CN118050445A - 一种检测左乙拉西坦口服液中对羟基苯甲酸甘油酯的方法 - Google Patents
一种检测左乙拉西坦口服液中对羟基苯甲酸甘油酯的方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种检测左乙拉西坦口服液中对羟基苯甲酸甘油酯的方法，属于药物分析领域。该方法使用反相色谱系统，本发明通过选择合适的固定相和流动相，以及对色谱条件进行摸索和优化，优选出适合左乙拉西坦口服液中对羟基苯甲酸甘油酯的检测方法，该方法中对羟基苯甲酸甘油酯与主成分峰之间的分离度良好，检测的灵敏度和准确度较高。
Description
技术领域
本发明涉及药物分析技术领域，具体涉及一种检测左乙拉西坦口服液中对羟基苯甲酸甘油酯的方法。
背景技术
左乙拉西坦(Levetiracetam)，别名乐凡替拉西坦、利维西坦、左旋乙拉西坦，是一种白色结晶粉末的化学品。化学名称(S)-α-乙基-2-氧代-1-吡咯烷乙酰胺，分子式为C8H14N2O2，分子量为170.21。左乙拉西坦为抗癫痫药，是一种吡咯烷酮衍生物，具有广谱、起效迅速，耐受性和安全性好等特点，临床上主要用于成人及4岁以上儿童癫痫患者难治愈部分性发作的辅助治疗。
左乙拉西坦口服液的辅料中存在对羟基苯甲酸丁酯和甘油，根据现有制剂工艺，对羟基苯甲酸丁酯和甘油会发生酯交换反应，生成新的杂质对羟基苯甲酸甘油酯。
对羟基苯甲酸甘油酯对左乙拉西坦成品的质量控制方面具有非常有用的价值，例如：研究该杂质及其衍生物对于成品的污染程度，以及研究如何控制该杂质的生成，降低对成品污染的风险。然而目前已发表的文章或专利尚没有关于左乙拉西坦口服液中对羟基苯甲酸甘油酯的检测。
因此，我们提出了一种可以检测左乙拉西坦口服液中对羟基苯甲酸甘油酯的方法。
发明内容
针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种检测左乙拉西坦口服液中对羟基苯甲酸甘油酯的方法。
一种检测左乙拉西坦口服液中对羟基苯甲酸甘油酯的方法，包括如下步骤：
(1)供试品溶液：取左乙拉西坦口服液0.58-0.6g，精密称定，加稀释剂溶解并定量稀释，摇匀制成供试品溶液；
(2)储备液：分别取2-吡咯烷酮-正丁酸对照品5-16mg、对羟基苯甲酸甘油酯对照品5-16mg和左乙拉西坦对照品5-16mg，精密称定，分别加稀释剂溶解并定量稀释，摇匀制成2-吡咯烷酮-正丁酸对照品、对羟基苯甲酸甘油酯对照品和左乙拉西坦对照品对应的储备液；
(3)混合对照品溶液：取2-吡咯烷酮-正丁酸对照品储备液、对羟基苯甲酸甘油酯对照品储备液与左乙拉西坦对照品储备液各2-5ml，置同一100ml量瓶中，用稀释剂溶解并定量稀释，得到混合对照品溶液；
(4)定位溶液：取左乙拉西坦对照品储备液2.5-3ml、2-吡咯烷酮-正丁酸对照品储备液2.5-3ml和对羟基苯甲酸甘油酯对照品储备液2.5-3ml，用稀释剂定量稀释后再分别精密量取1-2ml，用稀释剂再次稀释至刻度，搅匀制成各定位溶液；
(5)空白：
空白溶剂：同流动相A；
空白辅料储备液：按照处方量配制不含左乙拉西坦原料药的空白溶液；
空白辅料溶液：取空白辅料储备液0.53-0.55g，用稀释剂定量稀释，得到空白辅料溶液；
(6)取各定位溶液、混合对照品溶液、供试品溶液、空白溶剂和空白辅料溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；
其中，步骤(6)中，所述色谱仪的色谱条件包括：
十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱为固定相；
0.015mol/L磷酸氢二钾和乙腈的混合溶液为流动相A，乙腈-水为流动相B；
对对羟基苯甲酸甘油酯进行测定；
液相色谱的检测条件包括：
流动相：流动相A：0.015mol/L磷酸氢二钾:乙腈＝(90～93):(10～7)，流动相B：乙腈-水(9：1)；
按下表进行洗脱：
| 时间 | 流动相A(％) | 流动相B(％) |
| 0 | 100 | 0 |
| 25 | 100 | 0 |
| 32 | 50 | 50 |
| 37 | 50 | 50 |
| 42 | 100 | 0 |
| 57 | 100 | 0 |
流动相流速为0.8～1.2ml/min；
柱温为25～35℃；
检测器采用紫外检测器，检测波长为203～207nm。
进一步地，所述十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱为YMC-PackODS-A。
进一步地，所述0.015mol/L磷酸氢二钾:乙腈＝92:8。
进一步地，所述0.015mol/L磷酸氢二钾用1mol/L磷酸调pH为6.0。
进一步地，所述色谱柱规格：250mm×4.6mm，5μm。
进一步地，所述流动相流速为1.0ml/min。
进一步地，所述柱温为30℃。
进一步地，所述检测波长为205nm。
进一步地，所述稀释剂为所述流动相A。
进一步地，色谱仪为Agilent1260高效液相色谱仪。
本发明与现有技术相比，至少具有如下有益效果：
1、本发明能够检测左乙拉西坦口服液中的对羟基苯甲酸甘油酯含量，并且在检测对羟基苯甲酸甘油酯含量的同时，检测左乙拉西坦与其有关物质的含量，具有很好的实用性。
2、本发明能排除左乙拉西坦口服液制剂中防腐剂对检测对羟基苯甲酸甘油酯的影响，提高检测结果的准确性。
3、本发明可直接将左乙拉西坦口服液稀释后检测，无需对左乙拉西坦口服液样品进行前处理，操作简单。
4、本发明对对羟基苯甲酸甘油酯的检测范围0.0247μg/ml～0.7416μg/ml，检测限达到1.2360％，定量限达到4.9438％，具有很高的灵敏性和准确性，能很好地控制药品质量。
附图说明
并入本文中并且构成说明书的部分的附图示出了本公开的实施例，并且与说明书一起进一步用来对本公开的原理进行解释，并且使相关领域技术人员能够实施和使用本公开。
图1是本发明色谱条件下系统适用性的检测图谱。
图2是以YMC-PackODS-A(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱，0.015mmol/L磷酸盐缓冲液(1mol/L磷酸调pH值为5.8)为流动相，得到的系统适用性的检测图谱。
图3是以YMC-PackODS-A(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱，0.015mmol/L磷酸盐缓冲液(1mol/L磷酸调pH值为6.2)为流动相，得到的系统适用性的检测图谱。
图4是以YMC-PackODS-A(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱，0.015mmol/L磷酸盐缓冲液-乙腈＝93:7为流动相，得到的系统适用性的检测图谱。
图5是以YMC-PackODS-A(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱，0.015mmol/L磷酸盐缓冲液-乙腈＝90:10为流动相，得到的系统适用性的检测图谱。
图6是以YMC-PackODS-A(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱，检测波长为203nm，得到的系统适用性的检测图谱。
图7是以YMC-PackODS-A(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱，检测波长为207nm，得到的系统适用性的检测图谱。
图8是以YMC-PackODS-A(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱，柱温为25℃，得到的系统适用性的检测图谱。
图9是以YMC-PackODS-A(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱，柱温为35℃，得到的系统适用性的检测图谱。
图10是本发明色谱条件下空白溶剂的检测图谱。
图11是本发明色谱条件下空白辅料的检测图谱。
图12是本发明色谱条件下对羟基苯甲酸甘油酯定位的检测图谱。
图13是本发明色谱条件下左乙拉西坦定位的检测图谱。
图14是本发明色谱条件下2-吡咯烷酮-正丁酸定位的检测图谱。
图15是对羟基苯甲酸甘油酯线性回归方程图。
图16是本发明色谱条件下供试品的检测图谱。
图17是本发明系统适用性结果。
图18是本发明对羟基苯甲酸甘油酯线性考察结果。
图19是本发明定量限检测结果(对羟基苯甲酸甘油酯)。
图20是本发明检测限检测结果。
图21是本发明进样精密度测定结果。
图22是本发明精密度及中间精密度测定结果(对羟基苯甲酸甘油酯)。
图23是本发明准确度实验结果(对羟基苯甲酸甘油酯)。
图24是本发明耐用性测定结果。
图25是本发明方法学考察结果总结。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明提供的一种检测左乙拉西坦口服液中对羟基苯甲酸甘油酯的方法进行详细描述。同时在这里做以说明的是，为了使实施例更加详尽，下面的实施例为最佳、优选实施例，对于一些公知技术本领域技术人员也可采用其他替代方式而进行实施；而且附图部分仅是为了更具体的描述实施例，而并不旨在对本发明进行具体的限定。
实施例1不同缓冲液pH值色谱方法的检测效果试验
色谱条件：
色谱柱：YMC-PackODS-A(250mm×4.6mm，5μm)；
流动相：
(1)流动相A：0.015mol/L磷酸氢二钾(取无水磷酸氢二钾2g，加水1000ml使溶解，用1mol/L磷酸溶液调节pH值至6.0)∶乙腈＝92∶8；
(2)流动相A：0.015mol/L磷酸氢二钾(取无水磷酸氢二钾2g，加水1000ml使溶解，用1mol/L磷酸溶液调节pH值至5.8)∶乙腈＝92∶8；
(3)流动相A：0.015mol/L磷酸氢二钾(取无水磷酸氢二钾2g，加水1000ml使溶解，用1mol/L磷酸溶液调节pH值至6.2)∶乙腈＝92∶8；
流动相B：乙腈-水(9：1)；按下表进行洗脱：
色谱仪器：Agilent1260高效液相色谱仪；
检测器及波长：UV205；
流速：1.0ml/min；
柱温：30℃；
进样量：20μl；
稀释液：流动相A。
系统适用性溶液：取2-吡咯烷酮-正丁酸对照品、左乙拉西坦对照品与对羟基苯甲酸甘油酯对照品适量，精密称定，采用(1)、(2)、(3)中不同的流动相A分别溶解并定量稀释制成每1ml中分别约含2-吡咯烷酮-正丁酸1.0μg、左乙拉西坦0.5μg与对羟基苯甲酸甘油酯0.5μg的溶液，得到色谱方法(1)、(2)、(3)对应的系统适用性溶液。
将色谱方法(1)、(2)、(3)对应的系统适用性溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，色谱图如图1、2、3所示。
结论：在色谱方法(1)、(2)、(3)下，2-吡咯烷酮-正丁酸、左乙拉西坦与对羟基苯甲酸甘油酯的峰面积相对标准偏差均小于10％。
实施例2不同流动相比例的检测效果试验
色谱条件：
色谱柱：YMC-PackODS-A(250mm×4.6mm，5μm)；
流动相：
(4)流动相A：0.015mol/L磷酸氢二钾(取无水磷酸氢二钾2g，加水1000ml使溶解，用1mol/L磷酸溶液调节pH值至6.0)∶乙腈＝93∶7；
(5)流动相A：0.015mol/L磷酸氢二钾(取无水磷酸氢二钾2g，加水1000ml使溶解，用1mol/L磷酸溶液调节pH值至6.0)∶乙腈＝90∶10；
流动相B：乙腈-水(9：1)；按下表进行洗脱：
色谱仪器：Agilent1260高效液相色谱仪；
检测器及波长：UV-205；
流速：1.0ml/min；
柱温：30℃；
进样量：20μl；
稀释液：流动相A。
系统适用性溶液：取2-吡咯烷酮-正丁酸对照品、左乙拉西坦对照品与对羟基苯甲酸甘油酯对照品适量，精密称定，采用(4)、(5)中不同的流动相A分别溶解并定量稀释制成每1ml中分别约含2-吡咯烷酮-正丁酸1.0μg、左乙拉西坦0.5μg与对羟基苯甲酸甘油酯0.5μg的溶液，得到色谱方法(5)、(5)对应的系统适用性溶液。
将色谱方法(4)、(5)对应的系统适用性溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，色谱图如图4、5所示。
结论：根据色谱图1、4、5所示，在不同流动相比例(4)、(5)条件下，2-吡咯烷酮-正丁酸、左乙拉西坦与对羟基苯甲酸甘油酯的峰面积相对标准偏差均小于10％。
实施例3不同检测波长的检测效果试验
色谱条件：
色谱柱：YMC-PackODS-A(250mm×4.6mm，5μm)；
流动相：流动相A：0.015mol/L磷酸氢二钾(取无水磷酸氢二钾2g，加水1000ml使溶解，用1mol/L磷酸溶液调节pH值至6.0)∶乙腈＝92∶8；流动相B：乙腈-水(9：1)；按下表进行洗脱：
色谱仪器：Agilent1260高效液相色谱仪；
(6)检测器及波长：UV-203；
(7)检测器及波长：UV-207；
流速：1.0ml/min；
柱温：30℃；
进样量：20μl；
稀释液：流动相A。
系统适用性溶液：取2-吡咯烷酮-正丁酸对照品、左乙拉西坦对照品与对羟基苯甲酸甘油酯对照品适量，精密称定，加流动相A溶解并定量稀释制成每1ml中分别约含2-吡咯烷酮-正丁酸1.0μg、左乙拉西坦0.5μg与对羟基苯甲酸甘油酯0.5μg的溶液。
将系统适用性溶液注入液相色谱仪，采用(6)、(7)不同的检测波长检测，记录色谱图，色谱图如图6、7所示。
结论：根据色谱图1、6、7所示，在不同检测波长(6)、(7)条件下，2-吡咯烷酮-正丁酸、左乙拉西坦与对羟基苯甲酸甘油酯的峰面积相对标准偏差均小于10％。
实施例4不同柱温的检测效果试验
色谱条件：
色谱柱：YMC-PackODS-A(250mm×4.6mm，5μm)；
流动相：流动相A：0.015mol/L磷酸氢二钾(取无水磷酸氢二钾2g，加水1000ml使溶解，用1mol/L磷酸溶液调节pH值至6.0)∶乙腈＝92∶8；流动相B：乙腈-水(9：1)；按下表进行洗脱：
色谱仪器：Agilent1260高效液相色谱仪；
检测器及波长：UV-205；
流速：1.0ml/min；
(8)柱温：25℃；
(9)柱温：35℃；
进样量：20μl；
稀释液：流动相A。
系统适用性溶液：取2-吡咯烷酮-正丁酸对照品、左乙拉西坦对照品与对羟基苯甲酸甘油酯对照品适量，精密称定，加流动相A溶解并定量稀释制成每1ml中分别约含2-吡咯烷酮-正丁酸1.0μg、左乙拉西坦0.5μg与对羟基苯甲酸甘油酯0.5μg的溶液。
将系统适用性溶液注入液相色谱仪，采用(8)、(9)不同的柱温检测，记录色谱图，色谱图如图8、9所示。
结论：根据色谱图1、8、9所示，在不同柱温(8)、(9)条件下，2-吡咯烷酮-正丁酸、左乙拉西坦与对羟基苯甲酸甘油酯的峰面积相对标准偏差均小于10％。
实施例5方法学考察
本发明初步建立了对羟基苯甲酸甘油酯分析方法的色谱条件，检测结果表明，可以有效检测对羟基苯甲酸甘油酯的含量，下面进一步进行检测方法学考察。
色谱条件：
色谱仪器：Agilent1260高效液相色谱仪；
色谱柱：YMC-PackODS-A(250mm×4.6mm，5μm)；
流动相：流动相A：0.015mol/L磷酸氢二钾(取无水磷酸氢二钾2g，加水1000ml使溶解，用1mol/L磷酸溶液调节pH值至6.0)∶乙腈＝92∶8；流动相B：乙腈-水(9：1)；按下表进行洗脱：
柱温：30℃；
检测器及波长：UV205；
流速：1.0ml/min；
进样量：20μl。
a、系统适用性和专属性
系统适用性溶液：取2-吡咯烷酮-正丁酸对照品、左乙拉西坦对照品与对羟基苯甲酸甘油酯对照品适量，精密称定，加流动相A溶解并定量稀释制成每1ml中分别约含2-吡咯烷酮-正丁酸1.0μg、左乙拉西坦0.5μg与对羟基苯甲酸甘油酯0.5μg的溶液。
空白溶剂：同流动相A
空白辅料储备液：按照处方量配制不含左乙拉西坦原料药的空白溶液。
空白辅料溶液：取空白辅料0.53g，精密称定，置100ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过。
左乙拉西坦定位溶液：取左乙拉西坦对照品适量，加稀释剂溶解并定量稀释制成每1ml中含左乙拉西坦0.5μg的溶液。
2-吡咯烷酮-正丁酸定位溶液：取2-吡咯烷酮-正丁酸对照品适量，加稀释剂溶解并定量稀释制成每1ml中含2-吡咯烷酮-正丁酸1μg的溶液。
对羟基苯甲酸甘油酯定位溶液：取对羟基苯甲酸甘油酯对照品适量，加稀释剂溶解并定量稀释制成每1ml中含对羟基苯甲酸甘油酯0.5μg的溶液。
取上述溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。色谱图如图10、图11、图12、图13、图14所示，系统适用性结果见图17。
结果显示，系统适用性溶液中，2-吡咯烷酮-正丁酸、左乙拉西坦与对羟基苯甲酸甘油酯的峰面积相对标准偏差均小于10％；空白溶剂和空白辅料对测定无干扰。
b、线性及范围
在本发明色谱条件下，以对羟基苯甲酸甘油酯的限度浓度(0.5μg/ml)作为线性中间浓度，各浓度点的设置分别为10％、50％、80％、100％、120％和150％。配制稀释成浓度分别为0.05μg/ml、0.25μg/ml、0.40μg/ml、0.50μg/ml、0.60μg/ml、0.75μg/ml的对羟基苯甲酸甘油酯线性溶液，精密量取各线性溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，对对羟基苯甲酸甘油酯的浓度和峰面积作图，如图15所示，结果如图18所示，表明对羟基苯甲酸甘油酯在0.0247μg/ml～0.7416μg/ml浓度范围内，与峰面积响应均呈现良好的线性关系，线性方程为y＝70024.7246x+63.6584，相关系数r＝1.0000。限度浓度的计算：拟定主成分浓度为0.5mg/ml，对羟基苯甲酸甘油酯的限度为0.10％。
c、检测限和定量限
取对羟基苯甲酸甘油酯对照品8mg，精密称定，置20ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀得到对羟基苯甲酸甘油酯对照品储备液，取对羟基苯甲酸甘油酯对照品储备液，逐级定量稀释配制成定量限浓度(信噪比S/N约为10)溶液和检测限浓度(信噪比S/N约为3)溶液，定量限溶液平行进样6针。结果参考图19、图20，结果对羟基苯甲酸甘油酯的定量限浓度为0.0247μg/ml(相当于供试品溶液浓度的0.0049％)，检测限浓度为0.0062μg/ml(相当于供试品溶液浓度的0.0012％)，均远远小于对羟基苯甲酸甘油酯的限度浓度(0.5μg/ml)，表明该方法的检测灵敏度较高。
d、精密度
1.进样精密度试验
供试品溶液：取左乙拉西坦口服溶液约0.58g，精密称定，置100ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀制成供试品溶液。
取供试品溶液，连续进样6针，计算峰面积的RSD，考察系统的进样精密度，结果参考图21，结果显示，进样6针，2-吡咯烷酮-正丁酸峰面积的RSD为0.2％，对羟基苯甲酸甘油酯峰面积的RSD为1.0％，表明该系统的进样精密度良好。
2.精密度及中间精密度试验
2-吡咯烷酮-正丁酸对照品储备液：取2-吡咯烷酮-正丁酸对照品约16mg，精密称定，置20ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀制得2-吡咯烷酮-正丁酸对照品储备液。
对羟基苯甲酸甘油酯对照品储备液：取对羟基苯甲酸甘油酯对照品约8mg，精密称定，置20ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀制得对羟基苯甲酸甘油酯对照品储备液。
左乙拉西坦对照品储备液：取左乙拉西坦对照品约8mg，精密称定，置20ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀制得对羟基苯甲酸甘油酯对照品储备液。
混合对照品储备液：精密量取2-吡咯烷酮-正丁酸对照品储备液与对羟基苯甲酸甘油酯对照品储备液各5ml，置同一100ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀制得混合对照品储备液。
供试品溶液(加标)：取左乙拉西坦口服溶液0.58g，精密称定，置100ml量瓶中，精密加入混合对照品储备液2.5ml，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过。(平行配制6份)。
由不同分析人员使用不同仪器在不同的日期，对相同批次样品6份供试品溶液(加标)进行中间精密度检测，对6份供试品溶液(加标)进行精密度检测，结果参考图22。结果显示，6份供试品溶液对羟基苯甲酸甘油酯回收率均在99.8％～100.6％之间，平均值为100.1％，RSD为0.3％；与精密度项下测定结果比较，12份回收率的RSD为0.9％，符合精密度要求，表明本方法的中间精密度良好。
e、准确度
采用标准加入法(往供试品溶液中加入对羟基苯甲酸甘油酯)对左乙拉西坦口服溶液测定回收率，选择对羟基苯甲酸甘油酯20％、100％(限度浓度0.5μg/ml)和120％三个浓度水平进行试验，每种浓度分别制备3份供试品溶液，用9份样品的测定结果进行评价。回收率＝(测得量-已有量)/加入量，结果参考图23。
对羟基苯甲酸甘油酯在不同浓度水平的加样回收率在98.5％～105.7％之间，平均值为100.5％，相对标准偏差为2.4％，符合要求。表明此方法用于测定左乙拉西坦口服溶液中的对羟基苯甲酸甘油酯，准确度良好。
f、耐用性
通过考察色谱参数的微小变化，对该方法进行耐用性试验。
分别以不同的流动相比例、不同流动相pH值、不同柱温、不同批号色谱柱、不同波长与不同仪器等色谱条件，测定两份加标供试品溶液的回收率，结果参考图24。
结果表明，不同仪器和不同批号色谱柱、不同柱温、不同流速检测波长、不同流动相pH及不同流动相比例的微小变化，2-吡咯烷酮-正丁酸和对羟基苯甲酸甘油酯的测定均不受影响，本法耐用性良好，均能满足检测要求。
综上所述，本发明检测方法的系统适用性和专属性、线性和范围、检测限和定量限、精密度、准确度和耐用性均符合要求，证明该本发明检测方法适合用于对羟基苯甲酸甘油酯的检测。方法学考察结果总结见图25。
实施例5左乙拉西坦口服溶液样品检测
采用本发明的方法对3批左乙拉西坦口服溶液工艺验证样品(批号：17H230202、17H230203、17H230204)中对羟基苯甲酸甘油酯进行检测，并按外标法计算，结果显示工艺验证3批样品中对羟基苯甲酸甘油酯含量均小于0.10％，符合规定，测定结果详见表1。
表1工艺验证样品测定结果
| 批号 | 对羟基苯甲酸甘油酯(％) |
| 17H230202 | 0.004 |
| 17H230203 | 0.004 |
| 17H230204 | 0.003 |
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。
Claims (10)
1.一种检测左乙拉西坦口服液中对羟基苯甲酸甘油酯的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)供试品溶液：取左乙拉西坦口服液0.58-0.6g，精密称定，加稀释剂溶解并定量稀释，摇匀制成供试品溶液；
(2)储备液：分别取2-吡咯烷酮-正丁酸对照品5-16mg、对羟基苯甲酸甘油酯对照品5-16mg和左乙拉西坦对照品5-16mg，精密称定，分别加稀释剂溶解并定量稀释，摇匀制成2-吡咯烷酮-正丁酸对照品、对羟基苯甲酸甘油酯对照品和左乙拉西坦对照品对应的储备液；
(3)混合对照品溶液：取2-吡咯烷酮-正丁酸对照品储备液、对羟基苯甲酸甘油酯对照品储备液与左乙拉西坦对照品储备液各2-5ml，置同一100ml量瓶中，用稀释剂溶解并定量稀释，得到混合对照品溶液；
(4)定位溶液：取左乙拉西坦对照品储备液2.5-3ml、2-吡咯烷酮-正丁酸对照品储备液2.5-3ml和对羟基苯甲酸甘油酯对照品储备液2.5-3ml，用稀释剂定量稀释后再分别精密量取1-2ml，用稀释剂再次稀释至刻度，搅匀制成各定位溶液；
(5)空白：
空白溶剂：同流动相A；
空白辅料储备液：按照处方量配制不含左乙拉西坦原料药的空白溶液；
空白辅料溶液：取空白辅料储备液0.53-0.55g，用稀释剂定量稀释，得到空白辅料溶液；
(6)取各定位溶液、混合对照品溶液、供试品溶液、空白溶剂和空白辅料溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；
其中，步骤(6)中，所述色谱仪的色谱条件包括：
十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱为固定相；
0.015mol/L磷酸氢二钾和乙腈的混合溶液为流动相A，乙腈-水为流动相B；
对对羟基苯甲酸甘油酯进行测定；
液相色谱的检测条件包括：
流动相：流动相A：0.015mol/L磷酸氢二钾:乙腈＝(90～93):(10～7)，流动相B：乙腈-水(9：1)；
按下表进行洗脱：
流动相流速为0.8～1.2ml/min；
柱温为25～35℃；
检测器采用紫外检测器，检测波长为203～207nm。
2.根据权利要求1所述的一种检测左乙拉西坦口服液中对羟基苯甲酸甘油酯的方法，其特征在于，所述十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱为YMC-PackODS-A。
3.根据权利要求2所述的一种检测左乙拉西坦口服液中对羟基苯甲酸甘油酯的方法，其特征在于，所述0.015mol/L磷酸氢二钾:乙腈＝92:8。
4.根据权利要求3所述的一种检测左乙拉西坦口服液中对羟基苯甲酸甘油酯的方法，其特征在于，所述0.015mol/L磷酸氢二钾用1mol/L磷酸调pH为6.0。
5.根据权利要求4所述的一种检测左乙拉西坦口服液中对羟基苯甲酸甘油酯的方法，其特征在于，所述色谱柱规格：250mm×4.6mm，5μm。
6.根据权利要求5所述的一种检测左乙拉西坦口服液中对羟基苯甲酸甘油酯的方法，其特征在于，所述流动相流速为1.0ml/min。
7.根据权利要求6所述的一种检测左乙拉西坦口服液中对羟基苯甲酸甘油酯的方法，所述柱温为30℃。
8.根据权利要求7所述的一种检测左乙拉西坦口服液中对羟基苯甲酸甘油酯的方法，其特征在于，所述检测波长为205nm。
9.根据权利要求1所述的一种检测左乙拉西坦口服液中对羟基苯甲酸甘油酯的方法，其特征在于，所述稀释剂为所述流动相A。
10.根据权利要求1所述的一种检测左乙拉西坦口服液中对羟基苯甲酸甘油酯的方法，其特征在于，色谱仪为Agilent1260高效液相色谱仪。
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