CN117269403A - 一种包含花椒的中药组合物中的药材花椒的薄层鉴别方法 - Google Patents
一种包含花椒的中药组合物中的药材花椒的薄层鉴别方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种包含花椒的中药组合物中的药材花椒的薄层鉴别方法，该薄层鉴别方法包括如下步骤：(1)将包含花椒的中药组合物进行前处理得到供试品溶液，将缺少花椒的中药组合物进行前处理得到阴性样品溶液，将对照药材进行前处理得到对照药材溶液；以及(2)对该对供试品溶液、该阴性样品溶液和该对照药材溶液进行薄层色谱鉴别分析；其中，该薄层色谱鉴别分析的步骤中采用石油醚‑乙酸乙酯‑三乙胺作为展开剂，该石油醚、该乙酸乙酯与该三乙胺之间的体积之比为(1～10):(0.1～10):(0.01～1)。本发明的上述薄层鉴别方法通过对于包含花椒的中药组合物中的药材花椒的检测，为包含花椒的中药组合物的质量控制和药效物质基础的研究提供了理论依据。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种包含花椒的中药组合物中的药材花椒的薄层鉴别方法。
背景技术
薄层色谱法在中药材及其制剂的定性鉴别中得到广泛的应用，这主要是由于其具有分离分析双重功能，大大提高了鉴别工作的灵敏度和专属性，成为中药鉴别的重要方法。薄层色谱法还可用于药品的杂质检查和含量测定。
现有技术中未见包含花椒的中药组合物中的药材花椒的薄层鉴别方法的相关报道。
发明内容
基于此，本发明提供了一种包含花椒的中药组合物中的药材花椒的薄层鉴别方法，该薄层鉴别方法包括如下步骤：
(1)将包含花椒的中药组合物进行前处理得到供试品溶液，将缺少花椒的中药组合物进行前处理得到阴性样品溶液，将对照药材进行前处理得到对照药材溶液；以及
(2)对该对供试品溶液、该阴性样品溶液和该对照药材溶液进行薄层色谱鉴别分析；
其中，该薄层色谱鉴别分析的步骤中采用石油醚-乙酸乙酯-三乙胺作为展开剂，该石油醚、该乙酸乙酯与该三乙胺之间的体积之比为(1～10):(0.1～10):(0.01～1)。
进一步地，该包含花椒的中药组合物包含花椒、干姜、人参和胶饴糖。
进一步地，该花椒、该干姜与该人参之间的质量之比为(0.5～2):(1～15):(0.5～9)。
进一步地，该花椒、该干姜与该人参之间的质量之比为约1:约6:约3。
进一步地，该包含花椒的中药组合物粉末的制备方法包括以下步骤：称取适量的花椒、干姜和人参，得到药材饮片混合物，加水浸泡一段时间之后，第一次武火加热至沸腾之后第一次文火煎煮一段时间，过滤，量取第一滤液并加入胶饴糖，第二次武火加热至沸腾之后第二次文火煎煮一段时间，过滤，量取第二滤液使其浓缩成浸膏，干燥，研磨成粉，过筛，混匀，得到该中药组合物粉末。
进一步地，该药材饮片混合物与该水或醇的质量/体积(g/ml)之比为(0.5～10):(1～50)，例如约1:约8.7。
进一步地，该加水浸泡的时间为10～60min，例如约30min。
进一步地，该第一次文火煎煮的时间为10～120min，例如约90min。
进一步地，该第一滤液与该水之间的体积比值为0.25～0.75，例如约0.5。
进一步地，该胶饴糖与该水之间的体积比值为0.1～0.4，例如约0.25。
进一步地，该第二次文火煎煮的时间为10～50min，例如约20min。
进一步地，该第二滤液与该水之间的体积比值为0.2～0.6，例如约0.375。
进一步地，该浓缩为将该第二滤液置于旋转蒸发仪中浓缩。
进一步地，该旋转蒸发仪的条件：真空度为-0.001～-0.150Mpa，例如-0.085～-0.099Mpa，转速为50～100r/min，例如约80r/min，温度为30～80℃，例如55～65℃。
进一步地，该浓缩为浓缩至在20℃下相对密度为1～1.5，例如1.17～1.24。
进一步地，该干燥为在冷冻干燥机中干燥。
进一步地，该冷冻干燥机的条件：冷阱温度不高于约-40℃，真空度不高于约100Pa。
进一步地，该干燥为干燥至水分不超过约8.0％。
进一步地，该筛为三号筛。
进一步地，该供试品溶液的制备方法包括：称取适量的包含花椒的中药组合物粉末，加水溶解，用第一溶剂进行萃取，得到第一溶液，将该第一溶液进行蒸干，得到残渣，在该残渣中加入第二溶剂进行溶解，得到该供试品溶液。
进一步地，该对照药材溶液的制备方法包括：称取适量的对照药材，加水进行加热回流提取，过滤，得到滤液，将该滤液用第一溶剂进行萃取，得到第一溶液，将该第一溶液进行蒸干，得到残渣，在该残渣中加入第二溶剂进行溶解，得到对照药材溶液。
进一步地，该阴性样品溶液的制备方法包括：称取适量的缺少花椒的中药组合物粉末，之后的步骤与该供试品溶液的制备方法相同。
进一步地，缺少花椒的中药组合物粉末通过如下方法进行制备：称取适量的干姜和人参，之后的步骤与包含花椒的中药组合物粉末的制备方法相同。
进一步地，该包含花椒的中药组合物与该水的质量/体积(g/ml)之比为(0.1～5):(1～10)，例如约1:约5。
进一步地，该包含花椒的中药组合物与该第一溶剂的质量/体积(g/ml)之比为(0.1～5):(1～10)，例如约1:约5。
进一步地，该包含花椒的中药组合物与该第二溶剂的质量/体积(g/ml)之比为(0.1～10):(0.1～10)，例如约5:约1。
进一步地，该加水溶解的方式为超声溶解和/或搅拌溶解，例如超声溶解。
进一步地，该第一溶剂为有机溶剂。
进一步地，该有机溶剂选自三氯甲烷和/或乙酸乙酯。
进一步地，该提取的方式为振摇提取、超声提取和/或回流提取，例如振摇提取。
进一步地，该振摇提取的次数为1～5次，例如2次。
进一步地，该第二溶剂为有机溶剂。
进一步地，该有机溶剂选自甲醇和/或乙醇。
进一步地，该对照药材与该水的质量/体积(g/ml)之比为(0.5～10):(1～30)，例如约1:约25。
进一步地，该包含花椒的中药组合物与该第一溶剂的质量/体积(g/ml)之比为(0.5～10):(1～30)，例如约1:约5。
进一步地，该对照药材与该第二溶剂的质量/体积(g/ml)之比为(0.1～10):(0.1～10)，例如约1:约1。
进一步地，该加热回流的时间为10～60min，例如约30min。
