CN117247430B - 一种玉米抗氧化肽及其制备方法与应用 - Google Patents
一种玉米抗氧化肽及其制备方法与应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN117247430B CN117247430B CN202311531906.1A CN202311531906A CN117247430B CN 117247430 B CN117247430 B CN 117247430B CN 202311531906 A CN202311531906 A CN 202311531906A CN 117247430 B CN117247430 B CN 117247430B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- corn
- antioxidant
- enzymolysis
- peptide
- protease
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 title claims abstract description 85
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 title claims abstract description 85
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 title claims abstract description 83
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 title claims abstract description 83
- 101800000068 Antioxidant peptide Proteins 0.000 title claims abstract description 36
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 claims abstract description 31
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 claims abstract description 24
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 17
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 claims abstract description 5
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 claims description 25
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 claims description 25
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 19
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 15
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 15
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims description 15
- 108091005658 Basic proteases Proteins 0.000 claims description 14
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 claims description 12
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 8
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 claims description 7
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 6
- 239000002131 composite material Substances 0.000 claims description 6
- 230000032258 transport Effects 0.000 claims description 6
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 claims description 5
- 230000004656 cell transport Effects 0.000 claims description 3
- 235000019261 food antioxidant Nutrition 0.000 claims description 3
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 claims description 3
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 claims 2
