CN117426304A - 一种巨花多穗蓼的组织培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及植物组织培养技术领域，尤其涉及一种巨花多穗蓼的组织培养方法。本发明的巨花多穗蓼组织培养方法包括：以巨花多穗蓼带芽点茎段作为外植体，涉及无菌体系的建立，诱导芽点萌发，不定芽增殖，诱导生根。利用本发明的巨花多穗蓼组织培养方法，能够提高巨花多穗蓼的诱导成功率，缩短诱导周期，提高巨花多穗蓼的增殖系数和生根率，从而实现巨花多穗蓼的快速繁殖，促进巨花多穗蓼的市场应用。
Description
技术领域
本发明涉及植物组织培养技术领域，尤其涉及一种巨花多穗蓼的组织培养方法。
背景技术
巨花多穗蓼（Persicaria polymorpha），属于蓼科蓼属园艺变种，为多年生灌木型宿根草本。巨花多穗蓼适应性广泛，在全日照或夏季稍有遮阴的环境下都生长良好，亦可忍受土壤稍湿润，在冬季耐寒可达零下25-35摄氏度，春季发芽生长，夏季开花，花期可从6月持续至9月，花序大而洁白。故巨花多穗蓼植株因其较高的观赏价值和优异的适应能力，适用于花境布置、私家花园庭院栽植，市场前景良好。
与其他蓼科植物不同，巨花多穗蓼无法通过种子自播，只能依靠无性分株繁殖。分株繁殖效率低，种苗整齐度差，不利于产业化推广。因此，巨花多穗蓼繁殖方式限制了巨花多穗蓼的应用推广。目前针对巨花多穗蓼的组织培养技术的研究很少。有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供一种巨花多穗蓼的组织培养方法以及用于巨花多穗蓼组织培养的培养基。
具体地，本发明提供以下技术方案：
第一方面，本发明提供一种巨花多穗蓼的组织培养方法，所述方法包括：以巨花多穗蓼带芽点茎段作为外植体，依次进行诱导茎段芽点萌发培养、腋芽增殖培养和诱导不定芽生根培养；诱导茎段芽点萌发培养的培养基以MS培养基为基本培养基并包括如下组分：6-BA 0.1-0.5mg/L，NAA 0.1-0.5mg/L；腋芽增殖培养的培养基以MS培养基为基本培养基并包括如下组分：6-BA 2.0-3.0mg/L。
本发明的巨花多穗蓼组织培养方法中，以生长健壮且无病虫害的巨花多穗蓼母株的带芽点茎段作为外植体进行组织培养。
优选地，上述方法以萌芽阶段的带芽点茎段作为外植体。
本发明发现，选择上述萌芽阶段的带芽点茎段作为外植体进行组织培养，更有利于提高巨花多穗蓼的诱导成功率。萌芽阶段的小芽能够在离体培养条件下具有更高的分裂活性，配合适宜的离体培养基能够在离体培养条件下旺盛分裂，在一定程度上可提高组织培养的诱导率和成功率，同时能够有效缩短组织培养过程中的诱导周期，并提高增殖系数。另外与萌芽后完全展叶的芽相比，选择生长期较短的萌芽阶段的带芽点茎段作为外植体，因其受到外界的干扰较小，可有效降低外植体的污染率。且完全展叶的芽较处于萌芽阶段的茎段芽点，细胞代谢活动减弱，诱导成功率和增殖率下降。
在本发明提供的较为具体的实施方式中，巨花多穗蓼组织培养方法的整体流程如下：对取自生长健壮且无病虫害的巨花多穗蓼母株上的带芽点茎段消毒处理后，利用诱导茎段芽点萌发的培养基对上述带芽点茎段进行诱导，在适宜的培养环境下，诱导茎段腋芽萌发。将诱导出的腋芽从茎段上剥离，再利用诱导腋芽增殖的培养基对腋芽进行诱导，在适宜的培养环境下，腋芽增殖形成丛生芽。将丛生芽分离成单株，在诱导不定芽生根的培养基上对单株进行生根诱导，形成生根苗。
上述组织培养方法中，诱导茎段芽点萌发培养使用的培养基以MS培养基为基本培养基并包括如下组分：6-BA（6-苄氨基腺嘌呤） 0.2-0.5mg/L，NAA（萘乙酸）0.1-0.2mg/L。腋芽增殖培养的培养基以MS培养基为基本培养基并包括如下组分：6-BA 2.0-3.0mg/L。
本发明发现，分别采用上述特定的培养基作为诱导茎段芽点萌发培养阶段和腋芽增殖培养阶段的培养基，能够使得两个培养阶段很好地衔接和配合作用，有效提高腋芽的分化情况，同时提高腋芽的增殖效率。
其中，诱导茎段芽点萌发的培养基中，使用6-BA和NAA作为诱导激素。上述两种激素在特定的浓度下配合作用，能够更好地促进细胞的增殖和扩大，诱导外植体脱分化和腋芽萌发。与单独采用NAA的诱导培养基相比，上述诱导茎段芽点萌发的培养基能够有效提高腋芽的分化情况，从而提高巨花多穗蓼的繁殖效率。
上述诱导腋芽增殖的培养基中，单独添加6-BA作为植物激素，与同时添加6-BA和NAA配合作用比较：单独添加6-BA作为植物激素增殖效果较好，且不影响增殖过程中的丛生芽长势，故选择在诱导腋芽增殖的培养基中只添加6-BA一种激素。
进一步优选地，诱导茎段芽点萌发培养使用的培养基以MS培养基为基本培养基并包括如下组分：6-BA（6-苄氨基腺嘌呤）0.2-0.5mg/L，NAA（萘乙酸）0.1-0.2mg/L，蔗糖25-30g/L，琼脂4-4.5g/L；腋芽增殖培养使用的培养基以MS培养基为基本培养基并包括如下组分：6-BA 2.0-3.0mg/L，蔗糖25-30g/L，琼脂4-4.5g/L。
更优选地，诱导茎段芽点萌发培养使用的培养基以MS培养基为基本培养基并包括如下组分：6-BA（6-苄氨基腺嘌呤）0.5mg/L，NAA（萘乙酸）0.1mg/L，蔗糖30g/L，琼脂4.5g/L；腋芽增殖培养使用的培养基以MS培养基为基本培养基并包括如下组分：6-BA 2.0mg/L，蔗糖30g/L，琼脂4.5g/L。
上述组织培养方法中，诱导不定芽生根培养使用的培养基优选以1/2 MS培养基为基本培养基并包含如下组分：活性炭0.3-0.5g/L，蔗糖25-30g/L，琼脂4-5g/L。
优选地，上述诱导不定芽生根的培养基中，不添加植物激素。
本发明发现，配合上述诱导茎段芽点萌发培养和腋芽增殖培养，在诱导不定芽生根阶段，不添加植物激素即能够获得100%的生根率。不定芽能够在生根培养基及自身合成的各类激素的共同作用下，促进生根形成小苗。在诱导不定芽生根的培养基中，还加入了活性炭。活性炭能够吸附不定芽的代谢产物和上一阶段的激素残留，利于植株的茁壮与生根。
进一步优选地，诱导不定芽生根培养使用的培养基以1/2 MS培养基为基本培养基并包含如下组分：活性炭0.5g/L，蔗糖25g/L，琼脂4.5g/L。
在本发明的一些实施方式中，诱导不定芽生根培养使用的培养基为在1/2MS培养基中按比例添加活性炭，蔗糖和琼脂得到。
在本发明中，上述诱导茎段芽点萌发培养、腋芽增殖培养或诱导不定芽生根培养使用的培养基的pH值优选为5.8-6.0。
在本发明中，以上所述的组织培养方法诱导茎段芽点萌发培养、腋芽增殖培养或诱导不定芽生根培养优选采用以下条件：培养温度为23-27℃，光照强度为1500-2300 Lux，光照时长为8-10h/d。
在本发明中，以上所述的组织培养方法优选在诱导茎段芽点萌发培养前，对外植体进行消毒处理；
在本发明中，所述消毒处理优选包括如下步骤：先以水冲洗后，再依次进行0.05-0.15%新洁尔灭溶液处理、70-80%酒精消毒处理和0.05-0.15%氯化汞溶液处理。本发明所述消毒处理的方式优选为浸泡震荡。
采用新洁尔灭溶液和酒精浸泡震荡消毒后，可杀灭附着在材料表面的部分病原体，有效排除外植体表面可能附带的污染源的干扰；氯化汞能够杀死繁殖体、亲脂性病毒等，对外植体携带的病原体等具有很强的杀灭作用，进一步提高外植体消毒的成功率。本发明中，先用新洁尔灭溶液作为阳离子表面活性剂的杀菌作用，对稍木质化的茎段进行初步处理，再利用酒精较强的浸润作用，排除外植体表面的空气，利于氯化汞的渗入，从而提高氯化汞对外植体材料表面的浸透性，提高消毒剂的消毒效果。
优选地，所述新洁尔灭溶液处理的时间为20-30min；所述酒精消毒的时间为30-60s；所述氯化汞溶液处理的时间为10-15min。
更优选地，所述新洁尔灭溶液处理的时间为20min；所述酒精消毒的时间为30s；所述氯化汞溶液处理的时间为10min。
优选地，新洁尔灭溶液处理使用0.1%新洁尔灭溶液，酒精消毒使用75%酒精。氯化汞溶液处理使用0.1%氯化汞溶液。
优选地，在新洁尔灭溶液处理后、酒精消毒后和氯化汞溶液处理后均以无菌水进行清洗外植体。
在本发明的一些具体实施方式中，所述巨花多穗蓼的组织培养方法包括：外植体的获取和消毒、诱导茎段芽点萌发、腋芽增殖以及诱导不定芽生根。
第二方面，本发明提供用于巨花多穗蓼组织培养的培养基，所述培养基包括诱导茎段芽点萌发培养的培养基、腋芽增殖培养的培养基和诱导不定芽生根培养的培养基；
所述诱导茎段芽点萌发培养的培养基以MS培养基为基本培养基并包括如下组分：6-BA 0.1-0.5mg/L，NAA 0.1-0.5mg/L，蔗糖 25-30g/L，琼脂4-5g/L；
所述腋芽增殖培养的培养基以MS培养基为基本培养基并包括如下组分：6-BA2.0-3.0mg/L，蔗糖25-30g/L，琼脂4-5g/L；
所述诱导不定芽生根培养的培养基以1/2 MS培养基为基本培养基并包含如下组分：活性炭0.3-0.5g/L，蔗糖25-30g/L，琼脂4-5g/L。
第三方面，本发明还提供以上所述的用于巨花多穗蓼组织培养的培养基在巨花多穗蓼组织培养中的应用。
优选地，所述应用为以巨花多穗蓼的带芽点茎段作为外植体进行组织培养。
有益效果：
本发明选择巨花多穗蓼母株的带芽点茎段作为外植体进行巨花多穗蓼的组织培养，并针对该外植体开发了适宜的诱导茎段芽点萌发、腋芽增殖以及诱导不定芽生根的培养培养基和培养方法。利用本发明的巨花多穗蓼组织培养方法，能够有效提高巨花多穗蓼腋芽的诱导成功率，缩短诱导周期，提高巨花多穗蓼的增殖系数和生根率，从而实现巨花多穗蓼的快速繁殖，促进巨花多穗蓼的应用。
附图说明
为了更清楚地说明本发明或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图进行说明。
图1是利用实施例1的组织培养方法进行巨花多穗蓼组织培养过程中，诱导茎段芽点萌发的照片。
图2是利用实施例1的组织培养方法进行巨花多穗蓼组织培养过程中，腋芽增殖分化形成丛生腋芽的照片。
图3是利用实施例1的组织培养方法进行巨花多穗蓼组织培养过程中，不定芽生根的照片。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合具体实施方式及附图，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
以下实施例中使用的酒精为欧洁75%消毒酒精，购自杭州欧拓普生物技术有限公司；氯化汞为购自天津市光复精细化工研究所的氯化汞标准溶液。
以下实施例中使用的巨花多穗蓼母株来源于北京花乡花卉科技研究所有限公司。
本发明提供一种巨花多穗蓼的组织培养方法，具体包括以下步骤：
1.外植体的获取和消毒
（1）外植体的获取：选择生长健壮、无病虫害的母株，选取萌芽阶段的带芽点茎段；
（2）外植体的消毒：
冲洗：将步骤（1）获取的带芽点茎段于流动的自来水下冲洗10min，晾干；
新洁尔灭溶液震荡处理：置于0.1%新洁尔灭溶液中浸泡震荡消毒20-30min，后用无菌水震荡清洗3-5遍，每次1-2min；
酒精消毒：晾干后，置于75%的酒精中浸泡震荡消毒30-60s，后用无菌水震荡清洗1-2遍，每次1-2min；
0.1%的氯化汞溶液处理：再将带芽点茎段置于0.1%的氯化汞溶液中浸泡震荡10-15min，后用无菌水震荡清洗3-5遍，每次1-2min；
裁剪：将消毒后的茎段基部损伤部位切除，然后分割成长为1-2cm的带芽点小段，获得待诱导的外植体。
2.诱导茎段芽点萌发
将步骤1获得的待诱导的外植体竖直插入诱导茎段芽点萌发的培养基中，诱导茎段芽点萌发，获得与茎段一体的腋芽。
其中，该步骤中用到的培养基配方为：MS培养基，6-BA（6-苄氨基腺嘌呤）0.2-0.5mg/L，NAA（萘乙酸）0.1-0.5mg/L，蔗糖25-30g/L，琼脂4-5g/L，pH5.8-6.0；培养温度为23-27℃，光照强度为1500-1800Lux，光照时长为8-10h/d。
3.腋芽增殖
将步骤2获得的与茎段一体的腋芽从茎段上剥离，并将剥离下的腋芽接种到诱导腋芽增殖的培养基中，获得增殖后的丛生芽。
其中，该步骤中用到的培养基配方为：MS培养基，6-BA 2.0-3.0mg/L，蔗糖25-30g/L，琼脂4-5g/L，pH5.8-6.0；培养温度为23-27℃，光照强度为1500-1800 Lux，光照时长为8-10h/d。
4.诱导不定芽生根
将步骤3获得的增殖后的丛生芽相互分离成单个的芽，接种到诱导不定芽生根的培养中。
其中，该步骤中用到的培养基配方为：1/2 MS培养基，AC（活性炭）0.3-0.5g/L，蔗糖25-30g/L，琼脂4-5g/L，pH5.8-6.0；培养温度为23-27℃，光照强度为1800-2500Lux，光照时长为8-10h/d。
以下结合实施例1-3、对比例1-7、图1-3以及检测试验对本发明的技术方案进行进一步详细说明。
实施例1
本实施例提供一种巨花多穗蓼的组织培养方法，具体包括以下步骤：
1.外植体的获取和消毒
（1）外植体的获取：选择生长健壮、无病虫害的母株，选取母株上萌芽阶段的带芽点茎段；
（2）外植体的消毒：
冲洗：将步骤（1）获取的带芽点茎段于流动的自来水下冲洗10min，晾干；
新洁尔灭溶液震荡处理：置于0.1%新洁尔灭溶液中浸泡震荡消毒20min，后用无菌水震荡清洗3遍，每次1min；
酒精消毒：晾干后，将带芽点茎段置于75%的酒精中浸泡震荡消毒30s，后用无菌水震荡清洗1遍，每次1min；
0.1%的氯化汞处理：再将带芽点茎段置于0.1%的氯化汞溶液中浸泡震荡10min，后用无菌水震荡清洗3遍，每次1min；
裁剪：将消毒后的茎段基部损伤部位切除，然后分割成长为1cm的带芽点小段，获得待诱导的外植体。
2.诱导茎段芽点萌发
将步骤1获得的待诱导的外植体接种至诱导茎段芽点萌发的培养基中，诱导茎段芽点萌发，2周后获得与茎段一体的腋芽。
3.腋芽增殖
将步骤2获得的与茎段一体的腋芽从茎段上分离出来，并将分离出来的腋芽接种到诱导腋芽增殖的培养基中，3周后获得增殖的丛生芽。
4.诱导不定芽生根
将步骤3获得的丛生芽相互分离，获得单独的不定芽，并将不定芽接种到诱导不定芽生根的培养中。
上述各步骤涉及的条件参数以及用到的培养基配方如表1所示。
实施例2
本实施例提供一种巨花多穗蓼的组织培养方法，其与实施例1的步骤流程相同，区别之处在于部分步骤的条件参数和用到的培养基配方，具体如表1所示。除表1中列出的条件参数和培养基外，实施例2的方法步骤与实施例1均相同。
实施例3
本实施例提供一种巨花多穗蓼的组织培养方法，其与实施例1的步骤流程相同，区别之处在于部分步骤的条件参数和用到的培养基配方，具体如表1所示。除表1中列出的条件参数和培养基外，实施例3的方法步骤与实施例1均相同。
对比例1-4
对比例1-4分别提供一种巨花多穗蓼的组织培养方法，其与实施例1的区别之处在于部分步骤的条件参数和用到的培养基配方，具体如表1所示。除表1中列出的条件参数和培养基外，对比例1-4的方法步骤与实施例1均相同。
表1 实施例1-3和对比例1-4的各步骤涉及的参数和用到的培养基配方
对比例5-7
对比例5-7分别提供一种巨花多穗蓼的组织培养方法，其与实施例1的区别之处在于外植体的选材以及消毒裁剪步骤，具体如表2所示。除表2中列出的条件参数外，对比例5-7的方法步骤与实施例1均相同。
表2 实施例1、对比例5-7的外植体的选材及获取和消毒裁剪
实验例
本实验例利用实施例1-3以及对比例1-7提供的组织培养方法对巨花多穗蓼进行培养，期间记录外植体消毒阶段的污染率、褐化死亡率和各培养阶段的考察参数，并计算腋芽诱导率，腋芽增殖系数以及不定芽生根率，具体的检测项目结果如表3所示。同时，记录巨花多穗蓼培养过程中腋芽诱导情况和分化苗长势的情况，具体记录结果如表4所示。其中，利用实施例1的组织培养方法进行巨花多穗蓼组织培养过程中，诱导茎段芽点萌发的示意图如图1所示，利用实施例1的组织培养方法进行巨花多穗蓼组织培养过程中，腋芽增殖分化形成丛生腋芽的示意图如图2所示，利用实施例1的组织培养方法进行巨花多穗蓼组织培养过程中，不定芽生根的示意图如图3所示。
表3巨花多穗蓼的组织培养的结果（1）
表4 巨花多穗蓼的组织培养的结果（2）
结合实施例1-3以及对比例1-7的组织培养方法以及表3和表4的结果，本发明选择母株上萌芽阶段的带芽点茎段作为外植体，同时在各组织培养阶段选择合适的培养基配方和培养条件，进行巨花多穗蓼的组织培养，缩短了诱导周期，提高了腋芽增殖倍率，同时，巨花多穗蓼的生根效果好，利于后期移栽成活，从而加快巨花多穗蓼的市场化应用。
选择合适的消毒剂配合使用，能较大提高消毒的成功率。通过表3中对比例3的消毒结果可知，在消毒阶段去掉新洁尔灭的使用后，污染率增加至40%。本发明中，先用新洁尔灭溶液作为阳离子表面活性剂的杀菌作用，对粗糙的茎段进行初步处理，再配合酒精和氯化汞的使用，能显著提高消毒成功率。
选择合适的母株部位作为外植体进行巨花多穗蓼的组织培养，直接影响巨花多穗蓼组织培养的最终结果。对比实施例1和对比例5-7的培养结果，在相同组织培养条件和无病虫害的要求下，实施例1选择的外植体为萌芽阶段的带芽点茎段，而对比例5-7选择的外植体分别为叶柄、叶片、完全展叶的芽。通过表3和表4可知，利用实施例1的组织培养方法诱导，腋芽正常萌出，且腋芽生长迅速，无玻璃化现象，且分化苗长势较好，植株茁壮，增殖率高；而利用对比例5-7的组织培养方法结果为：以叶柄为外植体的对比例5和以叶片为外植体的对比例6，虽然有愈伤组织形成，但愈伤组织最终未分化成不定芽；对比例7选择完全展叶的芽为外植体，在诱导阶段小芽抽新展叶，生长迅速，但在增殖阶段仅30%小芽基部有不定芽增殖，增殖率较低。综上所述，外植体的选择对巨花多穗蓼组织培养的效果影响较大，选择合适的母株部位作为外植体进行巨花多穗蓼组织培养，能够提高巨花多穗蓼组织培养的效果。本发明选择带芽点茎段作为巨花多穗蓼的组织培养的外植体，能够有效提高巨花多穗蓼的诱导率、增殖系数，降低巨花多穗蓼的组培生产成本。
在诱导茎段芽点萌发步骤中，6-BA的添加量也对组织培养的效果也有较大影响。对比例1的中6-BA的添加量为0mg/L，通过表4可知，对比例2的培养结果是腋芽能正常萌出，但在分化阶段仅20%腋芽形成丛生芽，叶片深绿，植株长势缓慢。由此可见，在诱导茎段芽点萌发步骤中，分裂素6-BA在第一步诱导芽点萌发步骤中的添加，有助于提高第二步腋芽的增殖率。本发明选择6-BA的添加量为0.1-0.5mg/L，能够在较高的诱导率和增殖率基础上，培养出茁壮的分化苗。
在腋芽增殖阶段植物激素的选择也会影响巨花多穗蓼组织培养的结果。通过表1、表3和表4可知，对比例2和3选择6-BA和NAA的组合作为诱导茎段芽点增殖的培养基配方，增殖系数低于仅使用6-BA为诱导激素的实施例1-3。由此可见，在腋芽形成的丛生芽，叶片正常，植株健壮的前提下，诱导腋芽增殖步骤中，可不添加NAA，既能简单化增殖配方，亦能提高增殖率。
本发明在腋芽萌发和增殖的合适培养基配方下诱导出的丛生芽植株健壮，在诱导其生根阶段，生根培养基中不添加植物激素即能够获得100%生根率，能够减少激素对组培苗移栽成活率的影响。由表1和3可知，对比例4在生根培养基中加入了生长素IBA，与实施例1不添加激素对比，无明显差异性，生根率都能达到100%。组培苗生根阶段通过添加活性炭，不加激素的生根培养基设计，既节约生产成本，又能减少组培苗体内激素含量，增强组培苗移栽后对外界环境的适应性。
综上所述，本发明提供的巨花多穗蓼组织培养方法中，外植体选择萌芽阶段的带芽点茎段，配合适宜的各阶段培养的培养基，通过诱导腋芽萌出至形成丛生芽，周期短，增殖系数高，同时，巨花多穗蓼的生根效果好，生根率达到100%，提高了巨花多穗蓼的移栽成活率，从而加快该品种的市场化应用。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，便于具体和详细地理解本发明的技术方案，但并不能因此而理解为对发明专利保护专利范围的限制。尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明的技术构思，仍属于本发明的保护范围。
Claims (10)
1.巨花多穗蓼的组织培养方法，其特征在于，所述方法包括：以巨花多穗蓼带芽点茎段作为外植体，依次进行诱导茎段芽点萌发培养、腋芽增殖培养和诱导不定芽生根培养；诱导茎段芽点萌发培养的培养基以MS培养基为基本培养基并包括如下组分：6-BA 0.1-0.5mg/L，NAA 0.1-0.5mg/L；腋芽增殖培养的培养基以MS培养基为基本培养基并包括如下组分：6-BA 2.0-3.0mg/L。
2.根据权利要求1所述的巨花多穗蓼的组织培养方法，其特征在于，所述外植体为萌芽阶段的带芽点茎段。
3.根据权利要求1所述的巨花多穗蓼的组织培养方法，其特征在于，诱导茎段芽点萌发培养的培养基以MS培养基为基本培养基并包括如下组分：6-BA 0.1-0.5mg/L，NAA 0.1-0.2mg/L，蔗糖25-30g/L，琼脂4-5g/L；腋芽增殖培养的培养基以MS培养基为基本培养基并包括如下组分：6-BA 2.0-3.0mg/L，蔗糖25-30g/L，琼脂4-5g/L。
4.根据权利要求3所述的巨花多穗蓼的组织培养方法，其特征在于，诱导不定芽生根培养的培养基以1/2 MS培养基为基本培养基并包含如下组分：活性炭0.3-0.5g/L，蔗糖25-30g/L，琼脂4-5g/L。
5.根据权利要求4所述的巨花多穗蓼的组织培养方法，其特征在于，诱导茎段芽点萌发培养的培养基的pH值为5.8-6.0；和/或，腋芽增殖培养的培养基的pH值为5.8-6.0；和/或，诱导不定芽生根培养的培养基的pH值为5.8-6.0。
6.根据权利要求1~5任一项所述的巨花多穗蓼的组织培养方法，其特征在于，诱导茎段芽点萌发培养的培养温度为23-27℃，光照强度为1500-2300 Lux，光照时长为8-10h/d；和/或，腋芽增殖培养的培养温度为23-27℃，光照强度为1500-2300 Lux，光照时长为8-10h/d；和/或，诱导不定芽生根培养的培养温度为23-27℃，光照强度为1500-2300 Lux，光照时长为8-10h/d。
7.根据权利要求1~5任一项所述的巨花多穗蓼的组织培养方法，其特征在于，在诱导茎段芽点萌发培养前，对外植体进行消毒处理；
所述消毒处理包括：先以水冲洗后，再依次进行0.05-0.15%新洁尔灭溶液处理、70-80%酒精消毒和0.05-0.15%氯化汞溶液处理。
8.根据权利要求7所述的巨花多穗蓼的组织培养方法，其特征在于，所述新洁尔灭溶液处理的时间为20-30min；所述酒精消毒的时间为30-60s；所述氯化汞溶液处理的时间为10-15min。
9.用于巨花多穗蓼组织培养的培养基，其特征在于，所述培养基包括诱导茎段芽点萌发培养的培养基、腋芽增殖培养的培养基和诱导不定芽生根培养的培养基；
所述诱导茎段芽点萌发培养的培养基以MS培养基为基本培养基并包括如下组分：6-BA0.1-0.5mg/L，NAA 0.1-0.5mg/L，蔗糖 25-30g/L，琼脂4-5g/L；
所述腋芽增殖培养的培养基以MS培养基为基本培养基并包括如下组分：6-BA 2.0-3.0mg/L，蔗糖25-30g/L，琼脂4-5g/L；
所述诱导不定芽生根培养的培养基以1/2 MS培养基为基本培养基并包含如下组分：活性炭0.3-0.5g/L，蔗糖25-30g/L，琼脂4-5g/L。
10.权利要求9所述培养基在巨花多穗蓼组织培养中的应用。
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