进一步地，该供试品溶液的点样量为0.5～10μl，例如约1μl。
进一步地，该对照药材溶液的点样量为0.5～10μl，例如约1μl。
进一步地，该石油醚、该乙酸乙酯与该三乙胺之间的体积之比为(3～7):(0.5～3):(0.05～0.5)。
进一步地，该石油醚、该乙酸乙酯与该三乙胺之间的体积之比为(4.5～5.5):(0.5～3):(0.05～0.5)。
进一步地，该石油醚、该乙酸乙酯与该三乙胺之间的体积之比为约5:约1:约0.1。
进一步地，该石油醚的沸程规格为60～90℃。
进一步地，该薄层鉴别方法进一步包括薄层板活化步骤。
进一步地，该薄层板活化步骤包括将该薄层板在100℃～120℃下活化20min～60min。
进一步地，该薄层板选自硅胶G薄层板、硅胶GF254薄层板、硅胶H预制薄层板、硅胶HF254薄层板和聚酰胺薄层板中的至少一种。
进一步地，该薄层板为硅胶G薄层板。
进一步地，该硅胶G薄层板为青岛海洋硅胶G薄层板或青岛胜海硅胶G薄层板。
进一步地，该薄层色谱鉴别分析的步骤中的检视条件为：在紫外灯下检视，其中检视所采用的紫外线波长为365nm。
进一步地，在该检视之前，将展开完毕的薄层板取出，晾干，喷以三氯化铝试液进行显色。
进一步地，该薄层色谱鉴别分析的步骤中的温度条件为1～30℃，例如约4℃或约25℃。
进一步地，该薄层色谱鉴别分析的步骤中的湿度条件为25％～95％，例如约32％或约88％。
进一步地，该薄层色谱鉴别分析的步骤中的展距条件为8～18cm，例如约10cm。
进一步地，该对照药材为花椒对照药材。
进一步地，该薄层鉴别的标准包括：查看薄层板在与花椒对照药材相应位置上，是否显示出相同颜色的特征斑点，以及阴性样品是否有干扰；如果该薄层板具有该特征斑点且该阴性样品无干扰，则所检测的包含花椒的中药组合物中含有花椒药材。
根据本发明的另一个方面，提供了一种上述薄层鉴别方法在鉴别包含花椒的中药组合物中的药材花椒中的用途。
根据本发明的另一个方面，提供了一种用于鉴别包含花椒的中药组合物中的药材花椒的试剂盒，其包括薄层板和展开剂，其中该薄层板为硅胶G薄层板，该展开剂为石油醚-乙酸乙酯-三乙胺。
进一步地，该石油醚、该乙酸乙酯与该三乙胺之间的体积之比为(1～10):(0.1～10):(0.01～1)。
进一步地，该石油醚、该乙酸乙酯与该三乙胺之间的体积之比为(3～7):(0.5～3):(0.05～0.5)。
进一步地，该石油醚、该乙酸乙酯与该三乙胺之间的体积之比为(4.5～5.5):(0.5～3):(0.05～0.5)。
进一步地，该石油醚、该乙酸乙酯与该三乙胺之间的体积之比为约5:约1:约0.1。
进一步地，该石油醚的沸程规格为60～90℃。
本发明的有益效果：
本发明的薄层鉴别方法展开剂选择适当、鉴别效率高、鉴别精度高并且操作方便，通过对于包含花椒的中药组合物中的药材花椒的检测，为包含花椒的中药组合物的质量控制和药效物质基础的深入研究提供了理论依据。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，还可以根据这些附图获得其他的附图，而并不超出本发明要求保护的范围。
图1为本发明的包含花椒的中药组合物粉末的制备方法流程图。
图2为方法一TLC色谱图。其中，1为供试品溶液，2为对照药材溶液，3为阴性样品溶液。
图3为方法二TLC色谱图。其中，1为供试品溶液，2为对照药材溶液，3为阴性样品溶液。
图4为方法三TLC色谱图。其中，1为供试品溶液，2为对照药材溶液，3为阴性样品溶液。
图5为方法四TLC色谱图。其中，1为供试品溶液，2为对照药材溶液，3为阴性样品溶液。
图6为专属性考察TLC图。其中，1为供试品溶液，2为对照药材溶液，3为阴性样品溶液。
图7为不同点样量考察TLC图。其中，1为供试品溶液0.5μl，2为供试品溶液1μl，3为供试品溶液2μl，4为对照药材溶液0.5μl，5为对照药材溶液1μl，6为对照药材溶液2μl。
图8为检视方法的考察TLC图。其中，1为供试品溶液，2为对照药材溶液，3为阴性样品溶液；A为日光灯下检视；B为紫外光灯(254nm)下检视；C为紫外光灯(365nm)下检视。
图9为不同展距考察TLC图。其中，1为供试品溶液，2为对照药材溶液，3为阴性样品溶液；A为展距8cm；B为展距18cm。
图10为不同展开剂比例考察TLC图。其中，1为供试品溶液，2为对照药材溶液，3为阴性样品溶液；A为石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-三乙胺(4.5：1：0.1)；B为石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-三乙胺(5：1：0.1)；C为石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-三乙胺(5.5：1：0.1)。
图11为不同温度考察TLC图。其中，1为供试品溶液，2为对照药材溶液，3为阴性样品溶液；A为T：4℃，RH：50％；B为T：25℃，RH：50％。
图12为不同相对湿度考察TLC图。其中，1为供试品溶液，2为对照药材溶液，3为阴性样品溶液；A为T：25℃，RH：32％；B为T：25℃，RH：50％；C为T：25℃，RH：88％。
图13为不同厂家薄层板考察TLC图。其中，1为供试品溶液，2为对照药材溶液，3为阴性样品溶液；A为青岛海洋硅胶G薄层板；B为青岛胜海硅胶G薄层板。
图14为20批包含花椒的中药组合物中的药材花椒薄层色谱图。其中，1-10，12-21分别为大建中汤物质基准1-20；11为花椒对照药材溶液，T：25℃，RH：58％。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
除非另外说明，本文所用的所有技术和科学术语和缩略语具有本发明领域或该术语应用领域中普通技术人员通常所理解的含义。虽然本发明实施过程中可使用类似于或等价于本文公开的那些的任何方法、条件、物质或材料，但本文描述了优选的方法、条件物质或材料。
本发明有预期地涵盖所有的选择余地、变体和同等物，这些可能如权利要求所定义的那样包含在现有发明领域。所属领域的技术人员将识别许多类似或等同于在此所描述的方法和物质，这些可以应用于本发明的实践中去。本发明绝非限于方法和物质的描述。
说明书和所附权利要求中所用的单数形式“一个”，“一种”和“所述”包括复数指示物，除非上下文另有明确规定。
在本发明中，术语“包括”与“包含”同义。本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。
正如背景技术部分所描述的，现有技术中未见包含花椒的中药组合物中的药材花椒的薄层鉴别方法的相关报道。为了解决上述问题，本发明提供了一种包含花椒的中药组合物中的药材花椒的薄层鉴别方法，该薄层鉴别方法包括如下步骤：
(1)将包含花椒的中药组合物进行前处理得到供试品溶液，将缺少花椒的中药组合物进行前处理得到阴性样品溶液，将对照药材进行前处理得到对照药材溶液；以及
(2)对该对供试品溶液、该阴性样品溶液和该对照药材溶液进行薄层色谱鉴别分析；
其中，该薄层色谱鉴别分析的步骤中采用石油醚-乙酸乙酯-三乙胺作为展开剂，该石油醚、该乙酸乙酯与该三乙胺之间的体积之比为(1～10):(0.1～10):(0.01～1)。
在本发明中，体积之比、温度、湿度、速率、时间、浓度、点样量、当量、浓度、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“1～10”时，所描述的范围应被解释为包括范围“1～10”、“1～9”、“1～8”、“1～7”、“1～6”、“1～5”、“1～4”、“1～3”、“1～2”、“2～10”、“2～9”、“2～8”、“2～7”、“2～6”、“2～5”、“2～4”、“2～3”、“3～10”、“3～9”、“3～8”等。当数值范围在本文中被描述时，除非另外说明，否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数。
在一种优选的实施方式中，该包含花椒的中药组合物包含花椒、干姜、人参和胶饴糖。
在一种优选的实施方式中，该花椒、该干姜与该人参之间的质量之比为(0.5～2):(1～3):(0.5～2)。
在一种优选的实施方式中，该花椒、该干姜与该人参之间的质量之比为约1:约6:约3。
在本发明中，“约”是指一个特定值的±5％范围的值。例如，“约1”包括1的±5％，或从0.95到1.05；“约6”包括6的±5％，或从5.7到6.3；“约3”包括3的±5％，或从2.85到3.15。
在一种优选的实施方式中，该包含花椒的中药组合物粉末的制备方法包括以下步骤：称取适量的花椒、干姜和人参，得到药材饮片混合物，加水浸泡一段时间之后，第一次武火加热至沸腾之后第一次文火煎煮一段时间，过滤，量取第一滤液并加入胶饴糖，第二次武火加热至沸腾之后第二次文火煎煮一段时间，过滤，量取第二滤液使其浓缩成浸膏，干燥，研磨成粉，过筛，混匀，得到该中药组合物粉末。
在一种优选的实施方式中，该药材饮片混合物与该水或醇的质量/体积(g/ml)之比为(0.5～10):(1～50)，例如约1:约8.7。
在一种优选的实施方式中，该加水浸泡的时间为10～60min，例如约30min。
在一种优选的实施方式中，该第一次文火煎煮的时间为10～120min，例如约90min。
在一种优选的实施方式中，该第一滤液与该水之间的体积比值为0.25～0.75，例如约0.5。
在一种优选的实施方式中，该胶饴糖与该水之间的体积比值为0.1～0.4，例如约0.25。
在一种优选的实施方式中，该第二次文火煎煮的时间为10～50min，例如约20min。
进一步地，该第二滤液与该水之间的体积比值为0.2～0.6，例如约0.375。
在一种优选的实施方式中，该浓缩为将该第二滤液置于旋转蒸发仪中浓缩。
在一种优选的实施方式中，该旋转蒸发仪的条件：真空度为-0.001～-0.150Mpa，例如-0.085～-0.099Mpa，转速为50～100r/min，例如约80r/min，温度为30～80℃，例如55～65℃。
在一种优选的实施方式中，该浓缩为浓缩至在20℃下相对密度为1～1.5，例如1.17～1.24。
在一种优选的实施方式中，该干燥为在冷冻干燥机中干燥。
在一种优选的实施方式中，该冷冻干燥机的条件：冷阱温度不高于约-40℃，真空度不高于约100Pa。
在一种优选的实施方式中，该干燥为干燥至水分不超过约8.0％。
在一种优选的实施方式中，该筛为三号筛。
在本发明中，“约”是指一个特定值的±5％范围的值。例如，“约1”包括1的±5％，或从0.95到1.05；“约8.7”包括8.7的±5％，或从8.265到9.135；“约30”包括30的±5％，或从28.5到31.5；“约90”包括90的±5％，或从85.5到94.5；“约0.5”包括0.5的±5％，或从0.475到0.525；“约0.25”包括0.25的±5％，或从0.2375到0.2625；“约20”包括20的±5％，或从19到21；“约0.375”包括0.375的±5％，或从0.35625到0.39375；“约80”包括80的±5％，或从76到84；“约40”包括40的±5％，或从38到42；“约100”包括100的±5％，或从95到105；“约8”包括8的±5％，或从7.6到8.4。
在一种优选的实施方式中，该供试品溶液的制备方法包括：称取适量的包含花椒的中药组合物粉末，加水溶解，用第一溶剂进行萃取，得到第一溶液，将该第一溶液进行蒸干，得到残渣，在该残渣中加入第二溶剂进行溶解，得到该供试品溶液。
在一种优选的实施方式中，该对照药材溶液的制备方法包括：称取适量的对照药材，加水进行加热回流提取，过滤，得到滤液，将该滤液用第一溶剂进行萃取，得到第一溶液，将该第一溶液进行蒸干，得到残渣，在该残渣中加入第二溶剂进行溶解，得到对照药材溶液。
在一种优选的实施方式中，该阴性样品溶液的制备方法包括：称取适量的缺少花椒的中药组合物粉末，之后的步骤与该供试品溶液的制备方法相同。
在一种优选的实施方式中，缺少花椒的中药组合物粉末通过如下方法进行制备：称取适量的干姜和人参，之后的步骤与包含花椒的中药组合物粉末的制备方法相同。
在一种优选的实施方式中，该包含花椒的中药组合物与该水的质量/体积(g/ml)之比为(0.1～5):(1～10)，例如约1:约5。
在一种优选的实施方式中，该包含花椒的中药组合物与该第一溶剂的质量/体积(g/ml)之比为(0.1～5):(1～10)，例如约1:约5。
在一种优选的实施方式中，该包含花椒的中药组合物与该第二溶剂的质量/体积(g/ml)之比为(0.1～10):(0.1～10)，例如约5:约1。
在本发明中，“约”是指一个特定值的±5％范围的值。例如，“约1”包括1的±5％，或从0.95到1.05；“约5”包括5的±5％，或从4.75到5.25。
在一种优选的实施方式中，该加水溶解的方式为超声溶解和/或搅拌溶解，例如超声溶解。
在一种优选的实施方式中，该第一溶剂为有机溶剂。
在一种优选的实施方式中，该有机溶剂选自三氯甲烷和/或乙酸乙酯。
在一种优选的实施方式中，该提取的方式为振摇提取、超声提取和/或回流提取，例如振摇提取。
在一种优选的实施方式中，该振摇提取的次数为1～5次，例如2次。
在一种优选的实施方式中，该第二溶剂为有机溶剂。
在一种优选的实施方式中，该有机溶剂选自甲醇和/或乙醇。
在一种优选的实施方式中，该对照药材与该水的质量/体积(g/ml)之比为(0.5～10):(1～30)，例如约1:约25。
在一种优选的实施方式中，该包含花椒的中药组合物与该第一溶剂的质量/体积(g/ml)之比为(0.5～10):(1～30)，例如约1:约5。
在一种优选的实施方式中，该对照药材与该第二溶剂的质量/体积(g/ml)之比为(0.1～10):(0.1～10)，例如约1:约1。
在本发明中，“约”是指一个特定值的±5％范围的值。例如，“约1”包括1的±5％，或从0.95到1.05；“约25”包括25的±5％，或从23.75到26.25。
在一种优选的实施方式中，该加热回流的时间为10～60min，例如约30min。
在本发明中，“约”是指一个特定值的±5％范围的值。例如，“约30”包括30的±5％，或从28.5到31.5。
在一种优选的实施方式中，该供试品溶液的点样量为0.5～10μl，例如约1μl。
在一种优选的实施方式中，该对照药材溶液的点样量为0.5～10μl，例如约1μl。
在一种优选的实施方式中，该石油醚、该乙酸乙酯与该三乙胺之间的体积之比为(3～7):(0.5～3):(0.05～0.5)。
在一种优选的实施方式中，该石油醚、该乙酸乙酯与该三乙胺之间的体积之比为(4.5～5.5):(0.5～3):(0.05～0.5)。
在一种优选的实施方式中，该石油醚、该乙酸乙酯与该三乙胺之间的体积之比为约5:约1:约0.1。
在本发明中，“约”是指一个特定值的±5％范围的值。例如，“约5”包括5的±5％，或从4.75到5.25；“约1”包括1的±5％，或从0.95到1.05；“约0.1”包括0.1的±5％，或从0.095到0.105。
在一种优选的实施方式中，该石油醚的沸程规格为60～90℃。
在一种优选的实施方式中，该薄层鉴别方法进一步包括薄层板活化步骤。
在一种优选的实施方式中，该薄层板活化步骤包括将该薄层板在100℃～120℃下活化20min～60min。
在一种优选的实施方式中，该薄层板选自硅胶G薄层板、硅胶GF254薄层板、硅胶H预制薄层板、硅胶HF254薄层板和聚酰胺薄层板中的至少一种。
在一种优选的实施方式中，该薄层板为硅胶G薄层板。
在一种优选的实施方式中，该硅胶G薄层板为青岛海洋硅胶G薄层板或青岛胜海硅胶G薄层板。
在一种优选的实施方式中，该薄层色谱鉴别分析的步骤中的检视条件为：在紫外灯下检视，其中检视所采用的紫外线波长为365nm。
在一种优选的实施方式中，在该检视之前，将展开完毕的薄层板取出，晾干，喷以三氯化铝试液进行显色。
在一种优选的实施方式中，该薄层色谱鉴别分析的步骤中的温度条件为1～30℃，例如约4℃或约25℃。
在本发明中，“约”是指一个特定值的±5％范围的值。例如，“约4”包括4的±5％，或从3.8到4.2；“约25”包括25的±5％，或从23.75到26.25。
在一种优选的实施方式中，该薄层色谱鉴别分析的步骤中的湿度条件为25％～95％，例如约32％或约88％。
在本发明中，“约”是指一个特定值的±5％范围的值。例如，“约32”包括32的±5％，或从30.4到33.6；“约88”包括88的±5％，或从83.6到92.4。
在一种优选的实施方式中，该薄层色谱鉴别分析的步骤中的展距条件为8～18cm，例如约10cm。
在本发明中，“约”是指一个特定值的±5％范围的值。例如，“约10”包括10的±5％，或从0.95到1.05。
在一种优选的实施方式中，该对照药材为花椒对照药材。
在一种优选的实施方式中，该薄层鉴别的标准包括：查看薄层板在与花椒对照药材相应位置上，是否显示出相同颜色的特征斑点，以及阴性样品是否有干扰；如果该薄层板具有该特征斑点且该阴性样品无干扰，则所检测的包含花椒的中药组合物中含有花椒药材。
根据本发明的另一个方面，提供了一种上述薄层鉴别方法在鉴别包含花椒的中药组合物中的药材花椒中的用途。
根据本发明的另一个方面，提供了一种用于鉴别包含花椒的中药组合物中的药材花椒的试剂盒，其包括薄层板和展开剂，其中该薄层板为硅胶G薄层板，该展开剂为石油醚-乙酸乙酯-三乙胺。
在一种优选的实施方式中，该石油醚、该乙酸乙酯与该三乙胺之间的体积之比为(1～10):(0.1～10):(0.01～1)。
在一种优选的实施方式中，该石油醚、该乙酸乙酯与该三乙胺之间的体积之比为(3～7):(0.5～3):(0.05～0.5)。
在一种优选的实施方式中，该石油醚、该乙酸乙酯与该三乙胺之间的体积之比为(4.5～5.5):(0.5～3):(0.05～0.5)。
在一种优选的实施方式中，该石油醚、该乙酸乙酯与该三乙胺之间的体积之比为约5:约1:约0.1。
在本发明中，“约”是指一个特定值的±5％范围的值。例如，“约5”包括5的±5％，或从4.75到5.25；“约1”包括1的±5％，或从0.95到1.05；“约0.1”包括0.1的±5％，或从0.095到0.105。
在一种优选的实施方式中，该石油醚的沸程规格为60～90℃。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或制造厂商所建议的条件。
除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本专利说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。
实施例
1、仪器与试药
仪器：电子分析天平：SHIMADZΜ(岛津)AΜW120D、Sartoriμs(赛多利斯)BSA124S；电热套：DZTW型邦西仪器科技(上海)有限公司；紫外仪：ZF-1型上海力晨邦西仪器科技有限公司；超声清洗机：KQ-500DB型，昆山市超声仪器有限公司；水浴锅：HH-S26型金坛市大地自动化仪器厂；试剂：硅胶G薄层板(青岛海洋化工有限公司规格：100*200mm)；硅胶G薄层板(青岛胜海化工有限公司规格：100*200mm)；甲醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、乙醇、正丁醇、石油醚(60～90℃)、氨水、香草醛、硫酸、三乙胺、三氯化铝均为分析纯，水为超纯水。对照品、对照药材信息：花椒对照药材(批号：121106-201906，中国食品药品检定研究院)，包含花椒的中药组合物粉末(制备方法如图1所示，以下简称为“本品粉末”)。
包含花椒的中药组合物粉末的制备方法描述
【处方量】
花椒9g、干姜55.2g、人参27.6g和胶饴糖200ml
【制法】取花椒、干姜、人参三味，置2L全自动陶瓷煎药壶中，加水800ml，浸泡30分钟，加盖，武火(220V)加热至沸，文火(175V)保持微沸煎煮90min，过滤，去渣，量取400ml滤液并加入胶饴糖，武火(220V)加热至沸，文火(175V)保持微沸煎煮20min，趁热过滤，量取300ml滤液置旋转蒸发仪中浓缩，真空度：-0.085～-0.099Mpa，转速：80转/分钟，温度：55～65℃，浓缩至相对密度为1.17～1.24(20℃)，约50ml。取出，浸膏置不锈钢盘中，使铺料厚度为5～15mm，在-18℃冰柜中预冻过夜，取出，置冷冻干燥机中干燥，干燥冷阱温度≤-40℃，真空度≤100Pa，冷冻干燥至水分不超过8.0％，取出，粉碎，过三号筛，混匀，即得。收得粉末重62.92～78.92g，收率范围：38.8％～48.7％。收得粉末均值±30％范围为51.74～96.10g，收率均值±30％范围为：32.0％～59.4％。
2、花椒薄层鉴别方法摸索
根据《中国药典》2015年版一部要求，采用薄层鉴别，以花椒对照药材作为对照，监测包含花椒的中药组合物中的花椒药材，并对包含花椒的中药组合物中花椒鉴别方法进行了摸索。
①方法一
取本品粉末2g，加乙醚10ml，充分振摇，浸渍过夜，滤过，滤液挥至1ml，作为供试品溶液；另取缺花椒阴性样品2g，同法制得缺花椒阴性样品溶液；再取花椒对照药材2g，同法制得花椒对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2015版四部通则0502)试验，吸取供试品溶液和阴性样品溶液各40μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(4：1)为展开剂(T：25℃，RH：50％)，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。结果如图2所示。
结果表明，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置无相同颜色斑点，该方法专属性较差。
②方法二
取本品粉末2g，加水25ml使溶解，用正丁醇20ml振摇提取，收集正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取缺花椒阴性样品2g，同法制得缺花椒阴性样品溶液；再取花椒对照药材2g，同法制得花椒对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2015版四部通则0502)试验，吸取供试品溶液、阴性样品溶液和对照药材溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-三乙胺(2：1：0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。结果如图3所示。
③方法三
取本品粉末2g，加水25ml使溶解，用三氯甲烷20ml振摇萃取，收集三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取缺花椒阴性样品2g，同法制得缺花椒阴性样品溶液；再取花椒对照药材2g，同法制得花椒对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2015版四部通则0502)试验，吸取供试品溶液与阴性样品溶液各20μl、对照药材溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯：甲酸：水(15：1：1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。结果如图4所示。
结果表明，供试品色谱中，与对照药材色谱相应的位置上，无相同颜色的斑点，该方法专属性差。
④方法四
取本品粉末5g，加水25ml使溶解，用三氯甲烷振摇萃取2次，每次25ml，收集三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取缺花椒阴性样品2g，同法制得缺花椒阴性样品溶液；再取花椒对照药材2g，同法制得花椒对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2015版四部通则0502)试验，吸取供试品溶液和阴性样品溶液各1μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚：乙酸乙酯：三乙胺(5：1：0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯(365nm)下检视。结果如图5所示。
结果表明，供试品色谱中，与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且阴性无干扰，该方法可行。
3、花椒薄层色谱鉴别
3.1、样品制备
①对照药材溶液的制备
取花椒对照药材1g，置具塞锥形瓶中，加水25ml，加热回流30分钟，滤过，滤液用三氯甲烷振摇萃取2次，每次25ml，收集三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，即得对照药材溶液。
②供试品溶液的制备
取本品粉末5g，置具塞锥形瓶中，加水25ml，超声使溶解，用三氯甲烷振摇萃取2次，每次25ml，收集三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，即得供试品溶液。
③阴性样品溶液的制备
按一日剂量配比称取缺花椒的其他药材，制成缺花椒的阴性样品冻干粉，按上述供试品溶液制备方法制备阴性样品溶液。
3.2、鉴别方法
照薄层色谱法(《中国药典》2015版四部通则0502)试验，吸取上述供试品溶液、对照药材溶液和阴性样品溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-三乙胺(5：1：0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。
3.3、方法考察
①专属性的考察
照薄层色谱法(《中国药典》2015版四部通则0502)试验，吸取上述供试品溶液、对照药材溶液和阴性样品溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-三乙胺(5：1：0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯(365nm)下检视。结果如图6所示。
结果表明，供试品色谱在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色斑点，且缺花椒的阴性样品无干扰，专属性好。
②点样量的考察
照薄层色谱法(《中国药典》2015版四部通则0502)试验，吸取上述供试品溶液和对照药材溶液各0.5μl、1μl、2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-三乙胺(5：1：0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯(365nm)下检视。结果如图7所示。
结果表明，供试品、对照药材点样量1μl均斑点清晰，大小适中，分离效果好；供试品、对照药材点样量0.5μl斑点较淡，影响分辨；供试品、对照药材点样量2μl斑点过于拖尾。综上，选择供试品与对照药材点样量均为1μl。
③不同检视方式的考察
照薄层色谱法(《中国药典》2015版四部通则0502)试验，吸取上述供试品溶液、对照药材溶液和阴性样品溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-三乙胺(5：1：0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置日光灯、紫外光灯(254nm)及紫外光灯(365nm)下检视。结果如图8所示。
结果表明，日光灯下检视，供试品色谱和对照药材色谱无可见斑点；紫外光灯(254nm)下检视，斑点虽有专属性但亮度较弱，影响分辨；紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱在对照药材色谱相应位置显相同颜色的斑点，斑点清晰可见，阴性无干扰。故选择紫外光灯(365nm)下检视。
3.4、耐用性考察
按拟定的方法，分别考察在不同展距、不同展开剂比例、不同温度、不同湿度、不同厂家薄层板条件下展开对实验结果的影响。
①不同展距考察
照薄层色谱法(《中国药典》2015版四部通则0502)试验，吸取上述供试品溶液、对照药材溶液和阴性样品溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-三乙胺(5：1：0.1)为展开剂，一块展至8cm，另一块展至18cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯(365nm)下检视。结果如图9所示。
结果表明，展距在8cm至18cm之间，供试品色谱与对照药材色谱在相应位置上显相同颜色斑点，阴性无干扰。说明展距对其无明显影响，该方法展距耐用性较好。
②不同展开剂比例的考察
照薄层色谱法(《中国药典》2015版四部通则0502)试验，吸取上述供试品溶液、对照药材溶液和阴性样品溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-三乙胺(4.5：1：0.1)、石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-三乙胺(5：1：0.1)、石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-三乙胺(5.5：1：0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯(365nm)下检视。结果如图10所示。
结果表明，石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-三乙胺(4.5：1：0.1)、石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-三乙胺(5：1：0.1)、石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-三乙胺(5.5：1：0.1)为展开剂展开的色谱图中，供试品色谱在与对照药材色谱相应位置上均显相同颜色斑点，且阴性无干扰。说明展开剂比例发生微小变动对其无明显影响，该薄层方法展开剂耐用性好。
③不同温度的考察
照薄层色谱法(《中国药典》2015版四部通则0502)试验，吸取上述供试品溶液、对照药材溶液和阴性样品溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-三乙胺(5：1：0.1)为展开剂，分别在低温(4℃)和常温(25℃)条件下展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯(365nm)下检视。结果如图11所示。
结果表明，在低温(4℃)与常温(25℃)条件下展开的色谱图中，供试品色谱在与对照药材色谱相应位置上均显相同颜色斑点，且阴性无干扰。说明温度对其无明显影响，该薄层鉴别方法温度耐用性好。
④不同湿度的考察
照薄层色谱法(《中国药典》2015版四部通则0502)试验，吸取上述供试品溶液、对照药材溶液和阴性样品溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-三乙胺(5：1：0.1)为展开剂，分别在低湿(相对湿度32％)、常湿(相对湿度50％)和高湿(相对湿度88％)条件下展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯(365nm)下检视。结果如图12所示。
结果表明，在低湿(相对湿度32％)和高湿(相对湿度88％)条件下，供试品色谱在与对照品色谱相应的位置显相同颜色的斑点，且色谱斑点分离较好，阴性无干扰。说明湿度对其影响不大，该薄层鉴别方法湿度耐用性好。
⑤不同厂家薄层板的考察
照薄层色谱法(《中国药典》2015版四部通则0502)试验，吸取上述供试品溶液、对照药材溶液和阴性样品溶液各1μl，分别点于不同厂家的硅胶G薄层板(青岛海洋硅胶G板、青岛胜海硅胶G板)上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-三乙胺(5：1：0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯(365nm)下检视。结果如图13所示。
结果表明，在不同厂家的硅胶G薄层板中，供试品色谱与对照药材色谱在相应位置上均显相同颜色斑点，且阴性无干扰。说明不同厂家薄层板对其影响不大，该薄层鉴别方法薄层板耐用性好。
4、结论
包含花椒的中药组合物中花椒的薄层鉴别方法为：取本品粉末5g，置具塞锥形瓶中，加水25ml，超声使溶解，用三氯甲烷振摇萃取2次，每次25ml，收集三氯甲烷，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取花椒对照药材1g，置具塞锥形瓶中，加水25ml，加热回流30分钟，滤过，滤液自“用三氯甲烷振摇萃取2次”起，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2015版四部通则0502)试验，吸取上述供试品溶液、对照药材溶液和阴性样品溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-三乙胺(5：1：0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
20批包含花椒的中药组合物中花椒薄层色谱如图14所示。
以上对本发明实施例进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明仅用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。同时，本领域技术人员依据本发明的思想，基于本发明的具体实施方式及应用范围上做出的改变或变形之处，都属于本发明保护的范围。综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。
Claims (10)
1.一种包含花椒的中药组合物中的药材花椒的薄层鉴别方法，其特征在于，所述薄层鉴别方法包括如下步骤：
(1)将包含花椒的中药组合物进行前处理得到供试品溶液，将缺少花椒的中药组合物进行前处理得到阴性样品溶液，将对照药材进行前处理得到对照药材溶液；以及
(2)对所述对供试品溶液、所述阴性样品溶液和所述对照药材溶液进行薄层色谱鉴别分析；
其中，所述薄层色谱鉴别分析的步骤中采用石油醚-乙酸乙酯-三乙胺作为展开剂，所述石油醚、所述乙酸乙酯与所述三乙胺之间的体积之比为(1～10):(0.1～10):(0.01～1)。
2.根据权利要求1所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述包含花椒的中药组合物包含花椒、干姜、人参和胶饴糖；
优选地，所述花椒、所述干姜与所述人参之间的质量之比为(0.5～2):(1～15):(0.5～9)；
优选地，所述花椒、所述干姜与所述人参之间的质量之比为约1:约6:约3；
优选地，所述包含花椒的中药组合物粉末的制备方法包括以下步骤：称取适量的花椒、干姜和人参，得到药材饮片混合物，加水浸泡一段时间之后，第一次武火加热至沸腾之后第一次文火煎煮一段时间，过滤，量取第一滤液并加入胶饴糖，第二次武火加热至沸腾之后第二次文火煎煮一段时间，过滤，量取第二滤液使其浓缩成浸膏，干燥，研磨成粉，过筛，混匀，得到所述中药组合物粉末；
优选地，所述药材饮片混合物与所述水或醇的质量/体积(g/ml)之比为(0.5～10):(1～50)，例如约1:约8.7；
优选地，所述加水浸泡的时间为10～60min，例如约30min；
优选地，所述第一次文火煎煮的时间为10～120min，例如约90min；
优选地，所述第一滤液与所述水之间的体积比值为0.25～0.75，例如约0.5；
优选地，所述胶饴糖与所述水之间的体积比值为0.1～0.4，例如约0.25；
优选地，所述第二次文火煎煮的时间为10～50min，例如约20min；
优选地，所述第二滤液与所述水之间的体积比值为0.2～0.6，例如约0.375；
优选地，所述浓缩为将所述第二滤液置于旋转蒸发仪中浓缩；
优选地，所述旋转蒸发仪的条件：真空度为-0.001～-0.150Mpa，例如-0.085～-0.099Mpa，转速为50～100r/min，例如约80r/min，温度为30～80℃，例如55～65℃；
优选地，所述浓缩为浓缩至在20℃下相对密度为1～1.5，例如1.17～1.24；
优选地，所述干燥为在冷冻干燥机中干燥；
优选地，所述冷冻干燥机的条件：冷阱温度不高于约-40℃，真空度不高于约100Pa；
优选地，所述干燥为干燥至水分不超过约8.0％；
优选地，所述筛为三号筛；
优选地，所述供试品溶液的制备方法包括：称取适量的包含花椒的中药组合物粉末，加水溶解，用第一溶剂进行萃取，得到第一溶液，将所述第一溶液进行蒸干，得到残渣，在所述残渣中加入第二溶剂进行溶解，得到所述供试品溶液；
优选地，所述对照药材溶液的制备方法包括：称取适量的对照药材，加水进行加热回流提取，过滤，得到滤液，将所述滤液用第一溶剂进行萃取，得到第一溶液，将所述第一溶液进行蒸干，得到残渣，在所述残渣中加入第二溶剂进行溶解，得到对照药材溶液；
更优选地，所述阴性样品溶液的制备方法包括：称取适量的缺少花椒的中药组合物粉末，之后的步骤与所述供试品溶液的制备方法相同；
更优选地，缺少花椒的中药组合物粉末通过如下方法进行制备：称取适量的干姜和人参，之后的步骤与包含花椒的中药组合物粉末的制备方法相同。
3.根据权利要求2所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述包含花椒的中药组合物与所述水的质量/体积(g/ml)之比为(0.1～5):(1～10)，例如约1:约5；
优选地，所述包含花椒的中药组合物与所述第一溶剂的质量/体积(g/ml)之比为(0.1～5):(1～10)，例如约1:约5；
优选地，所述包含花椒的中药组合物与所述第二溶剂的质量/体积(g/ml)之比为(0.1～10):(0.1～10)，例如约5:约1；
更优选地，所述加水溶解的方式为超声溶解和/或搅拌溶解，例如超声溶解；
更优选地，所述第一溶剂为有机溶剂；
更优选地，所述有机溶剂选自三氯甲烷和/或乙酸乙酯；
又优选地，所述提取的方式为振摇提取、超声提取和/或回流提取，例如振摇提取；
又优选地，所述振摇提取的次数为1～5次，例如2次；
尤其优选地，所述第二溶剂为有机溶剂；
尤其优选地，所述有机溶剂选自甲醇和/或乙醇；
尤其优选地，所述对照药材与所述水的质量/体积(g/ml)之比为(0.5～10):(1～30)，例如约1:约25；
又尤其优选地，所述包含花椒的中药组合物与所述第一溶剂的质量/体积(g/ml)之比为(0.5～10):(1～30)，例如约1:约5；
又尤其优选地，所述对照药材与所述第二溶剂的质量/体积(g/ml)之比为(0.1～10):(0.1～10)，例如约1:约1；
又特别优选地，所述加热回流的时间为10～60min，例如约30min；
又特别优选地，所述供试品溶液的点样量为0.5～10μl，例如约1μl；
又特别优选地，所述对照药材溶液的点样量为0.5～10μl，例如约1μl。
4.根据权利要求1所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述石油醚、所述乙酸乙酯与所述三乙胺之间的体积之比为(3～7):(0.5～3):(0.05～0.5)；
优选地，所述石油醚、所述乙酸乙酯与所述三乙胺之间的体积之比为(4.5～5.5):(0.5～3):(0.05～0.5)；
优选地，所述石油醚、所述乙酸乙酯与所述三乙胺之间的体积之比为约5:约1:约0.1；
更优选地，所述石油醚的沸程规格为60～90℃。
5.根据权利要求1所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述薄层鉴别方法进一步包括薄层板活化步骤；
优选地，所述薄层板活化步骤包括将所述薄层板在100℃～120℃下活化20min～60min；
更优选地，所述薄层板选自硅胶G薄层板、硅胶GF254薄层板、硅胶H预制薄层板、硅胶HF254薄层板和聚酰胺薄层板中的至少一种；
更优选地，所述薄层板为硅胶G薄层板；
更优选地，所述硅胶G薄层板为青岛海洋硅胶G薄层板或青岛胜海硅胶G薄层板。
6.根据权利要求1所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述薄层色谱鉴别分析的步骤中的检视条件为：在紫外灯下检视，其中检视所采用的紫外线波长为365nm；
优选地，在所述检视之前，将展开完毕的薄层板取出，晾干，喷以三氯化铝试液进行显色；
更优选地，所述薄层色谱鉴别分析的步骤中的温度条件为1～30℃，例如约4℃或约25℃；
又优选地，所述薄层色谱鉴别分析的步骤中的湿度条件为25％～95％，例如约32％或约88％；
尤其优选地，所述薄层色谱鉴别分析的步骤中的展距条件为8～18cm，例如约10cm。
7.根据权利要求1所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述对照药材为花椒对照药材。
8.根据权利要求1所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述薄层鉴别的标准包括：查看薄层板在与花椒对照药材相应位置上，是否显示出相同颜色的特征斑点，以及阴性样品是否有干扰；如果所述薄层板具有所述特征斑点且所述阴性样品无干扰，则所检测的包含花椒的中药组合物中含有花椒药材。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的薄层鉴别方法在鉴别包含花椒的中药组合物中的药材花椒中的用途。
10.一种用于鉴别包含花椒的中药组合物中的药材花椒的试剂盒，其包括薄层板和展开剂，其中所述薄层板为硅胶G薄层板，所述展开剂为石油醚-乙酸乙酯-三乙胺；
优选地，所述石油醚、所述乙酸乙酯与所述三乙胺之间的体积之比为(1～10):(0.1～10):(0.01～1)；
更优选地，所述石油醚、所述乙酸乙酯与所述三乙胺之间的体积之比为(3～7):(0.5～3):(0.05～0.5)；
更优选地，所述石油醚、所述乙酸乙酯与所述三乙胺之间的体积之比为(4.5～5.5):(0.5～3):(0.05～0.5)；
又优选地，所述石油醚、所述乙酸乙酯与所述三乙胺之间的体积之比为约5:约1:约0.1；
尤其优选地，所述石油醚的沸程规格为60～90℃。
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