CN117511862A - 一种用于创面修复的脂肪间充质干细胞及其培养方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于皮肤创面修复技术领域，具体涉及一种用于创面修复的脂肪间充质干细胞及其培养方法和应用。采用本发明所述低强度脉冲超声(LIPUS)处理中的频率、强度、脉冲时间和刺激时间的参数对脂肪间充质干细胞(ADSCs)进行处理可以最大限度地激活脂肪间充质干细胞的生物学响应，提高细胞的存活率、活性和功能性，从而加速皮肤创面的细胞增殖、血管生成和基质合成等生物学过程，最终促进创面的愈合，减少瘢痕形成并改善功能恢复。

Description

一种用于创面修复的脂肪间充质干细胞及其培养方法和应用
技术领域
本发明属于皮肤创面修复技术领域，具体涉及一种用于创面修复的脂肪间充质干细胞及其培养方法和应用。
背景技术
在医疗领域中，创面修复是一个关键的课题。烧伤、创伤、糖尿病、慢性溃疡等常导致皮肤的缺损。难治性、慢性创伤及组织缺损导致的疼痛、生理功能缺失、容貌的改变严重影响着病人的行动自由和生活质量，并进一步导致心理和社会问题。传统的创面修复方法包括缝合、皮瓣移植和皮肤移植等，但存在着一些局限性，如长时间愈合、不完全的再生和瘢痕形成等。因此，需要开发新的方法来促进创面修复的速度和质量。
ADSCs(Adipose-derived mesenchymal stem cells，ADSCs)是一类具有自我更新和多向分化潜力的多能干细胞，存在于脂肪组织中。由于其丰富的来源、易获取和较高的增殖能力，ADSCs成为了组织工程和再生医学领域的研究热点。LIPUS(Low-intensity pulsedultrasound，LIPUS)是一种非侵入性的物理刺激技术，已在骨科和软组织修复领域取得了广泛应用。研究表明，LIPUS能够促进骨折愈合、软组织修复和创面愈合等过程。LIPUS通过刺激细胞增殖、分化和基质合成等生物学过程，加速组织再生和修复。
但是，现有的以LIPUS刺激ADSCs增殖的方法存在刺激后ADSCs存活率低的问题，无法更好地激活ADSCs的生物学响应，进而影响其在创面修复过程中的功能性。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于创面修复的脂肪间充质干细胞及其培养方法和应用，所述培养方法可以更好地激活脂肪间充质干细胞的生物性能，使得到的脂肪间充质干细胞存活率和活性更高，创面修复效果更优。
本发明提供了一种用于创面修复的脂肪间充质干细胞的培养方法，包括：
对脂肪间充质干细胞进行低强度脉冲超声处理，得到所述用于创面修复的脂肪间充质干细胞；
所述低强度脉冲超声处理的频率为0.5～2MHz，占空比为10～50％，时间为1～20min，强度为0.1～00W/cm2。
优选的，所述脂肪间充质干细胞的制备方法包括如下步骤：
以含有抗生素和血清的生理盐水对脂肪组织进行浸泡后，对浸泡得到的脂肪组织进行清洗，得到脂肪组织颗粒；
以消化酶对所述脂肪组织颗粒进行组织消化，得到细胞混悬液；
对所述细胞混悬液进行离心，将得到的细胞沉淀进行洗涤，得到所述脂肪间充质干细胞。
优选的，所述抗生素包括青霉素-链霉素双抗，所述含有抗生素和血清的生理盐水中青霉素-链霉素双抗的质量浓度为1％，血清的质量浓度为1％。
优选的，所述消化酶包括胶原酶Ⅰ型；所述胶原酶Ⅰ型的酶活力≥125CDU/mg；所述胶原酶Ⅰ型在组织消化体系中的终浓度为0.5～2mg/mL。
优选的，所述组织消化的条件包括：温度为30～40℃，震荡频率为50～200rpm，时间为0.5～1.5h。
本发明还提供了上述技术方案所述培养方法培养得到的用于创面修复的脂肪间充质干细胞，以细胞的OD450nm计，所述用于创面修复的脂肪间充质干细胞的细胞存活率为≥95％。
本发明还提供了上述技术方案所述用于创面修复的脂肪间充质干细胞在制备皮肤创面修复的产品中的应用。
优选的，所述产品包括药物。
本发明还提供了一种用于皮肤创面修复的药物，所述药物的活性成分包括上述技术方案所述的用于创面修复的脂肪间充质干细胞。
优选的，所述药物的剂型包括注射剂、喷雾剂或搽剂。
有益效果：
本发明提供了一种用于创面修复的脂肪间充质干细胞的培养方法，包括：对脂肪间充质干细胞进行低强度脉冲超声处理，得到所述用于创面修复的脂肪间充质干细胞；所述低强度脉冲超声处理的频率为0.5～2MHz，占空比为10～50％，时间为1～20min，强度为0.1～100W/cm2。采用本发明所述低强度脉冲超声处理中的频率、强度、脉冲时间和刺激时间的参数对脂肪间充质干细胞进行处理可以最大限度地激活脂肪间充质干细胞的生物学响应，提高细胞的存活率、活性和增殖功能性，从而加速皮肤创面的细胞增殖、血管生成和基质合成等生物学过程，最终促进创面的愈合，减少瘢痕形成并改善功能恢复。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1为实施例1中脂肪干细胞流式鉴定分析示意图；
图2为实施例1中LIPUS刺激装置示意图；
图3为实施例1中LIPUS刺激ADSCs条件筛选分析结果示意图；
图4为实施例1中低强度超声处理hADSC-P3活性检测实验结果；
图5为实施例2创面修复过程示意图；
图6为实施例2中实验组和对照组创面闭合时间比较图；
图7为实施例2中ADSCs在组织中的定植分布结果；
图8为实施例2中以Ki-67为增殖标记物的实验组和对照组创面组织学分析示意图；
图9为实施例2中以CD31为增殖标记物的实验组和对照组创面组织学分析示意图；
图10为实施例2中实验组和对照组创面的Masson染色结果示意图；
图11为实施例2中实验组和对照组创面炎症分析结果示意图。
具体实施方式
本发明提供了一种用于创面修复的脂肪间充质干细胞的培养方法，包括：
对脂肪间充质干细胞进行低强度脉冲超声处理，得到所述用于创面修复的脂肪间充质干细胞；
所述低强度脉冲超声处理的频率为0.5～2MHz，占空比为20％，时间为1～20min，强度为0.1～100W/cm2。
本发明优选制备脂肪间充质干细胞，所述脂肪间充质干细胞的制备方法优选包括如下步骤：
以含有抗生素和血清的生理盐水对脂肪组织进行浸泡后，对浸泡得到的脂肪组织进行清洗，得到脂肪组织颗粒；
以消化酶对所述脂肪组织颗粒进行组织消化，得到细胞混悬液；
对所述细胞混悬液进行离心，将得到的细胞沉淀进行洗涤，得到所述脂肪间充质干细胞。
本发明优选获取脂肪组织。本发明所述脂肪组织优选包括无菌且高活性(组织活性≥95％)的脂肪组织，在此基础上，所述脂肪组织的来源优选包括人或动物的脂肪组织，更优选包括吸脂手术获得的脂肪组织；所述吸脂手术获得的脂肪组织可以达到对废弃脂肪组织重新利用，变废为宝的效果，同时此来源的脂肪组织取材来源广，获取方便且低免疫原性不产生免疫排斥反应。本发明对所述获取脂肪组织的具体步骤没有特殊限定，按照本领域常规步骤获取即可，比如抽脂手术或直接切除。
得到所述脂肪组织后，本发明优选以含有抗生素和血清的生理盐水对脂肪组织进行浸泡，以对所述脂肪组织进行消毒。本发明所述抗生素包括包括青霉素-链霉素双抗，所述含有抗生素和血清的生理盐水中的青霉素-链霉素双抗的质量浓度优选为1％，即所述青霉素和链霉素在所述含有抗生素和血清的生理盐水中的质量浓度均优选为1％；所述含有抗生素和血清的生理盐水中血清的浓度优选为1％。本发明所述浸泡的时间优选为5～20min，更优选为15min。
所述浸泡后，本发明优选对浸泡得到的脂肪组织进行清洗，得到脂肪组织颗粒。本发明优选以生理盐水进行所述清洗；所述清洗后还包括对清洗后的混合物进行离心，以通过反复的清洗和离心去除脂肪组织中多余的油脂和废液。本发明对所述清洗和离心的具体步骤没有特殊限定，按照本领域中常规的清洗和离心的步骤进行即可。
得到所述脂肪组织颗粒后，本发明优选以消化酶对所述脂肪组织颗粒进行组织消化，得到细胞混悬液。本发明所述消化酶优选包括胶原酶Ⅰ型；所述胶原酶Ⅰ型的酶活力优选≥125CDU/mg，更优选为100～150CDU/mg；所述胶原酶Ⅰ型在组织消化体系中的终浓度优选为0.5～2mg/mL，更优选为1mg/mL。本发明所述组织消化的温度优选为30～40℃，更优选为37℃；震荡频率优选为50～200rpm，更优选为100rpm；时间优选为0.5～1.5h，更优选为1h。
得到所述细胞混悬液后，本发明优选对所述细胞混悬液进行离心，得到细胞沉淀。本发明所述离心的转速优选为1000～3000g，更优选为1500g；时间优选为5～20min，更优选为10min。
得到所述细胞沉淀后，本发明优选对所述细胞沉淀进行洗涤，得到所述脂肪间充质干细胞。本发明所述洗涤优选包括将所述细胞沉淀与生理盐水混合和离心，重复进行3次，完成所述洗涤，去除杂质。本发明所述离心的转速优选为1000～3000g，更优选为1500g；时间优选为5～20min，更优选为10min。
本发明所述制备方法优选还包括将所述脂肪间充质干细胞进行贴壁培养，以对所述脂肪间充质干细胞进行扩增。本发明进行所述贴壁培养的细胞培养基优选包括低糖培养基，更优选为DMEM低糖培养基。经过本发明所述贴壁培养获得的脂肪间充质干细胞的纯度优选≥95％。本发明对所述贴壁培养的具体条件没有特殊限定，采用本领域中常规条件即可。
得到所述脂肪间充质干细胞后，本发明对脂肪间充质干细胞进行低强度脉冲超声处理，得到所述用于创面修复的脂肪间充质干细胞。本发明所述低强度脉冲超声处理的的频率为0.5～2MHz，优选为1～1.5MHz，更优选为1.5MHz；占空比为10～50％，优选为20％；时间为1～20min，优选为2.5～15min，更优选为5～10min，最优选为5min；强度为0.1～100W/cm2，优选为25～50W/cm2，更优选为50W/cm2。
本发明所述优选以脂肪间充质干细胞悬液的形式进行所述低强度脉冲超声处理，所述脂肪间充质干细胞悬液优选为脂肪间充质干细胞PBS悬液。本发明所述脂肪间充质干细胞悬液中的细胞浓度优选为1×107/mL。本发明进行所述低强度脉冲超声处理时，优选将低强度脉冲超声处理设备的探头与盛有所述脂肪间充质干细胞的器具以耦合剂进行连接，更优选与盛有所述脂肪间充质干细胞的器具底部进行连接，以保证所述低强度脉冲超声处理设备与脂肪间充质干细胞的器具的紧密接触。本发明对所述低强度脉冲超声处理设备的型号没有特殊限定，可以保证上述低强度脉冲超声处理参数的设备均可。本发明所述耦合剂优选包括医用凝胶超声耦合剂。
本发明所述低强度脉冲超声处理的超声频率、强度、脉冲时长和刺激时间的设置，实现了对脂肪间充质干细胞地精确刺激，合理的参数设计，可以激活脂肪间充质干细胞的生物学响应，提高脂肪间充质干细胞促进细胞增殖、分化和基质合成等的关键过程。
本发明还提供了上述技术方案所述培养方法培养得到的用于创面修复的脂肪间充质干细胞，以细胞的OD450nm计，所述用于创面修复的脂肪间充质干细胞的细胞存活率为90～99％，优选为95％。本发明所述细胞存活率的计算公式优选为细胞存活率＝[(实验孔OD450nm-空白孔OD450nm)/(对照孔OD450nm-空白孔OD450nm)]×100％。以本发明所述方法得到的脂肪间充质干细胞具有多能性和自我更新的能力，能够分化为多种细胞类型并参与组织再生的过程。
基于上述优势，本发明还提供了上述技术方案所述用于创面修复的脂肪间充质干细胞在制备皮肤创面修复的产品中的应用。本发明所述产品优选包括药物。本发明所述产品可以以注射、喷洒或涂抹的形式施用于皮肤创面上；所述施用剂量优选为106～107个细胞/直径为1cm的创面。本发明所述创面优选但不限于烧伤、创伤、溃疡和手术切口所致的创面。本发明所述应用可以将脂肪间充质干细胞直接用于创面区域，具有非侵入性，不需要进行大规模的手术或切口，减少了患者的痛苦和恢复时间，安全性更高；同时实现了制备得到的用于修复创面的脂肪间充质干细胞的定向应用，实现针对创面的局部治疗效果，提高了治疗的针对性和有效性；同时，此应用方式可以重复使用，可根据患者的需要进行多次用药和治疗，提高了治疗的可持续性和便利性。
本发明还提供了一种用于皮肤创面修复的药物，所述药物的活性成分包括上述技术方案所述的用于创面修复的脂肪间充质干细胞。本发明所述药物中所述用于创面修复的脂肪间充质干细胞的浓度优选为1×106～1×107/mL，更优选为1×107/mL。本发明所述药物的剂型优选包括注射剂、喷雾剂或搽剂。本发明对所述药物中的辅料的类型没有特殊限定，依据药物的剂型选用本领域中常规辅料即可。
为了进一步说明本发明，下面结合附图和实施例对本发明提供的技术方案进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
1：ADSCs的获取和准备，具体步骤如下：
①从人源脂肪组织中获取ADSCs：脂肪组织可以通过抽脂手术的方法获取；
②步骤①清除杂质后的脂肪成分用含有抗生素和血清的生理盐水(含有青霉素-链霉素双抗，质量浓度为1％；血清的质量浓度也为1％)浸泡消毒15min，后用生理盐水反复清洗离心去除多余油脂及废液，只保留脂肪组织颗粒；
③将步骤②清洗后的脂肪组织颗粒用胶原酶Ⅰ型(终浓度为1mg/mL，胶原酶Ⅰ型的酶活力≥125CDU/mg)置于37℃摇床100rpm震荡消化1h；
④将步骤③获得的混悬液离心，条件为1500g，10min，随后去除上层废液保留底部细胞沉淀；
⑤将步骤④获得的细胞入适量生理盐水，充分重悬细胞后再进行离心操作1500g，2min，重复清洗三次尽可能去除杂质；
⑥将步骤⑤获得的细胞使用DMEM低糖培养基进行贴壁培养、传代得到高质量、高纯度的人源ADSCs，得到的ADSCs的纯度为99％。
对得到的ADSCs进行流式鉴定分析，结果如图1所示。由图1可以得出：制备得到的ADSCs细胞流式分析结果显示，表面标志物CD11b、CD34和CD45阴性表达，CD44、CD90、CD29和CD105阳性表达，其结果符合国际细胞协会对ADSCs的定义，说明成功制备得到了人源ADSCs。
2：使用超声系统(Sonic Accelerated Fracture Healing System，SAFHS)进行LIPUS刺激ADSCs细胞，将传感器探头紧贴细胞皿底，将耦合剂涂在细胞皿底部，使用耦合剂进行黏连使其两者充分接触，对细胞皿中的ADSCs的PBS悬液进行刺激，如图2所示，LIPUS由超声发生器和超声探头组成；其中，ADSCs的PBS悬液的体积为200μL/皿，细胞浓度为1×107/mL。
通过调整不同超声参数对细胞进行物理干预，所设置的刺激参数为：频率1.5MHz、占空比20％、干预时间分别为：0、2.5、5、10min、超声强度分别为：0、25、50、100mW/cm2，通过检测各组细胞增殖活性从中筛选获得最佳刺激条件，具体设置和结果如图3所示，其中图3中第一排和第二排图中的24h和48h分别表示各组在刺激后24h和48h所测定的细胞活性。
根据图3可以得出，当超声强度为25mW/cm2时，增加刺激时间细胞活性并没任何变化，当超声强度为100mW/cm2时，细胞活性会随着刺激时间增加而逐渐降低，只有超声强度为50mW/cm2时，细胞活性在刺激5min后达到最佳，且继续延长刺激时间细胞活性也不再增加，因此，最佳LIPUS刺激条件是频率1.5MHz、占空比20％、时间5分钟，强度为50mW/cm2。
使用最佳参数处理ADSCs后，分别在24h和72h后对细胞进行活细胞染色，根据图4可以得出，使用50mW/cm2刺激细胞24h后两组细胞活性吴显著性差异，在72h后处理组活细胞数量显著高于对照组(0mW/cm2)。由此说明筛选得到的最佳参数有助于增加细胞活性。
实施例2
小鼠实验创面修复实验，步骤如下：
本实验分四组，其中对照组3个，实验组1个：PBS注射组、低剂量ADSC组(106)和高剂量ADSC组(107)组成3个对照组；经过LIPUS刺激后的低剂量ADSC(106)作为实验组。每组6列，3次重复，观察各组之间创面皮肤修复效果；其中低剂量组、高剂量组和实验组采用细胞PBS悬浮液的形式注射，四个组的注射剂量均为200μL/直径为1cm的创面。
1：ADSCs的获取和准备，步骤同实施例1。
2：小鼠创面模型构建，步骤如下：
选择健康的6周龄C57小鼠作为实验对象。在小鼠背部剃毛，然后用无菌手术器械清洁和消毒创面区域。
1)麻醉：将实验组和对照组的小鼠分别用适量的麻醉剂麻醉，确保其处于无痛苦和无抵抗状态；
2)制备创面：在每只小鼠的背部皮肤上制造一个直径约1cm的创面，深度达到皮下组织，创面应呈圆形，以确保创面大小和位置一致；
3：使用实施例1中筛选到的最佳LIPUS刺激条件(频率1.5MHz、占空比20％、时间5分钟，强度为50mW/cm2)对步骤1中的ADSCs进行超声刺激。将预先准备好的各组ADSCs悬液均匀地注入小鼠创面区域，确保细胞悬液充分渗透到创面内，并使细胞分布均匀。
1)实验组处理：使用无菌注射器，将实验组的小鼠创面皮下点注射预先经过LIPUS处理培养的ADSCs，并轻轻按摩以确保细胞均匀分布在创面上。
2)对照组处理：将三个对照组的小鼠创面皮下点注射相同体积的PBS溶液，作为对照处理。
3)照料和观察：对所有小鼠进行适当的照料，包括伤口清洁和消毒。每天观察并记录创面的愈合情况，包括创面闭合时间、炎症反应、红肿程度和愈合质量等指标。
4)创面样本收集：在预定的时间点(如1、3、7、10天)收集实验组和对照组小鼠的创面组织样本，如图5～6所示，其中图5中的ADSC+LI表示实验组。
由图5～6可以得出：实验组的创面闭合时间显著缩短，与对照组相比，创面愈合速度明显加快。实验组在第7天出门明显缩小，差异具有统计学意义，在第10天创面基本愈合，而其余三组仅有高剂量组在第7天较实验组无显著性差异，在第10天其他三组创面大小较实验组均具有显著差异。由此可见本发明LIPUS刺激ADSCs可显著促进损伤后皮肤创面修复。
4：使用荧光染料PKH26对ADSCs进行标记随后进行创面治疗，3天后对创面附近皮肤组织进行取材，使用荧光显微镜观察ADSCs在动物皮肤组织中的定植及分布情况，如图7所示，ADSCs(红色)细胞均匀分布在皮肤组织的真皮层下的组织中，由此说明ADSCs可以稳定的存在于皮下组织中并在后续发挥治疗功能。
5：参考Liang,X.,Lin,F.,Ding,Y.et al.Conditioned medium frominducedpluripotent stem cell-derived mesenchymal stem cells accelerates cutaneouswound healing through enhanced angiogenesis.Stem Cell Res Ther 12,295(2021).https://doi.org/10.1186/s13287-021-02366-x对创面样本进行组织学分析、免疫组化染色和分子生物学检测，评估创面修复的细胞和分子变化。其中分子生物学检测为荧光定量PCR分析(Q-PCR)，其中用于所述Q-PCR的引物如表1所示，以GAPDH为内参基因。
表1 Q-PCR分析引物
引物 序列(5’-3’) 序列编号
m-GAPDH-F TCAATGAAGGGGTCGTTGAT SEQ ID NO.1
m-GAPDH-R CGTCCCGTAGACAAAATGGT SEQ ID NO.2
m-IL-6-F TGGTACTCCAGAAGACCAGAGG SEQ ID NO.3
m-IL-6-R AACGATGATGCACTTGCAGA SEQ ID NO.4
m-TNF-α-F GGTCTGGGCCATAGAACTGA SEQ ID NO.5
m-TNF-α-R CAGCCTCTTCTCATTCCTGC SEQ ID NO.6
其中组织学分析的结果如图8～9所示。由图9可以得出：通过免疫组织化学染色检测到增殖标记物如Ki-67的阳性细胞数量明显增加。此外，由图8可以看出实验组中的血管生成也得到了增强，通过CD31染色观察到更多的血管形成。表明ADSCs的应用促进了创面组织再生和血管生成。
免疫组化染色结果如图10所示，其中图10中的ADSC-LIPUS表示实验组。由图10中的Masson染色结果显示，在实验组中，胶原蛋白和弹性纤维蛋白等基质成分的表达水平明显增加，说明LIPUS刺激促进了创面组织的基质重建过程，实验组中的创面组织显示出更好地基质重建能力。
由图11可以得出：与对照组相比，实验组的创面组织炎症反应明显减轻。Q-PCR结果显示，在实验组中，炎性细胞浸润和炎性因子如IL-6和TNF-α表达明显降低，表明LIPUS刺激有助于抑制创面的炎症反应。
由以上结果可以得出：本发明通过LIPUS刺激ADSCs制备得到了用于修复皮肤创面的ADSCs细胞，且通过实验证明了得到的用于修复皮肤创面的ADSCs细胞可以显著加速创面的愈合和组织再生；同时，本发明所述方法无创低风险，避免了传统方法中可能存在的创伤、感染和排异反应的问题，更加安全有效。
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。

Claims (10)

1.一种用于创面修复的脂肪间充质干细胞的培养方法，其特征在于，包括：
对脂肪间充质干细胞进行低强度脉冲超声处理，得到所述用于创面修复的脂肪间充质干细胞；
所述低强度脉冲超声处理的频率为0.5～2MHz，占空比为10～50％，时间为1～20min，强度为0.1～100W/cm2。
2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述脂肪间充质干细胞的制备方法包括如下步骤：
以含有抗生素和血清的生理盐水对脂肪组织进行浸泡后，对浸泡得到的脂肪组织进行清洗，得到脂肪组织颗粒；
以消化酶对所述脂肪组织颗粒进行组织消化，得到细胞混悬液；
对所述细胞混悬液进行离心，将得到的细胞沉淀进行洗涤，得到所述脂肪间充质干细胞。
3.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述抗生素包括青霉素-链霉素双抗，所述含有抗生素和血清的生理盐水中青霉素-链霉素双抗的质量浓度为1％，血清的质量浓度为1％。
4.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述消化酶包括胶原酶Ⅰ型；所述胶原酶Ⅰ型的酶活力≥125CDU/mg；所述胶原酶Ⅰ型在组织消化体系中的终浓度为0.5～2mg/mL。
5.根据权利要求2或4所述的培养方法，其特征在于，所述组织消化的条件包括：温度为30～40℃，震荡频率为50～200rpm，时间为0.5～1.5h。
6.权利要求1～5任一项所述培养方法培养得到的用于创面修复的脂肪间充质干细胞，其特征在于，以细胞的OD450nm计，所述用于创面修复的脂肪间充质干细胞的细胞存活率≥95％。
7.权利要求6所述用于创面修复的脂肪间充质干细胞在制备皮肤创面修复的产品中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述产品包括药物。
9.一种用于皮肤创面修复的药物，其特征在于，所述药物的活性成分包括权利要求6所述的用于创面修复的脂肪间充质干细胞。
10.根据权利要求9所述的药物，其特征在于，所述药物的剂型包括注射剂、喷雾剂或搽剂。
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