CN117625475A - 防治tmv的微生物代谢物的培养方法、筛选方法及筛选物 - Google Patents
防治tmv的微生物代谢物的培养方法、筛选方法及筛选物 Download PDFInfo
- Publication number
- CN117625475A CN117625475A CN202311618552.4A CN202311618552A CN117625475A CN 117625475 A CN117625475 A CN 117625475A CN 202311618552 A CN202311618552 A CN 202311618552A CN 117625475 A CN117625475 A CN 117625475A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- tmv
- leaf
- metabolites
- screening
- treatment
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 title claims abstract description 53
- 238000012216 screening Methods 0.000 title claims abstract description 27
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 title claims abstract description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 239000000463 material Substances 0.000 title claims abstract description 7
- 238000012136 culture method Methods 0.000 title abstract description 5
- 241000190950 Rhodopseudomonas palustris Species 0.000 claims abstract description 30
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 27
- 241000758794 Asarum Species 0.000 claims description 25
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 17
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 17
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 16
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 16
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 claims description 15
- 241000208125 Nicotiana Species 0.000 claims description 14
- 239000013641 positive control Substances 0.000 claims description 14
- 239000000779 smoke Substances 0.000 claims description 13
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 12
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 claims description 10
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 10
- 239000013642 negative control Substances 0.000 claims description 10
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 claims description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N (+/-)-DABA Natural products NCCC(N)C(O)=O OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000011284 combination treatment Methods 0.000 claims description 8
- 229960003692 gamma aminobutyric acid Drugs 0.000 claims description 8
- DMCPFOBLJMLSNX-UHFFFAOYSA-N indole-3-acetonitrile Chemical compound C1=CC=C2C(CC#N)=CNC2=C1 DMCPFOBLJMLSNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 8
- 235000019504 cigarettes Nutrition 0.000 claims description 7
- 150000001875 compounds Chemical group 0.000 claims description 7
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 claims description 7
- CWVRJTMFETXNAD-FWCWNIRPSA-N 3-O-Caffeoylquinic acid Natural products O[C@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)C[C@H]1OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 CWVRJTMFETXNAD-FWCWNIRPSA-N 0.000 claims description 6
- PZIRUHCJZBGLDY-UHFFFAOYSA-N Caffeoylquinic acid Natural products CC(CCC(=O)C(C)C1C(=O)CC2C3CC(O)C4CC(O)CCC4(C)C3CCC12C)C(=O)O PZIRUHCJZBGLDY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- CWVRJTMFETXNAD-KLZCAUPSSA-N Neochlorogenin-saeure Natural products O[C@H]1C[C@@](O)(C[C@@H](OC(=O)C=Cc2ccc(O)c(O)c2)[C@@H]1O)C(=O)O CWVRJTMFETXNAD-KLZCAUPSSA-N 0.000 claims description 6
- 229940074393 chlorogenic acid Drugs 0.000 claims description 6
- CWVRJTMFETXNAD-JUHZACGLSA-N chlorogenic acid Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)C[C@H]1OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 CWVRJTMFETXNAD-JUHZACGLSA-N 0.000 claims description 6
- FFQSDFBBSXGVKF-KHSQJDLVSA-N chlorogenic acid Natural products O[C@@H]1C[C@](O)(C[C@@H](CC(=O)C=Cc2ccc(O)c(O)c2)[C@@H]1O)C(=O)O FFQSDFBBSXGVKF-KHSQJDLVSA-N 0.000 claims description 6
- 235000001368 chlorogenic acid Nutrition 0.000 claims description 6
- BMRSEYFENKXDIS-KLZCAUPSSA-N cis-3-O-p-coumaroylquinic acid Natural products O[C@H]1C[C@@](O)(C[C@@H](OC(=O)C=Cc2ccc(O)cc2)[C@@H]1O)C(=O)O BMRSEYFENKXDIS-KLZCAUPSSA-N 0.000 claims description 6
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 6
- JXOHGGNKMLTUBP-HSUXUTPPSA-N shikimic acid Chemical compound O[C@@H]1CC(C(O)=O)=C[C@@H](O)[C@H]1O JXOHGGNKMLTUBP-HSUXUTPPSA-N 0.000 claims description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 6
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 5
- 238000013329 compounding Methods 0.000 claims description 5
- 238000005286 illumination Methods 0.000 claims description 5
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims description 5
- 238000003973 irrigation Methods 0.000 claims description 5
- 230000002262 irrigation Effects 0.000 claims description 5
- 239000003053 toxin Substances 0.000 claims description 5
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 claims description 5
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 claims description 5
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N beta-alanine Chemical compound NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 4
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 claims description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 3
- GSXOAOHZAIYLCY-UHFFFAOYSA-N D-F6P Natural products OCC(=O)C(O)C(O)C(O)COP(O)(O)=O GSXOAOHZAIYLCY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- NBSCHQHZLSJFNQ-GASJEMHNSA-N D-Glucose 6-phosphate Chemical compound OC1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O NBSCHQHZLSJFNQ-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 2
