CN114032270B - 具有美白功效的泥蚶多肽、多肽粉及制备方法和应用 - Google Patents
具有美白功效的泥蚶多肽、多肽粉及制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114032270B CN114032270B CN202111288112.8A CN202111288112A CN114032270B CN 114032270 B CN114032270 B CN 114032270B CN 202111288112 A CN202111288112 A CN 202111288112A CN 114032270 B CN114032270 B CN 114032270B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- polypeptide
- enzymolysis
- homogenate
- blood clam
- trypsin
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 96
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 86
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims abstract description 72
- 239000000843 powder Substances 0.000 title claims abstract description 24
- 241001339782 Scapharca broughtonii Species 0.000 title claims abstract description 20
- 230000002087 whitening effect Effects 0.000 title claims abstract description 18
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 10
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 claims abstract description 19
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 19
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 claims abstract description 19
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 claims abstract description 17
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 claims abstract description 17
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 5
- 241000628923 Anadara sativa Species 0.000 claims description 18
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 13
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 8
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 5
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 4
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 5
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 abstract description 4
- 239000004365 Protease Substances 0.000 abstract description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract description 3
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 abstract description 2
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 abstract 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 description 10
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 10
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 8
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 5
- BEJNERDRQOWKJM-UHFFFAOYSA-N kojic acid Chemical compound OCC1=CC(=O)C(O)=CO1 BEJNERDRQOWKJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229960004705 kojic acid Drugs 0.000 description 5
- WZNJWVWKTVETCG-UHFFFAOYSA-N kojic acid Natural products OC(=O)C(N)CN1C=CC(=O)C(O)=C1 WZNJWVWKTVETCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 3
- 241000180579 Arca Species 0.000 description 2
