CN117269345A - 小分子有机胺类物质的液相检测方法 - Google Patents
小分子有机胺类物质的液相检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN117269345A CN117269345A CN202311106746.6A CN202311106746A CN117269345A CN 117269345 A CN117269345 A CN 117269345A CN 202311106746 A CN202311106746 A CN 202311106746A CN 117269345 A CN117269345 A CN 117269345A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- organic amine
- sample
- derivative
- solvent
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 73
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 title claims abstract description 64
- 239000000126 substance Substances 0.000 title claims abstract description 33
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 title claims abstract description 16
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 claims abstract description 15
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 claims abstract description 14
- LOTKRQAVGJMPNV-UHFFFAOYSA-N 1-fluoro-2,4-dinitrobenzene Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(F)C([N+]([O-])=O)=C1 LOTKRQAVGJMPNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- IXIJRPBFPLESEI-UHFFFAOYSA-N 1,2-difluoro-3-nitrobenzene Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=CC(F)=C1F IXIJRPBFPLESEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 117
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 110
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 45
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims description 38
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 38
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 37
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 23
- 239000012490 blank solution Substances 0.000 claims description 21
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 19
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000012088 reference solution Substances 0.000 claims description 14
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 claims description 14
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 12
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 11
- 150000003141 primary amines Chemical group 0.000 claims description 11
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 claims description 11
- BSKHPKMHTQYZBB-UHFFFAOYSA-N 2-methylpyridine Chemical compound CC1=CC=CC=N1 BSKHPKMHTQYZBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 7
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 4
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 claims description 4
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims description 4
- ROBLTDOHDSGGDT-UHFFFAOYSA-M sodium;pentane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].CCCCCS([O-])(=O)=O ROBLTDOHDSGGDT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 claims description 4
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 claims description 3
- PWKNBLFSJAVFAB-UHFFFAOYSA-N 1-fluoro-2-nitrobenzene Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=CC=C1F PWKNBLFSJAVFAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 2
- FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylacetamide Chemical compound CN(C)C(C)=O FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- SPEUIVXLLWOEMJ-UHFFFAOYSA-N acetaldehyde dimethyl acetal Natural products COC(C)OC SPEUIVXLLWOEMJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 18
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 11
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 abstract description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 3
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 abstract description 3
- 230000007547 defect Effects 0.000 abstract description 2
- ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N Dimethylamine Chemical compound CNC ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 150000004656 dimethylamines Chemical class 0.000 description 20
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 12
- ZLVSPMRFRHMMOY-WWCCMVHESA-N bedaquiline fumarate Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O.C1([C@H](C2=CC3=CC(Br)=CC=C3N=C2OC)[C@@](O)(CCN(C)C)C=2C3=CC=CC=C3C=CC=2)=CC=CC=C1 ZLVSPMRFRHMMOY-WWCCMVHESA-N 0.000 description 8
- 229960001137 bedaquiline fumarate Drugs 0.000 description 8
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 6
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 6
