CN117362463A - 一种南酸枣多糖铁的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种南酸枣多糖铁的制备方法，其制备方法为：以新鲜南酸枣果肉制备出南酸枣多糖，再利用南酸枣多糖进行正交实验，最后得出影响多糖铁配合物Fe³⁺含量的因素顺序为：南酸枣多糖与柠檬酸三钠的质量比＞反应温度＞反应时间＞三氯化铁的添加量，确定多糖铁配合物最佳制备工艺条件为pH为8‑9、反应时间为1h、南酸枣多糖CAP30与柠檬酸三钠质量比为0.5、反应温度为60℃、2mol/L的三氯化铁的添加量为0.6mL。本发明的有益效果是：在最佳合成工艺条件下，南酸枣多糖铁配合物的铁含量约为27.09％，有助于提高南酸枣的附加值，延长南酸枣精深加工产业链，具有良好的应用价值和市场前景。

Description

一种南酸枣多糖铁的制备方法

技术领域

本发明涉及一种补铁剂领域，具体为一种南酸枣多糖铁的制备方法。

背景技术

铁是人体含量最高的必需微量元素，是构成血红蛋白、肌红蛋白的必需成分，参与人体的代谢和免疫功能，机体缺铁会造成多种功能失调及缺铁性贫血(IDA)，IDA是世界上最常见的一种营养缺乏症,随着经济发展、生活水平的提高，其发病率逐渐下降，但仍普遍存在，主要发生在儿童和育龄期妇女。中国居民营养与慢性病状况报告(2020年)显示，我国18岁及以上居民贫血率为8.7％，孕妇贫血率为13.6％，6～17岁儿童青少年贫血率为6.1％。在孕妇及儿童等主要贫血人群中，由缺铁导致的贫血占比高于50％。对于妊娠期IDA患者来说，患者剖宫产分娩率和产后出血发生率显著升高，胎儿低体质量及早产的发生率也随患者贫血程度加重而升高。对于儿童患者来说，IDA会影响婴幼儿重要脏器功能的发育，造成儿童运动障碍和免疫力下降，并影响儿童的认知发育。IDA也是慢性肾病(CKD)的常见并发症，约42.7％的CKD患者患有IDA。对于CKD合并IDA患者来说，贫血可加速CKD进展，增加患者的透析风险和心血管事件风险。此外，由于血氧不足，患者易发生疲劳、烦躁、记忆力减退等症状，严重影响身体健康，降低生活质量和劳动能力。

铁缺乏对健康的威胁在于它的隐蔽性，只有当铁缺乏达到一定程度时，机体才会表现出明显的症状，而此时营养缺乏性疾病已经发生。长期严重缺铁甚至会留下难以完全消除的终生不愈残疾、大脑迟钝等伤害。因此，IDA的及时诊断和治疗具有重要的临床意义。

补铁剂是治疗缺铁症的特效药，是预防和治疗IDA的一种安全、有效及经济的常用方法。因此，开发出高效低毒的新型营养型补铁剂有迫切的必要性。目前口服铁剂主要包括以硫酸亚铁为代表的第一代铁剂和以琥珀酸亚铁为代表的第二代铁剂。一二代铁剂均是以离子形式吸收，不良反应较大，胃肠道不良事件多，且生物利用度低。

近些年出现的第三代铁剂——多糖铁配合物，不仅具有较理想的稳定性、水溶性和吸收率等，而且没有游离铁离子所造成的胃肠道刺激作用，可起到良好的预防和治疗IDA的作用；另一方面，多糖铁配合物中的铁释放之后，配体多糖仍可在体内发挥多方面的生物活性，如免疫调节、抗病毒、降血糖等。因此，以三价铁(Fe³⁺)为核心的多糖铁(III)配合物是一类很有潜质的新型补铁物质，有望开发成为一种具有双重功效的生物补铁剂，已经成为当下研究的热点。

南酸枣系漆树科南酸枣属植物，南酸枣果又名五眼果、醋酸果、鼻涕果，在我国主要分布于江西、湖北、湖南、四川等地，印度、日本等国家也有分布。经国家林业局认定，江西省赣州市崇义县于2004年12月正式获得“中国南酸枣之乡”称号。南酸枣果肉富含大量的植物黄酮、天然果胶、维生素等营养成分，具有抗氧化、延缓衰老、保护心血管、抗肿瘤、抗病毒和养心安神等作用。过去很长一段时间，南酸枣常因生食酸涩而被当做野果遗弃于山林中；随着现代加工业及科学研究的不断发展，这种“野果”无论作为天然药物或是加工成保健食品都表现出较高的应用价值。多糖是枣类果实中一种重要的大分子活性成分。

本技术团队研究南酸枣粗多糖CAP的提取工艺条件，在最佳提取工艺下，南酸枣粗多糖CAP提取率约为27％，表明南酸枣果肉富含天然多糖，将有助于提高南酸枣的附加值。

发明内容

本发明的目的在于提供一种南酸枣多糖铁的制备方法，有助于提高南酸枣的附加值，延长南酸枣精深加工产业链，具有良好的应用价值和市场前景。

本发明采用的技术方案如下：一种南酸枣多糖的制备方法，其方法步骤为：

步骤S1，新鲜南酸枣洗净去皮去核得到南酸枣果肉，将南酸枣果肉干燥粉碎得南酸枣粉末；

步骤S2，在提取条件下提取南酸枣粉末得南酸枣粗提液，提取条件为：蒸馏水：S1步骤中南酸枣粉末的料液比1：40g/mL，提取温度100℃，提取时间5h；

步骤S3，将南酸枣提取液过滤和浓缩操作后，加入无水乙醇使得溶液乙醇浓度为20％v/v，在温度为4℃冰箱中静置24小时以上后离心，离心转速4800r/min，时间是10min，弃去下层沉淀物，得到的上清液即为南酸枣多糖溶液；

步骤S4，在南酸枣多糖溶液中继续加入无水乙醇，使得南酸枣溶液的乙醇浓度达到30％v/v，再次在温度为4℃冰箱中静置24小时以上后离心，离心转速4800r/min，时间是10min，弃去上层清液后，下层沉淀部分即为南酸枣多糖CAP30，真空干燥后备用。

进一步的，计算多糖得率，南酸枣多糖CAP30中含有中性糖、糖醛酸和蛋白质，采用苯酚-硫酸法对南酸枣多糖CAP30的中性糖含量进行测定，采用间羟基联苯比色法对南酸枣多糖CAP30的糖醛酸含量进行测定，采用考马斯亮蓝法对南酸枣多糖CAP30的蛋白质进行测定。

进一步的，采用苯酚-硫酸法对南酸枣多糖CAP30的中性糖含量进行测定，其具体步骤为：

步骤(1)，制作标曲：精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖标准品0.0100g，置于10mL容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，得到母液即葡萄糖标准溶液的浓度为1mg/mL；

将母液分别稀释为20，40，60，80，100μg/mL；分别移取1mL上述系列浓度的稀释后的葡萄糖标准溶液，加入1mL5％苯酚和5mL浓硫酸混匀，35min后于490nm处测定吸光度；

步骤(2)，样品测定：分别称取0.0100g南酸枣多糖CAP30，超声溶解，定容于100mL容量瓶；移取1mL南酸枣多糖CAP30溶液于试管中，分别加入1mL 5％苯酚和5mL浓硫酸，混匀，35min后于490nm处测定吸光度。

进一步的，采用间羟基联苯比色法对南酸枣多糖CAP30的糖醛酸含量进行测定，其具体步骤为：

步骤(1)，以半乳糖醛酸为标准制作标准曲线：称取10mg半乳糖醛酸标品溶于10mL蒸馏水，配置成1mg/mL的母液即半乳糖醛酸标准溶液，再分别稀释为20，40，60，80，100μg/mL的溶液；

分别取0.5mL上述系列浓度的稀释后的母液，空白试管加入0.5mL蒸馏水，每只空白试管加入3mL试剂A，混匀后100℃水浴加热5min，后冰浴冷却，再加入50μL试剂B，室温下静置20min，于520nm处测定吸光度；

步骤(2)，样品测定：分别称取0.0100g南酸枣多糖CAP30，超声溶解，定容于100mL容量瓶；取0.5mL南酸枣多糖CAP30溶液于试管中，分别加入3mL试剂A，混匀后于100℃水浴加热5min，后冰浴冷却，再分别加入50μL试剂B，室温下静置20min，于520nm处测定吸光度；

其中试剂A：0.25g四硼酸钠溶于100mL浓硫酸溶液；

试剂B：0.15g3-苯基酚与0.5g NaOH溶于100mL水中，包裹锡箔纸后避光放置于4℃冰箱保存，一个月内有效。

进一步的，采用考马斯亮蓝法对南酸枣多糖CAP30的蛋白质进行测定，其具体步骤为：

步骤(1)，制作标曲：称取0.0100g牛血清蛋白(BSA)作为标准物质，分别配制成1.00mg/mL的母液即牛血清蛋白标准溶液，将1.00mg/mL的牛血清蛋白标准溶液分别稀释为10，20，40，60，80，100μg/mL的标准溶液；

取上述系列浓度的稀释后的牛血清蛋白标准溶液1.0mL于试管，加入5.0mL考马斯亮蓝溶液，立即混匀后反应5min，在595nm处测定吸光度；

步骤(2)，样品测定：称取10mg的南酸枣多糖CAP30溶于1mL水中，加入5mL考马斯亮蓝G-250染色剂，立即混匀后反应5min，在595nm处测定吸光度。

考马斯亮蓝G-250染料试剂的配置：称取100mg考马斯亮蓝，溶于50mL的95％乙醇后，再加入120mL 85％的磷酸，用蒸馏水定容至1L。

进一步的，一种南酸枣多糖铁的制备方法，其方法步骤为：

步骤S5，称取备用的南酸枣多糖CAP30和柠檬酸三钠，将南酸枣多糖CAP30和柠檬酸三钠溶于10mL的去离子水中，固定南酸枣多糖CAP30质量为0.1g，使南酸枣多糖CAP30和柠檬酸三钠其质量比分别为0(柠檬酸三钠质量为0)、0.5、1、1.5、2，磁力搅拌10min混合均匀得混合溶液；

步骤S6，在不同温度梯度分别为50℃、60℃、70℃、80℃、90℃的恒温水浴中不断磁力搅拌混合溶液，缓慢均匀滴加2mol/L的体积分别为0mL、0.3mL、0.6mL、0.9mL、1.2mL的FeCl₃溶液，通过滴加20％NaOH溶液控制混合溶液的pH分别为5-6、6-7、7-8、8-9、9-10；

步骤S7，混合溶液在不同温度梯度下反应时间分别为0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h，将混合溶液在离心转速4000rpm，时间为10min离心，去除红褐色沉淀得到上清液；

步骤S8，在上清液中加入4倍无水乙醇，静置24小时以上，再次在离心转速4000rpm，时间为10min离心后得到下层沉淀，取下层的沉淀用无水乙醇洗涤2次，在离心转速4000rpm，时间为10min离心后真空干燥，即为南酸枣多糖铁粗品；

步骤S9，将南酸枣多糖铁粗品溶于水中，扎袋去离子水透析除盐3天得透析液，对透析液进行真空浓缩至约四分之一体积后得浓缩液，加入4倍乙醇醇沉，在离心转速4000rpm，时间为10min离心，除去上清液，真空干燥最终制得南酸枣多糖铁配合物。

进一步的，以多糖铁配合物Fe³⁺含量为评价指标，固定pH8-9，采用四因素三水平正交表设计正交实验，对南酸枣多糖CAP30与柠檬酸三钠的质量比、三氯化铁添加量、反应温度和反应时间4个因素进行极差分析，根据极差的大小得出最佳制备工艺条件；

影响多糖铁配合物Fe³⁺含量的因素顺序为：南酸枣多糖CAP30与柠檬酸三钠的质量比＞反应温度＞反应时间＞三氯化铁的添加量，确定多糖铁配合物最佳制备工艺条件为反应时间为1h、南酸枣多糖CAP30与柠檬酸三钠质量比为0.5、反应温度为60℃、三氯化铁的添加量为0.6mL。

进一步的，为测定南酸枣多糖铁中的铁含量，采用邻菲罗啉比色法测定南酸枣多糖铁中的铁含量的方法，具体为：

步骤(1)，制作标曲：

配置100mg/L的六水合硫酸亚铁铵(Fe(NH₄)₂·(SO₄)₂·6H₂O)，稀释10倍后制成10mg/L的六水合硫酸亚铁铵工作液。取7个50个mL容量瓶，准确加入不同体积(0.00、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL)上述10mg/L的六水合硫酸亚铁铵工作液至50mL容量中，依次加入1mL盐酸羟胺(10％)、2.5mL的浓度为0.1％的邻菲罗啉显色剂[2.5mL邻菲罗啉显色剂(0.1％，w/v)]，摇匀后再加入一小块刚果红试纸，慢慢滴加氨水，使刚果红试纸恰好由蓝色变成红紫色，然后再加入5mL乙酸-乙酸钠缓冲液(6.8g乙酸钠加入到2.88mL乙酸中，定容到100mL容量瓶)，摇匀后用蒸馏水定容，放置15min，测定510nm处的吸光度。以蒸馏水代替南酸枣多糖铁样品溶液，作为空白对照；

步骤(2)，取南酸枣多糖铁样品20mg溶解于50mL蒸馏水中，取10mL上述样品溶液用蒸馏水定容到50mL，加1mL硫酸溶液(浓硫酸：水＝1:35，v/v)，5.0mL过硫酸钾溶液(40g/L)，置于电炉上，缓慢煮沸15min,保持体积不低于20mL，冷却至室温，用氨水溶液(氨水：水＝1:3，v/v)或硫酸溶液(浓硫酸：水＝1:35，v/v)调节pH接近2，备用。

步骤(3)，南酸枣多糖铁样品铁含量测定：取5mL【步骤(2)】中样品至50mL容量中，依次加入1mL盐酸羟胺溶液(10％，w/v)、2.5mL邻菲罗啉显色剂(0.1％，w/v)，摇匀后再加入一小块刚果红试纸，慢慢滴加氨水，使刚果红试纸恰好由蓝色变成红紫色，然后再加入5mL乙酸-乙酸钠(6.8g乙酸钠加入到2.88mL乙酸中，定容到100mL容量瓶)缓冲液，摇匀后用蒸馏水定容，放置15min，测定510nm处的吸光度；

步骤(4)，通过六水合硫酸亚铁铵标准溶液所制备的标准曲线y＝0.04506x+0.0012(R²＝0.9995)，计算南酸枣多糖铁配合物中的铁含量，其中，y为吸光度，x为六水合硫酸亚铁铵工作液浓度，R为线性相关系数。

本发明的有益效果是：采用正交实验优化南酸枣多糖铁配合物的制备工艺，开发一种高效低毒的新型营养型补铁剂，将有助于提高南酸枣的附加值，延长南酸枣精深加工产业链，具有良好的应用价值和市场前景。本发明的有益效果是：在最佳合成工艺条件下，南酸枣多糖铁配合物的铁含量约为27.09±0.66％，有助于提高南酸枣的附加值，延长南酸枣精深加工产业链，具有良好的应用价值和市场前景。

附图说明

图1为本发明三氯化铁添加量对南酸枣多糖铁配合物铁含量的影响图。

图2为本发明南酸枣多糖CAP30与柠檬酸三钠质量比对南酸枣多糖铁配合物铁含量的影响图。

图3为本发明反应体系pH对南酸枣多糖铁配合物铁含量的影响图。

图4为本发明反应温度对南酸枣多糖铁配合物铁含量的影响图。

图5为本发明反应时间对南酸枣多糖铁配合物铁含量的影响图。

具体实施方式

南酸枣果实购买于江西省赣州市崇义县。

本发明是这样来工作和实施的，南酸枣多糖制备工艺优化方法为：新鲜南酸枣洗净去皮去核，果肉干燥粉碎。在料液比1：40(g/mL)，提取温度100℃，提取时间5h的最佳提取工艺下提取南酸枣多糖。提取液过滤、浓缩后，加入无水乙醇，当乙醇浓度为20％(v/v)时，于4℃静置24小时以上，离心(4 800r/min，10min)，弃去沉淀物杂质；上清液继续添加无水乙醇，使得溶液的乙醇浓度达到30％(v/v)，再次置于4℃静置24小时以上，离心(4 800r/min，10min)，此时如果上清液中继续加入无水乙醇，则无新的沉淀产生，因此得到的沉淀物即为南酸枣多糖(南酸枣多糖CAP30)，真空干燥后备用。

计算多糖得率，并采用苯酚-硫酸法对中性糖含量进行测定、间羟基联苯比色法测得糖醛酸含量、考马斯亮蓝法测得蛋白质含量。

本发明进行正交实验，其正交实验方法为：称取0.1g步骤S1-S4制备的南酸枣多糖CAP30加入柠檬酸三钠，溶于10mL蒸馏水中磁力搅拌10min使混合均匀。在一定温度的水浴中不断磁力搅拌，并且缓慢均匀的向混合液中滴加一定体积的2mol/L的三氯化铁溶液，通过滴加20％的氢氧化钠溶液控制混合液的pH值，滴加完成后，将混合液在加热的水浴中反应一定时间，将反应混合物离心(4000rpm，10min)，去除红褐色沉淀，上清液加4倍无水乙醇，静置过夜，离心(4000rpm，10min)，取沉淀用无水乙醇洗涤2次，离心(4000rpm，10min)，下层沉淀真空干燥，得南酸枣多糖铁粗品。将干燥的南酸枣多糖铁粗品溶于水中，扎袋去离子水透析除盐3天，取透析内液进行真空浓缩至约四分之一体积，浓缩液加入4倍乙醇醇沉，离心(4000rpm，10min),除去上清液，真空干燥。最终制得南酸枣多糖铁配合物。

根据单因素实验结果，以Fe³⁺含量为评价指标，固定pH值为8-9，采用四因素三水平正交表(表1)设计实验，优化配合物的制备工艺，在10mL的反应体系下，对南酸枣多糖CAP30与柠檬酸三钠的质量比(A)、三氯化铁添加量(B)、反应温度(C)和反应时间(D)4个因素进行极差分析，根据极差(K值)的大小确定最优制备工艺，如果最优因素组合不在正交实验设计中，需进一步进行验证实验。

表1正交实验设计因素和水平表

对本发明的数据处理和分析，数据用平均值±标准差表示，设3次重复。采用SPSS软件进行单因素方差分析，以P＜0.05判定为差异具有统计学意义。

结果与分析，南酸枣多糖理化指标测定结果；南酸枣多糖CAP30得率为16.51±0.55％，中性糖含量为(76.15±0.86)％，糖醛酸含量为(51.93±3.68)，蛋白质含量为(1.17±0.18)％。

本发明制备南酸枣多糖铁的单因素实验结果

(1)三氯化铁添加量对铁含量的影响：固定南酸枣多糖CAP30与柠檬酸三钠的质量比为2：1，反应温度为70℃，反应时间为1h，控制反应液pH为8-9，考察南酸枣多糖(南酸枣多糖CAP30)与柠檬酸三钠质量比。由图1可以看出，当三氯化铁溶液(2mol/L)添加量达到0.9mL时，铁含量达到最大值，随着三氯化铁添加量进一步增加，铁含量反而下降。这可能由于当三氯化铁溶液添加量过大时，会引起副产物氧化亚铁生成，降低反应体系pH，不利于对南酸枣多糖与铁元素络合反应的进行。

(2)南酸枣多糖CAP30与柠檬酸三钠质量比对铁含量的影响；固定三氯化铁(2mol/L)添加量为0.9mL，反应温度为70℃，反应时间为1h，控制反应液ph为8-9，考察南酸枣多糖CAP30与柠檬酸三钠质量比对铁含量的影响。柠檬酸三钠在反应中作为催化剂的作用。由图2可以看出，添加柠檬酸三钠的铁含量明显高于未添加柠檬酸三钠的铁含量，当二者质量比(南酸枣多糖：柠檬酸三钠)为1.5时，铁含量达到最大值，随着质量比增加，铁含量下降。这可能由于添加量过大，反应体系内离子运动强度过大，不利于南酸枣多糖与铁元素络合反应的进行，影响了反应效率。

(3)反应体系pH对铁含量的影响；固定三氯化铁添加量为0.9ml，南酸枣多糖CAP30与柠檬酸三钠的质量比为1.5，反应温度为70℃，反应时间为1h，考察溶液pH值对铁含量的影响。由图3可以看出，随着反应体系pH值的增加铁含量也呈上升趋势，反应体系中pH在8.0-9.0范围内，铁含量达到最大值，但当反应体系的pH到达10时，南酸枣多糖铁配合物的铁含量显著下降，这可能由于反应体系pH的增大促进了铁元素通过O桥或OH桥聚合形成聚合β-FOOH铁核，而当反应体系pH过大时，反应体系的羟基浓度过大，会出现氢氧化铁沉淀，从而降低铁含量。因此固定选取反应体系pH为8-9做正交实验。

(4)反应温度对铁含量的影响：固定三氯化铁添加量为0.9mL，南酸枣多糖CAP30与柠檬酸三钠的质量比为1.5，反应时间为1h，控制反应液pH为8-9，考察反应温度对铁含量的影响。由图4可以看出，当反应温度在50-70℃范围内时，南酸枣多糖铁的随着温度的增加缓慢的增大，在70℃时达到最大值，而温度超过70℃时南酸枣多糖铁配合物的显著减小。这可能由于反应温度过高，反应体系内的离子震动剧烈，影响络合反应的进行。

(5)反应时间对铁含量的影响：固定三氯化铁添加量为0.9mL，南酸枣多糖CAP30与柠檬酸三钠的质量比为1.5，反应温度为70℃，控制反应液pH为8-9，考察反应时间对铁含量的影响。由图5可以看出，当反应时间在0.5-2.5h范围内时，南酸枣多糖铁的先增大后减小，在1h时达到最大值，而时间超过1h时南酸枣多糖铁配合物的显著减小。这可能由于反应过程中，南酸枣多糖与铁元素络合反应形成的络合物不稳定，所以当反应时间增加时，影响了南酸枣多糖铁的。

正交实验结果，如表2所示，影响多糖铁配合物Fe³⁺含量的因素顺序为南酸枣多糖CAP30与柠檬酸三钠的质量比＞反应温度＞反应时间＞三氯化铁的添加量，正交实验1号A₁B ₁C₁D₁(pH 8-9、反应时间0.5h、CAP与柠檬酸三钠质量比0.5、反应温度50℃、三氯化铁添加量为0.6mL)制备工艺得到的配合物中Fe ³⁺含量最高，为(26.02±0.933)％。然而，根据极差值大小优化出的最优制备工艺为A₁B₁C₂ D₂(pH 8-9、反应时间1h、南酸枣多糖CAP30与柠檬酸三钠质量比0.5、反应温度60℃、三氯化铁添加量0.6mL)。对此工艺进行验证，结果表明得到的配合物中Fe³⁺含量为(27.09±0.66)％，高于1号工艺，因此，确定配合物最佳制备工艺为pH 8-9、反应时间1h、南酸枣多糖CAP30与柠檬酸三钠质量比0.5、反应温度60℃、三氯化铁添加量0.6mL。

表3，对正交实验结果进行方差分析，分析结果如表3所示(表3中，*为P＜0.05为显著作用；**为P＜0.01为高度显著作用)

表2正交实验表

表3正交实验方差分析

Claims (3)

1.一种南酸枣多糖的制备方法，其特征在于：方法步骤为：

步骤S1，新鲜南酸枣洗净去皮去核得到南酸枣果肉，将南酸枣果肉干燥粉碎得南酸枣粉末；

步骤S2，在提取条件下提取南酸枣粉末得南酸枣多糖粗提液，提取条件为：蒸馏水：S1步骤中南酸枣粉末的料液比1：40g/mL，提取温度100℃，提取时间5h；

步骤S3，将上述南酸枣多糖粗提液过滤和浓缩操作后，加入无水乙醇使得溶液乙醇浓度为20％v/v，在温度为4℃冰箱中静置24小时以上后离心，离心转速4800r/min，时间是10min，弃去下层沉淀物，得到的上清液即为南酸枣多糖溶液；

步骤S4，在南酸枣溶液中继续加入无水乙醇，使得南酸枣上清液溶液的乙醇浓度达到30％v/v，再次在温度为4℃冰箱中静置24小时以上后离心，离心转速4800r/min，时间是10min，弃去上层清液后，下层沉淀部分即为南酸枣多糖CAP30，真空干燥后备用。

2.一种南酸枣多糖铁的制备方法，应用权利要求1所述的一种南酸枣多糖的制备方法制备得到的南酸枣多糖CAP30，其特征在于：方法步骤为：

步骤S5，称取备用的南酸枣多糖CAP30和柠檬酸三钠，将南酸枣多糖CAP30和柠檬酸三钠溶于10mL的去离子水中，固定南酸枣多糖CAP30质量为0.1g，使南酸枣多糖CAP30和柠檬酸三钠其质量比分别为0、0.5、1、1.5、2磁力搅拌10min混合均匀得混合溶液；

步骤S6，在不同温度梯度分别为50℃、60℃、70℃、80℃、90℃的恒温水浴中不断磁力搅拌混合溶液，缓慢均匀滴加2mol/L的体积分别为0mL、0.3mL、0.6mL、0.9mL、1.2mL的FeCl₃溶液；通过滴加20％NaOH溶液控制混合溶液的pH分别为5-6、6-7、7-8、8-9、9-10；

步骤S7，混合溶液在不同温度梯度下反应时间分别为0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h，将混合溶液在离心转速4000rpm，时间为10min离心，去除红褐色沉淀得到上清液；

步骤S8，在上清液中加入4倍无水乙醇，静置24小时以上，再次在离心转速4000rpm，时间为10min离心后得到下层沉淀，取下层的沉淀用无水乙醇洗涤2次，在离心转速4000rpm，时间为10min离心后真空干燥，即为南酸枣多糖铁粗品；

步骤S9，将南酸枣多糖铁粗品溶于水中，扎袋去离子水透析除盐3天得透析液，对透析液进行真空浓缩至约四分之一体积后得浓缩液，加入4倍乙醇醇沉，在离心转速4000rpm，时间为10min离心，除去上清液，真空干燥最终制得南酸枣多糖铁配合物。

3.根据权利要求2所述的一种南酸枣多糖铁的制备方法，其特征在于：以多糖铁配合物Fe³⁺含量为评价指标，采用四因素三水平正交表设计正交实验，对南酸枣多糖CAP30与柠檬酸三钠的质量比、三氯化铁添加量、反应温度和反应时间4个因素进行极差分析，根据极差的大小得出最佳制备工艺条件；

影响多糖铁配合物Fe³⁺含量的因素顺序为：南酸枣多糖CAP30与柠檬酸三钠的质量比＞反应温度＞反应时间＞三氯化铁的添加量，确定多糖铁配合物最佳制备工艺条件为反应时间为1h、南酸枣多糖CAP30与柠檬酸三钠质量比为0.5、反应温度为60℃、三氯化铁的添加量为0.6mL。