- VFRROHXSMXFLSN-UHFFFAOYSA-N Glc6P Natural products OP(=O)(O)OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O VFRROHXSMXFLSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 2
- 241001052560 Thallis Species 0.000 claims description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- RHKKZBWRNHGJEZ-ARQDHWQXSA-N beta-D-fructofuranose 1-phosphate Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@@H]1O RHKKZBWRNHGJEZ-ARQDHWQXSA-N 0.000 claims description 2
- 229940000635 beta-alanine Drugs 0.000 claims description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 claims description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 2
- GSXOAOHZAIYLCY-HSUXUTPPSA-N keto-D-fructose 6-phosphate Chemical compound OCC(=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)COP(O)(O)=O GSXOAOHZAIYLCY-HSUXUTPPSA-N 0.000 claims description 2
- JXOHGGNKMLTUBP-JKUQZMGJSA-N shikimic acid Natural products O[C@@H]1CC(C(O)=O)=C[C@H](O)[C@@H]1O JXOHGGNKMLTUBP-JKUQZMGJSA-N 0.000 claims description 2
- KPGXRSRHYNQIFN-UHFFFAOYSA-N 2-oxoglutaric acid Chemical compound OC(=O)CCC(=O)C(O)=O KPGXRSRHYNQIFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- POOSGDOYLQNASK-UHFFFAOYSA-N tetracosane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC POOSGDOYLQNASK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- VAWYEUIPHLMNNF-OESPXIITSA-N 1-kestose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)OC[C@]1(O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 VAWYEUIPHLMNNF-OESPXIITSA-N 0.000 claims 1
- GIUOHBJZYJAZNP-DVZCMHTBSA-N 1-kestose Natural products OC[C@@H]1O[C@](CO)(OC[C@]2(O[C@H]3O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]3O)O[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]2O)[C@@H](O)[C@@H]1O GIUOHBJZYJAZNP-DVZCMHTBSA-N 0.000 claims 1
- HWXBTNAVRSUOJR-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxyglutaric acid Natural products OC(=O)C(O)CCC(O)=O HWXBTNAVRSUOJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229940009533 alpha-ketoglutaric acid Drugs 0.000 claims 1
- VAWYEUIPHLMNNF-UHFFFAOYSA-N kestotriose Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OCC1(OC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)C(O)C(O)C(CO)O1 VAWYEUIPHLMNNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 abstract description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 2
- 238000012271 agricultural production Methods 0.000 abstract 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract 1
- 241000723873 Tobacco mosaic virus Species 0.000 description 33
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 19
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 7
- 229910010271 silicon carbide Inorganic materials 0.000 description 4
- 241001044671 Piper tuberculatum Species 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 2
- KPGXRSRHYNQIFN-UHFFFAOYSA-L 2-oxoglutarate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC(=O)C([O-])=O KPGXRSRHYNQIFN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 1
- 241000190946 Rhodopseudomonas sp. Species 0.000 description 1
- 241000208292 Solanaceae Species 0.000 description 1
- 241000132004 Symphyotrichum cordifolium Species 0.000 description 1
- 241000723848 Tobamovirus Species 0.000 description 1
- 150000001335 aliphatic alkanes Chemical class 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000000443 biocontrol Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000000853 biopesticidal effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 229930000044 secondary metabolite Natural products 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种防治TMV的微生物代谢物的培养方法、筛选方法及筛选物,所述微生物代谢物为沼泽红假单胞菌GJ‑22,其菌株GJ‑22保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCCNO:17356。本发明通过对沼泽红假单胞菌GJ‑22进行超声及代谢组分析,从中筛选出五种代谢物并得到防治TMV的配方,以期为农业生产中生防微生物源病毒抑制成分的研究和TMV的防治提供新的方向。
Description
技术领域
本发明涉及生物农药技术领域,尤其涉及一种防治TMV的微生物代谢物的培养方法、筛选方法及筛选物。
背景技术
烟草花叶病毒tobacco mosaic virus缩写TMV,为RNA病毒,是烟草花叶病等的病原体,属于Tobamovirus群。侵染茄科等超过36科400多种植物,至今仍无有效的化学治疗方法能抑制病毒的复制和繁殖。微生物源次生代谢产物具有丰富的种类和生物活性。本发明方法是对生防菌沼泽红假单胞菌GJ-22进行超声及代谢组分析,并通过诱导心叶烟抗TMV试验从而筛选并得到五种代谢物成分及配比用以诱导烟草抵抗TMV的侵染。有别于传统的化学农药防治和生物农药防治,其符合我国农业可持续发展和环境保护的最大需求。
发明内容
为解决上述技术问题,本发明的目的是提供一种防治烟草花叶病毒TMV的微生物代谢物的培养方法、筛选方法及筛选物。
本发明的目的通过以下的技术方案来实现:
一种防治TMV的微生物代谢物的培养方法,包括:
所述微生物代谢物为沼泽红假单胞菌GJ-22,其菌株GJ-22保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC NO:17356。
上述沼泽红假单胞菌GJ-22,已于2019年03月19日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC),保藏地址为:中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号,分类命名为:红假单胞菌Rhodopseudomonas sp.保藏编号为CGMCC NO:17356。
进一步地,以2%的接种量接种沼泽红假单胞菌GJ-22到液体培养基中,于30±1℃的恒温培养室,在2500lx-3000lx的白炽灯下光照培养;每24小时于40khr、80w条件下超声5分钟;
培养5天后,细菌过滤器过滤后去除菌体,得到滤液;
对滤液进行代谢组分析;
得到43种差异物代谢物,其中5种代谢物累积量下调,38种代谢物累积量上调,并有13种累积量上调超过0.6倍。
一种防治TMV的微生物代谢物的筛选方法,包括:
分别取13种累积量上调的代谢物的原药粉剂;
按照代谢组中所测物质含量进行复配并逐级筛选。
一种防治TMV的微生物代谢物筛选物,包括:
有效成分复配组为:0.01221μg/Lγ-氨基丁酸、0.00030μg/L 3-吲哚乙腈、0.08842μg/L莽草酸、0.01333μg/L绿原酸和0.01781μg/L 1-蔗果三糖。
与现有技术相比,本发明的一个或多个实施例可以具有如下优点:
超声处理增强了沼泽红假单胞菌GJ-22菌液诱导心叶烟抗烟草花叶病毒TMV的有效成分。
附图说明
图1是超声处理的沼泽红假单胞菌GJ-22菌液诱导心叶烟抗TMV试验示例图;
图2是13种代谢物复配处理诱导心叶烟抗TMV试验示例图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚,下面将结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述。
实施例一
超声处理沼泽红假单胞菌GJ-22菌液并进行诱导心叶烟抗TMV效果试验:
1、沼泽红假单胞菌GJ-22的培养及超声处理:
按2%的接种量接种沼泽红假单胞菌GJ-22到液体培养基中,于30±1℃的恒温培养室,在2500lx-3000lx的白炽灯下光照培养。
每24小时于40khr、80w条件下超声5分钟;培养5天。
2、诱导心叶烟抗TMV试验
心叶烟,移栽6-8周后,选长势均匀一致的心叶烟植株,每株灌根5mL超声处理的沼泽红假单胞菌GJ-22菌液,连续灌根三天,采用未超声处理的沼泽红假单胞菌GJ-22菌液作阳性对照,无菌水作为阴性对照。连续处理三天后,第三、四片叶接TMV病毒粒子。叶面撒金刚砂,每片叶接25μL TMV病毒粒子(浓度为0.74mg/ml),TMV接种后洗瓶冲洗。25℃光照培养,每10株为一个处理,重复三次。72h后统计枯斑数。
结论:试验数据显示,超声处理的沼泽红假单胞菌GJ-22菌液处理组植株接毒72h后,心叶烟叶面枯斑数均明显低于阴性对照组及阳性对照组叶面枯斑数。表1为超声处理后沼泽红假单胞菌GJ-22菌液诱导心叶烟抗TMV试验平均枯斑数统计,图1为超声处理的沼泽红假单胞菌GJ-22菌液诱导心叶烟抗TMV试验图,即超声处理增强了沼泽红假单胞菌GJ-22菌液诱导心叶烟抗TMV作用效果。
表1
实施例二
沼泽红假单胞菌GJ-22菌液代谢物病毒抑制成分的筛选:
1、超声处理的沼泽红假单胞菌GJ-22滤液代谢组分析:
按2%的接种量接种沼泽红假单胞菌GJ-22到其液体培养基,于30±1℃的恒温培养室,在2500lx-3000lx的白炽灯下光照培养。
每24小时于40khr、80w条件下超声5分钟;培养5天后,细菌过滤器过滤后去除菌体,得到滤液。
将上述滤液进行代谢组分析显示:以未做超声处理的样品滤液作为对照,共筛选到43种差异代谢物,5种代谢物累积量下调,38种代谢物累积量上调,其中13种代谢物累积量变化倍数超过0.6倍,如表2所示为沼泽红假单胞菌GJ-22滤液中差异代谢物,分别取上述13种累积量上调的代谢物的原药粉粉剂,按照代谢组中所测物质含量进行复配,上调0.6倍以上的差异代谢物及在各处理中的配比如表3所示。
表2
表3
注:“×”代表13种代谢物组合中去掉该物质。
2、菌液代谢物诱导心叶烟抗TMV成分筛选试验一
A处理:将13种代谢物质纯品按超声代谢组中检测到的含量进行复配即,γ-氨基丁酸0.01221μg/L+3-吲哚乙腈0.00030μg/L+天冬氨酸0.00261μg/L+β-丙氨酸0.00908μg/L+莽草酸0.08842μg/L+二十四烷0.04196μg/L+绿原酸0.01333μg/L+α-酮戊二酸0.00043μg/L+1-蔗果三糖0.01781μg/L+D-果糖-6-磷酸0.00750μg/L+葡萄糖-6-磷酸0.01214μg/L+D-果糖-1-磷酸0.18224μg/L+胞嘧啶0.00675μg/L;
阳性对照:超声处理的沼泽红假单胞菌GJ-22滤液;
阴性对照:无菌水。
心叶烟,移栽6-8周后,选长势均匀一致的心叶烟植株,上述处理每株灌根5mL,采用无菌水作对照。连续灌根三天后,第三、四片叶接TMV病毒粒子。叶面撒金刚砂,每片叶25μL TMV病毒粒子(浓度为0.74mg/ml),TMV接种后洗瓶冲洗。25℃光照培养,每10株为一个处理,重复三次。72h后统计枯斑数。
结论:诱导心叶烟抗TMV试验数据显示,A处理各植株接毒72h后,心叶烟叶面平均枯斑数为32.25个与阳性对照组的31.20个差异不显著,但A处理心叶烟叶面平均枯斑数显著低于阴性对照组62.00个。表4为13种代谢物复配A处理诱导心叶烟抗TMV试验平均枯斑数统计,图2为13种代谢物复配A处理诱导心叶烟抗TMV试验示例图,即A处理13种代谢物中包含超声处理的沼泽红假单胞菌GJ-22滤液中诱导心叶烟抗TMV的有效成分。
表4
3、菌液代谢物诱导心叶烟抗TMV成分筛选试验二
如表3,每次去掉一种代谢物质,然后进行诱导心叶烟抗TMV试验,计算与阳性对照病斑的差异显著性。
B处理:A处理组合中去掉γ-氨基丁酸;
C处理:A处理组合中去掉3-吲哚乙腈;
D-N处理:以此类推;
阳性对照:A处理;
阴性对照:无菌水。
心叶烟,移栽6-8周后,选长势均匀一致的心叶烟植株,上述处理每株灌根5mL,采用无菌水作对照。连续灌根三天后,第三、四片叶接TMV病毒粒子。叶面撒金刚砂,每片叶25μL TMV病毒粒子(浓度为0.74mg/ml),TMV接种后洗瓶冲洗。25℃光照培养,每10株为一个处理,重复三次。72h后统计枯斑数。
诱导心叶烟抗TMV的代谢物复配及筛选试验结果显示,各处理组植株接毒72h后,与阳性对照相比心叶烟叶面枯斑数差异显著的处理分别为处理B、C、F、H和I。与阳性对照相比心叶烟叶面枯斑数差异不显著的处理分别为处理D、E、G、K、L、M和N,表5为菌液代谢物诱导心叶烟抗TMV成分筛选及复配试验平均枯斑数统计。发生显著差异的处理其组合中去掉的成分为有效成分记为“√”,反之差异不显著的为无效成分记为“×”。结果显示,0.01221μg/Lγ-氨基丁酸、0.00030μg/L 3-吲哚乙腈、0.08842μg/L莽草酸、0.01333μg/L绿原酸和0.01781μg/L 1-蔗果三糖为有效成分如表5所示:
表5
注:表中同列不同小写字母表示处理间差异显著(P<0.05);“√”代表判断为有效成分,“×”代表判断为无效成分。
4、菌液代谢物诱导心叶烟抗TMV成分筛选试验三
有效成分复配组:0.01221μg/Lγ-氨基丁酸、0.00030μg/L 3-吲哚乙腈、0.08842μg/L莽草酸、0.01333μg/L绿原酸和0.01781μg/L 1-蔗果三糖;
阳性对照:A处理;
阴性对照:无菌水。
心叶烟,移栽6-8周后,选长势均匀一致的心叶烟植株,上述处理每株灌根5mL,采用无菌水作对照。连续灌根三天后,第三、四片叶接TMV病毒粒子。叶面撒金刚砂,每片叶25μL TMV病毒粒子(浓度为0.74mg/ml),TMV接种后洗瓶冲洗。25℃光照培养,每10株为一个处理,重复三次。72h后统计枯斑数。
试验数据显示,有效成分复配组植株接毒72h后,心叶烟叶面枯斑数均明显低于阴性对照组且与阳性对照A处理差异不显著,表6为有效成分复配组诱导心叶烟抗TMV试验平均枯斑数统计,即本方法筛选到的有效成分复配组能有效的诱导心叶烟抗TMV侵染。
表6
虽然本发明所揭露的实施方式如上,但所述的内容只是为了便于理解本发明而采用的实施方式,并非用以限定本发明。任何本发明所属技术领域内的技术人员,在不脱离本发明所揭露的精神和范围的前提下,可以在实施的形式上及细节上作任何的修改与变化,但本发明的专利保护范围,仍须以所附的权利要求书所界定的范围为准。
Claims (10)
1.一种防治TMV的微生物代谢物的培养方法,其特征在于,
所述微生物代谢物为沼泽红假单胞菌GJ-22,其菌株GJ-22保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC NO:17356。
2.根据权利要求1所述的防治TMV的微生物代谢物的培养方法,其特征在于,
以2%的接种量接种沼泽红假单胞菌GJ-22到液体培养基中,于30±1℃的恒温培养室,在2500lx-3000lx的白炽灯下光照培养;每24小时于40khr、80w条件下超声5分钟;
培养5天,得到沼泽红假单胞菌GJ-22菌液;
所述沼泽红假单胞菌GJ-22菌液可诱导心叶烟抗TMV。
3.根据权利要求1所述的防治TMV的微生物代谢物的培养方法,其特征在于,
以2%的接种量接种沼泽红假单胞菌GJ-22到液体培养基中,于30±1℃的恒温培养室,在2500lx-3000lx的白炽灯下光照培养;每24小时于40khr、80w条件下超声5分钟;
培养5天后,细菌过滤器过滤后去除菌体,得到滤液;
对滤液进行代谢组分析;
得到43种差异物代谢物,其中5种代谢物累积量下调,38种代谢物累积量上调,并有13种累积量上调超过0.6倍。
4.根据权利要求3所述的防治TMV的微生物代谢物的筛选方法,其特征在于,
分别取13种累积量上调的代谢物的原药粉剂;
按照代谢组中所测物质含量进行复配并逐级筛选。
5.根据权利要求4所述的防治TMV的微生物代谢物的筛选方法,其特征在于,所述13种累积量上调的代谢物及含量:γ-氨基丁酸0.01221μg/L、3-吲哚乙腈0.00030μg/L、天冬氨酸0.00261μg/L、β-丙氨酸0.00908μg/L、莽草酸0.08842μg/L、二十四烷0.04196μg/L、绿原酸0.01333μg/L、α-酮戊二酸0.00043μg/L、1-蔗果三糖0.01781μg/L、D-果糖-6-磷酸0.00750μg/L、葡萄糖-6-磷酸0.01214μg/L、D-果糖-1-磷酸0.18224μg/L、胞嘧啶0.00675μg/L。
6.根据权利要求5所述的防治TMV的微生物代谢物的筛选方法,其特征在于,
A处理组合:将13种累积量上调的代谢物按代谢组中所测物质含量进行复配后得到;
阳性对照:超声处理的沼泽红假单胞菌GJ-22滤液;
阴性对照:无菌水;
利用A组合处理各植株,接毒3天后,心叶烟叶面平均枯斑数与阳性对照组叶面平均枯斑数差异不显著,但A处理心叶烟叶面平均枯斑数显著低于阴性对照组。
7.根据权利要求6所述的防治TMV的微生物代谢物的筛选方法,其特征在于,按照代谢组中所测物质含量进行复配为:
将13种累积量上调的代谢物进行A-N的处理组合,其中A处理组合中包括13种累积量上调的代谢物;
B处理组合中去掉γ-氨基丁酸;
C处理组合中去掉3-吲哚乙腈;
D-N处理组合中依次类推去掉13种累积量上调代谢物中的一种;
阳性对照:A处理;
阴性对照:无菌水。
8.根据权利要求7所述的防治TMV的微生物代谢物的筛选方法,其特征在于,
取长势均匀的心叶烟,对各处理进行灌根每株5mL,连续灌根三天后进行TMV摩擦接毒,采用无菌水做对照;
各处理每片叶接25μL TMV病毒粒子,处理72小时后,统计枯斑数;
与阳性对照相比,心叶烟叶面枯斑数差异显著的处理组合分别为B、C、F、H和I;心叶烟叶面枯斑数差异不显著的处理组合分别为D、E、G、K、L、M和N。
9.根据权利要求8所述的防治TMV的微生物代谢物的筛选物,其特征在于,复配组中有效成分分别为:0.01221μg/Lγ-氨基丁酸、0.00030μg/L 3-吲哚乙腈、0.08842μg/L莽草酸、0.01333μg/L绿原酸和0.01781μg/L 1-蔗果三糖。
10.根据权利要求9所述的防治TMV的微生物代谢物的筛选物,其特征在于,取长势均匀的心叶烟每株灌根5mL,连续灌根三天后进行TMV摩擦接毒,72小时后统计叶片枯斑数显示有效成分复配组能有效的诱导心叶烟抗TMV侵染。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202311618552.4A CN117625475B (zh) | 2023-11-29 | 2023-11-29 | 防治tmv的微生物代谢物的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202311618552.4A CN117625475B (zh) | 2023-11-29 | 2023-11-29 | 防治tmv的微生物代谢物的制备方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN117625475A true CN117625475A (zh) | 2024-03-01 |
CN117625475B CN117625475B (zh) | 2024-05-24 |
Family
ID=90017728
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202311618552.4A Active CN117625475B (zh) | 2023-11-29 | 2023-11-29 | 防治tmv的微生物代谢物的制备方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN117625475B (zh) |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101875657A (zh) * | 2009-04-29 | 2010-11-03 | 南开大学 | 娃儿藤碱类生物碱有机酸盐衍生物在农药上的应用 |