- 108090000145 Bacillolysin Proteins 0.000 description 2
- 108091005658 Basic proteases Proteins 0.000 description 2
- WTDRDQBEARUVNC-LURJTMIESA-N L-DOPA Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 WTDRDQBEARUVNC-LURJTMIESA-N 0.000 description 2
- WTDRDQBEARUVNC-UHFFFAOYSA-N L-Dopa Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 WTDRDQBEARUVNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000035092 Neutral proteases Human genes 0.000 description 2
- 108091005507 Neutral proteases Proteins 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002514 liquid chromatography mass spectrum Methods 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 235000015170 shellfish Nutrition 0.000 description 2
- 241000237852 Mollusca Species 0.000 description 1
- 241000304459 Tacitus Species 0.000 description 1
- SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N all-trans-retinoic acid Chemical compound OC(=O)\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000008468 bone growth Effects 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 102000038379 digestive enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108091007734 digestive enzymes Proteins 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 108010007119 flavourzyme Proteins 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- SYHGEUNFJIGTRX-UHFFFAOYSA-N methylenedioxypyrovalerone Chemical compound C=1C=C2OCOC2=CC=1C(=O)C(CCC)N1CCCC1 SYHGEUNFJIGTRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003032 molecular docking Methods 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 230000001151 other effect Effects 0.000 description 1
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000004088 simulation Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 229960001727 tretinoin Drugs 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/06—Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/02—Preparations for care of the skin for chemically bleaching or whitening the skin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
- A61K2800/805—Corresponding aspects not provided for by any of codes A61K2800/81 - A61K2800/95
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Birds (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及多肽技术领域，为开发泥蚶蛋白资源，公开具有美白功效的泥蚶多肽、多肽粉及制备方法和应用，所述泥蚶多肽为短肽或至少两种短肽的混合物；所述短肽为QCRTDCPSTYKD、KEQHAEMKQ、LDMGDSETEK、HNGQPLTSLCEFMSTA、DCEKDIDEC、FQFMTVTE、ADDEGNE、TSKTMNDPC、SPSPPLDEDA和QEVVMGEC中的一种；所述泥蚶多肽经由泥蚶全组织依次经胃蛋白酶、胰蛋白酶分段酶解、离心、然后过滤截留1000～3000Da的分子、再分离纯化得到。本发明利用胃肠道同源蛋白酶水解泥蚶蛋白，获得具有美白功效的多肽，保留了更好的原始完整性。
Description
技术领域
本发明涉及多肽技术领域，具体涉及具有美白功效的泥蚶多肽、多肽粉及制备方法和应用。
背景技术
多肽是一类化合物，其在体内与目标结合具有更强的特异性，使得其生物活性更高效和更好的适用性，且其无关的副作用也更有限。与蛋白质相比，肽类的小分子尺寸更小，完善的多肽化学合成方法提供了更多和更经济的产量。此外肽的较短长度表明他们的使用不仅在系统性注射也为医学临床方便药片口服诱导骨生长刺激。泥蚶，属软体动物门，双壳纲，列齿目，蚶科，蚶属。作为中国传统养殖贝类中的一种，在中国沿海各地均有分布。泥蚶于每年8～10月份进入产卵和生产的旺季高峰期，此季节产量颇丰。泥蚶肉味鲜美，可鲜食或酒渍，亦可制成干品，蚶肉含多量蛋白质和维生素，是营养成分较为优质的蛋白源海洋食品。基于泥蚶的高蛋白特性，以泥蚶为原料开发功能多肽是值得研究的方向。
发明内容
为开发泥蚶蛋白资源，本发明的目的在于：提供具有美白功效的泥蚶多肽、以及含有泥蚶多肽的多肽粉；泥蚶多肽和多肽粉的制备方法；泥蚶多肽和多肽粉在制备美白乳液上的应用。
本发明提供如下的技术方案：
本发明一方面提供了一种具有美白功效的泥蚶多肽，所述泥蚶多肽为短肽或至少两种短肽的混合物；
所述短肽为QCRTDCPSTYKD、KEQHAEMKQ、LDMGDSETEK、HNGQPLTSLCEFMSTA、DCEKDIDEC、FQFMTVTE、ADDEGNE、TSKTMNDPC、SPSPPLDEDA、QEVVMGEC中的一种；
各短肽的氨基酸序列为：
QCRTDCPSTYKD：Gln-Cys-Arg-Thr-Asp-Cys-Pro-Ser-Thr-Tyr-Lys-Asp；
KEQHAEMKQ：Lys-Glu-Gln-His-Ala-Glu-Met-Lys-Gln；
LDMGDSETEK：Leu-Asp-Met-Gly-Asp-Ser-Glu-Thr-Glu-Lys；
HNGQPLTSLCEFMSTA： His-Asn-Gly-Gln-Pro-Leu-Thr-Ser-Leu-Cys-Glu-Phe-Met-Ser-Thr-Ala；
DCEKDIDEC：Asp-Cys-Glu-Lys-Asp-Ile-Asp-Glu-Cys；
FQFMTVTE：Phe-Gln-Phe-Met-Thr-Val-Thr-Glu；
ADDEGNE：Ala-Asp-Asp-Glu-Gly-Asn-Glu；
TSKTMNDPC：Thr-Ser-Lys-Thr-Met-Asn-Asp-Pro-Cys；
SPSPPLDEDA：Ser-Pro-Ser-Pro-Pro-Leu-Asp-Glu-Asp-Ala；
QEVVMGEC：Gln-Glu-Val-Val-Met-Gly-Glu-Cys。
本发明另一方面提供了上述泥蚶多肽的制备方法，包括以下步骤：
(1)将泥蚶去壳后取全组织，然后清洗、匀浆；
(2)向泥蚶的匀浆液中先后加入胃蛋白酶、胰蛋白酶分段酶解；
(3)将步骤(2)酶解后的酶解液离心处理，然后取上清液；
(4)过滤步骤(3)所得的上清液，并截留分子量1000～3000Da的分子，冻干得多肽粉；
(5)将多肽粉分离纯化得到泥蚶多肽。
作为本发明方法的优选，步骤(2)中胃蛋白酶酶解时，保持匀浆液的pH值为2～4，酶解时间2～4小时，酶解温度30～38℃，胃蛋白酶加入量为匀浆液中蛋白重量的1～3％，胃蛋白酶的活力≥250U/mg。
作为本发明方法的优选，步骤(2)中加入胰蛋白酶酶解时，保持匀浆液的pH值为7.0～ 8.6，酶解时间0.5～2小时，酶解温度30～38℃，胰蛋白酶加入量为匀浆液中蛋白重量的1～ 3％，胰蛋白酶的活力10000U/mg。
本发明还提供了一种包含上述泥蚶多肽的多肽粉。
上述多肽粉的制备方法，包括以下步骤：
(1)将泥蚶去壳后取全组织，然后清洗、匀浆；
(2)向泥蚶的匀浆液中先后加入胃蛋白酶、胰蛋白酶分段酶解；
(3)将步骤(2)酶解后的酶解液离心处理，然后取上清液；
(4)过滤步骤(3)所得的上清液，并截留分子量1000～3000Da的分子，冻干得多肽粉。
作为本发明方法的优选，步骤(4)所得的多肽粉为多种短肽的混合物，可进一步将步骤(4)得到的多肽粉进行分离纯化得到单一的短肽或其中几种短肽的混合物。
作为本发明方法的优选，步骤(2)中胃蛋白酶酶解时，保持匀浆液的pH值为2～4，酶解时间2～4小时，酶解温度30～38℃，胃蛋白酶加入量为匀浆液中蛋白重量的1～3％，胃蛋白酶的活力≥250U/mg。
作为本发明方法的优选，步骤(2)中加入胰蛋白酶酶解时，保持匀浆液的pH值为7.0～ 8.6，酶解时间0.5～2小时，酶解温度30～38℃，胰蛋白酶加入量为匀浆液中蛋白重量的1～ 3％，胰蛋白酶的活力10000U/mg。
本发明还提供了上述泥蚶多肽或者多肽粉在制备美白乳液上的应用。
食用多肽常用的酶解方法主要为碱性蛋白酶、中性蛋白酶以及风味蛋白酶等，然而这些酶类水解得到的肽类在体内发挥生物功效存在一些缺点，因为人异源消化酶的多肽被食用后可能会被胃肠道中蛋白酶的二次或者多次水解，很难保证原始多肽的生物活性。很多多肽在体外活性测试得到的效果在体内会有所降低。而经过胃肠道同源蛋白酶水解的多肽可以较好的减少其再水解的可能性，有利于保留原始的完整性，防止体内胃肠道酶导致的活性改变或降低。
本发明的有益效果如下：本发明利用胃肠道同源蛋白酶水解泥蚶蛋白，获得具有美白功效的多肽，保留了更好的原始完整性。
附图说明
图1为多肽分离鉴定的LC-MS谱图；
图2为酶解多肽与主要活性多肽的酪氨酸酶抑制率。
具体实施方式
下面就本发明的具体实施方式作进一步说明。
如无特别说明，本发明中所采用的原料均可从市场上购得或是本领域常用的，如无特别说明，下述实施例中的方法均为本领域的常规方法。
实施例1
具有美白功效的泥蚶多肽，经以下过程制成：
(1)将泥蚶去壳后取全组织，然后清洗、匀浆；
(2)向泥蚶的匀浆液中先后加入胃蛋白酶、胰蛋白酶分段酶解；
(3)将步骤(2)酶解后的酶解液经10000g离心处理，然后取上清液；
(4)过滤步骤(3)所得的上清液，并截留分子量1000～3000Da的分子，冻干得多肽粉；
(5)将多肽粉序列鉴定，分别为短肽：QCRTDCPSTYKD、KEQHAEMKQ、LDMGDSETEK、HNGQPLTSLCEFMSTA、DCEKDIDEC、FQFMTVTE、ADDEGNE、TSKTMNDPC、 SPSPPLDEDA、QEVVMGEC。
步骤(2)中胃蛋白酶酶解时，保持匀浆液的pH值为2～4，酶解时间2～4小时，酶解温度30～38℃，胃蛋白酶加入量为匀浆液中蛋白质量的1～3％，胃蛋白酶的活力≥250U/mg；在本发明的优选实施方法中，胃蛋白酶酶解时，保持匀浆液的pH值为2，酶解时间1小时，酶解温度37℃，胃蛋白酶加入量为匀浆液中蛋白质量的2％，
步骤(2)中加入胰蛋白酶酶解时，保持匀浆液的pH值为7.0～8.6，酶解时间0.5～2小时，酶解温度30～38℃，胰蛋白酶加入量为匀浆液中蛋白质量的1～3％，胰蛋白酶的活力10000U/mg。在本发明的优选实施方法中，胰蛋白酶酶解时，保持匀浆液的pH值为8.6，酶解时间2小时，酶解温度37℃，胰蛋白酶加入量为匀浆液中蛋白质量的2％。
实施例2
具有美白功效的泥蚶多肽，为实施例1中制备的短肽QCRTDCPSTYKD、KEQHAEMKQ、LDMGDSETEK、HNGQPLTSLCEFMSTA、DCEKDIDEC、FQFMTVTE、ADDEGNE、 TSKTMNDPC、SPSPPLDEDA、QEVVMGEC中的至少两种的混合物，可以通过控制分离纯化条件得到或者直接采用短肽复配。
实施例3
具有美白功效的泥蚶多肽粉，通过实施例1的步骤(1)～步骤(4)得到。
实施例4
具有美白功效的乳液，向化妆品基础乳液配方中加入实施例1或实施例2或实施例3中的泥蚶多肽或者泥蚶多肽粉制备得到。
性能测试
1、实施例1中的各短肽对酪氨酸酶对接分子模拟结果
| CDOCKER ENERGY | CDOCKER INTERACTION ENERGY | ||
| 1 | QCRTDCPSTYKD | 207.471 | 146.725 |
| 2 | KEQHAEMKQ | 195.108 | 138.091 |
| 3 | LDMGDSETEK | 193.95 | 146.414 |
| 4 | HNGQPLTSLCEFMSTA | 192.806 | 146.706 |
| 5 | DCEKDIDEC | 176.21 | 114.494 |
| 6 | FQFMTVTE | 175.22 | 147.177 |
| 7 | ADDEGNE | 169.886 | 133.062 |
| 8 | TSKTMNDPC | 152.527 | 148.368 |
| 9 | SPSPPLDEDA | 151.638 | 163.65 |
| 10 | QEVVMGEC | 150.557 | 117.82 |
| 11 | 曲酸 | 112.339 | 63.052 |
通过上表可以看出，上述短肽的评分均要高于阳性对照曲酸，均潜在一定的酪氨酸酶抑制效果，并且不同的短肽的抑制作用不同，其中QCRTDCPSTYKD、KEQHAEMKQ、LDMGDSETEK、HNGQPLTSLCEFMSTA、DCEKDIDEC等效果较佳，从而表现出美白作用。
2、各短肽的美白功效测试。
(1)测试条件和测试数据
1.溶液配制
1)50mM磷酸缓冲液或PBS溶液，pH 6.4；
2)500μM L-DOPA解于PBS溶液(先用含有1％体积的DMSO溶解)；
3)酪氨酸酶(sigma)溶解于PBS溶液，终浓度1000U/ml。
4)实验组多肽溶液：多肽溶解于PBS溶液，浓度1mg/ml。
5)阳性对照曲酸溶液：曲酸定溶液溶解于PBS溶液，浓度500μM。
2.实验步骤
1)160μl L-DOPA液于96孔板中，三个平行；
2)20μL多肽溶液加入96孔板，空白组加入20μL PBS溶液，阳性对照加入20μL曲酸溶液。
3)各孔加入20μL终浓度为1000U/mL的酪氨酸酶，37℃孵育10min，20min后，分别在492nm下检测吸光度。
3.抑制率计算
S0＝样品自身吸光度SA＝多肽样品反应后吸光度C0＝底板吸光度CA＝只有底物和酶反应后吸光度。
(2)酶解的多肽的酪氨酸酶抑制效果
图1为多肽分离鉴定的LC-MS谱图，该图显示了多肽通过液相分离后被质谱检测到的总离子流信号(TIC，total lon chromatograms)。
图2为酶解多肽与主要活性多肽的酪氨酸酶抑制率。其中，碱性蛋白酶酶解方法：泥蚶组织匀浆后，调pH为9.0，温度为50℃，酶解时间2h，加酶量：2％(蛋白质量)；中性蛋白酶酶解方法：泥蚶组织匀浆后，调pH为7.0，温度为40℃，酶解时间2h，加酶量：2％(蛋白质量)。本方法的酪氨酸酶抑制率约为76％，略低于阳性对照曲酸，高于其他方法酶解多肽的酪氨酸酶抑制率。将本发明中所有预测活性多肽合成(也可以通过对本发明的多肽粉进行分离纯化得到)后分别进行酪氨酸酶抑制率试验(各活性多肽溶解于PBS溶液，浓度为1mg/ml，试验步骤同上)，发现序列FQFMTVTE对酪氨酸酶抑制活性明显。
Claims (6)
1.具有美白功效的泥蚶多肽，其特征在于，所述泥蚶多肽为短肽；
所述短肽为FQFMTVTE；
短肽的氨基酸序列为：
FQFMTVTE：Phe-Gln-Phe-Met-Thr-Val-Thr-Glu。
2.包含如权利要求1所述的泥蚶多肽的多肽粉。
3.如权利要求2所述的多肽粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将泥蚶去壳后取全组织，然后清洗、匀浆；
（2）向泥蚶的匀浆液中先后加入胃蛋白酶、胰蛋白酶分段酶解；
（3）将步骤（2）酶解后的酶解液离心处理，然后取上清液；
（4）过滤步骤（3）所得的上清液，并截留分子量1000～3000Da的分子，冻干得多肽粉。
4. 根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中胃蛋白酶酶解时，保持匀浆液的pH值为2～4，酶解时间2～4小时，酶解温度30～38 ℃，胃蛋白酶加入量为匀浆液中蛋白质量的 1～3%，胃蛋白酶的活力≥250 U/mg。
5. 根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中加入胰蛋白酶酶解时，保持匀浆液的pH值为7.0～8.6，酶解时间0.5～2小时，酶解温度30～38 ℃，胰蛋白酶加入量为匀浆液中蛋白质量的1～3%，胰蛋白酶的活力10000 U/mg。
6.如权利要求1所述的泥蚶多肽或者权利要求5所述方法制备的多肽粉在制备美白乳液上的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111288112.8A CN114032270B (zh) | 2021-11-02 | 2021-11-02 | 具有美白功效的泥蚶多肽、多肽粉及制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111288112.8A CN114032270B (zh) | 2021-11-02 | 2021-11-02 | 具有美白功效的泥蚶多肽、多肽粉及制备方法和应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114032270A CN114032270A (zh) | 2022-02-11 |
| CN114032270B true CN114032270B (zh) | 2024-04-05 |
Family
ID=80136036
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111288112.8A Active CN114032270B (zh) | 2021-11-02 | 2021-11-02 | 具有美白功效的泥蚶多肽、多肽粉及制备方法和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114032270B (zh) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1546682A (zh) * | 2003-12-16 | 2004-11-17 | 天津大学 | 酶解与膜滤集成连续制取酪蛋白生物活性多肽的工艺 |
| CN110951808A (zh) * | 2019-12-09 | 2020-04-03 | 北京工商大学 | 一种以小球藻粉为原料制备高f值低聚肽的方法 |
-
2021
- 2021-11-02 CN CN202111288112.8A patent/CN114032270B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1546682A (zh) * | 2003-12-16 | 2004-11-17 | 天津大学 | 酶解与膜滤集成连续制取酪蛋白生物活性多肽的工艺 |
| CN110951808A (zh) * | 2019-12-09 | 2020-04-03 | 北京工商大学 | 一种以小球藻粉为原料制备高f值低聚肽的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114032270A (zh) | 2022-02-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Aluko | Food protein-derived peptides: Production, isolation, and purification | |
| Saito et al. | Antihypertensive effects of peptide in sake and its by-products on spontaneously hypertensive rats | |
| CN104774896B (zh) | 带鱼鱼骨铁螯合胶原肽制备方法 | |
| Cancre et al. | Secretagogues and growth factors in fish and crustacean protein hydrolysates | |
| CN113088548A (zh) | 一种牡蛎抗氧化活性肽的制备方法 | |
| CN117247430B (zh) | 一种玉米抗氧化肽及其制备方法与应用 | |
| CN108935912B (zh) | 一种具有dpp-ⅳ抑制和抗疲劳功能的鱼肉蛋白肽及其制备方法 | |
| Garcıa-Carreno et al. | Digestive enzymes in juvenile green abalone, Haliotis fulgens, fed natural food | |
| CN110628859A (zh) | 一种糖基化牡蛎肽及其制备方法 | |
| CN111269290B (zh) | 一种鲟鱼抗炎肽的制备方法 | |
| Tang et al. | Evaluation of dried porcine solubles in diets of Rice field eel (Monopterus albus) | |
| JPH02504465A (ja) | オキアミ組織からの活性酵素の単離の改良 | |
| JP2001131084A (ja) | 生体コラーゲン合成促進剤 | |
| CN114032270B (zh) | 具有美白功效的泥蚶多肽、多肽粉及制备方法和应用 | |
| PL215480B1 (pl) | Sposób otrzymywania preparatów peptydowych do podawania doustnego | |
| Yatsunami et al. | Changes in nitrogenous components and protease activity of fermented sardine with rice-bran | |
| CN116606369A (zh) | 螺旋藻免疫调节肽及其制备方法与应用 | |
| CN114057833B (zh) | 基于减少黑色素沉淀功效的贻贝多肽、多肽粉及制备方法和应用 | |
| US20220248737A1 (en) | Oyster peptide with effect of improving sexual function and preparation method thereof | |
| CN107550909B (zh) | 4-羟乙基哌嗪乙磺酸在黄嘌呤氧化酶抑制肽中的应用 | |
| CN114032271B (zh) | 具有降尿酸功效的牡蛎多肽、多肽粉及制备方法和应用 | |
| KR20120079977A (ko) | 바지락 가수분해물을 유효성분으로 함유하는 항암제 조성물 | |
| JP3739992B2 (ja) | アンギオテンシン変換酵素阻害剤として用いられる新規ペプチド及びその製造方法 | |
| Kheng et al. | The analysis of Angiotensin-I Converting Enzyme (ACE) by maitake (Grifrola frondosa) mycelia | |
| Vernon | Intracellular Enzymes: A Course of Lectures Given in the Physiological Laboratory, University of London |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |