CN117298198A - 一种微藻的提取物应用于医疗的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物技术领域,特别涉及一种微藻的提取物应用于医疗的方法。本发明所述的微藻提取物的组合物,角毛藻提取物:油茶籽提取物:山茶叶提取物=1.5‑2.0:0.5‑1.0:0.5‑1.2。本发明提供的微藻提取物组合物,制备方法简单,成本较低,选适合工业化放大生产,并且制备出来的微藻提取物组合物可有效治疗脂溢性皮炎,具有良好的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域,特别涉及一种微藻的提取物、组合物及应用于医疗的方法。
背景技术
脂溢性皮炎是在皮脂溢出基础上所发生的一种慢性丘疹磷屑性炎症性疾病,典型的表现为黄红色斑片或丘疹,上覆有油腻性鳞屑或者痂皮,并伴有不同程度的瘙痒,常见于皮脂腺较多的区域和皱褶部位。一般脂溢性皮炎可分为婴儿脂溢性皮炎和成人脂溢性皮炎,婴儿脂溢性皮炎常发生在生后第1个月,皮损多在头皮、额部、眉间及双颊部,为溢出性红色斑片,上有黄痂;而成人一般脂溢性皮炎表现:油性也有是干性或者混合性、瘙痒,脱屑等皮肤表面症状表现,红斑较明显。
脂溢性皮炎的病因仍不明确,但其发病与诸多因素有关。大量的研究表明,脂溢性皮炎的发病与马拉色菌感染、活跃的皮脂腺、免疫异常、遗传等因素有着密不可分的关系。该病反复发作,给患者的生活造成困扰,极大地影响了患者的生活质量,甚至影响也理健康。
长期以来,因该病顽固难治,仍被列为当今世界皮肤科领域的重要科研课题,也是全世界皮肤科重点防治疾病之一,如何缓解病者的痛苦或者根治脂溢性皮炎已是世界医学领域的一大难题。目前西医在脂溢性皮炎治疗上,局部治疗以去脂、杀菌、消炎和止痒为原则,多以抗真菌药、皮质类固醇激素及维甲酸类药物为主,口服治疗可采用B族维生素、四环素类抗生素以及抗组胺药等,但治疗效果欠佳,且容易反复发作、无法根除。那么,如何找到一种可有效治疗脂溢性皮炎的药物使我们目前急需解决的问题。
微藻是单细胞生物,其生活在海洋和新鲜水域中,并且能够进行光合作用。微藻产生大气层中约一半的氧气。常见的微藻类型有硅藻、绿藻和金藻。微藻通过利用阳光和无机物(例如,二氧化碳、水、氮、磷)产生碳水化合物、蛋白质和脂肪酸等有机物。最近,对可持续世界和绿色技术的兴趣不断增加。通过这种方法,微藻产生的生物活性物质被用于化妆品、食品和药品等部门的不同用途。藻类被作为一种可靠的天然有机活性成分应用于各种化妆品、食品和药品中,以提高这些产品的价值。用于此目的的生物活性物质是微藻产生的多糖、蛋白质和色素等成分。这些组分用作抗氧化剂、抗炎剂、抗老化剂、抗皱剂、保湿剂、光防护剂、减薄剂、抗黑色素剂和胶原蛋白增强剂,并改善皮肤的健康状况和外观。
因此,如何找到一种可有效治疗脂溢性皮炎的微藻提取物具有巨大的临床应用前景。
发明内容
本发明的目的就在于提供一种可有效治疗脂溢性皮炎的微藻提取物。
本发明的目的是通过如下方案实现的:
在本发明中,微藻可以是任何种类的微藻,例如红藻紫菜、小球藻、荚膜小球藻属、角毛藻、螺旋藻等。
在本发明中,微藻优选角毛藻。
角毛藻,硅藻门,盒形藻科。细胞呈扁椭圆形,壳面椭圆形。长轴带面为四角形,短轴带面为长方形。细胞具有长角毛,并常借助于角毛交接成链。海产,我国沿海均有分布,种类达10多种,均为赤潮种类。海洋经济虾蟹贝类育苗常需要大量培养角毛藻,以供幼体或轮虫生长食用。角毛藻是海洋浮游硅藻的重要类群,也是我国沿海许多港湾的优势硅藻种群。相对于其它藻类而言,角毛藻生长快速,尤其是在春夏季节,常常成为浮游植物的优势类群。角毛藻的角毛上有倒刺,会刺伤鱼鳃,对养殖鱼类造成伤害。但大部分角毛藻是海洋浮游植物群落中的有益类群,是许多海洋动物的饵料生物,因此,其种类组成和细胞丰度对海洋生态系统中的其它生物以及海洋环境有着直接或间接的重要影响,具有重要的研究价值。
本发明的微藻提取物为角毛藻提取物。微藻提取物中的抗菌活性物质大多没有坚定清楚,目前从角毛藻中筛选或分离出的抗菌活性物质包括酯类、酚类、萜类、多糖类、卤化物和含硫化合物等;其中有机溶剂提取物相比水提物对细菌有更强的抑制效果。因此,本发明的角毛藻提取物主要指角毛藻有机溶剂提取物,其中富含酚类和萜类活性物质。
在本发明中,角毛藻提取物可以根据本领域常规的制备方法制备,例如搅拌、研磨、浸渍、蒸煮、超声提取、微波萃取、减压抽滤、渗滤等,也可以组合使用上述方法制备。
本发明提供了一种角毛藻提取物的制备方法,包括如下步骤:
(1)将角毛藻粉碎、烘干,得到角毛藻粉;
(2)用异丙醇和乙酸乙酯的混合溶剂处理角毛藻粉,进行浸提,得到浸提液;
(3)所述浸提液经减压浓缩除去异丙醇,依次进行超声、透析处理,得到透析液;
(4)所述透析液经浓缩干燥,得到角毛藻提取物。
在本发明中,步骤(1)粉碎的粒度为80-120目。
在本发明中,步骤(1)粉碎的粒度优选为100目。
在本发明中,步骤(1)烘干的温度为60-90℃。
在本发明中,步骤(1)烘干的温度为70-80℃。
在本发明中,步骤(1)烘干时间为2-3h。
在本发明中,步骤(1)烘干时间为2.5h。
在本发明中,步骤(2)异丙醇和乙酸乙酯的体积比为1-3:1。
在本发明中,步骤(2)异丙醇和乙酸乙酯的体积比为2:1。
在本发明中,步骤(2)角毛藻与混合溶剂的质量体积比为1:3-8(g/mL)。
在本发明中,步骤(2)角毛藻与混合溶剂的质量体积比为1:5(g/mL)。
在本发明中,步骤(2)浸提的温度为90-120℃。
在本发明中,步骤(2)浸提的温度为95-100℃。
在本发明中,步骤(2)浸提时间为6-8h。
在本发明中,步骤(2)浸提时间为7h。
在本发明中,步骤(2)浸提液采用离心分离得到。
在本发明中,离心分离的转速为900-1200rpm。
在本发明中,离心分离的转速优选为1000rpm。
在本发明中,离心分离的时间为40-60min。
在本发明中,离心分离的时间优选为50min。
在本发明中,步骤(3)减压浓缩在旋转蒸发仪中进行。
在本发明中,步骤(3)旋转蒸发仪的水浴温度为60-90℃。
在本发明中,步骤(3)旋转蒸发仪的水浴温度为70-80℃。
在本发明中,步骤(3)超声使用的超声功率为350-500W。
在本发明中,步骤(3)超声使用的超声功率为400W。
在本发明中,步骤(3)超声时间为10-30min。
在本发明中,步骤(3)超声时间为20min。
在本发明中,步骤(3)透析使用的透析袋的截留分子量为2-20KDa。
在本发明中,步骤(3)透析使用的透析袋的截留分子量优选为15KDa。
在本发明中,步骤(4)浓缩干燥的温度为65-75℃。
在本发明中,步骤(4)浓缩干燥的温度为70-75℃。
在本发明中,步骤(4)浓缩干燥时间为2-3h。
在本发明中,步骤(4)浓缩干燥时间为2.5h。
本发明还提供一种角毛藻提取物的组合物。
在本发明中,按照各组分的质量比计算,角毛藻提取物:油茶籽提取物:山茶叶提取物=1.5-2.0:0.5-1.0:0.5-1.2;优选1.7:0.8:0.9。
油茶籽含有皮肤需要的脂肪酸、甘油三酯及微量元素、矿物质等。经常使用可以促进皮肤的新陈代谢,使皮肤恢复弹性。同时还可以祛除皮肤的废物,如氧自由基等,所以经常使用可以改善肤质。本发明中使用油茶籽改善头皮环境。
在本发明中,油茶籽提取物可由商业渠道购入或通过制备方法制备。
作为本发明推荐的一个实施例,可使用晾干的油茶籽果实压榨研磨后的粉末,其中茶皂苷含量的重量比60%-97%,油茶籽提取物可以作为组合物中的主表面活性剂。
山茶叶提取物对皮肤的作用与功效是抗炎、抗过敏,可以用于治疗皮肤疾病,属于天然抗炎物质,可以抑制炎症因子的释放,降低毛细血管的通透性,从而减轻炎症反应,达到抗炎的目的。同时还可以修复皮肤屏障,加强皮肤的保湿功能,有助于皮肤的修复。
在本发明中,山茶叶提取物可由商业渠道购入或通过制备方法制备。
作为本发明推荐的一个实施例,将新鲜山茶叶洗净,在室温下阴干,研碎成山茶叶粉末,并过200目筛,然后将过筛后的山茶叶粉末按固液比1g∶10mL的比例与水混合,在30℃下震荡浸提12h后减压浓缩、干燥成干粉,得到山茶叶提取物。
本发明的组合物还包括乳化剂。
在本发明中,乳化剂为硬脂酰谷氨酸钠、植物甾醇/辛基十二醇月桂酰谷氨酸酯、聚甘油-3甲基葡糖二硬脂酸酯、聚甘油-10硬脂酸酯、聚甘油-3蜂蜡酸酯、氢化卵磷脂、聚甘油-6二硬脂酸酯、单硬脂酸甘油酯、山梨坦倍半油酸酯、山梨坦异硬脂酸酯、山嵛醇聚醚-10、C12-20烷基葡糖苷、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯-60、山梨坦油酸酯中的一种或几种的任意组合。
在本发明中,乳化剂优选为单硬脂酸甘油酯。
本发明的组合物还包括助乳剂。
在本发明中,助乳剂为乙醇、乙二醇、聚乙二醇、正丁醇、丙二醇、甘油、聚甘油酯、椰子油、山梨醇、甲基葡糖苷、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、硬脂酸或硬脂醇中的一种或几种的任意组合。
在本发明中,所述组合物还进一步包括助乳剂聚甘油酯(六聚甘油油酸酯)。
在本发明中,组合物还包括表面活性剂。
在本发明中,表面活性剂包括具有如下式I所述结构的化合物,
R-O-(PO)m-(EO)n-H
式I,
其中,R表示C8-C18的饱和直链烃基,该饱和直链烃基中,正辛基的含有比例为20~80mol%,正癸基的含有比例为0-10mol%,碳原子数为C12-C18的饱和直链烃基的含有比例为20~80mol%,PO为丙烯氧基,EO为乙烯氧基,(PO)m和(EO)n按照此顺序嵌段结合,m为丙烯氧基的平均加成摩尔数为0.1-5的数,n为乙烯氧基的平均加成摩尔数为0.5-20的数;
优选地,R表示C8/C12/C14=55/38/7(摩尔比),m=2.5,n=5。
在本发明中,式I的制备方法包括:将C8饱和直链烃基、C12饱和直链烃基和C14饱和直链烃基的混和物在高温高压下添加碱发生脱水反应,然后进行氮气置换。置换氮气之后,升温加入环氧丙烷反应,反应结束后加酸,继续搅拌即可得到。
在本发明中,所述的碱为有机碱或无机碱。
无机碱为碳酸铯、碳酸钾、碳酸钠、磷酸二氢钾、氢氧化钠或氢氧化钾。有机碱为三乙胺或二异丙基乙二胺。
在本发明中,碱优选为氢氧化钠。
在本发明中,酸为醋酸、盐酸、硫酸或本领域其他常用的酸。
在本发明中,酸优选醋酸。
在本发明中,式I制备方法优选包括:将C8饱和直链烃基、C12饱和直链烃基和C14饱和直链烃基的混和物在100℃、1.2kPa下添加氢氧化钠发生脱水反应,然后进行氮气置换。置换氮气之后,升温至130℃加入环氧丙烷反应,反应结束后冷却至80℃,加醋酸,继续搅拌即可得到。
在本发明中,表面活性剂为式I化合物和其他表面活性剂的组合。
其他表面活性剂可以为月桂醇聚醚硫酸酯钠、月桂醇聚醚、椰油酰水解燕麦蛋白钾、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠、十二烷基硫酸钠铵、椰子油脂肪酸单乙醇酰胺、丙烯酰胺丙基三甲基氯化铵/丙烯酰胺共聚物、椰油酰胺丙基甜菜碱、月桂醇硫酸酯铵、月桂酰两性基乙酸钠中的一种或几种的任意组合。
在本发明中,表面活性剂可以为式I与其他表面活性剂1:1的组合。
例如,可以为式I和月桂醇聚醚的组合物。
例如,可以为式I和十二烷基硫酸钠铵的组合物。
本发明的组合物还包括抗氧化剂。
在本发明中,抗氧化剂为对羟基苯乙酮、2,6-二叔丁基羟基甲苯、茶多酚、没食子酸酯、抗坏血酸、维生素E、丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯中的一种或几种的任意组合。
在本发明中,所述组合物还包括抗氧化剂维生素E。
本发明还包括增稠剂。
在本发明中,增稠剂为蜂蜡、小烛树蜡、向日葵籽蜡、巴西棕榈蜡、米糠蜡、葵花蜡、茉莉花蜡、糊精棕榈酸酯、糊精异硬脂酸酯、气相二氧化硅、鲸蜡硬脂醇、乙二醇二硬脂酸酯、氯化钠和卡波姆中的一种或几种的任意组合。
在本发明中,增稠剂优选氯化钠。
本发明还包括PH调节剂。
在本发明中,PH调节剂为磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、乙醇胺、碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钾、碳酸氢钠、氢氧化钾、苹果酸、乳酸、柠檬酸钠和柠檬酸中的一种或几种的任意组合。
在本发明在,PH调节剂优选柠檬酸。
本发明还包括络合剂。
在本发明中,络合剂为单乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨三乙酸钠、聚丙烯酸钠、乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸二钠、二乙烯三胺五羧酸盐和乙二胺四乙酸四钠中的一种或几种的任意组合。
在本发明中,络合剂为乙二胺四乙酸。
本发明还包括保湿剂。
在本发明中,保湿剂表现为保护皮肤、减少损伤等作用,保湿剂主要作用在于延缓水分丢失、增加真皮表皮水分渗透、为头部皮肤提供暂时性保护、减少损伤、促进修复过程。
在本发明中,保湿剂为海藻酸钠、神经酰胺、角鲨烷、尿囊素、尿素、甜菜碱、海藻糖、多糖、β-葡聚糖、透明质酸钠、银耳提取物、多元醇中的一种或几种的任意组合。
在本发明中,保湿剂优选甜菜碱。
本发明还包括润肤剂。
在本发明中,润肤剂的功能是在角质层内起润滑作用,填充皮肤表面的空间,代替在角质层内损失的脂质,减少鳞片状皮肤,改善头部皮肤状态。
在本发明中,润肤剂为卵磷脂、霍霍巴油、肉豆蔻酸豆酯、辛酸辛酯、油醇油酸酯、月桂酸己酯、棕榈酸异丙酯、月桂醇、油醇、辛基十二醇、己基癸醇、EG-6 辛酸/癸酸甘油三酯,PEG-60玉米油甘油混合酯和PEG-7橄榄油酸酯中的一种或几种的任意组合。
在本发明中,润肤剂优选卵磷脂。
在本发明中,卵磷脂从大豆卵磷脂或蛋黄卵磷脂中提纯得到,所述卵磷脂中磷脂酰胆碱的含量为50-99%。
在本发明中,所述组合物还进一步包括式I、单硬脂酸甘油酯、聚甘油酯、维生素E、乙二胺四乙酸、柠檬酸、甜菜碱、卵磷脂和氯化钠。
在本发明中,所述组合物包括:4-10%角毛藻提取物、1-5%油茶籽提取物、1-5%山茶叶提取物、0.1-1%式I、0.3-1.5%单硬脂酸甘油酯、0.1-2.0%聚甘油酯、0.1-0.8%维生素E、0.01-0.15%乙二胺四乙酸、0.01-0.5%柠檬酸、0.5-5%甜菜碱、0.01-0.15%卵磷脂、0.01-1.50%氯化钠。
在本发明中,所述百分比(%)是以组分占组合物总重量计算。
优选地,所述组合物包括6%角毛藻提取物、2.8%油茶籽提取物、3.2%山茶叶提取物、0.5%式I、0.8%单硬脂酸甘油酯、1.4%聚甘油酯、0.6%维生素E、0.11%乙二胺四乙酸、0.3%柠檬酸、3.9%甜菜碱、0.09%卵磷脂、1.2%氯化钠。
在本发明中,溶剂为去离子水。
本发明中,所述组合物余量使用去离子水加至100%。
本发明另一方面还提供一种微藻提取物的制备方法,具体包括以下步骤:
(1)制备角毛藻提取物:
(2)将油茶籽提取物、山茶叶提取物、式I分别加入去离子水中,加热搅拌均匀得混合溶液;
(3)往混合溶液中加入角毛藻提取物、聚甘油酯、维生素E、氯化钠并搅拌,得到中间混合液;
(4)最后加入单硬脂酸甘油酯、甜菜碱、卵磷脂、乙二胺四乙酸,柠檬酸调节混合液的pH值并搅拌。
在本发明中,步骤(1)优选上文所述的角毛藻提取物制备方法。
可以理解的是,本领域技术人员还可以通过其他常规手段制备,或者直接以角毛藻粉末进行后续步骤,制备组合物。
在本发明中,步骤(2)加热温度为40-70℃。
在本发明中,步骤(2)加热温度优选为50-60℃。
在本发明中,步骤(3)保温温度为50-60℃。
在本发明中,步骤(3)的保温温度优选为55℃。
在本发明中,步骤(4)加保温温度为50-60℃。
在本发明中,步骤(4)的保温温度优选为50℃。
在本发明中,步骤(4)的搅拌时间为2-4h。
在本发明中,步骤(4)的搅拌时间为3h。
在本发明中,步骤(4)调节PH至7-8.5。
在本发明中,步骤(4)调节PH至8。
本发明还提供一种微藻提取物或其组合物在制备预防或治疗皮肤真菌感染的药剂中的用途。
本发明还提供一种微藻提取物或其组合物在制备预防或治疗脂溢性皮炎的药剂中的用途。
本发明的有益效果:
(1)本发明添加了微藻提取物,为头发提供丰富的营养物质,滋润头发,使头发变得更加柔顺具有抗菌、缓和头皮紧张状态等性能,从而减少皮肤刺激,养护皮肤,达到养发护发的作用;
(2)本发明添加了山茶叶提取物,抑制病原微生物的生长,防止皮肤瘙痒;
(3)本发明添加了油茶籽提取物,经常使用可以改善皮肤环境,协同调节皮肤水油平衡,控油功效明显;
(4)本发明提供的微藻提取物组合物,制备方法简单,成本较低,选适合工业化放大生产,并且制备出来的微藻提取物组合物可有效治疗脂溢性皮炎,具有良好的应用前景。
具体实施方式
以下结合具体实施例,对本发明作进一步说明。应理解,以下实施例仅用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。
角毛藻为旋链角毛藻,旋链角毛藻藻种( GY-H28 Chaetoceros curvisetusCleve 1889)由上海光语生物科技有限公司提供;异丙醇(纯度≥99.7%,sigma);乙酸乙酯(纯度≥99.8%,sigma);RE-52型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);恒温水浴锅(上海亚荣生化仪器厂);超声波清洗仪器(上海科导超声仪器有限公司);再生纤维素透析袋15kD(优博生物);干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司);MAS-Ⅱ型微波萃取仪(新仪微波化学科技有限公司)。
实施例1角毛藻提取物的制备方法
制备方法A
取角毛藻粉碎过80目筛,取筛下物置于70℃下烘干2h,得到角毛藻粉。将100g角毛藻粉与异丙醇和乙酸乙酯的混合溶剂(体积比为2:1)按照质量体积比1g:4mL混合浸提,控制浸提的温度为90℃,时间为7h,浸提后在1000rpm下离心50min,得到浸提液。将浸提液置于旋转蒸发仪中,在75℃下减压浓缩,除去浸提液中的异丙醇。经除去异丙醇后的浸提液用400W超声处理20min,再经15KDa透析袋透析,取透过液置于70℃下浓缩干燥2.5h,得到角毛藻提取物10.3g,得率10.3%。
制备方法B
取角毛藻粉碎过100目筛,取筛下物置于75℃下烘干2.5h,得到角毛藻粉。将100g角毛藻粉与异丙醇和乙酸乙酯的混合溶剂(体积比为2:1)按照质量体积比1g:5mL混合浸提,控制浸提的温度为95℃,时间为7h,浸提后在1000rpm下离心50min,得到浸提液。将浸提液置于旋转蒸发仪中,在75℃下减压浓缩,除去浸提液中的异丙醇。经除去异丙醇后的浸提液用400W超声处理20min,再经15KDa透析袋透析,取透过液置于70℃下浓缩干燥2.5h,得到角毛藻提取物13.7g,得率13.7%。
制备方法C
取角毛藻粉碎过100目筛,取筛下物置于75℃下烘干2.5h,得到角毛藻粉。将100g角毛藻粉与异丙醇和乙酸乙酯的混合溶剂(体积比为5:1)按照质量体积比1g:5mL混合浸提,控制浸提的温度为95℃,时间为7h,浸提后在1000rpm下离心50min,得到浸提液。将浸提液置于旋转蒸发仪中,在75℃下减压浓缩,除去浸提液中的异丙醇。经除去异丙醇后的浸提液用400W超声处理20min,再经15KDa透析袋透析,取透过液置于70℃下浓缩干燥2.5h,得到角毛藻提取物9.6g,得率9.6%。
制备方法D
取角毛藻粉碎过100目筛,取筛下物置于75℃下烘干2.5h,得到角毛藻粉。将100g角毛藻粉与异丙醇和乙酸乙酯的混合溶剂(体积比为2:1)按照质量体积比1g:2mL混合浸提,控制浸提的温度为95℃,时间为7h,浸提后在1000rpm下离心50min,得到浸提液。将浸提液置于旋转蒸发仪中,在75℃下减压浓缩,除去浸提液中的异丙醇。经除去异丙醇后的浸提液用400W超声处理20min,再经15KDa透析袋透析,取透过液置于70℃下浓缩干燥2.5h,得到角毛藻提取物7.4g,得率7.4%。
制备方法E
取角毛藻粉碎过100目筛,取筛下物置于75℃下烘干2.5h,得到角毛藻粉。将100g角毛藻粉与异丙醇和乙酸乙酯的混合溶剂(体积比为2:1)按照质量体积比1g:10mL混合浸提,控制浸提的温度为95℃,时间为7h,浸提后在1000rpm下离心50min,得到浸提液。将浸提液置于旋转蒸发仪中,在75℃下减压浓缩,除去浸提液中的异丙醇。经除去异丙醇后的浸提液用400W超声处理20min,再经15KDa透析袋透析,取透过液置于70℃下浓缩干燥2.5h,得到角毛藻提取物8.9g,得率8.9%。
制备方法F
取角毛藻粉碎过100目筛,取筛下物置于75℃下烘干2.5h,得到角毛藻粉。将100g角毛藻粉与异丙醇和乙酸乙酯的混合溶剂(体积比为1:5)按照质量体积比1g:5mL混合浸提,控制浸提的温度为95℃,时间为7h,浸提后在1000rpm下离心50min,得到浸提液。将浸提液置于旋转蒸发仪中,在75℃下减压浓缩,除去浸提液中的异丙醇。经除去异丙醇后的浸提液用400W超声处理20min,再经15KDa透析袋透析,取透过液置于70℃下浓缩干燥2.5h,得到角毛藻提取物,得率10.9%。
制备方法G
称取角毛藻,将角毛藻研磨后,得角毛藻粉,在200g角毛藻粉加入混合溶剂浸泡得到处理液,角毛藻与混合溶剂的料液比为1:5,异丙醇和乙酸乙酯的体积比为2:1;然后对处理液进行微波萃取,萃取时间为30min,萃取温度为50℃,微波功率为350W,过滤萃取液、真空干燥,即得角毛藻提取物9.4g,得率9.4%。
实施例2表面活性剂的制备
正辛醇(纯度≥99.7%,sigma);月桂醇(纯度≥98%,上海浦达);肉豆蔻醇(纯度≥99.7%,sigma);氢氧化钠(纯度≥98%,sigma);环氧丙烷(纯度≥99%,上海盖德);冰醋酸(纯度≥99.9%,sigma);氢氧化钾(纯度≥85%,sigma);碳酸钾(纯度≥99.0%,sigma);SLP型微型高温高压反应釜(北京世纪森朗公司)。
方法2-1
将142g正辛醇、142g月桂醇和32g肉豆蔻醇的混和醇(摩尔比=55/38/7)加入高压反应釜,添加3g氢氧化钠,在100°C、1.2kPa的条件下进行脱水40分钟,然后进行氮气置换。置换氮气之后,升温至130°C,加入300g环氧丙烷继续反应3小时,升温至150°C,继续加入450g环氧乙烷反应半天,反应结束将温度冷却至80°C,加入3g醋酸,继续在80°C下搅拌30分钟,得到表面活性剂式I,收率80.6%,纯度99.8%。
方法2-2
将142g正辛醇、142g月桂醇和32g肉豆蔻醇的混和醇(摩尔比=55/38/7)加入高压反应釜,添加3g氢氧化钾,在100°C、1.2kPa的条件下进行脱水40分钟,然后进行氮气置换。置换氮气之后,升温至130°C,加入300g环氧丙烷继续反应3小时,升温至150°C,继续加入450g环氧乙烷反应半天,反应结束将温度冷却至80°C,加入3g醋酸,继续在80°C下搅拌30分钟,得到表面活性剂式I,收率69.5%%,纯度98.2%。
方法2-3
将142g正辛醇、142g月桂醇和32g肉豆蔻醇的混和醇(摩尔比=55/38/7)加入高压反应釜,添加3g氢氧化钠,在80°C、1.2kPa的条件下进行脱水40分钟,然后进行氮气置换。置换氮气之后,升温至130°C,加入300g环氧丙烷继续反应3小时,升温至150°C,继续加入450g环氧乙烷反应半天,反应结束将温度冷却至80°C,加入3g醋酸,继续在80°C下搅拌30分钟,得到表面活性剂式I,收率60.6%,纯度97.2%。
方法2-4
将142g正辛醇、142g月桂醇和32g肉豆蔻醇的混和醇(摩尔比=55/38/7)加入高压反应釜,添加3g碳酸钾,在100°C、1.2kPa的条件下进行脱水40分钟,然后进行氮气置换。置换氮气之后,升温至130°C,加入300g环氧丙烷继续反应3小时,升温至150°C,继续加入450g环氧乙烷反应半天,反应结束将温度冷却至80°C,加入3g醋酸,继续在80°C下搅拌30分钟,得到表面活性剂式I,收率74.1%,纯度98.2%。
方法2-5
将142g正辛醇、142g月桂醇和32g肉豆蔻醇的混和醇(摩尔比=55/38/7)加入高压反应釜,添加3g氢氧化钠,在100°C、1.2kPa的条件下进行脱水40分钟,然后进行氮气置换。置换氮气之后,升温至130°C,加入300g环氧丙烷继续反应3小时,升温至150°C,继续加入450g环氧乙烷反应半天,反应结束将温度冷却至80°C,加入3g盐酸,继续在80°C下搅拌30分钟,得到表面活性剂式I,收率65.9%,纯度94.2%。
实施例3组合物制备方法
油茶籽提取物(济宁棠邑化工有限公司);山茶叶提取物(森冉生物);聚甘油酯(山东滨州金盛新材料科技);维生素E(西安展迅生物科技有限公司);氯化钠(北京康普汇维科技有限公司);单硬脂酸甘油酯(广州朋远化工有限公司);甜菜碱(郑州信九达化工产品);卵磷脂(郑州四维磷脂技术有限公司);乙二胺四乙酸(苏州皓隆化工有限公司);柠檬酸(济南佳华化工科技有限公司);月桂醇聚醚-4(广州川一化工有限公司);十二烷基硫酸钠(广州花之王化工有限公司);丙烯酰胺丙基三甲基氯化铵/丙烯酰胺共聚物(广州市金宝来生物科技有限公司 )。
(1)制备角毛藻提取物:参考制备方法B制备;
(2)将油茶籽提取物、山茶叶提取物、表面活性剂分别加入去离子水中,加热至50℃,搅拌均匀得混合溶液;
(3)往混合溶液中加入角毛藻提取物、聚甘油酯、维生素E、氯化钠,保温55℃并搅拌,得到中间混合液;
(4)最后加入单硬脂酸甘油酯、甜菜碱、卵磷脂、乙二胺四乙酸,柠檬酸调节混合液的pH值至8并搅拌,在50℃下搅拌3h,得组合物。
实施例4不同表面活性剂的组合物
表1
参考实施例3所述述组合物制备方法按表1处方组成制备处方1-5,区别在于表面活性剂种类不同,详见下表2。
表2
实施例5不同比例组合物
表3
参考实施例3组合物制备方法制备处方6-10。
实施例6
甘油(广州市灿联化工有限公司);椰子油(广州万辰化工有限公司);山梨醇(广州美是化工有限公司);甲基葡糖苷(郑州琼岳化工产品有限公司)。
参考处方8制备,替换聚甘油酯为甘油、椰子油、山梨醇和甲基葡糖苷,依次制备处方11-14。
实施例7
没食子酸酯(青岛海维森生物科技有限公司);茶多酚(西安品诚生物科技有限公司);抗坏血酸棕榈脂(郑州嵩桦商贸有限公司)。
参考处方8制备,替换抗氧化剂维生素E为没食子酸酯、茶多酚和抗坏血酸棕榈脂,依次制备处方15-17。
对比例
对比例1
参考处方8制备,区别在于不使用角毛藻提取物。
对比例2
参考处方8制备,区别在于不使用油茶籽提取物。
对比例3
参考处方8制备,区别在于不使用山茶叶提取物。
实验例1皮肤过敏性试验
试验动物:体重200±20g左右的雄性大鼠(清洁级健康Wistar大鼠,来自上海Slac实验动物有限公司)72只。
试验方法:随机将大鼠分为9组,每组8只,剃除大鼠背部毛发(剃毛面积为3×3cm),24h后在大鼠脱毛区涂抹处方1~14的样品,30min后用温水清洗干净样品,观察洗去样品后以及24h后大鼠的皮肤情况,按照评分标准判断刺激强度。
评判标准:1:无明显症状;2:轻微红肿;3:红肿明显,有水肿现象;4:皮肤隆起,有明显红斑;5:严重红斑;6:紫红斑块,伴大鼠躁动(不安、抓鼻、喷嚏、竖毛、大小便失禁、等症状);7:死亡。
实验例2抑菌实验
实验仪器:金黄色葡萄球菌ATCC29213购自中国医学微生物菌种保藏管理中心;表皮葡萄球菌CMCC26069购自中国医学微生物菌种保藏管理中心;限制马拉色菌ATCC 96810购自NTCC典型培养物保藏中心;琼脂(国药集团化学试剂有限公司);SHA-B水浴恒温振荡器(青岛明博环保科技有限公司);恒温水浴锅(上海亚荣生化仪器厂)。
实验目的:采用抑菌圈法测试处方6、8、9对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌以及限制性马拉色菌的抑菌效果。
具体试验方法:将在4℃冰箱保存的金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌以及限制性马拉色菌转移至新鲜的营养琼脂斜面上,37℃培养18-24h;将斜面上的菌苔用10mL灭菌生理盐水分两次洗到装有玻璃珠的锥形瓶中,放到摇床上200r/min振荡10min,将菌悬液浓度调整106cfu/ml;每个试管分装20mL熔化的营养琼脂培养基,试管口多余培养基用纸巾擦掉,加橡皮塞,7支一捆包扎,121℃灭菌20min,灭菌稍冷却后置于50℃恒温水浴锅保温。在超净工作台上,每个灭菌培养皿先加入1mL菌悬液,倒入20mL培养皿,充分混匀,吹干冷凝水,待凝固;将灭菌牛津杯用无菌镊子夹出,先置于酒精灯火焰上迅速过一下火,再垂直放置培养基表面,轻轻按压,使杯底与培养基之间无缝隙。每个平板放置5个牛津杯,每个牛津杯注入200uL处方样品,中间用生理盐水作对照,样品不可溢出来;每种样品各做3个重复,37℃培养24小时,观察测量记录抑菌圈直径(mm),实验结果见下表。
实验例3杀螨活性测试
采用杀螨活性测试-点滴法:取3个孔细胞培养板,并在孔细胞培养板分别滴加少量样品(即试实施例6、8和9),并在每个孔细胞培养板上均放30只螨虫,在倒置显微镜下观察,每隔5min而观察1次,每次持续观察2min,同时对每组观察直至30只螨全部死亡,记录螨虫死亡时间和总死亡只数,并记入在下表。
实验例4头发摩擦测试
分别取头发用处方8、对比例1-3,揉洗后,晾干,在Y151型纤维摩擦仪上测定头发是静摩擦系数和动摩擦系数,静摩擦系数和动摩擦系数两者差值越小,说明该物体表面越光滑,手感柔软,光泽也较好,其结果如下表所示:
由表可知,处方8与对比例相比,静摩擦系数和动摩擦系数均较小,且两者差值较小,说明本发明制备的微藻提取物组合物能降低头发间的摩擦系数,使头发变得柔软顺滑,有光泽。
实验例5稳定性测试
稳定性测试条件为:样品在5℃、25℃和40℃条件下放置三个月,测定处方样品总杂(%)。
实验例6
本效果例采用志愿者试验的方式探究制备得到的处方8产品的控油效果。实验原理:基于光度计原理,由一种特殊胶带吸收人体皮肤上的油脂后变成半透明胶带,它的透光量发生变化,从而测得皮肤表面的油脂含量。胶带的透光度越大,代表吸收的皮肤表面油脂越多。
实验仪器:Sebumeter SM815(CK,德国)。
测量参数:皮脂指数T(μg/cm2)
实验对象:油性皮肤(皮脂指数≥150μg/cm2),年龄18岁以上成年人,共20人。
参数测试方法:在室温20±2℃以下,相对湿度(RH)50±5%以下;被测试者在测定前1小时使用指定的清洁产品先进行脸部清洁,然后进入测试环境中安静等待一小时,将胶带贴在志愿者额头处,使其与皮肤接触一分钟,然后用SM815测量额头处皮脂指数T。
测试方法:志愿者连续4周每日早晚在脸部使用将处方8样品,在开始测试前,测量志愿者初始皮脂指数(T0),并在开始测试后第7、14、28天分别测量对应皮脂指数T7、T14、T28。
皮脂抑制率r=(T0-T)/T0×100%
平均皮脂抑制率R=(r1+r2+r3+r4+r5+r6+r7+r8+r9+r10+r11+r12+r13+r14+r15
+r16+r17+r18+r19+r20)/20
测试结果如下表所示
从表中可以看出,本发明处方8具有明显的控油效果。
尽管通过优选实施例的方式对本发明进行了详细描述,但本发明并不限于此。在不脱离本发明的精神和实质的前提下,本领域普通技术人员可以对本发明的实施例进行各种等效的修改或替换,而这些修改或替换都应在本发明的涵盖范围内/任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,可轻易想到变化或替换,都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此,本发明的保护范围应以权利要求所述的保护范围为准。
Claims (10)
1.一种微藻提取物的组合物,其特征在于:按照各组分的质量比计算,角毛藻提取物:油茶籽提取物:山茶叶提取物=1.5-2.0:0.5-1.0:0.5-1.2。
2.根据权利要求1所述的组合物,其特征在于:按照各组分的质量比计算,角毛藻提取物:油茶籽提取物:山茶叶提取物=1.7:0.8:0.9。
3. 根据权利要求1所述的组合物,其特征在于:还包括表面活性剂,表面活性剂包括具有如下式I所述结构的化合物,
R-O-(PO)m-(EO)n-H
式I ,
其中,R表示C8-C18的饱和直链烃基,该饱和直链烃基中,正辛基的含有比例为20~80mol%,正癸基的含有比例为0-10mol%,碳原子数为C12-C18的饱和直链烃基的含有比例为20~80mol%,PO为丙烯氧基,EO为乙烯氧基,(PO)m和(EO)n按照此顺序嵌段结合,m为丙烯氧基的平均加成摩尔数为0.1-5的数,n为乙烯氧基的平均加成摩尔数为0.5-20的数。
4. 根据权利要求3所述的组合物,其特征在于:表面活性剂包括具有如下式I所述结构的化合物,
R-O-(PO)m-(EO)n-H
式I ,
其中,R表示该饱和直链烃基中,以摩尔比计算,C8/C12/C14=55/38/7;m=2.5;n=5。
5.根据权利要求4所述的组合物,其特征在于:组合物为4-10%角毛藻提取物、1-5%油茶籽提取物、1-5%山茶叶提取物、0.1-1%式I、0.3-1.5%单硬脂酸甘油酯、0.1-2.0%聚甘油酯、0.1-0.8%维生素E、0.01-0.15%乙二胺四乙酸、0.01-0.5%柠檬酸、0.5-5%甜菜碱、0.01-0.15%卵磷脂、0.01-1.50%氯化钠,余量使用去离子水加至100%。
6.根据权利要求4所述的组合物,其特征在于:组合物为6%角毛藻提取物、2.8%油茶籽提取物、3.2%山茶叶提取物、0.5%式I、0.8%单硬脂酸甘油酯、1.4%聚甘油酯、0.6%维生素E、0.11%乙二胺四乙酸、0.3%柠檬酸、3.9%甜菜碱、0.09%卵磷脂、1.2%氯化钠,余量使用去离子水加至100%。
7.权利要求1-6任意一项所述的微藻提取物组合物的制备方法,其特征在于:具体包括以下步骤:
(1)制备角毛藻提取物;
(2)将油茶籽提取物、山茶叶提取物、式I分别加入去离子水中,加热搅拌均匀得混合溶液,加热温度为50-60℃;
(3)保温温度为55℃条件下,往混合溶液中加入角毛藻提取物、聚甘油酯、维生素E、氯化钠并搅拌,得到中间混合液;
(4)保温温度为50℃条件下加入单硬脂酸甘油酯、甜菜碱、卵磷脂、乙二胺四乙酸,柠檬酸调节混合液的pH值至8并搅拌3h。
8.根据权利要求7所述的制备方法,其特征在于:角毛藻提取物通过如下步骤制备:
(1)将角毛藻粉碎过100目筛,取筛下物置于75℃下烘干2.5h,得到角毛藻粉;
(2)用体积比为1-3:1的异丙醇和乙酸乙酯的混合溶剂处理角毛藻粉,角毛藻与混合溶剂的质量体积比为1:5,进行浸提,浸提的温度为95-100℃,浸提时间为7h,离心分离得到得到浸提液,离心分离的转速为1000rpm,离心分离的时间为50min;
(3)所述浸提液经减压浓缩除去异丙醇,依次进行超声、透析处理,得到透析液;其中,减压浓缩在旋转蒸发仪中进行,旋转蒸发仪的水浴温度为70-80℃,超声使用的超声功率为400W,超声时间为20min,透析使用的透析袋的截留分子量优选为15KDa;
(4)所述透析液经浓缩干燥,得到角毛藻提取物;其中,浓缩干燥的温度为70-75℃,时间为2.5h。
9.权利要求1-6任意一项所述的微藻提取物组合物在制备预防或治疗皮肤真菌感染的药剂中的用途。
10.权利要求1-6任意一项所述的微藻提取物组合物在制备预防或治疗脂溢性皮炎的药剂中的用途。
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