CN104403978A (zh) * | 2014-12-10 | 2015-03-11 | 湖南省植物保护研究所 | 沼泽红假单胞菌菌株、菌剂及菌剂的制备方法、胞外蛋白及其提取方法和应用 |
CN104498399A (zh) * | 2014-12-10 | 2015-04-08 | 湖南省植物保护研究所 | 沼泽红假单胞菌菌株、生防菌剂及其制备方法和应用 |
CN110876380A (zh) * | 2019-10-30 | 2020-03-13 | 湖南省植物保护研究所 | 对-香豆酰高丝氨酸内酯在防治烟草花叶病毒病中的应用 |
CN111363056A (zh) * | 2020-03-17 | 2020-07-03 | 湖南省植物保护研究所 | 沼泽红假单胞菌胞外多糖及其制备方法和应用 |
EP4268595A1 (en) * | 2022-04-29 | 2023-11-01 | Multikraft Holding GmbH | Microbial compositions |
-
2023
- 2023-11-29 CN CN202311618552.4A patent/CN117625475B/zh active Active
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101875657A (zh) * | 2009-04-29 | 2010-11-03 | 南开大学 | 娃儿藤碱类生物碱有机酸盐衍生物在农药上的应用 |
CN104403978A (zh) * | 2014-12-10 | 2015-03-11 | 湖南省植物保护研究所 | 沼泽红假单胞菌菌株、菌剂及菌剂的制备方法、胞外蛋白及其提取方法和应用 |
CN104498399A (zh) * | 2014-12-10 | 2015-04-08 | 湖南省植物保护研究所 | 沼泽红假单胞菌菌株、生防菌剂及其制备方法和应用 |
CN110876380A (zh) * | 2019-10-30 | 2020-03-13 | 湖南省植物保护研究所 | 对-香豆酰高丝氨酸内酯在防治烟草花叶病毒病中的应用 |
CN111363056A (zh) * | 2020-03-17 | 2020-07-03 | 湖南省植物保护研究所 | 沼泽红假单胞菌胞外多糖及其制备方法和应用 |
EP4268595A1 (en) * | 2022-04-29 | 2023-11-01 | Multikraft Holding GmbH | Microbial compositions |
Non-Patent Citations (6)
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN117625475B (zh) | 2024-05-24 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN108676778B (zh) | 一株防治土传青枯病的噬菌体及其应用 | |
CN115369062A (zh) | 一种番茄青枯病拮抗细菌wjb0802及其应用 | |
CN114134068A (zh) | 一种多粘类芽孢杆菌菌剂、制备方法及其应用 | |
CN115261233B (zh) | 一株西红花茎腐病生防真菌及其应用 | |
CN114196585B (zh) | 一株用于防治番茄青枯病的伯克霍尔德菌及其应用 | |
CN106754563B (zh) | 一种防治烟草青枯病的微生物组合物及用途 | |
CN113444651B (zh) | 一种西红花内生真菌及其在防治球茎腐烂病中的应用 | |
CN117625475B (zh) | 防治tmv的微生物代谢物的制备方法 | |
CN114525217B (zh) | 一种解钾促生吡咯伯克霍尔德菌及其菌剂和应用 | |
CN114032182B (zh) | 一株兼具拮抗大蒜根腐病病原菌和促生功能的真菌 | |
CN114933980B (zh) | 一种防治黄精根腐病的浅紫链霉菌hjb-xtbg45及其应用 | |
CN115873770A (zh) | 一株贝莱斯芽孢杆菌及其在防治番茄病害中的应用 | |
CN111187732B (zh) | 一种防治苦瓜枯萎病的生防菌株及其应用 | |
CN112831430A (zh) | 一种水丛毛单胞菌菌株、生防菌剂及其制备方法与应用 | |
CN115433689B (zh) | 一种解钾促生产左聚糖微杆菌及其菌剂和应用 | |
CN110791458A (zh) | 防治苦瓜枯萎病的生防菌株、生防菌剂及制备方法、应用 | |
CN114891679B (zh) | 一株荧光假单胞菌及其在防治樱桃枝干病害中的应用 | |
CN112646733B (zh) | 一种柽柳内生拮抗真菌及其分离方法和应用 | |
CN111184029B (zh) | 荧光假单胞菌在双子叶杂草和白粉病防除中的应用及其菌剂、制备和使用方法 | |
CN117887634B (zh) | 一株具有促生作用的细菌及其应用 | |
CN115975886B (zh) | 一株新型假单胞菌及其在作物细菌性病害防治中的应用 | |
CN116064320B (zh) | 一株降解烟碱的烟草内生肠杆菌cylob及其应用 | |
CN116083276B (zh) | 一种花生内生细菌及其在植物病虫害防治中的应用 | |
CN116769667B (zh) | 一种特基拉芽孢杆菌k3-11及其应用 | |
CN118064326A (zh) | 一株根际益生菌克雷伯氏菌属kp01及其应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |