CN114099780A

CN114099780A - 同种异体或异种脂肪萃取液及其制备方法、应用

Info

Publication number: CN114099780A
Application number: CN202010897212.XA
Authority: CN
Inventors: 易成刚; 党娟丽; 郑惠; 杨剂忠
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2020-08-31
Filing date: 2020-08-31
Publication date: 2022-03-01

Abstract

本发明公开了一种同种异体或异种脂肪萃取液的制备方法以及应用，其来源于人抽脂手术时废弃的脂肪组织以及猪的脂肪组织，经过脂肪采集及纯化处理、脱细胞、去油处理以及过滤操作，所获得的脂肪萃取液属于无细胞液体产品；它具有来源丰富、稳定性好、易于产品化、方便储存，因为没有细胞同时无免疫排斥反应，该萃取液可异体或异种注射以及敷用到靶组织，有利于受区组织细胞的增殖和分化，对促进伤口、创面愈合、组织的修复与再生、皮肤光老化起到长久的修复效果；本发明的产品适用于软组织缺损的修复以及皮肤的年轻化改善。

Description

同种异体或异种脂肪萃取液及其制备方法、应用

技术领域

本发明涉及医学整形美容材料领域，具体涉及一种纯物理的方法制备的同种异体或异种脂肪萃取液及其应用。

背景技术

脂肪移植的应用迅猛发展，在组织修复，美容整形领域(皮肤光老化、皮肤年轻化)也显示出独特优势。脂肪组织作为活跃的内分泌器官和丰富的生物活性物质来源，其在体内储存丰富，大量动物研究和临床试验表明，脂肪组织中的非细胞成分，主要包括细胞外基质蛋白和细胞因子，可用于软组织修复等。例如，脂肪组织提取脂肪间充质干细胞用于体内抗衰老，组织修复等方面，ADSCs在缺血性心脏病，外周血管疾病和慢性伤口等疾病中具有促进血管生成的能力,但干细胞存在体外扩增潜在致瘤风险、不易获取等，干细胞用于临床应用仍然是复杂且耗时。而干细胞的的分泌因子的被认为是一种干细胞替代策略，因为它可以规避许多安全问题和与使用培养细胞有关的复杂程序。除了脂肪来源间充质干细胞以及其培养基分泌因子的应用，近期研究表明脂肪组织本身分泌大量的生长因子，例如bFGF，VEGF和血小板衍生的生长因子(PDGF)等可在体内外促进血管生成和脂肪生成。这些结果表明，脂肪组织内富含各种生物活性因子，这些因子可以直接分离用于临床，而无需细胞分离或培养过程。

自体脂肪移植技术有一些局限性：需要抽脂手术获取自体脂肪，因为含有细胞成份，只能自体应用，难以成为产品。干细胞因为安全性问题在临床应用受到限制，因此，迫切需要新的技术和战略，以适合应用于临床治疗。

本发明是基于脂肪组织的优势，并通过更加简便、经济、安全的方法脱细胞、脱油处理获得一种无细胞脂肪萃取液，该产品可异体或异种注射以及敷用到靶组织，可用于皮肤光老化以及年轻化、组织缺损、创面愈合等的单独治疗或补充。

发明内容

本发明提出了一种同种异体或异种脂肪萃取液及其制备方法、应用，其具有来源相对方便、稳定性好、方便储存等特点，注射后更利于受区组织细胞的增殖和分化，对促进伤口、创面愈合，皮肤组织的修复与再生，起到长久的填充和年轻化效果。

为了解决上述技术问题，本发明特提供如下技术方案：

一种同种异体或异种脂肪萃取液的制备方法，包括：

A)将获取到的脂肪颗粒进行数次漂洗后进行高速离心操作；收集中部的脂肪颗粒；

B)将步骤A)中得到的脂肪颗粒进行匀浆或乳糜化、冻融操作；其中：

将获取的脂肪组织用去离子水清洗3次，离心并去除上层油脂及下层血液成分；

将脂肪微粒至于匀浆机中，经800～1500g离心2～10min；匀浆后的脂肪组织经800～1500g离心2～10min；

将获得脂肪颗粒进行机械乳糜化处理，离心去油，制成脂肪微粒

将脂肪置于液氮冰冻，后经37℃，水浴加热融化，反复3～5次；经800～1500g离心2～10min后将第三层的液体层进行收集再进行过滤，去除细胞碎片和杀菌；

C)将步骤B)中收集到的液体进行滤膜过滤，得脂肪萃取液。

所述步骤A)中的高速离心操作为800～1500g离心2～10min。

所述步骤B)中的脂肪乳糜化处理为用螺旋口注射器抽取脂肪颗粒，通过鲁尔接头与另一螺旋口注射器相连，来回推注这两个注射器60～120次直至脂肪颗粒在推注器中移动流畅；连接孔径逐渐减小的鲁尔接头逐层乳糜化，网筛过滤，获取直径小于200um的脂肪微粒；

所述鲁尔接头的孔径大小为1.2～2.4mm或0.8～1.2mm。

在其中一个实施例中，所述步骤C)中的滤膜≤0.45um滤膜。

本发明的又一目的是提供一种脂肪萃取液。

与现有技术相比，本发明产生的有益效果主要体现在：

本发明公开了同种异体或异种脂肪萃取液及其制备方法、应用其来源于人由吸脂手术得到的脂肪组织以及猪的组织，经过脂肪采集及纯物理的方法处理、脱细胞、去油处理以及过滤操作，所获得的脂肪萃取液属于无细胞注射液；

本发明公开了同种异体或异种脂肪萃取液的制备方法：其具有如下优点：

①纯物理机械化处理，脱细胞和去油处理全过程不添加任何化学试剂，因此后续使用对人体无生物学污染伤害，副作用更小，容易批准应用和产品化；

②来源丰富：随着生活水平提高，肥胖人群增加，吸脂手术在不断增加，每次吸出的脂肪量也较大，一般情况下，吸出的脂肪组织都作为医疗废物处理，这将变废为宝，一举两得，容易产品化。另外猪因为皮下脂肪较多，来源丰富，脂肪萃取液因为是无细胞产品，可以应用于人体，容易满足产品化生产。

③操作简单，方便，仅需三个简单步骤即可完成，长期保存于-20℃、-80℃冰箱中，方便储存；

④液体中无细胞，因此可以认为是非免疫原性的，这可能有利于在临床上的同种或异种、异体使用可用于皮肤、组织的再生疗法；

附图说明

图1是本发明的同种异体或异种脂肪萃取液的制备方法的工艺流程图；

图2是本发明的脂肪萃取液对光老化模型皮肤组织HE染色图及Masson染色图；其中：

A：对照组HE图(200×)；B：脂肪萃取液HE图(200×)

C：对照组Masson图(200×)；D：脂肪萃取液Masson图(200×)

具体实施方式

为了便于理解本发明的目的、技术方案及其效果，现将结合实施例对本发明做进一步详细阐述。

如图1和图2所示，本发明的一种同种异体或异种脂肪萃取液的制备方法，包括：

B)将步骤A)中得到的脂肪颗粒进行匀浆、冻融操作；其中：

将脂肪微粒至于匀浆机中，经1200g匀浆处理5min；匀浆后的脂肪组织经300g高速离心5min；

将脂肪置于液氮冰冻，后经37℃，水浴加热融化，反复5次；经1200g高速离心5min后将第三层的液体层进行收集再进行过滤，去除细胞碎片和杀菌；

C)将步骤B)中收集到的液体进行滤膜过滤，得脂肪萃取液。

在其中一个实施例中，所述步骤A)中的脂肪颗粒为通过吸脂手术丢弃人源脂肪、猪源的脂肪组织；

所述步骤A)中的高速离心操作为1200g离心5min。

在其中一个实施例中，所述步骤B)中的脂肪乳糜化处理为用螺旋口注射器抽取脂肪颗粒，通过鲁尔接头与另一螺旋口注射器相连，来回推注这两个注射器60-120次直至脂肪颗粒在推注器中移动流畅；连接孔径逐渐减小的鲁尔接头逐层乳糜化，网筛过滤，获取直径小于200um的脂肪微粒；

本发明公开了一种可注射型同种异体或异种脂肪萃取液的制备方法，其来源于人由吸脂手术得到的脂肪组织以及猪的组织，经过机械乳糜化处理、离心去油、冻融，后续温和的脱细胞工序，离心进一步脱脂所得；所获得的脂肪萃取液属于无细胞注射液，可异体注射以及敷用到靶组织，来源相对方便，稳定性好，方便储存，注射后更利于受区组织细胞的增殖和分化，对促进伤口、创面愈合，皮肤组织的修复与再生，起到长久的填充和年轻化效果。本发明的产品适用于面部年轻化和软组织缺损的修复。

本发明公开了一种可注射型同种异体或异种脂肪萃取液，纯物理机械化处理，去除细胞不添加任何化学试剂可能有利于在临床上的同种或异种使用可用于皮肤、组织的再生疗法。

本发明的一种同种异体或异种脂肪萃取液的制备方法，所述匀浆机采用的型号为IKA(德国)T18基本型分散机。

本发明的一种同种异体或异种脂肪萃取液的制备方法，所述步骤C)中的滤膜≤0.45um滤膜。

本发明的又一目的是提供一种脂肪萃取液。

本发明的又一目的是提供一种脂肪萃取液在面部年轻化及软组织损伤修复的应用；将该液体置于注射器中，进行真皮内注射或局部精确注射填充即可。

本发明的又一目的是提供一种脂肪萃取液其适用于创面愈合的修复。

应用范围：皮肤光老化，烧伤创面、糖尿病创面、放射性溃疡、周围神经损伤、心脑缺血性损伤等；

应用方式：局部涂抹，制成膏剂、巴布剂、水凝胶、脂质体等进行贴敷；

局部注射：将萃取液应用于普通小剂量注射器，无针注射器，水光针或可溶性水凝胶微针进行应用。

灭菌方法：抗生素处理、紫外线照射、Y射线照射和过滤方法灭菌获取的脂肪萃取液。

本发明的一种脂肪萃取液的凝胶贴膏的制备方法，水凝胶贴膏剂是一种透皮给药制剂，通过贴敷于皮肤，药物扩散进入皮肤和血液而达到治疗的作用。取适量脂肪萃取液，再加入甘羟铝、高岭土、依地酸二钠、NP700和丙三醇，混合均匀即得到丙三醇相，另取酒石酸、明胶、山梨醇，用适量纯化水溶解，即得到水相溶液；将水相迅速倒入丙三醇相中，充分搅拌交联成膏，迅速涂布于背衬材料无纺布上，覆盖防粘膜，即制成脂肪萃取液凝胶贴膏，然后切割成规格大小的膏贴，遮光、密封保存，可用于皮肤老化后的修复。

皮肤光老化应用：

①：对于皮肤老化，皱纹等治疗采用无针注射器进行治疗，就医者进行面部清洁后取仰卧位，选取自动模式，分别进行面部深层清洁及脂肪萃取液导入，每周治疗1次，10次为1个疗程。

②：对于皮肤老化，创面愈合、烫伤等治疗采用水凝胶贴剂，其处方组成是：聚丙烯酸钠NP700 2.8g、卡波姆940 1.8g、酒石酸0.4g、柠檬酸0.4g、甘油20m L、蒸馏水150m L。其制备方法是：将处方量的聚丙烯酸钠NP700、卡波姆、酒石酸、柠檬酸及甘油充分混合，加水溶胀24h后，搅拌均匀，即成空白基质，并加入适量脂肪萃取液制备成脂肪萃取液水凝胶贴剂进行皮肤贴敷。

③：采用脂肪萃取液注射液进行后肢缺血治疗，采用1ml有针注射器或无针注射器进行导入脂肪萃取液。无针注射压力设置为180Pa，共进行4次注射治疗，每次间隔1周，注射前行常规消毒，无针注射器组每枪注射剂量为0.1ml，每针注射间隔约0.5～1.0cm，每次注射后记录注射药物剂量。普通1ml注射为每周治疗2次，10次为1个疗程。

实验分析：

建立BALB/c裸鼠光老化模型，脂肪来源于西京医院整形外科吸脂手术丢弃脂肪，样本获取均经患者知情同意，动物实验均过伦理审查，操作方法为：

假手术组：不进行紫外线照射和治疗

紫外线照射空白对照组：紫外线照射+皮下注射1毫升PBS缓冲液；

紫外线照射实验组组：紫外线照射+皮下注射1毫升脂肪萃取液；

脂肪获取后，静置10分钟，除去血性液体后，分装10ml无菌离心管内，以4℃离心1200g离心3min，去除底层液体和上层油，取中间层颗粒脂肪，用2.4mm鲁尔连接器相连的注射器进行推注，来回推注60次，获得乳糜化脂肪，4℃离心1200g离心3min，获取脂肪液体部分，将脂肪液体部分进行反复冻融三次，4℃离心1200g离心3min处理后将处理后的脂肪萃取液进行0.22um滤器过滤，分装入无菌1ml注射器，储存于-20℃备用；

观察术后2个月脂肪萃取液组的皮肤表皮厚度变化、真皮胶原变化：

如图2所示，图2为用于皮肤光老化模型改善皮肤表皮厚度，真皮胶原含量的图片；

2月后，与对照组相比，与模型组相比，脂肪萃取液组皮肤厚度明显减小，正常组没有过度角质化现象，表皮层厚度正常，具有丰富的胶原纤维排列在真皮层，表皮层和真皮层交界处具有明显波浪状。

上述说明示出并描述了发明的若干优选实施例，但如前所述，应当理解发明并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文所述发明构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离发明的精神和范围，则都应在发明所附权利要求的保护范围内。

Claims

1.一种同种异体或异种脂肪萃取液的制备方法，其特征包括：

将获取的脂肪组织用去离子水清洗2～4次，离心并去除上层油脂及下层血液成分；

B)将步骤A)中得到的脂肪颗粒进行匀浆、冻融操作，其中：

将脂肪颗粒至于匀浆机中，经800～1500g匀浆处理2～10min；匀浆后的脂肪组织经4℃离心机800～1500g高速离心2～10min；

将匀浆后的乳糜化脂肪置于-80℃或液氮冷冻，后经37℃，水浴加热融化，反复3～5次；4℃离心机经800～1500g离心2～10min后将第三层的液体层进行收集；

C)将步骤B)中收集到的液体进行滤膜过滤，得脂肪萃取液。

2.根据权利要求1所述的一种同种异体或异种脂肪萃取液的制备方法，其特征在于：

所述步骤A)中的高速离心操作为800～1500g高速离心2～10min。

3.根据权利要求1所述的一种同种异体或异种脂肪萃取液的制备方法，其特征在于：

所述鲁尔接头的孔径大小为1.2～2.4mm或0.8～1.2mm。

4.根据权利要求1所述的一种同种异体或异种脂肪萃取液的制备方法，其特征在于：

所述步骤C)中的滤膜为≤0.45um滤膜。

5.一种权利要求1-4任一项所述的制备方法制得的脂肪萃取液。