
实验目的：通过单剂量静脉给予受试物于BALB/c小鼠，测定小鼠血浆中受试物的浓度，评价受试物在小鼠体内药代特征。
实验对象：本发明实施例化合物。
试验动物：雄性BALB/c小鼠，22g左右，6～8周龄，9只/化合物。购于成都达硕实验动物有限公司。
试验方法：试验当天，9只BALB/c小鼠按体重随机分组。给药前1天禁食不禁水12～14h，给药后4h给食。按照表4给药。
表4给药信息
静脉给药溶媒：5％DMA+5％Solutol+90％Saline
于给药前及给药后异氟烷麻醉经眼眶取血0.06ml，置于EDTAK2离心管中。5000rpm，4℃离心10min，收集血浆。采血时间点：0,5,15,30min,1,2,4,6,8,24h。分析检测前，所有样品存于-80℃。
3.3比格犬药代动力学测试
实验目的：通过单剂量静脉给予受试物于比格犬，测定比格犬血浆中受试物的浓度，评价受试物在比格犬体内药代特征。
试验动物：雄性比格犬，8～11kg左右，6只/化合物，购于北京玛斯生物技术有限公司。
试验方法：试验当天，6只比格犬按体重随机分组。给药前1天禁食不禁水12～14h，给药后4h给食。按照表5给药。
表5给药信息
静脉给药溶媒：5％DMA+5％Solutol+90％Saline
于给药前及给药后通过四肢静脉取血1ml，置于EDTAK2离心管中。5000rpm，4℃离心10min，收集血浆。采血时间点：0,5,15,30min,1,2,4,6,8,10,12,24,48,72,96h。分析检测前，所有样品存于-80℃。
3.4食蟹猴药代动力学测试
实验目的：通过单剂量静脉给予受试物于食蟹猴，测定食蟹猴血浆中受试物的浓度，评价受试物在食蟹猴体内药代特征。
实验对象：本发明实施例化合物。
试验动物：雄性食蟹猴，3～5kg左右，6只/化合物，购于苏州西山中科实验动物有限公司。
试验方法：试验当天，6只食蟹猴按体重随机分组。给药前1天禁食不禁水12～14h，给药后4h给食。按照表6给药。
表6给药信息
静脉给药溶媒：5％DMA+5％Solutol+90％Saline
于给药前及给药后通过四肢静脉取血1ml，置于EDTAK2离心管中。5000rpm，4℃离心10min，收集血浆。采血时间点：0,5,15,30min,1,2,4,6,8,10,12,24,48,72,96h分析检测前，所有样品存于-80℃。
本发明的化合物具有优异的药代动力学特征。
4、CYP450酶抑制测试
本试验采用混合人肝微粒体分别与不同浓度的化合物(0.05～50μM)和相应的探药共同孵育后，测定CYP酶活性的变化，计算IC
50值，评价化合物对每种CYP酶的抑制潜能。
5、hERG钾离子通道作用测试
实验平台：电生理手动膜片钳系统
细胞系：稳定表达hERG钾离子通道的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系
实验方法：稳定表达hERG钾通道的CHO(Chinese Hamster Ovary)细胞，在室温下用全细胞膜片钳技术记录hERG钾通道电流。玻璃微电极由玻璃电极毛胚(BF150-86-10，Sutter)经拉制仪拉制而成，灌注电极内液后的尖端电阻为2-5MΩ左右，将玻璃微电极插入放大器探头即可连接至膜片钳放大器。钳制电压和数据记录由pClamp 10软件通过电脑控制和记录，采样频率为10kHz，滤波频率为2kHz。在得到全细胞记录后，细胞钳制在-80mV，诱发hERG钾电流(I
hERG)的步阶电压从-80mV给予一个2s的去极化电压到+20mV，再复极化到-50mV，持续1s后回到-80mV。每10s给予此电压刺激，确定hERG钾电流稳定后(至少1分钟)开始给药过程。化合物每个测试浓度至少给予1分钟，每个浓度至少测试2个细胞(n≥2)。
数据处理：数据分析处理采用pClamp 10，GraphPad Prism 5和Excel软件。不同化合物浓度对hERG钾电流(-50mV时诱发的hERG尾电流峰值)的抑制程度用以下公式计算：
Inhibition％＝[1–(I/Io)]×100％
其中，Inhibition％代表化合物对hERG钾电流的抑制百分率，I和Io分别表示在加药后和加药前hERG钾电流的幅度。
化合物IC
50使用GraphPad Prism 5软件通过以下方程拟合计算得出：
Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50-X)*HillSlope))
其中，X为供试品检测浓度的Log值，Y为对应浓度下抑制百分率，Bottom和Top分别为最小和最大抑制百分率。
本发明的化合物毒副作用小。
Claims (27)
- 一种式(I)所示的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，X 1选自O或S；X 2选自CR x2aR x2b、O、S或NR x2c；Y选自OR 2、-C(R y1R y2)-P(＝O)(OR 2)OR 2、-C(R y1R y2)-P(＝O)(OR 2)NHR y3、-C(R y1R y2)-P(＝O)(OR 2)SR y3、-C(R y1R y2)-R y4、-C(R y1R y2)-P(＝S)(OR 2)OR 2、-C(R y1R y2)-P(＝S)(OR 2)NHR y3或-C(R y1R y2)-P(＝S)(OR 2)SR y3；每个R 1、R 2各自独立地选自H、氘、氨基、C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-10环烷基、3-10元杂环烷基、C 6-10芳基、5-10元杂芳基、-C(R 2aR 2b)-O-C(O)-OR 2c、-C 0-6烷基-S(O) rR 2c、-C 0-6烷基-C(O)R 2c、-C 0-6烷基-C(O)OR 2c或-C 0-6烷基-C(O)NR 2c，所述的烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基任选进一步被1个或多个选自R x的基团取代；r选自1或2；每个R y1、R y2、R y3、R x2a、R x2b、R x2c各自独立选自H、氘、羟基、氰基、C 1-6烷基、氘代C 1-6烷基或卤代C 1-6烷基；R y4选自4-10元杂环烷基、5-10元杂芳基、C 3-10环烷基或C 6-10芳基，所述的杂环烷基、杂芳基、环烷基或芳基任选进一步被1个或多个选自R x的基团取代；每个R 2a、R 2b各自独立选自H、氘、羟基、氰基、卤素、C 1-6烷基、氘代C 1-6烷基、卤代C 1-6烷基、C 3-10环烷基、3-10元杂环烷基、C 6-10芳基或5-10元杂芳基；每个R 2c各自独立选自H、氘、C 1-6烷基、氘代C 1-6烷基、卤代C 1-6烷基、C 3-10环烷基、3-10元杂环烷基、C 6-10芳基或5-10元杂芳基，所述的烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基任选进一步被1个或多个选自R x的基团取代；L 1选自键、S、O、NH、N(C 1-6烷基)或C 1-6烷基，所述的烷基任选进一步被1个或多个选自R x的基团取代；L 2选自-(CR L2aR L2b)n-、*-Z-C 6-10芳基-、*-Z-(5-10元杂芳基)-、*-C 6-10芳基-Z-、*-(5-10 元杂芳基)-Z-、C 2-6烯基或C 2-6炔基，所述的-(CR L2aR L2b)n-中碳原子任选被1个或多个选自N、O、S、S(O)或S(O) 2替代，所述的L 2任选进一步被1个或多个选自R x的基团取代，*表示L 2与P原子相连接的位点；每个R L2a、R L2b各自独立选自H、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、或-C 1-6烷基-O-C 1-6烷基，所述烷基、烷氧基、烯基或炔基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氘代C 1-6烷基、卤代C 1-6烷基、羟基C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、氘代C 1-6烷氧基、卤代C 1-6烷氧基、羟基C 1-6烷氧基、5-10元杂芳基、C 6-10芳基、4-10元杂环烷基或C 3-10环烷基的基团取代；或者，同一个碳原子上的R L2a和R L2b与所连接的碳原子一起形成C 3-6元环烷基或4-6元杂环烷基；每个n各自独立选自1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；每个Z独立选自键、-O-或C 1-6烷基，所述烷基任选进一步被1个或多个选自R x的基团取代；R 4、R 5、R 6a、R 6b、R 7a、R 7b各自独立选自H、氘、羟基、氰基、卤素、叠氮基、氨基、C 1-6烷基、C 3-6环烷基、C 2-6烯基或C 2-6炔基，所述的氨基或烷基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、羟基、氰基或C 1-6烷氧基的基团取代；或者，R 6a和R 6b、或R 7a和R 7b一起形成C 2-6烯基、C 3-6元环烷基或4-6元杂环烷基，所述的烯基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、羟基或氰基的基团取代；或者，R 4、R 5和X 2、或者R 4、R 6a和X 2、或R L2a、R 5和X 2、或R 4、R 7a和X 2一起形成C 5-7环烷基或5-7元杂环烷基；或者，R 4和R 6a、或R 6b和R 7b、或R 4和R L2a、或R 4和X 2一起形成C 3-7环烷基或3-7元杂环烷基；或者，R x2a和R 4、或R x2a和R 5、或R 6a和R 4、或R 6b和R 7b、或R 7a和R 5一起形成一个化学键，条件是最多一组形成一个化学键；Hy选自5-15元杂芳基或5-15元杂环烷基，所述的杂芳基或杂环烷基任选进一步被1个或多个选自R hy的基团取代；R 3选自L 3-R 3a、5-10元杂环烷基、C 5-10环烷基、5-10元杂芳基或C 6-10芳基，所述的杂环烷基、环烷基、杂芳基或芳基任选进一步被1个或多个选自R y的基团取代；L 3选自**-N(R L3)C 1-6烷基-、-N(R L3)-、**-N(R L3)-O-、**-N(R L3)S(O)-、**-N(R L3)S(O) 2-、**-N(R L3)S(O)-C 1-6烷基-、**-N(R L3)S(O) 2-C 1-6烷基-或**-N(R L3)-N＝CH-，**表示L 3与Hy连接位点；R 3a选自H、C 1-6烷基、苄基、5-15元碳环基或者5-15杂环基，所述的烷基、苄基、碳 环基或杂环基任选进一步被1个或多个选自R y的基团取代；R L3各自独立地选自H、氘、C 1-6烷基、卤代C 1-6烷基或氘代C 1-6烷基；或者，R L3和R hy与所连接的原子一起形成5-8元杂环烷基；每个R hy、R x各自独立选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、＝O、SF 5、叠氮基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 2-6烯基或C 2-6炔基，所述烷基、烷氧基、烯基或炔基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氘代C 1-6烷基、卤代C 1-6烷基、羟基C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、氘代C 1-6烷氧基、卤代C 1-6烷氧基、羟基C 1-6烷氧基、-O-C 1-6烷基-C 6-10芳基或-O-C 1-6烷基-(5-10元杂芳基)的基团取代；R y选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、＝O、SF 5、叠氮基、-P(＝O)(C 1-6烷基) 2、-P(＝S)(C 1-6烷基) 2、 -Si(C 1-6烷基) 3、-N＝S(＝O)(C 1-6烷基) 2、-C 1-6烷基-S(＝O)(＝N)、-C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 2-6烯基或C 2-6炔基，所述烷基、烷氧基、氨基、烯基或炔基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氘代C 1-6烷基、卤代C 1-6烷基、羟基C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、氘代C 1-6烷氧基、卤代C 1-6烷氧基或羟基C 1-6烷氧基的基团取代。
- 根据权利要求1所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中L 2选自*-O-(CR L2aR L2b)n’-、*-(CR L2aR L2b)n’-O-、-(CR L2aR L2b)n-、-O-、*-O-(CR L2aR L2b)n’-O-(CR L2aR L2b)m-、*-(CR L2aR L2b)n’-O-(CR L2aR L2b)m-、*-O-(CR L2aR L2b)n’-O-、*-O-N(R L2c)-、*-C(O)C 1-6烷基、*-Z-C 6-10芳基、*-Z-(5-10元杂芳基)、C 2-6烯基或C 2-6炔基，所述的烷基、芳基、杂芳基、烯基或炔基任选进一步被1个或多个选自R x的基团取代；每个R L2a、R L2b、R L2c各自独立选自H、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基或-C 1-6烷基-O-C 1-6烷基，所述烷基、烷氧基、烯基或炔基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氘代C 1-6烷基、卤代C 1-6烷基、羟基C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、氘代C 1-6烷氧基、卤代C 1-6烷氧基、羟基C 1-6烷氧基、5-10元杂芳基、C 6-10芳基、4-10元杂环烷基或C 3-10环烷基的基团取代；或者，同一个碳原子上的R L2a和R L2b与所连接的碳原子一起形成C 3-6元环烷基或4-6元杂环烷基；每个m、n、n’为各自独立选自1、2、3、4或5。
- 根据权利要求1所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，R 3选自L 3-R 3a；R 3a选自H、C 1-6烷基、苄基、5-15元碳环基或者5-15杂环基，所述的烷基、苄基、碳环基或杂环基进一步被1个或多个选自R y的基团取代；当R 3a被2个或2个以上R y取代时，R y选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、＝O、SF 5、叠氮基、-P(＝O)(C 1-6烷基) 2、-P(＝S)(C 1-6烷基) 2、 -Si(C 1-6烷基) 3、-N＝S(＝O)(C 1-6烷基) 2、-C 1-6烷基-S(＝O)(＝N)、-C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 2-6烯基或C 2-6炔基，所述烷基、烷氧基、烯基或炔基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氘代C 1-6烷基、卤代C 1-6烷基、羟基C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、氘代C 1-6烷氧基、卤代C 1-6烷氧基或羟基C 1-6烷氧基的基团取代，条件是，当R 3a被2个R y取代时，R y不为F和SF 5的组合；当R 3a被一个R y取代时，R y选自叠氮基、-P(＝O)(C 1-6烷基) 2、-P(＝S)(C 1-6烷基) 2、 -Si(C 1-6烷基) 3、-N＝S(＝O)(C 1-6烷基) 2或-C 1-6烷基-S(＝O)(＝N)，所述烷基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氘代C 1-6烷基、卤代C 1-6烷基、羟基C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、氘代C 1-6烷氧基、卤代C 1-6烷氧基或羟基C 1-6烷氧基的基团取代。
- 根据权利要求1所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中R 4、R 5、R 6a、R 6b、R 7a、R 7b各自独立选自H、氘、羟基、氰基、卤素、叠氮基、氨基、C 1-6烷基、C 2-6烯基或C 2-6炔基，所述的氨基或烷基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、羟基或氰基的基团取代；或者，R 6a和R 6b、或R 7a和R 7b一起形成C 2-6烯基、C 3-6元环烷基或4-6元杂环烷基，所述的烯基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、羟基或氰基的基团取代；或者，R 4、R 5和X 2、或者R 4、R 6a和X 2、或R 4、R 7a和X 2一起形成C 5-7环烷基或5-7元杂环烷基；或者，R 4和R 6a、或R 6b和R 7b、或R 4和X 2及其连接的原子一起形成C 3-7环烷基、或3-7元杂环烷基；或者，R x2a和R 4、或R x2a和R 5、或R 6a和R 4、或R 6b和R 7b、或R 7a和R 5一起形成一个化学键，条件是最多一组形成一个化学键；条件是 不选自如下结构：
- 根据权利要求1所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中选自
- 根据权利要求1所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中R L2a、R 5和X 2及其连接的原子一起形成C 5-7环烷基、或5-7元杂环烷基；或者，R 4和R L2a及其连接的原子一起形成C 3-7环烷基、或3-7元杂环烷基；进一步，R L2a、R 5和X 2及其连接的原子一起形成6元杂环烷基、或7元杂环烷基；或者，R 4和R L2a及其连接的原子一起形成3元环烷基、4元环烷基、或5元环烷基。
- 根据权利要求1所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，所述化合物具有式(II)结构：
- 根据权利要求1所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，所述化合物具有式(III)、(IV)、(V)、(VI)结构：L 1选自S、O、NH、N(CH 3)或-CH 2-；L 1a选自键、S、O、NH、N(CH 3)或-CH 2-；L 2选自*-O-(CR L2aR L2b) 2-、*-(CR L2aR L2b)n’-O-、-O-、*-O-(CR L2aR L2b)n’-O-(CR L2aR L2b) m-、*-(CR L2aR L2b)n’-O-(CR L2aR L2b) m-、*-O-(CR L2aR L2b)n’-O-、*-O-N(R L2c)-、*-C(O)C 1-6烷基-、*-Z-C 6-10芳基-、*-Z-(5-10元杂芳基)-、C 2-6烯基或C 2-6炔基，所述的烷基、芳基、杂芳基、烯基或炔基任选进一步被1至3个选自R x的基团取代，*表示L 2与P原子相连接的位点；L 2a选自*-O-(CR L2aR L2b) 2-、*-(CR L2aR L2b)n’-O-、*-O-(CR L2aR L2b)n’-O-(CR L2aR L2b) m-、*-(CR L2aR L2b) 2-O-(CR L2aR L2b) m-、*-O-(CR L2aR L2b)n’-O-、*-O-N(R L2c)-、*-C(O)C 1-6烷基-、*-Z-C 6-10芳基-、*-Z-(5-10元杂芳基)-、C 2-6烯基或C 2-6炔基，所述的烷基、芳基、杂芳基、烯基或炔基任选进一步被1至3个选自R x的基团取代，*表示L 2与P原子相连接的位点；L 2b选自*-O-(CR L2aR L2b) 2-、*-(CR L2aR L2b)n’-O-、-O-、*-O-(CR L2aR L2b)n’-O-(CR L2aR L2b)m-、*-(CR L2aR L2b)n’-O-(CR L2aR L2b) m-、*-O-(CR L2aR L2b)n’-O-、*-O-N(R L2c)-、*-C(O)C 1-6烷基-、*-Z-C 6-10芳基-、*-Z-(5-10元杂芳基)-、C 2-6烯基或C 2-6炔基，所述的烷基、芳基、杂芳基、烯基或炔基任选进一步被1至3个选自R x的基团取代，*表示L 2与P原子相连接的位点；每个R L2a、R L2b、R L2c各自独立选自H、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、C 1-6烷基、C 1-6 烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基或-C 1-6烷基-O-C 1-6烷基，所述烷基、烷氧基、烯基或炔基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氘代C 1-6烷基、卤代C 1-6烷基、羟基C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、氘代C 1-6烷氧基、卤代C 1-6烷氧基、羟基C 1-6烷氧基、5-10元杂芳基、C 6-10芳基、4-10元杂环烷基或C 3-10环烷基的基团取代；或者，同一个碳原子上的R L2a和R L2b与所连接的碳原子一起形成C 3-6元环烷基、或4-6元杂环烷基；X 2选自CH 2或O；每个m、n、n’独立选自1、2或3；条件是，式(V)化合物中，当L 2b选自*-(CR L2aR L2b)-O-(CR L2aR L2b)-时，R L2a、R L2b不同时选自H。
- 根据权利要求8所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，所述化合物具有式(III-2)、(III-3)、(IV-2)、(IV-3)、(V-2)、(V-3)、(VI-2)、(VI-3)结构：p选自0、1或2；R 3a选自5-6元单环环烷基、5-6元单环杂环烷基、8-10元双环环烷基、8-10元双环杂环烷基、11-15元三环环烷基或11-15元三环杂环烷基，所述的环烷基或杂环烷基任选进一步被1至3个选自R y的基团取代。
- 根据权利要求1所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中Hy选自6元杂芳基、5元杂芳基并5元杂芳基、5元杂芳基并苯基、5元杂芳基并5元杂环烷基、5元杂芳基并6元杂环烷基、5元杂环烷基并5元杂芳基、5元杂环烷基并6元杂芳基、5元杂环烷基并苯基、5元杂环烷基并5元杂环烷基、5元杂环烷基并6元杂环烷基、6元杂芳基并5元杂芳基、6元杂芳基并6元杂芳基、6元杂芳基并苯基、6元杂芳基并5元杂环烷基、6元杂芳基并6元杂环烷基、6元杂环烷基并5元杂芳基、6元杂环烷基并6元杂芳基、6元杂环烷基并苯基、6元杂环烷基并5元杂环烷基、6元杂环烷基并6元杂环烷基或者A环选自5-6元杂芳基、5-6元杂环烷基或苯基；B环选自5-6元杂芳基、4-6元杂环烷基或4-6环烷基；C环选自5-6元杂芳基、5-6元杂环烷基或苯基；所述的杂芳基、芳基、苯基或杂环烷基任选进一步被1个或多个选自R hy的基团取代；每个R hy各自独立选自H、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、C 1-6烷基、氘代C 1-6烷基、卤代C 1-6烷基、羟基C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、氘代C 1-6烷氧基、卤代C 1-6烷氧基或羟基C 1-6烷氧基的基团取代。
- 根据权利要求1所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中Hy选自：每个R hy各自独立选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、SF 5、叠氮基、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、C 2-4烯基或C 2-4炔基，所述烷基、烷氧基、烯基或炔基任选进一步被1至3个选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氘代C 1-4烷基、卤代C 1-4烷基、羟基C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、氘代C 1-4烷氧基、卤代C 1-4烷氧基或羟基C 1-4烷氧基的基团取代。
- 根据权利要求1所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中Y选自-C(R y1R y2)-R y4、-C(R y1R y2)-P(＝S)(OR 2)OR 2、-C(R y1R y2)-P(＝S)(OR 2)NR y3或-C(R y1R y2)-P(＝S)(OR 2)SR y3。
- 根据权利要求1所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中所述化合物具有式(VII)结构：每个R L2a1、R L2b1、R L2a2、R L2b2各自独立选自H、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基或-C 1-6烷基-O-C 1-6烷基，所述烷基、烷氧基、烯基或炔基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氘代C 1-6烷基、卤代C 1-6烷基、羟基C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、氘代C 1-6烷氧基、卤代C 1-6烷氧基或羟基C 1-6烷氧基的基团取代；或者，同一个碳原子上的R L2a1和R L2b1与所连接的碳原子一起形成C 3-6元环烷基、或4-6元杂环烷基；或者，同一个碳原子上的R L2a2和R L2b2与所连接的碳原子一起形成C 3-6元环烷基、或4-6元杂环烷基；条件是，R L2a1、R L2b1、R L2a2和R L2b2其中至少3个基团不选自H；L 3选自**-N(R L3)C 1-6烷基-或-N(R L3)-；R 3a选自5-15元碳环基或者5-15杂环基，所述的碳环基或杂环基任选进一步被1个或多个选自R y的基团取代。
- 根据权利要求1所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，所述化合物具有如下(VIII)结构：X 3选自CH或N；R 4、R 5、R 6a、R 7a各自独立选自H、氘、羟基、氰基、卤素、叠氮基、氨基、C 1-6烷基、C 3-6环烷基、C 2-6烯基或C 2-6炔基，所述的氨基或烷基任选进一步被1、2、3个选自氘、卤素、羟基、氰基或C 1-6烷氧基的基团取代；R 3选自-NH-O-R 3a、3-6元单环环烷基、4-6元单环杂环烷基、5-10元螺环、4-10元并环、或5-9元桥环，所述的环烷基、杂环环烷基、螺环、桥环或并环任选进一步被1、2、3个选自R y的基团取代；R 3a选自C 1-6烷基、苄基、3-6元单环环烷基、4-6元单环杂环烷基、5-12元螺环、4-10元并环、或5-9元桥环，所述的环烷基、杂环烷基、螺环、桥环或并环任选进一步被1、2、3个选自R y的基团取代；R y选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、＝O、SF 5或叠氮基；条件是，当R 3为取代或未取代的3-6元单环环烷基、4-6元单环杂环烷基、5-12元螺环、4-10元并环、或5-9元桥环时，R 4、R 5、R 6a、R 7a不同时为H或氘。
- 根据权利要求14所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物：其中，R 4、R 5、R 6a、R 7a各自独立选自H、氘、羟基、氰基、卤素、叠氮基、氨基、C 1-6 烷基、C 3-6环烷基、C 2-6烯基或C 2-6炔基，所述的氨基或烷基任选进一步被1、2、3个选自氘、卤素、羟基、氰基或C 1-6烷氧基的基团取代，条件是，R 4、R 5、R 6a、R 7a不同时为H或氘；R 3选自3-6元单环环烷基、4-6元单环杂环烷基、5-10元螺环、4-10元并环或5-9元桥环，所述的环烷基、杂环环烷基、螺环、桥环或并环任选进一步被1、2、3个选自R y的基团取代；R y选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、＝O、SF 5或叠氮基。
- 根据权利要求15所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中R 4、R 5、R 7a选自H；R 6a选自C 1-6烷基或C 2-6炔基，所述的烷基任选进一步被1、2、3个选自氘、卤素、羟基、氰基或C 1-2烷氧基的基团取代；R 3选自4-10元并环，所述的并环任选进一步被1、2、3个选自R y的基团取代；R y选自氘、卤素、氨基、羟基或＝O。
- 根据权利要求14所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，所述化合物具有如下(IX)结构：X 3为CH或N；R 4、R 5、R 6a、R 7a各自独立选自H、氘、羟基、氰基、卤素、叠氮基、氨基、C 1-6烷基、C 2-6烯基或C 2-6炔基，所述的氨基或烷基任选进一步被1、2、3个选自氘、卤素、羟基或氰基的基团取代；R 3a选自C 1-6烷基、苄基、3-6元单环环烷基、4-6元单环杂环烷基、5-11元螺环、4-10元并环或5-9元桥环，所述的环烷基、杂环环烷基、螺环、桥环或并环任选进一步被1、2、3个选自R y的基团取代；R y选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、＝O、SF 5或叠氮基。
- 根据权利要求17所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、 共晶或氘代物，其中R 4、R 5、R 6a、R 7a选自H；R 3a选自C 1-6烷基、苄基或3-6元单环环烷基，所述的环烷基任选进一步被1、2、3个选自R y的基团取代；R y选自氘、卤素、氨基、羟基或＝O。
- 根据权利要求1所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，所述化合物具有如下(X)结构：X 4为CH或N；R 4、R 5、R 6a、R 7a各自独立选自H、氘、羟基、氰基、卤素、叠氮基、氨基、C 1-6烷基、C 2-6烯基或C 2-6炔基，所述的氨基或烷基任选进一步被1、2、3个选自氘、卤素、羟基或氰基的基团取代；R y选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、＝O、SF 5、叠氮基、-P(＝O)(C 1-3烷基) 2、-P(＝S)(C 1-3烷基) 2、 -Si(C 1-3烷基) 3、-N＝S(＝O)(C 1-3烷基) 2、-C 1-3烷基-S(＝O)(＝N)、-C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、C 2-4烯基或C 2-4炔基，所述烷基、烷氧基、烯基或炔基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氘代C 1-3烷基、卤代C 1-3烷基、羟基C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、氘代C 1-3烷氧基、卤代C 1-3烷氧基或羟基C 1-3烷氧基的基团取代；p选自0、1、2；R hy选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、＝O、SF 5、叠氮基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 2-6烯基或C 2-6炔基，所述烷基、烷氧基、烯基或炔基任选进一步被1个或多个选自氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氘代C 1-6烷基、卤代C 1-6烷基、羟基C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、氘代C 1-6烷氧基、卤代C 1-6烷氧基、羟基C 1-6烷氧基、-O-C 1-6烷基-C 6-10芳基或-O-C 1-6烷基-(5-10元杂芳基)的基团取代。
- 根据权利要求19所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中R 4、R 5、R 7a选自H；R 6a选自C 1-6烷基，所述的烷基任选进一步被1、2、3个选自氘、卤素、羟基、氰基或C 1-2烷氧基的基团取代；p选自0；R hy选自F或Cl。
- 一种化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，所述化合物选自以下结构之一：
- 一种药物组合物，其特征在于，含有权利要求1-21任意一项所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，以及药学上可接受的辅料和/或载体。
- 权利要求1-21任意一项所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，或者权利要求22所述的组合物在制备治疗CD73介导的疾病的药物中的用途。
- 根据权利要求23所述的用途，其中，所述药物单独使用或联合抗PD-1抗体使用。
- 根据权利要求23所述的用途，所述CD73介导的疾病为肿瘤或自身免疫疾病。
- 一种治疗CD73介导的疾病的方法，所述方法包括给药权利要求1-21任意一项所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或共晶，或者权利要求22所述的组合物。
- 根据权利要求26所述的方法，其中，所述CD73介导的疾病为肿瘤或自身免疫疾病。
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