CN115097026B - 从药物中检测吡唑并嘧啶苯磺酸酯类化合物的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及药物分析技术领域，提出了从药物中检测吡唑并嘧啶苯磺酸酯类化合物的方法，将待测药物样品加入乙腈和水的混合溶剂溶解，得到样品溶液，采用液相色谱法进行检测，确定药物中吡唑并嘧啶苯磺酸酯类化合物的含量，所述液相色谱法检测时，流动相采用如下梯度洗脱程序： 时间(min) 流动相A(％) 流动相B(％) 0 47‑51 53‑49 25 47‑51 53‑49 26 95‑100 5‑0 36 95‑100 5‑0 36.1 47‑51 53‑49 45 47‑51 53‑49
通过上述技术方案，解决了现有技术的检测方法中采用的洗脱体系无法在吡唑并嘧啶苯磺酸酯类杂质测定中得到合格的专属性，无法实现吡唑并嘧啶苯磺酸酯类杂质的基因毒性水平控制的问题。

Description

从药物中检测吡唑并嘧啶苯磺酸酯类化合物的方法
技术领域
本发明涉及药物分析技术领域，具体的，涉及从药物中检测吡唑并嘧啶苯磺酸酯类化合物的方法。
背景技术
在药物合成中，如果使用了氯磺酸类物质，中间体结构中将含有氯磺酰官能团，后续步骤使用到了醇类，可能残留磺酸酯类杂质，且起始原料的合成路线中，部分中间体含有警示结构。需结合起始物料合成路线全面评估原料中的潜在致突变性杂质，参照ICH M7的相关要求，对潜在致突变性杂质进行研究，需建立分析方法对该类杂质进行合理控制。
西地那非是用于治疗性功能障碍的磷酸二酯酶-5(PDE-5)抑制剂类药物，疗效确切良好，在世界范围内广泛应用。西地那非原料药供应商Pharmaceutical WorksPolpharma S.A.公司采用的合成路线中，使用了氯磺酸，中间体B含有氯磺酰官能团，步骤4(中间体C反应生产中间体D)使用到了醇类，此过程中可能生成磺酸酯类杂质即中间体D杂质7(4-乙氧基-3-(1- 甲基-7-氧代-3-丙基-4,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)苯磺酸乙酯)和中间体D杂质8(4- 乙氧基-3-(1-甲基-7-氧代-3-丙基-4,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)苯磺酸异丙酯)，此类杂质具有警示结构，可能被生成并残留至成品中，步骤3-步骤4反应路线如下：
现有技术中，存在使用HPLC-UV的检测磺酸类杂质的方法，但是已报道的方法中采用的洗脱体系，无法在吡唑并嘧啶苯磺酸酯类杂质测定中得到合格的专属性，无法实现吡唑并嘧啶苯磺酸酯类杂质的基因毒水平控制方法。
发明内容
本发明提出从药物中检测吡唑并嘧啶苯磺酸酯类化合物的方法，解决了现有技术的检测方法中采用的洗脱体系无法在吡唑并嘧啶苯磺酸酯类杂质测定中得到合格的专属性，无法实现吡唑并嘧啶苯磺酸酯类杂质的基因毒性水平控制的问题。
本发明的技术方案如下：
从药物中检测吡唑并嘧啶苯磺酸酯类化合物的方法，其特征在于，将待测药物样品加入乙腈和水的混合溶剂溶解，得到样品溶液，采用液相色谱法进行检测，确定药物中吡唑并嘧啶苯磺酸酯类化合物的含量，所述液相色谱法检测时，流动相采用如下梯度洗脱程序：
时间(min) 流动相A(％) 流动相B(％)
0 47-51 53-49
25 47-51 53-49
26 95-100 5-0
36 95-100 5-0
36.1 47-51 53-49
45 47-51 53-49
作为进一步的技术方案，所述采用液相色谱法进行检测包括以下步骤：
S1、对照品溶液配制：取吡唑并嘧啶苯磺酸酯类化合物，加入乙腈-水的混合溶剂溶解后定容，得到吡唑并嘧啶苯磺酸酯类化合物对照品溶液；
S2、样品检测：采用液相色谱法分别对样品溶液和对照品溶液进行检测，确定药物中吡唑并嘧啶苯磺酸酯类化合物的残留量。
作为进一步的技术方案，所述药物为枸橼酸西地那非。
作为进一步的技术方案，所述吡唑并嘧啶苯磺酸酯类化合物为枸橼酸西地那非中间体D 杂质7和中间体D杂质8。
作为进一步的技术方案，所述混合溶剂中乙腈和水的体积比为(0.25～0.75)：(0.75～0.25)。
作为进一步的技术方案，所述液相色谱法检测时，流动相包括流动相A和流动相B，所述流动相A为乙腈，所述流动相B为甲酸溶液，所述甲酸溶液的质量分数为0.05％～0.2％。
作为进一步的技术方案，所述液相色谱法检测时，流动相采用如下梯度洗脱程序：
时间(min) 流动相A(％) 流动相B(％)
0 49 51
25 49 51
26 100 0
36 100 0
36.1 49 51
45 49 51
作为进一步的技术方案，所述液相色谱法检测时，流速为0.5～0.7mL/min，进样量为 15～25μL。
作为进一步的技术方案，所述液相色谱法检测时，色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相。
作为进一步的技术方案，所述色谱柱的柱温为20-30℃。
本发明的工作原理及有益效果为：
1、本发明中，通过对药物中吡唑并嘧啶苯磺酸酯类化合物的检测方法和检测条件进行优化，使得该方法能很好实现吡唑并嘧啶苯磺酸酯类化合物的分离，从而实现对药物中该类杂质含量的准确控制，同时该方法经过系统适用性试验、专属性试验、检测限及定量限试验、线性和范围、准确度试验等试验验证，对药物中吡唑并嘧啶苯磺酸酯类化合物的检测专属性强、分离度好，回收率高，线性关系、重现性好，检测限低，既适用于实验室的研发，也适用于企业大规模生产的产品质量控制，实用性强。
2、当待测药物样品为枸橼酸西地那非时，待测杂质为D-7、D-8时，采用本发明特定流动相、洗脱梯度以及流动相流速等条件，可以很好的实现样品中目标杂质D-7、D-8的分离，解决高浓度枸橼酸西地那非样品溶液中低含量未知杂质对目标杂质分离的干扰问题，从而对枸橼酸西地那非中D-7、D-8的检测专属性强、分离度好，回收率高。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。
图1为本发明实验例2中检测枸橼酸西地那非100％限度水平加标样品中D-7和D-8的液相色谱图；
图2为本发明实验例3中检测枸橼酸西地那非100％限度水平加标样品中D-7和D-8的液相色谱图；
图3为本发明实验例4中检测枸橼酸西地那非100％限度水平加标样品中D-7和D-8的液相色谱图；
图4为本发明对比例1中检测枸橼酸西地那非样品100％限度水平加标样品中D-7和D-8 的液相色谱图及D-7和D-8定位的液相色谱图；
图5为本发明对比例3中检测枸橼酸西地那非样品100％限度水平加标样品中D-7和D-8 的液相色谱图及D-7和D-8定位的液相色谱图；
图6为本发明对比例4中检测枸橼酸西地那非样品100％限度水平加标样品中D-7和D-8 的液相色谱图及D-7和D-8定位的液相色谱图；
图7为本发明对比例5中检测枸橼酸西地那非样品100％限度水平加标样品中D-7和D-8 的液相色谱图及D-7和D-8定位的液相色谱图；
图8为本发明对比例6中检测枸橼酸西地那非100％限度水平加标样品中D-7和D-8的液相色谱图及D-7和D-8定位的液相色谱图；
图9为本发明对比例7中检测枸橼酸西地那非100％限度水平加标样品中D-7和D-8的液相色谱图及D-7和D-8定位的液相色谱图；
图10为本发明对比例8中检测枸橼酸西地那非100％限度水平加标样品中D-7和D-8的液相色谱图及D-7和D-8定位的液相色谱图；
图11为本发明对比例9中检测枸橼酸西地那非100％限度水平加标样品中D-7和D-8的液相色谱图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都涉及本发明保护的范围。
实施例1
从枸橼酸西地那非中检测中间体D杂质7(以下简称D-7)和中间体D杂质8(以下简称D-8)，具体如下：
1、溶液配制
(1)空白溶液，即稀释剂，为乙腈-水(体积比1:1)的溶液；
(2)样品溶液：取枸橼酸西地那非500mg，精密称定，置于25mL容量瓶中，加乙腈-水(体积比1:1)溶解并稀释至刻度，摇匀，作为样品溶液，样品溶液中枸橼酸西地那非的浓度为20mg/mL；
(3)对照品溶液：取枸橼酸西地那非中间体D杂质7(D-7)对照品适量，枸橼酸西地那非中间体D杂质8(D-8)对照品适量，加少量乙腈溶解，加乙腈-水(体积比1:1)稀释，得到对照品溶液，该溶液中D-7的质量浓度为0.3μg/mL，D-8的质量浓度为0.3μg/mL；
(4)灵敏度溶液：精密量取对照品溶液适量，加乙腈-水(50:50)稀释得到灵敏度溶液，该溶液中D-7的质量浓度为0.075μg/mL，D-8的质量浓度为0.075μg/mL；
2、液相色谱检测
采用高效液相色谱法对样品溶液、对照品溶液进行测定，色谱条件如下：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Waters Symmetry Shield RP C18柱，150m m×4.6mm，3.5μm)；
流动相：A：乙腈
B：0.1％甲酸溶液；
流速：0.6mL/min；
波长：290nm；
柱温：25℃；
进样体积：25μL；
梯度洗脱
时间(min) 流动相A(％) 流动相B(％)
0 49 51
25 49 51
26 100 0
36 100 0
36.1 49 51
45 49 51
按照上述色谱条件，精密量取空白溶液(稀释剂)、灵敏度溶液、对照品溶液、供试品溶液各25μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算D-7、D-8的含量，计算公式如下：
式中：X:为枸橼酸西地那非中测定组分的含量，％。
rU为供试品溶液中杂质的峰面积；
rS为6针对照品溶液中杂质的峰面积的平均值；
WS为杂质对照品的称样量，mg；
WU为供试品称样量，mg；
DS为杂质对照品的稀释体积，mL；
DU为供试品的稀释体积，mL；
P为杂质对照品纯度。
3方法验证
3.1、系统适用性试验
(1)试验方法
对照品溶液连续进样6针，记录色谱图。
(2)试验要求
6针混合对照品溶液各组分的峰面积RSD值应不大于10.0％；
6针混合对照品溶液各组分峰的保留时间的RSD值应不大于2.0％；
灵敏度溶液各组分峰的信噪比应大于10。
(3)试验结果
对照品溶液重复进样6次，D-7峰面积的RSD为1.5％；D-8峰面积的RSD为2.9％，满足要求；
D-7峰的保留时间的RSD为0.1％；D-8峰的保留时间的RSD为0.2％，满足要求；
灵敏度溶液D-7峰的信噪比17.5；D-8峰的信噪比11.7，满足要求。
3.2、专属性试验
(1)试验方法
空白溶液：乙腈-水(体积比1:1)；
对照品溶液：取枸橼酸西地那非中间体D杂质7(D-7)对照品适量，枸橼酸西地那非中间体D杂质8(D-8)对照品适量，加少量乙腈溶解，加乙腈-水(体积比1:1)稀释，得到对照品溶液，该溶液中D-7的质量浓度为0.3μg/mL，D-8的质量浓度为0.3μg/mL；
枸橼酸西地那非供试品加标溶液(100％限度浓度)：取枸橼酸西地那非约500mg，精密称定，置25mL量瓶中，用适量稀释剂溶解，精密加入枸橼酸西地那非中间体D杂质7定位溶液1.0mL，枸橼酸西地那非中间体D杂质8定位溶液1.0mL，用稀释剂稀释至刻度，超声溶解，摇匀，即得；
分别进样空白溶液、对照品溶液、枸橼酸西地那非供试品加标溶液(100％限度浓度)，记录色谱。
(2)试验要求
空白溶剂无干扰。
混合溶液中，各已知杂质及主成分对D-7和D-8的检测无干扰。
(3)试验结果
空白溶剂无干扰；满足要求；
混合溶液中，各已知杂质及主成分对D-7和D-8的检测无干扰；满足要求。
3、检测限及定量限试验
(1)试验方法
检测限溶液：取枸橼酸西地那非中间体D杂质7(D-7)对照品适量，枸橼酸西地那非中间体D杂质8(D-8)对照品适量，加少量乙腈溶解，加乙腈-水(体积比1:1)稀释，得到检测限溶液，该溶液中D-7的质量浓度为0.0375μg/mL，D-8的质量浓度为0.0375μg/mL；
定量限溶液：取枸橼酸西地那非中间体D杂质7(D-7)对照品适量，枸橼酸西地那非中间体D杂质8(D-8)对照品适量，加少量乙腈溶解，加乙腈-水(体积比1:1)稀释，得到定量限溶液，该溶液中D-7的质量浓度为0.075μg/mL，D-8的质量浓度为0.075μg/mL；
分别进样检测限溶液，定量限溶液，记录色谱图。
(2)试验要求
检测限信噪比S/N不低于3；
定量限信噪比S/N不低于10，且定量限溶液重复进样6次，各组分峰面积的RSD应不大于10.0％，保留时间的RSD应不大于2.0％。
(3)试验结果
各杂质组分的检测限及定量限结果见下表：
表1检测限和定量限检测结果
4、线性和范围
(1)试验方法
线性1(定量限)：精密量取枸橼酸西地那非中间体D杂质7定位溶液1.0mL，枸橼酸西地那非中间体D杂质8定位溶液1.0mL，置同一100mL量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，即得。
线性2(50％水平)：精密量取枸橼酸西地那非中间体D杂质7定位溶液1.0mL，枸橼酸西地那非中间体D杂质8定位溶液1.0mL，置同一50mL量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，即得。
线性3(75％水平)：精密量取枸橼酸西地那非中间体D杂质7定位溶液3.0mL，枸橼酸西地那非中间体D杂质8定位溶液3.0mL，置同一100mL量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，即得。
线性4(100％水平)：精密量取枸橼酸西地那非中间体D杂质7定位溶液1.0mL，枸橼酸西地那非中间体D杂质8定位溶液1.0mL，置同一25mL量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，即得。
线性5(125％水平)：精密量取枸橼酸西地那非中间体D杂质7定位溶液1.0mL，枸橼酸西地那非中间体D杂质8定位溶液1.0mL，置同一20mL量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，即得。
线性6(150％水平)：精密量取枸橼酸西地那非中间体D杂质7定位溶液3.0mL，枸橼酸西地那非中间体D杂质8定位溶液3.0mL，置同一50mL量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，即得。
进样线性1-6溶液，记录色谱图。
(2)试验要求
各组分从定量限开始到限度浓度的150％水平，线性R2≥0.99。
(3)试验结果
以对照品峰面积为纵坐标，以D-7、D-8对照品浓度为横坐标，建立线性回归曲线，测试结果见下表：
表2线性检测结果
检测项目 D-7 D-8
线性范围 0.0754μg/mL～0.4521μg/mL 0.0737μg/mL～0.4421μg/mL
线性回归方程 y＝0.9047x+0.0078 y＝0.7569x-0.0062
<![CDATA[线性R<sup>2</sup>]]> 0.9996 0.9997
5、准确度
(1)试验方法
供试品溶液：精密称取枸橼酸西地那非500mg，置25mL量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，超声溶解，摇匀，即得。
枸橼酸西地那非供试品加标溶液(100％限度浓度水平)：取枸橼酸西地那非500mg，精密称定，置25mL量瓶中，用适量稀释剂溶解，精密加入枸橼酸西地那非中间体D杂质7定位溶液1.0mL，枸橼酸西地那非中间体D杂质8定位溶液1.0mL，用稀释剂稀释至刻度，超声溶解，摇匀，即得；平行配制6份。
进样空白溶液、对照品溶液、供试品溶液及枸橼酸西地那非供试品加标溶液(100％限度浓度水平)，记录色谱图。
(2)试验要求
同一批样品平行配制的6份供试品加标溶液(100％限度浓度水平)，各组分的回收率平均值应为80％～120％；RSD不得超过10.0％；
(3)试验结果
准确度试验结果见下表：
表3准确度试验结果
检测项目 D-7 D-8
回收率平均值 109.7％ 93.0％
RSD 1.2％ 3.6％
实验例1
取3批枸橼酸西地那非样品(生产批号分别为：NSC200304A-1、NSC200305A-1、NSC200306A-1，记为样品1、样品2、样品3)，按上述方法检测样品中D-7、D-8的含量，结果如下：
表4枸橼酸西地那非样品中D-7、D-8的含量检测结果
检测样品 D-7 D-8
样品1 未检出 未检出
样品2 未检出 未检出
样品3 未检出 未检出
实验例2
采用实施例1的的方法检测枸橼酸西地那非100％限度水平加标样品中D-7、D-8的含量，得到的谱图如图1所示，从图中可以看出，杂质D-8和D-7可以很好的与枸橼酸西地那非主峰以及与枸橼酸西地那非中未知杂质分离。
实验例3
与实验例2的区别仅在于洗脱梯度为下表：
得到的谱图如图2所示，从图中可以看出，杂质D-8和D-7可以很好的与枸橼酸西地那非主峰以及与枸橼酸西地那非中未知杂质分离。
实验例4
与实验例2的区别仅在于洗脱梯度为下表：
时间(min) 流动相A(％) 流动相B(％)
0 51 49
25 51 49
26 100 0
36 100 0
36.1 51 49
45 51 49
得到的谱图如图3所示，从图中可以看出，杂质D-8和D-7可以很好的与枸橼酸西地那非主峰以及与枸橼酸西地那非中未知杂质分离。
实验例5
与实验例2的区别仅在洗脱条件为：
混合溶液中乙腈和水的体积比为0.25：0.75；甲酸溶液的质量分数为0.05％；
流速为0.5mL/min；进样量为15μL；色谱柱的柱温为20℃。
得到的谱图与图2一致，杂质D-8和D-7可以很好的与枸橼酸西地那非主峰以及与枸橼酸西地那非中未知杂质分离。
实验例6
与实验例2的区别仅在洗脱条件为：
混合溶液中乙腈和水的体积比为0.75：0.25；甲酸溶液的质量分数为0.2％；
流速为0.7mL/min；进样量为25μL；色谱柱的柱温为30℃。
得到的谱图与图2一致，杂质D-8和D-7可以很好的与枸橼酸西地那非主峰以及与枸橼酸西地那非中未知杂质分离。
对比例1
采用现有技术中的方法1对枸橼酸西地那非中D-7和D-8含量进行检测，此方法与实施例1的区别仅在于流动相A为5mmol/L乙酸铵，流动相B为乙腈，流动相流速为1.0mL/min，波长为260nm，洗脱梯度为下表：
时间(min) A％ B％
0 90 10
5 90 10
14 80 20
15 10 90
25 10 90
30 90 10
35 90 10
得到的谱图如图4所示，从图中可以看出，杂质D-8和D-7与枸橼酸西地那非主峰无法分离。
对比例2
与对比例1的区别仅在于流动相流速为0.6mL/min，结果得到的谱图与图4类似，杂质 D-8和D-7与枸橼酸西地那非主峰均无法分离。
对比例3
与对比例1的区别仅在于检测波长为290nm，结果得到的谱图如图5所示，与图4类似，杂质D-8和D-7与枸橼酸西地那非主峰均无法分离。
对比例4
采用现有技术中的方法2对枸橼酸西地那非中D-7和D-8含量进行检测，此方法与实施例1的区别仅在于流动相A为5mmol/L乙酸铵，流动相B为乙腈，流动相流速为1.0mL/min，波长为260nm，洗脱梯度为下表：
时间(min) A％ B％
0 55 45
4 55 45
5 5 95
8 5 95
8.1 55 45
12.0 55 45
得到的谱图如图6所示，从图中可以看出，杂质D-8和D-7受到枸橼酸西地那非主峰干扰，并且两个杂质无法基线分离。
对比例5
与对比例4的区别仅在于检测波长为290nm，结果得到的谱图如图7所示，与图6存在相同的问题。
对比例6
采用现有技术中的方法3对枸橼酸西地那非中D-7和D-8含量进行检测，此方法与实施例1的区别仅在于流动相A为pH为3.0的甲酸，流动相B为乙腈，流动相流速为1.0mL/min，波长为260nm，洗脱梯度为下表：
时间(min) A％ B％
0 55 45
4 55 45
5 5 95
8 5 95
8.1 55 45
12.0 55 45
得到的谱图如图8所示，从图中可以看出，杂质D-8和D-7受到枸橼酸西地那非主峰干扰，并且两个杂质无法基线分离。
对比例7
与对比例6的区别仅在于检测波长为290nm，结果得到的谱图如图9所示，与图8存在相同的问题。
对比例8
与对比例4的区别仅在于流动相流速为0.6mL/min，结果得到的谱图如图10所示，与图 8存在相同的问题。
对比例9
与实施例2的区别仅在于流动相流速为0.4mL/min，结果得到的谱图如图11所示，杂质 D-8与供试品中未知杂质无法分离。
在枸橼酸西地那非中测定吡唑并嘧啶苯磺酸酯类杂质，要求目标杂质与供试品中存在各个杂质之间的分离度大于1.5，从而实现对该类杂质含量的准确控制，但是本发明中，由于使用的枸橼酸西地那非样品溶液浓度为20mg/mL，样品溶液的浓度过高，即使是高纯度的样品，也会存在低含量未知杂质，因此，在检测过程中，低含量未知杂质可能会干扰两个目标杂质的分离，因此，需要特定的分离体系，以实现样品中目标杂质的分离。从实验例3-6和对比例1-9可以看出，采用本发明特定流动相、洗脱梯度以及流动相流速，可以解决上述问题，很好的实现样品中目标杂质的分离。
以上仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.从药物中检测吡唑并嘧啶苯磺酸酯类化合物的方法，其特征在于，将待测药物样品加入乙腈和水的混合溶剂溶解，得到样品溶液，采用液相色谱法进行检测，确定药物中吡唑并嘧啶苯磺酸酯类化合物的含量，
所述吡唑并嘧啶苯磺酸酯类化合物为枸橼酸西地那非中间体D杂质7和中间体D杂质8，所述枸橼酸西地那非中间体D杂质7为4-乙氧基-3-(1-甲基-7-氧代-3-丙基-4,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)苯磺酸乙酯，所述中间体D杂质8为4-乙氧基-3-(1-甲基-7-氧代-3-丙基-4,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)苯磺酸异丙酯；
所述液相色谱法检测时，流动相包括流动相A和流动相B，所述流动相A为乙腈，所述流动相B为甲酸溶液，流动相采用如下梯度洗脱程序：
流速为0.5~0.7mL/min，色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相。
2.根据权利要求1所述的从药物中检测吡唑并嘧啶苯磺酸酯类化合物的方法，其特征在于，所述采用液相色谱法进行检测包括以下步骤：
S1、对照品溶液配制：取吡唑并嘧啶苯磺酸酯类化合物，加入乙腈-水的混合溶剂溶解后定容，得到吡唑并嘧啶苯磺酸酯类化合物对照品溶液；
S2、样品检测：采用液相色谱法分别对样品溶液和对照品溶液进行检测，确定药物中吡唑并嘧啶苯磺酸酯类化合物的残留量。
3.根据权利要求1或2所述的从药物中检测吡唑并嘧啶苯磺酸酯类化合物的方法，其特征在于，所述药物为枸橼酸西地那非。
4.根据权利要求1所述的从药物中检测吡唑并嘧啶苯磺酸酯类化合物的方法，其特征在于，所述混合溶剂中乙腈和水的体积比为（0.25~0.75）：（0.75~0.25）。
5.根据权利要求1所述的从药物中检测吡唑并嘧啶苯磺酸酯类化合物的方法，其特征在于，所述甲酸溶液的质量分数为0.05%~0.2%。
6.根据权利要求1所述的从药物中检测吡唑并嘧啶苯磺酸酯类化合物的方法，其特征在于，所述液相色谱法检测时，流动相采用如下梯度洗脱程序：
7.根据权利要求1所述的从药物中检测吡唑并嘧啶苯磺酸酯类化合物的方法，其特征在于，所述液相色谱法检测时，进样量为15~25μL。
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