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 claims 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 abstract description 45
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 42
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 abstract description 9
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 abstract description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 235000013305 food Nutrition 0.000 abstract description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 abstract 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 40
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 13
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 13
- 108010068370 Glutens Proteins 0.000 description 12
- 235000021312 gluten Nutrition 0.000 description 12
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 12
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 10
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 9
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 9
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000002292 Radical scavenging effect Effects 0.000 description 9
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 9
- MGJZITXUQXWAKY-UHFFFAOYSA-N diphenyl-(2,4,6-trinitrophenyl)iminoazanium Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+](=O)[O-])=CC([N+]([O-])=O)=C1N=[N+](C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 MGJZITXUQXWAKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000007760 free radical scavenging Effects 0.000 description 8
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 7
- HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N dpph Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+](=O)[O-])=CC([N+]([O-])=O)=C1[N]N(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- -1 DPPH radicals Chemical class 0.000 description 3
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 230000003064 anti-oxidating effect Effects 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 2
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000010413 mother solution Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 238000009777 vacuum freeze-drying Methods 0.000 description 2
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 108010064851 Plant Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229920002494 Zein Polymers 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 235000021120 animal protein Nutrition 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 235000019658 bitter taste Nutrition 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 239000000413 hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 238000001294 liquid chromatography-tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000002932 luster Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000008621 organismal health Effects 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004792 oxidative damage Effects 0.000 description 1
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 1
- 235000021118 plant-derived protein Nutrition 0.000 description 1
- USHAGKDGDHPEEY-UHFFFAOYSA-L potassium persulfate Chemical compound [K+].[K+].[O-]S(=O)(=O)OOS([O-])(=O)=O USHAGKDGDHPEEY-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000001007 puffing effect Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 235000019640 taste Nutrition 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 239000005019 zein Substances 0.000 description 1
- 229940093612 zein Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
- A23L33/18—Peptides; Protein hydrolysates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
- A61K8/645—Proteins of vegetable origin; Derivatives or degradation products thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
- A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/08—Anti-ageing preparations
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/06—Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
- Y02A40/90—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in food processing or handling, e.g. food conservation
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Birds (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明提供了一种玉米抗氧化肽及其制备方法与应用，属于活性肽技术领域。本发明提供的玉米抗氧化肽，包括氨基酸序列如SEQ ID NO.1‑5所示的玉米抗氧化肽中的至少一种。本发明首次从玉米蛋白粉中分离得到了具有较高抗氧化活性且抗氧化效果与同浓度还原型谷胱甘肽相当的氨基酸序列如SEQ ID NO.1‑5所示的新的玉米抗氧化肽，可作为天然抗氧化剂应用于食品、药品和化妆品中。
Description
技术领域
本发明属于活性肽技术领域，尤其涉及一种玉米抗氧化肽及其制备方法与应用。
背景技术
人体的衰老和许多疾病的发生与机体内物质氧化产生的自由基密切相关。正常情况下，机体内的抗氧化酶和内源性抗氧化剂组成的防御系统可以有效的清除代谢过程中产生的各种自由基，从而维持体内自由基的动态平衡。但当机体受到外界刺激时，动态平衡被打破，就会导致氧化应激，造成氧化损伤。研究表明，通过外源性补充膳食抗氧化剂可以明显降低机体自由基水平，增强机体自身抗氧化能力，起到预防疾病，保持机体健康的作用。
天然抗氧化剂与合成抗氧化剂相比，具有来源广、易吸收、安全性高等优点，近些年来广受关注。抗氧化肽是一种由多个氨基酸残基组成的多肽分子，已从多种动植物蛋白中分离得到，但分离方法较为繁琐复杂且成本较高。因此，研发高效、安全且价格低廉的天然抗氧化肽具有十分重要的意义。
玉米蛋白粉（corn gluten meal，CGM），是玉米籽粒经湿法生产玉米淀粉后的主要副产物，具有产量大、蛋白含量高等优点。但玉米蛋白粉因其氨基酸组成不平衡、成品口感粗糙、水溶性差、有独特的苦味和色泽等缺点，严重限制其在食品工业中的应用，常常被用作生产蛋白粗饲料，造成了粮食资源的严重浪费。因此，如果对玉米蛋白粉进行酶法改性，开发具有抗氧化活性的功能食品，对拓宽玉米蛋白粉的应用领域，实现高值化利用具有重要意义。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种具有较高抗氧化活性，抗氧化效果与同浓度还原型谷胱甘肽相当的玉米抗氧化肽及其制备方法与应用。
为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：
本发明提供了一种玉米抗氧化肽，所述玉米抗氧化肽包括氨基酸序列如SEQ IDNO.1（CSQAPIA）、SEQ ID NO.2（QCSQAPIA）、SEQ ID NO.3（QQPHPSPC）、SEQ ID NO.4（CCHQIR）和SEQ ID NO.5（QPQPW）所示的玉米抗氧化肽中的至少一种。
本发明还提供了一种玉米蛋白水解物，所述玉米蛋白水解物含有上述的玉米抗氧化肽。在本发明所述玉米蛋白水解物中，优选的含有上述玉米抗氧化肽中的两种以上。
本发明还提供了上述玉米蛋白水解物的制备方法，包括如下步骤：先用碱性蛋白酶对玉米蛋白粉进行酶解，得酶解物，然后用复合蛋白酶对酶解物进行酶解，得到所述玉米蛋白水解物。
优选的，所述碱性蛋白酶的用量为1300U/g蛋白（此处用量是根据玉米蛋白粉中蛋白含量来计算酶的添加量的）；所述碱性蛋白酶的酶解温度为64℃，时间为150min，pH为8.0。
优选的，所述复合蛋白酶的用量为200U/g蛋白（此处用量是根据玉米蛋白粉中蛋白含量来计算酶的添加量的）；所述复合蛋白酶的酶解温度为55℃，时间为150min，pH为7.0。
本发明还提供了一种玉米抗氧化肽的制备方法，在上述制备方法的基础上，还包括如下步骤：将玉米蛋白水解物进行Caco-2细胞单层转运，收集细胞转运液，进行质谱测序，化学合成即得所述玉米抗氧化肽。
在本发明中，进行Caco-2细胞单层转运时，优选的需先构建Caco-2细胞单层模型，本发明对于Caco-2细胞单层模型的构建方法没有特殊限定，采用本领域常规构建方法即可。
本发明还提供了上述玉米抗氧化肽、上述玉米蛋白水解物、上述玉米蛋白水解物制备方法或上述玉米抗氧化肽制备方法在制备抗氧化产品中的应用。
优选的，所述抗氧化产品包括抗氧化药品、食品抗氧化剂或化妆品。
本发明还提供了一种抗氧化产品，所述抗氧化产品的活性成分包括上述玉米抗氧化肽或上述玉米蛋白水解物。
本发明的有益效果：
本发明从玉米蛋白粉中分离得到了具有较高抗氧化活性且抗氧化效果与同浓度还原型谷胱甘肽相当的氨基酸序列如SEQ ID NO.1-5所示的新的玉米抗氧化肽，可作为天然抗氧化剂应用于食品、药品和化妆品中。
附图说明
图1为本发明玉米抗氧化肽制备的技术路线图；
图2为本发明多肽Ⅰ（CSQAPIA）的质谱检测图；
图3为本发明多肽Ⅱ（QCSQAPIA）的质谱检测图；
图4为本发明多肽Ⅲ（QQPHPSPC）的质谱检测图；
图5为本发明多肽Ⅳ（CCHQIR）的质谱检测图；
图6为本发明多肽Ⅴ（QPQPW）的质谱检测图。
具体实施方式
本发明提供了一种玉米抗氧化肽，所述玉米抗氧化肽包括氨基酸序列为CSQAPIA（SEQ ID NO.1）、QCSQAPIA（SEQ ID NO.2）、QQPHPSPC（SEQ ID NO.3）、CCHQIR（SEQ ID NO.4）和QPQPW（SEQ ID NO.5）中的至少一种。
本发明还提供了一种玉米蛋白水解物，所述玉米蛋白水解物含有上述的玉米抗氧化肽。
本发明还提供了上述玉米蛋白水解物的制备方法，包括如下步骤：先用碱性蛋白酶对玉米蛋白粉进行酶解，得酶解物，然后用复合蛋白酶对酶解物进行酶解，得到所述玉米蛋白水解物。
在本发明中，所述玉米蛋白粉优选的为经预处理后的玉米蛋白粉，所述预处理优选的为经挤压膨化并去除淀粉的玉米蛋白粉，本发明对于玉米蛋白粉的具体来源没有特殊限定。进行碱性蛋白酶酶解前，优选的还包括将所述玉米蛋白粉与水混合配制成悬浊液的步骤，所述悬浊液的质量浓度优选为10％(m/v)。本发明对于碱性蛋白酶和复合蛋白酶的具体来源没有特殊限定，所述碱性蛋白酶的用量优选为1300U/g蛋白，所述碱性蛋白酶的酶解温度优选为64℃，时间优选为150min，pH优选为8.0；所述复合蛋白酶的用量优选为200U/g蛋白，所述复合蛋白酶的酶解温度优选为55℃，时间优选为150min，pH优选为7.0。两种酶进行顺次酶解结束后，优选的需进行灭酶处理，所述灭酶的条件优选为100℃加热灭酶20min，灭酶结束后，取上清即为玉米蛋白水解物，更优选的取上清进行真空冷冻干燥，得到玉米蛋白水解物，本发明对于真空冷冻干燥的方法没有特殊限定，采用本领域中常规真空冷冻干燥方法即可。
本发明还提供了一种玉米抗氧化肽的制备方法，在上述制备方法的基础上，还包括如下步骤：将玉米蛋白水解物进行Caco-2细胞单层转运，收集细胞转运液，进行质谱测序，化学合成即得所述玉米抗氧化肽。
本发明将玉米蛋白水解物进行Caco-2细胞单层转运，有助于获得既能经肠道吸收，又能在机体内真正发挥抗氧化作用的抗氧化肽。本领域获得多肽的常规方法为利用层析技术进行分离纯化，但较为繁琐复杂且成本较高。本发明首次利用Caco-2细胞单层模型进行玉米蛋白水解物的转运吸收，并对转运后的转运液进行质谱测序，获得玉米抗氧化肽。本发明提供的该方法一方面相对较为简单便捷，另一方面也能确保得到的多肽是能够经肠道转运吸收后的多肽，能真正在机体内发挥抗氧化功效。本发明对于质谱测序的具体方法没有特殊限定。本发明所述玉米抗氧化肽的制备方法的流程图如图1所示。
本发明还提供了上述玉米抗氧化肽、上述玉米蛋白水解物、上述玉米蛋白水解物制备方法或上述玉米抗氧化肽制备方法在制备抗氧化产品中的应用。
在本发明中，所述抗氧化产品优选的包括抗氧化药品、食品抗氧化剂或化妆品。
本发明还提供了一种抗氧化产品，所述抗氧化产品的活性成分包括上述玉米抗氧化肽或上述玉米蛋白水解物。
在本发明中，所述抗氧化产品优选的还包括辅料和/或其他活性成分，本发明对于所述辅料和/或其他活性成分的种类没有特殊限定，采用所要制备的产品常规辅料或其他活性成分即可。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
下述实施例中，如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1
（1）玉米蛋白水解物的制备
取一定量经挤压膨化并去除淀粉的玉米蛋白粉（购买于齐齐哈尔龙江阜丰生物科技有限公司），加水配制成底物浓度为10％(w/v)的悬浊液，然后先用碱性蛋白酶（诺维信碱性蛋白酶Alcalase 2.4L，购买自丹麦诺维信公司）进行酶解，碱性蛋白酶酶解条件为：加酶量1300U/g玉米蛋白粉，酶解温度64℃，酶解时间150min，酶解pH 8.0，获得碱性蛋白酶酶解液后，添加复合蛋白酶（诺维信复合蛋白酶Protamex，购买自丹麦诺维信公司）进行酶解，复合蛋白酶酶解条件为：加酶量200U/g玉米蛋白粉，酶解温度55℃，酶解时间150min，酶解pH7.0。酶解结束后100℃加热灭酶20min，酶解物在4000r/min离心20min并弃去沉淀，所得上清液为玉米蛋白酶解液，真空冷冻干燥，得到玉米蛋白水解物。
（2）Caco-2细胞单层模型建立
Caco-2细胞用含10%胎牛血清和1%青-链霉素双抗的DMEM完全培养基在37℃、5%CO2恒温培养箱中培养和传代。选用20代的细胞，以密度1×105个/mL接种于12孔Transwell板中，其中肠腔侧（apical，AP）加入0.5 mL细胞悬液，基底侧（basolateral，BL）加入1.5 mLDMEM完全培养基，接种后置于37℃，5% CO2培养箱中进行培养。前7天每隔2天更换一次培养基，之后每天更换，连续培养21 d，建立Caco-2细胞单层模型。
（3）Caco-2细胞单层转运
将步骤（1）中玉米蛋白水解物用PBS缓冲液配制成浓度为20 mg/mL的溶液，然后在Caco-2细胞单层模型的AP侧加入0.5 mL，在BL侧加入PBS缓冲液1.5 mL，置于37℃，5% CO2培养箱中转运2 h，然后收集BL侧的细胞转运液。
（4）LC-MS/MS质谱测序
将步骤（3）中得到的细胞转运液进行质谱测序（委托北京百泰派克生物科技有限公司进行），得到氨基酸序列为CSQAPIA的多肽Ⅰ，氨基酸序列为QCSQAPIA的多肽Ⅱ，氨基酸序列为QQPHPSPC的多肽Ⅲ，氨基酸序列为CCHQIR的多肽Ⅳ和氨基酸序列为QPQPW的多肽Ⅴ。结果如图2-图6所示。
实施例2
委托上海强耀生物科技有限公司合成实施例1中得到的玉米多肽，测定其对DPPH的清除能力，同时以同浓度的还原型谷胱甘肽作为对照组进行试验，具体方法如下：
取2mL不同浓度的多肽Ⅰ溶液(以水溶解多肽Ⅰ制备多肽Ⅰ溶液)，加入2mL 0.1mmol/L DPPH无水乙醇溶液，混合均匀，避光反应30min，在517nm处测其吸光值(Ai)；取2mL多肽Ⅰ溶液于试管中，加入2mL无水乙醇，在517nm处测其吸光值(Aj)；取2mL 0.1mmol/L DPPH无水乙醇溶液(0.1mmol/L)和2mL无水乙醇反应作为参比，在517nm处测其吸光值(A0)。样品对DPPH自由基的清除率按下述公式计算：
式中：A0为2mL 0.1mmol/L DPPH无水乙醇溶液与2mL无水乙醇在517nm下的吸光值；
Ai为2mL 0.1mmol/L DPPH无水乙醇溶液与2mL样品溶液反应在517nm下的吸光值；
Aj为2mL无水乙醇与2mL样品溶液在517nm下的吸光值。
结果显示，多肽Ⅰ(CSQAPIA)对DPPH自由基清除能力的IC50值为0.039mg/mL，还原性谷胱甘肽对DPPH自由基清除能力的IC50值为0.047mg/mL。
采用相同的方法测定多肽Ⅱ(QCSQAPIA)对DPPH自由基清除能力，结果显示多肽Ⅱ(QCSQAPIA)对DPPH自由基清除能力的IC50值为0.025mg/mL。
采用相同的方法测定多肽Ⅲ(QQPHPSPC)对DPPH自由基清除能力，结果显示多肽Ⅲ(QQPHPSPC)对DPPH自由基清除能力的IC50值为0.040mg/mL。
采用相同的方法测定多肽Ⅳ(CCHQIR)对DPPH自由基清除能力，结果显示多肽Ⅳ(CCHQIR)对DPPH自由基清除能力的IC50值为0.018mg/mL。
采用相同的方法测定多肽Ⅴ(QPQPW)对DPPH自由基清除能力，结果显示多肽Ⅴ(QPQPW)对DPPH自由基清除能力的IC50值为0.173mg/mL。
实施例3
委托上海强耀生物科技有限公司合成实施例1中得到的玉米多肽，测定其对ABTS自由基的清除能力，同时以同浓度的还原型谷胱甘肽作为对照组进行试验，具体方法如下：
准确配制7.0mmol/LABTS溶液及2.45mmol/L过硫酸钾水溶液，混匀，室温避光条件下静置12h后，即得ABTS+母液。将ABTS+母液用去离子水稀释，使其在734nm处的吸光值为0.70±0.02，并在30℃下平衡30min，即得ABTS+工作液。分别取2.0mL不同浓度的多肽I溶液和2.0mLABTS+工作液加入试管中，混匀，室温下避光放置20min，于734nm处测定吸光值。以去离子水替代多肽I溶液同体积的反应混合液为对照，设3个重复，求平均值。根据下述公式计算多肽I溶液对ABTS自由基的清除率。
式中：A（样）为添加样品后溶液的吸光值；
A（空）为未添加样品溶液的吸光值。
结果显示，多肽Ⅰ(CSQAPIA)对ABTS自由基清除能力的IC50值为0.042mg/mL，还原性谷胱甘肽对对ABTS自由基清除能力的IC50值为0.006mg/mL。
采用相同的方法测定多肽Ⅱ(QCSQAPIA)对ABTS自由基清除能力，结果显示，多肽Ⅱ(QCSQAPIA)对ABTS自由基清除能力的IC50值为0.024mg/mL。
采用相同的方法测定多肽Ⅲ(QQPHPSPC)对ABTS自由基清除能力，结果显示，多肽Ⅲ(QQPHPSPC)对ABTS自由基清除能力的IC50值为0.009mg/mL。
采用相同的方法测定多肽Ⅳ(CCHQIR)对ABTS自由基清除能力，结果显示，多肽Ⅳ(CCHQIR)对ABTS自由基清除能力的IC50值为0.013mg/mL。
采用相同的方法测定多肽Ⅴ(QPQPW)对ABTS自由基清除能力，结果显示，多肽Ⅴ(QPQPW)对ABTS自由基清除能力的IC50值为0.005mg/mL。
由以上结果可以得出：本发明所述单个玉米活性肽均具备较高的抗氧化活性，其抗氧化效果与同浓度的还原型谷胱甘肽相当。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (7)
1.一种玉米抗氧化肽，其特征在于，所述玉米抗氧化肽为氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示的玉米抗氧化肽。
2.一种玉米蛋白水解物，其特征在于，所述玉米蛋白水解物含有权利要求1所述的玉米抗氧化肽。
3.权利要求2所述玉米蛋白水解物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：先用碱性蛋白酶对玉米蛋白粉进行酶解，得酶解物，然后用复合蛋白酶对酶解物进行酶解，得到所述玉米蛋白水解物，所述复合蛋白酶为诺维信复合蛋白酶Protamex；
所述碱性蛋白酶的用量为1300U/g蛋白；所述碱性蛋白酶的酶解温度为64℃，时间为150min，pH为8.0；
所述复合蛋白酶的用量为200U/g蛋白；所述复合蛋白酶的酶解温度为55℃，时间为150min，pH为7.0。
4.一种玉米抗氧化肽的制备方法，其特征在于，在权利要求3所述制备方法的基础上，还包括如下步骤：将玉米蛋白水解物进行Caco-2细胞单层转运，收集细胞转运液，进行质谱测序，化学合成即得权利要求1所述玉米抗氧化肽。
5.权利要求1所述玉米抗氧化肽、权利要求2所述玉米蛋白水解物、权利要求3所述制备方法或权利要求4所述制备方法在制备抗氧化产品中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述抗氧化产品包括抗氧化药品、食品抗氧化剂或化妆品。
7.一种抗氧化产品，其特征在于，所述抗氧化产品的活性成分包括权利要求1所述玉米抗氧化肽或权利要求2所述玉米蛋白水解物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311531906.1A CN117247430B (zh) | 2023-11-17 | 2023-11-17 | 一种玉米抗氧化肽及其制备方法与应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311531906.1A CN117247430B (zh) | 2023-11-17 | 2023-11-17 | 一种玉米抗氧化肽及其制备方法与应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN117247430A CN117247430A (zh) | 2023-12-19 |
| CN117247430B true CN117247430B (zh) | 2024-01-30 |
Family
ID=89133576
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202311531906.1A Active CN117247430B (zh) | 2023-11-17 | 2023-11-17 | 一种玉米抗氧化肽及其制备方法与应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN117247430B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117587090B (zh) * | 2024-01-19 | 2024-03-29 | 齐齐哈尔大学 | 一种玉米蛋白水解物及其制备方法与应用 |
| CN117586349B (zh) * | 2024-01-19 | 2024-04-05 | 齐齐哈尔大学 | 玉米谷蛋白源抗氧化活性肽及其制备方法与应用 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007254417A (ja) * | 2006-03-24 | 2007-10-04 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | ペプチド |
| CN107868124A (zh) * | 2017-11-13 | 2018-04-03 | 江苏大学 | 一种玉米醇溶蛋白抗炎多肽及其制备方法 |
| CN116023433A (zh) * | 2022-08-18 | 2023-04-28 | 齐齐哈尔大学 | 一种玉米活性肽及其制备方法和应用 |
| CN116041425A (zh) * | 2022-08-18 | 2023-05-02 | 齐齐哈尔大学 | 双功能玉米蛋白源活性肽及其制备方法和应用 |
| CN116063378A (zh) * | 2022-08-18 | 2023-05-05 | 齐齐哈尔大学 | 具有拮抗幽门螺旋杆菌粘附活性和抗氧化活性的双功能玉米肽及其制备方法和应用 |
| CN116375800A (zh) * | 2023-03-20 | 2023-07-04 | 齐齐哈尔大学 | 玉米谷氨酰胺肽及其制备方法与应用 |
-
2023
- 2023-11-17 CN CN202311531906.1A patent/CN117247430B/zh active Active
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007254417A (ja) * | 2006-03-24 | 2007-10-04 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | ペプチド |
| CN107868124A (zh) * | 2017-11-13 | 2018-04-03 | 江苏大学 | 一种玉米醇溶蛋白抗炎多肽及其制备方法 |
| CN116023433A (zh) * | 2022-08-18 | 2023-04-28 | 齐齐哈尔大学 | 一种玉米活性肽及其制备方法和应用 |
| CN116041425A (zh) * | 2022-08-18 | 2023-05-02 | 齐齐哈尔大学 | 双功能玉米蛋白源活性肽及其制备方法和应用 |
| CN116063378A (zh) * | 2022-08-18 | 2023-05-05 | 齐齐哈尔大学 | 具有拮抗幽门螺旋杆菌粘附活性和抗氧化活性的双功能玉米肽及其制备方法和应用 |
| CN116375800A (zh) * | 2023-03-20 | 2023-07-04 | 齐齐哈尔大学 | 玉米谷氨酰胺肽及其制备方法与应用 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Preparation of antioxidative corn protein hydrolysates, purification and evaluation of three novel corn antioxidant peptides;Du-xin Jin等;《Food Chemistry》;第204卷;第427-436页 * |
| 玉米肽的纳滤脱盐工艺及脱盐产物抗氧化活性;王晓杰等;《食品科学》;第42卷(第5期);第39-45页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN117247430A (zh) | 2023-12-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN117247430B (zh) | 一种玉米抗氧化肽及其制备方法与应用 | |
| EP1478732B1 (en) | A selenium yeast product, a method of preparing a selenium yeast product and the use of the product for preparing food, a dietary supplement or a drug | |
| CN101972004A (zh) | 牡蛎酶解物的制备方法及应用 | |
| CN110218756B (zh) | 一种具有抗衰作用的富硒鲟鱼骨肽提取方法及产品 | |
| JP2021038213A (ja) | アボカド抽出物及びその調製方法並びに老化防止化粧品における使用 | |
| CN108203729B (zh) | 一种巨藻抗氧化肽的制备方法 | |
| CN107410239A (zh) | 一种利用米酒进行发酵的鱼饵窝料及其制备方法 | |
| CN116042422B (zh) | 一种酵母来源外泌体及其制备方法和应用 | |
| KR20100138664A (ko) | 2단계 방식에 의한 기능성 강화 가공발효녹용 및 그 제조방법 | |
| CN115611971A (zh) | 一种富含支链氨基酸的蛋白肽及其制备方法与应用 | |
| CN111718857B (zh) | 一种绣球菌的培养方法，绣球菌干燥粉末，及其溶媒提取物和应用 | |
| CN113481270A (zh) | 一种从扇贝裙边中提取功能糖肽的方法 | |
| CN111073944A (zh) | 一种基于Caco-2细胞模型的活性肽定向制备方法 | |
| CN114032270B (zh) | 具有美白功效的泥蚶多肽、多肽粉及制备方法和应用 | |
| CN111471733B (zh) | 一种大星鲨鱼皮多肽干粉的制备方法和应用 | |
| CN118127111B (zh) | 一种从高温花生粕中制备功能性短肽的方法 | |
| CN117820426B (zh) | 雪蛤卵肽制剂及其制备方法和应用 | |
| CN104046650B (zh) | 一种促进动物生长和抗应激的酵母细胞活性代谢物及其制备方法 | |
| CN112048534B (zh) | 一种具有提高白藜芦醇功效活性的马鲛鱼蛋白水解物及其制备方法 | |
| CN115746092B (zh) | 具有抗氧化、抗衰老活性的钝顶螺旋藻藻蓝蛋白活性肽及其应用 | |
| CN115109132B (zh) | 一种具有抗氧化、抗衰老活性的多管藻藻红蛋白活性肽及其制备方法与应用 | |
| CN117925759B (zh) | 林蛙多肽制剂及其在食品和化妆品中的应用 | |
| CN115960982A (zh) | 一种高密度发酵工业化生产枯草三十七肽的方法 | |
| CN106309372B (zh) | 一种牛骨多肽缓释剂及其制备方法 | |
| CN118272267A (zh) | 一种提升玉米蛋白粉品质地衣芽孢杆菌及其复合菌剂的制备方法和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |