CN1173707C - 一种含野黄芩甙和咖啡酰奎宁酸的药用组合物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种新的含野黄芩甙和咖啡酰奎宁酸的药用组合物及其原料、制剂制备方法。该组合物可单独或与其它药用许可的辅料配合后制成口服和注射剂型，适用于各种缺血性心脑血管疾病、老年痴呆、高血脂和病毒性肝炎的预防与治疗。

Description

一种含野黄芩甙和咖啡酰奎宁酸的药用组合物

本发明属医药领域，涉及一种含野黄芩甙和咖啡酰奎宁酸的药用组合物及其制备方法和在预防、治疗各种缺血性心脑血管病、老年痴呆、高血脂、病毒性肝炎方面的用途。

缺血性心脑血管疾病如中风、冠心病是人类死亡的主要病因，急性发作致死率极高，存活者多会不同程度留下偏瘫、失语、口眼歪斜、视力模糊或者频发心绞痛、心律失常，降低生活质量，给病人及家属带来沉重的身心和经济负担。据统计，我国约有4000万患者，随着人口老龄化发展，发病人群还在快速增长，每年新发病人数高达450万。开发此类预防治疗药物是世界新药研究的热点。心脑缺血后影响能量代谢，继发乳酸堆积、钙超载、自由基损伤等多种变化。多靶点逆转或改善这些变化，提高综合疗效是药物治疗的重要目标。病毒性肝炎也是一种严重危害人类健康的传染性疾病，其流行范围之广、发病率之高、传染性之强是其它疾病所不能比拟的，目前尚缺乏真正有效的治疗药物。植物药化学组成具多样性特征，结构各异的有效成分通过作用于不同靶点或病理环节联合奏效，常发挥明显的协同效应。从历史悠久的中草药或民族药开发新药有其独特优势。本发明的目的即是通过对云南苗族植物药灯盏花(Erigeron breviscapus)的研究为上述疾病的预防和治疗提供一种成分明确、质量可控、安全有效的药用组合物及其制剂。

灯盏花为菊科飞蓬属草本植物，主要分布于云南省，民间广泛用于治疗中风后遗症、风湿痛、胸痹等症，取得了较好效果。早在1976年云南学者即开始对灯盏花的化学成分进行研究，分离鉴定了灯盏花乙素(即野黄芩甙，scutellarin)、焦袂康酸、飞蓬甙等成分，其中灯盏花乙素经药理筛选被证明是治疗中风的有效成分，在此基础上研制成功以灯盏花素为原料(黄酮类有效部位，主成分为野黄芩甙，约占90％)的药品“灯盏花素片”，后来一些厂家又开发了“灯盏花素注射液”和“注射用灯盏花素”。与灯盏花素相关的专利有CN1053609、CN1095934、CN1133180、CN1252277、CN1228959、CN1191730、CN1187356等，涉及灯盏花素原料提取及口服、注射制剂的制备工艺。但是，对灯盏花化学成分的认识还远未充分。近年，我们通过深入系统的分离和药理学试验，发现其中含量更高的咖啡酰奎宁酸类也是重要活性成分，具有明显的抗氧化、抑制胆固醇合成、降低血清甘油三酯浓度、抑制15-脂氧酶、舒张平滑肌、抗血小板聚集、抑制组胺释放等活性，而且对乙肝病毒也有显著抑制作用。这类成分包括多种一、二咖啡酰奎宁酸化合物，结构式如下：

进一步的药理筛选揭示，咖啡酰奎宁酸类与已知的野黄芩甙之间存在明显的药理协同作用，且以二者含量分别为45～95％(重量)和5～25％(重量)时最为显著。研究表明，由咖啡酰奎宁酸和野黄芩甙组成的该组合物，静脉注射4mg/kg即可明显改善三氯化铁所致大鼠脑缺血行为障碍，缩小梗塞范围，并能明显改善由高分子右旋糖苷所致微循环障碍的脑部血流量，降低血粘度，还能明显推迟正常大鼠血栓形成时间及降低血小板聚集率；毒性试验示，小鼠静脉注射LD₅₀为1700mg/kg左右，显然，本组合物具有高效低毒特征，安全系数大，预示其应用前景广阔。

本发明组合物为黄棕色粉末，主要含黄酮和咖啡酰奎宁酸两类成分，均属酚酸类。本品游离状态水溶性较差，与氢氧化钠或其它药用许可的碱成盐后水溶性增强。根据口服、注射不同制剂需要，本组合物既可为游离形式，也可制成药用许可的盐。应用HPLC法控制黄酮类主要成分野黄芩甙的含量；UV法控制总咖啡酰奎宁酸(包括咖啡酸)的含量，二者最适范围分别为5～25％和45～95％。图1是本发明组合物的HPLC图谱，直观地反映了本组合物的化学组成概况。本组合物与现有灯盏花素有显著区别，如前所述，灯盏花素为黄酮类有效部位，成分单一，主要含野黄芩甙，含量高达90％左右，不含咖啡酰奎宁酸。本发明组合物主要含咖啡酰奎宁酸类(包括一、二咖啡酰奎宁酸同系物)，其次为野黄芩甙，另含少量咖啡酸及高黄芩素、芹菜素等其它黄酮，有效成分全面，协同作用明显，因而具有较好的药效和更广的适应症群。

本发明组合物可通过如下二技术方案来制备：

1.从菊科植物灯盏花提取。

工艺路线如附图2所示，取灯盏花原料粗粉，用水煎煮或酒精回流提取，提取液减压浓缩，所得浸膏加水溶解，加碱调pH6-8，滤过，滤液酸化至pH1-3，用正丁醇萃取数次，合并有机层，减压浓缩，挥尽正丁醇，所得膏状物经干燥、粉碎即为游离组合物，可直接用作各种口服制剂的原料药；膏状物也可通过加碱溶解、滤过、喷雾干燥等操作将其转化成水溶性更好的盐，用作各种注射剂原料。

该提取方法具体为将菊科植物灯盏花的全草或地上部分用热水或酒精提取2～4次，合并提取液，浓缩，浸膏用2～10倍量水溶解，加碱调pH值至6～8，滤过，取滤液加酸调pH值至1～3，继用正丁醇萃取2～5次，合并有机层，减压回收溶剂，残留物干燥即得；或者再加入适量碱水溶解，滤过，经冷冻干燥或喷雾干燥得其盐。

本技术的一个重要特征是应用正丁醇进行粗提物的精制，以除去大分子多糖、蛋白质、无机盐等杂质。

2.以市售或其它植物来源的野黄芩甙、咖啡酰奎宁酸为原料进行配制。已知国内市场上有主含野黄芩甙的灯盏花素供应(符合卫生部中成药部颁标准)，而咖啡酰奎宁酸类在菊科、茜草科、忍冬科植物中广泛分布，可以作为该类成分的原料来源，应用现有技术进行提取。

本发明组合物可单独或与其它药用许可的辅料配合后按现有技术制成片剂、胶囊(软、硬)、滴丸、颗粒剂、口服液等口服剂型；成人每日剂量0.2～5.0g。本发明组合物也可单独或与其它药用许可的辅料配合后按现有技术制成水针(1～500ml任意规格)、粉针等注射剂型；成人每日剂量0.05～1.0g。

下面以更具体的实施例对本发明药用组合物及其制剂的制备方法加以说明。

实施例一：组合物制备

取灯盏花全草100kg，切段并粉碎成粗粉，用10倍量80％酒精分3次回流提取，合并提取液，减压浓缩，得浸膏20kg；醇浸膏以5倍量热水溶解，加入10％氢氧化钠调节溶液pH值至7左右，滤过，滤液用10％硫酸酸化至pH1～3，再用等体积正丁醇萃取4次，合并正丁醇溶液，减压浓缩，得正丁醇萃取物4.5kg；萃取物置真空干燥箱内充分干燥，粉碎，即得黄棕色粉状组合物3.2kg(游离形式)；若将正丁醇萃取物用8倍量水溶解，并逐渐加入10％氢氧化钠调pH值7～8，滤过，滤液喷雾干燥，则得黄棕色粉状组合物盐约3.2kg。

实施例二：片剂制备

将本发明组合物100g、淀粉80g、糊精5g混合均匀，加入10％淀粉浆制软材，用14目尼龙筛网制粒，60～70℃通风干燥，16目筛整粒，加硬脂酸镁1.5g、羧甲基淀粉钠5g混匀，压制成1000片，包衣即得。每片含组合物100mg。成人口服每日2～5次，每次1～10片。

实施例三：胶囊制备

取本发明组合物100g，加入淀粉78g、硬脂酸镁2g混匀，直接用全自动胶囊填充机填充成1000粒，抛光即得。每粒含组合物100mg。成人口服每日2～5次，每次1～10粒。

实施例四：滴丸制备

取本发明组合物12g，投入32g加热熔融的聚乙二醇6000中，搅拌至溶解，转移至贮液瓶中，密闭并保温在80～90℃，调节滴丸机液滴定量阀门，由上往下滴入10～15℃的液状石蜡中，共制1000粒，将形成的滴丸沥干并擦除液状石蜡，干燥即得。每粒含组合物12mg。成人口服每日2～5次，每次10～80粒。

实施例五：口服液制备

取本发明组合物(盐)20g，与蜂蜜300g、蔗糖50g、苯甲酸钠2g及蒸馏水300ml混合，加热至85～90℃，搅拌使溶解，保温30min，滤过，滤液加水稀释至1000ml，搅匀，灌封(每支10ml)，灭菌即得。成人口服每日2～5次，每次1～5支。

实施例六：颗粒剂制备

取本发明组合物(盐)1份、糊精2份、蔗糖粉10份及乙醇适量，混匀，过10目筛制成颗粒，于60～70℃干燥，整粒，分装即得，每包重5g。成人口服每日2～5次，每次1～5包。

实施例七：注射液制备

取本发明组合物(盐)100g，加注射用水适量使溶解，加配制量的0.02％活性炭搅拌5～10min，滤过，滤液稀释至10L左右，加氯化钠调节渗透压至等渗，调pH 7.5～8.0，超滤，灌封成1000支(10ml/支)，100℃30min灭菌即得。成人静脉或肌肉注射给药，每日1～2次，每次1～5支。

实施例八：粉针剂制备

取本发明组合物100g，加注射用水及稀氢氧化钠适量使溶解，加配制量的0.02％活性炭搅拌5～10min，滤过，滤液加水稀释至1L，调pH值6.5～7.8，超滤，喷雾干燥，干粉无菌分装即得。每支100mg，临用前加注射用水适量使溶解，用氯化钠输液250～500ml稀释后缓慢静脉滴注。成人每日1～2次，每次1～5支。

实施例九：冻干粉针制备

无菌条件下取本发明组合物(盐)100g，置于无菌容器内，加注射用水至约950ml，搅拌使溶解，调节pH值至6.5～7.5，加注射用水至1000ml，然后加配制量的0.02％活性炭搅拌5～10min，用无菌抽滤漏斗过滤，再用灭菌垂熔漏斗精滤或超滤，滤液检验合格后分装于2ml安瓿中，低温冷冻干燥，无菌熔封即得。每支100mg，临用前加注射用水适量使溶解，用氯化钠输液250～500ml稀释后缓慢静脉滴注。成人每日1～2次，每次1～5支。

为便于理解本发明组合物在治疗和预防缺血性心脑血管疾病、血管型老年痴呆、高血脂、病毒性肝炎方面的药用价值，下面提供本发明组合物的部分药理实验结果。

1.对局灶性脑缺血的影响

大鼠静脉输注组合物，观察本品对三氯化铁所致脑缺血大鼠的行为及梗塞面积的影响，结果显示，大鼠输注组合物2、4、8mg/kg后，动物行为变化及梗塞范围与生理盐水对照组比较有明显改善，24h后行为评分分别降低了47.2％(p＜0.01)、61.1％(p＜0.001)、52.8％(p＜0.001)；脑梗塞面积平均缩小了21.2％(p＞0.05)、51.5％(p＜0.001)、42.4％(p＜0.01)。

2.对微循环障碍大鼠软脑膜局部血流量的影响

静脉输注组合物，观察本品对高分子右旋糖苷所致大鼠微循环障碍的影响。结果表明，假手术大鼠软脑膜局部流量60min内无明显改变；静脉推注高分子右旋糖苷后大鼠脑软膜局部流量明显减少，60min内最大下降23.9±6.2PU；静注组合物2、4、8mg/kg组于给药后10min，大鼠脑软膜流量降低值即明显少于溶剂对照组，作用持续60min以上，60min内最大下降分别为18.3±7.5、18.0±5.5、13.5±5.5PU，与溶剂对照组最大下降值比较，p分别＞0.05、＜0.05、＜0.001，说明给予组合物可缓解静注高分子右旋糖苷导致微循环流量的减少。

3.对微循环障碍大鼠血粘度的影响

前一实验结束后，从大鼠腹主动脉取血，按体积1∶9比例将3.8％枸橼酸钠加入全血中抗凝，用锥板型血液粘度计在不同切速下(7.5～150s^-1)测定大鼠全血粘度。结果表明，与假手术组比较，造型组大鼠在静脉推注高分子右旋糖苷后在不同切速下血粘度均明显高于正常大鼠。给予组合物2mg/kg后在各切速下大鼠血粘度与模型对照组无明显差别；给予4mg/kg后在低切速(7.5s^-1)时血粘度明显低于模型对照组(p＜0.05)；给予8mg/kg后在各切速下大鼠血粘度均明显低于模型对照组。

4.对大鼠实验性动脉血栓形成的影响

取Wistar大鼠，按体重随机分组，每组10只。对照组大鼠静脉注射生理盐水；给药组静注组合物2、4、8mg/kg，给药体积均为0.1ml/100g。实验时腹腔注射20％乌拉坦1g/kg麻醉，仰卧位固定，分离颈总动脉，将实验性体内血栓形成仪的刺激电极和温度探头挂于颈总动脉上，给药后10min开始刺激，刺激强度为2mA，刺激5min后关闭刺激开关，取下电极，3min后调节温控表至零位，记录动脉血栓形成时间。结果表明，大鼠静注组合物2、4、8mg/kg后，与对照组比较，动脉血栓形成时间分别推迟9％(p＞0.05)、63％(p＜0.001)、108％(p＜0.001)，表明组合物中、高剂量能明显推迟大鼠实验性动脉血栓形成时间。

5.抗血小板聚集作用

取Wistar大鼠，按体重随机分组，每组10只。对照组大鼠静注生理盐水，给药组分别静注组合物2、4、8mg/kg，给药体积均为0.1ml/100g。实验时腹腔注射20％乌拉坦1g/kg麻醉，仰卧位固定，腹主动脉取血，3.8％枸橼酸钠与全血按1∶9混合抗凝，1000rpm离心7min制备富血小板血浆，3000rpm离心10min制备贫血小板血浆，应用PPP自动平衡血小板聚集仪，将各诱导剂诱导的生理盐水组血小板聚集百分数调至60％左右，诱导剂ADP、花生四烯酸(AA)、胶原终浓度分别为4μmol/L、2mmol/L、20mg/ml。观察对给药组大鼠血小板聚集作用的影响。结果见表1。

表1  本发明组合物对大鼠血小板聚集功能的影响(X±SD，n＝10)

药物          剂量            鼠数        血小板聚集百分率(％)

              (mg/kg)         (只)        ADP              花生四烯酸      胶原

溶剂对照        -             10          55.1±18.1       72.8±10.0      49.7±20.0

组合物          2             10          39.3±17.7       69.4±7.6       41.8±16.6

组合物          4             10          37.2±14.5^*     62.1±18.8      39.4±18.8

组合物          8             10          36.1±20.0^**    51.9±17.7^*    26.2±18.0^*

注：与对照组比较：^*p＜0.05；^**p＜0.01

6.急性毒性试验

取体重18～22g昆明种小鼠雌、雄各50只，按性别、体重分别随机分成各5组，每组10只，静脉推注组合物2070、1863、1677、1509、1358mg/kg，相邻两剂量组剂距为0.9，静注体积均为0.1ml/10g体重，观察给药后一周内小鼠的毒性反应、死亡分布和死亡动物数，并按Bliss法计算LD₅₀及其95％可信限。结果表明，高剂量静脉注射组合物后小鼠1min左右出现自主活动减少，静卧，呼吸急促，继而出现行为失调，惊厥，5～20min左右死亡。未死动物在30min后呼吸逐渐恢复正常，1h后行为等均恢复正常，以后6日内均不再出现死亡。死亡小鼠肉眼尸检心、肺、肝等主要脏器未见异常。雌性小鼠LD₅₀为1676.75(1566.02～1795.30)mg/kg；雄性小鼠LD₅₀为1740.76(1617.87～1872.99)mg/kg，雌雄动物LD₅₀近似，无明显差异。

7.对犬心肌缺血的治疗作用及血流动力学影响

静脉输注组合物2、4mg/kg，明显改善结扎犬冠状动脉前降支所致实验性急性心肌缺血程度，缩小心肌梗塞范围。麻醉开胸犬心脏血流动力学试验结果表明，输注组合物1、2mg/kg对血流动力学各指标无明显影响；4mg/kg可降低血压、左室内压最大变化速率、左室做功及冠脉阻力，对心率、左室舒张末期压、总外周阻力、心脏泵血功能等其它血流动力学参数无影响，表明组合物通过减轻心脏后负荷，扩张冠脉及外周血管，减少回心血量及心脏做功发挥抗心肌缺血作用。

8.腹腔注射及口服给药在鸭体内对鸭乙型肝炎病毒感染的治疗效果

实验采用一日龄北京鸭，经腿胫静脉注射鸭乙型肝炎病毒，7天后开始给鸭腹腔注射及口服组合物3个剂量组，腹腔注射为25、50、100mg/kg，口服给药为0.25、0.5、1.0g/kg，1天2次，给药10天，观察药物对鸭的毒性和鸭血清鸭乙型肝炎病毒DNA的影响，并与阿昔洛韦比较。实验表明：大剂量组1.0g/kg口服，1天2次10天，无毒性。第一批实验，腹腔注射给药100mg/kg组，按配对统计，给药后第10天和停药后3天治疗组鸭血清DHBV-DNA有非常显著下降和显著下降(P＜0.01-0.05)；按成组统计与各自对照组比较，给药后第10天和停药后3天，能非常显著和显著地降低DHBV感染鸭血清DHBV-DNA水平(P＜0.01-0.05)。口服给药0.5g/kg，按配对统计，停药后3天治疗组鸭血清DHBV-DNA有显著效果(P＜0.05)；成组统计，给药后第10天和停药后3天治疗组鸭血清DHBV-DNA有显著下降(P＜0.05)。第二批实验，腹腔注射给药，按配对统计和成组统计处理，25、50和100mg/kg组给药后第5天、第10天和停药后3天鸭血清DHBV-DNA有非常显著和显著下降(P＜0.01-0.05)。口服给药0.5g/kg停药后3天鸭血清DHBV-DNA有一定的抑制作用；1.0g/kg给药后第5天，第10天和停药后3天按配对统计，治疗组鸭血清DHBV-DNA有显著和非常显著下降(P＜0.05-0.01)；成组统计处理，给药后第5天、第10天和停药后3天治疗组鸭血清DHBV-DNA有非常显著和显著下降(P＜0.01-0.05)。第三批实验，腹腔注射给药，按配对统计和成组统计处理，25、50和100mg/kg组，给药后第5天、第10天和停药后3天，治疗组鸭血清DHBV-DNA有显著和非常显著下降(P＜0.05-0.01)。口服给药1.0g/kg给药后第5天、第10天，治疗组鸭血清DHBV-DNA有显著下降(P＜0.05)。阿昔洛韦对照有显著效果，说明实验可信。结论：组合物腹腔注射给药100mg/kg；口服给药0.5-1.0g/kg对鸭乙型肝炎病毒感染有效。

本发明药用组合物具有如下突出特点：

1.高效低毒

2.有效成分明确，质量可控

3.工艺简便，易于产业化

4.植物原料廉价易得

5.适应症广，市场容量大

Claims (13)

1.一种以野黄芩甙、咖啡酰奎宁酸或其盐为主要活性成分的药用组合物，其特征在于该组合物中野黄芩甙的含量为5～25％(重量)；咖啡酰奎宁酸或其可药用盐的含量为45～95％(重量)。

2.根据权利要求1的药用组合物，其中所述咖啡酰奎宁酸是由3种以上一、二咖啡酰奎宁酸组成的混合物。

3.权利要求1药用组合物的提取方法，其特征在于将菊科植物灯盏花的全草或地上部分用热水或酒精提取2～4次，合并提取液，浓缩，浸膏用2～4倍量水溶解，加碱调pH值至6～8，滤过，取滤液加酸调pH值至1～3，继用正丁醇萃取2～5次，合并有机层，减压回收溶剂，残留物干燥即得；或者再加入适量碱水溶解，滤过，经冷冻干燥或喷雾干燥得其盐。

4.权利要求1的组合物在制备治疗血管性老年痴呆之药物中的应用。

5.权利要求1的组合物在制备治疗病毒性肝炎之药物中的应用。

6.权利要求1的组合物在制备治疗缺血性心脑血管疾病之药物中的应用。

7.含权利要求1药用组合物以及可药用载体和/或赋形剂的制剂。

8.根据权利要求7的制剂，其中所述制剂为胶囊。

9.根据权利要求7的制剂，其中所述制剂为滴丸。

10.根据权利要求7的制剂，其中所述制剂为颗粒剂。

11.根据权利要求7的制剂，其中所述制剂为口服液。

12.根据权利要求7的制剂，其中所述制剂为注射剂。

13.根据权利要求12的制剂，其中所述注射剂为粉针和水针形式。

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