- 125000002147 dimethylamino group Chemical group [H]C([H])([H])N(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 3
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 3
- INOPOHSUVXSUKY-WLHGVMLRSA-N (e)-but-2-enedioic acid;quinoline Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O.N1=CC=CC2=CC=CC=C21 INOPOHSUVXSUKY-WLHGVMLRSA-N 0.000 description 2
- QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N Ethylamine Chemical compound CCN QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 2
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N Methylamine Chemical compound NC BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- WGYKZJWCGVVSQN-UHFFFAOYSA-N propylamine Chemical compound CCCN WGYKZJWCGVVSQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000006069 Corneal Opacity Diseases 0.000 description 1
- 208000028006 Corneal injury Diseases 0.000 description 1
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004008 N-nitroso compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 231100000315 carcinogenic Toxicity 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 239000013064 chemical raw material Substances 0.000 description 1
- HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N diethylamine Chemical compound CCNCC HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WEHWNAOGRSTTBQ-UHFFFAOYSA-N dipropylamine Chemical compound CCCNCCC WEHWNAOGRSTTBQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000622 irritating effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 150000002832 nitroso derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- AOHJOMMDDJHIJH-UHFFFAOYSA-N propylenediamine Chemical compound CC(N)CN AOHJOMMDDJHIJH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
- G01N2030/067—Preparation by reaction, e.g. derivatising the sample
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
Abstract
本发明涉及一种药物分析检测方法，具体涉及小分子有机胺类物质的液相检测方法，为解决现有技术中存在的气相色谱法检测小分子有机胺类物质会导致原料药分解影响检测结果的不足之处。本发明利用氟代二硝基苯或二氟代硝基苯与小分子有机胺类物质反应生成小分子有机胺衍生物，小分子有机胺衍生物中包括双键显色基团，再利用液相色谱法进行检测得到对应溶液中小分子有机胺衍生物的浓度，小分子有机胺类物质的浓度与小分子有机胺衍生物的浓度相同，该检测方法方便快捷，且结果准确性高，重复性好。
Description
技术领域
本发明涉及一种药物分析检测方法，具体涉及小分子有机胺类物质的液相检测方法。
背景技术
在许多官能团中包含氨基的原料药的合成中通常使用小分子有机胺类物质充当起始原料，或其起始原料的工艺路线中会使用小分子有机胺类物质，小分子有机胺类物质为包含1-6个碳原子的伯胺或仲胺，如甲胺、二甲胺、乙基胺、乙二胺、二乙胺、丙基胺、丙二胺或二丙胺；近距离接触伯胺或仲胺会对眼和呼吸道有强烈的刺激作用，眼睛接触伯胺或仲胺可引起角膜混浊、损伤，皮肤接触液态伯胺或仲胺会引起坏死。在人体内，由于亚硝酸根的存在，伯胺或仲胺易形成致癌物质N-亚硝基化合物，对人体健康造成危害，近些年来，欧美药品监管机构对于亚硝基类化合物的检测和控制要求越发精准，所以为保证用药安全，也为保证生产销售原料药企业的效益，有必要对原料药中的小分子有机胺类物质进行质量控制。
小分子有机胺类物质目前常通过气相色谱法进行检测，然而气相色谱检测的温度较高，容易造成原料药分解，从而影响检测结果；同时小分子有机胺类物质不含发色团，无明显的紫外吸收，无法直接通过高效液相色谱法检测，国内药典收载的原料药及其制剂中，也不包含对小分子有机胺类物质的其他有效检测方法。当涉及伯胺或仲胺的原料药在欧美质量审核时，可能会因为难以对伯胺或仲胺含量进行有效说明而引起质疑，因此，亟需一种有效的、精准的检测方法，对涉及伯胺或仲胺的化学原料药进行相关检测和控制。
发明内容
本发明的目的是解决现有技术中存在的气相色谱法检测小分子有机胺类物质会导致原料药分解影响检测结果的不足之处，而提供一种小分子有机胺类物质的液相检测方法。
为实现上述目的，本发明提供的技术解决方案如下：
一种小分子有机胺类物质的液相检测方法，其特殊之处在于，包括以下步骤：
S1、配制衍生溶液；
将氟代二硝基苯或二氟代硝基苯中的一种与第一溶剂混合得到衍生溶液，第一溶剂为四氢呋喃、乙腈、DMA中的一种；
S2、配制供试品溶液和空白溶液；
将供试品、第一溶剂、第二溶剂、有机弱碱试剂和衍生溶液混合反应，得到供试品溶液，其中供试品和衍生溶液反应产生小分子有机胺衍生物；所述第二溶剂为用于溶解供试品的有机溶剂；
将第一溶剂、有机弱碱试剂和衍生溶液混合得到空白溶液，第一溶剂、有机弱碱试剂和衍生溶液的种类、用量均与配制供试品溶液时相同，确保检验方法的均一性，排除溶剂对结果的干扰或影响；
S3、利用液相色谱法检测得到对应空白溶液和供试品溶液的图谱，根据对应空白溶液和供试品溶液的图谱获取对应小分子有机胺衍生物的浓度；所述小分子胺为伯胺或仲胺，小分子有机胺类物质的浓度与小分子有机胺衍生物的浓度相同。
进一步地，步骤S1中，配制衍生溶液具体为：量取1.0-3.0体积份的氟代二硝基苯或二氟代硝基苯中的一种，用第一溶剂定容到100体积份；
步骤S2中，配制供试品溶液时，所述第二溶剂为四氢呋喃、甲醇、异丙醇中的一种或至少两种的混合溶剂；所述有机弱碱试剂为三乙胺、吡啶或2-甲基吡啶中的一种；所述混合反应的时间至少为30min。
在该时间范围内，供试品溶液与衍生溶液充分反应，反应时间不足则导致反应不充分影响检测精度，超出30min则对反应无明显影响，有机弱碱试剂作为催化剂催化供试品溶液与衍生溶液的反应。
进一步地，步骤S3中，重复检测每个空白溶液和供试品溶液2-5次，对多次检测得到的浓度求平均值作为最终结果。
进一步地，步骤S2中，配制供试品溶液具体为：称取供试品10.0～40.0mg至10ml容量瓶，加入5.0±0.5ml第二溶剂，超声溶解，再依次加入100±1μl有机弱碱试剂、0.5～2.0ml衍生溶液，振摇，在室温反应30min，用第一溶剂定容至10ml刻度，得到供试品溶液。
进一步地，步骤S2中，还包括配制参比溶液；
将小分子有机胺类物质标准溶液和衍生溶液混合反应得到小分子有机胺衍生物溶液，配制多个小分子有机胺衍生物溶液作为参比溶液，多个小分子有机胺衍生物溶液中的小分子有机胺衍生物具有梯度浓度；
步骤S3中，还包括利用液相色谱法检测得到参比溶液的检测图谱，以其小分子有机胺衍生物的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制得到浓度标准曲线；重复检测4-6次任一混合溶液，根据4-6次结果计算得到其相对标准偏差RSD，用于评价检测方法的准确性。
进一步地，步骤S2中，还包括配制样品加标溶液；
将供试品、第一溶剂、第二溶剂、小分子有机胺类物质标准溶液、有机弱碱试剂和衍生溶液混合反应，得到样品加标溶液；其中，供试品、第一溶剂、第二溶剂、有机弱碱试剂和衍生溶液均与供试品溶液中的种类和用量相同；
步骤S3中，还包括利用液相色谱法检测得到样品加标溶液的图谱，根据对应图谱获取样品加标溶液中小分子有机胺衍生物的浓度，计算其中小分子有机胺衍生物的回收率，以验证检测结果的准确性。
进一步地，步骤S3中，所述液相色谱法中用到的流动相包括戊烷磺酸钠的水溶液和乙腈；
液相色谱法的检测波长为226-260nm，检测时的流速为0.5-1.5mL/min，进样量为10μL。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
1.本发明利用氟代二硝基苯或二氟代硝基苯与小分子有机胺类物质反应生成小分子有机胺衍生物，小分子有机胺衍生物中包括双键显色基团，再利用液相色谱法进行检测得到对应溶液中小分子有机胺衍生物的浓度，小分子有机胺类物质的浓度与小分子有机胺衍生物的浓度相同，该检测方法方便快捷，且结果准确性高，重复性好；而且本方法在常温下反应和检测，对作为供试品的原料药没有影响，适用性强。
2.本发明可以用于对原料药中伯胺或仲胺小分子有机胺残留检测，其中所用第二溶剂对原料药的溶解性好，原料药浓度即使增大到为1.0～4.0mg/ml，也不影响小分子有机胺类物质的检测，因此本方法具有更广泛的适用性，可以提高检测的灵敏度；同时，本方法也可以用于其他原料药的小分子有机胺类物质的检测。
附图说明
图1是本发明实施例一中二甲胺衍生物浓度标准曲线；
图2是本发明实施例一中H溶液中二甲胺衍生物的检测图谱；
图3是本发明实施例一中供试品-1的检测图谱。
具体实施方式
实施例一
本实施例以原料药富马酸贝达喹啉作为供试品，对其中的二甲胺进行液相检测。富马酸贝达喹啉的结构式中包含一个二甲胺基团，在一定条件下会发生降解生成二甲胺，从而残留在富马酸贝达喹啉原料药中，为确保富马酸贝达喹啉的质量安全，需要对其二甲胺含量进行检测。
1、溶液配制
1.1、衍生溶液
精密吸取氟代二硝基苯1.0ml至100ml容量瓶，并用乙腈定容。
1.2、空白溶液
精密吸取5.0ml乙腈至100ml容量瓶，加入100μl三乙胺，加入1.0ml衍生溶液。密封后充分振摇。常温放置反应30min后，用乙腈定容得到空白溶液。
1.3、参比溶液
A溶液：精密吸取1.0ml的二甲胺(40％水溶液)至100ml容量瓶，用乙腈溶解稀释并定容到刻度。
B溶液：精密吸取0.2ml的A溶液，至100ml容量瓶，用乙腈溶解稀释并定容到刻度。精密吸取上述溶液1.0ml，至10ml容量瓶，依次加入5.0ml乙腈，100μl三乙胺，1.0ml衍生溶液，充分振摇。在室温放置30min。用乙腈定容至刻度，为0.004％(40ppm)的二甲胺衍生溶液。
C溶液：精密吸取0.25ml的A溶液，至100ml容量瓶，用乙腈溶解稀释并定容到刻度。精密吸取上述溶液1.0ml，至10ml容量瓶，依次加入5.0ml乙腈，100μl三乙胺，1.0ml衍生溶液，充分振摇。在室温放置30min。用乙腈定容至刻度，为0.005％(50ppm)的二甲胺衍生溶液。
D溶液：精密吸取0.5ml的A溶液，至100ml容量瓶，用乙腈溶解稀释并定容到刻度。精密吸取上述溶液1.0ml，至10ml容量瓶，依次加入5.0ml乙腈，100μl三乙胺，1.0ml衍生溶液，充分振摇。在室温放置30min。用乙腈定容至刻度，为0.01％(100ppm)的二甲胺衍生溶液。
E溶液：精密吸取1.0ml的A溶液，至100ml容量瓶，用乙腈溶解稀释并定容到刻度。精密吸取上述溶液1.0ml，至10ml容量瓶，依次加入5.0ml乙腈，100μl三乙胺，1.0ml衍生溶液，充分振摇。在室温放置30min。用乙腈定容至刻度，为0.02％(200ppm)的二甲胺衍生溶液。
F溶液：精密吸取1.5ml的A溶液，至100ml容量瓶，用乙腈溶解稀释并定容到刻度。精密吸取上述溶液1.0ml，至10ml容量瓶，依次加入5.0ml乙腈，100μl三乙胺，1.0ml衍生溶液，充分振摇。在室温放置30min。用乙腈定容至刻度，为0.03％(300ppm)的二甲胺衍生溶液。
G溶液：精密吸取2.0ml的A溶液，至100ml容量瓶，用乙腈溶解稀释并定容到刻度。精密吸取上述溶液1.0ml，至10ml容量瓶，依次加入5.0ml乙腈，100μl三乙胺，1.0ml衍生溶液，充分振摇。在室温放置30min。用乙腈定容至刻度，为0.04％(400ppm)的二甲胺衍生溶液。
H溶液：精密吸取2.5ml的A溶液，至100ml容量瓶，用乙腈溶解稀释并定容到刻度。精密吸取上述溶液1.0ml，至10ml容量瓶，依次加入5.0ml乙腈，100μl三乙胺，1.0ml衍生溶液，充分振摇。在室温放置30min。用乙腈定容至刻度，为0.05％(500ppm)的二甲胺衍生参比溶液。
I溶液：精密吸取3.0ml的A溶液，至100ml容量瓶，用乙腈溶解稀释并定容到刻度。精密吸取上述溶液1.0ml，至10ml容量瓶，依次加入5.0ml乙腈，100μl三乙胺，1.0ml衍生溶液，充分振摇。在室温放置30min。用乙腈定容至刻度，为0.06％(600ppm)的二甲胺衍生溶液。
参比溶液包括B溶液至I溶液。
1.4、检测方法重复性考察溶液
精密吸取0.25ml的A溶液，至100ml容量瓶，用乙腈溶解稀释并定容到刻度。精密吸取上述溶液1.0ml至10ml容量瓶，依次加入5.0ml乙腈、100μl三乙胺、1.0ml衍生溶液，充分振摇，在室温放置反应30min用乙腈定容至刻度，为0.005％(50ppm)的二甲胺衍生溶液。
1.5、供试品溶液
精密称取富马酸贝达喹啉10.0mg至10ml容量瓶，加入5.0ml四氢呋喃，超声溶解。依次加入100μl三乙胺、1.0ml衍生溶液，充分振摇。在室温放置反应30min。用乙腈定容至刻度，得到浓度为1mg/ml供试品溶液。
依照以上配制方法，分别配制浓度相同的供试品-1，供试品-2，供试品-3溶液，供试品-1，供试品-2，供试品-3分别平行配制两份。
1.6、样品加标溶液
精密称取富马酸贝达喹啉10.0mg，加入10ml容量瓶，向其中加入5.0ml四氢呋喃，超声溶解，精确添加50ppm(即0.005％)的二甲胺溶液1.0ml，再依次加入100μl三乙胺、1.0ml衍生溶液，充分振摇，在室温放置反应30min用乙腈定容至刻度。相当于在每份浓度为1mg/ml的供试品溶液中分别定量添加50ppm衍生物(0.005％w/w)。
依照以上配制方法，分别配制浓度相同的供试品-a1，供试品-a2，供试品-a3的样品加标溶液作为平行样品，供试品-a1，供试品-a2，供试品-a3样品加标溶液分别平行配制两份，用于对每个样品分别进行两针平行检测，确保检测的准确性，避免系统和人为误差。
2、检测
2.1、仪器设置
检测仪器为岛津LC-20A plus；色谱柱型号为YMC Pack Pro C18，150mm×3.0mm，5μm；
检测时，流动相A为戊烷磺酸钠的水溶液；流动相B为乙腈；梯度洗脱方式为：
| 时间(min) | 0 | 5 | 15 | 20 | 25 | 40 | 41 | 50 |
| 流动相A％ | 60 | 60 | 35 | 35 | 30 | 30 | 60 | 60 |
| 流动相B％ | 40 | 40 | 65 | 65 | 70 | 70 | 40 | 40 |
检测波长为226nm，流速为1.5ml/min，进样量为10μL。
流动相A的配置方法为：将1.74g的戊烷磺酸钠溶于纯水，并用纯水定容至1000ml，并用磷酸调节pH到3.0±0.1。
2.2、检测步骤
2.2.1、将1.1至1.3、1.4中的B溶液到I溶液、1.5至1.7配置的各溶液依次利用液相色谱法(HPLC)进行检测，获得对应图谱；
其中，1.5中的溶液共取6个样本进行重复测量；
2.2.2、根据对应图谱得到对应溶液中的二甲胺含量。
2.3、检测结果分析
2.3.1、B溶液到I溶液的检测结果
| 二甲胺衍生物浓度(ppm) | 衍生物峰面积 |
| 40 | 57372 |
| 50 | 74678 |
| 100 | 163205 |
| 200 | 335663 |
| 300 | 483373 |
| 400 | 651973 |
| 500 | 840092 |
| 600 | 1029905 |
以二甲胺衍生物浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，用上表的检测结果绘制浓度标准曲线，如图1所示；
其中，H溶液的图谱如图2所示。
结果表明，二甲胺衍生物在40～600ppm呈良好的线性关系。计算得回归方程y＝8548.4x-13494，线性系数R＝0.9994，符合规定(R≥0.99)。
2.3.2、检查方法重复性考察
1.5中的6个样本的检测结果如下表所示：
| 进样 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 平均峰面积 | RSD％ |
| 峰面积 | 76021 | 76404 | 76527 | 76431 | 76423 | 76763 | 76478 | 0.35 |
6个样本中0.005％(50ppm)的二甲胺衍生溶液峰面积的相对标准偏差RSD＜6.0％，符合规定，说明本方法检测结果的稳定性高。
2.3.3、供试品溶液检测结果
供试品富马酸贝达喹啉在常温条件下，二甲胺衍生物检测结果为未检出，由此说明作为原料药的富马酸贝达喹啉质量稳定。
其中，供试品溶液的图谱如图3所示，
2.3.4、样品加标溶液检测结果
单个样品加标溶液中，二甲胺衍生物的回收率在50％～150％，平均回收率在70％～130％。符合规定，说明本方法的检测结果准确性好。
2.3.5、检出限计算
1)1.5中的6个样本的检测结果及其标准偏差σ如下表所示：
2)二甲胺衍生物在40～600ppm标准曲线y＝8548.4x-13494的斜率S为8548.4，根据下式计算检出限：
LOD＝3.3σ/S
其中：σ＝响应值的标准偏差
本实施例中，检出限LOD＝3.3×240.1/8548.4＝0.1ppm，因此，由上述实验说明本方法理论检出限为0.1ppm，具有较高灵敏度，能够满足API产品中二甲胺的质量控制。
本实施例中，乙腈作为第一溶剂，四氢呋喃作为第二溶剂，三乙胺作为有机弱碱试剂。在本发明的其他实施例中，第一溶剂还可以使用四氢呋喃、DMA中的一种；第二溶剂还可以是甲醇、异丙醇中的一种或至少两种的混合溶剂；有机弱碱试剂还可以是吡啶或2-甲基吡啶中的一种
实施例二
本发明小分子有机胺类物质的液相检测方法包括以下步骤：
S1、配制衍生溶液
量取2.0ml二氟代硝基苯到100ml容量瓶中，用四氢呋喃定容到100ml。
S2、配制供试品溶液、空白溶液、样品加标溶液和参比溶液；
S2.1、配制供试品溶液：精密称取富马酸贝达喹啉20mg至10ml容量瓶，加入5.0±0.5ml甲醇，超声溶解。依次加入100±1μl吡啶、0.5ml衍生溶液，充分振摇，在室温放置40min。用四氢呋喃定容至刻度，得到供试品溶液。
S2.2、配制空白溶液：精密吸取5.0±0.5ml甲醇至100ml容量瓶，加入100±1μl吡啶，加入0.5ml衍生溶液。密封后充分振摇。常温放置40min后，用四氢呋喃定容得到空白溶液。
S2.3、配制样品加标溶液
精密称取富马酸贝达喹啉20mg，加入10ml容量瓶，向其中加入5.0±0.5ml甲醇，超声溶解，精确添加50ppm的二甲胺溶液1.0ml，相当于在每份供试品溶液中分别定量添加50ppm衍生物(0.005％w/w)；再依次加入100±1μl吡啶、0.5ml衍生溶液，充分振摇，在室温放置40min用四氢呋喃定容至刻度。
S2.4、配制参比溶液：参比溶液的配制方式与实施例一相同；
S3、利用液相色谱法检测得到对应供试品溶液、空白溶液、样品加标溶液和参比溶液的检测图谱，根据参比溶液的检测图谱绘制标准曲线、计算线性系数，并获取供试品溶液、空白溶液、样品加标溶液中的二甲胺衍生物浓度，即为其中的二甲胺浓度，对检测结果进行分析。
实施例三
本发明小分子有机胺类物质的液相检测方法包括以下步骤：
S1、配制衍生溶液
量取3.0ml二氟代硝基苯到100ml容量瓶中，用DMA定容到100ml。
S2、配制供试品溶液、空白溶液；
S2.1、配制供试品溶液：精密称取富马酸贝达喹啉40mg至10ml容量瓶，加入5.0±0.5ml异丙醇，超声溶解。依次加入100±1μl 2-甲基吡啶、2.0ml衍生溶液，充分振摇，在室温放置50min。用DMA定容至刻度，得到供试品溶液。
S2.2、配制空白溶液：精密吸取5.0±0.5ml异丙醇至100ml容量瓶，加入100±1μl2-甲基吡啶，加入2.0ml衍生溶液。密封后充分振摇。常温放置50min后，用DMA定容得到空白溶液。
S3、利用液相色谱法检测得到供试品溶液、空白溶液的检测图谱，获取对应的二甲胺衍生物浓度，即为其中的二甲胺浓度。
Claims (7)
1.一种小分子有机胺类物质的液相检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、配制衍生溶液；
将氟代二硝基苯或二氟代硝基苯中的一种与第一溶剂混合得到衍生溶液，第一溶剂为四氢呋喃、乙腈、DMA中的一种；
S2、配制供试品溶液和空白溶液；
将供试品、第一溶剂、第二溶剂、有机弱碱试剂和衍生溶液混合反应，得到供试品溶液，其中供试品和衍生溶液反应产生小分子有机胺衍生物；所述第二溶剂为用于溶解供试品的有机溶剂；
将第一溶剂、有机弱碱试剂和衍生溶液混合得到空白溶液，第一溶剂、有机弱碱试剂和衍生溶液的种类、用量均与配制供试品溶液时相同；
S3、利用液相色谱法检测得到对应空白溶液和供试品溶液的图谱，根据对应空白溶液和供试品溶液的图谱获取对应小分子有机胺衍生物的浓度；所述小分子胺为伯胺或仲胺，小分子有机胺类物质的浓度与小分子有机胺衍生物的浓度相同。
2.根据权利要求1所述的小分子有机胺类物质的液相检测方法，其特征在于：
步骤S1中，配制衍生溶液具体为：量取1.0-3.0体积份的氟代二硝基苯或二氟代硝基苯中的一种，用第一溶剂定容到100体积份；
步骤S2中，配制供试品溶液时，所述第二溶剂为四氢呋喃、甲醇、异丙醇中的一种或至少两种的混合溶剂；所述有机弱碱试剂为三乙胺、吡啶或2-甲基吡啶中的一种；所述混合反应的时间至少为30min。
3.根据权利要求2所述的小分子有机胺类物质的液相检测方法，其特征在于：
步骤S3中，重复检测每个空白溶液和供试品溶液2-5次，对多次检测得到的浓度求平均值作为最终结果。
4.根据权利要求3所述的小分子有机胺类物质的液相检测方法，其特征在于：
步骤S2中，配制供试品溶液具体为：称取供试品10.0～40.0mg至10ml容量瓶，加入5.0±0.5ml第二溶剂，超声溶解，再依次加入100±1μl有机弱碱试剂、0.5～2.0ml衍生溶液，振摇，在室温反应30min，用第一溶剂定容至10ml刻度，得到供试品溶液。
5.根据权利要求1-4任一所述的小分子有机胺类物质的液相检测方法，其特征在于：
步骤S2中，还包括配制参比溶液；
将小分子有机胺类物质标准溶液和衍生溶液混合反应得到小分子有机胺衍生物溶液，配制多个小分子有机胺衍生物溶液作为参比溶液，多个小分子有机胺衍生物溶液中的小分子有机胺衍生物具有梯度浓度；
步骤S3中，还包括利用液相色谱法检测得到参比溶液的检测图谱，以其小分子有机胺衍生物的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制得到浓度标准曲线；重复检测4-6次任一混合溶液，根据4-6次结果计算得到其相对标准偏差RSD，用于评价检测方法的准确性。
6.根据权利要求5所述的小分子有机胺类物质的液相检测方法，其特征在于：
步骤S2中，还包括配制样品加标溶液；
将供试品、第一溶剂、第二溶剂、小分子有机胺类物质标准溶液、有机弱碱试剂和衍生溶液混合反应，得到样品加标溶液；其中，供试品、第一溶剂、第二溶剂、有机弱碱试剂和衍生溶液均与供试品溶液中的种类和用量相同；
步骤S3中，还包括利用液相色谱法检测得到样品加标溶液的图谱，根据对应图谱获取样品加标溶液中小分子有机胺衍生物的浓度，计算其中小分子有机胺衍生物的回收率，以验证检测结果的准确性。
7.根据权利要求6所述的小分子有机胺类物质的液相检测方法，其特征在于：
步骤S3中，所述液相色谱法中用到的流动相包括戊烷磺酸钠的水溶液和乙腈；
液相色谱法的检测波长为226-260nm，检测时的流速为0.5-1.5mL/min，进样量为10μL。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311106746.6A CN117269345A (zh) | 2023-08-30 | 2023-08-30 | 小分子有机胺类物质的液相检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311106746.6A CN117269345A (zh) | 2023-08-30 | 2023-08-30 | 小分子有机胺类物质的液相检测方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN117269345A true CN117269345A (zh) | 2023-12-22 |
Family
ID=89218739
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202311106746.6A Pending CN117269345A (zh) | 2023-08-30 | 2023-08-30 | 小分子有机胺类物质的液相检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN117269345A (zh) |
-
2023
- 2023-08-30 CN CN202311106746.6A patent/CN117269345A/zh active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110031557B (zh) | 一种盐酸法舒地尔中5-异喹啉磺酸甲酯、5-异喹啉磺酸乙酯的检测方法 | |
| CN103698424B (zh) | 一种测定难溶性铝盐药物中有机溶剂的检测方法 | |
| CN112611820A (zh) | 奥扎格雷钠残留溶剂的测定方法 | |
| CN112730641B (zh) | 一种n-甲基哌嗪的离子色谱测定法 | |
| CN118050445A (zh) | 一种检测左乙拉西坦口服液中对羟基苯甲酸甘油酯的方法 | |
| CN113984921A (zh) | 一种测定基因毒杂质1,3-二氯-2-丙醇的气相色谱质谱联用方法 | |
| CN117269345A (zh) | 小分子有机胺类物质的液相检测方法 | |
| CN113514565A (zh) | 一种高哌嗪中残留物乙二胺和哌嗪的检测方法 | |
| CN114354800B (zh) | 头孢呋辛酯中乙酰溴含量的分析方法 | |
| CN114166982B (zh) | 一种同时测定氨基己酸注射液中二聚体、三聚体和己内酰胺的方法 | |
| CN115616133A (zh) | 一种复方氨基酸注射液中半胱氨酸的检测方法及其应用 | |
| CN108982706B (zh) | 一种米格列奈钙中杂质顺式全氢异吲哚的检测方法 | |
| CN113049583A (zh) | 一种泼尼松龙的生产方法 | |
| CN113702523B (zh) | 奥泽沙星中n-亚硝基二甲胺含量的测定方法 | |
| CN115343380B (zh) | 一种盐酸伊托必利中2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐检测方法 | |
| CN113933413B (zh) | 更昔洛韦中杂质k的检测方法、及杂质的分离方法 | |
| CN113917006B (zh) | 一种头孢硫脒中异硫氰酸异丙酯含量的检测方法 | |
| CN115372489B (zh) | 一种盐酸替扎尼定有关物质的检测方法 | |
| CN115097026B (zh) | 从药物中检测吡唑并嘧啶苯磺酸酯类化合物的方法 | |
| CN117074578B (zh) | 一种2-（甲氨基）-乙醇的lc-ms/ms定量检测方法 | |
| CN111693623B (zh) | 一种高效液相法测定米力农中基因毒性杂质的方法 | |
| CN118731232A (zh) | 同时检测水溶性样品中多种残留有机溶剂的分析方法 | |
| CN116223667A (zh) | 一种检测他达拉非中遗传毒性杂质的方法 | |
| CN117554549A (zh) | 一种同时检测盐酸达克罗宁残留甲酸和乙酸的方法 | |
| CN117169394A (zh) | 一种亚美尼斯和可比落的检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |